KR102528619B1 - 포토박테리움 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도 - Google Patents

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Abstract

신규한 미생물, 그의 파쇄액, 배양액, 추출액 및 이들의 피부 상태 개선 용도에 관한 것이다. 일 양상에 따른 포토박테리움 레이오그나티(Photobacterium leiognathi) 균주에 의하면, 피부 관련 상태의 예방, 개선, 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

포토박테리움 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도{Photobacterium strain and skin condition improving uses of thereof}
신규한 미생물, 그의 파쇄액, 배양액, 추출액 및 이들의 피부 상태 개선 용도에 관한 것이다.
고령화 사회가 진행됨에 따라 피부 미백, 탄력, 주름 개선, 보습 개선과 같은 피부에 대한 관심이 더욱 높아지고 있다.
일반적으로 피부의 색이 검게 변하는 이유는 과도한 멜라닌(melanin) 생성에 의한다. 멜라닌 합성의 출발물질은 티로신(tyrosine)이며 티로시나아제(tyrosinase), TRP-1(tyrosinase related protein-1) 및 TRP2(yrosinase related protein-2)와 같은 효소들에 의해 생성된다. 티로신은 티로시나아제에 의해 가수분해되어 도파(dihydroxyphenylalanine: DOPA), 도파퀴논(DOPA quinone)으로 전환되고, 도파퀴논이 도파 크롬(DOPA chrome)이 되어 최종적으로 붉은 계열의 유멜라닌(eumelanin)과 갈색 계열의 페오멜라닌(pheomelanin)이 합성된다. 멜라노좀에서 합성된 멜라닌 색소는 멜라닌 세포의 수지상돌기를 통하여 주변의 각질세포(keratinocyte)로 이동된 후, 각질세포를 통하여 피부, 모발 등의 착색이 이루어진다. 멜라닌 생성 억제를 통한 피부 미백 방법으로 티로시나아제의 활성을 저해시키는 방법이 있으며, 지금까지 하이드로퀴논(hydroquinone), 4-하이드록시애니솔(4-hydroxyanisole), 아스코르브산(ascorbic acid), 코지산(kojic acid), 아젤라인산(azelaic acid) 등이 티로시나아제 저해제로 이용되어 왔으나 피부 안전성, 제형 안정성 등의 문제로 제한된 양만 사용되고 있다.
또한, 피부는 인체의 1차적인 보호장벽으로 체내 수분을 보존하고 외부 환경으로부터 피부를 지키는 역할을 한다. 피부는 크게 표피, 진피, 그리고 피하지방으로 이루어져 있으며 표피의 각질층은 피부의 수분 보유량을 지키는 중요한 역할을 하는데, 노화 혹은 외부 환경적 스트레스로 인한 피부장벽의 손상은 피부의 수분 보유량 감소를 초래한다. 따라서, 피부의 각질층의 수분함량을 적절하게 유지하는 것은 매우 중요하다.
한편, 최근 기능성 화장품의 원료로 자연주의를 선호하며 다양한 한방 및 천연자원을 원료로 한 화장품 개발이 활발히 진행되고 있으나, 미생물을 이용한 미백 원료 개발은 부진한 상태이다. 이에, 안전하면서도 피부 관련된 상태에 유용하게 사용될 수 있는 미생물 원료의 개발이 필요한 실정이다.
US 4129644 A
일 양상은 포토박테리움 속(Photobacterium sp.)에 속하는 포토박테리움 레이오그나티(Photobacterium leiognathi) 균주를 제공하는 것이다.
다른 양상은 상기 균주의 파쇄액, 배양액 또는 배양액의 추출물을 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 포토박테리움 레이오그나티(Photobacterium leiognathi) 균주, 그의 파쇄액, 배양액 또는 배양액의 추출물을 포함하는 조성물을 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 유효한 양의 상기한 조성물을 그를 필요로 하는 개체에 처리 또는 투여하는 단계를 포함하는 개체의 상태를 예방 개선, 또는 치료하는 방법을 제공한다.
일 양상은 포토박테리움 레이오그나티(Photobacterium leiognathi) 균주를 제공한다.
상기 균주는 포토박테리움 속(Photobacterium sp.)에 속하는 균주일 수 있다.
상기 균주는 서열번호 1과 약 98% 이상, 약 99% 이상, 약 99.5% 이상 또는 약 99.9% 이상의 서열 동일성을 갖는 16S rRNA를 포함하는 것일 수 있다. 상기 균주는 서열번호 1의 16S rRNA를 포함하는 것일 수 있다.
본 명세서에서 용어 "서열 동일성(sequence identity)"은 특정 비교 영역에서 양 서열을 최대한 일치되도록 얼라인시킨 후 서열간의 아미노산 잔기 또는 염기의 동일한 정도를 의미한다. 서열 동일성은 특정 비교 영역에서 2개의 서열을 최적으로 얼라인하여 비교함으로써 측정되는 값으로서, 비교 영역 내에서 서열의 일부는 대조 서열(reference sequence)과 비교하여 부가, 삭제되어 있을 수 있다. 서열 동일성 백분율은 예를 들면, 비교 영역 전체에서 두 개의 최적으로 정렬된 서열을 비교하는 단계, 두 서열 모두에서 동일한 아미노산 또는 핵산이 나타나는 위치의 개수를 결정하여 일치된(matched) 위치의 개수를 수득하는 단계, 상기 일치된 위치의 개수를 비교 범위 내의 위치의 총 개수(즉, 범위 크기)로 나누는 단계, 및 상기 결과에 100을 곱하여 서열 동일성의 백분율을 수득하는 단계에 의해 계산될 수 있다. 상기 서열 동일성의 퍼센트는 공지의 서열 비교 프로그램을 사용하여 결정될 수 있으며, 일례로 BLASTN(NCBI), CLC Main Workbench (CLC bio), MegAlignTM(DNASTAR Inc) 등을 들 수 있다.
상기 포토박테리움 레이오그나티(Photobacterium leiognathi) 균주는 기탁번호 KCCM12926P로 기탁된 균주일 수 있다.
상기 균주는 분리된 것일 수 있다. 본 명세서에서 용어 "분리된(isolated)"이란 자연계에 존재하는 것이 아닌 인위적으로 분리하여 이용가능한 것을 의미한다. 상기 균주는 인위적으로 분리되어 상기 기탁번호로 기탁되었다.
상기 균주는 피부 미용 또는 피부 상태 개선 효과, 예를 들면, 피부 미백, 피부 보습, 피부장벽 강화, 피부 노화 억제 또는 개선, 피부 주름 예방 또는 개선, 피부 탄력 개선 및 피부 재생 효과로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 효과를 갖는 것일 수 있다.
상기 균주는 피부 세포의 멜라닌 생성을 억제하여 피부 미백 효과를 갖는 것일 수 있다. 또한, 피부 보습 및 피부장벽 관련 인자인 히알루론산 합성 효소 3(hyaluronan synthase 3: HAS3) 또는 필라그린(filagrin) 등의 발현을 증가시켜 피부 노화를 방지하고 외부 환경 변화인 대기 건조, 자외선 및 각종 공해 물질로부터 피부 조직의 수분 유지를 촉진하면서, 수분 손실을 방지하는 피부장벽을 강화하도록 각질층을 형성하는 것일 수 있다.
다른 양상은 상기 균주의 파쇄액, 배양액 또는 배양액의 추출물을 제공한다.
상기 균주의 구체적인 내용은 전술한 바와 같다.
본 명세서에서 용어 "파쇄액"은 균주 자체에 대해 화학적 또는 물리적 힘을 가하여 균주의 세포벽을 파쇄하여 얻은 산물을 의미할 수 있다.
본 명세서에서 용어"배양액"은 "배양 상층액", "조건 배양액" 또는 "조정 배지"와 호환적으로 사용될 수 있고, 포토박테리움 레이오그나티(Photobacterium leiognathi) 균주가 시험관 내에서 성장 및 생존할 수 있도록 영양분을 공급할 수 있는 배지에 상기 균주를 일정기간 배양하여 얻는 상기 균주, 이의 대사물, 여분의 영양분 등을 포함하는 전체 배지를 의미할 수 있다. 또한, 상기 배양액은 균주를 배양하여 얻은 균체 배양액에서 균체를 제거한 배양액을 의미할 수 있다. 한편, 상기 배양액 중 균체를 제거한 액체를 "상등액"이라고도 하며,　배양액을 일정시간 가만히 두어 하층에 가라앉은 부분을 제외한 상층의 액체만을 취하거나, 여과를 통해 균체를 제거하거나, 배양액을 원심분리하여 하부의 침전을 제거하고 상부의 액체만을 취하여 획득할 수 있다. 상기 "균체"는 본 발명의 균주 자체를 의미하는 것으로 피부 샘플 등으로부터 분리하여 선별한 균주 자체 또는 상기 균주를 배양하여 배양액으로부터 분리한 균주를 포함한다. 상기 균체는 배양액을 원심분리하여 하층에 가라앉은 부분을 취하여 획득할 수 있고, 또는 중력에 의해 배양액의 하층으로 가라앉으므로 일정 시간동안 가만히 두었다가 상부의 액체를 제거함으로써 획득할 수 있다.
상기 배양액은 균주를 배양하여 수득된 배양액 자체, 그의 농축물, 또는 동결건조물 또는 배양액으로부터 균주를 제거하여 수득된 배양 상층액, 그의 농축물 또는 동결건조물을 포함할 수 있다.
상기 배양액은 포토박테리움 레이오그나티(Photobacterium leiognathi) 균주를 배지(예를 들면, TSB 배지) 에서 10℃초과 또는 40℃ 미만 중 어느 온도에서 일정 시간, 예를 들면, 4 내지 50시간 동안 배양하여 수득된 것일 수 있다.
일 구체예에서, 균주의 배양 상층액은 균주 배양액을 원심분리나 여과시켜 균주를 제거하는 단계에 의해 수득될 수 있다.
다른 구체예에서, 농축물은 상기 균주 배양액 자체, 또는 상기 배양액을 원심분리나 필터를 이용하여 여과한 후 수득된 상층액을 농축하는 단계에 의해 수득될 수 있다.
상기 포토박테리움 레이오그나티(Photobacterium leiognathi) 균주를 배양하기 위한 배양용 배지 및 배양 조건은 통상의 지식을 가진 자가 적절하게 선택하거나 변형하여 이용할 수 있다.
본 명세서에서 용어 "배양액 추출물"은 상기 배양액 또는 그의 농축액로부터 추출한 것을 의미하며, 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 또는 이들 조정제물 또는 정제물, 이를 분획한 분획물을 포함할 수 있다.
또 다른 양상은 포토박테리움 레이오그나티(Photobacterium leiognathi) 균주, 상기 균주의 파쇄액, 배양액 또는 배양액의 추출물의 용도를 제공한다. 상세하게는, 포토박테리움 레이오그나티(Photobacterium leiognathi) 균주, 그의 파쇄액, 배양액 또는 그의 배양액의 추출물을 포함하는 조성물을 제공한다.
상기 용도 또는 조성물에 있어서, 상기 포토박테리움 레이오그나티 균주는 상기 일 양상에 따른 포토박테리움 레이오그나티 균주일 수 있다. 일 구체예에서, 상기 균주는 서열번호 1과 약 98% 이상, 약 99% 이상, 약 99.5% 이상, 또는 약 99.9% 이상의 서열 동일성을 갖는 16S rRNA를 포함하는 것일 수 있다. 다른 구체예에서, 상기 균주는 서열번호 1의 16S rRNA를 포함하는 것일 수 있다. 또 다른 구체예에서, 상기 균주는 기탁번호 KCCM12926P로 기탁된 균주일 수 있다.
상기 균주의 용도는 피부 상태 개선, 피부 미용 개선, 피부 질환의 예방, 개선 또는 치료 등을 포함할 수 있다.
본 명세서에서 용어 "개선"은 상태의 완화 또는 치료와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 의미할 수 있다.
상기 피부 상태 개선 또는 피부 미용 개선은 피부 미백 촉진, 피부 보습 촉진, 피부장벽 강화, 피부 노화 억제 또는 개선, 피부 주름 예방 또는 개선, 피부 탄력 개선 및 피부 재생 촉진으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상일 수 있다.
본 명세서에서 용어 "피부 미백"이란 멜라닌 색소의 합성을 저해함으로써 피부 톤을 밝게 할 뿐만 아니라, 자외선, 호르몬 또는 유전에 기인한 기미나 주근깨 등의 피부 과색소 침착을 개선하는 것을 의미할 수 있다. 상기 "색소 침착"은 체내에 있는 색소의 양이 비정상적인 경우 또는 색소가 나타나는 장소에 이상이 있는 상태를 의미하며, 예를 들면 기미 및 주근깨 등인 것일 수 있다.
본 명세서에서 용어 "피부 보습"이란 피부 수분을 유지하거나 수분 손실을 방지하는 모든 작용을 의미할 수 있다.
본 명세서에서 용어 "피부장벽"이란 죽은 각질세포와 세포간 지질로 구성되어 있고, 외부 자극으로부터 피부를 보호하며 피부에서 수분이 증발하는 것을 막아주는 피부 보호막을 의미할 수 있고, 피부장벽 강화는 피부 가장 바깥쪽에 위치하여 수분과 영양 손실을 막아주는 피부 장벽의 기능이 증진되는 모든 작용을 의미할 수 있다.
상기 피부장벽 기능의 손상은 피부 장벽의 기능이 저하되거나 손상되어 피부에 나타나는 모든 변화를 의미할 수 있다. 예를 들어, 피부 주름 증가, 건조, 피부염, 아토피 피부염, 알레르기성 피부염, 여드름 등을 포함할 수 있다.
본 명세서에서 용어 "피부 노화"란 나이가 들어가면서 피부에 나타나게 되는 유형과 무형상의 변화를 통틀어 말하는 것으로, 예컨대 표피 두께가 얇아지는 현상, 진피의 세포 수나 혈관 수, DNA 손상복구 능력, 세포교체주기, 상처 회복, 피부장벽기능, 표피의 수분 유지, 땀분비, 피지분비, 비타민D 생산, 물리적 손상방어, 화학물질 제거능력, 면역반응, 감각 기능, 체온조절의 감소를 의미할 수 있다.
상기 균주 또는 이의 배양액은 외인성 요인 또는 내인성 요인에 의해 유발되는 피부 노화 개선용일 수 있다. 상기 외인성 요인은 여러 가지 외부 요인, 예컨대 자외선(광)을 말하고 내인성 요인은 연대기적 요인이라고도 지칭되며 주로 시간의 흐름에 의해 발생하는 요인을 말한다. 즉, 상기 피부 노화는 구체적으로는 자외선, 공해, 담배연기, 화학물질 등에 의한 외부 자극에 의해 유도되는 조기 노화 증상 뿐만 아니라, 나이가 들어감에 의해 피부세포의 증식이 감소함에 따라 발생하는 자연노화 현상을 포함하며 주름, 탄력 감소, 피부 쳐짐 및 건조 현상 등을 모두 포함하는 개념이다. 또한 주름은 내부 및 외부 요인의 변화에 의한 자극이 피부조직을 구성하고 있는 성분을 변화시켜 주름을 유발하는 것을 포함한다.
상기 노화는 광노화일 수 있다. 용어 "광노화(Photoaging)"는 외부 환경적인 요인에 의해 유발되는 현상으로, 가장 대표적인 인자로는 자외선이 있다. 자외선은 단백질 분해효소의 활성화와 기질단백질의 사슬절단 및 비정상적인 교차결합 등의 생체 구성 성분들의 손상을 가져오고, 이러한 메커니즘의 반복은 외관상으로도 확연한 피부노화를 초래하게 된다.
본 명세서에서 용어 "주름"은 피부의 탄력성이 상실되어 느슨해진 상태를 의미하며, 예를 들면 피부가 접히는 것일 수 있다. 상기 "피부 주름 예방 또는 개선"이란 주름과 관련된 인자의 발현을 억제하여 주름을 방지 또는 개선하거나, 콜라겐 총량을 증가시키는 모든 작용을 의미할 수 있다.
본 명세서에서 용어 "피부 탄력 개선"이란 피부가 쳐지거나 늘어지는 정도를 완화하는 것을 의미할 수 있고, "피부 재생"이란 피부의 일부분이 소실되었거나 손상되었을 경우 그 부분을 보충하거나 피부 세포의 증식 및 이동을 증진시키는 모든 작용을 의미할 수 있다. 피부가 재생됨에 따라 주름 개선 효과가 나타날 수 있다.
본 명세서에서 용어 "피부 질환"은 피부 장벽 기능 손상에 의한 질환, 피부 노화, 피부 상처, 피부 흉터, 또는 피부 염증일 수 있다. 용어, "예방"은 질병의 발생을 억제하는 것을 포함한다. 용어, "치료"는 질병의 발전의 억제, 경감, 또는 제거를 포함한다.
상기 “상처”는 "창상"이라고도 하며, 생체의 손상을 의미한다. 상기 손상은 물리적 손상, 방사선, 화학물질에 의한 자극, 미생물의 증식 등 외부 요인, 스트레스 등의 내부 요인에 의한 것일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 상기 상처는 절창, 자창, 할창, 좌창, 열창, 사창, 교창 등 모든 종류의 상처를 포함할 수 있다. “상처 개선"은 얼굴이나 신체의 상처를 옅어지게 하거나 정도를 감소시키는 모든 작용을 의미할 수 있다. "상처 치유"는 상처를 회복하는 일련의 생체반응을 의미할 수 있다.
상기 피부 재생, 주름 개선, 상처 개선 또는 상처 치유의 원인은 제한이 없으나, 예를 들어 피부 세포의 이동 또는 증식에 의한 것일 수 있다.
또 다른 구체예에 있어서, 상기 균주는 피부 개선 효과를 갖는 다른 포토박테리움 속에 속하는 균주와 함께 사용되어 시너지 효과를 나타내는 것일 수 있다. 상기 포토박테리움 속에 속하는 균주는 예를 들어, 포토박테리움 레이오그나티(Photobacterium leiognathi), 포토박테리움 담셀(Photobacterium damsel), 포토박테리움 포스포리움(photobacterium phosphoreum), 포토박테리움 할로톨레란스(Photobacterium halotolerans), 포토박테리움 앙구스텀(Photobacterium angustum) 등을 포함할 수 있다.
상기 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 중량% 내지 80 중량%, 예를 들면, 0.01 중량% 내지 60 중량%, 0.01 중량% 내지 40 중량%, 0.01 중량% 내지 30 중량%, 0.01 중량% 내지 20 중량%, 0.01 중량% 내지 10 중량%, 0.01 중량% 내지 5 중량%, 0.05 중량% 내지 60 중량%, 0.05 중량% 내지 40 중량%, 0.05 중량% 내지 30 중량%, 0.05 중량% 내지 20 중량%, 0.05 중량% 내지 10 중량%, 0.05 중량% 내지 5 중량%, 0.1 중량% 내지 60 중량%, 0.1 중량% 내지 40 중량%, 0.1 중량% 내지 30 중량%, 0.1 중량% 내지 20 중량%, 0.1 중량% 내지 10 중량%, 또는 0.1 중량% 내지 5 중량%의 균주, 이의 파쇄액, 배양액 또는 이의 배양액의 추출물을 포함할 수 있다. 이 때, 상기 균주, 이의 파쇄액, 배양액 또는 이의 배양액의 추출물의 함량이 상기 범위 미만인 경우, 피부 상태 개선 효과, 예를 들면, 피부 미백 촉진, 피부 보습 촉진, 피부장벽 강화, 피부 노화 억제 또는 개선, 피부 주름 예방 또는 개선, 피부 탄력 개선 또는 피부 재생 촉진 효과가 충분히 발휘되지 않는다는 문제점이 있다.
본 명세서에서 용어, "유효성분으로 포함"은 상기에서 언급한 효과를 나타낼 수 있는 정도로 본 명세서의 균주, 이의 파쇄액, 배양액 또는 이의 배양액의 추출물이 첨가되는 것을 의미하고, 약물전달 및 안정화 등을 위하여 다양한 성분을 부성분으로 첨가하여 다양한 형태로 포뮬레이션(formulation)되는 것을 포함하는 의미이다.
상기 조성물은 액체 상태 또는 건조 상태인 것일 수 있다. 일 구체예에서, 상기 조성물은 건조 분말 형태일 수 있다.
상기 조성물을 건조 상태로 제조하는 건조 방법은 당업계에서 일반적으로 사용되는 방법을 사용할 수 있으며, 특별히 제한되지 않는다. 상기 건조 방법의 비제한적인 예는, 공기 건조 방법, 자연 건조 방법, 분무 건조 방법, 동결 건조 방법 등이 있다. 이들 방법은 단독으로 사용하거나 적어도 두 가지 방법을 함께 사용할 수 있다.
상기 조성물은 상기 균주, 그의 파쇄액, 배양액 또는 배양액의 추출물의 열화(deterioration)를 감소시키기에 충분한 유효량의 첨가제를 포함할 수 있다. 상기 첨가제는 예를 들어 결합제일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 조성물은 화장품학적으로, 약학적으로 또는 식품학적으로 허용가능한 담체를 더 포함할 수 있다. 상기 조성물은 담체와 함께 제형화되어 화장품, 약품, 식품 첨가제 등으로 제공될 수 있다.
상기 조성물은 화장료 조성물일 수 있다.
상기 화장료 조성물은 예를 들면, 유연화장수, 영양화장수, 마사지크림, 영양크림, 에센스, 팩, 젤, 앰플 또는 피부 점착 타입의 화장료 제형을 갖는 것일 수 있다.
상기 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 조성물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함할 수 있다.
또한, 상기 조성물은 피부외용제용 조성물일 수 있다.
본 명세서에서, 상기 피부외용제는 크림, 겔, 연고, 피부 유화제, 피부 현탁액, 경피전달성 패치, 약물 함유 붕대, 로션, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 피부외용제는 통상 화장품이나 의약품 등의 피부외용제에 사용되는 성분, 예를 들면 수성성분, 유성성분, 분말성분, 알코올류, 보습제, 증점제, 자외선흡수제, 미백제, 방부제, 산화방지제, 계면활성제, 향료, 색제, 각종 피부 영양제, 또는 이들의 조합과 필요에 따라서 적절하게 배합될 수 있다. 상기 피부외용제는, 에데트산이나트륨, 에데트산삼나트륨, 시트르산나트륨, 폴리인산나트륨, 메타인산나트륨, 글루콘산 등의 금속봉쇄제, 카페인, 탄닌, 벨라파밀, 감초추출물, 글라블리딘, 칼린의 과실의 열수추출물, 각종생약, 아세트산토코페롤, 글리틸리틴산, 트라넥삼산 및 그 유도체 또는 그 염등의 약제, 비타민 C, 아스코르브산인산마그네슘, 아스코르브산글루코시드, 알부틴, 코지산, 글루코스, 프룩토스, 트레할로스 등의 당류등도 적절하게 배합할 수 있다.
다른 구체예에 있어서, 상기 조성물은 약학적 조성물일 수 있다.
상기 약학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 추가적으로 포함할 수 있다. 상기 희석제는 유당, 옥수수 전분, 대두유, 미정질 셀룰로오스, 또는 만니톨, 활택제로는 스테아린산 마그네슘, 탈크, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 담체는 부형제, 붕해제, 결합제, 활택제, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 부형제는 미결정 셀룰로오즈, 유당, 저치환도 히드록시셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 붕해제는 카르복시메틸셀룰로오스 칼슘, 전분글리콜산 나트륨, 무수인산일수소 칼슘, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 결합제는 폴리비닐피롤리돈, 저치환도 히드록시프로필셀룰로오즈, 히드록시프로필셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 활택제는 스테아린산 마그네슘, 이산화규소, 탈크, 또는 그 조합일 수 있다.
상기 약학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여 제형으로 제형화될 수 있다. 경구 투여 제형은 과립제, 산제, 액제, 정제, 캅셀제, 건조시럽제, 또는 그 조합일 수 있다. 비경구 투여 제형은 주사제일 수 있다.
상기 조성물은 건강기능식품 조성물일 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물은 상기 균주 또는 이의 배양액 단독 또는 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적 (예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 명세서의 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하의 양으로 첨가될 수 있다. 상기 건강기능식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 건강기능식품의 종류 중 음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 건강식품 조성물은 또한 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제, 또는 그 조합을 함유할 수 있다. 상기 건강기능식품 조성물은 또한, 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료, 야채 음료의 제조를 위한 과육, 또는 그 조합을 함유할 수 있다.
또한, 다른 양상은 유효한 양의 상기한 조성물을 그를 필요로 하는 개체에 처리 또는 투여하는 단계를 포함하는 개체의 상태를 예방, 개선, 또는 치료하는 방법을 제공한다.
상기 개체의 상태는 피부와 관련된 상태일 수 있다.
본 명세서에서 용어, "투여하는", "도입하는" 및 "이식하는"은 상호교환적으로 사용되고 일 구체예에 따른 조성물의 원하는 부위로의 적어도 부분적 국소화를 초래하는 방법 또는 경로에 의한 개체 내로의 일 구체예에 따른 조성물의 배치를 의미할 수 있다.
투여는 당업계에 알려진 방법에 의하여 투여될 수 있다. 투여는 예를 들면, 정맥내, 근육내, 경구, 경피 (transdermal), 점막, 코안 (intranasal), 기관내 (intratracheal) 또는 피하 투여와 같은 경로로, 임의의 수단에 의하여 개체로 직접적으로 투여될 수 있다. 상기 투여는 전신적으로 또는 국부적으로 투여될 수 있다.
상기 개체는 포유동물, 예를 들면, 사람, 소, 말, 돼지, 개, 양, 염소, 또는 고양이일 수 있다. 상기 개체는 피부미용 개선, 예를 들어 피부 보습, 피부 장벽 강화, 피부 염증 억제, 피부 주름 개선 효과를 필요로 하는 개체일 수 있다.
상기 투여는 일 구체예에 따른 조성물을 개체당 일당 0.1 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 예를 들면, 0.1 ㎎ 내지 500 ㎎, 0.1 ㎎ 내지 100 ㎎, 0.1 ㎎ 내지 50 ㎎, 0.1 ㎎ 내지 25 ㎎, 1 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 1 ㎎ 내지 500 ㎎, 1 ㎎ 내지 100 ㎎, 1 ㎎ 내지 50 ㎎, 1 ㎎ 내지 25 ㎎, 5 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 5 ㎎ 내지 500 ㎎, 5 ㎎ 내지 100 ㎎, 5 ㎎ 내지 50 ㎎, 5 ㎎ 내지 25 ㎎, 10 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 10 ㎎ 내지 500 ㎎, 10 ㎎ 내지 100 ㎎, 10 ㎎ 내지 50 ㎎, 또는 10 ㎎ 내지 25 ㎎을 투여하는 것일 수 있다. 다만, 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성별, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있고, 당업자라면 이러한 요인들을 고려하여 투여량을 적절히 조절할 수 있다. 투여 횟수는 1일 1회 또는 임상적으로 용인가능한 부작용의 범위 내에서 2회 이상이 가능하고, 투여 부위에 대해서도 1개소 또는 2개소 이상에 투여할 수 있으며, 매일 또는 2 내지 5일 간격으로 총 투여 일수는 한번 치료 시 1일에서 30일까지 투여될 수 있다. 필요한 경우, 적정 시기 이후에 동일한 치료를 반복할 수 있다. 인간 이외의 동물에 대해서도, kg당 인간과 동일한 투여량으로 하거나, 또는 예를 들면 목적의 동물과 인간과의 기관(심장 등)의 용적비(예를 들면, 평균값) 등으로 상기의 투여량을 환산한 양을 투여할 수 있다.
일 양상에 따른 포토박테리움 레이오그나티(Photobacterium leiognathi) 균주에 의하면, 피부 관련 상태의 예방, 개선, 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 일 구체예에 따른 균주가 피부미백에 미치는 영향을 나타낸 사진 및 그래프이다.
도 2는 일 구체예에 따른 균주가 HAS3의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
도 3은 일 구체예에 따른 균주가 필라그린의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
이하 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 하나 이상의 구체예를 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
[실시예]
실시예 1. 균주의 분리 및 동정
해수 및 담수로부터 채취한 시료를 TSB를 함유하는 액체 배지 또는 고체 배지(Becton Dickinson, Cockeysville, MD)에 접종하였다. 접종 후 48시간 동안 28℃인큐베이터에서 배양한 뒤 형성된 집락 100개를 순수 분리 배양하여, 48시간 동안 28℃ 인큐베이터에서 재배양 하였다. 배양이 완료된 집락은 16s rRNA 유전자 서열 동정을 실시하였다. 이때 사용된 프라이머는 박테리아에만 반응하여 증폭하도록 고안되었으며, 하기와 같다.
- 서열번호 2: 5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3', 27F
- 서열번호 3: 5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3', 1492R
PCR 증폭은 95℃ 1분, 55℃ 1분, 75℃ 1분30초씩 30 사이클로 실시하였으며, 마지막으로 72℃에서 8분간 처리한 후 4℃에서 보관하였다. PCR 반응이 끝난 뒤 분리 배양된 종들의 DNA 서열은 ABI-3730XL(ABI, USA)를 이용하여 결정하였다. 분리 배양된 미생물 집락 중 결정된 16S rRNA부위의 염기서열을 미국 국립생물정보센터(NCBI, National Center for Biotechnology Information) 홈페이지에서 제공되는 BLAST 프로그램으로 등록된 다른 균주들과 비교 분석하였을 때 상동성 97% 이하의 신규성 있는 종들만 선별하여 사용하였고, 그 중 상동성 97% 이하의 신규 미생물 포토박테리움 레이오그나티(Photobacterium leiognathi) 균주(이하 "LED-10"이라 함)을 선별하였다. 선별된 LED-10 균주를 2021년 1월 11일자로 한국 미생물 보존센터에 기탁하여 기탁번호 KCCM12926P를 부여 받았고, LED-10 균주는 서열번호 1(complementary DNA)의 16s rRNA 서열을 갖는다.
[실험예]
실험예 1. 피부 미백 활성 분석
상기 실시예 1에서 분리한 LED-10 균주 배양액의 피부 미백 활성을 분석하였다. 구체적으로, 마우스의 색소 세포인 B16-F10(Murine Melanoma) 세포(ATCC)를 10% FBS를 포함하는 DMEM 배지(Dulbecco'smodified Eagle's Medium, Gibco 1210-0038) 2㎖에 현탁시켜 1 x 105 세포/웰로 6-웰 플레이트에 접종한 후, 상기 세포가 웰 바닥에 40~50% 부착될 때까지 37℃, 5% CO2 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 이후, α-MSH를 100 nM 농도로 처리하여 멜라닌 생성을 유도하였다. 다음으로 상기 LED-10 균주의 배양액 1% 및 10% (w/w)를 처리하여 3일 동안 추가 배양하였으며, 미생물 배지에 대한 영향을 확인하기 위해 대조구로 culture medium 1% 및 10% (w/w)를 처리하여 3일 동안 추가 배양하였다. 이후, 배양액을 회수하여 1,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상등액을 얻었다. 상등액을 마이크로플레이트 리더(Microlpate reader, Victor 3)로 490 ㎚에서 흡광도를 3회 측정하여 멜라닌 분비 억제능을 평가하였다. 하기 계산식에 의해 평가하였으며, 그 결과를 도 1에 나타내었다. 양성대조군으로는 알부틴(100ppm, Sigma aldrich)를 사용하였다.
[계산식]
Melanin contents(%)=(각 시료 처리군의 평균 흡광도)/(α-MSH 처리군의 평균 흡광도) x 100(%)
도 1에 나타낸 바와 같이, 균주 배양액 처리군은 무처리 대조군 뿐만 아니라 양성대조군과 비교하여도 멜라닌 함량이 유의적으로 감소하였음을 확인하였다. 상기 결과로부터, 일 구체예에 따른 균주는 α-MSH에 의해 증가된 멜라닌을 현저히 감소시킬 수 있음을 알 수 있었다. 따라서, 일 구체예에 따른 균주는 피부 미백에 유용하게 사용될 수 있다.
실험예 2. 피부장벽 강화 및 피부 보습 활성 분석
상기 실시예 1에서 분리한 LED-10 균주 배양액이 피부장벽강화 및 피부 보습 활성에 미치는 영향을 분석하였다. 구체적으로, 인간 각질형성 세포주(human keratinocyte)인 HaCaT 세포를 10% 우혈청 (fetal bovine serum)을 포함한 DMEM 배지(Dulbecco'smodified Eagle's Medium, Gibco 1210-0038)에서 배양하였고, 배양은 모두 37℃, 5% CO2 배양기에서 수행하였다. 상기 배양된 세포주에 상기 LED-10 균주의 배양액 1% 및 10% (w/w)를 처리하고 24시간 동안 추가 배양하였다. 양성 대조군으로는 레티논산(Retionic acid: RA) 1 μM을 사용하였다.
그 후 각 시료의 세포에서 트리졸(RNA iso, DAKARA, 일본)을 이용하여 RNA를 분리한 뒤 나노드롭으로 260㎚에서 RNA를 정량한 후, 각각 2㎍의 RNA를 사용하여 증폭기에서 cDNA를 합성하였다(C1000 Thermal Cycler, Bio-Rad, 미국). 합성된 cDNA를 주형으로 타겟 유전자인 피부 장벽 강화 및 보습과 관련된 인자인 히알루론산 합성 효소 3(hyaluronan synthase 3: HAS3) 또는 필라그린(filagrin)에 대한 프라이머 및 cDNA와 함께 첨가하여 실시간(real-time) PCR 기계(Step One Plus, Applied Biosystems, 미국)에서 실시간 중합효소 연쇄반응을 수행하였다. 유전자의 발현량은 β-액틴 유전자에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하였고, 그 결과를 도 2 및 도 3에 나타내었다.
도 2 내지 3에 나타낸 바와 같이, 균주 배양액 처리군은 무처리 대조군 뿐만 아니라 양성대조군과 비교하여도 HAS3 및 필라그린의 발현을 유의하게 증가시키는 것을 확인할 수 있었다. 따라서, 일 구체예에 따른 균주는 피부장벽 강화 및 피부 보습에 유용하게 사용될 수 있다.
한국미생물보존센터(국외) KCCM12926P 20210111
<110> COSMAX, INC. <120> Photobacterium strain and skin condition improving uses of thereof <130> PN137459KR <160> 3 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1431 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Photobacterium leiognathi LED-10 <400> 1 atgcaagtcg agcggcagcg acttaactga accttcgggg aacgttaagg gcggcgagcg 60 gcggacgggt gagtaatgcc tgggaatatg ccctgatgtg ggggataact attggaaacg 120 atagctaata ccgcataatc tcttcggagc aaagaggggg accttcgggc ctctcgcgtc 180 aggattagcc caggtgggat tagcttgttg gtgaggtaat ggctcaccaa ggcaacgatc 240 cctagctggt ctgagaggat gatcagccac actggaactg agacacggtc cagactccta 300 cgggaggcag cagtggggaa tattgcacaa tgggggaaac cctgatgcag ccatgccgcg 360 tgtatgaaga aggccttcgg gttgtaaagt actttcagta gggaggaagg cagtgtcgtt 420 aatagcggca ttgtttgacg ttacctacag aagaagcacc ggctaactcc gtgccagcag 480 ccgcggtaat acggagggtg cgagcgttaa tcggaattac tgggcgtaaa gcgcatgcag 540 gcggtctgtt aagcaagatg tgaaagcccg gggctcaacc tcggaacagc attttgaact 600 ggcagactag agtcttgtag aggggggtag aatttcaggt gtagcggtga aatgcgtaga 660 gatctgaagg aataccggtg gcgaaggcgg ccccctggac aaagactgac gctcagatgc 720 gaaagcgtgg ggagcaaaca ggattagata ccctggtagt ccacgccgta aacgatgtct 780 acttggaggt tgtggccttg agccgtggct ttcggagcta acgcgttaag tagaccgcct 840 ggggagtacg gtcgcaagat taaaactcaa atgaattgac gggggcccgc acaagcggtg 900 gagcatgtgg tttaattcga tgcaacgcga agaaccttac ctactcttga catccagaga 960 actttccaga gatggattgg tgccttcggg aactctgaga caggtgctgc atggctgtcg 1020 tcagctcgtg ttgtgaaatg ttgggttaag tcccgcaacg agcgcaaccc ttatccttgt 1080 ttgccagcac ttcgggtggg aactccaggg agactgccgg tgataaaccg gaggaaggtg 1140 gggacgacgt caagtcatca tggcccttac gagtagggct acacacgtgc tacaatggcg 1200 tatacagagg gctgccaact cgcgagagtg agcgaatccc agaaagtacg tcgtagtccg 1260 gattggagtc tgcaactcga ctccatgaag tcggaatcgc tagtaatcgt gaatcagaat 1320 gtcacggtga atacgttccc gggccttgta cacaccgccc gtcacaccat gggagtgggc 1380 tgcaccagaa gtagatagct taaccttcgg gagggcgtta ccacggtggt c 1431 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 27F <400> 2 agagtttgat cctggctcag 20 <210> 3 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 1492R <400> 3 ggttaccttg ttacgactt 19

Claims (12)

  1. 기탁번호 KCCM12926P로 기탁된, 포토박테리움 속(Photobacterium sp.)에 속하는 포토박테리움 레이오그나티(Photobacterium leiognathi) LED-10 균주로서,
    상기 균주는 멜라닌 분비를 억제하거나, 또는 HAS3 및 필라그린으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 발현을 증가시키는 것인, 균주.
  2. 청구항 1에 있어서,
    서열번호 1의 16S rRNA를 포함하는 것인, 균주.
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 청구항 1의 균주의 배양액.
  6. 청구항 1의 균주, 그의 파쇄액 또는 배양액을 포함하는 화장료 조성물.
  7. 청구항 6에 있어서,
    상기 조성물은 피부 상태 개선용이고,
    상기 피부 상태 개선은 피부 미백 촉진, 피부 보습 촉진, 및 피부장벽 강화로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것인, 화장료 조성물.
  8. 삭제
  9. 삭제
  10. 청구항 1의 포토박테리움 레이오그나티(Photobacterium leiognathi) LED-10 균주, 그의 파쇄액 또는 배양액을 포함하는 피부 상태 개선용 건강기능식품 조성물로서,
    상기 피부 상태 개선은 피부 미백 촉진, 피부 보습 촉진, 및 피부장벽 강화로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것인, 건강기능식품 조성물.
  11. 기탁번호 KCCM12926P로 기탁된, 포토박테리움 레이오그나티(Photobacterium leiognathi) LED-10 균주를 배양하는 단계; 및
    배양 후 얻어진 균체 배양액을 원심분리하여 균체를 제거하고 상등액을 회수하는 단계를 포함하는 균주 배양액을 제조하는 방법으로서,
    상기 배양액은 멜라닌 분비를 억제하거나, 또는 HAS3 및 필라그린으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 발현을 증가시키는 것인, 방법.
  12. 삭제
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