KR101928521B1 - 브로모도메인-억제 화합물 및 상기 화합물을 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학 조성물 - Google Patents

브로모도메인-억제 화합물 및 상기 화합물을 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학 조성물 Download PDF

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Abstract

본원에서는, 브로모도메인 및 추가의 말단 도메인(BET) 단백질 억제 활성을 갖는 신규 화합물, 및 전암성 전환 또는 암의 예방 또는 치료에 유용할 수 있는 상기 화합물을 포함하는 약학 조성물이 제공된다.

Description

브로모도메인-억제 화합물 및 상기 화합물을 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학 조성물{BROMODOMAIN-INHIBITING COMPOUNDS AND PHARMACEUTICAL COMPOSITION COMPRISING SAME FOR PREVENTING OR TREATING A CANCER}
본 발명은, 브로모도메인 및 추가의 말단 도메인(BET) 단백질을 억제하는 화합물, 상기 화합물의 제조 방법, 상기 화합물을 포함하는 약학 조성물, 및 상기 화합물을 사용하여 전암성 전환 또는 암을 예방 또는 치료하는 방법에 관한 것이다.
유전자 발현은, 다양하고 상이한 메커니즘에 의해 여러개의 상이한 수준으로 조절된다. 후성(epigenetic) 메커니즘은, 뉴클레오타이드 서열의 변화 없이 DNA를 변경함으로써, 또는 DNA 분자를 싸고 DNA 결합 단백질(예컨대, 전사 인자)의 접근을 제한하는 히스톤을 변경함으로써 유전자 발현을 조절한다. 히스톤 변경은 아세틸화, 메틸화, 인산화, 유비퀴티닐화 등을 포함한다. 상기 변경은 "기록"으로 불리며, 상기 "기록"을 담당하는 효소는 "기록자"로 불린다. 상기 히스톤 변경은 가역적이며, 역(reverse) 메커니즘을 수행하는 효소(예컨대, 히스톤 데아세틸라제) 및 히스톤 데메틸라제)는 "삭제자"로 불린다.
이러한 후성적 변경은 전형적으로 소위 "판독자"에 의해 인식되어, 각각의 기록-판독 조합의 특정 염색질 상황(context)에 따라 유전자 발현의 활성화 또는 무증상(silencing)을 야기한다. 브로모도메인(BRD)-함유 단백질은 BRD(이는, 약 110개의 아미노산 길이임)를 통해, 아세틸화된 히스톤에 결합된다(문헌[P. Filippakopoulos, et al ., Cell, 2012, 149:214-231]). 4개의 역평행 알파-헬릭스 및 2개의 연결 루프로 구성된 이러한 고도로 보존된 브로모도메인은, 다수의 상이한 부류의 단백질, 예컨대 히스톤 아세틸라제, 진핵세포 전사 인자 및 동시-조절제, DNA 헬리카제, 염색질-개조 복합체 등에서 발견된다.
브로모도메인 및 추가의 말단 도메인(BET) 단백질은, 2개의 브로모도메인 및 하나의 추가적-말단 도메인(ET)을 갖는 브로모도메인-함유 단백질의 아과이다. 상기 아과는, BRD2, BRD3, BRD4, 및 BRDT(BRD5)를 포함하는 4개의 일원으로 구성된다. BET 단백질은 몇몇 전사 프로그램에 있어서 중요한 역할을 하며, 염증 및 암을 비롯한 인간 질환의 몇몇 유형에 원인이 되는 이상(aberrant) 전사 사건과 연루되어 있다(문헌[A. C. Belkina, et al ., Nature Reviews Cancer, 2012, 12 (7):465-477]; 및 문헌[R. K. Prinjha, et al ., Trends in Pharmacological Sciences, 2012, 33:146-153]). BRD2, BRD3 및 BRD4의 비조절된 발현은 인간에서 종양을 발생시킨다. 인간 BRD3(9q34.2) 또는 BRD4(19p13.1) 유전자와 NUT 유전자(15q14) 간의 상호 염색체 전위는, NUT 정중선 암종(NMC) 및 고 치사율의 공격적 암을 유발하는 융합된 종양단백질을 생성한다(문헌[C. A. French, et al ., Cancer Research, 2003, 63(2):304-307]; 및 문헌[C. A. French, et al ., Oncogene , 2008, 27:2237-2242]). BRD4는 흔히 흑색종에서 상향조절된다(문헌[M. F. Segura, et al ., Cancer Research , 2013, 73(20):6264-6276]).
아세틸화된 히스톤에 BRD가 결합되는 것을 방지하는 수많은 소분자 억제제가 개발되었다(문헌[S. Muller et al ., MedChemComm, 2014, 5:288-296]). 대부분의 이러한 화합물은 아세틸화된-리신 모방체이며, 혈액암 및 고형 암, 예를 들면 혼성 계통 백혈병(MLL)-융합 백혈병)(문헌[Dawson MA et al ., Nature, 2011, 478:529-533]), 다발성 골수종(문헌[J. E. Delmore et al ., Cell, 2011, 146:904-917], 및 문헌[Aristeidis Chaidos et al ., Blood 2014, 123:697-705]), 교아종(문헌[Zhixiang C. et al ., Clinical cancer research, 2013, 19:1748-1759]), 신경아 세포종(문헌[J. A. Mertz et al ., Cancer Discovery 2013, 3:308-323]), 전립선암(문헌[A. Wyce et al ., Oncotarget 2013, 4:2419-2429]), 폐암(문헌[Shimamura T. et al ., Clinical cancer research, 2013, 19:6183-6192]), 흑색종(문헌[M. F. Segura, et al ., Cancer Research 2013, 73(20):6264-6276]), 및 자가면역 질환에 대해 강한 항-종양 활성을 나타낸다. 특히, BRD 억제제는, 다수의 상이한 유형의 암에서 세포 증식에 중요한 영향을 미치는 종양유전자 c- myc의 발현을 억제한다. 따라서, BRD 억제제 또는 BET 단백질 억제제는 잠재적으로, 전암성 전환 또는 암의 예방 또는 치료를 위한 새로운 부류의 치료제를 제공한다.
따라서, 본 발명의 목적은, 브로모도메인-함유 단백질, 예컨대 BRD2, BRD3 및 BRD4를 선택적으로 억제하는 신규 화합물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또다른 목적은, 활성 성분으로서 상기 화합물을 포함하는 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또다른 목적은, 상기 화합물을 사용하여 전암성 전환 또는 암을 예방 또는 치료하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 하나의 양태에 따라, 하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물, 용매화물 또는 이성질체가 제공된다:
[화학식 I]
Figure 112016107528273-pct00001
상기 식에서,
R1은 수소, C1 -10 알킬, C1 -10 알킬아릴, C3 -10 사이클로알킬, C3 -10 사이클로알킬C1-10 알킬, C1 -10 알킬C3 -10 사이클로알킬, 폼일, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴C1 -10 알킬, 할로C1-10 알킬, 헤테로아릴, 아르알킬, 헤테로아릴C1-10 알킬, 헤테로아릴아릴, 융합된 바이사이클릴, 바이아릴, 아릴옥시아릴, 헤테로아릴옥시아릴, 아릴옥시헤테로아릴, 헤테로아릴옥시헤테로아릴, C2-10 알켄일, C2-10 알킨일, 아자이도, 나이트로, 시아노, ORa, NRbRb' 및 CORc로 이루어진 군으로부터 선택되고,
이때, Ra, Rb, Rb' 및 Rc는, 각각 독립적으로, 수소, C1 -10 알킬, C1 -10 알킬아릴, C3 -10 사이클로알킬, C3 -10 사이클로알킬C1 -10 알킬, C1 -10 알킬사이클로알킬, 폼일, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 할로C1-10 알킬, 헤테로아릴, 아르알킬, 헤테로아릴C1-10 알킬, 헤테로아릴아릴, 융합된 바이사이클릴, 바이아릴, 아릴옥시아릴, 헤테로아릴옥시아릴, 아릴옥시헤테로아릴, 헤테로아릴옥시헤테로아릴, C2-10 알켄일, C2-10 알킨일, 아자이도, 나이트로 및 시아노로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R2는 수소, 하이드록실, 할로, C1-6 알킬, 할로 C1-6 알킬, C1-6 알콕시, 할로 C1-6 알콕시, 나이트로, 시아노, -CF3, -OCF3, -COORd, -CONHRd, 및
Figure 112016107528273-pct00002
,
Figure 112016107528273-pct00003
및
Figure 112016107528273-pct00004
으로 이루어진 군으로부터 선택되는 헤테로방향족 기로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R3은 수소, 하이드록실, 할로, C1-6 알킬, 할로 C1-6 알킬, C1-6 알콕시, 할로 C1-6 알콕시, 나이트로, 시아노, -CF3, -OCF3, -COORd 및 -CONHRd로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Rd는 C1 -3 알킬 또는 하이드록시 C1 -3 알킬이다.
또한, 하기 화학식 II의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물, 용매화물 또는 이성질체가 제공된다:
[화학식 II]
Figure 112016107528273-pct00005
상기 식에서,
X는 C 또는 S이고;
R1은 수소, C1 -10 알킬, C1 -10 알킬아릴, C3 -10 사이클로알킬, C3 -10 사이클로알킬C1-10 알킬, C1 -10 알킬C3 -10 사이클로알킬, 폼일, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴C1 -10 알킬, 할로C1 -10 알킬, 헤테로아릴, 아르알킬, 헤테로아릴C1 -10 알킬, 헤테로아릴아릴, 융합된 바이사이클릴, 바이아릴, 아릴옥시아릴, 헤테로아릴옥시아릴, 아릴옥시헤테로아릴, 헤테로아릴옥시헤테로아릴, C2 -10 알켄일, C2 -10 알킨일, 아자이도, 나이트로, 시아노, ORa, NRbRb' 및 CORc로 이루어진 군으로부터 선택되고,
이때, Ra, Rb, Rb' 및 Rc는, 각각 독립적으로, 수소, C1 -10 알킬, C1 -10 알킬아릴, C3 -10 사이클로알킬, C3 -10 사이클로알킬C1 -10 알킬, C1 -10 알킬사이클로알킬, 폼일, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 할로C1 -10 알킬, 헤테로아릴, 아르알킬, 헤테로아릴C1-10 알킬, 헤테로아릴아릴, 융합된 바이사이클릴, 바이아릴, 아릴옥시아릴, 헤테로아릴옥시아릴, 아릴옥시헤테로아릴, 헤테로아릴옥시헤테로아릴, C2 -10 알켄일, C2 -10 알킨일, 아자이도, 나이트로 및 시아노로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R2 및 R4는, 각각 독립적으로, 수소, 하이드록실, 할로, C1 -6 알킬, 할로 C1 -6 알킬, C1 -6 알콕시, 할로 C1 -6 알콕시, 나이트로, 시아노, -CF3, -OCF3, -COORd, -CONHRd, 및
Figure 112016107528273-pct00006
,
Figure 112016107528273-pct00007
및
Figure 112016107528273-pct00008
으로 이루어진 군으로부터 선택되는 헤테로방향족 기로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R3은 수소, 하이드록실, 할로, C1 -6 알킬, 할로 C1 -6 알킬, C1 -6 알콕시, 할로 C1 -6 알콕시, 나이트로, 시아노, -CF3, -OCF3, -COORd 및 -CONHRd로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Rd는 C1 -3 알킬 또는 하이드록시 C1 -3 알킬이다.
본 발명의 또다른 양태에 따라, 활성 성분으로서 화학식 I 또는 II의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물, 용매화물 또는 이성질체, 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는, 전암성 전환 또는 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물이 제공된다.
본 발명의 또다른 양태에 따라, 포유동물에서의 전암성 전환 또는 암의 예방 또는 치료 방법이 제공되며, 상기 방법은, 상기 치료가 필요한 포유동물에게 화학식 I 또는 II의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물, 용매화물 또는 이성질체를 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 또다른 양태에 따라, 전암성 전환 또는 암의 예방 또는 치료용 약제의 제조를 위한, 화학식 I 또는 II의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물, 용매화물 또는 이성질체의 용도가 제공된다.
본 발명의 화합물은, 설포네이트 유도체 및 설파메이트 유도체를 갖지 않는 다른 브로모도메인 억제제보다 더욱 강력하고, 더욱 대사적으로 안정하고, 암 치료에 더욱 효과적일 수 있다. 또한, 본 발명의 화합물은 탁월한 생체 내 약리학적 및 약동학적 특성을 나타낼 수 있다.
본 발명의 상기 목적 및 다른 목적은, 첨부된 도면과 함께 하기 명세서로부터 자명해질 것이며, 이들 도면은 각각 다음을 나타낸다:
도 1: 마우스에서 PO 투여 경로를 통한 화합물 1의 약동학;
도 2: 래트에서 PO 투여 경로를 통한 화합물 1의 약동학;
도 3: 개에서 PO 투여 경로를 통한 화합물 1의 약동학; 및
도 4: MV4-11 인간 백혈병 이종이식에서 화합물 1의 종양 성장 억제(TGI) 활성.
본원 명세서에서 사용되는 용어는 당업자가 잘 이해할 것으로 생각되지만, 본원에서 제공되는 정의는, 본 발명의 기술을 용이하게 하고 상기 용어의 사용에 대한 예시를 제공하기 위해 개시된다.
본원에서 사용된 용어 "알킬"은, 노말, 2급, 3급, 또는 환형 탄소 원자를 함유하는 탄화수소(예컨대, 선형 포화된 지방족 탄화수소 기, 분지형 포화된 지방족 탄화수소 기, 또는 포화되거나 불포화된 비-방향족 탄화수소 단일- 또는 다중-고리 시스템(예컨대, 사이클로알킬))를 지칭한다. 용어 "알킬"이, 탄소 원자의 개수의 언급 없이 사용되는 경우, 이는 C1 -10 알킬을 지칭하는 것으로 이해해야 한다.
본원에서 사용된 용어 "아릴"은, 1 내지 3개의 방향족 고리를 갖는 환형 방향족 탄화수소 기를 지칭한다. 아릴 기는, 헤테로사이클로, 사이클로알킬, 또는 헤테로아릴 고리인 제 2 또는 제 3 고리에 융합될 수 있되, 단, 이 경우, 부착 지점은 상기 고리 시스템의 아릴 부분에 대한 것일 수 있다. "아릴" 기의 예는, 비제한적으로, 페닐, 나프틸, 테트라하이드로나프틸, 바이페닐, 인단일, 안트라실 또는 페난트릴뿐만 아니라, 이들의 치환된 유도체를 포함한다.
본원에서 사용된 용어 "헤테로아릴"은, 방향족 고리에서 탄소 원자들 중 적어도 하나가, 산소, 질소 및 황으로부터 선택되는 헤테로원자로 대체된 아릴 기를 지칭한다. 질소 및/또는 황 헤테로원자는 임의적으로 산화될 수 있으며, 질소 헤테로원자는 임의적으로 4급화될 수 있다. 헤테로아릴 기는 5원 또는 6원 일환형, 7원 내지 11원 이환형, 또는 10원 내지 16원 삼환형 고리 시스템일 수 있다.
본원에서 사용된 용어 "알켄일"은, 2 내지 10개의 탄소 원자를 함유하고, 2개의 수소를 제거함으로써 형성된 탄소-탄소 이중 결합을 하나 이상 함유하는 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소를 지칭한다.
본원에서 사용된 용어 "알킨일"은, 2 내지 10개의 탄소 원자를 함유하고 탄소-탄소 삼중 결합을 하나 이상 함유하는 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소를 지칭한다.
본원에서 사용된 용어 "알콕시"는, 산소 원자를 통해 모 분자 잔기에 부속되는 알킬 기(본원에 정의된 바와 같음)를 지칭한다.
본원에서 사용된 용어 "아르알킬"은, 아릴-알킬 기(이때, 아릴 및 알킬은 본원에 정의된 바와 같음)를 지칭한다. 바람직한 아르알킬은 저급 알킬 기를 포함한다.
본원에서 사용된 용어 "아릴옥시"는, 산소 원자를 통해 모 분자 잔기에 부속되는 아릴 기(본원에 정의된 바와 같음)를 지칭한다.
(단독으로 또는 다른 용어(들)와의 조합으로) 본원에서 사용된 용어 "카보사이클릴"은, 3 내지 14개의 탄소 고리 원자("고리 원자"는, 함께 결합되어 환형 치환기의 고리(들)를 형성하는 원자임)를 함유하는, 포화된 환형(즉, "사이클로알킬"), 부분적으로 포화된 환형(즉, "사이클로알켄일"), 또는 완전히 불포화된(즉, "아릴") 하이드로카빌 치환기를 지칭한다. 카보사이클릴은, 전형적으로 3 내지 6개의 고리 원자를 함유하는 단일 고리일 수 있다.
본원에서 사용된 용어 "사이클로알킬"은, 완전히 포화되거나 하나 이상의 불포화된 결합을 갖지만 방향족 기가 되지 않는 3 내지 12개의 탄소 원자를 함유하는 일환형 또는 다환형(예컨대, 이환형, 삼환형 등) 탄화수소를 지칭한다.
본원에서 사용된 용어 "시아노"는 -CN 기를 지칭한다.
본원에서 사용된 용어 "할로" 또는 "할로겐"은, -Cl, -Br, -I, 또는 -F를 지칭한다.
본원에서 사용된 용어 "할로알킬"은, 하나 이상의 수소 원자가 할로겐 원자로 대체된 알킬(본원에 정의된 바와 같음)을 지칭한다.
본원에서 사용된 용어 "헤테로사이클릴"은, 하나 이상의 헤테로원자(예컨대, 질소, 산소, 또는 황)를 포함하는 3 내지 12개의 원자를 갖고, 포화되거나(예컨대, "헤테로사이클로알킬"), 부분적으로 불포화되거나(예컨대, "헤테로사이클로알켄일" 또는 "헤테로사이클로알킨일"), 완전히 불포화된(예컨대, "헤테로아릴) 고리 시스템을 포함한다.
용어 "제 1" 및 "제 2"는, 명세서로부터 더 자명한 바와 같이, 2개의 화합물 또는 2개의 조성물을 구별할 목적으로 본원에서 사용된다.
어구 "의학적으로 효과량"이란, 특정 질환, 증상 또는 장애를 치료하고/하거나; 특정 질환, 증상 또는 장애와 관련된 하나 이상의 증후를 개선, 완화 또는 감소시키고/시키거나; 본원에 더 자세히 기술되는 특정 질환, 증상 또는 장애와 관련된 징후 또는 병리 과정의 개시를 지연시키거나 방지하는 조성물 또는 화합물의 양을 의미한다.
본원에서 사용되는 용어 "약학적으로 허용가능한 담체"는, 본원에 기술된 조성물 또는 화합물의 투여, 전달, 저장 및 안정성 중 임의의 하나 이상에 유용한 임의의 화합물, 조성물 또는 담체 매질을 의미한다.
약학적으로 허용가능한 담체는, 비제한적으로, 희석제, 물, 식염수, 적합한 비히클(예컨대, 리포좀, 미세입자, 나노입자, 유화액 및 캡슐), 완충제, 의학적 비경구 비히클, 부형제, 수용액, 현탁액, 용매, 유화액, 세제, 킬레이트제, 가용화제, 염, 착색제, 중합체, 하이드로겔, 계면활성제, 유화제, 보조제, 충전제, 보존제, 안정화제, 오일, 결합제, 붕해제, 흡수제, 향미제 및 당분야에 널리 공지된 것들을 포함한다.
이후에, 본 발명이 더 자세히 기술된다.
본 발명은, 하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물, 용매화물 또는 이성질체를 제공한다:
[화학식 I]
Figure 112016107528273-pct00009
상기 식에서,
R1은 수소, C1 -10 알킬, C1 -10 알킬아릴, C3 -10 사이클로알킬, C3 -10 사이클로알킬C1-10 알킬, C1 -10 알킬C3 -10 사이클로알킬, 폼일, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴C1 -10 알킬, 할로C1-10 알킬, 헤테로아릴, 아르알킬, 헤테로아릴C1-10 알킬, 헤테로아릴아릴, 융합된 바이사이클릴, 바이아릴, 아릴옥시아릴, 헤테로아릴옥시아릴, 아릴옥시헤테로아릴, 헤테로아릴옥시헤테로아릴, C2-10 알켄일, C2-10 알킨일, 아자이도, 나이트로, 시아노, ORa, NRbRb' 및 CORc로 이루어진 군으로부터 선택되고,
이때, Ra, Rb, Rb' 및 Rc는, 각각 독립적으로, 수소, C1 -10 알킬, C1 -10 알킬아릴, C3 -10 사이클로알킬, C3 -10 사이클로알킬C1 -10 알킬, C1 -10 알킬사이클로알킬, 폼일, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 할로C1-10 알킬, 헤테로아릴, 아르알킬, 헤테로아릴C1-10 알킬, 헤테로아릴아릴, 융합된 바이사이클릴, 바이아릴, 아릴옥시아릴, 헤테로아릴옥시아릴, 아릴옥시헤테로아릴, 헤테로아릴옥시헤테로아릴, C2-10 알켄일, C2-10 알킨일, 아자이도, 나이트로 및 시아노로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R2는 수소, 하이드록실, 할로, C1-6 알킬, 할로 C1-6 알킬, C1-6 알콕시, 할로 C1-6 알콕시, 나이트로, 시아노, -CF3, -OCF3, -COORd, -CONHRd, 및
Figure 112016107528273-pct00010
,
Figure 112016107528273-pct00011
및
Figure 112016107528273-pct00012
으로 이루어진 군으로부터 선택되는 헤테로방향족 기로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R3은 수소, 하이드록실, 할로, C1-6 알킬, 할로 C1-6 알킬, C1-6 알콕시, 할로 C1-6 알콕시, 나이트로, 시아노, -CF3, -OCF3, -COORd 및 -CONHRd로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Rd는 C1 -3 알킬 또는 하이드록시 C1 -3 알킬이다.
바람직하게는, R1은 C1 -6 알킬, C3 -10 사이클로알킬, 아르알킬 또는 NRbRb'이고, 이때 Rb 및 Rb'는 각각 독립적으로 수소 또는 C1 -6 알킬이고;
R2는 수소, C1 -6 알콕시, -CONHRd, 또는
Figure 112016107528273-pct00013
,
Figure 112016107528273-pct00014
및
Figure 112016107528273-pct00015
으로 이루어진 군으로부터 선택되는 헤테로방향족 기이고;
R3은 할로이고;
Rd는 C1 -3 알킬 또는 하이드록시 C1 -3 알킬이다.
또한, 본 발명은 하기 화학식 II의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물, 용매화물 또는 이성질체를 제공한다:
[화학식 II]
Figure 112016107528273-pct00016
상기 식에서,
X는 C 또는 S이고;
R1은 수소, C1-10 알킬, C1-10 알킬아릴, C3-10 사이클로알킬, C3-10 사이클로알킬C1-10 알킬, C1-10 알킬C3-10 사이클로알킬, 폼일, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴C1-10 알킬, 할로C1-10 알킬, 헤테로아릴, 아르알킬, 헤테로아릴C1-10 알킬, 헤테로아릴아릴, 융합된 바이사이클릴, 바이아릴, 아릴옥시아릴, 헤테로아릴옥시아릴, 아릴옥시헤테로아릴, 헤테로아릴옥시헤테로아릴, C2-10 알켄일, C2-10 알킨일, 아자이도, 나이트로, 시아노, ORa, NRbRb' 및 CORc로 이루어진 군으로부터 선택되고,
이때, Ra, Rb, Rb' 및 Rc는, 각각 독립적으로, 수소, C1 -10 알킬, C1 -10 알킬아릴, C3 -10 사이클로알킬, C3 -10 사이클로알킬C1 -10 알킬, C1 -10 알킬사이클로알킬, 폼일, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 할로C1-10 알킬, 헤테로아릴, 아르알킬, 헤테로아릴C1-10 알킬, 헤테로아릴아릴, 융합된 바이사이클릴, 바이아릴, 아릴옥시아릴, 헤테로아릴옥시아릴, 아릴옥시헤테로아릴, 헤테로아릴옥시헤테로아릴, C2-10 알켄일, C2-10 알킨일, 아자이도, 나이트로 및 시아노로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R2 및 R4는, 각각 독립적으로, 수소, 하이드록실, 할로, C1-6 알킬, 할로 C1-6 알킬, C1 -6 알콕시, 할로 C1 -6 알콕시, 나이트로, 시아노, -CF3, -OCF3, -COORd, -CONHRd, 및
Figure 112016107528273-pct00017
,
Figure 112016107528273-pct00018
및
Figure 112016107528273-pct00019
으로 이루어진 군으로부터 선택되는 헤테로방향족 기로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R3은 수소, 하이드록실, 할로, C1-6 알킬, 할로 C1-6 알킬, C1-6 알콕시, 할로 C1-6 알콕시, 나이트로, 시아노, -CF3, -OCF3, -COORd 및 -CONHRd로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Rd는 C1 -3 알킬 또는 하이드록시 C1 -3 알킬이다.
바람직하게는, X는 S이고;
R1은 C1 -6 알킬 또는 NRbRb'이고, 이때 Rb 및 Rb'는 각각 독립적으로 수소 또는 C1 -6 알킬이고;
R2 및 R4는 각각 독립적으로 수소 또는 C1 -6 알킬이고;
R3은 할로이다.
본 발명에 따른 더 바람직한 화합물의 예는 하기와 같다:
(R)-(6-(4-클로로페닐)-8-메톡시-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메틸 메탄설포네이트;
(R)-(6-(4-클로로페닐)-8-메톡시-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메틸 에탄설포네이트;
(R)-(6-(4-클로로페닐)-8-메톡시-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메틸 프로판-1-설포네이트;
(R)-(6-(4-클로로페닐)-8-메톡시-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메틸 사이클로프로판설포네이트;
(R)-(6-(4-클로로페닐)-8-메톡시-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메틸 벤젠설포네이트;
(R)-(6-(4-클로로페닐)-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메틸 메탄설포네이트;
(R)-(6-(4-시아노페닐)-8-메톡시-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메틸 메탄설포네이트 ;
(R)-(6-(4-클로로페닐)-8-메톡시-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메틸 설파메이트;
(R)-(6-(4-클로로페닐)-8-메톡시-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메틸 다이메틸설파메이트;
(R)-(6-(4-클로로페닐)-8-메톡시-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메틸 메틸설파메이트;
(R)-(6-(4-클로로페닐)-1-메틸-8-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메틸 메탄설포네이트;
(R)-(8-(1-(2-아미노-2-옥소에틸)-1H-피라졸-4-일)-6-(4-클로로페닐)-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메틸 메탄설포네이트;
(R)-(6-(4-클로로페닐)-8-(1-(2-(다이메틸아미노)-2-옥소에틸)-1H-피라졸-4-일)-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메틸 메탄설포네이트;
(R)-(6-(4-클로로페닐)-8-((2-하이드록시에틸)카바모일)-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메틸 메탄설포네이트;
(R)-(4-(4-클로로페닐)-2,3,9-트라이메틸-6H-티에노[3,2-f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-6-일)메틸 메탄설포네이트;
(R)-(4-(4-클로로페닐)-2,3,9-트라이메틸-6H-티에노[3,2-f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-6-일)메틸 설파메이트;
(R)-(4-(4-클로로페닐)-2,3,9-트라이메틸-6H-티에노[3,2-f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-6-일)메틸 다이메틸설파메이트; 및
(R)-(4-(4-클로로페닐)-2,3,9-트라이메틸-6H-티에노[3,2-f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-6-일)메틸 메틸설파메이트.
본 발명의 화합물은, BRD-함유 단백질(예컨대, BRD2, BRD3 및 BRD4)를 선택적으로 억제하는 설포네이트 유도체 및 설파메이트 유도체를 포함한다.
본 발명의 화합물을, BRD 결합 및 암 세포 항-증식성 활성 분석을 사용하여 실험관 내 효력에 대해 평가하였다. 상기 화합물의 생체 내 효능은, 암-유도된 동물 모델을 사용하여 확인하였다. 본 발명의 화합물은 아세틸화된 히스톤 펩타이드에 대한 BRD 결합 활성의 상당한 억제, 및 마우스, 래트 및 개에서의 탁월한 약동학적 특성을 나타내었다.
본 발명의 화합물을 사용하여, 암 세포의 성장을 실험관 내 또는 생체 내에서 억제하거나, 이를 필요로 하는 포유동물을 실험관 내 또는 생체 내에서 치료할 수 있다.
화학식 I 또는 II의 화합물은 염을 형성할 수 있으며, 상기 화합물의 염은 본 발명의 범주 내에 포함된다.
본원에서 사용되는 용어 "염" 또는 "약학적으로 허용가능한 염"은, 화합물의 무기 또는 유기 염을 지칭한다. 이러한 염은, 예를 들어 매질(예컨대, 형성된 염이 이어서 침전되는 매질) 중에서 또는 수성 매질 중에서 화학식 I 또는 II의 화합물을 일정량의 산 또는 염기와, 예컨대 당량으로서 반응시키고, 이어서 동결 건조시켜 제조할 수 있다. 대표적인 염은, 바이설페이트, 설페이트, 벤젠 설포네이트, 캄포어설포네이트, 라우릴설포네이트, 메탄설포네이트, 나프탈렌설포네이트, 톨루엔설포네이트, 아세테이트, 트라이플루오로아세테이트, 벤조에이트, 보레이트, 부티레이트, 시트레이트, 포메이트, 푸마레이트, 하이드로브로마이드, 하이드로클로라이드, 하이드로요오다이드, 락테이트, 라우레이트, 말레이트, 말로네이트, 메실레이트, 나이트레이트, 옥살레이트, 포스페이트, 헥사플루오로포스페이트, 프로피오네이트, 살리실레이트, 스테아레이트, 석시네이트, 타르타레이트, 티오시아네이트 등을 포함한다. 상기 염은, 알칼리 금속 및 알칼리 토금속(예컨대, 칼슘, 나트륨, 리튬, 마그네슘 및 칼륨)에 기초한 염; 또는 유기 염기, 예를 들면 유기 아민(예컨대, 다이사이클로헥실아민, t-부틸 아민, 메틸아민, 다이메틸아민, 트라이에틸아민, 에틸아민, 프로카인, 모폴린, N-메틸피페리딘, 다이벤질아민 등)과의 염; 또는 아민 염으로서의 염을 포함할 수 있다.
화학식 I 또는 II의 화합물은 용매화된 형태 또는 비용매화된 형태로 존재할 수 있다. 본 발명의 화합물의 용매화물은 합성 과정에 형성될 수 있으며, 이때 상기 화합물은 (예컨대, 이온성 및/또는 공유 결합에 의해) 하나 이상의 용매 분자와 물리적으로 결합된다. 임의적으로, 상기 화합물을 목적하는 양의 선택 용매(예컨대, 유기 용매, 물 또는 이들의 혼합물)에 용해시켜 용액을 형성하고, 상기 용액을 주위 온도보다 높은 온도에서 가열하고, 상기 용액을, 용매화물의 결정을 형성하기에 충분한 속도로 냉각시키고, 이어서 당분야에 공지된 방법을 사용하여 이를 추가로 단리함으로써, 용매화물로 전환시킬 수 있다. 적합한 용매의 예는 메탄올레이트, 에탄올레이트, 수화물(이때, 용매 분자는 물임) 등을 포함한다.
화학식 I 또는 II의 화합물은 비대칭 또는 키랄 중심을 포함하고, 이에 따라 상이한 이성질체 형태로 존재할 수 있다. 본 발명의 화합물의 모든 입체 이성질체(예컨대, 기하 이성질체, 광학 이성질체 등), 거울상 이성질체 형태, 부분입체 이성질체 형태, 호변 이성질체 형태 및 위치 이성질체도 본 발명의 범주 내에 포함된다. 화합물의 제 1 배좌 형태는, 당분야에 공지된 방법(예컨대, 크로마토그래피, 결정화, 및 특정 목적하는 배좌 형태를 선택적으로 제공하는 합성 방법)을 사용하여, 제 2 및 상이한 배좌 형태로부터 분리될 수 있다.
또한, 본 발명은 전암성 전환 또는 암을 예방 또는 치료하기 위한 약학 조성물을 제공하며, 상기 조성물은, 활성 성분으로서 화학식 I 또는 II의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물, 용매화물 또는 이성질체, 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함한다.
전암성 전환 또는 암은 자가면역 질환, 상피성 종양, 흑색종, 백혈병, 예컨대 급성 전골수성 백혈병, 림프종, 고형 또는 비-림프구성 종양, 예컨대 골육종, 대장암, 췌장암, 유방암, 전립선암, 난소암, 뇌암, 자궁경부암, 및 폐암으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 1회, 또는 필요한 경우 수 회 투여되어, 상기 조성물의 의학적 효과량(예컨대, 상기 조성물을 수용하는 개체에서 BRD를 억제함으로써, 질환, 장애 또는 증상의 조절을 매개하기에 효과적인 양)을 전달할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 화합물을 포함하는 약학 조성물의 의학적 효과량은, 상기 화합물과 접촉하는 세포 내로 도입되어 상기 세포 내에서 BRD를 억제하는 양일 수 있다. 상기 약학 조성물의 이러한 의학적 효과량은 인자, 예컨대 투여 방식, 투여를 위한 제형, 조절할 질환, 상기 조성물을 수용하는 개체의 크기 및 건강, 및 당분야의 의사가 고려할 수 있는 다른 인자에 의존할 것이다.
투여되는 약학 조성물의 양은 0.01 mg/일 내지 약 1,000 mg/일, 더욱 전형적으로 약 1 mg/일 내지 약 200 mg/일로 다를 수 있다. 당업자는, 본 발명의 화합물의 의학적 효과량을 결정하기 위해, 전임상 및 임상 연구에서 시험되는 투여량의 가능한 범위를 평가하기 위한 약물 전달 및 약동학의 공지된 원리 및 모델을 적용할 수 있다.
약학적으로 허용가능한 담체는, 결합제(예컨대, 시럽, 소르피톨, 검, 옥수수 전분, 젤라틴 및 아카시아), 충전제(예컨대, 락토오스, 당, 전분 및 칼슘 포스페이트), 부형제(예컨대, 이칼슘 포스페이트), 붕해제(예컨대, 식물성 전분 및 알긴산), 윤활제(예컨대, 마그네슘 스테아레이트) 및 향미제(예컨대, 감미제, 천연 및 인공 향료)로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
약학적으로 허용가능한 담체는 상기 조성물의 저장, 안정성, 투여 및 전달 중 하나 이상을 촉진할 수 있다. 상기 담체는, 예를 들어 상기 조성물이 분말 또는 고체 형태가 될 수 있도록 미립자일 수 있다. 상기 담체는, 상기 약학 조성물이 섭취, 주입, 적용 또는 달리 투여될 수 있도록 반-고체, 겔 또는 액체 제형일 수 있다. 상기 담체는, 상기 약학 조성물이 흡입될 수 있도록 기상일 수 있다.
본 발명의 화합물을 함유하는 약학 조성물의 경구 투여의 경우, 적합한 제형은 정제, 당의정, 캡슐 등의 형태로 제공될 수 있으며, 이때 본 발명의 화합물은 전형적으로, 단독 활성 성분으로서 또는 하나 이상의 약제와의 조합으로, 사전결정된 양의 분말, 과립, 용액 또는 현탁액으로 제공될 수 있다. 이러한 경구 제형은 이의 붕해 및/또는 흡수를 개질하기 위해 코팅되거나 코팅되지 않을 수 있다. 코팅은, 당분야에 공지된 통상적인 코팅제 및 방법을 사용하여 수행될 수 있다.
본 발명의 화합물 또는 약학 조성물을 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 방식은, 약학 조성물을 전달하기에 적합하고, BRD를 억제함으로써 질환, 장애 또는 증상을 치료하기에 특히 적합한, 당분야에 공지된 임의의 방식일 수 있다. 상기 약학 조성물은 살포 및 연동(peristaltic) 기술에 의해 정맥내, 복강내, 경구, 피하, 근육내, 비강내, 경피 투여될 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 하나 이상의 약제를 추가로 포함할 수 있다.
구체적으로, 상기 약학 조성물은 또한 질환, 장애 또는 증상(즉, 전암성 전환 또는 암)을 치료하기 위해 다른 요법(예컨대, 하나 이상의 추가적인 약제)과 조합될 수 있다. 이러한 병용 요법은 동시에, 순차적으로, 또는 본 발명의 조성물과 다른 요법을 교대하는 섭생법으로 투여될 수 있다.
또한, BRD 억제 활성을 갖는 본 발명의 화합물은, 전암성 전환 또는 암을 치료하는데 사용되는 경우, 조합에 의해 세포자멸사의 상승적 개선 및/또는 암세포의 성장 억제에 대한 가능성을 갖는 하나 이상의 화학치료제와 조합으로 사용될 수 있다.
상기 화학치료제는, 비제한적으로, LSD1 차단제, 퍼옥시좀 증식-활성제 수용체(PPAR) 리간드(예컨대, 로시글리타존); 알킬화제(예컨대, 질소 머스타드, 예컨대 메클로레타민, 클로람부실, 사이클로포스프아마이드, 이포스파미드, 및 멜팔란; 나이트로소우레아, 예컨대 스트렙토조신, 카무스틴, 및 로무스틴; 알킬 설포네이트, 예컨대 부설판; 트라이아진, 예컨대 다카르바진 및 테모졸로마이드; 에틸렌이민, 예컨대 티오테파 및 알트레타민; 및 백금계 약물, 예컨대 시스플라틴, 카보플라틴, 및 옥살라플라틴); 항대사성물질(예컨대, 5-플루오로우라실, 6-머캅토푸린, 카페시타빈, 클라드리빈, 클로파라빈, 사이타라빈, 플록수리딘, 플루다라빈, 겜시타빈, 하이드록시우레아, 메토트렉세이트, 페미트렉스드, 펜토스타틴, 및 티오구아닌); 항-종양 항생제(예컨대, 안트라사이클린, 예컨대 다우노루비신, 독소루비신, 에피루비신, 및 이다루비신; 및 악티노마이신-D, 블레오마이신, 미토마이신-C, 및 미톡산트론); 토포이소머라제 억제제(예를 들면, 토포이소머라제 I 억제제, 예컨대 토포테칸 및 이리노테칸; 및 토포이소머라제 II 억제제, 예컨대 에토포사이드, 테니포사이드, 및 미톡산트론); 유사분열 억제제(예를 들면, 탁산, 예컨대 파클리탁셀 및 도세탁셀; 에포틸론, 예컨대 익사베필론; 일일초알칼로이드, 예컨대 빈블라스틴, 빈크리스틴, 및 비노렐빈; 및 에스트라무스틴); 코르티코스테로이드(예컨대, 프레드니손, 메틸프레드니솔론, 및 덱사메타손); 프로테오솜 억제제(예컨대, 보르테조밉); 표적화된 요법(예컨대, 이마티닙, 게피티닙, 수니티닙, 리툭시맙, 알렘투주맙, 트라스투주맙, 및 보르테조밉); 분화제(예컨대, 레티노이드, 트레티노인, 및 벡사로텐); 및 호르몬제(예컨대, 항-에스트로겐, 예컨대 풀베스트란트, 타목시펜, 및 토레미펜; 아로마타제 억제제, 예컨대 아나스트로졸, 엑세메스탄, 및 레트로졸; 프로게스틴, 예컨대 메게스트롤 아세테이트; 에스트로겐; 항-안드로겐, 예컨대 비칼루타마이드, 플루타마이드, 및 닐루타마이드; 성선 자극 호르몬-방출 호르몬(GnRH)(황체 형성 호르몬-방출 호르몬(LHRH) 작용제 또는 유사체로도 공지됨, 예컨대 류프로라이드 및 고세렐린)를 포함한다.
또한, 본 발명은 포유동물에서 전암성 전환 또는 암을 예방 또는 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은, 상기 치료가 필요한 포유동물에게 화학식 I 또는 II의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물, 용매화물 또는 이성질체를 투여하는 것을 포함한다.
상기 포유동물은 인간일 수 있다.
상기 방법에서, 본 발명의 하나 이상의 화합물은 단일 약제로서 의학적 효과량으로 투여되거나, 병용 요법으로 투여될 수 있으며, 이때 본 발명의 화합물의 의학적 효과량은 하나 이상의 추가적인 약제의 의학적 효과량과 함께 투여된다.
따라서, 상기 전암성 전환 또는 암을 예방 또는 치료하는 방법은, (i) 화학식 I 또는 II의 화합물, 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 제 1 조성물을 상기 치료가 필요한 포유동물에게 투여하는 단계; 및 (ii) 화학치료제를 포함하는 하나 이상의 추가적인 약제를 포함하는 제 2 조성물을 상기 치료가 필요한 포유동물에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다.
상기 방법에서, 상기 제 1 및 제 2 조성물은 동시에 또는 순차적으로 및 임의의 순서로 투여된다.
또한, 본 발명은 전암성 전환 또는 암의 예방 또는 치료용 약제의 제조를 위한 본 발명의 화합물의 용도를 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 화합물 또는 약학 조성물 및 이의 사용 지침서를 포함하는 키트를 제공한다.
하기 실시예는 본 발명의 범주를 제한하지 않고 본 발명을 추가로 예시하는 것으로 의도된다.
NMR 스펙트럼을 30℃에서 5-mm o.d. 튜브(노렐 인코포레이티드(Norell, Inc.) 507-HP) 중의 CDCl3 및 DMSO-d 6 용액 내에서 기록하고, 버라이언(Varian) VNMRS-400 상에서 400 MHz로 1H에 대해 수집하였다. 화학적 이동(δ)은 테트라메틸실란(TMS = 0.00 ppm)에 대한 것이며, ppm으로 표현된다. LC/MS는, 피닌간 써모 엘씨큐 어드밴티지 맥스(FINNIGAN Thermo LCQ Advantage MAX), 애질런트(Agilent) LC 1200 시리즈(칼럼: ESI(+) 이온화 방식으로 조작되는 와이엠씨 하이드로스피어(YMC Hydrosphere)(C18, Φ4.6 x 50 mm, 3 μm, 120 Å, 40℃); 유속 = 1.0 mL/min; 및 유동 상 = 물 또는 CH3CN 중의 0.01% 헵타플루오로부티르산(HFBA) 및 1.0% 이소프로필 알코올(IPA)) 상의 이온-트랩(Ion-trap) 질량 분광계 상에서 취했다.
실시예 1 내지 5
Figure 112016107528273-pct00020
상기 식에서, R1은 상기 정의된 것과 같은 의미를 가진다.
단계 1: ( S )- 메틸 2-((3급- 부톡시카보닐 )아미노)-3- 하이드록시프로파노에이트(중간체 2)의 제조
Figure 112016107528273-pct00021
건조 테트라하이드로퓨란(THF)(64.3 mL) 중의 (L)-세린메틸 에스터 HCl(5.00 g, 32.1 mmol)의 용액에 0℃에서 트라이에틸아민(TEA)(9.85 mL, 70.7 mmol) 및 이어서 THF(30 mL) 중의 (Boc)2O(7.46 mL, 32.1 mmol)의 용액을 가했다. 이 반응 혼합물을 실온(r.t.)에서 12시간 동안 교반하였다. 생성 혼합물을 진공 중에서 농축한 후, 잔사를 에틸 아세테이트(EtOAc)와 물 사이에 분배하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합친 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하여, 표제 화합물(7.16 g, >99%)을 무색 오일로서 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.54 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 4.39 (brs, 1H), 3.96 (ABX, J AB = 11.2 Hz, J Bx = 3.6 Hz, 1H), 3.89 (ABX, J AB = 11.2 Hz, J Ax = 3.6 Hz, 1H), 3.79 (s, 3H), 2.81 (brs, 1H), 1.46 (s, 9H).
단계 2: ( S )-3-3급-부틸-4-메틸 2,2- 다이메틸옥사졸리딘 -3,4- 다이카복실레이트( 중간체 3)의 제조
Figure 112016107528273-pct00022
건조 아세톤(55 mL) 중의 (S)-메틸 2-((3급-부톡시카보닐)아미노)-3-하이드록시프로파노에이트(6.16 g, 28.1 mmol) 및 2,2-다이메톡시프로판(34.4 mL, 281 mmol)의 용액에 실온에서 붕소 트라이플루오라이드 다이에틸 에터(BF3·OEt2)(0.214 mL, 1.68 mmol)를 가했다. 이 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 생성 혼합물을 진공 중에서 농축한 후, 잔사를 다이클로로메탄(DCM)으로 희석하고, 50% NaHCO3 수용액 및 물로 2회 세척하였다. 분리한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(Hex:EtOAc=10:1)로 정제하여, 표제 화합물(6.75 g, 93%)을 황색 오일로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): (회전 이성질체들로부터의 2개의 세트) δ 4.38 (dd, J = 6.8, 2.8 Hz, 1H), 4.15 (ddd, J = 9.2, 9.2, 7.2 Hz, 2H), 3.76 (s, 3H), 1.83 (s, 3H), 1.54 (s, 3H), 1.42 (s, 9H).
δ 4.49 (dd, J = 6.8, 2.8 Hz, 1H), 4.05 (ddd, J = 9.2, 9.2, 3.2 Hz, 2H), 3.76 (s, 3H), 1.64 (s, 3H), 1.50 (s, 12H).
단계 3: (S)-3-(3급- 부톡시카보닐 )-2,2- 다이메틸옥사졸리딘 -4- 카복실산(중간체 4)의 제조
Figure 112016107528273-pct00023
THF(80 mL) 및 물(40 mL) 중의 (S)-3-3급-부틸-4-메틸 2,2-다이메틸옥사졸리딘-3,4-다이카복실레이트(6.75 g, 26.0 mmol)의 용액에 실온에서 리튬 하이드록사이드 수화물(1.20 g, 28.6 mmol)을 가했다. 이 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 휘발성 용매를 증발시킨 후, 잔사를 EtOAc로 희석하고, 2 N 수성 HCl로 중화시키고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하여, 표제 화합물(6.32 g, 99%)을 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): (회전 이성질체들의 2세트) δ 4.40-4.51 (m, 1H), 4.17-4.28 (m, 1H), 4.11-4.15 (m, 1H), 1.62 및 1.67 (s 및 s, 3H), 1.51 및 1.54 (s 및 s, 3H), 1.43 및 1.51 (s 및 s, 9H).
단계 4: 6- 메톡시 -2-메틸-4H- 벤조[d][1,3]옥사진 -4-온(중간체 6)의 제조
Figure 112016107528273-pct00024
2-아미노-5-메톡시벤조산(5.00 g, 29.9 mmol) 및 아세트산 무수물(28.2 mL, 299 mmol)의 혼합물을 4시간 동안 환류시키고, 이어서 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 톨루엔으로 희석하고, 남아있는 아세트산을 제거하기 위해 진공 중에서 2회 농축하였다. 잔류 고체를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(Hex:EtOAc = 3:1 내지 1:1 내지 1:2)로 정제하여, 표제 화합물(5.68 g, 99%)을 연황색 고체로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.56 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.36 (dd, J = 8.8, 3.2 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H), 2.45 (s, 3H).
단계 5: N -(2-(4- 클로로벤조일 )-4- 메톡시페닐 ) 아세트아마이드(중간체 7)의 제조
Figure 112016107528273-pct00025
톨루엔(66 mL)/Et2O (33 mL) 중의 6-메톡시-2-메틸-4H-벤조[d][1,3]옥사진-4-온 (5.68 g, 29.7 mmol)의 용액에 0℃에서 (4-클로로페닐)마그네슘 브로마이드(35.7 mL, 35.7 mmol, THF 중의 1 M 용액)를 적가하였다. 이 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 1시간 동안 교반하였다. 이를 1 N 수성 HCl로 켄칭한 후, 분리된 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합친 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하여, 표제 화합물을 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.
LC/MS m/z 303.99 [M+H]+, Rt = 0.64 min
단계 6: (2-아미노-5- 메톡시페닐 )(4- 클로로페닐 ) 메탄온 (중간체 8)의 제조
Figure 112016107528273-pct00026
상기 단계 5에서 수득된 조질 N-(2-(4-클로로벤조일)-4-메톡시페닐)아세트아마이드를 EtOH(60 mL)에 용해시키고, 이어서 여기에 6 N 수성 HCl(23 mL)을 가했다. 이 반응 혼합물을 2시간 동안 환류시키고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 EtOAc에 용해시키고, 1 N 수성 NaOH로 중화시켰다. 분리된 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합친 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(Hex:EtOAc = 10:1 내지 7:1 내지 5:1)로 정제하여, 표제 화합물(5.10 g, 2 단계에 대해 65%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.63 (dd, J = 6.4, 1.6 Hz, 2H), 7.44 (dd, J = 6.8, 1.6 Hz, 2H), 7.00 (dd, J = 8.8, 3.2 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.71 (brs, 2H), 3.66 (s, 3H).
단계 7: ( S )-3급-부틸 4-((2-(4- 클로로벤조일 )-4- 메톡시페닐 ) 카바모일 )-2,2-다이메틸옥사졸리딘-3- 카복실레이트( 중간체 9)의 제조
Figure 112016107528273-pct00027
DCM(100 mL) 중의 (S)-3-(3급-부톡시카보닐)-2,2-다이메틸옥사졸리딘-4-카복실산(4.78 g, 19.5 mmol)의 용액에 0℃에서 N-메틸모폴린(2.57 mL, 23.4 mmol) 및 이어서 이소부틸 클로로포메이트(3.07 mL, 23.4 mmol)를 가했다. 실온에서 30분 동안 교반한 후, 이 혼합물에 (2-아미노-5-메톡시페닐)(4-클로로페닐)메탄온(5.10 g, 19.5 mmol)을 가했다. 생성 혼합물을 실온에서 밤새도록 교반하였다. 이 반응 혼합물을 DCM으로 희석하고, 2 N 수성 HCl, 포화된 수성 NaHCO3 및 물로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(Hex:EtOAc = 5:1 내지 3:1 내지 1:1)로 정제하여, 표제 화합물(8.50 g, 89%)을 점성 황색 오일로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): (회전 이성질체들로부터의 2개의 세트) δ 10.83 및 10.73 (brs 및 brs, 1H), 8.56 (brs, 1H), 7.69 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.45 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.14 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.98 (brs, 1H), 4.21-4.51 (m, 3H), 3.76 (s, 3H), 1.84 및 1.79 (s 및 s, 3H), 1.59 및 1.57 (s 및 s, 4H), 1.46 (s, 3H), 1.24-1.29 (m, 5H).
단계 8: ( S )-2-아미노- N -(2-(4- 클로로벤조일 )-4- 메톡시페닐 )-3- 하이드록시 -프로판아마이드(중간체 10)의 제조
Figure 112016107528273-pct00028
MeOH(30 mL) 중의 (S)-3급-부틸 4-((2-(4-클로로벤조일)-4-메톡시페닐)카바모일)-2,2-다이메틸옥사졸리딘-3-카복실레이트(3.00 g, 6.14 mmol)의 용액에 실온에서 진한 5% HCl(6.0 mL)을 가했다. 이 반응 혼합물을 5시간 동안 환류시키고, 이어서 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 EtOAc로 희석하고, 포화된 수성 NaHCO3 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하여, 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 11.33 (s, 1H), 8.42 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.46 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.13 (dd, J = 9.2, 2.8 Hz, 1H), 6.99 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 3.94 (ABX, J AB = 10.7 Hz, J Bx = 5.5 Hz, 1H), 3.79 (ABX, J AB = 10.7 Hz, J Ax = 4.9 Hz, 1H), 3.77 (s, 3H), 3.58 (dd, J = 5.6, 5.2 Hz, 1H), 2.01 (brs, 2H). *OH 피크는 관찰되지 않음.
단계 9: ( S )-5-(4- 클로로페닐 )-3-( 하이드록시메틸 )-7- 메톡시 -1 H -벤조[ e ][1,4]- 다이아제핀 -2(3 H )-온(중간체 11)의 제조
Figure 112016107528273-pct00029
상기 단계 8에서 수득된 조질 (S)-2-아미노-N-(2-(4-클로로벤조일)-4-메톡시페닐)-3-하이드록시-프로판아마이드를 EtOH(30 mL)에 용해시키고, 이 반응 혼합물을 밤새도록 환류시키고, 진공 중에서 농축하여, 표제 화합물(2.10 g, >99%)을 황색 고체로서 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.95 (brs, 1H), 7.54 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.37 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.11 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H), 7.06 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.39-4.45 (m, 1H), 4.21-4.25 (m, 1H), 3.80 (dd, J = 7.2, 5.2 Hz, 1H), 3.74 (s, 3H), 2.83 (m, 1H).
단계 10: ( S )-3-(((3급- 부틸다이메틸실릴 ) 옥시 )메틸)-5-(4- 클로로페닐 )-7- 메톡시 -1 H - 벤조[ e ][1,4]다이아제핀 -2(3 H )-온(중간체 12)의 제조
Figure 112016107528273-pct00030
DMF(30 mL) 중의 조질 (S)-5-(4-클로로페닐)-3-(하이드록시메틸)-7-메톡시-1H-벤조[e][1,4]-다이아제핀-2(3H)-온(1.90 g, 5.74 mmol)의 용액에 실온에서 이미다졸(0.665 g, 9.77 mmol) 및 이어서 t-부틸다이메틸실릴 클로라이드(TBDMS-Cl)(1.30 g, 8.62 mmol)을 가했다. 이 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 생성 혼합물을 진공 중에서 농축한 후, 잔사를 EtOAc로 희석하고, 2 N 수성 HCl, 포화된 수성 NaHCO3, 물 및 염수로 순차적으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(Hex:EtOAc = 7:1 내지 5:1 내지 3:1)로 정제하여, 표제 화합물(2.30 g, 90%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 9.27 (brs, 1H), 7.51 (dd, J = 8.4, 2.0 Hz, 2H), 7.33 (d, J = 8.4, 2.0 Hz, 2H), 7.14 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.08 (dd, J = 8.8, 2.8 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.56 (ABX, J AB = 10.1 Hz, J Ax = 6.5 Hz, 1H), 4.29 (ABX, J AB = 10.1 Hz, J Ax = 6.7 Hz, 1H), 3.74 (dd, J = 6.8, 6.0 Hz, 1H), 3.73 (s, 3H), 0.94 (s, 9H), 0.18 (s, 3H), 0.16 (s, 3H).
단계 11: ( S )-3-(((3급- 부틸다이메틸실릴 ) 옥시 )메틸)-5-(4- 클로로페닐 )-7- 메톡시 -1 H - 벤조[ e ][1,4]다이아제핀 -2(3 H )- 티온(중간체 13)의 제조
Figure 112016107528273-pct00031
THF(23 mL) 중의 P4S10(1.00 g, 2.25 mmol) 및 탄산 나트륨(0.238 g, 2.25 mmol)의 혼합물 실온에서 1시간 동안 교반하고, 0℃로 냉각하였다. 이 반응 혼합물에 THF(5.0 mL) 중의 (S)-3-(((3급-부틸다이메틸실릴)옥시)메틸)-5-(4-클로로페닐)-7-메톡시-1H-벤조[e][1,4]다이아제핀-2(3H)-온(2.00 g, 4.49 mmol)의 용액을 가한 후, 이 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 및 이어서 실온에서 3일 동안 교반하였다. 생성 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과한 후, 여액을 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 EtOAc에 용해시키고, 포화된 수성 NaHCO3로 2회 및 염수로 1회 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(Hex:EtOAc = 5:1)로 정제하여, 표제 화합물(1.48 g, 71%)을 점성 오일로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 10.77 (brs, 1H), 7.51 (dd, J = 8.4, 1.6 Hz, 2H), 7.33 (d, J = 8.4, 2.4 Hz, 2H), 7.20 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.08 (dd, J = 9.2, 3.2 Hz, 1H), 6.76 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 4.63 (ABX, J AB = 10.1 Hz, J Bx = 7.3 Hz, 1H), 4.47 (ABX, J AB = 10.1 Hz, J Ax = 5.5 Hz, 1H), 3.88 (dd, J = 7.2, 5.6 Hz, 1H), 3.74 (s, 3H), 0.93 (s, 9H), 0.17 (s, 3H), 0.15 (s, 3H).
단계 12: ( R , Z )- N ' -(3-(((3급- 부틸다이메틸실릴 ) 옥시 )메틸)-5-(4- 클로로페닐 )-7- 메톡시 -1 H - 벤조[ e ][1,4]다이아제핀 -2(3 H )- 일리덴 ) 아세토하이드라자이드(중간체 14)의 제조
Figure 112016107528273-pct00032
THF(32 mL) 중의 (S)-3-(((3급-부틸다이메틸실릴)옥시)메틸)-5-(4-클로로페닐)-7-메톡시-1H-벤조[e][1,4]다이아제핀-2(3H)-티온(1.48 g, 3.21 mmol)의 용액에 0℃에서 히드라진 일수화물(0.604 mL, 19.3 mmol)을 가했다. 이 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하고, 0℃로 냉각하였다. 여기에 TEA(2.68 mL, 19.3 mmol) 및 이어서 아세틸 클로라이드(1.37 mL, 19.3 mmol)를 첨가한 후, 이 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 생성 혼합물을 진공 중에서 농축한 후, 잔사를 DCM에 용해시키고, 물로 세척하였다. 분리한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하여, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 10.66 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.52 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.32 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.17 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.04 (dd, J = 8.8, 2.8 Hz, 1H), 6.65 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.49 (ABX, J AB = 9.9 Hz, J bx = 6.9 Hz, 1H), 4.30 (ABX, J AB = 9.9 Hz, J Ax = 5.9 Hz, 1H), 3.97 (dd, J = 6.6, 6.4 Hz, 1H), 3.71 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 0.93 (s, 9H), 0.15 (s, 3H), 0.12 (s, 3H).
단계 13: ( R )-4-(((3급- 부틸다이메틸실릴 ) 옥시 )메틸)-6-(4- 클로로페닐 )-8- 메톡시 -1-메틸-4 H - 벤조[ f ][1,2,4]트라이아졸로 [4,3- a ][1,4] 다이아제핀(중간체 15)의 제조
Figure 112016107528273-pct00033
THF(30 mL) 중의 상기 조질 (R,Z)-N'-(3-(((3급-부틸다이메틸실릴)옥시)메틸)-5-(4-클로로페닐)-7-메톡시-1H-벤조-[e][1,4]다이아제핀-2(3H)-일리덴)아세토하이드라자이드(1.61 g, 3.21 mmol)의 용액에 실온에서 아세트산(6.00 mL, 105 mmol)을 가했다. 이 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 생성 혼합물을 진공 중에서 농축한 후, 잔사를 EtOAc로 희석하고, 포화된 수성 NaHCO3로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하여, 표제 화합물(1.48 g, 2단계에 대해 95%)을 점성 황색 오일로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.55 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.39 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.20 (dd, J = 9.2, 2.8 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.71 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 4.17 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 2.61 (s, 3H), 0.95 (s, 9H), 0.21 (s, 3H), 0.17 (s, 3H).
단계 14: ( R )-(6-(4- 클로로페닐 )-8- 메톡시 -1-메틸-4 H -벤조[ f ][1,2,4]- 트라이아졸로[4,3- a ][1,4]다이아제핀 -4-일)메탄올(중간체 16)의 제조
Figure 112016107528273-pct00034
THF(15 mL) 중의 (R)-4-(((3급-부틸다이메틸실릴)옥시)메틸)-6-(4-클로로페닐)-8-메톡시-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀(1.48 g, 3.06 mmol)의 용액에 실온에서 테트라-n-부틸암모늄 플루오라이드(TBAF)(6.13 mL, 6.13 mmol, THF 중의 1 M 용액)를 가했다. 이 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하고, 포화된 수성 NH4Cl로 켄칭하였다. 이 혼합물을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합친 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(EtOAc 단독 내지 EtOAc:MeOH = 8:1 내지 4:1)로 정제하여, 표제 화합물(983 mg, 87%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.55 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.40 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.22 (dd, J = 8.8, 3.2 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.64 (ABX, J AB = 11.6 Hz, J bx = 5.6 Hz, 1H), 4.53 (ABX, J AB = 11.6 Hz, J Ax = 6.8 Hz, 1H), 3.24 (dd, J = 6.4, 6.0 Hz, 1H), 3.81 (s, 3H), 2.64 (s, 3H). *OH 피크는 관찰되지 않음.
LC/MS m/z 369.2 [M+H]+, Rt = 2.45 min.
실시예 1: ( R )-(6-(4- 클로로페닐 )-8- 메톡시 -1-메틸-4 H -벤조[ f ]-[1,2,4] 트라이아졸로 [ 4,3- a ][1,4]다이아제핀 -4-일)메틸 메탄설포네이트( 화합물 1)의 제조
Figure 112016107528273-pct00035
DCM(3.0 mL) 중의 (R)-(6-(4-클로로페닐)-8-메톡시-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]-트라이아졸로-[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메탄올(중간체 16, 50.0 mg, 0.136 mmol)의 용액에 0℃에서 메탄 설폰일 클로라이드(MsCl)(0.0210 mL, 0.271 mmol) 및 이어서 TEA(0.0470 mL, 0.339 mmol)를 가했다. 이 반응 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반하고, DCM으로 희석하였다. 생성 혼합물을 2 N 수성 HCl 및 포화된 수성 NaHCO3로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(EtOAc:MeOH = 10:1)로 정제하여, 표제 화합물(56.0 mg, 92%)을 황색 오일로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.55 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.42 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.24 (dd, J = 9.2, 2.8 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 5.30 (ABX, J AB = 10.3 Hz, J bx = 7.1 Hz, 1H), 5.17 (ABX, J AB = 10.3 Hz, J Ax = 6.5 Hz, 1H), 4.46 (dd, J = 6.8, 6.4 Hz, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.21 (s, 3H), 2.63 (s, 3H).
LC/MS m/z 447.1 [M+H]+, Rt = 2.87 min
실시예 2: ( R )-(6-(4- 클로로페닐 )-8- 메톡시 -1-메틸-4 H -벤조[ f ][1,2,4] 트라이아졸로 [ 4,3- a ][1,4]다이아제핀 -4-일)메틸 에탄설포네이트( 화합물 2)의 제조
Figure 112016107528273-pct00036
DCM(3.0 mL) 중의 (R)-(6-(4-클로로페닐)-8-메톡시-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]-트라이아졸로-[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메탄올(중간체 16, 0.100 g, 0.271 mmol)의 용액에 0℃에서 에탄설폰일 클로라이드(70.0 mg, 0.542 mmol) 및 이어서 TEA(0.0940 mL, 0.678 mmol)를 가했다. 이 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 생성 혼합물을 진공 중에서 농축한 후, 잔사를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(EtOAc:MeOH = 10:1 내지 5:1)로 정제하여, 표제 화합물(68.0 mg, 54%)을 갈색 오일로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.55 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.42 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.24 (dd, J = 8.8, 2.8 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 5.28 (ABX, J AB = 10.3 Hz, J bx = 6.9 Hz, 1H), 5.18 (ABX, J AB = 10.3 Hz, J Ax = 6.3 Hz, 1H), 4.46 (dd, J = 6.8, 6.8 Hz, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.33 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 2.63 (s, 3H), 1.50 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
LC/MS m/z 461.2 [M+H]+, Rt = 3.17 min
실시예 3: ( R )-(6-(4- 클로로페닐 )-8- 메톡시 -1-메틸-4 H -벤조[f][1,2,4] 트라이아졸로 [ 4,3-a][1,4]다이아제핀 -4-일)메틸 프로판-1- 설포네이트( 화합물 3)의 제조
Figure 112016107528273-pct00037
DCM(1 mL) 중의 (R)-4-(((3급-부틸다이메틸실릴)옥시)메틸)-6-(4-클로로페닐)-8-메톡시-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀(중간체 15, 50.0 mg, 0.136 mmol)의 용액에 0℃에서 프로판-1-설폰일 클로라이드(30.5 μL, 0.271 mmol) 및 이어서 TEA(47.2 μL, 0.339 mmol)를 가했다. 이 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하고, DCM으로 희석하였다. 생성 혼합물을 2 N 수성 HCl 및 포화된 수성 NaHCO3로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(EtOAc:MeOH = 10:1)로 정제하여, 표제 화합물(63.0 mg, 98%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.55 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.41 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.23 (dd, J = 9.0, 3.0 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 5.27 (ABX, J AB = 10.3 Hz, J BX = 6.4 Hz, 1H), 5.18 (ABX, J AB = 10.3 Hz, J AX = 7.6 Hz, 1H), 4.46 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.27 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 2.63 (s, 3H), 2.15-1.93 (m, 2H), 1.12 (t, J = 7.4 Hz, 3H).
LC-MS m/z 475.1 [M+H] +, Rt = 3.13 min.
실시예 4: ( R )-(6-(4- 클로로페닐 )-8- 메톡시 -1-메틸-4 H -벤조[f][1,2,4] 트라이아졸로 [ 4,3-a][1,4]다이아제핀 -4-일)메틸 사이클로프로판설포네이트( 화합물 4)의 제조
Figure 112016107528273-pct00038
THF(0.81 mL) 중의 (R)-4-(((3급-부틸다이메틸실릴)옥시)메틸)-6-(4-클로로페닐)-8-메톡시-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀(중간체 15, 60.0 mg, 0.163 mmol)의 용액에 -78℃에서 리튬 비스(트라이메틸실릴)아마이드(LHMDS)(THF 중의 1.6 M, 0.122 mL, 0.195 mmol) 및 이어서 사이클로프로판설폰일 클로라이드(0.249 mL, 0.244 mmol)를 가했다. 이 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 실온에서 밤새도록 교반하였다. 이를 포화된 수성 NH4Cl로 켄칭한 후, 이 혼합물을 DCM으로 희석하고, 2 N 수성 HCl 및 포화된 수성 NaHCO3로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(EtOAc:MeOH = 10:1)로 정제하여, 표제 화합물(33.0 mg, 43%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.56 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.41 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.23 (dd, J = 9.0, 2.2 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 5.32 (ABX, J AB = 10.2 Hz, J BX = 5.6 Hz, 1H), 5.23 (ABX, J AB = 10.2 Hz, J AX = 8.0 Hz, 1H), 4.46 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 2.73-2.65 (m, 1H), 2.63 (s, 3H), 1.37-1.33 (m, 2H), 1.20-1.15 (m, 2H).
LC-MS m/z 473.2 [M+H] +, Rt = 3.31 min.
실시예 5: ( R )-(6-(4- 클로로페닐 )-8- 메톡시 -1-메틸-4 H -벤조[ f ][1,2,4] 트라이아졸로 [ 4,3- a ][1,4]다이아제핀 -4-일)메틸 벤젠설포네이트( 화합물 5)의 제조
Figure 112016107528273-pct00039
DCM(3.0 mL) 중의 (R)-(6-(4-클로로페닐)-8-메톡시-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]-트라이아졸로-[4,3-a][1,4]-다이아제핀-4-일)메탄올(중간체 16, 50.0 mg, 0.136 mmol)의 용액에 0℃에서 DCM(3.0 mL) 중의 벤젠설폰일 클로라이드(48.0 mg, 0.271 mmol) 및 이어서 TEA(0.0470 mL, 0.339 mmol)를 가했다. 이 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 생성 혼합물을 진공 중에서 농축한 후, 잔사를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(EtOAc:MeOH = 10:1)로 정제하여, 표제 화합물(14.0 mg, 20%)을 갈색 오일로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.02 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.69 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.59 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 7.50 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.38 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.22 (dd, J = 8.8, 2.0 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.02-5.12 (m, 2H), 4.45 (dd, J = 8.0, 4.8 Hz, 1H), 3.83 (s, 3H), 2.60 (s, 3H).
LC/MS m/z 509.2 [M+H]+, Rt = 2.94 min
실시예 6: ( R )-(6-(4- 클로로페닐 )-1-메틸-4 H -벤조[f][1,2,4] 트라이아졸로 [ 4,3-a][1,4]다이아제핀 -4-일)메틸 메탄설포네이트( 화합물 6)의 제조
Figure 112016107528273-pct00040
(R)-(6-(4-클로로페닐)-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메탄올의 제조 절차를 반복하되, 단, 2-아미노-5-메톡시벤조산 대신에 2-아미노벤조산(2.0 g, 14.6 mmol)을 사용하였다. DCM(8.0 mL) 중의 (R)-(6-(4-클로로페닐)-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메탄올(596 mg, 1.76 mmol)의 용액에 0℃에서 MsCl(0.274 mL, 3.52 mmol) 및 이어서 TEA(0.613 mL, 4.40 mmol)를 가했다. 이 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 이를 DCM으로 희석한 후, 생성 혼합물을 2 N 수성 HCl 및 포화된 수성 NaHCO3로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(EtOAc:MeOH = 10:1)로 정제하여, 표제 화합물(645 mg, 88%)을 황색 오일로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.74 (td, J = 7.7, 1.6 Hz, 1H), 7.55-7.46 (m, 5H), 7.36 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.32 (ABX, J AB = 10.1 Hz, J BX = 6.7 Hz, 1H), 5.17 (ABX, J AB = 10.1 Hz, J AX = 6.9 Hz, 1H), 4.46 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 3.21 (s, 3H), 2.67 (s, 3H).
LC-MS m/z 417.2 [M+H] +, Rt = 2.59 min.
실시예 7: ( R )-(6-(4- 시아노페닐 )-8- 메톡시 -1-메틸-4 H -벤조[f][1,2,4] 트라이아졸로 [ 4,3-a][1,4]다이아제핀 -4-일)메틸 메탄설포네이트( 화합물 7)의 제조
Figure 112016107528273-pct00041
실시예 1에 따른 절차를 반복하되, 단, (4-클로로페닐)마그네슘 브로마이드 대신에 1,4-다이브로모벤젠(4.19 g, 0.18 mmol)을 사용하여 표제 화합물(23 mg, 47%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.73 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.69 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.45 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.28-7.25 (m, 1H), 6.84 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 5.31 (ABX, J AB = 10.4 Hz, J BX = 7.1 Hz, 1H), 5.20 (ABX, J AB = 10.4 Hz, J AX = 6.1 Hz, 1H), 4.51 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.20 (s, 3H), 2.64 (s, 3H).
LC-MS m/z 438.2 [M+H] +, Rt = 2.89 min.
실시예 8: ( R )-(6-(4- 클로로페닐 )-8- 메톡시 -1-메틸-4 H -벤조[f][1,2,4] 트라이아졸로 [ 4,3-a][1,4]다이아제핀 -4-일)메틸 설파메이트( 화합물 8)의 제조
Figure 112016107528273-pct00042
단계 1: 설파모일 클로라이드( CH 3 CN 중의 2M 용액)(중간체 17)의 제조
Figure 112016107528273-pct00043
교반 막대 및 고무 격막을 장착한 환저 플라스크에 황이소시아나타이드산 클로라이드(200 mg, 1.41 mmol)를 넣었다. 이 플라스크를 0℃로 냉각하고, 이어서 여기에 HCO2H(288 μL, 7.50 mmol)를 적가하였다. 이를 0℃에서 5분 동안 격렬히 교반한 후, 이 혼합물에 CH3CN(0.70 mL)을 가했다. 이 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 격렬히 교반하고, 실온으로 밤새도록 가온하여, CH3CN 중의 표제 화합물의 용액(약 2 M)을 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.
단계 2: ( R )-6-(4- 클로로페닐 )-8- 메톡시 -1- 메틸 -4H-벤조[f][1,2,4] 트라이아 졸로[ 4,3-a][1,4]다이아제핀 -4-일) 메틸 설파메이트 (화합물 8)의 제조
Figure 112016107528273-pct00044
DMF(0.70 mL) 중의 ((R)-6-(4-클로로페닐)-8-메톡시-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메탄올(중간체 16, 50.0 mg, 0.136 mmol)의 용액에 0℃에서 NaH(55중량%, 8.87 mg, 0.203 mmol) 및 이어서 설파모일 클로라이드(CH3CN 중의 2 M 용액, 0.203 mL, 0.406 mmol)를 가했다. 이 반응 혼합물을 실온에서 35분 동안 교반하고, 이어서 EtOAc로 희석하였다. 생성 혼합물을 2 N 수성 HCl 및 포화된 수성 NaHCO3로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(EtOAc:MeOH = 10:1)로 정제하여, 표제 화합물(48.0 mg, 79%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.54 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.42 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.24 (dd, J = 9.4, 2.6 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 5.86 (s, 2H), 5.33 (dd, J = 18, 10 Hz, 1H), 5.04 (dd, J = 10.4, 5.6 Hz, 1H), 4.46 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 2.63 (s, 3H).
LC-MS m/z 448.2 [M+H] +, Rt = 2.97 min.
실시예 9: ( R )-(6-(4- 클로로페닐 )-8- 메톡시 -1-메틸-4 H -벤조[f][1,2,4] 트라이아졸로 [ 4,3-a][1,4]다이아제핀 -4-일)메틸 다이메틸설파메이트( 화합물 9)의 제조
Figure 112016107528273-pct00045
DMF(0.11 mL) 중의 (R)-(6-(4-클로로페닐)-8-메톡시-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메틸 설파메이트(97.0 mg, 0.217 mmol)의 용액에 0℃에서 NaH(55중량%, 20.8 mg, 0.476 mmol) 및 이어서 메틸 요오다이드(MeI)(54.2 μL, 0.866 mmol)를 가했다. 이 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, EtOAc로 희석하였다. 생성 혼합물을 2 N 수성 HCl 및 포화된 수성 NaHCO3로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 분취용-HPLC로 정제하여, 표제 화합물(38.0 mg, 37%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.55 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.41 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.23 (dd, J = 9.0, 3.0 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 5.23 (ABX, J AB = 10.3 Hz, J BX = 5.9 Hz, 1H), 5.12 (ABX, J AB = 10.3 Hz, J AX = 7.7 Hz, 1H), 4.47 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.01 (s, 6H), 2.63 (s, 3H).
LC-MS m/z 476.2 [M+H] +, Rt = 2.92 min.
실시예 10: R )-(6-(4- 클로로페닐 )-8- 메톡시 -1-메틸-4 H -벤조[f][1,2,4] 트라이아졸로 [ 4,3-a][1,4]다이아제핀 -4-일)메틸 메틸설파메이트( 화합물 10)의 제조
Figure 112016107528273-pct00046
단계 1: 메틸설파모일 클로라이드(중간체 18)의 제조
Figure 112016107528273-pct00047
질소 대기 하에 톨루엔(1.0 mL) 중의 메틸설팜산(100 mg, 0.900 mmol)의 용액에 PCl5(187 mg, 0.900 mmol)를 가했다. 이 반응 혼합물을 80℃로 천천히 가열하고, 4시간 동안 교반하였다. 이를 실온으로 냉각한 후, 이 반응 혼합물을 진공 중에서 농축하여, 표제 화합물(99.0 mg, 85%)을 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 13.8 (brs, 1H), 2.96 (s, 3H).
단계 2: ( R )-(6-( 4-클로로페닐 )-8- 메톡시 -1- 메틸 -4H-벤조[f][1,2,4] 트라이아졸로 [ 4,3-a][1,4]다이아제핀 -4-일) 메틸 메틸설파메이트 (화합물 10)의 제조
Figure 112016107528273-pct00048
DMF(0.70 mL) 중의 (R)-(6-(4-클로로페닐)-8-메톡시-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로 [4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메탄올(50.0 mg, 0.136 mmol)의 용액에 0℃에서 NaH(55중량%, 8.87 mg, 0.203 mmol) 및 이어서 메틸설파모일 클로라이드(52.7 mg, 0.407 mmol)를 가했다. 이 반응 혼합물을 실온에서 40분 동안 교반하고, EtOAc로 희석하였다. 생성 혼합물을 2 N 수성 HCl 및 포화된 수성 NaHCO3로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(EtOAc:MeOH = 10:1)로 정제하여, 표제 화합물(45.0 mg, 72%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.54 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.41 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.23 (dd, J = 8.8, 2.8 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 5.23 (brs, 1H), 5.25 (ABX, J AB = 10.2 Hz, J BX = 6.2 Hz, 1H), 5.05 (ABX, J AB = 10.2 Hz, J AX = 7.0 Hz, 1H), 4.46 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 2.90 (d, J = 5.2 Hz, 3H), 3.83 (s, 3H), 2.63 (s, 3H).
LC-MS m/z 462.2 [M+H] +, Rt = 2.95 min.
실시예 11: ( R )-(6-(4- 클로로페닐 )-1-메틸-8-(1-메틸-1 H -피라졸-4-일)-4 H -벤조[f][1,2,4] 트라이아졸로 [4,3-a][1,4] 다이아제핀 -4-일)메틸 메탄설포네이트( 화합물 11)의 제조
Figure 112016107528273-pct00049
단계 1: ( R )-8- 브로모 -4-(((3급- 부틸다이메틸실릴 ) 옥시 )메틸)-6-(4- 클로로페닐 )-1-메틸-4H- 벤조[f][1,2,4]트라이아졸로 [4,3-a][1,4] 다이아제핀(중간체 19)의 제조
Figure 112016107528273-pct00050
출발 물질로서 2-아미노-5-브로모벤조산(2 g, 9.26 mmol)을 사용하여, (Z)-N'-((R,Z)-7-브로모-3-((3급-부틸다이메틸실릴옥시)메틸)-5-(4-클로로페닐)-1H-벤조[e][1,4]다이아제핀-2(3H)-일리덴)아세토하이드라자이드를 유사한 방식으로 합성하였다. THF(30 mL) 중의 (Z)-N'-((R,Z)-7-브로모-3-((3급-부틸다이메틸실릴옥시)메틸)-5-(4-클로로페닐)-1H-벤조[e][1,4]다이아제핀-2-(3H)-일리덴)아세토하이드라자이드(115 mg, 0.209 mmol)의 용액에 실온에서 아세트산(395 μL, 6.90 mmol)을 가했다. 이 반응 혼합물을 실온에서 밤새도록 교반하였다. 생성 혼합물을 진공 중에서 농축한 후, 잔사를 EtOAc로 희석하고, 포화된 수성 NaHCO3로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하여, 표제 화합물(105 mg, 2 단계에 대해 94%)을 점성 황색 오일로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.81 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.51 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.37 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.70 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 4.15 (t, J = 6.2 Hz, 1H), 2.62 (s, 3H), 0.95(s, 9H), 0.20 (s, 3H), 0.17 (s, 3H).
단계 2: ( R )-4-(((3급- 부틸다이메틸실릴 ) 옥시 )메틸)-6-(4- 클로로페닐 )-1-메틸-8-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-4H- 벤조[f][1,2,4]트라이아졸로 -[4,3-a][1,4] 다이아 제핀(중간체 21)의 제조
Figure 112016107528273-pct00051
건조된 환저 플라스크에 (R)-8-브로모-4-(((3급-부틸다이메틸실릴)옥시)메틸)-6-(4-클로로페닐)-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀(110 mg, 0.207 mmol), 1-메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸(52.0 mg, 0.248 mmol), 다이옥산(8.0 mL) 및 물(4.0 mL)을 넣고, 이를 배기하고, 질소로 수차례 재충전하였다. 여기에 Pd(PPh3)4(24.0 mg, 0.021 mmol) 및 K2CO3(57.2 mg, 0.414 mmol)를 실온에서 가한 후, 이 반응 혼합물을 4시간 동안 환류시켰다. 이를 실온으로 냉각한 후, 이 반응 혼합물을 물(5.0 mL)로 처리하고, 이어서 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여액을 포화된 수성 NaHCO3(5.0 mL)와 DCM(10 mL) 사이에 분배하였다. 분리된 수성 층을 DCM으로 추출하고, 합친 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(EtOAc:MeOH = 10:1)로 정제하여, 표제 화합물(65.0 mg, 59%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.75 (dd, J = 8.4, 1.6 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.57 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.47 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.72 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 4.21 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 3.95 (s, 3H), 2.65 (s, 3H), 0.95 (s, 9H).
단계 3: ( R )-(6-(4- 클로로페닐 )-1-메틸-8-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-4H-벤조[f][1,2,4] 트라이아졸로 [4,3-a][1,4] 다이아제핀 -4-일)메탄올(중간체 22)의 제조
Figure 112016107528273-pct00052
THF(1.0 mL) 중의 (R)-4-(((3급-부틸다이메틸실릴)옥시)메틸)-6-(4-클로로페닐)-1-메틸-8-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로 [4,3-a][1,4]다이아제핀(65.0 mg, 0.122 mmol)의 용액에 실온에서 TBAF(244 μL, 0.244 mmol, THF 중의 1 M 용액)를 가했다. 이 반응 혼합물을 실온에서 밤새도록 교반하고, 포화된 수성 NH4Cl로 켄칭하였다. 이 혼합물을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합친 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(EtOAc 단독 내지 EtOAc:MeOH = 8:1 내지 4:1)로 정제하여, 표제 화합물(23.0 mg, 45%)을 황색 고체로서 수득하였다.
LC/MS m/z 419.12 [M+H]+, Rt = 0.24 min.
단계 4: (R) -(6-(4- 로로페닐 )-1- 메틸 -8-(1- 메틸 -1H- 피라졸 -4-일)-4H-벤조[f][1,2,4] 트라이아졸로 [4,3-a][1,4] 다이아제핀 -4-일) 메틸 메탄설포네이트 (화합물 11)의 제조
Figure 112016107528273-pct00053
DCM(0.50 mL) 중의 (R)-(6-(4-클로로페닐)-1-메틸-8-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-4H-벤조[f][1,2,4]트라이졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메탄올(23.0 mg, 0.055 mmol)의 용액에 0℃에서 MsCl(8.56 μL, 0.115 mmol) 및 이어서 TEA(19.1 μL, 0.137 mmol)를 가했다. 이 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 이를 DCM으로 희석한 후, 생성 혼합물을 2 N 수성 HCl 및 포화된 수성 NaHCO3로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(EtOAc:MeOH = 10:1)로 정제하여, 표제 화합물(14.0 mg, 52%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.78 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.56 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.47 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.37 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.31 (ABX, J AB = 10.4 Hz, J BX = 7.0 Hz, 1H), 5.18 (ABX, J AB = 10.4 Hz, J AX = 6.6 Hz, 1H), 4.50 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.20 (s, 3H), 2.67(s, 3H). LC-MS m/z 497.3 [M+H] + Rt = 3.06 min.
실시예 12 및 13

실시예 12: ( R )-(8-(1-(2-아미노-2- 옥소에틸 )-1 H -피라졸-4-일)-6-(4- 클로로페닐 )-1-메틸-4 H - 벤조[f][1,2,4]트라이아졸로 [4,3-a][1,4] 다이아제핀 -4-일)메틸 메 탄설포네이트( 화합물 12)의 제조
단계 1: 2-(4-(4,4,5,5- 테트라메틸 -1,3,2- 다이옥사보롤란 -2-일)-1H-피라졸-1-일) 아세트아마이드(중간체 24)의 제조
Figure 112016107528273-pct00055
CH3CN(5.0 mL) 중의 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸(200 mg, 1.03 mmol), 2-브로모아세트아마이드(213 mg, 1.54 mmol) 및 Cs2CO3(1.27 g, 3.92 mmol)의 혼합물을 90℃에서 3시간 동안 교반하였다. 이를 실온으로 냉각한 후, 이 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합친 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하여, 표제 화합물(174 mg, 67%)을 백색 고체로서 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.89 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 6.21 및 5.41 (brs, 2H), 4.83 (s, 2H), 1.32 (s, 12H).
단계 2: ( R )-2-(4-(4-(((3급- 부틸다이메틸실릴 ) 옥시 )메틸)-6-(4- 클로로페닐 )-1-메틸-4H- 벤조[f][1,2,4]트라이아졸로 [4,3-a][1,4] 다이아제핀 -8-일)-1H-피라졸-1-일) 아세트아마이드(중간체 26)의 제조
Figure 112016107528273-pct00056
건조된 환저 플라스크에 (R)-8-브로모-4-(((3급-부틸다이메틸실릴)옥시)메틸)-6-(4-클로로페닐)-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4] 트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀(300 mg, 0.564 mmol), 2-(4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아마이드(142 mg, 0.564 mmol), 다이옥산(2.0 mL) 및 물(1.0 mL)을 넣고, 이를 배기하고, 질소로 수차례 재충전하였다. 이 혼합물에 실온에서 Pd(PPh3)4(65.2 mg, 0.056 mmol) 및 K2CO3(156 mg, 1.13 mmol)를 첨가한 후, 이 반응 혼합물을 4시간 동안 환류시켰다. 이를 실온으로 냉각한 후, 이 반응 혼합물을 물(5.0 mL)로 처리하고, 이어서 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여액을 포화된 수성 NaHCO3(5.0 mL)와 DCM(10 mL) 사이에 분배하였다. 분리된 수성 층을 DCM으로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(EtOAc/MeOH = 10:1)로 정제하여, 표제 화합물(194 mg, 60%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.85 (s, 1H), 7.75 (dd, J = 8.0, 2.0 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.55 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.49-7.44 (m, 2H), 7.35 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.83 (s, 2H), 4.71 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 4.18 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 3.73 (s, 2H), 2.64 (s, 3H), 0.94 (s, 9H), 0.20 (s, 3H), 0.16 (s, 3H).
단계 3: ( R )-2-(4-(6-(4- 클로로페닐 )-4-( 하이드록시메틸 )-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4] 트라이아졸로 [4,3-a][1,4] 다이아제핀 -8-일)-1H-피라졸-1-일) 아세트아마이드(중간체 28)의 제조
Figure 112016107528273-pct00057
THF(2.0 mL) 중의 (R)-2-(4-(4-(((3급-부틸다이메틸실릴)옥시)메틸)-6-(4-클로로페닐)-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-8-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아마이드(194 mg, 0.337 mmol)의 용액에 실온에서 TBAF(673 μL, 0.673 mmol, THF 중의 1 M 용액)를 가했다. 이 반응 혼합물을 실온에서 밤새도록 교반하고, 포화된 수성 NH4Cl로 켄칭하였다. 이 혼합물을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합친 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(EtOAc 단독 내지 EtOAc:MeOH = 10:1)로 정제하여, 표제 화합물(73.0 mg, 47%)을 황색 고체로서 수득하였다.
LC/MS m/z 462.32 [M+H]+, Rt = 0.20 min.
단계 4: ( R )-(8-(1-(2-아미노-2- 옥소에틸 )-1H-피라졸-4-일)-6-(4- 클로로페닐 )-1-메틸-4H- 벤조[f][1,2,4]트라이아졸로 [4,3-a][1,4] 다이아제핀 -4-일)메틸 메탄 설포네이트( 화합물 12)의 제조
Figure 112016107528273-pct00058
DCM(0.80 mL) 중의 (R)-2-(4-(6-(4-클로로페닐)-4-(하이드록시메틸)-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-8-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아마이드(73.0 mg, 0.158 mmol)의 용액에 0℃에서 MsCl(24.6 μL, 0.316 mmol) 및 이어서 TEA(55.1 μL, 0.395 mmol)를 가했다. 이 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하고, DCM으로 희석하였다. 생성 혼합물을 2 N 수성 HCl 및 포화된 수성 NaHCO3로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 분취용-HPLC로 정제하여, 표제 화합물(36.0 mg, 43%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.82 (s, 1H), 7.79 (dd, J = 8.6, 1.8 Hz, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.53 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.49 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.32 및 5.78 (brs, 2H), 5.29 (ABX, J AB = 10.5 Hz, J BX = 6.1 Hz, 1H), 5.16 (ABX, J AB = 10.5 Hz, J AX = 6.7 Hz, 1H), 4.83 (s, 2H), 4.47 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 3.18 (s, 3H), 2.65 (s, 3H).
LC-MS m/z 540.3 [M+H] + Rt = 2.83 min.
실시예 13: ( R )-(6-(4- 클로로페닐 )-8-(1-(2-( 다이메틸아미노 )-2- 옥소에틸 )-1 H -피라졸-4-일)-1-메틸-4 H -벤조[f][1,2,4] 트라이아졸로 [4,3-a][1,4] 다이아제핀 -4-일)메틸 메탄설포네이트( 화합물 13)의 제조
단계 1: N,N- 다이메틸 -2-(4-(4,4,5,5- 테트라메틸 -1,3,2- 다이옥사보롤란 -2-일)-1H-피라졸-1-일) 아세트아마이드(중간체 25)의 제조
Figure 112016107528273-pct00059
DMF(3.0 mL) 중의 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸(100 mg, 0.515 mmol), 2-클로로-N,N-다이메틸아세트아마이드(58.3 μL, 0.567 mmol) 및 Cs2CO3(252 mg, 0.773 mmol)의 혼합물을 90℃에서 3시간 동안 교반하였다. 이를 실온으로 냉각한 후, 이 반응 혼합물을 물로 처리하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합친 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하여, 표제 화합물(106 mg, 74%)을 백색 고체로서 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.81 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.99 (s, 2H), 3.07 (s, 3H), 2.98 (s, 3H), 1.31 (s, 12H).
단계 2: ( R )-2-(4-(4-(((3급- 부틸다이메틸실릴 ) 옥시 )메틸)-6-(4- 클로로페닐 )-1-메틸-4H- 벤조[f][1,2,4]트라이아졸로 [4,3-a][1,4] 다이아제핀 -8-일)-1H-피라졸-1-일)-N,N- 다이메틸아세트아마이드(중간체 27)의 제조
Figure 112016107528273-pct00060
실시예 12의 단계 2에 따른 절차를 반복하되, 단, 중간체 24 대신에 중간체 25를 사용하여, 표제 화합물(66.0 mg, 45%)을 황색 고체로서 수득하였다.
LC/MS m/z 604.48 [M+H]+, Rt = 0.28 min.
단계 3: ( R )-2-(4-(6-(4- 클로로페닐 )-4-( 하이드록시메틸 )-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4] 트라이아졸로 [4,3-a][1,4] 다이아제핀 -8-일)-1H-피라졸-1-일)-N,N- 다이 메틸아세트아마이드(중간체 29)의 제조
Figure 112016107528273-pct00061
실시예 12의 단계 3에 따른 절차를 반복하되, 단, 중간체 26 대신에 중간체 27을 사용하여, 표제 화합물(35 mg, 72%)을 황색 고체로서 수득하였다.
LC/MS m/z 490.3 [M+H]+, Rt = 0.31 min.
단계 4: (R) -(6-(4- 클로로페닐 )-8-(1-(2-( 다이메틸아미노 )-2- 옥소에틸 )-1H-피라졸-4-일)-1- 메틸 -4H- 벤조[f][1,2,4]트라이아졸로 [4,3-a][1,4] 다이아제핀 -4-일) 메틸 메탄 설포네이트( 화합물 13)의 제조
Figure 112016107528273-pct00062
DCM(0.5 mL) 중의 (R)-2-(4-(6-(4-클로로페닐)-4-(하이드록시메틸)-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-8-일)-1H-피라졸-1-일)-N,N-다이메틸아세트아마이드(15.0 mg, 0.031 mmol)의 용액에 0℃에서 MsCl(4.77 μL, 0.061 mmol) 및 이어서 TEA(10.7 μL, 0.077 mmol)를 가했다. 이 반응 혼합물을 실온에서 3일 동안 교반하고, DCM으로 희석하였다. 생성 혼합물을 2 N 수성 HCl 및 포화된 수성 NaHCO3로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(EtOAc:MeOH = 10:1)로 정제하여, 표제 화합물(11.9 mg, 68%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.82-7.76 (m, 3H), 7.55 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.50 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.32 (ABX, J AB = 10.2 Hz, J BX = 6.8 Hz, 1H), 5.18 (ABX, J AB = 10.2 Hz, J Ax = 7.2 Hz, 1H), 5.02 (s, 2H), 4.49 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 3.21 (s, 3H), 3.12 (s, 3H), 3.01 (s, 3H), 2.67 (s, 3H).
LC-MS m/z 568.3 [M+H] + Rt = 2.71 min.
실시예 14: ( R )-(6-(4- 클로로페닐 )-8-((2-하이드록시에틸) 카바모일 )-1-메틸-4 H -벤조[f][1,2,4] 트라이아졸로 [4,3-a][1,4] 다이아제핀 -4-일)메틸 메탄설포네이트 (화합물 14)의 제조
Figure 112016107528273-pct00063
단계 1: 2-( 다이벤질아미노 )에탄올(중간체 31)의 제조
Figure 112016107528273-pct00064
EtOH(11 mL) 중의 2-아미노에탄올(500 mg, 8.19 mmol) 및 TEA(2.74 mL, 19.7 mmol)의 용액에 실온에서 EtOH(2.0 mL) 중의 벤질 클로라이드(1.90 mL, 16.4 mmol)를 가했다. 이 반응 혼합물을 12시간 동안 환류시켰다. 휘발성 물질을 증발시킨 후, 잔사를 다이에틸 에터로 희석하였다. 이 혼합물을 다이에틸 에터로 추출하고, 다이에틸 에터로 희석하고, 2 N 수성 HCl로 추출하였다. 분리된 수성 층을 Na2CO3로 중화시키고, 다이에틸 에터로 추출하였다. 분리한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하여, 표제 화합물(980 mg, 50%)을 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.36-7.15 (m, 10H), 3.63 (s, 4H), 3.58 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 2.67 (t, J = 5.2 Hz, 2H) *OH 피크는 관찰되지 않음.
단계 2: 2-( 다이벤질아미노 )에탄올 하이드로클로라이드(중간체 32)의 제조
Figure 112016107528273-pct00065
다이에틸 에터(1.0 mL) 중의 2-(다이벤질아미노)에탄올(980 mg, 4.06 mmol)의 용액에 0℃에서 HCl(에터 중의 2 M 용액, 2.0 mL)을 가했다. 이 반응 혼합물을 실온에서 밤새도록 교반하고, 이어서 진공 중에서 농축하여, 표제 화합물(980 mg, 87%)을 백색 고체로서 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.
1H-NMR (400 MHz, D2O): δ 7.40-7.21 (m, 10H), 4.27 (s, 4H), 3.72 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 3.13 (t, J = 5.0 Hz, 2H) *2HCl 및 OH 피크는 관찰되지 않았다.
단계 3: N,N- 다이벤질 -2-( 테트라하이드로 -2H-피란-2- 일옥시 ) 에탄아민(중간체 33)의 제조
Figure 112016107528273-pct00066
DCM(5.0 mL) 중의 2-(다이벤질아미노)에탄올 하이드로클로라이드(980 mg, 3.55 mmol)의 용액에 3,4-다이하이드로-2H-피란(DHP)(485 μL, 5.32 mmol)을 적가하였다. 이 반응 혼합물을 실온에서 밤새도록 교반하고, 이어서 포화된 수성 Na2CO3에 부었다. 수성 층을 DCM으로 추출하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 진공 중에서 농축하여, 표제 화합물(1.00 g, 87%)을 수득하고, 이를 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.58-7.12 (m, 10H), 4.57 (s, 1H), 3.94-3.79 (m, 2H), 3.67 (brs, 4H), 3.58-3.43 (m, 2H), 2.71 (brs, 2H), 1.64-1.42 (m, 6H).
단계 4: 2-( 테트라하이드로 -2H-피란-2- 일옥시 ) 에탄아민(중간체 34)의 제조
Figure 112016107528273-pct00067
수소 대기(풍선) 하에 EtOH(15 mL) 중의 N,N-다이벤질-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일옥시)에탄아민(1.00 g, 3.07 mmol) 및 Pd/C(5 중량%, 327 mg, 0.154 mmol)의 현탁액에 실온에서 밤새도록 교반하였다. 이를 셀라이트 패드를 통해 여과한 후, 여액을 진공 중에서 농축하여, 표제 화합물(430 mg, 96%)을 무색 오일로서 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 4.60 (brs, 1H), 3.93-3.84 (m, 1H), 3.83-3.76 (m, 1H), 3.56-3.44 (m, 2H), 2.92 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 2.29 (brs, 2H), 1.65-1.46 (m, 6H).
단계 5: ( R,E )-4-(((3급- 부틸다이메틸실릴 ) 옥시 )메틸)-6-(4- 클로로페닐 )-1-메틸-8- 스티릴 -4H- 벤조[f][1,2,4]트라이아졸로 [4,3-a][1,4] 다이아제핀(중간체 36)의 제조
Figure 112016107528273-pct00068
건조된 환저 플라스크에 (R)-8-브로모-4-(((3급-부틸다이메틸실릴)옥시)메틸)-6-(4-클로로페닐)-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4] 트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀(중간체 19, 460 mg, 0.865 mmol), (E)-스티릴보론산(256 mg, 1.73 mmol), 다이옥산(3.0 mL) 및 물(1.5 mL)을 넣고, 이를 배기하고, 질소로 수차례 재충전하였다. 이 혼합물에 Pd(PPh3)4(100 mg, 0.0860 mmol) 및 K2CO3(239 mg, 1.73 mmol)를 가한 후, 이 반응 혼합물을 3시간 동안 환류시켰다. 이를 실온으로 냉각한 후, 이 반응 혼합물을 물(5.0 mL)로 처리하고, 이어서 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여액을 포화된 수성 NaHCO3(5.0 mL)와 DCM(10 mL) 사이에 분배하였다. 분리된 수성 층을 DCM으로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(EtOAc:MeOH = 10:1)로 정제하여, 표제 화합물(389 mg, 81%)을 갈색 고체로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.82 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.53-7.48 (m, 3H), 7.45 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.41-7.34 (m, 4H), 7.32 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 4.72 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 4.20 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 0.95 (s, 9H), 2.66 (s, 3H), 0.21 (s, 3H), 0.18 (s, 3H).
단계 6: ( R )-4-(((3급- 부틸다이메틸실릴 ) 옥시 )메틸)-6-(4- 클로로페닐 )-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4] 트라이아졸로 [4,3-a][1,4] 다이아제핀 -8- 카복실산(중간체 37)의 제조
Figure 112016107528273-pct00069
CCl4(0.80 mL), CH3CN(0.80 mL) 및 물(1.2 mL) 중의 (R,E)-4-(((3급-부틸다이메틸실릴)옥시)메틸)-6-(4-클로로페닐)-1-메틸-8-스티릴-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀(310 mg, 0.558 mmol)의 용액에 실온에서 NaIO4(478 mg, 2.23 mmol) 및 루테늄(III) 클로라이드(3.94 mg, 0.0150 mmol)를 가했다. 이 반응 혼합물을 실온에서 3일 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 DCM으로 2회 추출하고, 분리된 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(EtOAc:MeOH = 5:1)로 정제하여, 표제 화합물(70.0 mg, 25%)을 갈색 고체로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.38 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.57 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.36 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.72 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 4.17 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 2.69 (s, 3H), 0.94 (s, 9H), 0.20 (s, 3H), 0.17 (s, 3H). *COOH 피크는 관찰되지 않음.
단계 7: (4 R )-2-(( 테트라하이드로 -2H-피란-2-일) 옥시 )에틸 4-(((3급- 부틸다이메틸실릴 ) 옥시 )메틸)-6-(4- 클로로페닐 )-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4] 트라이아졸로 [4,3-a][1,4] 다이아제핀 -8- 카복실레이트( 중간체 38)의 제조
Figure 112016107528273-pct00070
DMF(0.70 mL) 중의 (R)-4-(((3급-부틸다이메틸실릴)옥시)메틸)-6-(4-클로로페닐)-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-8-카복실산(70.0 mg, 0.141 mmol)의 용액에 실온에서 2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일옥시)에탄아민(30.7 mg, 0.211 mmol), (1-[비스(다이메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트라이아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥사이드 헥사플루오로포스페이트)(HATU)(80.0 mg, 0.211 mmol) 및 N,N-다이이소프로필에틸아민(DIPEA)(36.9 μL, 0.211 mmol)을 가했다. 생성 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 진공 중에서 농축한 후, 잔사를 EtOAc로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(Hex:EtOAc = 10:1)로 정제하여, 표제 화합물(44.0 mg, 50%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.16 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.55 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.18 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 4.71 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 4.91 (s, 1H), 4.13 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 3.91-3.84 (m, 1H), 3.83-3.72 (m, 2H), 3.71-3.63 (m, 1H), 3.60-3.51(m, 1H), 3.45-3.35 (m, 1H), 2.65 (s, 3H), 1.56-1.44 (m, 6H), 0.94 (s, 9H), 0.20 (s, 3H), 0.16 (s, 3H).
단계 8: (4 R )-2-(( 테트라하이드로 -2H-피란-2-일) 옥시 )에틸 6-(4- 클로로페닐 )-4-( 하이드록시메틸 )-1-메틸-4H- 벤조[f][1,2,4]트라이아졸로 [4,3-a][1,4] 다이아 제핀-8- 카복실레이트( 중간체 39)의 제조
Figure 112016107528273-pct00071
THF(0.35 mL) 중의 (4R)-2-((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에틸 4-(((3급-부틸다이메틸실릴)옥시)메틸)-6-(4-클로로페닐)-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-8-카복실레이트(44.0 mg, 0.0700 mmol)의 용액에 실온에서 TBAF(141 μL, 0.141 mmol, THF 중의 1 M 용액)를 가했다. 이 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 포화된 수성 NH4Cl로 켄칭하였다. 이 혼합물을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합친 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(EtOAc 단독 내지 EtOAc:MeOH = 9:1)로 정제하여, 표제 화합물(30.0 mg, 83%)을 황색 고체로서 수득하였다.
LC/MS m/z 510.23 [M+H]+, Rt = 0.31 min
단계 9: (4 R )-2-(( 테트라하이드로 -2H-피란-2-일) 옥시 )에틸 6-(4- 클로로페닐 )-1-메틸-4-((( 메틸설폰일 ) 옥시 )메틸)-4H- 벤조[f][1,2,4]트라이아졸로 [4,3-a][1,4]다이아제핀-8- 카복실레이트( 중간체 40)의 제조
Figure 112016107528273-pct00072
DCM(0.30 mL) 중의 (4R)-2-((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에틸 6-(4-클로로페닐)-4-(하이드록시메틸)-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-8-카복실레이트(30.0 mg, 0.0590 mmol)의 용액에 0℃에서 MsCl(9.17 μL, 0.118 mmol) 및 이어서 TEA(20.5 μL, 0.147 mmol)를 가했다. 이 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, DCM으로 희석하였다. 생성 혼합물을 2 N 수성 HCl 및 포화된 수성 NaHCO3로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(EtOAc 단독 내지 EtOAc:MeOH = 9:1)로 정제하여, 표제 화합물(30.0 mg, 87%)을 황색 거품으로서 수득하였다.
LC/MS m/z 588.2 [M+H]+, Rt = 0.42 min.
단계 10: ( R )-(6-(4- 클로로페닐 )-8-((2-하이드록시에틸) 카바모일 )-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4] 트라이아졸로 [4,3-a][1,4] 다이아제핀 -4-일)메틸 메탄설포네이트( 화합물 14)의 제조
Figure 112016107528273-pct00073
MeOH(0.26 mL) 중의 (4R)-2-((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에틸 6-(4-클로로페닐)-1-메틸-4-(((메틸설폰일)옥시)메틸)-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-8-카복실레이트(30.0 mg, 0.0510 mmol)의 용액에 실온에서 p-톨루엔설폰산(p-TsOH)(0.97 mg, 5.10 μmol)을 가했다. 이 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, DCM으로 희석하였다. 생성 혼합물을 포화된 수성 NaHCO3로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 분취용-HPLC로 정제하여, 표제 화합물(5.8 mg, 23%)을 황색 거품으로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.27 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.91 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.44 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.13 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 4.58 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 3.68 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.48 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 3.23 (s, 3H), 2.69 (s, 3H). *OH 및 NH 피크는 관찰되지 않음. LC-MS m/z 504.1 [M+H] + Rt = 3.03 min.
실시예 15: ( R )-(4-(4- 클로로페닐 )-2,3,9- 트라이메틸 -6 H -티에노[3,2-f][1,2,4]트라이아졸로[ 4,3-a][1,4]다이아제핀 -6-일) 메틸 메탄설포네이트 (화합물 15)의 제조
Figure 112016107528273-pct00074
단계 1: 3-(4- 클로로페닐 )-3- 옥소프로판나이트릴(중간체 42)의 제조
Figure 112016107528273-pct00075
EtOH(101 mL) 중의 2-클로로-1-(4-클로로페닐)에탄온(15.5 g, 66.4 mmol)의 용액에 물(10 mL) 중의 KCN(10.8 g, 166 mmol)의 용액을 가했다. 이 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하고, 이어서 물 및 DCM으로 희석하였다. 이 혼합물을 아세트산(20 mL)으로 처리하였다. 분리한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하여, 표제 화합물(11.8 g, 99%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.88 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.52 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.06 (s, 2H).
단계 2: (2-아미노-4,5- 다이메틸티오펜 -3-일)(4- 클로로페닐 ) 메탄온 (중간체 43)의 제조
Figure 112016107528273-pct00076
EtOH(191 mL) 중의 3-(4-클로로페닐)-3-옥소프로판나이트릴(12.0 g, 66.8 mmol), 2-부탄온(5.98 mL, 66.8 mmol) 및 모폴린(5.82 mL, 66.8 mmol)의 용액에 실온에서 황(2.14 g, 66.8 mmol)을 가했다. 이 반응 혼합물을 18시간 동안 환류시키고, 실온으로 냉각하고, 물에 부었다. 이 혼합물을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합친 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(Hex:EtOAc = 1:1)로 정제하여, 표제 화합물(8.97 g, 51%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.47 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.38 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.43 (brs, 2H), 2.14 (s, 3H), 1.56 (s, 3H).
단계 3: (S)-3급-부틸-4-(3-(4- 클로로벤조일 )-4,5- 다이메틸티오펜 -2- 일카바모일 )-2,2- 다이메틸옥사졸리딘 -3- 카복실레이트( 중간체 44)의 제조
Figure 112016107528273-pct00077
DCM(9 mL) 중의 (S)-3-(3급-부톡시카보닐)-2,2-다이메틸옥사졸리딘-4-카복실산(중간체 4, 0.886 g, 3.61 mmol)의 용액에 0℃에서 N-메틸모폴린(NMM)(0.397 mL, 3.61 mmol) 및 이어서 이소부틸 클로로포메이트(0.474 mL, 3.61 mmol)를 가했다. 이 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 이 혼합물에 (2-아미노-4,5-다이메틸티오펜-3-일)(4-클로로페닐)메탄온(중간체 43, 0.800 g, 3.01 mmol)을 가한 후, 이 반응 혼합물을 실온에서 2일 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 DCM으로 희석하고, 2 N 수성 HCl, 포화된 수성 NaHCO3 및 물로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(Hex:EtOAc = 5:1 내지 3:1 내지 1:1)로 정제하여, 표제 화합물(1.80 g, 88%)을 점성 황색 오일로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): (회전 이성질체들로부터의 2개의 세트) δ 11.4 (brs, 1H), 7.53 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.41 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.65-4.13 (m, 3H), 2.26 (s, 3H), 1.84 및 1.79 (s 및 s, 3H), 1.68 (s, 3H), 1.57 및 1.56 (s 및 s, 4H), 1.47 (s, 3H), 1.29-1.24 (m, 5H).
단계 4: (S)-2-아미노-N-(3-(4- 클로로벤조일 )-4,5- 다이메틸티오펜-2-일)-3-하이드록시프로판아마이드(중간체 45)의 제조
Figure 112016107528273-pct00078
MeOH(13 mL) 중의 (S)-3급-부틸-4-(3-(4-클로로벤조일)-4,5-다이메틸티오펜-2-일카바모일)-2,2-다이메틸옥사졸리딘-3-카복실레이트(1.30 g, 2.64 mmol)의 용액에 실온에서 진한 HCl(2.64 mL, 4.34 mmol)을 가했다. 이 반응 혼합물을 1시간 동안 환류시키고, 이어서 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 EtOAc로 희석하고, 포화된 수성 NaHCO3 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하여, 표제 화합물(770 mg, 82%)을 황색 고체로서 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 12.1 (s, 1H), 7.59 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.43 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.03 (dd, J = 10.6, 5.0 Hz, 1H), 3.82 (dd, J = 10.6, 5.4 Hz, 1H), 3.65 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 2.28 (s, 3H), 1.72 (s, 3H). *NH2 및 OH로부터의 3개의 양자는 관찰되지 않음.
단계 5: (S,Z)-5-(4- 클로로페닐 )-3-( 하이드록시메틸 )-6,7- 다이메틸 -1H- 티에노[2,3-e][1,4]다이아제핀 -2(3H)-온(중간체 46)의 제조
Figure 112016107528273-pct00079
톨루엔(10 mL) 중의 (S)-2-아미노-N-(3-(4-클로로벤조일)-4,5-다이메틸티오펜-2-일)-3-하이드록시프로판아마이드(770 mg, 2.18 mmol) 및 아세트산(AcOH)(3.12 mL, 54.6 mmol)의 혼합물을 2시간 동안 환류시키고, 이어서 진공 중에서 농축하여, 표제 화합물(723 mg, 99%)을 황색 고체로서 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.
LC/MS m/z 335.1[M+H]+, Rt = 0.46 min.
단계 6: (S,Z)-3-((3급- 부틸다이메틸실릴옥시 )메틸)-5-(4- 클로로페닐 )-6,7-다이메틸-1H- 티에노[2,3-e][1,4]다이아제핀 -2(3H)-온(중간체 47)의 제조
Figure 112016107528273-pct00080
DMF(11 mL) 중의 (S,Z)-5-(4-클로로페닐)-3-(하이드록시메틸)-6,7-다이메틸-1H-티에노-[2,3-e][1,4]다이아제핀-2(3H)-온(723mg, 2.16 mmol)의 용액에 실온에서 이미다졸(250 mg, 3.67 mmol) 및 이어서 TBDMS-Cl(488 mg, 3.24 mmol)을 가했다. 이 반응 혼합물을 실온에서 밤새도록 교반하였다. 이를 진공 중에서 농축한 후, 잔사를 EtOAc로 희석하고, 2 N 수성 HCl, 포화된 수성 NaHCO3, 물 및 염수로 순차적으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(Hex:EtOAc = 7:1 내지 5:1 내지 3:1)로 정제하여, 표제 화합물(417mg, 43%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.30 (s, 1H), 7.46 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.34 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.58 (dd, J = 10.4. 7.2 Hz, 1H), 4.26 (dd, J = 10.4, 6.0 Hz, 1H), 3.86 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 2.29 (s, 3H), 1.60 (s, 3H), 0.93 (s, 9H), 0.16 (s, 3H), 0.14 (s, 3H).
단계 7: (S,Z)-3-((3급- 부틸다이메틸실릴옥시 )메틸)-5-(4- 클로로페닐 )-6,7-다이메틸-1H- 티에노[2,3-e][1,4]다이아제핀 -2(3H)- 티온(중간체 48)의 제조
Figure 112016107528273-pct00081
THF(5 mL) 중의 P4S10(206 mg, 0.464 mmol) 및 탄산 나트륨(49.2 mg, 0.464 mmol)의 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 0℃로 냉각하였다. 이 혼합물에 THF(1.0 mL) 중의 (S,Z)-3-((3급-부틸다이메틸실릴옥시)메틸)-5-(4-클로로페닐)-6,7-다이메틸-1H-티에노[2,3-e][1,4]다이아제핀-2(3H)-온(417 mg, 0.929 mmol)의 용액을 가한 후, 이 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 및 실온에서 5일 동안 교반하였다. 이를 셀라이트 패드를 통해 여과한 후, 여액을 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 EtOAc에 용해시키고, 포화된 수성 NaHCO3로 2회 및 염수로 1회 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(Hex:EtOAc = 5:1)로 정제하여, 표제 화합물(90.0 mg, 21%)을 점성 오일로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 9.89 (brs, 1H), 7.45 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 4.67 (dd, J = 10.2. 5.4 Hz, 1H), 4.44 (dd, J = 9.4, 7.4 Hz, 1H), 4.00 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 2.31 (s, 3H), 1.62 (s, 3H), 0.93 (s, 9H), 0.18 (s, 3H), 0.16 (s, 3H).
단계 8: (Z)- N' -((R,Z)-3-((3급- 부틸다이메틸실릴옥시 )메틸)-5-(4- 클로로페닐 )-6,7- 다이메틸 -1H- 티에노[2,3-e][1,4]다이아제핀 -2(3H)- 일리덴 ) 아세토하이드라자이드(중간체 49)의 제조
Figure 112016107528273-pct00082
THF(2.0 mL) 중의 (S,Z)-3-((3급-부틸다이메틸실릴옥시)메틸)-5-(4-클로로페닐)-6,7-다이메틸-1H-티에노[2,3-e][1,4]다이아제핀-2(3H)-티온(202 mg, 0.434 mmol)의 용액에 0℃에서 히드라진 일수화물(82.0 μL, 2.61 mmol)을 가했다. 이 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하고, 0℃로 냉각하였다. 이 혼합물에 TEA(363 μL, 2.61 mmol) 및 이어서 아세틸 클로라이드(185 μL, 2.61 mmol)를 가한 후, 이 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 이를 진공 중에서 농축한 후, 잔사를 DCM에 용해시키고, 물로 세척하였다. 분리한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하여, 표제 화합물(204 mg, 93%)을 백색 고체로서 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.
LC/MS m/z 505.2 [M+H]+, Rt = 0.29 min
단계 9: ( R )-6-(((3급- 부틸다이메틸실릴 ) 옥시 ) 메틸 )-4-(4- 클로로페닐 )-2,3,9-트라이메틸-6H- 티에노[3,2-f][1,2,4]트라이아졸로 [4,3-a][1,4] 다이아제핀 (중간체 50)의 제조
Figure 112016107528273-pct00083
THF(2.0 mL) 중의 (Z)-N'-((R,Z)-3-((3급-부틸다이메틸실릴옥시)메틸)-5-(4-클로로페닐)-6,7-다이메틸-1H-티에노[2,3-e][1,4]다이아제핀-2(3H)-일리덴)아세토하이드라자이드(204 mg, 0.404 mmol) 및 아세트산(763 μL, 13.3 mmol)의 혼합물을 12시간 동안 환류시켰다. 이를 진공 중에서 농축한 후, 잔사를 EtOAc로 희석하고, 포화된 수성 NaHCO3로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하여, 표제 화합물(195 mg, 92%)을 점성 황색 오일로서 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.46 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.34 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 4.75-4.68 (m, 2H), 4.18 (dd, J = 7.2, 5.6 Hz, 1H), 2.67 (s, 3H), 2.41 (s, 3H), 1.70 (s, 3H), 0.95 (s, 9H), 0.21 (s, 3H), 0.18 (s, 3H).
단계 10: ( R )-(4-(4- 클로로페닐 )-2,3,9- 트라이메틸 -6H-티에노[3,2-f][1,2,4] 트라이아졸로 [ 4,3-a][1,4]다이아제핀 -6-일)메탄올(중간체 51)의 제조
Figure 112016107528273-pct00084
THF(2.0 mL) 중의(R)-6-(((3급-부틸다이메틸실릴)옥시)메틸)-4-(4-클로로페닐)-2,3,9-트라이메틸-6H-티에노[3,2-f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀(195 mg, 0.402 mmol)의 용액에 실온에서 TBAF(805 μL, 0.805 mmol, THF 중의 1 M 용액)를 가했다. 이 반응 혼합물을 실온에서 밤새도록 교반하고, 포화된 수성 NH4Cl로 켄칭하였다. 이 혼합물을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합친 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(EtOAc 단독 내지 EtOAc:MeOH = 10:1)로 정제하여, 표제 화합물(110 mg, 73%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.46 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 4.66 (dd, J = 11.2, 7.2 Hz, 1H), 4.54 (dd, J = 11.6, 5.6 Hz, 1H), 4.26 (t, J = 6.2 Hz, 1H), 3.23 (brs, 1H), 2.69 (s, 3H), 2.42 (s, 3H), 1.69 (s, 3H).
단계 11: ( R )-(4-(4- 클로로페닐 )-2,3,9- 트라이메틸 -6H-티에노[3,2-f][1,2,4] 트라이아졸로 [ 4,3-a][1,4]다이아제핀 -6-일) 메틸 메탄설포네이트 (화합물 15)의 제조
Figure 112016107528273-pct00085
DCM(1.0 mL) 중의 (R)-(4-(4-클로로페닐)-2,3,9-트라이메틸-6H-티에노[3,2-f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-6-일)메탄올(48.0 mg, 0.131 mmol)의 용액에 0℃에서 MsCl(20.4 μL, 0.261 mmol) 및 이어서 TEA(45.5 μL, 0.327 mmol)를 가했다. 이 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, DCM으로 희석하였다. 생성 혼합물을 2 N 수성 HCl 및 포화된 수성 NaHCO3로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(EtOAc:MeOH = 10:1)로 정제하여, 표제 화합물(46.0 mg, 78%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.45 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.36 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.32 (dd, J = 10.4, 6.4 Hz, 1H), 5.18 (dd, J = 10.4, 6.8 Hz, 1H), 4.48 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 3.21 (s, 3H), 2.69 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 1.71 (s, 3H).
LC-MS m/z 451.1 [M+H] +, Rt = 3.21 min
실시예 16 내지 18
Figure 112016107528273-pct00086
실시예 16: ( R )-(4-(4- 클로로페닐 )-2,3,9- 트라이메틸 -6 H -티에노[3,2-f][1,2,4]트라이아졸로[ 4,3-a][1,4]다이아제핀 -6-일) 메틸 설파메이트 (화합물 16)의 제조
Figure 112016107528273-pct00087
DMF(1.0 mL) 중의 (R)-(4-(4-클로로페닐)-2,3,9-트라이메틸-6H-티에노[3,2-f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-6-일)메탄올(중간체 51, 85.0 mg, 0.228 mmol)의 용액에 0℃에서 NaH(55중량%, 15.0 mg, 0.342 mmol) 및 이어서 설파모일 클로라이드(중간체 17, 342 μL, 0.684 mmol)를 가했다. 이 반응 혼합물을 실온에서 40분 동안 교반하고, EtOAc로 희석하였다. 생성 혼합물을 2 N 수성 HCl 및 포화된 수성 NaHCO3로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(EtOAc:MeOH = 10:1)로 정제하여, 표제 화합물(78.0 mg, 76 %)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.45 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.36 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.63 (s, 2H), 5.36 (dd, J = 10.4, 8 Hz, 1H), 5.05 (dd, J = 10.6, 5.4 Hz, 1H), 4.47 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 2.69 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 1.71 (s, 3H).
LC-MS m/z 452.1 [M+H] +, Rt = 2.99 min.
실시예 17: ( R )-(4-(4- 클로로페닐 )-2,3,9- 트라이메틸 -6 H -티에노[3,2-f][1,2,4]트라이아졸로[ 4,3-a][1,4]다이아제핀 -6-일) 메틸 다이메틸설파메이트 (화합물 17)의 제조
Figure 112016107528273-pct00088
DMF(645 μL) 중의 (R)-(4-(4-클로로페닐)-2,3,9-트라이메틸-6H-티에노[3,2-f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-6-일)메틸 설파메이트(화합물 16, 58.3 mg, 0.129 mmol)의 용액에 0℃에서 NaH(55중량%, 12.4 mg, 0.284 mmol) 및 이어서 MeI(32.3 μL, 0.516 mmol)를 가했다. 이 반응 혼합물을 0℃에서 40분 동안 교반하고, EtOAc로 희석하였다. 생성 혼합물을 2 N 수성 HCl 및 포화된 수성 NaHCO3로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 분취용-HPLC로 정제하여, 표제 화합물(31.0 mg, 50%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.45 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.25 (dd, J = 10.4, 6.0 Hz, 1H), 5.12 (dd, J = 9.8, 7.8 Hz, 1H), 4.49 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 3.01 (s, 6H), 2.68 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 1.71 (s, 3H).
LC-MS m/z 480.2 [M+H] + , Rt = 3.00 min.
실시예 18: ( R )-(4-(4- 클로로페닐 )-2,3,9- 트라이메틸 -6 H -티에노[3,2-f][1,2,4]트라이아졸로[ 4,3-a][1,4]다이아제핀 -6-일) 메틸 메틸설파메이트 (화합물 18)의 제조
Figure 112016107528273-pct00089
DMF(0.27 mL) 중의 (R)-(4-(4-클로로페닐)-2,3,9-트라이메틸-6H-티에노[3,2-f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-6-일)메탄올(중간체 51, 20.0 mg, 0.0540 mmol)의 용액에 0℃에서 NaH(55중량%, 3.51 mg, 0.0800 mmol) 및 이어서 메틸설파모일 클로라이드(중간체 18, 9.18 μL, 0.161 mmol)를 가했다. 이 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, EtOAc로 희석하였다. 생성 혼합물을 2 N 수성 HCl 및 포화된 수성 NaHCO3로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공 중에서 농축하였다. 잔사를 SiO2 상에서 칼럼 크로마토그래피(EtOAc:MeOH = 10:1)로 정제하여, 표제 화합물(15.0 mg, 60%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.45 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.26 (dd, J = 10.8, 6.4 Hz, 1H), 5.14-5.19 (m, 1H), 5.07 (dd, J = 10.4, 6.8 Hz, 1H), 4.48 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 2.91 (d, J = 5.6 Hz, 3H), 2.69 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 1.71 (s, 3H).
LC-MS m/z 466.2 [M+H] +, Rt = 2.98 min.
시험 실시예 1 : 브로모도메인 결합 분석( BRD4 알파-스크린을 사용한, 억제제에 대한 IC 50 측정)
리액션 바이올로지(Reaction Biology, 미국 펜실베니아 소재)에서 알파-스크린 분석 방법에 의해 브로모도메인 결합 분석을 수행하여, 본 발명의 화합물이 인간 BRD4 브로모도메인 1을 억제하는 정도를 시험하였다.
N-말단 His-tag를 갖는 에스케리치아 콜라이(E. coli)에서 발현된 재조합 인간 BRD4 브로모도메인 1을 효소 표적으로서 사용하였다.
리신 5, 8, 12 및 16에서 아세틸화된 히스톤 H4의 1 내지 21번째 아미노산을 함유하고 비오틴에 접합된 합성 펩타이드(SGRGACKGGACKGLGACKGGAACKRH-GSGSK-biotin)를 밀리포어(Millipore)로부터 구입하였다.
BRD4-1(44 내지 170번째 아미노산; 진뱅크(Genbank) 수탁 번호 NM_058243)을, N-말단 His-tag를 갖는 E. coli에서 발현시켰다(문헌[Ni-NTA spin Kit Handbook (Qiagen), second edition, January, 2008] 참조). BRD4-1에 특이적으로 결합시키기 위해 니켈-킬레이트 ALPHA 수용체 비드(퍼킨 엘머(Perkin Elmer))를 사용하고, 알파 스트렙타비딘 공여체 비드(퍼킨 엘머)를 사용하였으며, 그 이유는, 이들이, 비오티닐화된 H4 펩타이드를 특이적으로 인식하기 때문이다. 상기 합성 펩타이드에 BRD4-1이 결합되면, 알파 시그널을 증가시키는 공여체 비드와 알파 신호를 감소시키는 수용체 비드가 근접하게 된다.
50 mM Hepes(pH7.5), 100 mM NaCl, 0.05% CHAPS, 0.1 % BSA, 및 1% DMSO를 포함하는 혼합물 내에서 BRD 결합 분석을 수행하였다. 25℃에서 60분의 분석 반응 시간 이후, 스트렙타비딘 공여체 비드 및 니켈-킬레이트 수용체 비드를 사용하여 결합을 측정하였다. 엔스파이어(Enspire)(Ex/Em=680/520-620 nm) 상에서 알파 신호를 검출하였다. 투여량-반응 곡선을 피팅하여 IC50 값을 계산하였다. 모든 IC50 값은, 4개의 측정의 최소값의 기하 평균 값을 나타낸다. 이러한 분석은 일반적으로, 보고된 평균의 3배 이내의 결과를 제공하였다.
결과를 하기 표 1에 제시한다.
시험 실시예 2 : 항-증식성 활성 시험
실시예 1 내지 18에서 수득된 화합물의 혈액암 세포 및 고형 종양에 대한 IC50(uM)을 측정하여 항-증식성 활성을 확인하였다.
인간 전립선 선종 세포주, LnCAP(ATCC(등록상표), CRL-1740) 및 인간 백혈병 세포주 MV4-11(ATCC(등록상표), CRL-9591)를 사용하여, 화합물 1 내지 18이 암세포 성장을 억제하는 정도를 시험하였다. 시험 세포 농도를, 37℃의 온도, 5% CO2 및 95% 습도에서, 10 % FBS으로 보충된 배양액을 사용하여, 6.7×103 세포/mL로 조절하였다. 배양액 및 FBS는 깁코(GIBCO)로부터 구입하였다. 이렇게 수득된 90 μL의 세포 현탁액을 600개 세포/웰의 최종 세포 밀도로 2개의 96-웰 플레이트에 첨가하고, 각각의 웰 플레이트에 10 μL의 배양액을 첨가하였다. 이들 플레이트를 가습된 배양기 내에서 37℃에서 5% CO2 하에 밤새도록 배양하였다.
화합물 1 내지 18을 각각 다이메틸설폭사이드(DMSO) 또는 포스페이트 완충액(PBS)에 용해시키고, DMSO를 사용하여 시험 화합물(2 mM)의 200배 용액을 제조하였다. 이어서, 이렇게 수득된 DMSO 용액을 배양액 또는 PBS로 20배 희석하여, 10배 작업 용액을 수득하였다. 10 μL의 10배 작업 용액(약물 용액)을 각각의 웰에 분배하였다(각각의 농도에 대해 3회). 배양액 중 DMSO의 최종 농도는 0.5 부피%였다.
셀타이터-글로(세포Titer-Glo, 등록상표)(CTG) 분석을 사용하여, 세포 생존능을 결정하였다. 100 μL의 셀타이터-글로(등록상표)를 동 부피의 배양된 세포에 첨가하여, 엔비전 멀티 라벨(EnVision Multi Label) 판독기에서 발광을 판독하였다. 결과를 하기 표 1에 제시한다.
시험 실시예 3 : 인간/마우스 간 마이크로솜 안정성
인간 및 마우스 간 마이크로솜 제거율(clearance) 분석을 크라운 바이오사이언시스(CROWN Biosciences, 중국 타이캉 소재)에서 수행하였다. 인간 간 마이크로솜(카탈로그 번호 X008067, 제품 번호 KQB) 및 마우스 간 마이크로솜(카탈로그 번호 M1000, 제품 번호 1210302)은 각각 셀시스(Celsis) 및 제노텍(Xenotech)으로부터 구입하였다.
5 μL의 시험 화합물 모액을 495 μL의 메탄올/물(1:1)(최종 농도: 100 μm, 50% MeOH)로 희석하고, 534 μL의 상기 각각의 간 마이크로솜 용액(최종 농도: 1.111 μm, 0.555% MeOH)과 합쳤다. 간 마이크로솜 용액의 최종 농도는 0.7 mg 단백질 /mL였다.
상기 간 마이크로솜 용액의 배양을 37℃에서 96 웰 플레이트 내에서 수행하였다. 90 μL의 상기 간 마이크로솜 용액을 블랭크(Blank)에 첨가하고, 90 μL의 상기 시험 화합물의 작업 용액을 블랭키를 제외한 모든 플레이트에 첨가하였다.
이렇게 수득된 모든 플레이트를 37℃의 수욕 내에서 10분 동안 가온하고, 수욕 내에서 37℃에서 5분 동안 가온된, 42 mg의 β-니코틴아마이드 아데닌 다이뉴클레오타이드 포스페이트(시그마(Sigma) 카탈로그 번호 N0505, 제품 번호 020M7009V), 84 mg의 이소시트르산(시그마 카탈로그 번호 I1252, 제품 번호 119K1099) 및 0.478 mL의 이소시트르산 탈수소효소(시그마 카탈로그 번호 I2002, 제품 번호 086K7055, 15 단위/mg 단백질)를 포함하는 10 μL의 NADPH 보조-인자 용액을 상기 플레이트에 첨가하였다. 결과적인 플레이트를 37℃에서 하기 순서로 배양하였다: T60(시험 화합물을 상기 간 마이크로솜 용액 및 NADPH와 함께 37℃에서 60분 동안 배양함), T30(예컨대, 30분 동안), 및 T10(예컨대, 10분 동안). 플레이트들에, 300 μL의 차가운(4℃) 정지액(내부 표준물로서의 500 nM의 톨부타미드를 포함하는 아세토나이트릴(ACN)) 및 10 μL의 NADPH 공동-인자 용액(출발 플레이트(T0: 임의의 반응이 없는 100%의 모 화합물))을 첨가하였다. 다른 플레이트들에는, 300 μL의 차가운(4℃) 정지액을, 먼저 T10, 이어서 T30 및 T60의 순서에 따라 첨가함으로써, 반응을 종결시켰다.
시료들을 4,000 rpm에서 20분 동안 원심분리하고, 액체 크로마토그래피-질량 분광법(LC-MS)/MS(워터스(Waters) UPLC/API 4000, 10 μL 주입) 분석을 위해 바이오어낼리티컬 서비시스(Bioanalytical Services)로 옮겼다. 결과를 하기 표 1에 제시한다.
시험 실시예 1 시험 실시예 2 시험 실시예 3
BRD4-1 결합 IC50
(uM)		 세포 증식 IC50
(uM)
(LnCAP/MV4-11)		 간 마이크로솜 제거율
(인간/마우스)
(μL/min/mg)
화합물 1 0.19 0.47/0.31 2.3/4.7
화합물 2 0.22 0.60/0.41 1.9/8.1
화합물 3 0.39 0.83/1.81 71.3/39.7
화합물 4 0.42 0.13/0.69 6.3/8.9
화합물 5 0.90 - -
화합물 6 1.41 - -
화합물 7 0.23 0.83/3.34 2.1/3.4
화합물 8 0.22 0.96/1.49 5/5
화합물 9 0.28 1.90/1.49 126/86
화합물 10 0.40 0.57/0.35 29/21
화합물 11 0.087 0.19/0.32 8.6/8.6
화합물 12 0.11 44.05/1.07 5.6/6.9
화합물 13 0.11 0.43/0.29 12.3/7.4
화합물 14 0.38 - 8.3/6.3
화합물 15 0.10 0.48/0.50 20/22
화합물 16 0.25 - 10/9
화합물 17 0.90 - 171/138
화합물 18 0.16 - 51/49
표 1에 제시된 바와 같이, 실시예 1 내지 18의 화합물은 우수한 효소 결합 활성, 및 LnCAP(인간 전립선 선암) 및 MV4-11(인간 백혈병)에 대한 암세포 항-증식성 활성을 나타냈다. 또한, 이들 화합물은 인간 및 마우스 간 마이크로솜에서 매우 안정하였다.
또한, 추가적인 암 세포주(즉, OPM-2(다발성 골수종, DSMZ(등록상표), ACC50), A375(악성 흑색종, ATCC(등록상표), CRL-1619), SK-LU-1(선암, ATCC(등록상표) HTB-57(상표명), RS4;11(급성 림프아구성 백혈병, ATCC(등록상표) CRL-1873(상표명), MOLM13(급성 골수 백혈병, DSMZ(등록상표), ACC554), HL60(급성 전골수성 백혈병, SIBS(등록상표), TCHu23), MOLT-4(급성 림프아구성 백혈병, SIBS(등록상표), TCHu37), 다우디(Daudi)(B 림프종, ATCC(등록상표) CCL-213(상표명), MDA-MB-435(유방암, ATCC(등록상표) HTB-129(상표명), 및 NCI-H526(다양한 소세포 폐암, ATCC(등록상표) CRL-5811(상표명))에 대한 화합물 1 및 2의 항-증식성 활성을 시험 실시예 2에 기술된 방법에 따라 시험하였다. 결과를 하기 표 2에 제시한다.
세포 증식, IC50(uM) 화합물 1 화합물 2
OPM-2(다발성 골수종) 1.45 0.65
A375(악성 흑색종) 5.57 9.30
SKLU-1(선암) 6.96 1.45
RS4;11(급성 림프아구성 백혈병) 3.14 - (측정 안함)
MOLM13(급성 골수 백혈병) 1.52 -
HL60(급성 전골수성 백혈병) 1.24 -
MOLT-4(급성 림프아구성 백혈병) 2.63 -
다우디(B 림프종) 5.09 -
MDA-MB-435(유방암) 5.99 -
NCI-H526(다양한 소세포 폐암) 2.62 -
표 2에 제시된 바와 같이, 화합물 1 및 2는 고형 종양 세포주에서 우수한 항-증식성 활성을 나타내었다.
시험 실시예 4: 동물 약동학( PK )
화합물 1, 2, 7, 8, 11 및 15의 약동학을, 각각 정맥내(IV) 투여(10 mg/kg 투여량 수준) 및 경구(PO) 투여(10 mg/kg 투여량 수준)에 따라 ICR 마우스(6 내지 8주령, 20 내지 25 g)에서 평가하였다. 특히, 화합물 1의 추가적인 투여량 수준은 30 mg/kg이었다.
혈청 화합물 분석을 위해, 24시간의 기간에 걸쳐 심장 천자에 의해 혈액 시료를 수집하였다. 20 μL의 스파이킹된(spiked) 혈장을 96-웰 플레이트에 첨가하고, 수득된 침전된 단백질에 아세토나이트릴(ACN) 중 10 부피의 내부 표준물(IS)을 첨가하고, 완전히 혼합하고, 4,000 rpm에서 10분 동안 원심분리하고, 이렇게 수득된 150 μL의 상청액을 또다른 사전-표지된 96-웰 플레이트로 옮기고, 150 μL의 물과 혼합하였다. 5 μL 또는 10 μL의 상기 혼합물을 하기 조건 하에 상기 LC-MS 시스템에 주입하였다:
칼럼: API-4000 + 워터스 UPLC(TCLM08);
이동 상: 물 : MeOH = 100:0, 30:70, 5:95 및 100:0(v/v %);
유속: 0.45 mL/min.
정량화의 하한(LLOQ)은 1 ng/mL였다. 피닉스 윈논린(Phoenix WinNonlin) 6.3(비-구획 모델)을 사용하여, 상기 화합물의 반감기(T1 /2), 제거율(CL), 최대 혈장 농도(Cmax), 평균 체류 시간(MRT) 및 생물학적 이용가능성(F%), 혈장 노출(AUC)의 약동학 매개변수를 계산하였다. 마우스 약동학의 결과를 하기 표 3에 제시한다.
화합물 경로 mpk
(mg/kg)		 AUC
(uM.hr)		 CL
(mL/min/kg)		 T1/2 MRT
(hr)		 F%
화합물 1 IV 10 74 5.1 2.9 4.7 -
PO 10 76 - 2.7 6.2 103.3
IV 30 302 3.7 2.7 - -
PO 30 260 - 2.4 - 86.2
화합물 2 IV 10 73 4.9 2.4 3.9 -
PO 10 66 - 2.3 4.1 89.8
화합물 7 IV 10 17.3 22.5 3.6 - -
PO 10 8.19 - 4.3 - 47.4
화합물 8 IV 10 41 9 2.6 - -
PO 10 31.5 - 3.2 - 62.3
화합물 11 IV 10 20 16.8 1.3 - -
PO 10 11.7 - 1.9 - 58.4
화합물 15 IV 10 27 13.5 1.6 1.9 -
PO 10 31 - 2.5 2.5 105.4
표 3에 제시된 바와 같이, 시험 화합물은 IV 및 PO 경로 둘 다에서, 탁월한 마우스 PK를 나타냈다
또한, 화합물 1의 마우스 약동학을 도 1에 도시한다. 도 1에 도시된 바와 같이, 화합물 1은 혈장 노출에서 우수한 투여량 선형성을 나타냈다.
또한, 화합물 1의 약동학을 각각 IV 투여(3 mg/kg 또는 10 mg/kg 투여량 수준) 및 PO 투여(3 mg/kg 또는 10 mg/kg 투여량 수준)에 따라 스프래그 다우리(Sprague Dawley)(SD) 래트에서 평가하였다. 분석 절차는 전술된 바와 같고, 래트 약동학의 결과를 하기 표 4 및 도 2에 제시한다.
화합물 경로 mpk
(mg/kg)		 AUC
(uM.hr)		 CL
(mL/min/kg)		 T1/2 MRT(hr) F%
화합물 1


 IV 3 2 54.8 0.7 - -
PO 3 1 - 1.5 - 50.6
IV 10 15.4 24.9 1.57 1.86 -
PO 10 13.6 - 5.06 88.6
표 4에 제시된 바와 같이, 화합물 1은 탁월한 래트 PK 프로파일을 나타냈다.
또한, 화합물 1의 개 약동학을 각각 IV 투여(3 mg/kg 투여량 수준) 및 PO 투여(3 mg/kg 투여량 수준)에 따라 비글 개에서 평가하였다. 분석 절차는 전술된 바와 같고, 래트 약동학의 결과를 하기 표 5 및 도 3에 제시한다.
화합물 경로 mpk
(mg)		 AUC
(uM.hr)		 CL
(mL/min/kg)		 T1/2 MRT(hr) F%
화합물 1
 IV 3 19.7 5.6 3.86 4.9 -
PO 3 17.3 - 4.2 - 92.3
화합물 1의 개 PK 데이터는 IV 및 PO에서 탁월한 혈장 노출이었고, 이는 높은 생물학적 이용가능성(%)을 나타낸다.
시험 실시예 5: MV4 -11 인간 백혈병 모델 마우스 이종이식에서의 화합물 1의 효능
화합물 1의 종양 성장 억제(TGI) 활성을 MV4-11 인간 백혈병 마우스 이종이식에서 시험하였다.
생체내 피하 마우스 이종이식 모델(MV4-11 세포주, ATCC(등록상표), CRL-9591)에서 종양 성장 억제가 관찰되었다. 6 내지 8주령이고 약 18 내지 23 g의 무게를 갖는 총 48마리의 NOD/SCID 암컷 마우스(HFK(베이징 에이치에프케이 바이오-테크놀로지 캄파니 리미티드(Beijing HFK Bio-Technology Co. Ltd.))로부터 구입)를 종양 접종에 사용하였다.
MV4-11 세포주를, 공기 중의 5% CO2의 대기 하에 37℃에서, 시험관 내에서 10% 소 태아 혈청으로 보충된 IMDM(Iscove's modified Dulbecco's media) 중에 유지하였다. 종양 세포를 트립신-EDTA 처리에 의해 매주 2회 관행적으로 계대배양하였다. 급속한 성장 단계로 자라는 세포를 수확하고, 종양 접종에 대해 계수하였다. 상기 처리는, 종양 크기가 약 150 내지 200 mm3에 도달하였을 때 개시하였다.
종양 발달을 위해 각각의 마우스의 우측 옆구리에, 100 uL 의 PBS 및 100 uL의 마트리겔(matrigel, 상표명)의 혼합물 중의 MV4-11 종양 세포(1 x 107 세포)를 피하 접종하였다. 총 48마리의 마우스를 각각의 그룹에 사용하였다. 처리된 화합물의 양을 동물 체중(mg/kg, mpk)에 대한 화합물의 mg으로 나타내었다. 투여 경로 시험 화합물의 투여 경로는 PO(경구) 주입이었다. 마우스의 3개의 그룹(즉, 비히클 그룹(대조군), 50 mpk 그룹(PO 주입을 통한, 화합물 1의 50 mpk에서의 처리) 및 100 mpk 그룹(PO 주입을 통한, 화합물 1의 100 mpk에서의 처리)을 사용하였다. 총 투여 스케줄은, 5일 동안의 치료(5d ON) 및 이어서 2일 동안의 비-치료(2d OFF)의 2 사이클이었다.
매 4일마다 캘리퍼스를 사용하여 종양 크기를 측정하고, 종양 부피를 하기 수학식 1을 사용하여 mm3로 나타내었다:
[수학식 1]
V = 0.5 a × b2
상기 식에서, a 및 b는 각각 종양의 긴 직경 및 짧은 직경이다.
상기 3개의 그룹의 종양 성장 억제(% TGI) 결과를 도 4에 도시한다. 또한, 비히클 대비 체중 변화(% BW 변화)를 하기 표 6에 제시한다.
시료 경로 투여 스케줄(14일) % TGI % BW 변화
비히클 PO 5d ON/2d Off ⅹ2 0 >5%
화합물 1 50 mpk, PO 5d ON/2d Off ⅹ2 77 >5%
100 mpk, PO 5d ON/2d Off ⅹ2 84 >5%
도 4 및 표 6에 제시된 바와 같이, 화합물 1은, 비히클(0%) 대비, 100 mpk에서 84%(% TGI) 및 50 mpk에서 77%를 나타냈다. 또한, BW 변화(%)는 매우 적었다.

Claims (12)

  1. 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물, 용매화물 또는 이성질체:
    [화학식 I]
    Figure 112018064187896-pct00090

    상기 식에서,
    R1은 수소, C1-10 알킬, C3-10 사이클로알킬, C3-10 사이클로알킬C1-10 알킬, C1-10 알킬C3-10 사이클로알킬, 할로C1-10 알킬, C2-10 알켄일 및 NRbRb'로 이루어진 군으로부터 선택되고,
    이때, Rb 및 Rb'는, 각각 독립적으로, 수소, C1-10 알킬 및 할로C1-10 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R2는 수소, 하이드록실, 할로, C1-6 알콕시, 할로 C1-6 알콕시, -OCF3, -CONHRd, 및
    Figure 112018064187896-pct00091
    ,
    Figure 112018064187896-pct00092
    및
    Figure 112018064187896-pct00093
    으로 이루어진 군으로부터 선택되는 헤테로방향족 기로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R3은 수소, 할로 및 시아노로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    Rd는 C1-3 알킬 또는 하이드록시 C1-3 알킬이다.
  2. 하기 화학식 II의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물, 용매화물 또는 이성질체:
    [화학식 II]
    Figure 112018064187896-pct00094

    상기 식에서,
    X는 C 또는 S이고;
    R1은 수소, C1-10 알킬, 할로C1-10 알킬, C2-10 알켄일 및 NRbRb'로 이루어진 군으로부터 선택되고,
    이때, Rb 및 Rb'는, 각각 독립적으로, 수소, C1-10 알킬 및 할로C1-10 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R2 및 R4는, 각각 독립적으로, 수소, C1-6 알킬 및 할로 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R3은 수소 및 할로로 이루어진 군으로부터 선택된다.
  3. 제 1 항에 있어서,
    R1이 C1 -6 알킬, C3 -10 사이클로알킬, 아르알킬 또는 NRbRb'이고, 이때 Rb 및 Rb'는, 각각 독립적으로 수소 또는 C1 -6 알킬이고;
    R2가 수소, C1 -6 알콕시, -CONHRd, 또는
    Figure 112016107528273-pct00098
    ,
    Figure 112016107528273-pct00099
    및
    Figure 112016107528273-pct00100
    으로 이루어진 군으로부터 선택되는 헤테로방향족 기이고;
    R3이 할로이고;
    Rd가 C1 -3 알킬 또는 하이드록시 C1 -3 알킬인, 화합물.
  4. 제 2 항에 있어서,
    X가 S이고;
    R1이 C1 -6 알킬 또는 NRbRb'이고, 이때 Rb 및 Rb'는 각각 독립적으로 수소 또는 C1 -6 알킬이고;
    R2 및 R4는 각각 독립적으로 수소 또는 C1 -6 알킬이고;
    R3은 할로이다.
  5. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물:
    1) (R)-(6-(4-클로로페닐)-8-메톡시-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메틸 메탄설포네이트;
    2) (R)-(6-(4-클로로페닐)-8-메톡시-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메틸 에탄설포네이트;
    3) (R)-(6-(4-클로로페닐)-8-메톡시-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메틸 프로판-1-설포네이트;
    4) (R)-(6-(4-클로로페닐)-8-메톡시-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메틸 사이클로프로판설포네이트;
    5) (R)-(6-(4-클로로페닐)-8-메톡시-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메틸 벤젠설포네이트;
    6) (R)-(6-(4-클로로페닐)-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메틸 메탄설포네이트;
    7) (R)-(6-(4-시아노페닐)-8-메톡시-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메틸 메탄설포네이트
    8) (R)-(6-(4-클로로페닐)-8-메톡시-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메틸 설파메이트;
    9) (R)-(6-(4-클로로페닐)-8-메톡시-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메틸 다이메틸설파메이트;
    10) (R)-(6-(4-클로로페닐)-8-메톡시-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메틸 메틸설파메이트;
    11) (R)-(6-(4-클로로페닐)-1-메틸-8-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메틸 메탄설포네이트;
    12) (R)-(8-(1-(2-아미노-2-옥소에틸)-1H-피라졸-4-일)-6-(4-클로로페닐)-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메틸 메탄설포네이트;
    13) (R)-(6-(4-클로로페닐)-8-(1-(2-(다이메틸아미노)-2-옥소에틸)-1H-피라졸-4-일)-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메틸 메탄설포네이트;
    14) (R)-(6-(4-클로로페닐)-8-((2-하이드록시에틸)카바모일)-1-메틸-4H-벤조[f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-4-일)메틸 메탄설포네이트;
    15) (R)-(4-(4-클로로페닐)-2,3,9-트라이메틸-6H-티에노[3,2-f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-6-일)메틸 메탄설포네이트;
    16) (R)-(4-(4-클로로페닐)-2,3,9-트라이메틸-6H-티에노[3,2-f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-6-일)메틸 설파메이트;
    17) (R)-(4-(4-클로로페닐)-2,3,9-트라이메틸-6H-티에노[3,2-f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-6-일)메틸 다이메틸설파메이트; 및
    18) (R)-(4-(4-클로로페닐)-2,3,9-트라이메틸-6H-티에노[3,2-f][1,2,4]트라이아졸로[4,3-a][1,4]다이아제핀-6-일)메틸 메틸설파메이트.
  6. 활성 성분으로서, 제 1 항 또는 제 2 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물, 용매화물 또는 이성질체, 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는, 전암성 전환(precancerous transformation) 또는 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  7. 제 6 항에 있어서,
    상기 약학적으로 허용가능한 담체가, 결합제, 충전제, 부형제, 붕해제, 윤활제 및 향미제로 이루어진 군으로부터 선택되는, 약학 조성물.
  8. 제 6 항에 있어서,
    화학치료제를 포함하는 추가적인 약제를 하나 이상 추가로 포함하며,
    상기 화학치료제는 LSD1 차단제, 퍼옥시좀 증식-활성제 수용체(PPAR) 리간드, 알킬화제, 항대사성물질, 항-종양 항생제, 토포이소머라제 억제제, 토포이소머라제 II 억제제, 유사분열 억제제, 일일초알칼로이드, 코르티코스테로이드, 프로테오솜 억제제, 표적 항암제, 분화제 및 호르몬제로 이루어진 군으로부터 선택되는, 약학 조성물.
  9. 인간을 제외한 포유동물에서의 전암성 전환 또는 암의 예방 또는 치료 방법으로서, 제 1 항 또는 제 2 항에 따른 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물, 용매화물 또는 이성질체를 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
  10. 인간을 제외한 포유동물에서의 전암성 전환 또는 암의 예방 또는 치료 방법으로서,
    (i) 제 1 항 또는 제 2 항에 따른 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물, 용매화물 또는 이성질체, 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 제 1 조성물을 포유동물에게 투여하는 단계; 및
    (ii) 화학치료제를 포함하는 추가적인 약제를 하나 이상 포함하는 제 2 조성물을 포유동물에게 투여하는 단계
    를 포함하는 방법.
  11. 제 10 항에 있어서,
    상기 제 1 조성물 및 상기 제 2 조성물이 동시에 또는 임의의 순서로 순차적으로 투여되는 방법.
  12. 삭제
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