KR101916835B1

KR101916835B1 - 빈크리스틴 설페이트 리포좀 주사를 위한 즉석 제형물

Info

Publication number: KR101916835B1
Application number: KR1020187002715A
Authority: KR
Inventors: 윌리암 티 몬트; 로버트 말콤 아브라; 빙 루오; 위엔펑 장
Original assignee: 스펙트럼 파마슈티컬즈 인크
Priority date: 2015-07-22
Filing date: 2016-07-22
Publication date: 2018-11-08
Also published as: EP3324969A1; ES2808938T3; JP6850788B2; CN107864624A; IL257068A; US11559486B2; RU2676762C1; EP3324969B1; HK1250477A1; HK1248563A1; MX2018000951A; TW201717913A; EP3324969A4; KR20180122050A; AU2016206387A1; IL257068B; TWI678213B; BR112018001145A2; CA2992724C; KR102384126B1

Abstract

본 명세서에서는 신생물성 제형물들을 포함하는 다양한 조성물들 및 그들의 사용 방법들이 개시된다.

Description

빈크리스틴 설페이트 리포좀 주사를 위한 즉석 제형물

빈크리스틴과 같은 화학요법 제제들의 리포좀 제형물들은 그들의 피막화되지 않은 형태들을 능가하는 유의한 항암 임상적 유익을 제공할 수 있다. 약제학적 나노입자 제형물들은 생체내에서 연장된 약물 보유, 보다 긴 약물역학적 반감기들 및 종양 부위들에서 증가된 축적을 허용할 수 있고, 이는 개선된 임상적 성과들로 해석될 수 있다. 이들 특징들은 상세하게 체세포 분열기 동안 튜불린 결합을 방해하는 빈크리스틴과 같은 세포 주기 특이적 약물들에게 매력적일 수 있다. 극적인 리포좀 유래 장점은 용량 한계 (cap)이 없이 빈크리스틴 설페이트 리포좀 주사 (VSLI)를 잠재적으로 투여하는 능력에서 두드러지고, 심지어 용량 증강화도 허용할 수 있다. 한편으로 피막화되지 않은 빈크리스틴은 중대한 용량을 피하여 신경병리학적 독성들을 제한하도록 용량 한계와 함께 처방될 수 있다.

리포좀 제형물의 효능은 치료적 제제를 보유하고 활성 제제의 화학적 안정성을 유지시키는 리포좀의 능력에 있는 것으로 여겨진다. VSLI에서와 같이 스핑고미엘린-콜레스테롤로 구성된 리포좀들이 사용될 때, 이들 가수분해 저항성 리포좀들은 치료적으로 의미를 가지는 약물 보유 시간들을 허용하는 것으로 생각된다. 그러나, 빈크리스틴의 화학적 불안정성은 VSLI의 보관 기간 안정성을 제한할 수 있다 (Vendrig et al., Internatl. J. of Pharmaceutics 50:189-196, 1989; Sethi et al., Cancer Res. 45:5386-5389, 1985). 마르키보® (Marqibo®)의 안정성 연구들은 VSLI 분해가 실온에서 조제 (constitution) 24시간 이내에 일어났던 점을 확인한 것으로 여겨진다. 현재 승인된 FDA 라벨은 조제 이후 24시간 이내의 투여를 요구한다 (www.accessdata.fda.gov; Reference ID: 3172211, 2012). VSLI로 관찰된 장기 안정성 제한들의 결과로서, 이것은 투여 직전에 약국에서 제조된다 (www.accessdata.fda.gov; Reference ID: 3172211, 2012).

명목상으로 안정한 즉석 제형물을 성공하지 못한 무능력의 결과로서, 빈크리스틴 설페이트 리포좀 주사 (0.16 mg/mL) (VSLI)는 약국에서 마르키보 ® 키트의 일부로서 공급되는 세 가지 약물 산물 성분들로부터 조제된다. 세 가지 약물 산물 성분들은 빈크리스틴 설페이트 주사, USP, (VSI), 스핑고미엘린 콜레스테롤 리포좀 주사 (SCLI) 및 소듐 포스페이트 주사 (SPI)이다 (www.accessdata.fda.gov; Reference ID: 3172211, 2012). 세 가지 성분 키트는 포장물에 적어도 24개월에 적합한 보관 기간을 제공하는 방식으로서 선택되었다. 키트의 안정성은 2 내지 8℃에서 가장 짧은 만료 기간을 가진 키트 성분, 예로 빈크리스틴 설페이트 주사에 의해 관리될 수 있다.

따라서 약국에서 다단계 혼합의 필요성을 회피하도록 즉석 제형물을 개발하는 것이 바람직할 수 있고; 이것은 마르키보 투여의 용이성을 증진시키며, 보조 기구 예로 조제 수조를 조달할 필요성을 없애고, 약제 제조의 실수들의 가능성을 최소화시킬 것이다. 산물의 안정성은 빈크리스틴의 분해, 기본적으로 N-데스포르밀빈크리스틴 (NFV)의 형성에 의해 제한된다. 이것은 마르키보 키트의 성분인 VSLI 및 VSI 둘 다의 가장 큰 단일한 품질 저하인자 (degradent)인 것으로 보인다. 시간 경과 시 이러한 불순도의 증가는 마르키보 키트 및 VSI 둘 다가 24개월의 만료 기간을 가지도록 유도한다.

빈크리스틴은 식물 빈카 로세아 (Vinca rosea)의 잎들로부터 분리된 이량체 인돌디하이드로인돌 화합물이다 (US 20040071768). 알칼로이드는 벨바나민 종들과 결합된 N-데스메틸-N-포르밀-빈돌린 분체로 구성된다. 이것은 염 형태로 가장 안정한 것으로 여겨진다. 염들은 알칼로이드 자유 염기의 용액에 이론량의 산을 첨가하여 쉽게 제조되지만, 상기에 주목된 바와 같이 빈크리스틴 염들도 제한된 안정성: 4℃에서 24개월을 가진다. 빈크리스틴 설페이트의 N-탈포르밀화는 빈크리스틴의 중요한 분해 경로이다 (US 4,303,584). N-포름아미드는 긴장된 빈돌린 헤테로고리의 N1 질소 상에 위치하고, 아미드의 카보닐 기능기를 핵친화성 공격 또는 가수분해 둘 중 하나에 대해 취약한 위치로 팽창시키는 것 같다. 다른 소수의 분해 경로들은 4-탈아세틸화 또는 18번 위치에서 메틸 에스테르의 손실 이후의 탈카복실화와 같은 빈크리스틴의 가수분해적 변환들을 포함한다.

빈크리스틴의 불안정성 (lability)은 안정한 피막화되지 않은 빈크리스틴 제형물들의 개발을 방해하여, 엘리 릴리사의 VSI USP 개선체로 회귀하도록 하였다. 릴리사는 빈크리스틴 설페이트 주사의 냉동 건조된 또는 동결건조된 제형물을 개발하려고 추구하였다. 빈크리스틴 분해가 빈크리스틴 설페이트를 포함하는 즉석 용액을 선호하는 이들 포장물들의 포기를 진행시켰던 것으로 보인다. 빈크리스틴은 N-데스포르밀빈크리스틴 종들의 분해를 유도하는 열, 산 및 광 스트레스뿐만 아니라 다른 관련된 물질 불순물들에 대해서도 민감하다. 공기 산화가 기여인자일 수 있으며, 가열 무균화는 분해 불순물들의 형성으로 인해 VSLI 또는 VSI와 적합하지 않는 것으로 관찰되었다.

빈크리스틴의 구조적인 복잡성 및 이량체의 종종 예측하지 못한 화학적 민감성은 전형적으로 약제학적 제형물들을 위한 공통 유형들의 부형제들의 사용에 독이 되어왔다. 엘리 릴리사의 과학자들은 VSI의 제형물 개발에서 염소 이온의 존재가 "종양용해 빈카 이량체들의 유해한 효과들"을 가질 수 있기 때문에 최소화되어야 하는 점을 주목하였다. 약물 제형물들에서 염소 이온들의 유해한 효과들은 드물다. 염화나트륨은 원하는 등장성 성질들을 제공하도록 약제학적 제형물들에 광범위하게 사용된다. 한 가지 보고서는 독소루비신 및 빈크리스틴 둘 다가 0.45% 수용성 염화나트륨 및 링거 혼합물들에서 25℃ 내지 37℃의 범위로는 신속하게 분해되는 점을 주장하고 있다 (Stability of intravenous admixtures of doxorubicin and vincristine. Am J Hosp Pharm. 1986 Dec;43(12):3022-7). 염소 이온은 염화나트륨을 등장제로서 포함하는 안과 제형물들에서 항진균제인 티머로살의 불안정성과도 역시 결부되어 왔다. 이들 연구들은 빈크리스틴의 독특하고 매우 화학적인 민감성을 강조한다.

연장된 보관을 할 수 있는 마르키보®를 위한 즉석 제형물을 찾지 못한 실패는 VSLI를 투여하는 대안의 방식의 탐색을 가져왔고, 세 개 바이알 키트의 개발을 선도하였다. 마르키보®의 투여를 위한 (약국에서 조제와 함께 하는) 세 개 바이알 조제 공정은 2012년 8월에 FDA로부터 시판 승인을 받았다 (https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/nda/2012/202497_marqibo_toc.cfm) 참고).

즉석 포장물의 개발은 마르키보® 투여를 위한 유의한 개선책일 것이다. 연구들이 인넥스사 마르키보 개선체로, 동결건조법, 이온운반체 로딩 및/또는 망간 또는 마그네슘 설페이트 리포좀 로딩 플랫폼들을 사용하였던 VSLI 제형물의 안정성을 개선시키도록 제안되었다. 이들 제안들은 pH 구배 방법과 대비하여, 리포좀에게 더욱 순하거나 전기적 중성이라고 주장되는 2세대 피막화 방법의 사용을 기초로 하였다. 그러나, 안정한 즉석 제형물은 마르키보의 개발 동안 전혀 성공하지 못하였다. 여전히 VSLI의 즉석 제형물의 필요성은 계속되고 있다.

일정 구현예들은 첫 번째 수용성 완충액을 포함하는 연속적 수용성 상, 상기 첫 번째 수용성 상 내에 분산된 리포좀 상 및 상기 리포좀 상 내에 적재물로서 피막화된 안정화 수용성 용액을 포함하는, 즉석 빈크리스틴 조성물로서, 상기 안정화 수용성 용액은 두 번째 수용성 완충액 및 이에 용해된 안정화된 빈크리스틴을 포함하고; 상기 두 번째 수용성 완충액은 리포좀 상 밖으로 운반하고 안정화 수용성 용액에서 양전하를 가지는 용질 또는 하이드로늄 이온을 남길 수 있는 적어도 하나의 용질을 가지는 염을 포함하고, 상기 양전하를 가지는 용질 또는 하이드로늄 이온은 빈크리스틴을 안정화시키며; 상기 연속적 수용성 상 및 상기 안정화 수용성 용액은 적어도 2의 pH 단위들의 pH 차이를 가지는, 조성물을 포함한다.

일정 구현예들은 빈크리스틴을 리포좀으로 안정화시키는 방법으로서, 첫 번째 수용성 완충액을 포함하는 연속적 수용성 상 내에 리포좀 상을 분산시키는 단계를 포함하고; 상기 리포좀 상은 리포좀 상 내에 피막화된 안정화 수용성 용액을 포함하고; 상기 안정화 수용성 용액은 두 번째 수용성 완충액 및 이에 용해된 안정화된 빈크리스틴을 포함하고; 상기 두 번째 수용성 완충액은 리포좀 상 밖으로 운반하고 안정화 수용성 용액에서 양전하를 가지는 용질 또는 하이드로늄 이온을 남길 수 있는 적어도 하나의 용질을 가지는 염을 포함하고, 상기 양전하를 가지는 용질 또는 하이드로늄 이온은 빈크리스틴을 안정화시키며; 상기 연속적 수용성 상 및 상기 안정화 수용성 용액은 적어도 2의 pH 단위들의 pH 차이를 가지는, 방법을 포함한다.

일정 구현예들은 포유동물에서 암을 치료하는 방법들로서, 첫 번째 수용성 완충액을 포함하는 연속적 수용성 상, 상기 첫 번째 수용성 상 내에 분산된 리포좀 상 및 상기 리포좀 상 내에 적재물로서 피막화된 안정화 수용성 용액을 포함하는, 조성물의 치료량을 투여하는 단계를 포함하고, 상기 안정화 수용성 용액은 두 번째 수용성 완충액 및 이에 용해된 안정화된 빈크리스틴을 포함하고; 상기 두 번째 수용성 완충액은 리포좀 상 밖으로 운반하고 안정화 수용성 용액에서 양전하를 가지는 용질 또는 하이드로늄 이온을 남길 수 있는 적어도 하나의 용질을 가지는 염을 포함하고, 상기 양전하를 가지는 용질 또는 하이드로늄 이온은 빈크리스틴을 안정화시키며; 상기 연속적 수용성 상 및 상기 안정화 수용성 용액은 적어도 2의 pH 단위들의 pH 차이를 가지는, 방법들을 포함한다.

본 명세서에서는 증진된 안정성을 가진 빈크리스틴 설페이트 리포좀 주사를 위한 즉석 제형물과 관련된 조성물들 및 방법들이 개시된다. 일정 구현예들은 현재 VSLI 제형물에 사용되는 시트르산 완충액을 암모늄 설페이트 완충액 (AS)으로 대체하고, 안정한 빈크리스틴 설페이트 종들의 농도를 증가시키는 리포좀 막 pH 평형의 다중복합체를 제작하여 달성되었다 (도 1 참조). 보완적인 외부 pH 완충액과 결합된 암모늄 설페이트는 스핑고미엘린-콜레스테롤 리포좀의 구조적 및 역동적인 특성을 유지하면서, 빈크리스틴의 N-데스포르밀빈크리스틴으로의 분해를 경감시킬 수 있다. 이것은 막통과 방법을 통하여 빈크리스틴의 효율적인 로딩 및 보유를 허용할 수 있다. 일정의 구현예들은 비-호지킨 림프종의 재발된 형태들을 치료하는 방법들과 같은, 다양한 유형들의 림프종들을 치료하는 방법들과 관련된다. 전형적으로, 본 발명에 따른 약물을 안정화시키는 즉석 조성물은 연속적 수용성 상, 상기 연속적 수용성 상에 분산된 리포좀 상 및 상기 리포좀 상 내에 적재물로서 피막화된 안정화 수용성 용액을 포함할 수 있다.

연속적 수용성 상은 첫 번째 수용성 완충액을 포함할 수 있다. 첫 번째 완충액은 빈크리스틴을 안정화시킬 수 있고, 빈크리스틴의 피막화를 용이하게 도울 수 있다. 예를 들면, 도 1에 도시된 외부 포스페이트 완충액과 같은 중성 또는 높은 pH 연속적 수용성 상은 빈크리스틴이 주로 자유 염기 형태로 리포좀 막을 통과하도록 허용할 수 있다. 대조적으로, 리포좀에 피막화된 안정화 수용성 용액은 빈크리스틴의 산-염기 평형을 유도하는 데 충분히 낮은 pH를 가짐으로써, 리포좀 내의 중성 빈크리스틴의 양은 무시할만하다. 예를 들면, 이것은 도 1의 내부 리포좀 용액에 도시된 빈크리스틴 자유 염기, 빈크리스틴 설페이트, 암모니아 및 암모늄 설페이트 간의 평형에 의해 설명된다. 이것은 더 높은 빈크리스틴 자유 염기 농도를 가질 수 있는 연속적 수용성 상, 및 무시할만한 빈크리스틴 자유 염시 농도를 가질 수 있는 리포좀 내에 피막화된 안정화 수용성 용액 간의 빈크리스틴 자유 염기의 농도 구배를 제공할 수 있다. 이러한 농도 구배는 높은 농도의 빈크리스틴 자유 염기를 가지는 연속적 수용성 상으로부터 무시할만한 농도의 중성 빈크리스틴을 가지는 리포좀 내의 안정화 수용성 상에 이르기까지 자유 빈크리스틴의 이동을 추진할 수 있다. 빈크리스틴 로딩도 역시, 빈크리스틴의 염 형태가 전형적으로 리포좀 장벽을 통해 연속적 수용성 상으로 진행하지 않지만 중성 빈크리스틴은 리포좀 장벽을 통해 리포좀 내의 안정화 수용성 용액으로 진행할 수 있기 때문에 추진되는 것으로 여겨진다.

일정 구현예들에서, 첫 번째 수용성 완충액 용액은 이에 제한되는 것은 아니지만 단일음이온 짝 염기, 이중음이온 짝 염기, 삼중음이온 짝 염기, 짝 염기, 짝 산 또는 그들의 임의의 혼합 또는 조합과 같은 산 또는 염기의 짝과 조합된 염, 산 또는 염기와 같은, 연속적 수용성 상을 주로 중성 빈크리스틴을 제공하는 pH까지 완충시킬 수 있는 임의의 완충액을 포함한다. 일정 구현예들에서, 상기의 임의의 조합은 적정된 혼합물에 존재할 수 있다. 일정 구현예들에서, 완충액은 설페이트 완충액이다. 일정 구현예들에서, 완충액은 포스페이트 완충액 (예로, 소듐 포스페이트 완충액), 바이카보네이트 완충액, 보레이트 완충액 등이다. 일정 구현예들에서, 첫 번째 수용성 완충액 용액은 일차 담체 용매 또는 리포좀 상의 유체 담체일 수 있다.

첫 번째 수용성 완충액은 임의의 적합한 농도로 존재할 수 있다. 예를 들면, 첫 번째 수용성 완충액은 약 150 mM 내지 약 400 mM 또는 약 250 mM 내지 약 350 mM 범위의 농도와 같이 완충액을 대략 등장성으로 만드는 농도로 존재할 수 있다.

리포좀은 적어도 당업자에 의해 이해되는 가장 넓은 의미를 포함하고, 지질 이중막과 같은 층상의 이중막으로 구성되는 소포체들 또는 나노입자들도 역시 포함한다. 일정 구현예들에서, 리포좀 또는 리포좀 막은 리포좀 나노입자들을 형성하는 것으로 알려진 임의의 물질을 포함하여 첫 번째 수용성 완충액 용액에 실질적으로 불용성인 임의의 물질에 의해 형성된다. 일정 구현예들에서, 리포좀들은 층상의 지질 이중막으로 구성되는 소포체를 형성할 수 있는 임의의 물질을 포함한다. 리포좀들은 인지질들 (예로, 포스파티딜콜린들), 스핑고지질들 (예로, 스핑고미엘린), 당지질들, 포스포글리세라이드들, 폴리에틸렌 글리콜, 콜레스테롤 등을 포함할 수 있다. 일정 구현예들에서, 리포좀들은 PEG화된 및/또는 PEG화되지 않은 포스파티딜 콜린 지질들 및/또는 인지질들을 포함한다. 일정 구현예들에서, 일정 리포좀들의 지질 성분은 리포좀의 지질 이중막에 유용한 성질들, 예로 개선된 탄력성, 개선된 약물 로딩 등을 부여할 수 있는 임의의 지방산을 포함한다.

일정 구현예들에서, 나노입자 또는 리포좀은 용매 장벽을 제작하거나 화학적 또는 삼투적 구배를 제작하는 데 사용된다. 리포좀 또는 나노입자는 실질적으로 다른 pH의 두 가지 수용성 용액들을 분리하는 데 사용될 수 있다. 나노입자는 또한 실질적으로 동일한 pH의 두 가지 수용성 용액들을 분리하는 데 사용될 수 있다. 일정 구현예들에서, 나노입자는 실질적으로 다른 완충액들을 포함하는 두 가지 용액들을 분리하는 데 사용된다. 리포좀 또는 나노입자는 또한 실질적으로 동일한 완충액들을 포함하는 두 가지 용액들을 분리하는 데 사용될 수 있다. 일정 구현예들에서, 리포좀은 실질적으로 다른 pH이고 실질적으로 다른 완충액 용액을 포함하는 두 가지 수용성 용액들을 분리하는 데 사용된다. 일정 구현예들에서, 두 가지 수용성 용액들의 분리에 의해 형성되는 구배는 리포좀 또는 나노입자의 로딩 효율을 증가시킬 수 있다. 일정 구현예들에서, 리포좀에 의해 형성되는 막은 리포좀 상, 리포좀 상 또는 내부 나노입자 상으로 기술된다.

피막화된 적재물은 적어도 당업자에 의해 이해되는 가장 넓은 의미를 포함하는 것으로 이해되어야 하고, 리포좀 지질 이중막에 의해 주변 수용성 상으로부터 분리되는 수용성 상을 포함한다.

일정 구현예들에서, 리포좀은 두 번째 수용성 완충액 및 이에 용해된 안정화된 빈크리스틴을 포함할 수 있는 안정화 수용성 용액을 피막화한다.

일정 구현예들에서, 두 번째 수용성 완충액은 암모늄 염 예로 암모늄 설페이트 완충액, 암모늄 시트레이트 완충액, 암모늄 포스페이트 완충액, 암모늄 바이카보네이트 완충액, 암모늄 카보네이트 완충액, 암모늄 보레이트 완충액 등을 포함하는 안정화 수용성 용액의 pH를 완충시킬 수 있는 임의의 완충액을 포함한다. 암모늄 완충액은 처음부터 유사한 pH를 제공하는 다른 완충액들과 비교하여, 시간 경과 시 더 낮은 pH에서 안정화 수용성 용액을 유지하여 빈크리스틴을 안정화시키도록 도울 수 있는 것으로 여겨진다. 비-암모늄 완충액들은 시간 경과 시 그들의 완충화 능력을 상실할 수 있는 것으로 여겨진다. 일단 약물이 리포좀에 피막화되면, 이것은 리포좀에 매우 농축되어지고 복합체 이온 이동 평형들을 만들 수 있어, 균형을 이루지 않는 경우 빈크리스틴의 분해에 기여할 수 있다. 예기치 못하게도, 암모늄 완충액들은 처음부터 유사한 pH를 가진 다른 완충액들보다 더 안정한 pH를 유지할 수 있다. 이것은 도 1에 도시된 시스템과 같은 시스템들의 경우에 자유 암모늄이 리포좀 장벽을 통해 이탈하고 이로써 내부 리포좀 pH를 안정화시키는 양성자를 남길 수 있기 때문일 수 있다.

일정 구현예들에서, 안정화된 치료적으로 활성을 가진 제제는 안정화 수용성 용액에서 안정화될 수 있는 임의의 약제이다. 일정 구현예들에서, 안정화된 치료적으로 활성을 가진 제제는 이에 제한되는 것은 아니지만 빈크리스틴과 같은 항암 약물이다.

빈크리스틴은 다음의 화학적 구조식에 의해 나타낼 수 있다.

또한 빈크리스틴은 화학적 명칭: (3aR,3a¹R,4R,5S,5aR,10bR)-메틸-4-아세톡시-3a-에틸-9-((5S,7S,9S)-5-에틸-5-하이드록시-9-(메톡시카보닐)-2,4,5,6,7,8,9,10-옥타하이드로-1H-3,7-메타노[1]아자사이클로운데시노[5,4-b]인돌-9-일)-6-포르밀-5-하이드록시-8-메톡시-3a,3a1,4,5,5a,6,11,12-옥타하이드로-1H-인돌리지노[8,1-cd]-카바졸-5-카복실레이트로 나타낼 수 있다.

일정 구현예들에서, 두 번째 수용성 완충액은 안정화 수용성 용액 내에 용해된 빈크리스틴을 안정화시키도록 돕는다. 일정 구현예들에서, 치료적으로 활성을 가진 제제는 첫 번째 수용성 완충액에 존재하는 것보다 안정화 수용성 용액에서 실질적으로 더 안정하다. 일정 구현예들에서, 빈크리스틴은 첫 번째 수용성 완충액에서보다 안정화 수용성 용액에서 실질적으로 더 안정하다.

안정화 수용성 용액은 두 번째 수용성 완충액을 포함한다. 두 번째 수용성 완충액은 리포좀 상 밖으로 운반할 수 있는 적어도 하나의 용질을 가지는 염을 포함한다. 용질이 리포좀 상 밖으로 운반될 때, 이것은 안정화 수용성 용액에서 양전하를 가지는 용질 또는 하이드로늄 이온을 남긴다. 이에 따라, 양전하를 가지는 용질 또는 하이드로늄 이온은 빈크리스틴을 안정화시킬 수 있다. 리포좀 상 밖으로 운반하고, 양전하를 가지는 용질 또는 하이드로늄 이온을 남길 수 있는 많은 염들이 존재한다. 예를 들면, 중성 전하의 염기들은 리포좀 상들 밖으로 운반할 수 있다. 이에 따라, 암모니아, 아민들, 아미노산들, 포스파인들 등과 같은 중성 염기의 염의 경우, 중성 염기 예로 암모니아 또는 아민은 리포좀 상 밖으로 운반할 수 있고, 염으로부터 나온 양이온 또는 하이드로늄 이온은 안정화 수용성 용액에 남을 수 있다. 적합한 안정화 염들의 예들은 이에 제한되는 것은 아니지만, 암모니아의 염들 또는 메틸아민, 디메틸아민, 트리메틸아민, 에틸아민, 디에틸아민, 트리에틸아민, 에탄올아민, 디에탄올 아민, 트리에탄올 아민 등과 같은 아민들의 염들을 포함할 수 있다.

일정 구현예들에서, 치료적으로 활성을 가진 제제는 두 번째 수용성 완충액에서 암모늄 염에 의해 실질적으로 안정화된다. 일정 구현예들에서, 암모늄 설페이트 완충액은 빈크리스틴의 데스포르밀빈크리스틴으로 분해율을 실질적으로 감소시킨다. 일정 구현예들에서, 암모늄 설페이트는 탈포르밀화에 대항하여 빈크리스틴을 실질적으로 보호한다. 일정 구현예들에서, 암모늄 이온의 존재는 탈포르밀화에 대항하여 빈크리스틴을 실질적으로 보호한다. 일정 구현예들에서, 암모늄 이온의 용액에 대한 일차적인 기여인자는 암모늄 설페이트이다. 일정 구현예들에서, 임의의 암모늄 염은 탈포르밀화에 대항하여 빈크리스틴을 보호하는 데 기여할 수 있다.

두 번째 수용성 완충액은 빈크리스틴을 안정화시키도록 도울 수 있는 pH에서 안정화 수용성 용액에 존재할 수 있다. 일정 구현예들에서, 암모늄 염 예로 암모늄 설페이트와 같은 두 번째 수용성 완충액은 본 발명의 조성물에 존재하고, 여기에서 암모늄 염은 두 번째 수용성 완충액에 약 100 mM 내지 약 500 mM, 약 200 mM 내지 약 400 mM, 약 200 mM 내지 약 300 mM, 약 250 mM 내지 약 300 mM, 약 300 mM 내지 약 350 mM 또는 약 250 mM 내지 약 350 mM 범위의 농도로 존재한다.

일정 구현예들에서, 연속적 수용성 상 또는 첫 번째 수용성 완충액은 약 pH 5부터 약 pH 8.8 또는 약 pH 9까지, 약 pH 5부터 약 pH 6까지, 약 pH 6부터 약 pH 7까지, 약 pH 7부터 약 pH 8까지, 약 pH 7부터 약 pH 8.5까지, 약 pH 7부터 약 pH 8.8 또는 약 pH 9까지, 약 pH 7.2부터 약 pH 7.8까지, 약 pH 7.4부터 약 pH 7.8까지, 약 pH 7.8부터 약 pH 8까지, 약 pH 8부터 약 pH 8.2까지, 약 pH 8.2부터 약 pH 8.8까지, 약 pH 8.4부터 약 pH 8.8까지 범위, 약 pH 7.8, 약 pH 7.4, 약 pH 8 또는 임의의 이들 수치들 또는 이들 범위에 속하는 임의의 pH의 pH를 가진다.

일정 구현예들에서, 안정화 수용성 상 또는 두 번째 수용성 완충액은 약 pH 3부터 약 pH 5.5까지, 약 pH 3부터 약 pH 4까지, 약 pH 3.5부터 약 pH 4.5까지, 약 pH 4부터 약 pH 5까지 범위, 약 pH 4 또는 임의의 이들 수치들 또는 이들 범위에 속하는 임의의 pH의 pH를 가진다.

일정 구현예들에서, 연속적 수용성 상 및 안정화 수용성 상 또는 첫 번째 수용성 완충액 및 두 번째 수용성 완충액 간의 pH 차이 또는 △pH는 약 1의 pH 단위들부터 약 4의 pH 단위들까지, 약 2의 pH 단위들부터 약 3의 pH 단위들까지, 약 1.5의 pH 단위들부터 약 2.5의 pH 단위들까지, 약 2.5의 pH 단위들부터 약 3.5의 pH 단위들까지, 약 3의 pH 단위들부터 약 4의 pH 단위들까지, 약 3.8의 pH 단위들 또는 임의의 이들 수치들 또는 이들 범위에 속하는 임의의 차이이다.

일정 구현예들에서, △pH는 리포좀 피막화 효율을 증가시키도록 도울 수 있다. 일정 구현예들에서, 유용한 리포좀 로딩을 달성하는 데 유용한 △pH는 약 1의 pH 단위들부터 약 4의 pH 단위들까지, 약 2의 pH 단위들부터 약 3의 pH 단위들까지, 약 1.5의 pH 단위들부터 약 2.5의 pH 단위들까지, 약 2.5의 pH 단위들부터 약 3.5의 pH 단위들까지, 약 3의 pH 단위들부터 약 4의 pH 단위들까지, 약 3.8의 pH 단위들 또는 임의의 이들 수치들 또는 이들 범위에 속하는 임의의 차이이다.

일정 구현예들에서, 리포좀의 활성 성분으로 로딩은 막통과 잠재력 로딩으로서 기술될 수 있다. 일정 구현예들에서, 잠재력은 상기에 기술된 바와 같이 양성자 구배에 의해 만들어지고, 이는 리포좀 내부에 치료제의 축적을 유도한다.

일정 구현예들에서, 적용된 완충액들 및 리포좀인 △pH의 조합은 치료적으로 활성을 가진 제제의 우수한 로딩에 필요로 하는 특징들 및 치료적으로 활성을 가진 제제의 분해를 최소화하는 특징들 둘 다의 균형으로 귀착된다.

일정 구현예들에서, 개시된 조성물은 안정한 빈크리스틴 설페이트 종들의 증가된 농도를 가져오는 리포좀 막 pH 평형들의 복합체를 만들 수 있는 암모늄 설페이트 완충액을 포함한다 (도 1 참조). 개시된 리포좀 제형물의 보완적인 외부 pH 완충액에 의한 이온 이동 조절과 결합된 암모늄 설페이트 평형들의 사용은 놀랍게도 빈크리스틴의 N-데스포르밀빈크리스틴 (NFV)으로 분해를 경감시키고, 또한 막통과 방법에 의한 빈크리스틴의 효율적인 로딩 및 보유를 허용하도록 리포좀의 구조적 및 역동적인 특성을 유지한다.

N-데스포르밀빈크리스틴은 하기 화학적 구조식에 의해 나타낼 수 있다.

또한 N-데스포르밀빈크리스틴은 화학적 명칭: (3aR,3a¹R,4R,5S,5aR,10bS)-메틸-4-아세톡시-3a-에틸-9-((5S,7S,9S)-5-에틸-5-하이드록시-9-(메톡시카보닐)-2,4,5,6,7,8,9,10-옥타하이드로-1H-3,7-메타노[1]아자사이클로운데시노[5,4-b]인돌-9-일)-5-하이드록시-8-메톡시-3a,3a1,4,5,5a,6,11,12-옥타하이드로-1H-인돌리지노[8,1-cd]-카바졸-5-카복실레이트로 나타낼 수 있다.

NFV는 심지어 구배가 존재할 때 (예로, pH 4 내부 및 pH 7.5 외부) 또는 외부 및 내부 pH가 동일한 경우라면 (예로, pH 4) 때로 형성될 수 있다. 이것은 비가역적인 탈포르밀화에 대해 취약할 수 있는 빈크리스틴 종들이 리포좀의 내부에서 형성될 수 있는 점을 의미할 수 있다. 한 가지 가능한 종은 빈크리스틴 분해 경로들에 대해 취약할 수 있는 중성 빈크리스틴이다. 현재까지 개시된 조성물들의 한 가지 장점은 리포좀 내의 분해에 대해 취약할 수 있는 빈크리스틴 종들의 형성을 최소화하는 그들의 능력이다

일정 구현예들에서, 본 명세서에서 개시된 조성물들은 암의 치료를 위해 또는 재발된 암의 치료를 위해 포유동물에게로 투여될 수 있다. 일정 구현예들에서, 암은 림프종 또는 백혈병을 포함한다. 일정 구현예들에서, 포유동물은 암 치료 요법을 이전에 거쳤을 수 있다.

일정 구현예들에서, 본 명세서에서 개시된 조성물들은 포유동물에서 신생물의 치료 방법들에 포함될 수 있다. 일정 구현예들에서, 본 명세서에서 개시된 조성물들은 포유동물에서 신생물의 재발 형태들의 치료 방법들에 포함될 수 있다. 일정 구현예들에서, 본 명세서에서 개시된 조성물들은 다양한 형태들의 림프종들의 치료 방법에 포함될 수 있다. 일정 구현예들에서, 본 명세서에서 개시된 조성물들은 비-호지킨 림프종의 치료를 위해 투여될 수 있다. 일정 구현예들에서, 본 명세서에서 개시된 조성물들은 비-호지킨 림프종의 재발의 치료를 위해 투여될 수 있다.

용어 신생물은 본 명세서에서 사용되는 바, 적어도 당업자에 의해 이해되는 가장 넓은 의미를 포함하고, 세포들, 종양들, 악성 삼출물들, 낭종들 등의 임의의 이상 성장도 역시 포함한다. 신생물의 인용은 이에 제한되지 않고 신생물 세포들, 내피 세포들 또는 백혈구들, 골수세포들, 림프세포들 등과 같은 면역학적 세포들을 포함하는 다양한 세포 유형들을 포함할 수 있다.

일정 구현예들에서, 치료될 신생물은 암이다.

조성물이 빈크리스틴 설페이트 리포좀 주사 (VSLI)인 일정 구현예들에서, 조성물은 암 또는 재발된 암의 치료를 위해 포유동물에게로 투여될 수 있다. 조성물은 약 1 mg/m²부터 약 4 mg/m²까지, 약 1.5 mg/m²부터 약 3 mg/m²까지, 약 2 mg/m²부터 약 3 mg/m²까지, 약 2 mg/m²부터 약 2.5 mg/m²까지의 범위, 약 2 mg/m², 약 1.5 mg/m², 약 2.25 mg/m², 약 2.5 mg/m², 약 3 mg/m², 약 2.0 mg/m², 약 2.1 mg/m², 약 2.2 mg/m², 약 2.3 mg/m², 약 2.4 mg/m² 또는 약 1.9 mg/m²의 용량으로 투여될 수 있다. 일정 구현예들에서, VSLI는 다른 치료적 화합물들과 조합으로 투여된다. 일정 구현예들에서, VSLI는 다른 항-신생물 약제들과 조합으로 투여된다.

도 1은 빈크리스틴 설페이트 리포좀 제형물의 피막화 기작을 나타낸 것이다.

실시예 1: 더 낮은 자유 약물 함량, 투석된 마르키보 제형물 .

빈크리스틴 설페이트 리포좀 주사 (VSLI)의 안정성은 그의 N-데스포르밀빈크리스틴 (NFV)으로 분해로 반영된다. VSLI은 3개-바이알 키트 제형물로부터 조제될 때, 빈크리스틴의 잠재적인 분해로 인해 24시간 이내의 투여를 요구할 수 있다. VSLI의 제조는 항상 ≤ 5% 자유 빈크리스틴도 역시 달성한다. 자유 빈크리스틴은 외부 pH 7.4 완충액 환경에 놓일 것이다. 그러나, 빈크리스틴은 그의 염 형태 (pKa 5.0 및 7.4)에서 가장 안정하고, pH 7.4에서 평형들은 pH 4.0의 리포좀 내부와 비교하여 염 형태의 경우 덜 바람직할 것으로 생각된다. 자유 빈크리스틴이 NFV의 형성에 기여하였던 정도 및 그의 VSLI의 전반적인 안정성에 미치는 영향을 조사하는 것이 유용할 수 있다.

VSLI은 마르키보 키트 동등물 성분들, 예로 VSI, SPI 및 SCLI로부터 제조되었다. 자유 (피막화되지 않은) 빈크리스틴은 다양한 pH 조건들 하에서 다양한 완충액을 사용한 투석법에 의해 제거되었다. 변형체들은 12주까지 동안 안정성에 관하여 조사되었고, 핵심 VSLI 안정성을 지시하는 판정기준들에 대하여 검정되었다. 변화들이 다음의 외부 완충액들을 사용한 투석으로 조사되었다.

a) 포스페이트-완충 슈크로스 용액, pH 7.4

b) 포스페이트-완충 식염수 (PBS), pH 7.4

c) 포스페이트-완충 슈크로스 용액, pH 4.0

d) 포스페이트-완충 슈크로스 용액, pH 5.0

pH 4.0 내지 7.4 범위의 외부 완충액으로 외부 빈크리스틴이 없는 VSLI의 제조

키트 성분들로부터 3가지 분리된 VSLI 피막화들이 수행되었고 (각각 31 mL), 풀로 만들어졌다. 로딩-후 시료는 분석을 위해 제거되었고, 남은 시료 부피로 4개 부분들로 나뉘었다 (각각 ~ 21.75 mL). 이들 시료들은 스펙트라포어 1호, 너비 40 mm, 6-8 kDa MWCO 투석막 백들 내에 놓였고, 24시간 동안 4배 부피 교환들을 위해 포스페이트-완충 식염수 (PBS) 또는 포스페이트-완충 슈크로스 용액들, pH 7.4 둘 중 하나를 사용하는 20배 초과 부피로 광 보호된 실온에서 투석되었다. 제조된 PBS는 20 mM 소듐 포스페이트, 130 mM 염화나트륨, pH 7.4를 포함하였다. 포스페이트-완충 슈크로스는 10% (w/v) 슈크로스, 20 mM 소듐 포스페이트, pH 7.4를 포함하였다. 투석 이후에, 시료 완충액으로부터 얻은 시료들은 다함께 풀로 만들어졌고, 일회용 주사기 필터들 (팔 아크로디스크, 0.2 um 공극 크기, 슈포아 멤브레인사)를 사용하여 방부제 조건들 하에서 무균 여과되었으며, 각각 시간대의 안정성 연구를 위해 (2 내지 8℃에서 0, 2, 4, 8, 12주; 실온에서 2, 4, 8, 12주; 및 40℃에서 2주) 개별적인 무균 튜브들 (4.2 mL) 내로 분량되었다.

pH 4 및 5의 외부 완충액으로 외부 빈크리스틴이 없는 VSLI의 제조

예비적인 소규모 평가들

초기 테스트 연구는 낮은 pH 조건들 하에서 마르키보의 투석이 실제로 일어나는지 여부를 확인하도록 수행되었다. 전부 8 mL VSLI 산물이 상기에 기술된 바와 같이 마르키보 키트 바이알들로부터 제조되었고, 로딩-후 물질은 스펙트라포어 1호, 너비 20 mm, 6-8 kDa MWCO 투석막 백들 내에 광 보호된 2 내지 8℃에서 24시간 동안 4배 부피 교환들을 위해 pH 4, 5 또는 6 중 어느 하나의 SPI 용액들을 사용한 20배 초과 부피로의 투석을 위해 2 mL 분량들로 나뉘었다. 투석-후 시료들은 자유 빈크리스틴 함량에 대하여 검정되었고 (표 1), 낮은 pH 외부 완충액으로의 투석이 가능한 점을 보여주었다. 하기 표 1은 마르키보 변형체들의 자유 약물 전체 및 백분율에 관한 투석의 효과를 나타낸다.

시료	전체 약물 (ug/mL)	자유 약물 %
pH 4에서 투석-후 마르키보	166.7	0.4
pH 5에서 투석-후 마르키보	161.7	0.2
pH 6에서 투석-후 마르키보	165.4	0.3

투석 변형체들의 규모 증가

VSLI 산물의 50 mL 용액이 상기에 기술된 바와 같이 마르키보 키트로부터 제조되었다. 로딩-후 산물은 두 가지로 나뉘었고, 각각의 절반은 스펙트라포어 1호, 너비 40 mm, 6-8 kDa MWCO 투석막 백들 내에 놓여졌으며, 광 보호된 2 내지 8℃에서 24시간 동안 4배 부피 교환들을 위해 pH 4 또는 5 둘 중 하나의 포스페이트-완충 슈크로스 용액들을 사용한 20배 초과 부피로 투석되었다. 투석-후 시료들은 수집되었고, 무균 여과되었으며, 각각 시간대의 안정성 연구를 위해 (2 내지 8℃에서 0, 2, 4, 8, 12주; 실온에서 2, 4주) 개별적인 무균 튜브들 (3.5 mL) 내로 분량되었다.

안정성 분석 프로토콜

각각의 안정성 시간대에서 시료들이 분석되었다: pH (벡크만 파이 360 pH 측정기), 삼투압 (웨스코사 배프로 5520 진공 압력 삼투측정기), 입자 크기, 전체 및 자유 빈크리스틴 그리고 약물-관련 불순물들.

결과들

3개-바이알 제형물로부터 제조된 VSLI의 외부 완충액으로부터 자유 빈크리스틴을 제거하는 안정성 결과들은 표 2에 나타나 있다. 자유 빈크리스틴을 제거하는 것이 VSLI 안정성을 개선하는 것으로 관찰되지 않았다. 4주 이내에 NFV는 4℃에서 양이 배가되었고, 8주까지 분해율은 모든 완충액 및 pH 변화들의 경우에 > 1.3% NFV/개월이었다. 전체 빈크리스틴은 NFV의 형성과 동시에 감소되었다. 자유 외부 빈크리스틴이 없는 VSLI도 역시 약물이 실온에서 더 신속하게 분해되고 2주 이내에 NFV 백분율이 배가되는 기지의 빈크리스틴의 화학적 분해 특징들을 따랐다. 이들 분해율들은 빈크리스틴의 NFV로 분해로 인해 조제 24시간 이내에 VSLI의 투여를 요구하도록 하였던, 4℃에서 3개-바이알 마르키보 키트 안정성의 경우에 관찰되는 1.6% NFV/개월과 유사하다.

이들 투석 연구들로부터 얻은 결과들은 VSLI의 안정성 관리자가 N-데스포르밀빈크리스틴 (NFV)의 형성인 점을 입증하고 있다. VSLI의 보관 기간은 NFV가 3.0 명세서 한계를 벗어난 수준들로 증가하는 신속한 정도에 의해 결정될 것이다. 전체 빈크리스틴의 손실은 관찰된 NFV의 성장과 상관되었다. 전체 불순물들은 전체 할당에 포함되는 NFV의 성장과 반비례하여 증가하지 않았다. 새로운 불순물들은 전혀 관찰되지 않았다. 모든 변형체들은 pH, 삼투압 및 입자 크기의 허용된 VSLI 판정기준 내에 그대로 유지되었고, 규격을 벗어난 경향성은 이들 판정기준의 경우에 전혀 관찰되지 않았다. 또한, 3개-바이알 제형물에 존재하는, 등장제로서 슈크로스의 만니톨로 치환은 빈크리스틴의 분해율에 미치는 효과를 가지지 않았다.

추가적으로, 표 2에 나타낸 결과들은 pH 4 및 pH 5 완충액들을 사용한 투석에 의한 자유 빈크리스틴의 제거가 리포좀 막의 특성을 변경시키지 않았던 점을 보여주었다. △pH 구배의 크기를 변경하는 것은 (pH-로딩 구배가 양보되는 경우라면 예상될 수 있었던 바와 같이) 리포좀 함량들의 유출을 유발하지 않았다. 자유 빈크리스틴은 시간 경과 시 모든 변형체들에서 일정하게 낮게 유지되었다. 하기 표 2는 외부 자유 약물의 투석후 VSLI의 안정성을 나타낸다.

VSLI 변형체 완충액	pH	안정성 온도℃	안정성 시간, 주	자유 약물 %	전체 약물 %	NFV %	NFV % /개월
PBS	7.4	4	12	0.10	93.0	6.4	1.3
PBS	7.4	RT	12	0.22	76.1	22.8	6.7
슈크로스-PB	7.4	4	12	0.08	93.0	6.5	1.3
슈크로스-PB	7.4	RT	12	0.12	76.1	22.7	6.7
슈크로스-PB	4.0	4	4	0.23	94.6	4.8	1.3
슈크로스-PB	4.0	RT	4	0.37	88.6	10.3	8.1
슈크로스-PB	5.0	4	8	0.18	94.5	4.9	1.4
슈크로스-PB	5.0	RT	8	0.33	88.7	10.4	8.2

이들 투석 연구들의 결과들은 자유 외부 빈크리스틴 분해가 VSLI의 전반적인 안정성에 소수의 방식으로 기여하는 것 같더라도, VSLI의 관찰된 안정성을 결정하는 데 주요한 역할을 담당하지 않는 점을 보여준다. 이들 결과들은 빈크리스틴의 분해가 3개 바이알 키트로부터 제조된 VSLI의 조제후 리포좀 내부에서 일어나고 있는 점을 보여준다. 리포좀의 내부 및 외부 간의 △pH를 유지하는 것 또는 VSLI의 △pH를 제거하는 (또는 최소화하는) 것은 3개 바이알 제형물의 경우 리포좀 내부의 빈크리스틴의 안정성을 개선시키지 못한다.

실시예 2: 암모늄 설페이트 VCR 리포좀 변형체들

마르키보는 약국에서 마르키보 키트 성분들 (VSI, SCLI 및 SPI)을 다함께 배양하여 조제된다. 약한 염기인 빈크리스틴 셀페이트는 내부 SCLI pH 4.0 및 결과로 얻은 리포좀의 외부 SPI 완충액 pH 7.4의 pH 차별에 의해 만들어진 막통과 구배의 작용에 의해 리포좀 내로 로딩된다. 로딩 과정 동안, 빈크리스틴의 중성 형태만이 리포좀 막을 통과하고, 시트레이트 염으로서 SCLI 내부에 포집된다. 이러한 시트레이트 완충액으로 로딩은 95% 이상의 빈크리스틴 로딩을 제공한다. 그러나, 일단 조제되면, 내부 빈크리스틴 시트레이트는 적당하게 불안정하여 리포좀 내부 pH 4.0에도 불구하고 24시간 이내에 NFV의 성장이 일어나고, 이는 빈크리스틴을 염 종들로서 유지한다. 상기에 기술된 초기의 자유 약물 투석 실험들로부터, 빈크리스틴의 분해는 리포좀 내부에서 일어나고, 외부 빈크리스틴 pH 7.4 환경 또는 리포좀으로부터 빈크리스틴 유출로부터는 아닌 것으로 보인다. 내부 리포좀에서 시트레이트 완충 능력이 비효율적이고, 양성자들 및 용질 이온들이 리포좀의 내부 pH 4.0 완충액을 탈안정화시킬 정도로 막을 통해 이동하도록 허용할 수 있는 것으로 생각가능하다. 이러한 가능성을 조사하기 위하여, 리포좀 내부 소듐 시트레이트 완충액은 대안의 "로딩 배터리"로 대체되었다. 내부 리포좀 완충액이 암모늄 설페이트 용액 (AS)이었던 일련의 실험들이 시행되었다. 250 mM 암모늄 설페이트의 pH는 약 5.5이지만, 리포좀의 내부에서 암모니아 및 암모늄 염 간의 해리 평형은 중성의 암모니아 분자들이 리포좀 막을 교차하도록 허용하여 남게 되는 수소 이온들의 결과로서 내부 pH를 효과적으로 감소시킨다. 결과로 얻은 내부 pH는 약 4이다. 이러한 평형은 마르키보의 리포좀 환경 내부의 소듐 시트레이트-시트르산 평형보다 빈크리스틴 설페이트를 염 형태로서 더 잘 유지시킬 수 있다. 이들 실험들에서, 외부 pH는 내부 pH를 약 4.0으로 유지하면서 (상기에 기술된 암모니아/암모늄 평형의 결과로서) 5.5부터 8까지 범위로 변화되었다. 몰 농도 또는 완충액 능력은 250 및 350 mM AS 사이 범위에서 변화되었고, 전반적인 삼투압에 기여하는 등장성 성분들은 폴리올들 및 이온성 염들을 사용하여 변화되었다. 모든 실험들에서, 리포좀들은 필수적으로 SCLI와 동일한 조성물에서 스핑고미엘린 및 콜레스테롤로 구성되었다. 유일한 변화는 시트레이트 완충액의 암모늄 설페이트 완충액으로의 치환이었다.

리포좀 제조 단위 공정들

본 실시예는 스핑고미엘린-콜레스테롤 리포좀 생산에 사용되는 일반적인 방법들을 기술하고 있다.

표적 리포좀 성분 제조 계산들

마르키보 리포좀 막들은 스핑고미엘린 (SM) 및 콜레스테롤 (CH)을 무게 비율 2.5 : 1로 포함하고, 최종 산물 VSLI은 2.37 mg/mL SM을 포함한다.

이들 실험들에서, 비-약물 로딩된 리포좀 변형체들의 표적 농도는 약물 로딩 단계를 위해 용이하게 처리하고 충분히 농축되게 하도록 43 mg/mL SM으로 선택되었다.

리포좀 제조 단위 공정들은 다음과 같다: 70 mL 최종 산물의 표적의 경우:

1. 수화 (리포좀들의 형성).

지질 용해. SM 및 CH 지질 미가공 물질들은 에탄올에 용해된다. 충분한 에탄올이 15.7% (v/v)의 수화된 상에서 최종 농도를 주는 데 사용된다. 상기 실시예에서, 3 g의 SM 및 1.2 g의 CH가 무게 측정되었고, 다함께 혼합되었으며, 13 mL의 200 프루프 에탄올에 용해되었다. 용해는 투명한 에탄올 용액이 획득될 때까지 75℃에서 밀봉된 용기로 에탄올성 지질 혼합물을 가열하여 달성된다.

수용성 수화. 상기 제조된 지질 용액은 수조에서 65℃로 미리 평형화되었던 수용성 상 내로 에탄올성 지질 용액을 신속하게 첨가하여 "수화"된다. 본 실시예에서는, 리포좀 제형물에 의해 피막화될 관심 있는 용질들을 포함하는 70 mL의 수용성 상이 사용되었다. 예를 들면, 350 mM 암모늄 설페이트 또는 관련된 염들. 결과로 얻은 혼합물은 지질들의 완전한 수화를 허용하도록 0.5 내지 1시간 동안 교반하면서 배양된다. 지질들의 에탄올성 용액이 수용성 상과 혼합될 때, 에탄올 용매는 신속하게 희석되어, 지질들을 물로 노출시키며, 이는 불균질한 크기 분포로 리포좀 소포체들을 자발적으로 형성하는 지질들을 가져온다. 수화는 물 분자가 분자들의 친수성 부분들과 완전하게 결합되는 것을 보장한다.

2. 크기 축소.

리포좀들의 형성 이후에, 소포체들은 일정하고 바람직한 입자 반경 (이러한 경우에 약 100 nm)을 가지는 리포좀들 집단을 제작하도록 크기가 정해진다. 이것은 압력 하에서 정해진 공극 크기의 막들을 통하여 단계 1에서 제작된 리포좀 현탁액을 삼출시켜서 달성된다. 삼출은 65℃에서 수행되고, 막 공극들을 통한 리포좀들의 투과는 수화로부터 그대로 남은 에탄올에 의해 용이하게 된다. 이러한 처리의 결과로서, 리포좀들은 사용된 막 공극들의 반경에 대략 맞추어진다. 이들 연구들에서, 100 mL의 전체 부피를 보유할 수 있는 리펙스 익스트루더 (노던 리피드사)가 사용되었고, 리포좀 현탁액은 100 내지 400 psi의 압력의 질소 기체를 사용하는공극 크기 0.2 μm (세 번 통과) 및 0.08 μm (다섯 번 통과)의 25 mm 반경의 폴리카보네이트 막들을 통해 (와트만사 뉴클레오포아 트랙-에칭된 막들) 투과되었다. 리포좀 입자 크기는 역동적 광 산란법을 사용하는 ZetaPALS 입자 분석기 (브룩헤이븐 인스트루먼트사)에 의해 측정된다.

3. 외부 완충액 교환.

본 단계에서는 외부 수용성 상 (예로, 350 nM 암모늄 설페이트 용액)이 투석 또는 투과여과에 의해 10% 슈크로스 용액 또는 SPI와 같은 다른 바람직한 완충액으로 교환되고, 동시에 에탄올을 제거한다. 이러한 공정은 리포좀 구배를 확립한다 (예로, 리포좀 내부의 암모늄 설페이트 및 리포좀들의 외부 상의 10% 슈크로스 완충액). 암모늄 설페이트은 수용성 배지에서 암모늄 및 설페이트 이온들로 높게 해리된다. 하전된 이온들로서, 그들은 리포좀 막을 교차하지 않지만, 암모늄 이온들은 물 및 암모니아와 역시 평형을 이루고, 이는 중성 기체로서 리포좀 막을 교차할 수 있다. 암모니아 분자가 리포좀 내부를 벗어나지 않을 때, 양성자가 남게 되고, 리포좀 막 내부의 pH를 약 4까지 낮춘다. 이것은 리포좀 내부가 약 pH 4이고 외부가 교환 완충액의 pH (예로, pH 7.4)가 되는 △pH 구배를 확립한다. 이러한 구배는 빈크리스틴을 리포좀들 내로 로딩하는 데 사용된다. 투과여과 프로토콜은 (산물 부피들 > 50 mL의 경우) QuixStand 투과 여과 시스템에 부착된 MidGee 카트리지 (모델 UFP-300-E-3MA, 300,000 MWCO) (GE 헬스케어 라이프 사이언스사)를 사용하는 완충액의 15배 부피 교환들이다. 투석은 (산물 부피들 < 50 mL의 경우) 리포좀 현탁액을 MWCO 6-8000을 가진 스펙트럼 스펙트라포아 분자 공극성 막에 올리는 것으로 구성되고, 이를 실온에서 20배 초과 부피의 완충액으로 현탁시키면서, 외부 완충액은 한 번의 밤샘 교환을 포함하여 하루 동안 네 번 교환된다. 외부 완충액의 교환 이후에, 각각의 투과여과-후 제조물의 SM 함량이 스튜어트 인지질 콜린 검정법을 사용하여 측정되었다.

4. 약물 로딩.

약물 로딩은 원하는 전체 부피를 달성하도록 VSLI 처방된 약물-대-지질 비율을 사용하여 수행된다. VSLI 로딩 혼합물은 0.16 mg/mL 빈크리스틴, 2.37 mg/mL SM을 목표로 하고 (리포좀 제조물로서), 원하는 실험적 변형체에 사용되도록 외부 리포좀 완충액으로 원하는 전체 부피가 조절된다. 로딩은 외부 완충액, 약물 및 리포좀 용액 (실온으로 미리 평형화됨)을 혼합하고, 혼합물을 가만히 혼합시키면서 수조에서 65℃로 10분 동안 배양하여 수행된다. 다음으로 혼합물은 수조로부터 제거되어 실온으로 식혀지며, 2 내지 8℃에서 보관된다.

5. 무균 여과 및 바이알 충전.

약물이 로딩된 대용량 현탁액은 보관에 적합한 바이알들 내로 여과와 같은 통상적인 리포좀 무균화 기법들에 의해 무균화될 수 있다. 방부제/무균 기법은 전체 과정을 통하여 사용되고, 작업들은 Nunair 클래스 Ⅱ 타입 A/B3 생물학적 안전성 캐비넷에서 수행된다. 대용량 산물은 실온에서 루어 피팅을 가진 무균의 10 mL 주사기를 사용하여 무균의 25 mm 반경, 0.2 μm 공극-크기 아크로디스크® 주사기 필터 슈포어® 막 (Pall Corp.)을 통해 여과된다. 대용량은 무균 수용 용기들 내에 10 mL 정량들로 여과된다.

리포좀 변형체 제조물들은 내부 리포좀 완충액으로서 다양한 몰 농도들의 AS를 포집하여 만들어졌다. 리포좀들은 상기에 기술된 공정들을 사용하여 제조되었다. 리포좀들은 43 mg/mL SM 및 SM/CH 무게 비율 2.5 : 1에서 최종 수화 부피 70 mL을 위해 두 벌로 무게 측정된 스핑고미엘린 (SM) 및 콜레스테롤 (CH)으로 제조되었다. 지질 혼합물들은 75℃에서 9.5 mL 에탄올에 용해되었고, 에탄올성 지질 용액을 미리 가열된 65℃ AS 용액 내에 첨가하여 30분 동안 혼합하고 12% v/v의 최종 에탄올 농도를 생산하여 수화되었다. 이에 따라 형성된 리포좀들은 공극 크기 0.2 μm (세 번 통과) 및 0.08 μm (다섯 번 통과)의 25 mm 반경의 폴리카보네이트 막들을 통한 리펙스 익스트루더 (노던 리피드사)로의 연속적인 삼출에 의해 크기가 결정되었다. 삼출 이후에 각각의 제조물은 MidGee 카트리지 (모델 UFP-300-E-3MA, 300,000 MWCO) 및 QuixStand 홀더 (GE 헬스케어 라이프 사이언스사)에서 15배 부피 교환들을 사용하여 10% 슈크로스 용액 내로 (동시에 임의의 에탄올을 제거하면서) 투과여과되었다. 각각의 투과여과-후 제조물의 SM 함량은 스튜어트 인지질 콜린 검정법을 사용하여 측정되었다.

상기에 제조된 리포좀들을 사용한 소규모 테스트 약물 로딩들은 pH 5.5, 6.5 또는 7.5로 조절된 SPI 완충액 또는 포스페이트-완충 슈크로스를 pH 5.5, 6.5 또는 7.5에서 사용하여 수행되었다. 5% 이하의 자유 빈크리스틴이 로딩된 변형체들이 규모 증가를 위해 선택되었고, 이는 pH 6.5, 7.5에서 SPI 완충액 및 pH 6.5에서 포스페이트-완충 슈크로스이었다. 대규모 로딩들이 이전에 기술된 조제 방법에 따라 각각의 AS 변형체 및 완충액을 위해 수행되었다. 결과로 얻은 약물 피막화된 리포좀 혼합물들은 무균 여과되었으며, 2 내지 8℃에서 0, 2, 4, 8, 12주 및 실온에서 2, 4주에 안정성에 대해 모니터링되었다.

상기 실험적 섹션에 기술된 소규모 암모늄 설페이트 탐구적 실험들은 AS 변형체들의 피막화 효율을 조사하였다. 이들 결과들은 평형 조건들 하에서 대략 4.0의 내부 리포좀 pH를 유도하는 완충액 내부의 암모늄 설페이트가 외부 완충액 pH가 6.5 이상일 때 폴리올을 사용하지 않고도 빈크리스틴을 가장 잘 로딩할 수 있는 점을 제시한다. pH 5.5의 외부 완충액을 사용하는 모든 변형체들은 90% 이하를 로딩하였고, 외관상으로 불충분한 막통과 △pH 구배를 제공한다. PBS 완충액 변형체들은 모두 적어도 95%의 약물을 로딩하였던 한편, 슈크로스를 사용하였던 변형체들은 혼합된 결과들을 가졌으며, 89 내지 95%의 더 넓은 범위의 피막화를 보여준다. 250 mM 및 350 mM 완충 능력 변형체들 둘 다는 pH 및 폴리올 변화들과 유사한 피막화 경향성들을 보여주었다. ≥ 95% 로딩을 보여주었던 모든 변형체들은 규모가 증가되었고, 안정성에 대해 평가되었다.

규모가 증가된 암모늄 설페이트 리포좀들의 24주 안정성 결과들은 표 3에 요약되어 있다. 모든 변형체들은 바람직한 VSLI 입자 크기 및 삼투압 판정기준을 유지하였다. 자유 빈크리스틴의 pH 및 백분율도 역시 안정성 모니터링 기간 동안 일정하게 유지되었다. 암모늄 설페이트 완충액은 스핑고미엘린 콜레스테롤 리포좀의 투과도 특징들을 변경하지는 않았다. 3개 바이알 마르키보 제형물을 능가하는 개선된 안정성이 외부 PBS 완충액 pH 7.5으로 250 mM 및 350 mM 암모늄 설페이트의 제형물들을 사용하여 관찰되었다. 이들 변형체들의 경우, 분해율들은 냉장된 온도에서 매달 0.2%의 NFV으로 확인되었다. 이러한 비율은 약 일 년이 되는 제형물의 보관 기관을 전망할 수 있다. 추가적으로 전체 불순물들만은 NFV%의 임의의 증가와 비례적으로 증가하였다. 전반적인 전체 불순물들은 6% 이하의 VSLI 판정기준 미만으로 수준들을 잘 유지하였다.

pH 6.5의 외부 완충액을 가지거나 완충액이 폴리올 등장제 예로 슈크로스를 포함하였던 암모늄 설페이트 리포좀들은 pH 7.5 변형체들과 비교하여 열등한 안정성 비율들로 귀착된다. 이들 변형체들의 분해율들은 냉장된 온도에서 1.5 내지 1.8 NFV 백분율/개월의 범위를 가졌다 (표 3); 현재의 3개-바이알 시트레이트 기초 키트 제형물의 VSI 성분과 유사한 비율들 (표 2). 250 mM 및 350 mM 변형체들 둘 다는 pH 및 삼투압 제제 변화들과 동일한 경향성들을 보여주었다. 추가적으로, 안정성이 실온에서 모니터링되었던 모든 경우들에서 빈크리스틴 분해가 관찰되었다. 냉장된 시료들만이 암모늄 설페이트 제형물들로 적합한 안정성 특징들을 제공하였다.

250 mM 및 350 mM 암모늄 설페이트 빈크리스틴 리포좀 SPI pH 7.5 제형물들은 시판되는 즉석 제형물에 적합한 예비적인 보관 기간 요구사항들을 나타내어, 심화 평가를 위해 선택되었다. 하기 표 3은 4℃에서 암모늄 설페이트 리포좀 제형물 변형체의 안정성의 요약을 나타낸다.

실시예 3: 이가 이온들 및 폴리올들로의 암모늄 설페이트 VCR 리포좀 피막화 및 안정성

일련의 실험들이 이가 이온들 또는 폴리올들을 포함하는 VSLI이 피막화된 빈크리스틴을 증진시키는지 여부를 조사하도록 시행되었다.

리포좀 변형체 제조물들은 마르키보 산물과 동일한 조성을 가지고, 200 mM 알모늄 설페이트를 200 mM 마그네슘 설페이트 또는 200 mM 망간 설페이트 둘 중 하나로; 200 mM 소듐 시트레이트를 200 mM 마그네슘 설페이트 또는 200 mM 망간 설페이트 둘 중 하나로 피막화하여 만들어졌다. 각각의 이들 제조물들은 10% 슈크로스 내로 투과여과되었으며, 이전에 기술된 바와 같이 지질 농도가 검정되었다. 또한, 리포좀들은 250 mM 암모늄 설페이트를 리포좀에 5% 만니톨 - 20 mM PB pH 7.4, SPI pH 7.4 및 SPI pH 7.0으로 포집하여 제조되었다. 약물 로딩은 각각의 변형체의 경우 10분 (표준 조건) 또는 30분 65℃ 둘 중 하나에서 10분 동안 배양하여 시도되었다.

소규모 탐구적 실험들의 결과들은 표 4에 나타나 있다. 약물-로딩 결과들은 Mg²⁺ 또는 Mn² ⁺가 리포좀의 내부 완충액에 포함되고 65℃에서 10분 (표준 조건) 또는 30분 동안 배양되었을 때, 표준 3개-바이알 키트 조제와 비교하여 덜 효율적인 로딩을 보여주었다. 6 내지 8%의 최고의 로딩 비율들은 20% 자유 약물을 보여주었던 시트레이트-Mg 변형체를 제외하고는, 10분 동안 배양들와 함께 관찰되었다. 이가 금속 이온들의 존재는 pH 구배 평형의 파괴 또는 막 투과성의 붕괴 둘 중 하나를 유발하는 것으로 보인다. 하기 표 4는 금속 이온을 포함하는 시료들의 약물 로딩을 나타낸다.

시료	10분 로딩, 자유 약물 %	30분 로딩, 자유 약물%
마르키보 (대조군, 2mL)	1	2
AS/Mg2+	6	52
AS/Mn2+	7	55
Cit/Mg2+	21	80
Cit/Mn2+	8	54

로딩 이후에 6% 자유 약물을 보여주었던 암모늄 설페이트 MgSO₄변형체는 규모가 증가되었고 안정성에 대해 모니터링되었다. 규모 증가 시, 본 제형물 변형체는 이가 이온의 존재 시 이전에 관찰된 약한 리포좀 로딩 효율을 재확인하였고, 38% 자유 약물이 조제 이후에 관찰되었다 (표 5). 이러한 혼합된 구배 변형체는 외부 자유 빈크리스틴을 제거하도록 재투석에 의해 더 처리되었다. 투석-후 변형체는 다음으로 안정성에 대하여 모니터링되었다. 모니터링하는 5주 동안 자유 약물 수준들은 일정하게 유지되었고, 리포좀으로부터 약물의 추가 유출이 전혀 일어나지 않은 것으로 확인되었다. 그러나, NFV로의 신속한 분해 및 VCR의 손실이 관찰되었고; 5주에서 12.2% NFV의 결과를 가져왔다. 이것은 250 mM AS SPI pH 7.4 리포좀 제형물보다 62배 신속한 것이었다 (표 5). 이들 결과들은 이가 설페이트를 포함하는 VSLI가 피막화된 빈크리스틴의 개선된 안정성을 제공하지 않는 점을 나타내었다.

만니톨을 가진 AS 제형물은 0.14% NFV/개월에서 비-폴리올을 포함하는 제형물과 비교한 바와 같이 0.17% NFV/개월의 분해율을 보여주었다 (표 5). 그러나 그의 단지 93.4% 빈크리스틴의 피막화는 폴리올이 없는 이들 제형물들과 같이 덜 효율적이었다. 하기 표 5는 20주에서 추가적인 AS 변형체들을 위한 VSLI의 안정성을 나타낸다.

AS 변형체	pH	안정성 온도 ℃	안정성 시간, 주	자유 약물 %	전체 약물 %	NFV %	NFV %/Mo
250 mM AS/MgSO4	7.4	4	5	38.1*		22.4	14.4
250 mM AS/만니톨-PB	7.39	4	20	6.92	95.36	2.88	0.17
250 mM AS/API	7.39	4	20	2.85	95.32	3.44	0.27
250 mM AS/SPI	7.01	4	20	2.03	93.85	4.97	0.55

* 초기 약한 로딩 이후에, 변형체는 자유 VSI를 제거하도록 투석되었고, T = 0는 2.81% NF를 가졌다.

구현예들

구현예 1.

첫 번째 수용성 완충액을 포함하는 연속적 수용성 상, 상기 첫 번째 수용성 상 내에 분산된 리포좀 상 및 상기 리포좀 상 내에 적재물로서 피막화된 안정화 수용성 용액을 포함하는, 즉석 빈크리스틴 조성물로서, 상기 안정화 수용성 용액은 두 번째 수용성 완충액 및 이에 용해된 안정화된 빈크리스틴을 포함하고; 상기 두 번째 수용성 완충액은 리포좀 상 밖으로 운반하고 안정화 수용성 용액에서 양전하를 가지는 용질 또는 하이드로늄 이온을 남길 수 있는 적어도 하나의 용질을 가지는 염을 포함하고, 상기 양전하를 가지는 용질 또는 하이드로늄 이온은 빈크리스틴을 안정화시키며; 상기 연속적 수용성 상 및 상기 안정화 수용성 용액은 적어도 2의 pH 단위들의 pH 차이를 가지는, 조성물.

구현예 2.

첫 번째 수용성 완충액을 포함하는 연속적 수용성 상 내에 리포좀 상을 분산시키는 단계를 포함하는, 빈크리스틴을 리포좀으로 안정화시키는 방법으로서, 상기 리포좀 상은 리포좀 상 내에 피막화된 안정화 수용성 용액을 포함하고; 상기 안정화 수용성 용액은 두 번째 수용성 완충액 및 이에 용해된 안정화된 빈크리스틴을 포함하고; 상기 두 번째 수용성 완충액은 리포좀 상 밖으로 운반하고 안정화 수용성 용액에서 양전하를 가지는 용질 또는 하이드로늄 이온을 남길 수 있는 적어도 하나의 용질을 가지는 염을 포함하고, 상기 양전하를 가지는 용질 또는 하이드로늄 이온은 빈크리스틴을 안정화시키며; 상기 연속적 수용성 상 및 상기 안정화 수용성 용액은 적어도 2의 pH 단위들의 pH 차이를 가지는, 방법.

구현예 3.

구현예 1 또는 2의 조성물 또는 방법으로서, 상기 두 번째 수용성 완충액은 암모늄 염을 포함하는, 조성물 또는 방법.

구현예 4.

구현예 1, 2 또는 3의 조성물 또는 방법으로서, 상기 첫 번째 수용성 완충액은 포스페이트 완충액 용액을 포함하는, 조성물 또는 방법.

구현예 5.

구현예 1, 2, 3 또는 4의 조성물 또는 방법으로서, 상기 리포좀 상은 스핑고미엘린-콜레스테롤 리포좀을 포함하는, 조성물 또는 방법.

구현예 6.

구현예 1, 2, 3, 4 또는 5의 조성물 또는 방법으로서, 상기 두 번째 수용성 완충액은 암모늄 설페이트를 포함하는, 조성물 또는 방법.

구현예 7.

구현예 1, 2, 3, 4, 5 또는 6의 조성물 또는 방법으로서, 빈크리스틴은 빈크리스틴 설페이트를 포함하는, 조성물 또는 방법.

구현예 8.

구현예 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7의 조성물 또는 방법으로서, 상기 안정화 수용성 용액의 pH는 약 3부터 약 5까지의 범위인, 조성물 또는 방법.

구현예 9.

구현예 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8의 조성물 또는 방법으로서, 상기 연속적 수용성 상의 pH는 약 5부터 약 8까지의 범위인, 조성물 또는 방법.

구현예 10.

구현예 9의 조성물 또는 방법으로서, 상기 연속적 수용성 상의 pH는 약 7부터 약 8.8까지의 범위인, 조성물 또는 방법.

구현예 11.

구현예 10의 조성물 또는 방법으로서, 상기 연속적 수용성 상의 pH는 약 7.5부터 약 8.8까지의 범위인, 조성물 또는 방법.

구현예 12.

구현예 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 11의 조성물 또는 방법으로서, 상기 리포좀은 가수분해 저항성을 가지는, 조성물 또는 방법.

구현예 13.

구현예 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12의 조성물 또는 방법으로서, 빈크리스틴은 상기 연속적 수용성 상에서보다 상기 안정화 수용성 용액에서 더 안정한, 조성물 또는 방법.

구현예 14.

구현예 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13의 조성물 또는 방법으로서, 상기 연속적 수용성 상 및 상기 안정화 수용성 용액의 비율은 상기 두 상들의 혼합이 pH 약 6.6부터 약 8.8까지의 범위를 가진 조합된 수용성 상을 가져오는 것인, 조성물 또는 방법.

구현예 15.

구현예 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 또는 14의 조성물 또는 방법으로서, 상기 암모늄 염은 상기 두 번째 수용성 완충액에 약 150 mM 내지 약 350 mM 범위의 농도로 존재하는, 조성물 또는 방법.

구현예 16.

구현예 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15의 조성물 또는 방법으로서, 상기 암모늄 염은 암모늄 설페이트인, 조성물 또는 방법.

구현예 17.

구현예 1, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16의 조성물의 치료량의 필요로 하는 포유동물에게로 투여 단계를 포함하는, 상기 포유동물에서 암을 치료하는 방법.

구현예 18.

상기 암은 림프종, 백혈병 또는 골수종인, 구현예 17의 방법.

구현예 19.

구현예 1, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16의 조성물을 포유동물에게로 투여 단계를 포함하는, 상기 포유동물에서 암의 재발을 치료하는 방법.

구현예 20.

상기 암의 재발은 림프종, 백혈병 또는 골수종인, 구현예 19의 방법.

구현예 21.

상기 포유동물은 이전에 적어도 하나의 다중-제제 조합 요법을 거쳤던, 구현예 17, 18, 19 또는 20의 방법.

구현예 22.

적어도 하나의 다른 화학요법 제제와 공동-투여 단계를 더 포함하는, 구현예 17, 18, 19, 20 또는 21의 방법.

구현예 23.

상기 포유동물은 인간인, 구현예 17, 18, 19, 20, 21 또는 22의 방법.

구현예 24.

빈크리스틴을 암모늄 염 완충액과 혼합하는 단계를 포함하는 탈포르밀화에 대항하여 빈크리스틴을 보호하는 방법.

구현예 25.

빈크리스틴이 약 1.5 mg/m²부터 약 2.5 mg/m²까지 범위의 용량으로 투여되는, 구현예 23의 방법.

달리 표시되지 않는 경우라면, 본 명세서 및 청구항들에서 사용되는 성분들의 정량들, 분자량, 반응 조건들 등과 같은 성질을 표현하는 모든 수들은 모든 경우에 용어 "약"에 의해 변형되는 것으로서 이해되어야 한다. 이에 따라, 정반대로 표시되지 않는 경우라면, 본 명세서에서 및 첨부된 청구항들에서 제시된 수적 매개변수들은 본 발명의 구현예들에 의해 획득하도록 추구하는 원하는 성질들에 의존하여 변화할 수 있는 근사치들이다. 동등물들의 원리의 출원을 청구항들의 범위로 제한하려는 시도로서 가장 적고 또한 전혀 아닌, 각각의 수적 매개변수는 적어도 보고된 유의한 아라비아 숫자들의 수에 비추어 주변의 일반 기법들을 적용하여 고려되어야 한다. 본 발명의 광범위한 범주를 제시하는 수적 범위들 및 매개변수들이 근사치들임에도 불구하고, 상세한 실시예들에서 제시된 수적인 수치들은 가능한 명확하게 기록된다. 그러나, 임의의 수적 수치는 본질적으로 개별적인 테스트 측정들에서 관찰되는 표준 편차로부터 반드시 유발되는 소정의 오차들을 포함한다. 한 가지 구현예에서, 용어들 "약" 및 "대략"은 표시된 범위의 10% 이내의 수적 매개변수들을 말한다.

본 발명의 구현예들을 기술하는 맥락에 사용되는 용어들 "하나 (a)", "하나 (an)", "그 (the)" 및 유사한 대상물들은 달리 본 명세서에서 표시되지 않거나 문맥에 의해 명백하게 반박되지 않는 경우라면, 단수 및 복수 둘 다를 포괄하는 것으로 고려되어야 한다. 본 명세서에서 수치들의 범위들의 재인용은 범위 내에 속하는 각각의 분리된 수치를 개별적으로 언급하는 속기 방법이 되도록 단순하게 의도된다. 달리 본 명세서에서 표시되지 않는 경우라면, 각각의 개별적인 수치는 이것이 본 명세서에서 개별적으로 인용된 것처럼 본 명세서 내에 통합된다. 본 명세서에 기술된 모든 방법들은 달리 본 명세서에서 표시되지 않거나 문맥에 의해 명백하게 반박되지 않는 경우라면, 임의의 적합한 순서로 수행될 수 있다. 본 명세서에서 제공된 임의의 및 모든 실시예들 또는 예시적인 언어 (예로, "와 같은")의 사용은 본 발명의 구현예들을 더욱 잘 도시하도록 단순하게 의도되고, 본 발명의 범주에 관한 제한이 되지 않는다. 본 명세서에서의 언어는 본 발명의 구현예들의 실행에 필수적인 임의의 청구되지 않은 요소를 표시하는 것으로서 고려되지 않아야 한다.

본 명세서에서 개시된 대안의 요소들 또는 구현예들의 그룹화는 제한들로서 고려되지 않아야 한다. 각각의 그룹 구성원은 개별적으로 또는 그룹의 다른 구성원들 또는 본 명세서에서 확인되는 다른 요소들과 임의의 조합으로 언급되고 청구될 수 있다. 그룹의 하나 이상의 구성원들이 편의성 및/또는 특허가능성의 이유들로 그룹에 포함되거나 이로부터 배제될 수 있는 것으로 기대된다. 임의의 이러한 포함 또는 배제가 일어날 때, 본 명세서는 변형된 그룹을 포함하는 것으로 간주되고, 이에 따라 첨부된 청구항들에 사용된 모든 마르쿠쉬 그룹들의 기록된 상세한 설명을 충족시킨다.

본 발명자에게 알려져 있는 본 발명의 구현예들을 수행하는 최상의 방식을 포함하는 소정의 구현예들이 본 명세서에 기술된다. 물론, 이들 기술된 구현예들에 관한 변형들은 당업자들에게라면 전술된 상세한 설명을 읽을 때 자명해질 것이다. 본 발명자는 당업자들이 이러한 적당한 변화들을 채용할 것으로 예상하고, 본 발명자는 본 발명의 구현예들이 본 명세서에서 특정하게 기술된 것과 달리 실행되는 것을 의도한다. 따라서, 본 발명은 적용가능한 법에 의해 허용되는 바와 같이 본 명세서에 첨부된 청구항들에 재인용된 주제 문제의 변형들 및 동등물들 모두를 포함한다. 또한, 그의 모든 가능한 변화들에서 상기-기술된 요소들의 임의의 조합은 달리 본 명세서에서 표시되지 않거나 문맥에 의해 명백하게 반박되지 않는 경우라면 본 발명에 의해 포괄된다.

본 명세서에 개시된 상세한 구현예들은 언어로 구성되거나 언어로 필수적으로 구성되는 것을 사용하여 청구항들에서 더 제한되지 않을 것이다. 보정서마다 제출되거나 첨부되는 바와 상관없이 청구항들에 사용될 때, 과도기 용어 "로 구성되는"은 청구항들에 특정되지 않은 임의의 요소, 단계 또는 성분을 배제한다. 과도기 용어 "로 필수적으로 구성되는"은 청구항의 범주를 특정된 물질들 또는 단계들 그리고 기본적 및 새로운 특징(들)에 물질적으로 영향을 주지 않는 것들에 제한시키지 않는다. 이와 같이 청구된 본 발명의 구현예들은 본 명세서에서 고유하게 또는 명백하게 기술되고 가능해진다.

또한, 본 발명 전체를 통하여 임의의 참고문헌들이 특허들 및 인쇄된 출판물들로 언급되었던 경우라면, 이들 참고문헌들 및 인쇄된 출판물들 각각은 본 명세서에서 그들의 전부가 개별적으로 참고문헌으로 통합된다.

마지막으로, 본 명세서에서 개시된 구현예들은 본 발명의 원리들을 설명하는 것으로 이해되어야 한다. 채용될 수 있는 다른 변형들이 본 발명의 범주에 속한다. 이에 따라, 예로서 이에 제한되는 것은 아니지만, 본 발명의 구현예들의 대안의 형태들이 본 명세서에서의 제시안들에 따라 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명은 관찰되거나 기술된 바와 같이 명확하게 제한되지 않는다.

Claims

첫 번째 수용성 완충액을 포함하는 연속적 수용성 상, 상기 첫 번째 수용성 완충액 내에 분산된 리포좀 상 및 상기 리포좀 상 내에 적재물(cargo)로서 피막화된 안정화 수용성 용액을 포함하는, 즉석 빈크리스틴 조성물로서,
상기 리포좀 상은 스핑고미엘린-콜레스테롤 리포좀을 포함하고,
상기 안정화 수용성 용액은 두 번째 수용성 완충액 및 이에 용해된 안정화된 빈크리스틴을 포함하며, 상기 두 번째 수용성 완충액은 암모늄 설페이트를 포함하고;
상기 두 번째 수용성 완충액은, 리포좀 상 밖으로 운반하고 안정화 수용성 용액에서 양전하를 가지는 용질 또는 하이드로늄 이온을 남길 수 있는 적어도 하나의 용질을 가지는 염을 포함하고, 상기 양전하를 가지는 용질 또는 하이드로늄 이온은 빈크리스틴을 안정화시키며;
상기 연속적 수용성 상 및 상기 안정화 수용성 용액은 적어도 2의 pH 단위들의 pH 차이를 가지고,
상기 연속적 수용성 상의 pH가 7부터 9까지의 범위인, 즉석 빈크리스틴 조성물.
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제1항에 있어서, 상기 첫 번째 수용성 완충액은 포스페이트 완충액 용액을 포함하는, 조성물.
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제1항에 있어서, 빈크리스틴은 빈크리스틴 설페이트를 포함하는, 조성물.
제1항에 있어서, 상기 연속적 수용성 상의 pH는 7부터 8.8까지의 범위인, 조성물.
제1항에 있어서, 상기 연속적 수용성 상의 pH는 7.5부터 8.8까지의 범위인, 조성물.
제1항에 있어서, 상기 안정화 수용성 용액의 pH는 3부터 5까지의 범위인, 조성물.
제1항에 있어서, 상기 빈크리스틴은 설페이트 염 형태인, 조성물.
제1항에 있어서, 상기 리포좀은 가수분해 저항성을 가지는, 조성물.
제1항에 있어서, 상기 빈크리스틴은 상기 연속적 수용성 상에서보다 상기 안정화 수용성 용액에서 더 안정한, 조성물.
제1항에 있어서, 상기 연속적 수용성 상 및 상기 안정화 수용성 용액의 비율은 상기 두 상들의 혼합이 6부터 8.8까지의 범위의 pH를 가진 조합된 수용성 상을 가져오는 것인, 조성물.
제1항에 있어서, 상기 암모늄 설페이트는 150 mM 내지 350 mM 범위의 농도로 존재하는, 조성물.
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제1항에 있어서, 포유동물에서 암을 치료하기 위해 사용되는, 조성물.
제16항에 있어서, 상기 암은 림프종, 백혈병 또는 골수종인, 조성물.
제16항 또는 제17항에 있어서, 빈크리스틴은 1.5 mg/m²부터 2.5 mg/m²까지 범위의 용량으로 투여되는, 조성물.
제1항의 조성물을 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 포유동물에서 암의 재발을 치료하기 위한 조성물.
제19항에 있어서, 상기 암의 재발은 림프종, 백혈병 또는 골수종인, 조성물.
제19항 또는 제20항에 있어서, 상기 포유동물은 이전에 적어도 하나의 다중-제제 조합 요법을 거쳤던, 조성물.
제19항 또는 제20항에 있어서, 상기 리포좀 내에 피막화된 빈크리스틴은 적어도 하나의 추가적인 화학요법 제제와 공동-투여되는, 조성물.
제16항 또는 제19항에 있어서, 상기 포유동물은 인간인, 조성물.
첫 번째 수용성 완충액을 포함하는 연속적 수용성 상 내에 리포좀 상을 분산시키는 단계를 포함하는, 빈크리스틴을 리포좀 내에서 안정화시키는 방법으로서,
상기 리포좀 상은 리포좀 상 내에 피막화된 안정화 수용성 용액을 포함하며, 상기 리포좀 상은 스핑고미엘린-콜레스테롤 리포좀을 포함하고;
상기 안정화 수용성 용액은 두 번째 수용성 완충액 및 이에 용해된 안정화된 빈크리스틴을 포함하며, 상기 두 번째 수용성 완충액은 암모늄 설페이트를 포함하고;
상기 두 번째 수용성 완충액은, 리포좀 상 밖으로 운반하고 안정화 수용성 용액에서 양전하를 가지는 용질 또는 하이드로늄 이온을 남길 수 있는 적어도 하나의 용질을 가지는 염을 포함하고, 상기 양전하를 가지는 용질 또는 하이드로늄 이온은 빈크리스틴을 안정화시키며;
상기 연속적 수용성 상 및 상기 안정화 수용성 용액은 적어도 2의 pH 단위들의 pH 차이를 가지고,
상기 연속적 수용성 상의 pH가 7부터 9까지의 범위인, 안정화 방법.
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제24항에 있어서, 상기 첫 번째 수용성 완충액은 포스페이트 완충액 용액을 포함하는, 안정화 방법.
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제24항에 있어서, 빈크리스틴은 빈크리스틴 설페이트를 포함하는, 안정화 방법.
제24항에 있어서, 상기 연속적 수용성 상의 pH는 7부터 8.8까지의 범위인, 안정화 방법.
제24항에 있어서, 상기 연속적 수용성 상의 pH는 7.5부터 8.8까지의 범위인, 안정화 방법.
제24항에 있어서, 상기 안정화 수용성 용액의 pH는 3부터 5까지의 범위인, 안정화 방법.
제24항에 있어서, 상기 빈크리스틴은 설페이트 염 형태인, 안정화 방법.
제24항에 있어서, 상기 리포좀은 가수분해 저항성을 가지는, 안정화 방법.
제24항에 있어서, 상기 빈크리스틴은 상기 연속적 수용성 상에서보다 상기 안정화 수용성 용액에서 더 안정한, 안정화 방법.
제24항에 있어서, 상기 연속적 수용성 상 및 상기 안정화 수용성 용액의 비율은 상기 두 상들의 혼합이 6부터 8.8까지의 범위의 pH를 가진 조합된 수용성 상을 가져오는 것인, 안정화 방법.
제24항에 있어서, 상기 암모늄 설페이트는 상기 두 번째 수용성 완충액에 150 mM 내지 350 mM 범위의 농도로 존재하는, 안정화 방법.
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