KR101910628B1

KR101910628B1 - 수용화도가 향상된 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말의 제조방법 및 이를 포함하는 항암제 조성물

Info

Publication number: KR101910628B1
Application number: KR1020180016365A
Authority: KR
Inventors: 박상재
Original assignee: (주)메디언스
Priority date: 2018-02-09
Filing date: 2018-02-09
Publication date: 2018-10-24
Also published as: WO2019156307A1

Abstract

본 발명은 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말의 제조방법 및 이를 포함하는 항암제 조성물에 관한 것으로, 본 발명은 참옻나무 추출분말로부터 나노 피세틴 추출 시 또는 추출 후 증점제를 첨가함으로써, 수상에서의 분산능이 현저히 향상되고, 체내 흡수율이 뛰어난 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말을 제조할 수 있다.

Description

수용화도가 향상된 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말의 제조방법 및 이를 포함하는 항암제 조성물 {Method for producing an extract of rhus verniciflua stokes containing a high concentration of nano sized fisetin with enhanced water solubility and anti-cancer drug composition thereof}

본 발명은 증점제를 사용하여 수상에서 분산능을 현저하게 향상시킨 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말의 제조방법 및 이를 포함하는 항암제 조성물에 관한 것이다.

옻나무는 예로부터 알러지를 초래하므로 다양한 생리활성이 있음에도 불구하고 그 사용에 제한을 받아왔다. 많은 사람들은 옻나무의 알러지를 유발하는 성분을 우루시올로 규명하였으며, 이를 제거하기 위한 다양한 방법을 연구하여 왔다. 그 중에는 열처리를 하는 방법, 용매로 추출하고 저온처리하는 방법, 산소를 이용하여 처리하는 방법 등이 있다.

지금까지 옻나무와 관련된 기술 및 용도로는, 알러지를 제거하는 기술과 관련된 방법, 알러지 유발물질로 알려진 우루시올의 약리효능에 관한 약리적 방법, 알러지를 제거한 옻나무 추출물의 분리 및 정제에 관한 방법이 대부분이라 할 수 있다.

한국, 일본, 중국 등지에서 자생하는 참옻나무의 학명은 Rhus verniciflua STOKES이다. 옻은 알러지 유발 물질로 알려진 우루시올을 함유하고 있어 잎, 진액 등과 접촉에 의하여 심각한 알러지를 유발하는 경우가 많다. 따라서, 식용 및 사용에 신중을 기해야 한다.

한편, 옻나무는 식품 및 의약품의 소재로 사용 가능하나, 옻나무에 함유된 유용성분의 흡수율이 매우 저조하다는 점이 문제로 지적되어 왔다. 따라서, 옻나무 추출물의 유용성분의 흡수를 높이기 위한 방법의 개발이 필요한 시점이다.

대한민국 등록특허 제10-1794769호(등록일자 2017.11.01)는 옻나무 추출물로부터 유래하는 성분을 함유하는 고상 세정 조성물의 제조방법을 기재하고 있다. 대한민국 공개특허 제10-1794769호(등록일자 2016.06.01)는 옻나무 추출물을 유효성분으로 하는 운동능력 증강용 식품 조성물을 기재하고 있다.

본 발명은 수상에서의 분산능이 현저히 향상되고, 체내 흡수율이 뛰어난 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말을 제조하는 방법 및 이렇게 제조한 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말을 포함하는 항암제 조성물을 개발하여 제공하고자 한다.

본 발명은 본 발명의 제1형태로, 참옻나무에 물 또는 유기용매를 가하여 추출하는 단계 (a); 상기 단계 (a) 후, 여과하여 불용성 물질을 제거하고 추출액을 회수하는 단계 (b); 상기 단계 (b) 후, 추출액을 냉각하고, 농축, 건조하여 건조분말을 회수하는 단계 (c); 상기 단계 (c) 후, 건조분말에 유기용매를 가하여 추출하는 단계 (d); 상기 단계 (d) 후, 여과하여 불용성 물질을 제거하고 유기용매 추출액을 회수하는 단계 (e); 상기 단계 (e) 후, 증점제 함유 용액에 상기 유기용매 추출액을 첨가하여 나노 상태의 피세틴을 침전시키는 단계 (f); 상기 단계 (f) 후, 건조하는 단계 (g); 를 포함하는 것을 특징으로 하는 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말의 제조방법을 제공한다.

본 발명 제1형태에 있어서, 상기 단계 (a)의 참옻나무는, 바람직하게 참옻나무를 세절한 후, 건조시킨 것을 사용하는 것이 좋다.

본 발명 제1형태에 있어서, 상기 단계 (a)의 유기용매는, 바람직하게 주정, 희석 주정, 에탄올, 메탄올, 아세톤 중 선택되는 어느 하나를 사용하는 것이 좋다.

본 발명 제1형태법에 있어서, 상기 단계 (a)의 물 또는 유기용매는, 바람직하게 산 또는 알칼리가 첨가되어 있는 것이 좋다.

본 발명 제1형태에 있어서, 상기 단계 (a)의 추출은, 바람직하게 물 또는 유기용매의 증기압보다 낮은 온도로 3~7시간 동안 수행하는 것이 좋다.

본 발명 제1형태에 있어서, 상기 단계 (d)의 유기용매는, 바람직하게 에탄올, 메탄올 또는 이들의 희석액 중 선택되는 어느 하나를 사용하는 것이 좋다. 이때, 상기 에탄올은, 더욱 바람직하게 70~100% 에탄올인 것이 좋다.

본 발명 제1형태에 있어서, 상기 증점제 함유 용액은, 바람직하게 증점제가 0.001~0.5%(w/v)의 농도로 함유되어 있는 것이 좋다.

본 발명 제1형태에 있어서, 상기 증점제는, 바람직하게 아라비안검, 잔탄검, 구아검, 커들란, 알긴산, 덱스트린, 전분, 폴리감마글루탐산 및 카복시메틸셀룰로오스 중 선택되는 어느 하나인 것을 사용하는 것이 좋다.

본 발명 제1형태에 있어서, 상기 단계 (f)는, 바람직하게 증점제 함유 용액 1L 당 유기용매 추출액 0.1~0.2L의 비율로, 유기용매 추출액을 증점제 함유 용액에 첨가하는 것이 좋다.

한편, 본 발명은 제2형태로, 참옻나무에 증점제를 넣고, 물 또는 유기용매를 가한 후, 추출하는 단계 (가); 상기 단계 (가) 후, 여과하고, 농축하는 단계 (나); 상기 단계 (나) 후, 냉각하여 나노 상태의 피세틴을 제조하는 단계 (다); 상기 단계 (다) 후, 건조하는 단계 (라); 를 포함하는 것을 특징으로 하는 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말의 제조방법을 제공한다.

본 발명 제2형태에 있어서, 상기 물 또는 유기용매는, 바람직하게 참옻나무 무게의 7~10배 무게만큼 첨가되는 것이 좋다.

본 발명 제2형태에 있어서, 상기 유기용매는, 바람직하게 주정, 희석 주정, 에탄올, 메탄올, 아세톤 중 선택되는 어느 하나를 사용하는 것이 좋다.

본 발명 제2형태에 있어서, 상기 증점제는 바람직하게 아라비안검, 잔탄검, 구아검, 커들란, 알긴산, 덱스트린, 전분, 폴리감마글루탐산 및 카복시메틸셀룰로오스 중 선택되는 어느 하나를 사용하는 것이 좋다.

본 발명 제2형태에 있어서, 상기 증점제는, 바람직하게 0.001~0.40%(w/v) 만큼 물에 첨가되는 것이 좋다.

본 발명 제2형태에 있어서, 상기 단계 (가)의 추출은, 물 또는 유기용매의 증기압보다 낮은 온도로 3~7시간 동안 수행하는 것이 좋다.

한편, 본 발명은 상기 본 발명 제1형태 또는 제2형태의 방법으로 제조한 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말을 포함하는 것을 특징으로 하는 항암제 조성물을 제공한다.

본 발명은 참옻나무 추출분말로부터 나노 피세틴 추출 시 또는 추출 후 증점제를 첨가하는 것을 특징으로 하는데, 수상에서의 분산능이 현저히 향상되고, 체내 흡수율이 뛰어난 나노 피세틴을 제조할 수 있다.

도 1은 본 발명 나노 피세틴 분말의 입자크기별 분포도를 나타낸 그래프이다.

참옻나무 추출물은 참옻나무(Rhus verniciflua STOKES)를 크기 1cm 이하가 되게 세절하여 분쇄하고 이를 건조하여 수분의 함량을 10% 이하가 되게 한 다음, 여기에 물 또는 유기용매를 가하여 추출할 수 있다. 이때, 유기용매는 일 예로 물, 주정, 희석주정, 메탄올, 에탄올, 아세톤 등을 사용할 수 있다. 물 또는 유기용매를 첨가하여 추출을 수행하면, 참옻나무로부터 플라보노이드 성분을 최대한 추출할 수 있다.이때, 상기 추출 용매는 피세틴의 추출을 위한 것으로 바람직하게 물 또는 유기용매에 산 또는 알칼리를 추가할 수도 있다. 이를 통해 플라보노이드 성분의 추출 수율을 높일 수 있다.

한편, 추출은 사용하는 용매의 증기압 이하의 온도에 진행하는 것이 좋으며, 바람직하게 물의 경우, 95~100℃가 좋다. 이러한 조건은 피세틴의 추출을 위한 것이다. 다만, 온도가 증기압 보다 낮아질 경우 추출 수율이 낮아지는 것이지, 추출이 완전히 불가능한 것은 아니다. 추출시간은 통상 3~7시간 정도가 좋으며 추출시간을 길게 하는 것은 경제성 측면에서 불리하며 고온에서 장시간 내용물이 방치되는 것은 주요물질의 안정성에도 좋지 않은 영향을 주기 때문이다. 추출이 완료되면 추출액을 회수하기 위하여 필터 등을 사용하여 여과하는데, 이를 통해 불용성 물질을 제거하고 추출액을 회수할 수 있다.

한편, 회수한 추출액을 냉각하면, 피세틴과 같은 플라보노이드가 용해도 저하로 침전되면서 혼탁한 추출액이 된다. 이후, 이를 농축하고 건조하면 참옻나무 추출물을 얻을 수 있다. 이후, 플라보노이드 성분의 함량을 증가시키기 위하여 상기에서 얻어진 참옻나무 추출물을 유기용매(가장 좋게는 에탄올-더욱 바람직하게 70~100% 에탄올-, 메탄올 또는 그들의 희석액)로 재추출하여 불용성물질을 제거하고 유기용매 추출액을 회수한다. 그 후, 잔탄검, 아라비아검, 카복시메틸셀룰로오스, 폴리감마글루탐산, 알긴산, 구아검, 덱스트린, 전분, 커들란 등으로 구성되는 다당류(바람직하게 0.001~5%(w/v) 함유)를 함유하는 용액(바람직하게 수용액)에, 상기에서 제조한 유기용매 추출액을 천천히 떨어뜨려 피세틴을 침전시킨다. 이때, 바람직하게는 상기 증점제 함유 용액 1L 당 유기용매 추출액 0.1~0.2L의 비율로, 유기용매 추출액을 증점제 함유 용액에 첨가하는 것이 좋다.

상기와 같이 유기용매 추출액을 증점액(다당류를 함유하는 용액)에 떨어뜨릴 경우, 피세틴 결정이 수용액에서 형성된 후, 추가적으로 성장하지 못하여, 나노 형태의 피세틴 결정으로 머무르게 된다. 이를 통해 본 발명의 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말을 제조할 수 있게 된다.

본 발명에서 사용한 다당류는 수용성이면서 동시에 점도를 올리는 점증효과를 가지고 있어, 유기용매에 용해된 피세틴이 점성의 수용액에서 침전으로 형성될 때 이들 고분자 다당류로 인하여 추가적인 결정의 성장이 억제되고 결정핵 단계의 나노입자의 크기로 유지가 되는 것이다.

상기의 과정을 통해 제조한 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말 용액을 농축하여 유기용매를 제거하고 이를 동결건조, 진공건조, 분무건조 등의 건조 방법에 의하여 물을 완전히 제거하면 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말을 최종 제조할 수 있다. 최종적으로 건조된 분말은 참옻나무 추출물과 다당류가 혼합되어 있는 것으로 참옻나무 추출물 1에 대하여 무게비로 다당류 0.1~25의 비로 구성될 수 있으며, 이를 피세틴으로 환산하면 피세틴 1에 대하여 무게비로 다당류 0.3~25의 비로 구성되는 조성물의 제조가 가능하다.

본 발명의 제2형태는, 본 발명의 제1형태와 그 구성이 약간 상이하다. 상기 본 발명의 제1형태는 우선 피세틴 함유 추출물을 수득하고, 이를 증점제를 함유하는 용액에 떨어뜨려 나노 피세틴을 제조하는 구성을 취하고 있음에 반해, 본 발명의 제2형태는 피세틴 함유 추출물을 제조할 때, 추출용매로 사용하는 물 또는 유기용매에 증점제를 넣고 추출하는 것을 특징으로 한다.

좀 더 구체적으로 설명하자면, 참옻나무 분말에 물 또는 유기용매를 가하고 동시에 증점제를 가하여 점도액을 만들고 가온하여 추출을 진행하는 것이다. 이 과정에서 피세틴은 추출되어 용해된 상태로 있게 되며, 증점제로 인하여 결정의 성장은 억제되게 된다. 추출 후 여과하고 농축한 후, 냉각하면 첨가된 증점제로 인하여 추출액 중의 피세틴의 결정 성장이 억제되어 나노상태의 입자로 머물게 된다. 이 농축액을 건조하여, 최종적으로 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말을 얻을 수 있었다. 얻어진 참옻나무 추출분말 중 피세틴의 입도는 45~700nm의 범위에 있으며 이는 온도, 시간, 첨가량, 다당류의 종류 및 함량 등에 의하여 영향을 받는 것으로 나타났다.

본 발명의 제2형태에서 사용되는 물 또는 유기용매는 참옻나무 무게의 7~10배 무게만큼 첨가되는 것이 좋다. 유기용매는, 주정, 희석 주정, 에탄올, 메탄올, 아세톤 중 선택되는 어느 하나를 사용할 수 있다. 또한, 용액의 점도를 높이기 위해 사용하는 증점제는 바람직하게 다당체를 사용할 수 있는데, 일 예로는 아라비안검, 잔탄검, 구아검, 커들란, 알긴산, 덱스트린, 전분, 폴리감마글루탐산 및 카복시메틸셀룰로오스 중 선택되는 어느 하나를 사용할 수 있다. 이때, 상기 증점제는, 바람직하게 0.01~0.40%(w/v) 만큼 물에 첨가되는 것이 좋다. 상기 단계 (가)의 추출은, 바람직하게 물 또는 유기용매의 증기압보다 낮은 온도로 3~7시간 동안 수행하는 것이 좋다.

상기와 같이 본 발명의 제1형태 또는 제2형태에 의해 제조된 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말은 물에 가용화시킬 경우 투명한 상태를 유지하며 추가적으로 피세틴의 결정이 성장하는 것이 억제된다. 따라서, 이를 경구로 섭취할 경우 체내에서의 피세틴의 흡수율이 획기적으로 향상되게 되어 뛰어난 생리활성을 얻을 수 있게 된다.

또한, 본 발명에서 제조한 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말은 물에 용해하여 다당류 성분을 용해시킨 후 원심분리하여 제거하고 이를 다시 부형제로서 당류, 레시틴, 셀룰로오스 등 통상적으로 식품 및 의약품의 제조에서 사용하는 것들과의 액상으로 혼합하거나 분말상으로 혼합하여 나노 피세틴을 함유하는 다양한 제형의 조성물로도 제조가 가능하다.

한편, 본 발명은 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말을 포함하는 것을 특징으로 하는 항암제 조성물을 제공한다. 상기 '포함하는'이란 본 발명의 항암제 조성물에 있어서, 항암제로서의 효능이 '나노 피세틴'에 의해 발휘될 수 있는 정도의 양을 첨가하는 것을 의미한다.

본 발명의 항암 조성물은, 유효성분 이외에 약제학적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 더욱 포함할 수 있으며, 사용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자이리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유가 있으며, 이들은 1종 이상 사용될 수 있다.

또한, 항암제 조성물이 약제인 경우 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 또는 방부제 등이 있다.

한편, 본 발명의 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말을 유효성분으로 포함하는 항암 조성물은, 식품, 식품첨가제, 음료, 또는 음료첨가제 등으로 사용될 수 있는데, 그 예로는 육류, 음료수, 초콜렛, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류, 알코올 음료, 비타민 복합제, 주류 및 그 밖의 건강보조식품류 등이 있으나, 반드시 이에 한정되는 것은 아니다.

한편, 항암 조성물의 제형은 사용방법에 따라 바람직한 형태일 수 있으며, 특히 포유동물에 투여된 후, 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 채택하여 제형화하는 것이 좋다.

구체적인 제형의 예로는 경고제(PLASTERS), 과립제(GRANULES), 로션제(LPTIONS), 리니멘트제(LINIMENTS), 리모나데제(LEMONADES), 방향수제(AROMATIC WATERS), 산제(POWDERS), 시럽제(SYRUPS), 안연고제(OPHTALMIC OINTMENTS), 액제(LIQUIDS AND SOLUTIONS), 에어로솔제(AEROSOLS), 엑스제(EXTRACTS), 엘릭실제(ELIXIRS), 연고제(OINTMENTS), 유동엑스제(FLUIDEXTRACTS), 유제(EMULSIONS), 현탁제(SUSPESIONS), 전제(DECOCTIONS), 침제(INFUSIONS), 점안제(OPHTHALMIC SOLUTIONS), 정제(TABLETS), 좌제(SUPPOSITIORIES), 주사제(INJECTIONS), 주정제(SPIRITS), 카타플라스마제(CATAPLSMA), 캅셀제(CAPSULES), 크림제(CREAMS), 트로키제(TROCHES), 틴크제(TINCTURES), 파스타제(PASTES), 환제(PILLS), 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀, 코팅정제, 산제, 과립제 및 캡슐제 중 선택되는 어느 하나의 형태로 제형화 할 수 있다.

코팅정제를 제조하는 경우, 주성분인 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말에 탈크, 히드록시프로필 메틸셀룰로오스, 폴리에틸렌글리콜을 첨가하여 공지의 방법으로 혼합 타정하거나, 또는 상기 주성분인 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말에 유당, 스네아린산 마그네슘, 콜로이드성 이산화규소, 히드록시프로필 메틸셀룰로오스, 폴리에틸렌글리콜, 산화티탄을 공지의 방법으로 혼합 타정할 수 있다.

산제로 제조하는 경우, 상기 주성분인 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말에 백당, 유당, 미결정 셀룰로오스를 첨가하여 공지의 방법으로 제조하거나, 또는 상기 주성분에 만니톨, 옥수수전분, 콜로이드성 이산화규소를 첨가하여 공지의 방법으로 제조할 수 있다.

과립제로 제조하는 경우, 상기 주성분인 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말에 백당과 옥수수전분을 첨가하여 공지의 방법으로 제조하거나, 또는 상기 주성분에 만니톨, 유당, 포비돈, 콜로이드성 이산화규소를 첨가하여 공지의 방법으로 제조할 수 있다.

캡슐제로 제조하는 경우, 상기 주성분인 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말에 미결정셀룰로오스, 옥수수전분, 히드록시프로필 셀룰로오스, 스테아린산 마그네슘을 첨가하여 공지의 방법으로 제조하거나, 또는 상기 주성분에 유당, 포비돈, 콜로이드성 이산화규소, 탈크, 스테아린산 마그네슘을 첨가하여 공지의 방법으로 제조할 수 있다.

본 발명에 따른 항암 조성물의 투여량은, 투여방법, 복용자의 연령, 성별 및 체중, 및 질환의 중증도 등을 고려하여 결정하는 것이 좋다. 일례로, 본 발명의 항암 조성물은 유효성분을 기준으로 하였을 때 1일 0.1 내지 100 ㎎/㎏(체중)으로 1회 이상 투여가능하다. 그러나, 상기 투여량은 예시하기 위한 일 예에 불과하며 상기 범위에 한정되진 않으며, 이와 같은 복용량은 환자의 중증 정도 및 환자의 상태를 고려하여 전문의가 조절할 수도 있다.

이하, 본 발명에 대해 하기 실시예에서 더욱 상세히 설명하고자 한다. 다만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에만 한정되는 것은 아니고, 이와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 모두 포함한다.

[ 실시예 1: 참옻나무 추출분말의 제조]

국내 경동시장에서 구입한 국내산 참옻나무 2kg을 크기 1cm 이하가 되게 세절하였다. 이후, 수분함량이 5.3%(w/w)가 되도록 건조하여 참옻나무 분말을 수득하였다.

그 다음, 상기에서 제조된 참옻나무 분말 중 500g을 취하여 추출용매로 물 4L를 가하고 95℃에서 5시간 동안 추출하였다. 이후, 여과하여 불용성 물질을 제거하고, 추출액을 얻었다. 그 후, 추출액을 진공농축한 다음 동결건조하여 33g의 참옻나무 추출분말을 얻었다.

[실시예 2: 참옻나무 추출분말을 용매로 추출한 뒤, 증점제를 첨가하여 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말 제조]

상기 실시예 1에서 수득한 참옻나무 추출분말 10g을 취하여 85%(v/v) 에탄올 100ml에 용해시켰다. 이후, 불용성 물질을 여과하여 제거하고, 102ml의 참옻나무 에탄올 추출액을 얻었다.

0.25%(w/v) 수용액상으로 준비한 다당류 아라비안검(arabian gum) 500ml에, 임펠러(Impeller)를 돌리면서 상기 참옻나무 에탄올추출액 100ml을 천천히 가하여 주었다. 이 과정에서 피세틴은 나노입자 상태의 침전으로 형성되었다. 최종적으로 600ml의 나노 피세틴이 포함된 참옻나무 에탄올 추출액을 300ml로 진공농축한 다음, 이를 동결건조하여 11.8g의 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말을 얻었다.

[실시예 3: 참옻나무 추출분말 추출 시 증점제를 첨가하여 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말 제조]

참옻나무 500g에 물 4L를 가하고 동시에 증점제로서 잔탄검을 10g을 가하여 0.25%(w/v)의 점도액을 만들고 가온하여 실시예 1과 동일하게 추출을 진행하였다. 이 과정에서 피세틴은 추출되어 용해된 상태로 있게 되며, 증점제로 인하여 결정의 성장은 억제되게 된다. 추출 후 여과하고 농축하여 냉각하게 되면 첨가된 증점제로 인하여 추출액 중의 피세틴은 결정 성장이 억제되어 나노상태의 입자로 머물게 된다. 이 농축액을 동결건조하여 최종적으로 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말로서 42.3g을 얻을 수 있었다.

피세틴 결정의 입도를 조사하기 위하여 상기의 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말 1g을 물에 용해하여 다당류를 용해시키고 불용성인 피세틴의 입도를 입도분석기로 측정한 결과 도 1에 나타낸 바와 같이 평균 115nm의 크기임을 알 수 있었다. 한편, 얻어진 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말에서 피세틴의 함량을 통상의 HPLC 방법으로 분석한 결과 7.1%(w/w)이었고 피세틴 : 다당류의 비는 약 1:14로 나타났다.

[ 제형예 : 나노 피세틴 농축액 제조]

상기 실시예 3에서 얻어진 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말 5g을 취하여 물 30ml에 용해시키고, 이를 원심분리하여 수용성의 다당류를 제거하였다. 그 다음, 남은 용액에 섭취의 편의를 위한 부형제로 고형분 62Bx의 올리고당용액을 3ml 가하고, 충분히 혼합하여 올리고당에 분산시킨 나노 피세틴 농축액을 얻었다. 상기 제조된 농축액은 경구섭취가 매우 용이하고, 매우 뛰어난 생리활성 효과를 발휘한다.

[ 실험예 1: 항암활성 측정]

본 실험예에서는 상기에서 제조한 본 발명의 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말의 항암활성을 비교하기 위하여 암세포를 이용한 성장억제효과를 검증하였다. 즉, 상기 실시예 1을 통해 제조한 참옻나무 분말 및 실시예 2 내지 3을 통해 제조한 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말의 항암활성을 비교 측정하였다.

사용한 암세포로는 인체 폐암세포주인 A-549, 인체 대장암세포주 HT-29, 간암세포주 Hep G2, 인체 위암세포주 AGS이었다. 이들을 대상으로 암세포 성장을 억제하는 효과를 MTT(30[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl tetrazolium bromide) assay법으로 확인하였다. 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

인체 유래 암세포의 성장 억제 효과 비교 (억제율 %)

암세포주	A-549	HT-29	Hep G2	AGS
미처치군	0	0	0	0
실시예 1	34	27	39	45
실시예 2	77	82	75	69
실시예 3	88	83	89	91

실험결과, 본 발명의 실시예 3(나노 피세틴 추출 시 증점제 첨가)을 통해 제조한 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말이 가장 높은 항암활성을 나타냈고, 그 다음으로 실시예 2(나노 피세틴 추출 후, 증점제 첨가)를 통해 제조한 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말이 높은 항암활성을 나타내었다. 이를 통해, 증점제를 첨가하여 제조한 참옻나무 추출분말(실시예 2 및 3)이 증점제를 첨가하지 않은 실시예 1보다 2배 이상 높은 암세포 성장 억제효과를 보임을 확인할 수 있었다.

[실험예 2: 참옻나무 추출분말의 나노 피세틴 흡수율 비교 측정]

본 실험예에서는 상기 실시예 1의 참옻나무 추출분말 및 실시예 2~3에서 제조한 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말의 피세틴 체내 흡수율을 측정하고자 하였다. 체내 흡수율이 증가한 것은 생리활성의 증대를 의미하는데, 경구투여 후 혈액 중 주요성분의 함량을 분석하여 비교하였다. 마우스는 Balb/C 마우스에 실시예 1 내지 실시예 3의 시료를 각각 100mg/Kg의 양으로 경구투여하고 2시간 후 혈액을 채취하여 주요 성분의 함량을 HPLC로 분석하였다. 그 결과를 하기 표 2에 나타냈다.

주요성분 (Fustin 및 Fisetin)의 혈액 중 함량 상대 비교 (%)

	Fustin	Fisetin
실시예 1	100	100
실시예 2	125	345
실시예 3	133	624

실험결과, 상기 표 2에 나타난 바와 같이, 본 발명 실시예 2(참옻나무 추출 후 증점제 첨가)에서 제조한 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말 및 실시예 3(참옻나무 추출시 증점제 첨가)에서 제조한 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말이 증점제를 첨가하지 않은 실시예 1의 참옻나무 추출분말에 비해 혈중 피세틴의 함량이 높게 나타났다. 특히, 본 발명의 실시예 3(참옻나무 추출시 증점제 첨가)에서 제조한 참옻나무 추출분말이 가장 높은 혈중 피세틴 함량을 보이는 것으로 나타났다. 이를 통해, 증점제를 첨가하여 제조한 참옻나무 추출분말의 나노 피세틴이 체내흡수율이 뛰어나 우수한 생리활성을 나타낼 수 있는 것으로 확인할 수 있었다.

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Claims

참옻나무에 물 또는 유기용매를 가하여 추출하는 단계 (a);
상기 단계 (a) 후, 여과하여 불용성 물질을 제거하고 추출액을 회수하는 단계 (b);
상기 단계 (b) 후, 추출액을 냉각하고, 농축, 건조하여 건조분말을 회수하는 단계 (c);
상기 단계 (c) 후, 건조분말에 유기용매를 가하여 추출하는 단계 (d);
상기 단계 (d) 후, 여과하여 불용성 물질을 제거하고 유기용매 추출액을 회수하는 단계 (e);
상기 단계 (e) 후, 증점제 함유 용액에 상기 유기용매 추출액을 첨가하여 나노 상태의 피세틴을 침전시키는 단계 (f);
상기 단계 (f) 후, 건조하는 단계 (g); 를 포함하는 것을 특징으로 하는 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말의 제조방법.
제1항에 있어서,
상기 증점제 함유 용액은,
증점제가 0.001~0.5%(w/v)의 농도로 함유되어 있는 것을 특징으로 하는 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말의 제조방법.
제1항에 있어서,
상기 증점제는,
아라비안검, 잔탄검, 구아검, 커들란, 알긴산, 덱스트린, 전분, 폴리감마글루탐산 및 카복시메틸셀룰로오스 중 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말의 제조방법.
제1항에 있어서,
상기 단계 (f)는,
증점제 함유 용액 1L 당 유기용매 추출액 0.1~0.2L의 비율로, 유기용매 추출액을 증점제 함유 용액에 첨가하는 것을 특징으로 하는 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말의 제조방법.
참옻나무에 증점제를 넣고, 물 또는 유기용매를 가한 후, 추출하는 단계 (가);
상기 단계 (가) 후, 여과하고, 농축하는 단계 (나);
상기 단계 (나) 후, 냉각하여 나노 상태의 피세틴을 제조하는 단계 (다);
상기 단계 (다) 후, 건조하는 단계 (라); 를 포함하는 것을 특징으로 하는 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말의 제조방법.
제5항에 있어서,
상기 증점제는,
아라비안검, 잔탄검, 구아검, 커들란, 알긴산, 덱스트린, 전분, 폴리감마글루탐산 및 카복시메틸셀룰로오스 중 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말의 제조방법
제5항에 있어서,
상기 증점제는,
0.001~0.40%(w/v) 만큼 물에 첨가되는 것을 특징으로 하는 나노 피세틴을 고농도로 함유하는 참옻나무 추출분말의 제조방법.
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