KR101897005B1 - 진세노사이드 화합물 k를 이용한 숙취해소용 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명에서는 알코올 분해효소의 활성을 증가시키며 에탄올을 처리하여 손상을 유도한 간세포에서 생존율 증가를 나타낼 뿐만 아니라 동물 모델에서 혈중 알코올 농도 저하효과를 나타내는 CK를 유효성분하는 숙취해소용 조성물을 개시한다.
Description
본 발명은 진세노사이드 화합물 K를 이용한 숙취해소용 조성물에 관한 것이다.
에틸알코올의 대사과정을 보면, 에틸알코올이 간세포에서 알코올탈수소화효소(ADH, alcohol dehydrogenase)에 의해 아세트알데히드로 산화되고 이 아세트알데히드는 아세트알데히드 탈수소화효소(ALDH, acetaldehyde dehydrogenase)에 의해 초산으로 전환되어 최종적으로는 탄산가스와 물로 분해되게 된다. 물론 불순물로 소량 포함된 메틸알코올은 같은 효소들에 의해서 포름알데히드를 거쳐서 개미산으로 대사된다.
과도한 음주로 발생한 고농도의 알데히드 물질들은 생체 내 모든 물질의 -NH2 group과 Schiff base를 형성하여 그 기능을 억제함으로써 독성을 나타낸다. 특히 비타민 B1과 B5는 생체 내에 소량으로 존재하기 때문에 Schiff base형성에 의한 에너지대사 저하가 뚜렷하게 나타난다. 이로 인해 기운 없음이 느껴진다.
과음하면 간세포에서는 아세트알데히드가 초산으로 전환되는 에너지대사가 활발해지기 때문에 보통대사 때와는 다르게 과도한 활성산소가 발생한다. 이와 같은 활성산소는 세포자멸(apoptosis)을 촉진하며 간세포막지질의 과산화 원인이 되어 간조직의 손상을 초래한다. 이로 인해 AST(asparate aminotransferase)와 ALT(alanine aminotransferase)의 활성의 혈중에서 높아진다.
알코올은 신경독성이 강한 물질이다. 따라서 과도하게 섭취된 알코올은 신속하게 처리되지 않으면 안 된다. 그런데 과도하게 섭취된 알코올은 간에서 신속하게 모두 처리될 수 없으므로 모든 세포 특히 뇌세포에서 알코올을 대사할 수 있는 효소인 cytochrome P450가 발현되어 알코올을 대사하여 아세트알데히드를 발생시킨다. 이 때 알코올이 ADH(alcohol dehydrogenase)와 ALDH(acetaldehyde dehydrogenase)에 의해 대사될 때보다 훨씬 많은 활성산소가 발생한다. 따라서 전신적인 독성뿐만 아니라 뇌독성에 의한 맥박의 증가, 오심, 구토, 두통 등이 나타난다.
숙취현상이란 과도한 알코올 섭취에 따른 후유증으로서 전신권태, 피로감, 기운 없음, 식욕부진, 발한, 두통, 복부팽만감, 구토 등의 증상이 나타난다.
이러한 숙취 현상을 해소하기 위하여, 대한민국 특허 제403721호, 대한민국 특허 제976241호 등과 같이 천연 추출물 단독 또는 혼합하여 제조한 조성물이 다수 제안되어 있다.
한편 인삼은 중국, 한국, 일본 등의 동아시아 국가에서 약 2천년 전부터 약재나 건강 증진의 보약제로 폭넓게 사용되어 왔는데, 이러한 인삼의 주요 활성 성분은 사포닌(ginsenoside)으로 알려져 있다. 샤포닌은 트리테르페노이드 계열의 담마란(dammarane) 골격에 포도당, 아라비노오스, 자일로오스, 람노오스 등의 당 분자가 2~4개 결합하고 있는 중성 배당체 화합물이다.
일반적으로 자연계에 존재하는 많은 배당체 화합물들은 그 자체보다는 당이 분해되어 비당체가 되었을 때 생리활성이 증가되는 경향을 나타낸다(Med. Pharm. Soc. 1992, 9:1-13). 인삼 사포닌의 경우도 당이 3개 이상 결합된 진세노사이드 Rb1, Rb2, Rd, 및 Re보다 일부의 당이 가수분해되어 생성된 진세노사이드 Rg3, Rh1, Rh2, F2, 화합물 Y 및 화합물 K 등이 생체 내로의 흡수나 생리활성 등의 면에서 훨씬 우수한 효과를 나타내는 것으로 알려져 있다(Ginseng Res. 2003, 27:129-134).
특히 화합물 K(이하 "CK")의 경우 사포닌이 대장내 활성화 세균에 의해서 당분자 하나만 남아있는 상태의 화합물인데, 이것은 장에서 전량 흡수된다. 그런데 식약처 자료에 따르면 한국인 25%는 대장내 활성화 세균이 거의 없다. 따라서 대부분의 천연사포닌은 대변으로 배설된다. 그러나 나머지 75%에서도 활성화 세균이 있다 하더라도 그 양이 크게 다르기 때문에 그 양이 많지 않은 사람들에서는 천연사포닌은 일부만 CK로 전환되어 흡수되고 나머지는 대변으로 배설된다. 그러나 천연사포닌을 미리 발효하여 CK로 전환하고 이를 복용하면 CK는 대장내 활성화 세균 상태와 무관하게 모든 사람에게 전량 흡수될 수 있다.
본 발명은 이러한 CK의 숙취 해소 활성을 개시한다.
본 발명의 목적은 CK를 이용한 숙취해소용 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적이나 구체적인 목적은 이하에서 제시될 것이다.
본 발명은 CK 또는 CK와 헛개나무 추출물의 혼합물이 알코올 분해효소인 ADH 및 ALDH의 활성을 증가시켰으며, 에탄올 처리로 손상을 유도한 간세포에서 생존율 증가를 나타내었을 뿐만 아니라 동물 모델에서 혈중 알코올 농도 저하효과를 나타냄을 확인함으로서 완성된 것이다.
본 발명의 숙취해소용 조성물은 전술한 바에 기초하여 제공되는 것으로 CK를 유효성분으로 포함함을 특징으로 한다.
또 본 명세서에서 "유효성분"이란 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.
또 본 명세서에서, "개선"은 증상의 예방, 경감을 포함하는 의미이다.
본 발명의 조성물에서 그 유효성분은 숙취해소 효과 등을 나타낼 수 있는 한, 용도, 제형 등에 따라 임의의 양(유효량)으로 포함될 수 있는데, 통상적인 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.0001 중량 % 내지 15 중량 % 범위 내에서 결정될 것이다. 여기서 "유효량"이란 적용 대상인 사람에게 본 발명의 조성물이 투여될 때 숙취해소 효과를 나타낼 수 있는, 본 발명의 조성물에 포함되는 유효성분의 양을 말한다. 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될 수 있다.
본 발명의 조성물은 유효성분으로서 CK 이외에 헛개나무 추출물을 추가로 포함할 수 있다.
헛개나무(Hovenia dulcis)는 갈매나무과의 낙엽활엽교목으로 경기, 강원 이남의 표고 50-800m에 분포하고 있으며 호깨나무, 허리깨나무, 지구(枳俱), 백석목(白石木), 목밀(木蜜), 현포리(玄圃梨) 등으로도 불린다. 헛개나무 열매의 주요 성분으로는 과당, 설탕, 포도당, 카탈라제, 페록시다제 등의 당분이 13%정도를 차지하고 있으며 그 외 T륨, 칼슘, 철 등의 성분이 미량 함유되어 있다. 헛개나무 열매는 본초학이나 식물도설에서 주독해독, 정혈, 이뇨, 갈증해소, 해독작용을 한다는 보고가 있다.
상기 헛개나무는 뿌리, 줄기, 잎, 종자 및/ 또는 열매가 모두 사용가능하며, 바람직하게는 열매 부위가 사용가능하다.
본 명세서에서 "헛개나무 추출물"이란 추출 대상인 헛개나무를 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜(메탄올, 에탄올, 부탄올 등), 메틸렌클로라이드, 에틸렌, 아세톤, 헥산, 에테르, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, N,N-디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 또는 이들의 혼합 용매를 사용하여 침출하여 얻어진 추출물, 이산화탄소, 펜탄 등 초임계 추출 용매를 사용하여 얻어진 추출물 또는 그 추출물을 분획하여 얻어진 분획물을 의미하며, 추출 방법은 활성물질의 극성, 추출 정도, 보존 정도를 고려하여 냉침, 환류, 가온, 초음파 방사, 초임계 추출 등 임의의 방법을 적용할 수 있다. 분획된 추출물의 경우 추출물을 특정 용매에 현탁시킨 후 극성이 다른 용매와 혼합·정치시켜 얻은 분획물, 상기 조추출물을 실리카겔 등이 충진된 칼럼에 흡착시킨 후 소수성 용매, 친수성 용매 또는 이들의 혼합 용매를 이동상으로 하여 얻은 분획물을 포함하는 의미이다. 또한 상기 추출물의 의미에는 동결건조, 진공건조, 열풍건조, 분무건조 등의 방식으로 추출 용매가 제거된 농축된 액상의 추출물 또는 고형상의 추출물이 포함된다. 바람직하게는 열수추출 방법이 사용될 수 있다.
또한 본 발명의 숙취 해소를 위한 CK와 헛개나무 열매 추출물의 혼합물은 아래의 실험예에서 확인되는 바와 같이 7:3의 중량비로 혼합되는 것이 바람직하다.
본 발명의 조성물은 유효성분 이외에, 숙취해소 효과의 상승·보강을 위하여 또는 간 손상 개선 효과, 체지방 감소, 혈중 콜레스테롤 개선 활성, 혈중 중성지방 개선 활성 등 유사 활성의 부가를 통한 복용이나 섭취의 편리성을 위하여, 당업계에서 이미 안전성이 검증되고 해당 활성이 확인된 임의의 화합물이나 천연 추출물을 추가로 포함할 수 있다.
이러한 화합물 또는 추출물에는 각국 약전(한국에서는 "대한민국약전"), 각국 건강기능식품공전(한국에서는 식약처 고시인 "건강기능식품 기준 및 규격"임), 등의 공정서에 실려 있는 화합물 또는 추출물, 의약품의 제조·판매를 규율하는 각국의 법률(한국에서는 "약사법"임)에 따라 품목 허가를 받은 화합물 또는 추출물, 건강기능식품의 제조·판매를 규율하는 각국 법률(한국에서는 "건강기능식품에관한법률"임)에 따라 개별적으로 기능성을 인정받은 화합물 또는 추출물 등이 포함된다. 예컨대 한국 건강기능식품공전 또는 한국 "건강기능식품에관한법률"에 따른 개별 인정 원료로서, 알코올성 간 손상 보호 활성을 가진 유산균 발효 다시마 추출물 등이나, 간 건강 기능성을 가진 도라지 추출물, 밀크씨슬 추출물, 발효 울금, 복분자 추출물 등이나, 체지방 감소 기능성을 가진 가르시니아 캄보지아 껍질 추출물, 공액 리놀렌산(유리지방산), 공액리놀렌산(트리글리세라이드), 녹차 추출물, 키토산, 그린마떼 추출물, 그린커피빈 추출물, 깻잎 추출물, 대두 배아 추출물 등의 복합물, 돌외잎 주정 추출 분말, 락토페린(우유 정제 단백질), 레몬 밤 추출물 혼합 분말, 마테 열수 추출물 또는 미역 등의 복합 추출물(잔티젠) 등이나, 혈중 콜레스테롤 개선 기능성을 가진 녹차 추출물 또는 스피루리나, 대나무 잎 추출물, 보리 베타글루칸 추출물, 보이차 추출물, 식물 스타놀에스테르, 감태주정추출물, 아마인, 알로에 복합 추출물 또는 알로에 추출물 등이나, 혈중 중성지방 개선 기능성을 가진 DHA 농축 유지, 난소화성 말토덱스트린, 대나무 잎 추출물, 식물성 유지 디글리세라이드, 정제 오징어유, 글로빈 가수분해물 또는 정어리 정제어유, 혈행 개선 기능성을 가진 은행잎 추출물, 나토균 배양 분말, 나토 배양물, 메론 추출물 또는 카카오 분말 또는 홍삼 추출물 등이 그러한 화합물 또는 추출물에 해당할 것이다.
이러한 화합물 또는 추출물은 본 발명의 조성물에 그 유효성분과 함께 하나 이상 포함될 수 있다.
본 발명의 조성물은 구체적인 양태에 있어서 식품 조성물로서 파악할 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 어떠한 형태로도 제조될 수 있으며, 예컨대 차, 쥬스, 탄산음료, 이온음료 등의 음료류, 우유, 요구루트 등의 가공 유류(乳類), 껌류, 떡, 한과, 빵, 과자, 면 등의 식품류, 정제, 캡슐, 환, 과립, 액상, 분말, 편상, 페이스트상, 시럽, 겔, 젤리, 바 등의 건강기능식품 제제류 등으로 제조될 수 있다. 또 본 발명의 식품 조성물은 법률상·기능상의 구분에 있어서 제조·유통 시점의 시행 법규에 부합하는 한 임의의 제품 구분을 띨 수 있다. 예컨대 한국 "건강기능식품에관한법률"에 따른 건강기능식품이거나, 한국 "식품위생법"의 식품공전(식약처 고시 "식품의 기준 및 규격"임)상 각 식품유형에 따른 과자류, 두류, 다류, 음료류, 특수용도식품 등일 수 있다.
본 발명의 식품 조성물에는 그 유효성분 이외에 식품첨가물이 포함될 수 있다. 식품첨가물은 일반적으로 식품을 제조, 가공 또는 보존함에 있어 식품에 첨가되어 혼합되거나 침윤되는 물질로서 이해될 수 있는데, 식품과 함께 매일 그리고 장기간 섭취되므로 그 안전성이 보장되어야 한다. 식품의 제조·유통을 규율하는 각국 법률(한국에서는 "식품위생법"임)에 따른 식품첨가물공전에는 안전성이 보장된 식품첨가물이 성분 면에서 또는 기능 면에서 한정적으로 규정되어 있다. 한국 식품첨가물공전(식약처 고시 "식품첨가물 기준 및 규격")에서는 식품첨가물이 성분 면에서 화학적 합성품, 천연 첨가물 및 혼합 제제류로 구분되어 규정되어 있는데, 이러한 식품첨가물은 기능 면에 있어서는 감미제, 풍미제, 보존제, 유화제, 산미료, 점증제 등으로 구분된다.
감미제는 식품에 적당한 단맛을 부여하기 위하여 사용되는 것으로, 천연의 것이거나 합성된 것 모두 본 발명의 식품 조성물에 사용할 수 있다. 바람직하게는 천연 감미제를 사용하는 경우인데, 천연 감미제로서는 옥수수 시럽 고형물, 꿀, 수크로오스, 프룩토오스, 락토오스, 말토오스 등의 당 감미제를 들 수 있다.
풍미제는 맛이나 향을 좋게 하기 위한 용도로 사용되는 것으로, 천연의 것과 합성된 것 모두 사용될 수 있다. 바람직하게는 천연의 것을 사용하는 경우이다. 천연의 것을 사용할 경우에 풍미 이외에 영양 강화의 목적도 병행할 수 있다. 천연 풍미제로서는 사과, 레몬, 감귤, 포도, 딸기, 복숭아 등에서 얻어진 것이거나 녹차잎, 둥굴레, 대잎, 계피, 국화 잎, 자스민 등에서 얻어진 것일 수 있다. 또 인삼(홍삼), 죽순, 알로에 베라, 은행 등에서 얻어진 것을 사용할 수 있다. 천연 풍미제는 액상의 농축액이나 고형상의 추출물일 수 있다. 경우에 따라서 합성 풍미제가 사용될 수 있는데, 합성 풍미제로서는 에스테르, 알콜, 알데하이드, 테르펜 등이 이용될 수 있다.
보존제로서는 소르브산칼슘, 소르브산나트륨, 소르브산칼륨, 벤조산칼슘, 벤조산나트륨, 벤조산칼륨, EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산) 등이 사용될 수 있고, 또 유화제로서는 아카시아검, 카르복시메틸셀룰로스, 잔탄검, 펙틴 등이 사용될 수 있으며, 산미료로서는 연산, 말산, 푸마르산, 아디프산, 인산, 글루콘산, 타르타르산, 아스코르브산, 아세트산, 인산 등이 사용될 수 있다. 산미료는 맛을 증진시키는 목적 이외에 미생물의 증식을 억제할 목적으로 식품 조성물이 적정 산도로 되도록 첨가될 수 있다. 점증제로서는 현탁화 구현제, 침강제, 겔형성제, 팽화제 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 전술한 바의 식품첨가물 이외에, 기능성과 영양성을 보충·보강할 목적으로 당업계에 공지되고 식품첨가물로서 안정성이 보장된 생리활성 물질이나 미네랄류를 포함할 수 있다.
그러한 생리활성 물질로서는 녹차 등에 포함된 카테킨류, 비타민 B1, 비타민 C, 비타민 E, 비타민 B12 등의 비타민류, 토코페롤, 디벤조일티아민 등을 들 수 있으며, 미네랄류로서는 구연산칼슘 등의 칼슘 제제, 스테아린산마그네슘 등의 마그네슘 제제, 구연산철 등의 철 제제, 염화크롬, 요오드칼륨, 셀레늄, 게르마늄, 바나듐, 아연 등을 들 수 있다.
본 발명의 식품 조성물에는 전술한 바의 식품첨가물이 제품 유형에 따라 그 첨가 목적을 달성할 수 있는 적량으로 포함될 수 있다.
본 발명의 식품 조성물에 포함될 수 있는 기타의 식품첨가물과 관련하여서는 각국 법률에 따른 식품공전이나 식품첨가물공전을 참조할 수 있다.
본 발명의 조성물은 다른 구체적인 양태에 있어서는 약제학적(약품) 조성물로 파악될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하여 당업계에 공지된 통상의 방법으로 투여 경로에 따라 경구용 제형 또는 비경구용 제형으로 제조될 수 있다. 여기서 투여 경로는 국소 경로, 경구 경로, 정맥 내 경로, 근육 내 경로, 및 점막 조직을 통한 직접 흡수를 포함하는 임의의 적절한 경로일 수 있으며, 두 가지 이상의 경로를 조합하여 사용할 수도 있다. 두 가지 이상 경로의 조합의 예는 투여 경로에 따른 두 가지 이상의 제형의 약물이 조합된 경우로서 예컨대 1차로 어느 한 약물은 정맥 내 경로로 투여하고 2차로 다른 약물은 국소 경로로 투여하는 경우이다.
약학적으로 허용되는 담체는 투여 경로나 제형에 따라 당업계에 주지되어 있으며, 구체적으로는 "대한민국약전"을 포함한 각국의 약전을 참조할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물이 경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 분말, 과립, 정제, 환제, 당의정제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 현탁액, 웨이퍼 등의 제형으로 제조될 수 있다. 이때 적합한 담체의 예로서는 락토스, 글루코스, 슈크로스, 덱스트로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨 등의 당류, 옥수수 전분, 감자 전분, 밀 전분 등의 전분류, 셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스 등의 셀룰로오스류, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 마그네슘 스테아레이트, 광물유, 맥아, 젤라틴, 탈크, 폴리올, 식물성유, 에탄올, 그리세롤 등을 들 수 있다. 제제화활 경우 필요에 따라적절한 결합제, 윤활제, 붕해제, 착색제, 희석제 등을 포함시킬 수 있다. 적절한 결합제로서는 전분, 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분페리스트, 젤라틴, 메틸셀룰로스, 소듐 카복시메틸셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 글루코스, 옥수수 감미제, 소듐 알지네이트, 폴리에틸렌 글리콜, 왁스 등을 들 수 있고, 윤활제로서는 올레산나트륨, 스테아르산나트륨, 스테아르산마그네슘, 벤조산나트륨, 초산나트륨, 염화나트륨, 실리카, 탈쿰, 스테아르산, 그것의 마그네슘염과 칼슘염, 폴리데틸렌글리콜 등을 들 수 있으며, 붕해제로서는 전분, 메틸 셀룰로스, 아가(agar), 벤토나이트, 잔탄 검, 전분, 알긴산 또는 그것의 소듐 염 등을 들 수 있다. 또 희석제로서는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 소비톨, 셀룰로스, 글라이신 등을 들 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물이 비경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 주사제, 경피 투여제, 비강 흡입제 및 좌제의 형태로 제제화될 수 있다. 주사제로 제제화할 경우 적합한 담체로서는 수성 등장 용액 또는 현탁액을 사용할 수 있으며, 구체적으로는 트리에탄올 아민이 함유된 PBS(phosphate buffered saline)나 주사용 멸균수, 5% 덱스트로스 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있다. 경피 투여제로 제제화할 경우 연고제, 크림제, 로션제, 겔제, 외용액제, 파스타제, 리니멘트제, 에어롤제 등의 형태로 제제화할 수 있다. 비강 흡입제의 경우 디클로로플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 등의 적합한 추진제를 사용하여 에어로졸 스프레이 형태로 제제화할 수 있으며, 좌제로 제제화할 경우 그 담체로는 위텝솔(witepsol), 트윈(tween) 61, 폴리에틸렌글리콜류, 카카오지, 라우린지, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르류, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트류, 소르비탄 지방산 에스테르류 등을 사용할 수 있다.
약제학적 조성물의 구체적인 제제화와 관련하여서는 당업계에 공지되어 있으며, 예컨대 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences(19th ed., 1995)] 등을 참조할 수 있다. 상기 문헌은 본 명세서의 일부로서 간주 된다.
본 발명의 약제학적 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태, 체중, 성별, 연령, 환자의 중증도, 투여 경로에 따라 1일 0.001mg/kg ~ 10g/kg 범위, 바람직하게는 0.001mg/kg ~ 1g/kg 범위일 수 있다. 투여는 1일 1회 또는 수회로 나누어 이루어질 수 있다. 이러한 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 아니 된다.
전술한 바와 같이, 본 발명에 따르면 CK를 이용한 숙취 해소용 조성물을 제공할 수 있다.
본 발명의 조성물은 식품 또는 약품으로 제품화될 수 있다.
도 1은 ADH 활성을 나타낸 결과이다.
도 2는 ALDH 활성을 나타낸 결과이다.
도 3은 알코올 처리 간세포 생존율을 확인한 결과이다.
도 2는 ALDH 활성을 나타낸 결과이다.
도 3은 알코올 처리 간세포 생존율을 확인한 결과이다.
이하 본 발명을 실시예를 참조하여 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 실시예에 한정되는 것은 아니다.
<실시예> 시료 준비
진세노사이드 화합물 K(CK)는 인삼을 미생물로 발효하여 자체 제조한 것을 분말화하여 실험에 사용하였다.
헛개나무는 건조된 헛개나무 열매를 시중에서 구매하여 사용하였으며 10배 용량의 물을 첨가하여 100℃에서 3시간 동안 열수추출한 후 여과지를 이용하여 불순물을 제거하였으며 감압농축하였다.
상기 획득한 CK와 헛개나무 열매 추출물을 아래의 [표 1]에 나타낸 중량비로 혼합하여 실험에 사용하였다.
시료 | CK | 헛개나무 추출물 |
제조예1 | 10 | - |
제조예2 | 7 | 3 |
제조예3 | 5 | 5 |
제조예4 | 3 | 7 |
제조예5 | - | 10 |
<실험예>
숙취해소 활성 확인
<실험예 1> 알코올 분해효소 활성
알코올은 ADH(alcohol dehydrogenase) 및 ALDH(aldehyde dehydrogenase) 효소 반응을 통하여 아세테이트로 최종 분해된다. 이에 따라 해당 효소 활성 측정을 통하여 본 발명 실시예 조성물의 알코올 분해 활성을 측정할 수 있다.
ADH 활성 어세이 키트(K787-100; Biovision, USA)와 ALDH 활성 어세이 키트(K731-100; Biovision, USA)를 이용하였으며 제조사의 방법에 따라 실험을 수행하였다. 10㎍/ml의 제조예 1 내지 제조예 5의 시료 50ul와 혼합반응시약(developer, substrate,buffer)100 ul를 96 웰 플레이트에 함께 넣고 37℃에서 3분간 반응시킨 후 450 nm의 파장으로 초기 흡광도(A0)를 측정하였다. 이후 37℃에서 30분간 추가로 반응시킨 후 450 nm에서 후기 흡광도(A1)를 측정하였다. 반응 전후의 변화된 흡광도(A1-A0) 값을 표준곡선에 대입하여 NADH양을 측정하였다. 이후 하기의 식에 따라 ADH 활성을 측정하여 무처리 대조군 대비 %로 나타내었다.
ADH/ALDH activity(mU/ml) = NADH(nmol)/반응시간(min)×측정량(ml)
그 결과 [도 1] 및 [도 2]에 나타난 바와 같이 본 발명의 조성물은 대조군에 비하여 높은 ADH 및 ALDH 활성을 나타내었다. 특히 CK와 헛개나무 추출물을 혼합한 제조예 2의 조성물을 사용한 경우 ADH 활성이 약 45% 증가하였으며 ALDH 활성은 57%가량 증가하였다.
<실험예 2> 간세포 보호 활성
간세포에서 CK 및 헛개나무 추출물의 알코올 독성에 대한 보호효과를 측정하기 위하여 간세포주에 알코올과 본 발명의 조성물을 처리한 후 세포 생존율을 확인하였다.
사람 간암세포주인 HepG2를 96웰 플레이트에서 confluent하게 배양한 후, 상기 실시예의 제조예 1 내지 제조예 5의 시료를 1㎍/ml의 농도로 처리하였다. 1시간 후 에탄올 1M을 처리하여 세포손상을 유도한 12시간 후 MTT 방법(MTT assay kit; Cayman#10008883)을 이용하여 세포 생존율을 확인하였으며 그 결과를 [도 3]에 나타내었다. 대조군으로는 실시예의 시료를 첨가하지 않은 군을 사용하였으며 알코올만 처리한 군을 음성 대조군으로 사용하였다.
상기 결과에서 나타나는 바와 같이, CK만을 처리한 군(제조예 1)에서 헛개나무 열매 추출물만을 처리한 군(제조예 5)보다 우수한 간세포 보호 활성을 나타내었으며 CK와 헛개나무를 혼합한 군(제조예 2)에서 가장 우수한 활성을 나타내었다.
<실험예 3>
in vivo
혈중 알코올 농도 저하효과
5주령의 수컷 흰쥐(SD rat)을 코아텍(한국)에서 실험수행 일주일 전 구입하였으며, 온도 24±2°C, 습도 55-60 % 및 자율급여(물 및 사료) 조건에서 사육하였다. 일주일 후 상기 실시예의 제조예 1 내지 5를 1mg/kg의 농도로 경구 투여하였으며 각 그룹당 5마리씩 사용하였다. 이때 대조군으로는 상기 실시예의 시료를 투여하지 않은 흰쥐를 사용하였다. 한시간 후 에탄올(50%, v/v)을 3g/kg으로 경구 투여하였으며 대조군으로는 상기 실시예의 시료를 투여하지 않은 에탄올 투여군을 이용하였다.
에탄올 투여 후 3시간 후에 혈중 알코올 농도를 측정하기 위하여 혈액을 채취하였다. CO2를 이용하여 흰쥐를 안락사 시킨 후 개복하여 간에서 심장으로 이어진 후대정맥의 혈액을 채취하였으며 4℃, 3,000rpm, 10분간 원심분리하였다. 분석을 바로 진행하지 않는 경우 -70℃ 냉동고에 샘플을 보관하였다.
혈중 에탄올 농도는 에탄올 어세이 키트(K620-100; Biovision, USA)를 이용하여 제조사의 방법에 따라 실험을 수행하였으며 570nm 파장에서 결과를 분석하였다. 해당 측정 결과는 하기의 [표 2]에 나타내었다.
시료 | 혈중 알코올 농도(nmol/ul) |
대조군 | 10.3±0.81 |
제조예 1 | 3.5±0.21 |
제조예 2 | 3.2±0.33 |
제조예 3 | 3.8±0.51 |
제조예 4 | 4.0±0.64 |
제조예 5 | 4.2±0.36 |
상기 결과에서 나타난 바와 같이, CK와 헛개나무 추출물이 7:3의 비율로 혼합된 제조예 2의 시료가 가장 혈중 알코올 농도 저하 효과가 높은 것으로 나타났으며 CK 단독 시료(제조예 1)나 헛개나무와 5:5로 혼합한 시료(제조예 3)의 효과도 높은 것으로 나타났다.
<실험예 4> 숙취 해소에 대한 관능평가
자발적으로 참가한 25명의 남성 성인에게 음주 1시간 전 상기 실시예의 조성물 50mg을 캡슐에 충진하여 섭취하도록 한 후 2시간 동안 각각 소주(알콜 함량 17.5%) 3병을 음주하게 하였다. 음주 1시간 후 숙취 정도를 평소에 비하여 5점 척도법(5점: 매우 취함, 4점: 취함, 3점: 보통, 2점: 취하지 않음, 1점: 전혀 취하지 않음)에 따라 측정하도록 하였으며 총 합을 아래의 [표 3]에 기재하였다. 합이 15점 이하일 경우 숙취해소에 효과가 있는 것으로 판단 가능하다.
시료 | 평가점수 |
제조예 1 | 6 |
제조예 2 | 6 |
제조예 3 | 8 |
제조예 4 | 10 |
제조예 5 | 11 |
상기 결과에서 나타나는 바와 같이, 본 발명의 조성물을 섭취한 경우 평소에 비해 모두 숙취해소 효과가 높은 것으로 평가하였으며 특히 CK 만을 섭취한 경우(제조예 1)나 CK와 헛개나무 추출물이 7:3의 비율로 혼합된 경우 효과가 매우 우수하다고 평가하였다.
Claims (5)
- 진세노사이드 화합물 K과 헛개나무 추출물의 혼합물을 유효성분으로 포함하되,
상기 혼합물은 진세노사이드 화합물 K과 헛개나무 추출물이 7:3(진세노사이드 화합물 K : 헛개나무 추출물)의 중량비로 혼합된 것임을 특징으로 하는 숙취해소용 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 헛개나무 추출물은 헛개나무 열매의 물, 에탄올 또는 이들의 혼합용매 추출물인 것을 특징으로 하는 숙취해소용 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 헛개나무 추출물은 헛개나무 열매의 물 추출물인 것을 특징으로 하는 숙취해소용 조성물.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 식품 조성물인 것을 특징으로 하는 숙취해소용 조성물.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 약품 조성물인 것을 특징으로 하는 숙취해소용 조성물.
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