KR101882468B1 - 분리 유산균 발효에 의해 Rg3, Rh1, 컴파운드 K 함량 및 항산화 효능을 증가시킨 산양삼 유산균 발효물의 제조방법 - Google Patents

분리 유산균 발효에 의해 Rg3, Rh1, 컴파운드 K 함량 및 항산화 효능을 증가시킨 산양삼 유산균 발효물의 제조방법 Download PDF

Info

Publication number
KR101882468B1
KR101882468B1 KR1020160069877A KR20160069877A KR101882468B1 KR 101882468 B1 KR101882468 B1 KR 101882468B1 KR 1020160069877 A KR1020160069877 A KR 1020160069877A KR 20160069877 A KR20160069877 A KR 20160069877A KR 101882468 B1 KR101882468 B1 KR 101882468B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
goat
ginseng
fermentation
lactic acid
acid bacteria
Prior art date
Application number
KR1020160069877A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20170137566A (ko
Inventor
김성호
김인호
노인식
Original Assignee
대구대학교 산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 대구대학교 산학협력단 filed Critical 대구대학교 산학협력단
Priority to KR1020160069877A priority Critical patent/KR101882468B1/ko
Publication of KR20170137566A publication Critical patent/KR20170137566A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101882468B1 publication Critical patent/KR101882468B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2250/00—Food ingredients
    • A23V2250/20—Natural extracts
    • A23V2250/21—Plant extracts
    • A23V2250/2124—Ginseng
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2300/00—Processes
    • A23V2300/34—Membrane process
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2300/00—Processes
    • A23V2300/50—Concentrating, enriching or enhancing in functional factors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/31—Leuconostoc
    • A23V2400/321—Mesenteroides
    • A23Y2260/35—

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

본 발명은 산양삼 추출물을 발효에 적합한 조건으로 조성한 다음 본 기술에 유효한 균주로 분리한 유산균 루코노스톡 멘센테로이데스(Leuconostoc mesenteroises) DU-B1604(KCTC 13015BP)를 전배양하여 접종하고 발효시킨 발효물을 조성하여 최적의 조건에서 항산화 효능과 Rg3, Rh1 및 Compound K를 함량이 증강된 기능성 식품으로 활용할 수 있도록 한 항산화 효능 및 특정의 진세노사이드의 증강이 있는 산양삼 유산균 발효물의 제조방법에 관한 것이다.
즉, 본 발명의 분리 유산균 발효에 의해 Rg3, Rh1, 컴파운드 K 함량 및 항산화 효능을 증가시킨 산양삼 발효물의 제조방법은, 산양삼을 분쇄하여 발효주정 70%에서 75℃로 5시간 30분동안 침지한 후 추출한 15 브릭스(brix)의 산양삼 추출물을 회전농축기를 이용하여 50℃의 수조에서 20~50브릭스로 농축하여 산양삼 농축액을 얻는 1단계(S1)와; 상기 1단계(S1)에서 얻은 산양삼 농축액을 증류수의 1~50 부피%로 증류수에 첨가하여 산양삼 조정액을 얻는 제2단계(S2)와; 상기 2단계에서 얻은 산양삼 조정액의 전체부피에 갈락토올리고당(galactooligosaccharide)을 0.1~30 부피%로 첨가하고 pH를 5.0~7.0으로 조정한 후 살균 처리하여 산양삼 조성액을 얻는 제3단계(S3)와; 상기 3단계에서 살균 처리된 산양삼 조성액에 상업용 MRS배지에 전배양한 분리 유산균 루코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) DU-B1604(KCTC 13015BP)을 산양삼 조성액의 0.1~20 부피%로 접종하여 유산균 접종 조성액을 얻는 제4단계(S4)와; 상기 단계에서 얻은 유산균 접종 조성액을 발효온도 20~45℃, 발효시간 6~120시간 동안 발효하여 산양삼 발효물을 얻는 제5단계(S5)로 이루어진다.

Description

분리 유산균 발효에 의해 Rg3, Rh1, 컴파운드 K 함량 및 항산화 효능을 증가시킨 산양삼 유산균 발효물의 제조방법{THE MANUFACTURING METHOD OF KOREAN PANAX GINSENG FERMENTATION SOLUTION HAVING INCREASING OF Rg3, Rh1 AND COMPOUND K CONTENT AND ANTIOXIDANT PROPERTIES BY ISOLATED LACTIC ACID BACTERIA}
본 발명은 분리 유산균 발효에 의해 항산화 효능과 진세노사이드 중 특정의 진세노이드 Rg3, Rh1 및 컴파운드 K (Compound K)의 함량을 증가시킨 산양삼 유산균 발효물의 제조방법에 관한 것으로, 더욱 구체적으로는 산양삼 추출물을 발효에 적합한 조건으로 조성한 다음 본 기술에 유효한 균주로 분리한 유산균 루코노스톡 멘센테로이데스(Leuconostoc mesenteroises) DU-B1604(KCTC 13015BP)를 전배양하여 접종하고 발효시킨 발효물을 조성하여 항산화 효능과 Rg3, Rh1 및 Compound K의 함량을 증가시킨 산양삼 유산균 발효물의 제조방법에 관한 것이다.
일반적으로 산양삼(Korean panax ginseng)은 야생상태에서 자연 발아하여 성장한 천연산삼의 종자나 묘삼을 인위적으로 산삼의 생육환경에 최대한 가깝게, 깊은 산속의 그늘지고 습기가 많은 곳에 뿌려두고 자연환경에 그대로 방치해 두었다가 수년에서 수십 년이 지난 후에야 캐내는 삼을 말하나, 산양삼에 대한 정확한 정의는 명확하지 않은 상태이다. 산양삼은 다른 말로 장뇌삼, 장로, 장뇌산삼이라고도 하며 뿌리의 굵기와 길이, 몸통의 태 존재 유무, 연령에 따른 뇌두의 개수 그리고 토양과 기후조건에 따라 수명이 다르며, 인삼에 비해 향기가 강하다고 한다. 일단 인삼과 산양산삼의 성분 분석 결과에 따르면 진세노사이드 Rh1, Rg3의 경우 인삼에 없으나 산양산삼에는 일부 소량 검출되었으며, 진세노사이드 모든 성분과 비교했을 때 인삼에 비해 산양산삼의 함량이 높은 것으로 분석된 보고가 있다. 이로 인해 산양삼은 시장 경쟁력에 있어 포화상태인 인삼시장에 비해 효능 및 시장성에 있어 뛰어난 고부가가치를 지며, 대체 소재 및 상품성이 있는 것으로 사료되며 이 산양삼을 발효시키면 Rg1, Rb1, Rg3가 크게 증가하여 약리효과가 증가한다고 보고된바 있다. 가격은 인삼에 비해 10배 이상 비싸지만 발효공정을 통해 약리효능을 높임으로써 기존 인삼시장에서 경쟁력이 있을 것으로 예상된다. 산양삼과 천연산삼을 비교해보면, 외관은 천연산삼과 유사하지만 가격은 1/5에서 1/10에 불과하다. 하지만, 약리효능은 천연산삼과 유사하다고 인정받고 있으며, 항암, 혈압강하, 항산화, 간독성, 지질강화 등에 효능이 있는 것으로 알려지고 있지만 아직까지 다양한 분야에서의 연구가 미비한 상황이다.
인삼류에 포함된 사포닌을 진세노사이드(ginsenoside)라고 하며, 비누를 뜻하는 사포나(sapona)에서 유래되었으며 수용액에서 거품을 내서 붙여진 이름이다. 한약방에서 강심제, 이뇨제로 사용되었으며 식물의 뿌리, 줄기, 잎, 껍질 등에 포함되어있고 항암, 항산화 작용으로 다른 식물과는 다른 약리작용을 하고 있으며 특이한 화학구조를 가지고 있어서 화장품, 기능성 식품으로 널리 이용되고 있다. 인삼류에서 진세노사이드, 폴리아세틸렌(polyacetylene), 산성 다당체, 인삼 단백질, 페놀성 물질 등의 성분들이 밝혀졌고 이들 중에서 진세노사이드는 그 화학구조가 명확히 확인되었다. 또한 항당뇨 활성을 비롯하여 항암작용, 항산화작용, 동맥경화 및 고혈압의 예방, 간 기능 촉진 및 숙취제거효과, 항 피로 및 항 스트레스 작용, 노화방지 작용, 두뇌활동 촉진작용, 항염증활성, 알레르기성 질환치료, 단백질합성 촉진 등의 작용이 보고되고 있다. 특히, 수삼을 쪄서 건조한 홍삼에는 열에 의해서 생성되는 홍삼 특유성분인 진세노사이드 Rg2, Rg3, Rh1, Rh2 등이 암 예방작용, 암세포 성장 억제작용, 혈압강하작용, 뇌신경세포 보호작용, 항혈전작용, 항산화작용을 한다고 하여, 홍삼만의 특장점으로 주목받고 있다.
유산균은 인간이 이용할 수 있는 가장 유익한 미생물 중의 한 종류로서, 비병원성균으로 인간의 장내에 서식하면서 정장 및 정균작용을 할 수 있고 당류를 발효해서 다량의 젖산(유산)을 생성하고 낮은 pH 및 혐기적인 조건에서도 잘 생육하며 여러 가지 영양물질을 요구하는 등의 특징을 가지고 있다. 유산균에 의해 채소류가 발효되면 독특한 향과 맛을 내게 되어 관능적 특성이 향상되고, 유기산에 의하여 비타민 C(vitamin C)와 여러 생리활성물질이 잘 보존되며, 초기 재료에는 거의 존재하지 않았던 비타민 B12와 비타민 K가 생합성되어 부패균과 병원성균의 성장과 증식을 저해하여 위생적인 식품이 되는 등의 장점을 가지고 있는 것으로 알려져 있다.
본 발명과 관련된 선행기술로는 대한민국 등록특허 10-1133739호가 공지되어 있으나 이는 백삼 추출물을 산가수분해 열처리함으로써 Rg3 함량이 높은 백삼 추출물의 제조방법과 이로부터 제조된 진세노이드 Rg3 함량이 높은 백삼 추출물에 관한 것이고, 대한민국 등록특허 10-1401658호에 진세노사이드 컴파운드 K 또는 이의 유도체로 된 항균제에 관한 것이 공지되어 있다. 그러나 현재까지 항산화효능과 Rg3, Rh1 및 컴파운드 K의 함량이 증강이 있는 산양삼 유산균 발효물의 제조방법에 대하여는 공지된 바 없다.
본 발명의 목적은 분리 유산균 발효에 의해 Rg3, Rh1, 컴파운드 K 함량 및 항산화 효능을 증가시킨 산양삼 발효물의 제조방법을 제공하는데 있다.
본 발명은 상기 방법에 따라 제조되어 진세노사이드 Rg3, Rh1 및 컴파운드 K 함량 및 항산화 효능을 증가시킨 산양삼 유산균의 발효물과 이 발효물을 유효성분으로 함유하는 건강 기능성 식품 조성물을 제공하는데 있다.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 분리 유산균 발효에 의해 Rg3, Rh1, 컴파운드 K 함량 및 항산화 효능을 증가시킨 산양삼 발효물의 제조방법은, 산양삼을 분쇄하여 발효주정 70%에서 75℃로 5시간 30분동안 침지한 후 추출한 15 브릭스(brix)의 산양삼 추출물을 회전농축기를 이용하여 50℃의 수조에서 20~50브릭스로 농축하여 산양삼 농축액을 얻는 1단계(S1)와; 상기 1단계(S1)에서 얻은 산양삼 농축액을 증류수의 1~50 부피%로 증류수에 첨가하여 산양삼 조정액을 얻는 제2단계(S2)와; 상기 2단계에서 얻은 산양삼 조정액의 전체부피에 갈락토올리고당(galactooligosaccharide)을 0.1~30 부피%로 첨가하고 pH를 5.0~7.0으로 조정한 후 살균 처리하여 산양삼 조성액을 얻는 제3단계(S3)와; 상기 3단계에서 살균 처리된 산양삼 조성액에 상업용 MRS배지에 전배양한 분리 유산균 루코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) DU-B1604(KCTC 13015BP)을 산양삼 조성액의 0.1~20 부피%로 접종하여 유산균 접종 조성액을 얻는 제4단계(S4)와; 상기 단계에서 얻은 유산균 접종 조성액을 발효온도 20~45℃, 발효시간 6~120시간 동안 발효하여 산양삼 발효물을 얻는 제5단계(S5)로 이루어진다.
본 발명은 상기 제5단계(S5)에서 얻은 산양삼 발효물을 살균온도 60~100℃에서 10~60분간 가열 살균 처리한 후 1.0 마이크로 필터 여과기를 통과시켜 여과하는 제6단계(S6)를 더 포함할 수 있다.
삭제
삭제
삭제
본 발명에 따라 제조된 산양삼 유산균 발효물은 항산화 효능과 진세노사이드인 Rg3, Rh1 및 컴파운드 K의 함량이 증강되어 건강 기능성 식품을 제공할 수 있는 뛰어난 효과가 있다.
도1은 본 발명에 따른 항산화 효능 및 특정의 진세노사이드인 Rg3, Rh1 및 컴파운드 K의 함량이 증강된 산양삼의 유산균 발효물 제조방법을 단계별로 나타낸 다이어그램이다.
도2는 본 발명에서 공시재료로 사용한 1차 분리된 유산균들(균주번호 25~29)의 에스큘린 반응사진도이다.
도3은 본 발명에 따른 표준균주와 최종분리균주 L1(붉은색)의 16S rRNA 유전자 시퀸스를 기반으로 하는 계통수(phylogenetic tree)의 근연관계도이다.
도4는 본 발명에서 산양삼농도, 갈락토올리고당 농도 및 시간 조건에 따른 산양삼 발효물의 pH(pH : 3.40 - 3.55 - 3.70)변화에 대한 4차원 반응표면을 보인 그래프이다.
도5는 본 발명에서 산양삼농도, 갈락토올리고당 농도 및 시간 조건에 따른 산양삼 발효물의 산도(acidity : 0.4 - 0.6 - 0.8 %)변화에 대한 4차원 반응표면을 보인 그래프이다.
도6은 본 발명에서 산양삼농도, 갈락토 올리고당 농도 및 시간 조건에 따른 산양삼 발효물의 유산균생균수 (viable cell content : 13.0 - 13.5 - 14.0 Log CFU/mL)변화에 대한 4차원 반응표면을 보인 그래프다.
도7은 본 발명에서 산양삼농도, 갈락토 올리고당 농도 및 시간 조건에 따른 산양삼 발효물의 조사포닌 함량 (crude saponin content : 0.1 - 0.2 - 0.3%)변화에 대한 4차원 반응표면을 보인 그래프이다.
도8은 본 발명에서 산양삼농도, 갈락토 올리고당 농도 및 시간 조건에 따른 산양삼 발효물의 총페놀화합물 함량(total phenolics compound content : 70 - 75 - 80 mg%)변화에 대한 4차원 반응표면을 보인 그래프다.
도9는 본 발명에서 산양삼농도, 갈락토 올리고당 농도 및 시간 조건에 따른 산양삼 발효물의 DPPH 라디칼 소거능(DPPH radical scavenging activity : 55 - 60 - 65%)변화에 대한 4차원 반응표면을 보인 그래프다.
도10은 본 발명에서 산양삼농도, 갈락토 올리고당 농도 및 시간 조건에 따른 산양삼 발효물의 ABTS 라디칼 소거능(ABTS radical scavenging activity : 52 - 55 - 58%) 변화에 대한 4차원 반응표면을 보인 그래프다.
도11은 본 발명에서 산양삼농도, 갈락토 올리고당 농도 및 시간 조건에 따른 산양삼 발효물의 아질산염 소거능(nitrate scavenging activity : 35 - 40 - 45%) 변화에 대한 4차원 반응표면을 보인 그래프다.
도12는 본 발명에서 산양삼농도, 갈락토 올리고당 농도 및 시간 조건에 따른 산양삼 발효물의 총페놀화합물 함량, 총사포닌함량 및 DPPH 라디칼 소거능의 최적조건에 대한 4차원 반응표면의 다중겹침도를 보인 그래프다.
도13은 본 발명에서 산양삼농도, 갈락토 올리고당 농도 및 시간 조건에 따른 산양삼 발효물의 진세노사이드 Rg1 함량(ginsenoside Rg1 content : 3.5 - 4.5 - 5.5 mg%)변화에 대한 4차원 반응표면을 보인 그래프다.
도14는 본 발명에서 산양삼농도, 갈락토 올리고당 농도 및 시간 조건에 따른 산양삼 발효물의 진세노사이드 Rb1 함량(ginsenoside Rb1 content : 16 - 19 - 22 mg%)변화에 대한 4차원 반응표면을 보인 그래프다.
도15는 본 발명에서 산양삼농도, 갈락토 올리고당 농도 및 시간 조건에 따른 산양삼 발효물의 진세노사이드 Rh1 함량(ginsenoside Rh1 content : 2.7 - 3.2 - 3.7 mg%)변화에 대한 4차원 반응표면을 보인 그래프다.
도16은 본 발명 산양삼농도, 갈락토 올리고당 농도 및 시간 조건에 따른 산양삼 발효물의 진세노사이드 Rg3 함량(ginsenoside Rg3 content : 4.0 - 4.5 - 5.0 mg%)변화에 대한 4차원 반응표면을 보인 그래프다.
도17은 본 발명에서 산양삼농도, 갈락토 올리고당 농도 및 시간 조건에 따른 산양삼 발효물의 진세노사이드 컴파운드 K 함량(ginsenoside compound K content : 3 - 5 - 7 mg%)변화에 대한 4차원 반응표면을 보인 그래프다.
도18은 본 발명에서 산양삼농도, 갈락토 올리고당 농도 및 시간 조건에 따른 산양삼 발효물의 진세노사이드 Rh1, 진세노사이드 Rg3와 컴파운드 K 최대함량을 위한 최적조건에 대한 4차원 반응표면의 다중겹침도를 보인 그래프다.
도19는 본 발명에 따른 발효전 배양물의 진세노사이드 크로마토그램이다.
도20은 본 발명에 따른 진세노사이드 함량을 위한 최적발효조건에서 발효한 배양물의 진세노사이드 크로마토그램이다.
이하 본 발명의 바람직한 실시 예를 상세히 설명하면 다음과 같다.
본 발명은 산양삼 추출물에 갈락토올리고당을 첨가하여 조성한 후 살균처리하여 전배양한 분리 유산균 루코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) DU-B1604(KCTC 13015BP)을 접종하여 최적의 발효조건에서 발효시켜 항산화 효능과 특정의 진세노사이드인 Rg3, Rh1 및 컴파운드 K의 함량이 증강된 산양삼 유산균 발효물의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명에 따르면 산양삼을 분쇄하여 특정의 조건(70% 발효주정, 75℃, 5시간 30분)에서 추출한 산양삼 추출물(15 브릭스)을 회전농축기를 이용하여 수조 50℃에서 발효주정을 제거하여 20~50 브릭스로 농축하여 산양삼 농축액을 얻는 1단계(S1)와; 상기 1단계에서 얻은 산양삼 농축액을 증류수의 1~50부피%로 증류수에 첨가하여 산양삼 조정액을 얻는 제2단계(S2)와; 상기 2단계에서 얻은 산양삼 조정액의 전체부피에 갈락토올리고당(galactooligosaccharide)을 0.1~30 부피%를 첨가하고 pH를 5.0~7.0으로 조정한 후 살균 처리하여 산양삼 조성액을 얻는 제3단계와; 상기 3단계에서 살균 처리하여 얻은 산양삼 조성액에 상업용 MRS배지에 전배양한 분리 유산균 루코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) DU-B1604(KCTC 13015BP)을 산양삼 조성액의 0.1~20 부피%로 접종하여 유산균 접종 조성액을 얻는 제4단계와; 상기 4단계에서 유산균 접종 조성액을 발효온도 20~45℃, 발효시간 6~120시간을 발효하여 산양삼 발효물을 얻는 제5단계로 이루어진다.
본 발명은 상기 제5단계에서 얻은 산양삼 발효물을 살균온도 60~100℃에서 10~60분간 가열 살균 처리한 후 1.0 마이크로 필터 여과기를 통과시켜 여과하는 제6단계를 더 포함하는 것을 특징으로 한다.
삭제
삭제
삭제
이하, 본 발명의 구체적인 내용을 실시예와 실험예를 통하여 설명하지만 본 발명의 권리 범위가 여기에 기재된 사항에 제한되는 것은 아니다.
실시예 1.
1) 유산균 분리
유산균 분리에 사용한 발효식품 시료는 가정집 및 음식점에서 담근 김치 수십 종 및 침채류 등을 수집하여 사용하였으며, 각 시료를 멸균증류수로 10-1 ~ 10-5로 희석한 후 0.004% BCP가 첨가된 시판용 MRS 한천배지에 100 μl씩 도말하고, 37℃에서 24시간 배양 후 나타난 독립된 콜로니 중 유산균의 특징적인 콜로니를 순수 분리하였다. 순수 분리한 유산균은 MRS 한천사면배지에 접종하여 37℃에서 24시간 배양한 후 4℃ 냉장보관하면서 사용하였다.
2) 베타글루코시데이스(β-Glucosidase) 활성 균주 선발
베타글루코시데이스 활성을 갖는 균주의 선발을 위해 에스쿨린 한천(esculin 0.1%, peptones 1.8%, ferric citrate 0.1%, agar 2%)법을 이용하여 에스쿨린(esculin)이 함유된 에스쿨린 한천배지에 균주를 접종하여 배지 내에서의 색깔 변화를 관찰하였다(도2). 에스쿨린은 베타글루코시데이스에 의하여 글루코스(glucose)와 에스쿨린으로 분리되며 에스쿨린은 ferric ammonium citrate 와 반응하여 콜로니 주위에 흑색 반점(black complex)를 형성하게 된다. 따라서 에스쿨린 한천배지에서 배양된 콜로니 주위에 흑색 반점를 형성하는 균주를 베타글루코시데이스 활성을 가지는 균주로 판단하여 선별하였다.
Figure 112017129436715-pat00001
… [구조식1]
베타글루코시데이스에 의하여 글루코시와 에스쿨린으로 분리되는 설명도
3) 베타글루코시데이스(β-Glucosidase) 활성능 측정
베타글루코시데이스 활성 측정은 1% 카르복시메칠셀루로스(carboxymethyl cellulose, CMC)가 첨가된 시판용 MRS 배지에 12 시간 전배양한 균주를 접종하여 37℃에서 24 시간 배양 후, 배양액을 4℃에서 3000 rpm으로 15 분간 원심분리하여 세포를 제거하고, 상층액 0.5 ml를 취하여 1 ml의 5 mM ρ-nitrophenyl-β-D-glucopynanoside(ρ-NPG)용액과 혼합한 후 37℃에서 30 분간 반응시켰다. 반응액은 1 ml의 1 M Na2CO3 용액을 첨가하여 반응을 중지시키고, 생성된 p-nitrophenol를 405 nm에서 흡광도를 측정한 후 ρ-NP의 검량곡선을 이용하여 농도를 환산하였다.
4) 최종선별균주의 염기서열분석과 계통분류
최종 선별된 균주의 16S rRNA gene은 시퀀싱(sequencing) 을 통하여 분석하였으며, NCBI 데이터베이스(database)를 이용하여 분리된 균주와 database상의 표준균주(type strain)와의 유사성(similarity, %)을 확인하였다.
실시예 2.
1) 산양삼 추출액을 활용한 발효조건
(1) 산양삼 추출액의 수득
산양삼을 흐르는 물에 세척하고 이물질을 제거한 다음 분쇄기로 골고루 분쇄하여 추출에 사용하였다. 분쇄한 산양삼의 추출은 70% 발효주정에 분쇄한 산양삼을 10% 첨가하여 75℃, 5시간 30분에서 추출한 산양삼 추출물에서 15 브릭스의 추출액을 얻었다. 이 추출액을 회전농축기를 이용하여 50 ℃의 항온수조에서 20~50 브릭스로 농축하여 농축액을 수득하였다. 수득되는 산양삼 농축액을 농도 조절하여 발효에 사용하였다.
(2) 올리고당 첨가 효과 시험
산양삼의 효율적인 유산균발효를 위하여 부원료 첨가효과를 조사하였다. 산양삼 농축액(25 브릭스) 5 부피%에 부원료로서 올리고당 종류를 1 부피%를 각각 첨가하여 121℃에서 15분간 가입멸균 후, 전 배양한 분리 유산균주를 2 부피% 접종하여 37℃에서 48시간 발효하여 유산균의 발효능을 조사하였다.
(3) 조사포닌 함량 측정
추출농축액 및 발효액의 조사포닌 함량은 n-butanol 추출법에 따라 정량하였다. 즉, 추출액 및 발효액 30 ml를 diethyl ether 30 ml로 3회 세척하여 지용성 성분을 제거한 후 수층에 수포화 n-butanol 30 ml를 가하여 3회 분리하고, n-butanol 층을 농축시켜 조사포닌을 얻은 다음 105℃ 건조기에서 항량이 될 때까지 건조하였다. 조사포닌 함량은 사용된 원료 양에 대한 백분율로 나타내었다.
(4) 진세노사이드(ginsenoside) 함량 측정
추출농축액 및 발효액의 진세노사이드 조성 및 함량은 조사포닌 추출한 것을 메탄올에 용해한 후 맴브레인 필터(membrane filter, 0.45 μm, pore size)로 여과, HPLC(Waters 2695 Separations Module, Waters Co., Milford, MA, USA)를 이용하여 측정하였으며, Symmetryⓡ C18(4.6×150 mm, 5㎛) 컬럼(column)과 용매는 A(water)와 B(Acetonitrile)를 사용하였다. 이동상의 유속 1.0 ml/min, 컬럼 온도는 30℃로 하고, PDA 검출기의 검출 파장은 203 nm로 하여 분석하였다.
2) 산양삼 유산균 발효에 의한 항산화 효능 및 특정 진세노사이드 증강 최적발효 조건
(1) 분리 유산균주별 산양삼 추출물의 발효
산양삼의 발효는 1차로 증류수에 산양삼 농축액(25 °brix)을 5 부피%를 첨가하여 121℃에서 15분으로 가압고온 멸균하여 실온 서서히 식힌 다음 미리 활성화 시킨 5종의 선발 균주를 접종하여 37℃에서 72시간 발효하여 발효특성을 조사하여 발효 활성이 가장 뛰어난 1종의 균주를 선택하였다.
(2) 산양삼 농도, 발효 시간 및 올리고당 농도의 설정
산양삼의 발효조건을 설정하기 위하여 최적의 조건으로 추출한 산양삼 추출물을 감압농축시켜 25 브릭스로 조정한 다음 실험에 사용하였다. 반응표면분석법(response surface methodology)을 이용하였고, 발효조건에 대한 실험계획은 중심합성계획법을 실시하여 발효에 영향을 줄 것으로 고려되는 발효인자인 산양삼 농축액 농도(X1), 발효시간(X2) 및 부원료 올리고당의 농도(X3)에 대한 시험범위를 설정하여 각각을 5단계로 부호화 것은 표 1과 같다. 중심합성계획에 따라 16구간으로 설정하여 발효실험을 하였다, 또한, 이들 독립변수에 영향을 받는 종속변수(Yn)로는 적정산도(Y1), 유산균수(Y2), 조사포닌 함량(Y3), 진세노사이드 함량(Y4) 및 항산화적 특성(Y5) 등을 측정하여 그 값을 회귀분석에 사용하였다. 또한 발효에 있어서 발효조건이 산양삼 발효물의 진세노사이드 유효성분 함량에 미치는 영향을 예측된 모델식을 바탕으로 Mathematica program을 이용하여 4차원 반응표면분석으로 해석하였다.
산양삼농도, 발효시간 및 갈락토올리고당 농도 결정을 위한 반응표면분석법의 독립변수와 코드표
독립변수 단위 표시 코드값
-2 -1 0 1 2
산양삼(25브릭스)첨가 농도 % X 1 2 4 6 8 10
발효시간 hr X 2 24 36 48 60 72
갈락토올리고당 농도 % X 3 0 0.25 0.5 0.75 1.0
산양삼 발효 최적화조건을 위한 중심합성 실험계획법
실험 번호 발효조건
산양삼 첨가농도 발효시간 갈락토올리고당 농도
(%) (hr) (%)
1 8 60 0.75
2 8 60 0.50
3 8 36 0.75
4 8 36 0.25
5 4 60 0.75
6 4 60 0.25
7 4 36 0.25
8 4 36 0.25
9 6 48 0.50
10 6 48 0.50
11 10 48 0.50
12 2 48 0.50
13 6 72 0.50
14 6 24 0.50
15 6 48 1.00
16 6 48 0.00
(3) 산양삼 발효물의 당도, pH 및 적정산도 측정
발효 중 조건의 일정 시간별로 시료를 취하여 산양삼 발효물의 당도는 당도계(Refractometer, PR-201α, ATAGO, Japan)로 측정하였다. 산양삼 발효물의 pH는 pH meter(Metter Toledo Group, Switzerland)를 사용하여, 적정 산도는 0.1 N NaOH용액으로 pH 8.3으로 중화 적정하여 소비된 0.1 N NaOH용액을 젖산 함량(%)으로 환산하였다.
(4) 산양삼 발효물의 생균수 측정
산양삼 발효물의 생균수는 발효 중 일정 시간별로 시료를 무균적으로 취한 후 생리멸균식염수로 적정 희석하여 시판용 MRS 한천배지에 접종하여 37℃에서 24시간 배양 후 나타나는 콜로니 수로 나타내었다.
3) 산양삼 유산균 발효물의 항산화 특성
(1) 전자공여능 측정
산양삼 발효시료의 전자공여능은 α,α'-diphenyl-β-pycrylhydrazyl (DPPH)을 사용한 방법으로 측정하였다. 즉, DPPH 시약 12 mg을 무수에탄올 100 ml에 용해한 후 50% 에탄올용액을 첨가하여 DPPH 용액의 흡광도를 517 nm에서 약 1.0으로 조정한 후, 발효액 0.5 ml에 DPPH 용액 5 ml를 혼합하여 흡광도를 측정하였다.
(2) 총 페놀성 화합물 함량 측정
산양삼 발효시료의 폴리페놀 함량은 Folin-Denis 법에 의해 비색정량하였다. 시료 1 ml에 페놀시약(phenol reagent) 1 ml를 가하여 3분간 정치한 후 10% 탄산나트륨(Na2CO3) 1 ml를 혼합하고 1시간 실온에서 방치하여 700 nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준곡선은 갈릭산(gallic acid) 용액으로 작성하였고, 총 페놀성 화합물 함량은 사용된 원료 양에 대한 백분율로 나타내었다.
(3) 2,2-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid, ABTS) 라디칼 소거능
ABTS 라디칼 소거능은 증류수에 녹인 7.2 mM ABTS 용액과 2.6 mM 과황산칼륨(potassium persulfate) 용액을 1:1로 혼합하여 12-16시간 동안 실온의 암소에서 방치한 후 메탄올(methanol)로 734 nm에서 흡광도가 1.1~1.2이 되도록 희석하였다. ABTS 희석용액 3.9 ml에 10.0 mg/ml의 농도로 조제한 시료 0.1 ml를 혼합한 다음 정확히 1분간 반응시킨 후 734 nm에서 흡광도를 측정하였다.
(4) 아질산염 소거능
산양삼 발효물 1 ml에 1 mM 아질산나트륨 용액 1 ml를 가하고 0.1 N HCl 및 0.1 M 구연산 완충액(pH 3.0)을 가하여 반응용액의 총 부피를 10 ml로 한 후 37℃에서 1시간 반응시켰다. 이 반응액 1 ml를 취하여 2% 초산용액과 Griess 시약을 차례로 가하여 520 nm에서 흡광도를 측정하여 시료 무첨가구에 대한 시료 첨가구의 아질산염 소거능을 계산하였다.
실험예 1.
1. 유산균 선발
1) 발효식품으로부터 유산균 분리
발효 김치류 26종의 시료에서 단일콜로니로 분리된 균들 중, MRS 한천배지에서 유산균의 특징을 보이는 콜로니를 형태적으로 다른 것을 분류하여 49개의 유산균을 순수 분리하였다. 49개의 유산균을 에스쿨린 한천법을 이용해 실험한 결과는 도 2 에 나타내었다. 27개의 유산균에서 콜로니 주위에 흑색반점(black complex)이 관찰되어 베타-글루코시데이즈(β-Glucosidase) 활성능이 있는 것으로 판단되었고, 에스쿨린의 반응을 보인 27개의 균주 중 17개는 흑색반점의 직경의 크기가 5mm 이하였고, 그중 반복실험을 통해 약 15mm이상의 흑색반점을 갖는 5개 균주를 분리하였다(표 3).
분리균주들의 에스쿨린(esculin)한천배지에서 흑색 반점의 직경
균주번호 25 26 27 28 29
직경(mm) 16.5 15.3 16.1 15.3 15.7
2) 분리 균주의 베타-글루코시데이즈(β-Glucosidase) 활성능
에스쿨린 반응에서 흑색반점의 직경이 15 mm이상으로 분리된 5종의 유산균을 대상으로 베타-글루코시데이즈 활성측정을 실시하였고, 이들 균주를 48시간 배양하여 베타글루코시데이즈 활성을 측정한 결과값은 표 4와 같다. 베타-글루코시데이즈 활성측정 결과 유산균 25번 균주가 배양시간 24시간에서 가장 높은 값을 나타내었다.
분리균주들의 베타-글루코시데이즈 활성측정 결과값
분리 균주번호 베타-글루코시데이즈(unit/ml)
0h 24h 48h
25 0.030.01 6.320.64 5.541.60
26 0.020.01 5.102.71 4.232.64
27 0.040.02 4.971.15 3.920.40
28 0.050.03 4.910.76 3.700.73
29 0.090.05 4.801.36 3.770.13
3) 산양삼 발효를 위한 유산 균주선택
산양삼 농축액을 10 브릭스로 희석 후 분리된 5종의 유산균주를 배양 접종하여 37℃에서 48 시간 배양하였다. 균주별 산양삼 발효물의 이화학적 성분 검사 결과는 표 5에 나타내었다. 성분 검사 결과, 5종의 균주 중 산 생성력과 산양삼 발효물내 유산균 생균수가 가장 높게 나타난 유산균 25번을 최종 발효유산균으로 선택하였다(도2).
분리균주의 최종선택을 위한 산양삼 발효물(37℃, 48시간 배양)의 특성
분리균주 번호 pH 당함량 산도 유산균 생균수
Brix % CFU/ml
무접종 5.900.03 3.50.1 0.050.01 0
25 4.270.02 1.30.0 0.310.05 8.80109
26 4.270.01 1.30.1 0.230.03 6.20108
27 4.280.02 1.20.0 0.240.02 6.92109
28 4.290.03 1.20.1 0.220.04 7.70108
29 4.300.02 1.20.1 0.200.01 5.50108
2. 분리유산균의 동정
최종 선택된 균주 중 활성능이 가장 높은 25번 균주의 16S rRNA gene의 부분 염기서열을 분석하여 NCBI blast DB와 비교한 결과는 표 6과 같다. 그 결과 데이터베이스의 비교균주로 Leuconostoc mesenteroides strain ATCC 8293 등 Leuconostoc mesenteroides의 균주와 99%의 유사성을 보였다. 그리고 상기 데이터베이스 연관균주와 분리균주의 16S rRNA 유전자 시퀸스 기반으로 한 계통수(phylogenetic tree)의 근연관계도는 도 3과 같다. 이들의 결과를 근거로 최종분리된 균주를 Leuconostoc mesenteroides으로 동정하고 Leuconostoc mesenteroides DU-B1604로 최종 명명하였으며 본 균주를 한국생명공학연구원 생물자원센터에 기탁하여 2016.4.25자 기탁번호 KCTC 13015BP를 부여받았다.
최종분리균주의 16 rDNA 부분적 염기서열 분석결과 표준균주와의 비교
주요 표준균주 차이도/비교수 유사도
Leuconostoc mesenteroides strain ATCC 8293 3/1404 99%
Leuconostoc mesenteroides subsp. dextranicum strain NBRC 100495 3/1404 99%
Leuconostoc mesenteroides strain JCM 6124 3/1404 99%
Leuconostoc mesenteroides subsp. suionicum strain LMG 8159 3/1404 99%
Leuconostoc mesenteroides subsp. cremoris strain NCFB 543 3/1404 99%
실험예 2. 산양삼 추출 농축액을 활용한 유산균 발효조건의 최적화
1) 부원료 올리고당 첨가효과 조사
부원료로서 올리고당의 첨가가 산양삼의 유산균의 발효에 미치는 영향을 조사하기 위해 산양삼 농축액(25브릭스) 5 부피%에 각종 올리고당의 종류를 각각 1 부피%를 첨가한 후 분리 유산균 Leuconostoc mesenteroides DU-B1604을 접종하여 37℃에서 48시간 발효하여 생균수, pH 및 산도 등을 조사한 결과는 표 7과 같다. 발효 후 pH는 갈락토올리고당이 3.66으로 가장 낮게 나타났으며, 이소말토올리고당은 pH 4.70으로 가장 높게 나타났다. 산도는 갈락토올리고당이 0.50%로 가장 높게 나타나 산 생성력이 가장 높았으며 이소말토올리고당은 0.34로 가장 낮은 증가를 보였다. 유산균수는 초기 107의 접종량에서 발효후 대부분 1010으로 증가하여 유산균의 생육에 올리고당의 첨가가 유효하였고 특히 갈락토올리고당이 7.90 x 1010으로 가장 많은 균수를 나타났다. 따라서 산양삼의 유산균 발효에 부원료로서 갈락토올리고당이 가장 유효한 것으로 나타났다.
산양삼 발효에 미치는 올리고당의 첨가의 영향
올리고당 pH 산도 유산균 생균수
단위 % CFU/ml
갈락토 올리고당 발효전 5.200.03 0.0630.05 2.62 x 107
발효후 3.660.04 0.500.04 7.90 x 1010
이소말토 올리고당 발효전 5.180.02 0.0660.03 2.45 x 107
발효후 4.700.01 0.340.05 2.88 x 1010
말토 올리고당 발효전 5.190.04 0.0620.04 2.47 x 107
발효후 4.280.02 0.380.05 2.90 x 1010
프락토 올리고당 발효전 5.180.03 0.0640.02 2.41 x 107
발효후 3.710.04 0.410.06 3.12 x 1010
2) 발효조건에 따른 산양삼 추출물의 발효 특성 모니터링
분리유산균 Leuconostoc mesenteroides DU-B1604에 의한 산양삼 추출물의 유산균 최적발효조건을 설정하기 위해 산양삼 첨가농도, 발효시간 및 부원료인 갈락토올리고당 농도를 독립변수로 하여 중심합성계획에 의해 설계된 16구의 발효조건에서 얻어진 pH, 산도 및 유산균수의 결과는 표 8과 같다. 산양삼 발효액의 pH는 3.43∼3.73, 총산도는 0.37∼0.80%, 유산균수는 12.29∼14.81 Log CFU/ml 및 조사포닌 함량은 0.06∼0.34%를 나타내어 산양삼 농도, 발효시간 및 부원료 농도에 따른 차이를 보여주었다.
중심합성계획법에 의한 산양삼 발효조건에 따른 이화학적 성분변화
실험 번호 실험데이터
pH 산도 생균수 조사포닌 함량
% Log CFU/ml %
1 3.48 0.79 14.09 0.22
2 3.72 0.47 13.86 0.20
3 3.53 0.64 13.27 0.34
4 3.73 0.41 13.50 0.16
5 3.41 0.74 13.68 0.15
6 3.66 0.41 14.00 0.08
7 3.48 0.60 13.16 0.06
8 3.66 0.37 12.71 0.09
9 3.54 0.55 13.58 0.21
10 3.56 0.55 13.50 0.23
11 3.47 0.62 13.37 0.24
12 3.60 0.53 12.89 0.06
13 3.50 0.61 14.18 0.14
14 3.65 0.48 12.29 0.11
15 3.43 0.80 13.68 0.20
16 3.69 0.41 12.91 0.15
각각의 결과를 이용한 반응표면 회귀분석을 실시하고 각 종속변수 즉, pH, 산도, 유산균수 및 조사포닌 함량에 대한 회귀 다항식을 얻어 표 9에 나타내었다. 산양삼의 발효조건에 따른 발효 특성의 다항식의 R2는 pH 0.8221, 총산도 0.9682, 유산균수 0.8608 및 조사포닌 함량은 0.8595의 상관관계를 나타내었다. 한편 pH의 경우 다항식이 10% 이내의 유의성이 인정되었으며, 유산균수 및 조사포닌 함량의 다항식은 5% 이내의 유의성이 인정되는 것으로 나타났으며, 총산도의 다항식은 1% 이외로 유의성이 인정되는 것으로 나타났다.
발효조건에 따른 산양삼의 2차 다항식
반응변수 2차다항식 R2 유의수준

pH		 Y = 3.718125 + 0.035625X1 0.002396X2 0.098750X3 0.003750X1 2 + 0.000069444X1X2 + 0.000019290X2 2 0.002500X1X3 0.001528X2X3 + 0.010000X3 2 0.8221 0.0921
산도 Y = 0.455000 0.048125X1 0.001007X2 0.003750X3 + 0.006250X1 2 + 0.000208X1X2 0.000003858X2 2 0.002500X1X3 + 0.002639X2X3 + 0.055000X3 2 0.9682 0.0008
유산 생균수 Y = 6.443125 + 1.426875X1 + 0.075104X2 + 1.093750X3 0.102500X1 2 0.004375X1X2 0.000235X2 2 0.032500X1X3 0.004306X2X3 0.245000X3 2 0.8608 0.0494
조사포닌함량 Y = -0.771250 + 0.100625X1 + 0.022396X2 + 0.145000X3 0.004375X1 2 0.000833X1X2 0.000165X2 2 + 0.040000X1X3 0.002500X2X3 0.180000X3 2 0.8595 0.05603
산양삼의 발효조건에 따른 발효 특성에 대한 다항식을 바탕으로 도 4∼7과 같은 4차원 반응표면 그래프를 확인할 수 있다. 발효액의 pH와 총산도의 경우 부원료의 농도가 증가하고, 발효시간이 길어질수록 pH 값은 낮은 경향을 보였으며, 총산도는 높은 함량을 나타내었다. 또한 유산균수는 산양삼 농도가 4.5∼5.5% 범위에서 발효시간이 높은 값을 나타내었다.
산양삼의 유산균발효에서 조건의 반응변수에 따른 영향은 표 10과 같다. pH는 부원료 농도에서 5% 이내의 유의성이 인정되었으나, 산양삼 농도와 발효 시간에서는 영향을 받지 않는 것으로 나타났으며, 총산도의 경우 부원료 농도에서 가장 큰 영향을 받고 있는 것으로 나타났으며, 발효시간에서는 5% 이내의 유의성이 인정되었다. 또한 유산균수는 발효시간에서 5% 이내의 유의성이 인정되었으나, 나머지 두 조건에서는 범위 내에서 영향을 받지 않은 것으로 나타났다. 조사포닌 함량의 경우는 산양삼 농도에 가장 큰 영향을 받는 것으로 나타났으며, 나머지 두 조건에서는 거의 영향을 받지 않는 것으로 나타났다.
발효조건에 따른 산양삼의 발효물의 이화적 특성 회귀분석 결과
반응변수 F-Ratio
산양삼농도 발효시간 갈락토올리고당 농도
% hr %
pH 0.01 0.70 6.26**
산도 1.59 5.30** 39.43***
생균수 1.31 7.85** 0.65
조사포닌 함량 7.60** 1.58 1.58
산양삼 발효 결과에 대한 능선분석을 통해 표 11과 같은 발효특성의 최대조건 및 최대값을 예측하였다. pH는 산양삼 농도 5.04% 발효시간 69.09 시간, 갈락토올리고당 농도 1.90% 조건에서 안장점의 형태였고, 총산도는 산양삼 농도 5.26%, 발효시간 68.44, 갈락토올리고당 농도 1.90% 조건에서 안장점 형태였으며, 유산균수는 산양삼 농도 4.90% 발효시간 89.84시간, 갈락토올리고당 농도 1.07% 조건에서 최대점 형태이었고 조사포닌 함량은 산양삼 농도 9.05%, 발효시간 42.00 시간, 부원료 농도 0.79% 조건에서 최대점이었다. 또한 각각의 최댓값 3.37, 0.87%, 14.20 Log CFU/ml 및 0.32%로 예측되었다.
능선분석에 의해 예측된 이화학적 특성에 대한 산양삼의 최적 발효조건
반응변수 예측반응 형태
반응값 산양삼농도 발효시간 갈락토올리고당 농도 결과값
% hr %
pH 최소 5.04 69.09 1.90 3.37 안장점
최대 5.03 54.33 0.00 3.74
산도 최소 4.46 57.61 0.04 0.35 안장점
최대 5.26 68.44 1.90 0.87
생균수 최소 3.98 24.47 0.73 12.27 최대값
최대 4.90 89.84 1.07 14.20
조사포닌 함량 최소 2.62 35.13 0.51 0.004 최대값
최대 9.05 42.00 0.79 0.32
3) 발효조건에 따른 산양삼의 항산화적 특성 모니터링
분리균주 Leuconostoc mesenteroides DU-B1604 균주를 이용하여 중심합성계획에 의한 16구간으로 산양삼 유산발효물의 항산화적 특성을 모니터링한 결과는 표 12와 같다. 산양삼 유산균 발효액의 총 페놀성 화합물 함량은 41.53∼69.97 mg%, DPPH 라디칼 소거능은 52.26∼70.14%, ABTS 라디칼 소거능은 26.99∼50.44, 아질산염 소거능은 16.81∼32.57% 범위를 나타내어 산양삼 농도, 발효시간 및 부원료 농도에 따른 차이를 보여주었다.
중심합성계획법에 근거한 산양삼 발효조건에 의한 총페놀화합물 함량, DPPH와 ABTS라디칼 소거활성능 및 아질산염 소거활성능 실험값
실험 번호 실험값
총페놀화합물 함량 DPPH 라디칼 소거능 ABTS 라디칼 소거능 아질산염 소거활성능
(mg%) (%) (%) (%)
1 62.00 64.65 41.99 27.59
2 59.62 62.59 39.23 24.69
3 60.96 64.00 42.77 25.10
4 58.17 62.01 40.66 24.55
5 48.00 56.64 31.76 20.89
6 46.43 54.46 29.99 19.43
7 49.19 57.93 34.71 18.05
8 46.30 56.52 33.53 17.22
9 55.12 59.58 37.17 25.52
10 54.12 60.22 36.50 25.80
11 69.97 70.14 50.44 32.57
12 41.53 52.26 26.99 16.81
13 51.53 59.42 40.71 22.82
14 48.11 56.37 37.91 20.82
15 62.13 65.56 43.46 27.87
16 49.95 58.12 38.35 23.86
산양삼 유산발효액의 발효조건에 따른 각 항산화적 특성에 대한 다항식은 표 13과 같다. 다항식의 R2는 총 페놀성 화합물 함량 0.9929, DPPH 라디칼 소거능은 0.9063, ABTS 라디칼 소거능 0.8541, 아질산염소거능 0.9853로 모두 비교적 높은 상관관계를 나타내었다. 한편 총 페놀성 화합물 함량, DPPH 라디칼 소거능과 아질산염 소거능은 1% 이내의 유의성이 인정되었고, 조사포닌 함량과 ABTS 라디칼 소거능의 경우는 5% 이내의 유의성이 인정되는 것으로 나타났다.
산양삼 발효조건에 의한 발효물의 항산화적 특성 다항식
반응변수 2차 다항식 R2 유의수준
총페놀화합물 함량 Y = -8.791875 + 15.582500X1 + 0.347604X2 + 0.130000X3 0.536563X1 2 0.053854X1X2 0.001589X2 2 0.750000X1X3 + 0.034167X2X3 + 6.740000X3 2 0.9929 <.0001
DPPH 라디칼 소거능 Y = -28.460625 + 12.242187X1 + 1.252656X2 + 1.364500X3 0.495313X1 2 0.040156X1X2 0.010460X2 2 0.677500X1X3 0.145417X2X3 + 18.660000X3 2 0.9063 0.0171
ABTS 라디칼 소거능 Y = 14.695625 + 8.106875X1 0.039688X2 8.220000X3 0.264688X1 2 0.027292X1X2 + 0.001892X2 2 + 0.895000X1X3 0.091667X2X3 + 13.960000X3 2 0.8541 0.0558
아질산염 소거활성능 Y = 25.720625 + 2.513125X1 0.468854X2 10.220000X3 0.095937X1 2 + 0.052604X1X2 + 0.003290X2 2 + 1.190000X1X3 0.205000X2X3 + 13.20000X3 2 0.9853 <.0001
산양삼의 유산균발효조건에 따른 표 13의 항산화적 특성에 대한 다항식을 바탕으로 도 8∼11와 같은 4차원 반응표면 그래프를 확인할 수 있었다. 산양삼의 발효에 따른 항산화적 특성은 산양삼 농도에 대한 영향을 많이 받는 경향을 보여주어, 산양삼 농도가 증가할수록 그 값들이 증가하는 것으로 나타났다.
산양삼의 발효에서 조건변수에 따른 영향은 표 14와 같다. 총 페놀성 화합물 함량의 경우 산양삼 농도에서 1% 이내, 발효시간에서 10% 이내에서 유의성이 인정되었으며, DPPH 라디컬 소거능, ABTS 라디컬 소거능과 아질산염 소거능은 산양삼 농도에서 1∼5% 이내의 유의성이 인정되었으나, 나머지 두 조건에서는 범위 내에서 영향을 받지 않는 것으로 나탔다.
발효조건에 따른 산양삼의 항산화적 특성에 대한 회귀분석 결과
반응변수 F-Ratio
산양삼농도 발효시간 갈락토올리고당 농도
% hr %
총페놀화합물 함량 203.51*** 3.42* 1.62
DPPH 라디칼 소거능 12.04*** 0.60 1.14
ABTS 라디칼 소거능 8.03** 0.12 0.44
아질산염 소거활성능 97.62*** 2.07 1.26
산양삼의 발효결과에 대한 능선분석을 통해 표 15와 같은 발효의 최적조건 및 최댓값을 예측하였다. 그 결과 총 페놀성 화합물 함량은 산양삼 농도 9.52%, 발효시간 36.75시간, 갈락토올리고당 농도 0.52% 조건에서, DPPH 라디칼 소거능은 산양삼 농도 8.08%, 발효시간 43.41시간, 갈락토올리고당 농도 0.91% 조건에서, ABTS, 라디칼 소거능은 산양삼 농도 9.00%, 발효시간 40.47시간, 갈락토올리고당 농도 0.79% 조건에서, 아질산염 소거능은 산양삼 농도 9.66%, 발효시간 57.20시간, 갈락토올리고당 농도 0.55% 조건에서 각각의 최댓값 81.57 mg%, 64.81%, 63.44% 및 52.36%을 예측되었다.
능선분석에 의해 예측된 항산화적 특성에 대한 산양삼의 최적 발효조건
반응변수 예측반응 형태
반응값 산양삼농도 발효시간 갈락토올리고당 농도 결과값
% hr %
총페놀화합물 함량 최소 2.01 46.55 0.46 29.69 안장점
최대 9.52 36.75 0.52 81.57
DPPH 라디칼 소거능 최소 2.06 45.15 0.42 26.83 안장점
최대 8.08 43.41 0.91 64.81
ABTS 라디칼 소거능 최소 2.00 47.06 0.47 27.70 안장점
최대 9.00 40.47 0.79 63.44
아질산염 소거활성능 최소 2.05 51.46 0.54 14.58 안장점
최대 9.66 57.20 0.55 52.36
산양삼의 최적의 유산균발효에 의하여 조사포닌, 총페놀성 화합물 함량과 DPPH 라디컬 소거능 등이 모두 높은 최적 조건을 설정하기 위하여 도 12와 같이 각 반응표면을 다중겹침(superimposing)한 결과, 발효조건은 산양삼 농축액 (25브릭스)농도 8∼9 중량%, 발효시간 35∼45 시간 및 갈락토올리고당 농도 0.6∼0.9%로 예측되었다. 이들 예측조건에서 실제 발효전, 후의 항산화 특성값을 측정한 결과는 표 16과 같다. 항산화적 특성값이 발효전에 비하여 발효후 60.67~165.20%의 증가를 보여 발효에 의하여 항산화적 특성값이 증강됨을 보였다.
다중겹침 반응표면에 의한 항산화 특성을 위한 산양삼의 최적발효조건 예측
항산화 특성 발효전(A) 발효후(B) 증가율 (B/A)x100
총페놀화합물 함량(mg%) 49.11 81.13 165.20
DPPH 라디칼 소거능 39.57 65.23 60.67
ABTS 라디칼 소거능 54.93 62.89 87.34
아질산염 소거활성능 42.60 52.36 81.35
4) 발효조건에 따른 산양삼의 진세노사이드 함량 변화 모니터링
산양삼 추출 농축액을 이용하여 중심합성계획에 의한 16구간을 분리균주 Leuconostoc mesenteroides DU-B1604 균주로 발효 후 발효시료의 진세노사이드 화합물 함량을 측정한 결과는 표 17과 같다. 산양삼 발효액의 진세노사이드 Rg1 함량은 1,757.21 mg%, 진세노사이드 Rb1 함량은 6,5322.81 mg%, 진세노사이드 Rh1 함량은 1,273.76 mg%, 진세노사이드 Rg3 함량은 2,915.33 mg%, 진세노사이드 컴파운드 K 함량은 3,568.30 mg% 나타내어 산양삼 농도, 발효시간 및 부원료 농도에 따른 차이를 나타내었다.
중심합성계획법에 근거한 산양삼 발효조건에 의한 진세노사이드 함량 실험값
실험 번호 실험값(mg%)
Rg1 Rb1 Rh1 Rg3 Compound K
1 6.17 21.34 3.76 5.33 6.66
2 5.73 20.91 3.59 4.10 5.74
3 6.28 18.75 3.54 5.06 6.10
4 4.75 17.84 3.34 4.41 5.74
5 5.17 17.71 3.20 4.76 6.25
6 4.43 16.20 3.13 4.02 4.68
7 4.95 16.23 2.90 4.20 5.58
8 3.82 15.01 2.56 3.95 4.04
9 5.21 17.96 3.36 4.78 7.96
10 5.17 17.61 3.29 4.65 8.30
11 7.21 22.81 3.75 5.17 6.56
12 1.75 6.53 1.59 2.91 3.56
13 5.08 17.85 3.38 4.99 6.32
14 4.32 15.23 1.27 3.50 3.61
15 5.21 18.60 3.51 4.27 6.24
16 3.85 17.76 3.23 3.32 5.24
Control 4.50 17.19 0.73 0.38 0.068
* Control : 산양삼 농도 5% 시료의 발효전 gensenoside 함량
산양삼의 발효조건에 따른 진세노사이드 화합물 함량 변화에 대한 다항식은 표 18과 같다. 다항식의 R2는 진세노사이드 Rg1 함량 0.8483, 진세노사이드 Rb1 함량은 0.8487, 진세노사이드 Rh1 함량은 0.8455, 진세노사이드 Rg3 함량은 0.8415, 진세노사이드 compound K 함량은 0.9225로 모두 높은 상관관계를 나타내었다. 한편 진세노사이드 compound K 함량은 1% 이내의 수준에서 진세노사이드 Rg1, 진세노사이드 Rb1, 진세노사이드 Rh1 및 진세노사이드 Rg3 함량은 10% 이내의 수준에서 각각의 유의성이 인정되었다.
산양삼 발효조건에 의한 발효물의 진세노사이드 화합물 함량 변화 다항식
반응변수 2차 다항식 R2 유의수준
Rg1 Y = -4.681250 + 0.993750X1 + 0.128021X2 + 7.090000X3 0.044375X1 2 + 0.000208X1X2 0.000851X2 2 + 0.025000X1X3 0.061667X2X3 2.640000X3 2 0.8483 0.0616
Rb1 Y = -2.736875 + 3.207813X1 + 0.188698X2 + 2.322500X3 0.194688X1 2 + 0.015573X1X2 0.002161X2 2 0.347500X1X3 0.007917X2X3 + 1.580000X3 2 0.8487 0.0612
Rh1 Y = -5.693750 + 0.807500X1 + 0.214375X2 + 0.815000X3 0.040937X1 2 0.002083X1X2 0.001736X2 2 0.010000X1X3 0.012500X2X3 + 0.180000X3 2 0.8455 0.0646
Rg3 Y = -1.468750 + 0.769062X1 + 0.096406X2 + 1.417500X3 0.042500X1 2 0.003490X1X2 0.000825X2 2 + 0.222500X1X3 + 0.044583X2X3 3.7000003 2 0.8415 0.0689
Compound K Y = -20.360625 + 3.021563X1 + 0.576615X2 + 12.722500X3 0.191875X1 2 0.003906X1X2 0.005495X2 2 0.457500X1X3 + 0.024583X2X3 9.560000X3 2 0.9225 0.0101
산양삼의 발효조건에 따른 표 18의 진세노사이드 화합물 함량에 대한 다항식을 바탕으로 도 1317와 같은 4차원 반응표면 그래프를 확인할 수 있었다. 발효액의 진세노사이드 화합물 함량은 산양삼 농도와 발효시간에 영향을 많이 받아 산양삼 농도가 높고 발효시간이 길수록 증가하는 경향을 보여주었다.
산양삼의 발효에서 조건변수에 따른 영향은 표 19와 같다. 진세노사이드 Rg1과 Rb1은 특히 산양삼 농도에 대한 영향이 큰 것으로 나타났으며, 나머지 두 조건에서는 영향을 받지 않는 것으로 나타났고, 진세노사이드 Rh1은 산양삼 농도, 발효시간 순으로 영향을 받는 것으로 나타났으며, 설정된 범위 내에서 갈락토올리고당 농도에 대한 영향은 거의 없는 것으로 나탔다. 또한 진세노사이드 Rg3 함량은 산양삼 농도, 갈락토올리고당 농도 순으로 영향을 받는 것으로 나타났으며, 설정된 범위 내에서 발효시간에 대한 영향은 받지 않는 것으로 나타났다. Compound K의 함량은 세 가지 조건 모두에서 영향을 받고 있는 것으로 나타났다.
발효조건에 따른 산양삼의 진세노사이드 함량에 대한 회귀분석 결과
반응변수 F-Ratio
산양삼농도 발효시간 갈락토올리고당 농도
% hr %
Rg1 6.76** 0.51 1.48
Rb1 7.45** 0.73 0.13
Rh1 4.17* 3.74* 0.16
Rg3 4.26* 1.60 3.30*
Compound K 11.10*** 9.46*** 6.13**
*Significant at 10% level; **significant at 5% level; ***significant at 1% level.
산양삼의 발효 결과에 대한 능선분석을 통해 표 20과 같은 발효의 최적조건 및 최댓값을 예측하였다. 진세노사이드 Rg1함량 산양삼 농도 9.65%, 발효시간 49.78시간, 갈락토올리고당 농도 0.69% 조건에서, 진세노사이드 Rb1 함량은 산양삼 농도 9.15%, 발효시간 62.66시간, 갈락토올리고당 농도 0.54% 조건에서, 진세노사이드 Rh1 함량은 산양삼 농도 8.02%, 발효시간 53.01시간, 갈락토올리고당 농도 0.91% 조건에서, 진세노사이드 Rg3 함량은 산양삼 농도 8.44%, 발효시간 60.66 ㅅ시간, 갈락토올리고당 농도 0.79% 조건에서, 진세노사이드 컴파운드 K 함량은 산양삼 농도 6.39%, 발효시간 58.89시간, 갈락토올리고당 농도 0.94% 조건에서 각각의 최댓값으로 Rg1 6.83 mg%, Rb1 22.31 mg%L, Rh1 3.96 mg%, Rg3 5.45 mg% 및 컴파운드 K 6.64 mg%로 예측되었다. 이 예측값은 표 17의 발효전 시료의 진세노사이드 함량을 비교한 결과는 표 21과 같다. Rg1은 1.52배, Rb1은 1.30배로 소량 중가 하였지만 Rh1은 5.42배, Rg3는 14.34배 및 컴파운드 K는 94.86배 증가하여 최적 발효 조건에서 발효할 경우 특정의 진세노사이드인 Rh1, Rg3 및 컴파운드 K의 함량의 증강이 일어나는 것을 알 수 있다.
산양삼의 최적의 유산균 발효조건을 설정하기 위하여 진세노사이드 Rh1, Rg3 및 compound K 함량이 모두 최대를 이루는 최적 조건을 설정하기 위하여 도 18과 같이 각 반응표면을 디중겹침(superimpose)한 결과, 발효조건은 표 22에서와 같이 산양삼 농도 68%, 발효시간 55.65 시간 및 부원료 농도 0.58%로 예측되었다. 이들 예측된 최적발효조건에서 발효전(도 18)과 발효후의 진세노사이드를 분석한 크로마토 그램은 도 19과 같다.
능선분석에 의해 예측된 진세노사이드 함량에 대한 산양삼의 최적 발효조건
반응변수 예측반응 형태
반응값 산양삼농도 발효시간 갈락토올리고당 농도 결과값
% hr %
Rg1 최소 2.53 41.65 0.28 2.53 최대점
최대 9.65 49.78 0.69 6.83
Rb1 최소 2.02 47.44 0.44 9.41 안장점
최대 9.15 62.66 0.54 22.31
Rh1 최소 3.65 28.69 0.45 1.44 안장점
최대 8.02 53.01 0.91 3.96
Rg33 최소 2.53 36.15 0.53 3.15 최대점
최대 8.44 60.66 0.79 5.45
Compound K 최소 2.92 35.45 0.31 2.88 최대점
최대 6.39 58.89 0.94 6.64
최적발효조건에서 예측된 진세노사이드 함량과 발효전 산양삼의 진세노사이드 함량 비교
반응변수 예측값(mg%)(A) 발효전(mg%)(B) 증가비(A/B)
Rg1 6.83 4.50 1.52
Rb1 22.31 17.19 1.30
Rh1 3.96 0.73 5.42
Rg3 5.45 0.38 14.34
Compound K 6.64 0.07 94.86
다중겹침 반응표면에 의한 진세노사이드 최대함량의 최적발효조건 예측
발효조건 단위 예측된 조건
산양삼농도 % 68
발효시간 hour 55.65
갈락토올리고당 함량 % 0.58
본 발명은 Leucomostic 속 균주 DUB1604를 이용하여 항산화효능과 특정 진세노이드 Rg3, Rh1 및 Compound K 함량이 강화된 산양삼 발효물을 제공하는 효과가 있으므로 건강 기능성 식품산업상 매우 유용한 발명인 것이다.
한국생명공학연구원 KCTC13015BP 20160425

Claims (7)

  1. 산양삼을 분쇄하여 발효주정 70%에서 75℃로 5시간 30분동안 침치한 후 추출한 15 브릭스(brix)의 산양삼 추출물을 회전농축기를 이용하여 50℃의 수조에서 20~50브릭스로 농축하여 산양삼 농축액을 얻는 1단계(S1)와;
    상기 1단계에서 얻은 산양삼 농축액을 증류수의 1~50 부피%로 첨가하여 산양삼 조정액을 얻는 제2단계(S2)와;
    상기 2단계에서 얻은 산양삼 조정액 전체부피에 대하여 갈락토올리고당(galactooligosaccharide)을 0.1~30 부피%로 첨가하고 pH를 5.0~7.0으로 조정한 후 살균 처리하여 산양삼 조성액을 얻는 제3단계(S3)와;
    상기 3단계에서 살균 처리하여 얻은 산양삼 조성액에 상업용 MRS배지에 전배양한 분리 유산균 루코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) DU-B1604(KCTC 13015BP)을 산양삼 조성액의 0.1~20 부피%로 접종하여 유산균 접종 조성액을 얻는 제4단계(S4)와;
    상기 4단계에서 얻은 유산균 접종 조성액을 발효온도 20~45℃, 발효시간 6~120시간 동안 발효하여 산양삼 발효물을 얻는 제5단계(S5)로 이루어진 것을 특징으로 하는
    분리 유산균 발효에 의해 Rg3, Rh1, 컴파운드 K 함량 및 항산화 효능을 증가시킨 산양삼 유산균 발효물의 제조방법.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 제5단계에서 얻은 산양삼 발효물을 살균온도 60~100℃에서 10~60분간 가열 살균 처리한 후 1.0 마이크로 필터 여과기를 통과시켜 여과하는 제6단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는
    분리 유산균 발효에 의해 Rg3, Rh1, 컴파운드 K 함량 및 항산화 효능을 증가시킨 산양삼 유산균 발효물의 제조방법.
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. 제1항 또는 제2항의 제조방법에 의해 제조되어 Rg3, Rh1, 컴파운드 K 함량 및 항산화 효능이 증가된 것을 특징으로 하는
    산양삼의 유산균 발효물.
  7. 제 6항의 산양삼의 유산균 발효물을 유효성분으로 함유하여 Rg3, Rh1, 컴파운드 K 함량 및 항산화 효능이 증가된 것을 특징으로 하는 건강 기능성 식품 조성물.
KR1020160069877A 2016-06-03 2016-06-03 분리 유산균 발효에 의해 Rg3, Rh1, 컴파운드 K 함량 및 항산화 효능을 증가시킨 산양삼 유산균 발효물의 제조방법 KR101882468B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020160069877A KR101882468B1 (ko) 2016-06-03 2016-06-03 분리 유산균 발효에 의해 Rg3, Rh1, 컴파운드 K 함량 및 항산화 효능을 증가시킨 산양삼 유산균 발효물의 제조방법

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020160069877A KR101882468B1 (ko) 2016-06-03 2016-06-03 분리 유산균 발효에 의해 Rg3, Rh1, 컴파운드 K 함량 및 항산화 효능을 증가시킨 산양삼 유산균 발효물의 제조방법

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20170137566A KR20170137566A (ko) 2017-12-13
KR101882468B1 true KR101882468B1 (ko) 2018-07-27

Family

ID=60944620

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020160069877A KR101882468B1 (ko) 2016-06-03 2016-06-03 분리 유산균 발효에 의해 Rg3, Rh1, 컴파운드 K 함량 및 항산화 효능을 증가시킨 산양삼 유산균 발효물의 제조방법

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR101882468B1 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020091192A1 (ko) * 2018-10-30 2020-05-07 경남과학기술대학교 산학협력단 인체 흡수형 진세노사이드 및 오메가-6 지방산이 증진된 산양삼 숙성 복합발효물 및 그 제조방법

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20240061287A (ko) 2022-10-31 2024-05-08 한방바이오 주식회사 고압 팽화에 의해 미량 진세노사이드 및 페놀성 화합물의 함량이 증가된 팽화 산삼배양근 및 그의 제조방법

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101247589B1 (ko) * 2010-12-03 2013-03-26 이재호 발효 산양삼차 및 이의 제조방법

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Zhongmei He 외 9명, ‘Antioxidant activity of prebiotic ginseng polysaccharides combined with potential probiotic Lactobacillus plantarum C88’, International Journal of Food Science and Technology 제50권제
박수지 외 3명, ‘Whole Cell Biotransformation of Major Ginsenosides Using Leuconostocs and Lactobacilli’, Food science and biotechnology 제21권제3호, 839-844쪽, 2012년 06월.

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020091192A1 (ko) * 2018-10-30 2020-05-07 경남과학기술대학교 산학협력단 인체 흡수형 진세노사이드 및 오메가-6 지방산이 증진된 산양삼 숙성 복합발효물 및 그 제조방법

Also Published As

Publication number Publication date
KR20170137566A (ko) 2017-12-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR100426279B1 (ko) 유산균 발효식품 및 그 제조방법
CN104509907A (zh) 一种复合植物酵素醋饮料及其制备方法
KR101828863B1 (ko) 떫은 맛이 감소된 아로니아 착즙액 및 그 제조방법, 이를 이용한 젖산 발효 음료 제조방법
KR101402031B1 (ko) 락토바실러스 플랜타룸 ｋ154를 이용한 ｇａｂａ 증진 발효 식물 추출물 제조방법
KR101859929B1 (ko) 증진된 풍미와 기능성을 갖는 참다래, 감 및 머루의 혼합 와인과 발효식초 및 이들의 제조방법
KR101260466B1 (ko) 감국식초의 제조방법
KR101616187B1 (ko) Ｇａｂａ 생산 젖산균을 이용한 오미자 발효음료 제조방법
KR100943024B1 (ko) 복분자 식초 및 그의 제조방법
KR20210060864A (ko) 인삼 잎 기원의 진세노사이드 함유 발효액 및 그 제조 방법
KR20180032231A (ko) 신규한 락토바실러스 플랜타럼(Lactobacillus plantarum) SI-6 및 락토바실러스 람너서스 (Lactobacillus rhamnosus) SI-15 균주, 및 이의 이용
KR101193634B1 (ko) 보리된장 제조방법
KR101882468B1 (ko) 분리 유산균 발효에 의해 Rg3, Rh1, 컴파운드 K 함량 및 항산화 효능을 증가시킨 산양삼 유산균 발효물의 제조방법
KR20150070933A (ko) 항산화 효능이 있는 오디 유산균 발효물의 제조방법
KR101809447B1 (ko) 류코노스톡 메센테로이드 drc1506 균주 및 이의 용도
KR102000286B1 (ko) 신규 락토바실러스 퍼멘텀 균주를 이용한 사포나린, 이소비텍신 및 루테올린 함량이 증진된 새싹보리 발효물의 제조방법
KR101814941B1 (ko) 맨드라미꽃 물추출물의 유산균 발효액을 함유하는 항산화 기능성 식품 조성물 및 그 제조방법
KR100424043B1 (ko) 사카로마이세스 속 ｋｗｓ 06을 이용한 수박 발효주 및 그제조방법
KR20230129136A (ko) 발효 작두콩 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균, 항산화, 또는 항염증용 조성물
KR20140039742A (ko) 홍삼 발효용 신규 미생물 락토바실러스 파낙시카세이 및 이를 이용하여 제조한 발효 홍삼을 포함하는 식품 조성물
KR101924392B1 (ko) 요구르트의 제조 방법 및 그에 의하여 얻어진 요구르트
KR20090061114A (ko) 건강 기능성 국화 식초 및 그 제조방법
KR20190051275A (ko) 벚나무속 식물의 열매를 이용한 유산균 발효 방법 및 이의 용도
KR102457478B1 (ko) 신규한 유산균 Pediococcus acidilactici DU. LAB. K-1(KCTC 13963BP)를 이용하여 설포라판 및 쿼세틴이 증강된 새싹브로콜리 유산균 발효물 및 이의 제조방법
KR20180032493A (ko) 신규한 락토바실러스 플랜타럼(Lactobacillus plantarum) SI-6 및 락토바실러스 람너서스 (Lactobacillus rhamnosus) SI-15 균주, 및 이의 이용
KR101494165B1 (ko) 으름열매를 첨가한 막걸리 제조방법 및 그 제조된 으름열매 쌀막걸리

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right