KR101876486B1 - Myh4 유전자를 포함하는 재조합 벡터 및 이의 이용 - Google Patents

Abstract

본 발명은 MYH4 유전자를 포함하는 재조합 벡터 및 이의 이용에 관한 것으로, 구체적으로 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 MYH4 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 포함하는 육질 향상용 조성물에 관한 것이다.
MYH4 유전자는 개체의 근내지방함량 및 전단력을 향상시키는 효과를 나타내므로, 상기 MYH4 유전자를 포함하는 재조합 벡터는 형질전환체의 육질을 향상시키는데 이용될 수 있을 것이다.

Description

MYH4 유전자를 포함하는 재조합 벡터 및 이의 이용{A recombinant vector comprising MYH4 gene and use thereof}

본 발명은 MYH4 유전자를 포함하는 재조합 벡터 및 이의 이용에 관한 것으로, 구체적으로 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 MYH4 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 포함하는 육질 향상용 조성물에 관한 것이다.

돼지는 사람이 필요로 하는 단백질을 제공하는 가장 기본적인 가축으로서, 약 9000년 전에 인도의 동부 지방에서 사육된 이래로, 각각의 시대와 상황 및 사람들의 기호에 따라 사육되어 왔다. 돼지의 육질과 육량을 결정하는 요인에는 여러 가지가 있는데, 이 중에서도 근내지방 함량의 수준은 육질, 등심단면적은 육량을 평가하는 가장 중요한 척도이며, 적색육은 소비자가 가장 선호하는 고기 색깔로서 구매 시 우선적으로 눈에 띄는 육질 형질이기도 하다.

이러한 상황에 맞추어 시판용 비육돈을 생산하기 위해 일당증체량, 면역능력, 산자수, 모유량, 육질 등에서 우수한 형질을 갖는 품종을 교배하여 돼지 신품종을 만들어 왔으며, 그 수는 현재 200여 종에 이른다. 그러나, 원하는 형질을 갖는 품종을 얻기에는 육종 과정이 복잡하며, 오랜 시간이 걸린다는 단점이 있었다. 이에 따라, 유전형을 변형시켜 가축의 육질을 향상시키기 위한 기술의 개발이 활발히 이루어지고 있으며, 그 결과로, 돼지의 육질 형질, 등지방 두께 및 흑모색에 관여하는 유전자의 SNP 형질을 이용하여 품질이 향상된 돼지를 제조하는 방법 등이 개발된 바 있다(한국 등록특허공보 제10-1457942호). 그러나, 여전히 돼지의 육질을 간편하고 효과적으로 향상시킬 수 있는 방법에 대해서는 개발되지 않은 상태이며, 또한, MYH4 유전자를 이용하여 돼지의 육질을 향상시키는 방법에 대해서는 개발된 바 없었다.

이러한 배경하에, 본 발명자들은 유전 형질을 변형하여 가축의 육질을 향상시킬 수 있는 방법을 개발하고자 예의 연구노력한 결과, MYH4 유전자가 돼지의 육질 형질을 결정하는 유전자임을 규명하였으며, 상기 유전자가 도입된 마우스는 야생형에 비하여 육질의 적색도가 향상됨을 확인함에 따라, 상기 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 이용하면 육질을 향상시킬 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 하나의 목적은 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 MYH4 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 포함하는 육질 향상용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 하나의 양태는 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 MYH4 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 포함하는 육질 향상용 조성물을 제공한다.

본 발명에서는, MYH4 유전자에 의해 돼지의 근내지방함량 및 전단력이 결정됨을 확인함에 따라, 상기 유전자를 포함하는 벡터를 이용하면 개체의 육질을 향상시킬 수 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 육질 향상용 조성물은, 개체가 MYH4 유전자를 발현할 수 있도록 함으로써 육질 향상 효과를 나타낼 수 있다.

상기 용어, '개체'는 마우스, 돼지, 닭, 소 등의 모든 동물을 의미한다. 구체적인 예로, 포유류, 조류 등의 가축일 수 있으나, 근육 및 지방 등으로 구성된 식육을 갖는 한, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명에서, 상기 개체는 마우스 또는 래트일 수 있으며, 상기 마우스 품종의 구체적인 예로는 C57BL/6n, BCF 하이브리드, FVB/n 등이 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 용어, "MYH4 유전자"는 동물의 근육을 구성하는 마이오신에 포함된 중쇄단백질의 하나인 myosin heavy chain 4를 코딩하는 유전자를 의미하며, 이의 염기서열은 NCBI의 GenBank 등 공지의 데이터베이스에서 얻을 수 있다(예: GenBank Accession: NP_001116613.1). 구체적인 예로, 상기 유전자는 돼지로부터 유래한 유전자일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명에서, 상기 유전자는 서열번호 1로 표시되는 폴리뉴클레오티드일 수 있다.

본 발명의 용어, "재조합 벡터"는 적당한 숙주세포에서 목적 단백질 또는 목적 RNA을 발현할 수 있는 벡터로서, 유전자 삽입물이 발현되도록 작동가능하게 연결된 필수적인 조절요소를 포함하는 유전자 작제물을 말한다.

본 발명의 재조합 벡터는 상기 MYH4 유전자를 포함하는데, 구체적으로 도 2의 개열지도로 표시되는 것일 수 있으며, 더욱 구체적으로 서열번호 2의 염기서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드를 포함하는 것일 수 있다.

또한, 상기 재조합 벡터는 CAGGS 프로모터(CAGGS promoter)를 포함하는 것일 수 있고, 더욱 구체적으로 CAGGS 프로모터(CAGGS promoter)가 MYH4 유전자와 작동 가능하게 연결된 것일 수 있다.

본 발명의 용어, "프로모터"는 일반적으로 전사를 개시하는 지점을 포함하는 암호화 부위의 상류 쪽에 위치하는 유전자 부위로, 흔히 유전자 발현을 조절하는 TATA 박스, CAAT 박스 부위, 외부 자극에 반응하여 유전자 발현에 영향을 주는 부위 및 위치와 방향에 상관없이 거의 모든 유전자의 발현을 촉진하는 인핸서(enhancer) 등으로 이루어져 있다. 또한, 이러한 프로모터 중에는 모든 조직에서 상시적으로 발현을 유도하는 프로모터(constitutive promoter) 및 시간 또는 위치 특이적으로 발현을 유도하는 프로모터(inducible promoter)가 있으며, 구체적으로 본 발명에 따른 프로모터는 CAGGS 프로모터일 수 있다.

상기 용어, '작동가능하게 연결된'(operably linked)은 일반적인 기능을 수행하도록 핵산 발현조절 서열과 목적하는 단백질 또는 RNA를 코딩하는 핵산 서열이 기능적으로 연결(functional linkage)되어 있는 것을 말한다. 예를 들어 프로모터와 단백질 또는 RNA를 코딩하는 핵산 서열이 작동가능하게 연결되어 코딩하는 핵산 서열의 발현에 영향을 미칠 수 있다. 재조합 벡터와의 작동적 연결은 당해 기술 분야에서 잘 알려진 유전자 재조합 기술을 이용하여 제조할 수 있으며, 부위-특이적 DNA 절단 및 연결은 당해 기술 분야에서 일반적으로 알려진 효소 등을 사용한다.

본 발명의 용어, "육질"은 뼈를 제외한 도축물의 상태를 나타내는 다양한 표현 형질을 의미하는데, 상기 표현 형질은 특별히 이에 제한되지 않으나, 근내지방함량, 육색, 보수력, 전단력 등이 될 수 있으며, 더욱 구체적으로 근내지방함량 또는 전단력이 될 수 있다. 근내지방함량은 근육 내 포함된 지방의 함량, 육색은 육안으로 판단되는 고기의 색, 보수력은 축육이 수분을 유지하는 능력, 전단력은 고기의 찢었을 때 질긴 정도로서, 근내지방함량은 높을수록, 육색은 적색을 나타낼수록, 보수력 및 전단력은 낮을수록 육질의 품질이 높아진다. 이 중에서도, 근내지방함량 및 전단력의 수준은 육질을 평가하는 가장 중요한 척도이며, 육색은 소비자의 신선도 및 선호도 평가에 영향을 주는 주된 요인이다.

본 발명의 구체적인 일 실시예에서, MYH4 유전자는 육질이 좋지 않은 외래종인 랜드레이스에 비하여, 육질이 좋은 재래종인 제주재래돼지의 등심 및 후지에서 발현 수준이 월등함을 확인하였다.

이는, MYH4 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 포함하는 본 발명의 조성물을 이용하면, 개체가 MYH4 유전자를 발현할 수 있도록 함으로써 육질을 향상시킬 수 있음을 시사하는 것이다.

MYH4 유전자는 개체의 근내지방함량 및 전단력을 향상시키는 효과를 나타내므로, 상기 MYH4 유전자를 포함하는 재조합 벡터는 형질전환체의 육질을 향상시키는데 이용될 수 있을 것이다.

도 1은 CAGGS-EGFP-Puro 벡터의 기본 유전자 구조를 보여준다.
도 2는 MYH4 유전자가 재조합된 CAGGS-MYH4-Flag 발현 벡터의 개열지도 및 벡터 내 유전자의 순서를 보여준다.
도 3은 MYH4 유전자가 재조합된 벡터로 형질전환된 세포의 MYH4 유전자의 전사 활성을 보여주는 이미지이다. P/C는 양성대조군(positive control), 붉은색으로 표시된 숫자(10, 13, 15)는 MYH4 유전자 전사활성을 나타내는 형질전환 세포, 검정색으로 표시된 숫자는 형질전환은 되었으나, MYH4 유전자의 전사활성이 없는 세포를 의미한다.
도 4는 MYH4 유전자가 재조합된 벡터로 형질전환된 세포의 MYH4 유전자의 mRNA 및 단백질 발현양을 보여준다. a는 MYH4 유전자의 mRNA 발현양을 분석한 RT-PCR 결과를 나타내는 그래프이고, b는 MYH4 유전자의 단백질 발현양을 분석한 웨스턴블롯 결과를 나타내는 이미지이다. 결과값은 독립적인 세 번의 실험을 통해 얻었으며, 이를 평균±SEM으로 나타내었다.

이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 돼지의 육질 형질 결정 유전자 선발

돼지의 육질 형질을 결정하는 유전자를 규명하기 위하여, 육질 형질의 양적특성자리(quantitative trait locus; QTL) 분석을 수행하였다.

그 결과, 제주재래흑돼지와 랜드레이스의 등심과 후지에서 MYH4의 발현 수준이 차이를 보임을 확인함으로써, MYH4 유전자가 돼지의 육질 형질 중에서도 특히, 근내지방함량과 전단력을 결정하는 주요 유전자임을 알 수 있었다.

실시예 2. 돼지 MYH4 유전자가 삽입된 형질전환 마우스의 제작

실시예 2-1. 형질전환 벡터의 제작

상기 실시예 1을 통해 MYH4가 돼지 육질 형질 중에서도 특히, 근내지방함량과 전단력을 결정하는 유전자임이 규명됨에 따라, 상기 유전자의 생체 내(in vivo) 활성을 확인하는데 사용될 수 있는 돼지 MYH4 유전자가 삽입된 형질전환 벡터를 제작하였다.

먼저, 돼지 MYH4 유전자가 삽입된 형질전환 마우스를 제작하고자, CAGGS-EGFP-Puro 벡터를 이용하여 MYH4 유전자가 삽입된 재조합 CAGGS-MYH4-Flag 발현벡터를 제조하였다.

구체적으로, 돼지 MYH4 과발현 벡터를 제작하기 위해, 돼지 MYH1 유전자의 mRNA 전체 염기서열을 확인한 후 총 3부분으로 나누어 DNA 단편을 각각 인위적으로 합성하였다. 첫 번째 단편은 1,423bp로 양쪽에 XbaI과 BglII 효소 site를 양끝 단면에 추가하여 인위적으로 합성하였다. 두 번째 단편은 2,074bp로 BglII와 AatII를 합성하였으며, 세 번째 단편은 2,347bp로 AatII와 EcoRI를 합성하였다. 완성된 3개의 DNA 단편을 상기 효소 site를 이용하여 결합(Ligation)시켜 최종적으로 돼지 MYH4 유전자의 전체 mRNA를 포함하는 유전자 단편을 완성하였다.

이후, 상기 유전자 단편을 과발현 벡터에 도입하기 위해 도 1에 나타낸 바와 같은 CAGGS-EGFP-Puro 벡터를 XbaI과 EcoRI으로 절단한 후, 앞서 제작한 돼지 MYH1 유전자 mRNA의 전체 단편을 삽입시킴으로써 최종적으로 돼지 MYH1 형질전환벡터를 제작을 완료하였다(도 2).

상기 벡터의 구조는 도 2에 나타내었으며, 벡터의 염기 서열은 서열번호 2로 표시하였다.

실시예 2-2. 형질전환 마우스의 제작

실시예 2-2-1. 형질전환 마우스의 제작 방법

상기 실시예 2-1을 통해 제작한 벡터를 이용하여 형질전환 마우스를 제작하였다.

구체적으로, C57BL/6n 마우스의 수정란을 획득한 후 미세주입기법(microinjection)을 사용하여 상기 제작된 형질전환 벡터를 수정란의 핵 안으로 도입하였다.

그 결과, 총 77마리의 F0 founder를 확인하였다.

실시예 2-2-2. mRNA 발현 분석을 통한 외래 유전자 도입 여부 확인

상기 실시예 2-2-1을 통해 제작한 형질전환 마우스에 MYH4 유전자가 도입되었는지 확인하기 위해, 상기 MYH4 유전자의 mRNA 발현 여부를 분석하였다.

구체적으로, PCR 실험 조건은 95℃에서 30초, 60℃에서 30초, 72℃에서 30초를 40회 반복하였으며, 사용한 프라이머는 하기 표 1에 나열하였다.

유전자	구분	방향	염기서열(5'→3')
pMYH4	서열번호 3	Forward	GAGGGAGCTTGAAAATGAGGT
	서열번호 4	Reverse	CTCCCATATGTCCTTCCGAGT

그 결과, 도 3 및 도 4의 a에서 볼 수 있듯이, 10, 13, 15, 44, 50, 58, 67, 69, 75번의 마우스가 MYH4 유전자의 전사 활성을 나타내며, 58번 마우스에서 MYH4 유전자의 mRNA 발현양이 가장 높게 나타남을 확인하였다.

실시예 2-2-3. 단백질 발현 분석을 통한 외래 유전자 도입 여부 확인

상기 실시예 2-2-1을 통해 제작한 형질전환 마우스에 MYH4 유전자가 도입되었는지 확인하기 위해, 상기 유전자의 단백질 발현 여부를 분석하였다.

구체적으로, 야생형 마우스(WT)와 형질전환 마우스(TG)의 후지 근육조직을 채취한 후, RIPA 버퍼에 단백질 분해 억제제를 첨가하여 초음파 분쇄하여 조직을 분해하였다. 이후, 저온원심분리기를 통해 조직과 단백질을 분리하여 상층액에서 단백질을 회수하였다. 회수한 단백질은 BSA 단백질 어세이 시약(bio-rad)를 이용하여 정량한 후, 4x 단백질 로딩 버퍼(1x)로 100℃에서 약 10분간 가열하였다. 준비된 단백질을 이용하여 웨스턴블롯을 수행하기 위해, SDS-PAGE 겔에 약 2시간 동안 상기 단백질을 영동하였다. 이후, 영동된 단백질을 PVDF 멤브레인으로 옮긴 후, 5% 스킴밀크를 이용하여 1시간 동안 블로킹하였고, 실험 목적에 맞는 일차 항체(Anti-Flag M2(F1804, Sigma-Aldrich) 및 b-actin(#4970, Cell signaling))를 첨가하여 4℃에서 밤새 반응시켰다. 다음날 TBST 용액으로 세척한 후 이차 항체를 2시간 동안 반응시킨 뒤, ECL 시약을 처리하였고, LAS-300 luminescent image analyzer system(Fujifilm)을 이용하여 단백질에 결합한 항체의 신호를 확인하였다. 실험에 사용된 이차 항체는 일차 항체에 따라 달리 사용하였다.

그 결과, 도 4의 b에서 볼 수 있듯이, MYH4 유전자의 단백질 발현양은 10번 마우스에서만 특이적으로 발현됨을 확인하였다.

상기 결과를 통해, MYH4 유전자가 삽입된 형질전환 마우스 세포를 선별할 수 있었다.

이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

<110> REPUBLIC OF KOREA(MANAGEMENT : RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION) Jeju National University Industry-Academic Cooperation Foundation <120> A recombinant vector comprising MYH4 gene and use thereof <130> KPA161031-KR <160> 4 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 5814 <212> DNA <213> Sus scrofa <400> 1 atgagttccg accaggaaat ggctattttt ggggaggctg ccccttacct ccgaaagtct 60 gaaaaggagc gcattgaggc ccagaataaa ccttttgatg ccaaaacgtc agtctttgtg 120 gtggagccca aggaatcctt tgtcaaaggg actgtccaga gcagagaagg agggaaagtg 180 acagtgaaga cggaagcagg ggcgactttg acagtgaaag aagaccaggt gttccccatg 240 aaccctccca aatttgacaa gatcgaggac atggccatga tgacccacct gcacgagccc 300 gctgtgctgt acaacctcaa agagcgttac gcagcctgga tgatctacac ctactcgggc 360 ctcttctgtg tcaccgtcaa cccctacaag tggctgccgg tgtacaacgc cgaggtggtg 420 acggcctaca gaggcaaaaa gcgccaggag gccccgcccc acatcttctc catctccgac 480 aacgcctatc agttcatgct gactgatcgg gagaatcagt ctatcttaat caccggagaa 540 tccggggcag gaaagactgt gaacacgaag cgtgtcatcc agtactttgc cacaatcgcc 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aagagacaag cggaagaggc ggaggaacaa tccaacgtca acctctccaa gttccgcaag 5700 ctccagcacg agctggagga ggccgaggaa cgggctgaca ttgctgagtc ccaggtcaac 5760 aagctgcggg tcaagagtcg ggaggttcac acaaaagtca taagtgaaga gtaa 5814 <210> 2 <211> 12229 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CAGGS-MYH4-Flag vector <400> 2 gtcgacattg attattgact agttattaat agtaatcaat tacggggtca ttagttcata 60 gcccatatat ggagttccgc gttacataac ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc 120 ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag 180 ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggact atttacggta aactgcccac ttggcagtac 240 atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg 300 cctggcatta tgcccagtac atgaccttat gggactttcc tacttggcag tacatctacg 360 tattagtcat cgctattacc atgggtcgag gtgagcccca cgttctgctt cactctcccc 420 atctcccccc cctccccacc cccaattttg tatttattta ttttttaatt attttgtgca 480 gcgatggggg cggggggggg gggggcgcgc gccaggcggg gcggggcggg gcgaggggcg 540 gggcggggcg aggcggagag gtgcggcggc agccaatcag agcggcgcgc tccgaaagtt 600 tccttttatg gcgaggcggc ggcggcggcg gccctataaa aagcgaagcg cgcggcgggc 660 gggagtcgct gcgttgcctt cgccccgtgc cccgctccgc gccgcctcgc gccgcccgcc 720 ccggctctga ctgaccgcgt tactcccaca ggtgagcggg cgggacggcc cttctcctcc 780 gggctgtaat tagcgcttgg tttaatgacg gctcgtttct tttctgtggc tgcgtgaaag 840 ccttaaaggg ctccgggagg gccctttgtg cgggggggag cggctcgggg ggtgcgtgcg 900 tgtgtgtgtg cgtggggagc gccgcgtgcg gcccgcgctg cccggcggct gtgagcgctg 960 cgggcgcggc gcggggcttt gtgcgctccg cgtgtgcgcg aggggagcgc ggccgggggc 1020 ggtgccccgc ggtgcggggg ggctgcgagg ggaacaaagg ctgcgtgcgg ggtgtgtgcg 1080 tgggggggtg agcagggggt gtgggcgcgg cggtcgggct gtaacccccc cctgcacccc 1140 cctccccgag ttgctgagca cggcccggct tcgggtgcgg ggctccgtgc ggggcgtggc 1200 gcggggctcg ccgtgccggg cggggggtgg cggcaggtgg gggtgccggg cggggcgggg 1260 ccgcctcggg ccggggaggg ctcgggggag gggcgcggcg gccccggagc gccggcggct 1320 gtcgaggcgc ggcgagccgc agccattgcc ttttatggta atcgtgcgag agggcgcagg 1380 gacttccttt gtcccaaatc tggcggagcc gaaatctggg aggcgccgcc gcaccccctc 1440 tagcgggcgc gggcgaagcg gtgcggcgcc ggcaggaagg aaatgggcgg ggagggcctt 1500 cgtgcgtcgc cgcgccgccg tccccttctc catctccagc ctcggggctg ccgcaggggg 1560 acggctgcct tcggggggga cggggcaggg cggggttcgg cttctggcgt gtgaccggcg 1620 gctctagggc caccatgagt tccgaccagg aaatggctat ttttggggag gctgcccctt 1680 acctccgaaa gtctgaaaag gagcgcattg aggcccagaa taaacctttt gatgccaaaa 1740 cgtcagtctt tgtggtggag cccaaggaat cctttgtcaa agggactgtc cagagcagag 1800 aaggagggaa agtgacagtg aagacggaag caggggcgac tttgacagtg aaagaagacc 1860 aggtgttccc catgaaccct cccaaatttg acaagatcga ggacatggcc atgatgaccc 1920 acctgcacga gcccgctgtg ctgtacaacc tcaaagagcg ttacgcagcc tggatgatct 1980 acacctactc gggcctcttc tgtgtcaccg tcaaccccta caagtggctg ccggtgtaca 2040 acgccgaggt ggtgacggcc tacagaggca aaaagcgcca ggaggccccg ccccacatct 2100 tctccatctc cgacaacgcc tatcagttca tgctgactga tcgggagaat cagtctatct 2160 taatcaccgg agaatccggg gcaggaaaga ctgtgaacac gaagcgtgtc atccagtact 2220 ttgccacaat cgccgtcact ggggagaaga agaaggagga acctactcct ggcaaaatgc 2280 aggggactct ggaagatcag atcatcagtg ccaaccccct gctcgaggcc tttggcaacg 2340 ccaagaccgt gaggaatgac aactcctctc gctttggtaa attcatcagg atccacttcg 2400 gtaccactgg gaagctggct tctgctgaca tcaaaacata tcttctagag aagtctagag 2460 tcactttcca gctaaaggca gaaagaagct accacatttt ttatcagatc atgtctaaca 2520 agaagccaga gctcattgaa atgctcctga tcaccaccaa cccatatgac tacgccttcg 2580 tcagtcaagg ggagatcact gtccccagca ttgatgacca agaggagctg atggccacag 2640 atagtgccat tgaaatcctg ggcttcactt ctgatgaaag ggtgtccatc tacaagctca 2700 caggggcggt aatgcactat ggaaacttga aattcaagca aaagcaacgc gaggagcaag 2760 cagagccaga tggcacagaa gttgctgaca aggctgccta cctccagggt ctgaactctg 2820 ctgacctgct caaagccctc tgctacccca gggtcaaggt cggcaatgag tttgtcacca 2880 aaggccagac tgtccagcag gtgtacaatg cggtgggtgc tctggccaaa gccgtctacg 2940 ataagatgtt cctgtggatg gtcactcgca tcaaccagca gctggacacc aagcagccca 3000 ggcagtactt catcggggtc ttggacatcg ccggctttga gatctttgat ttcaacagcc 3060 tggagcagct gtgcatcaac ttcaccaacg agaaactgca acagtttttc aaccaccaca 3120 tgttcgtgct ggagcaggag gagtacaaga aggaaggcat cgagtgggag ttcatcgact 3180 tcgggatgga cctggccgcc tgcatcgagc tcatcgagaa gcccatgggc atcttctcca 3240 tcctggaaga ggagtgcatg ttccccaagg ccacagacac ctccttcaag aacaagctct 3300 atgaacagca tcttggaaag tccaacaatt tccagaagcc caagcctgcc aaaggcaagg 3360 ccgaggccca cttctccctg atccactacg caggcaccgt ggactacaac attactggct 3420 ggctggacaa gaacaaggac cccctgaatg agacggtggt cgggctgtac cagaagtctt 3480 ccgtgaagac tctggctttc ctctttgctg agagacagag ttctgaagag ggtggtacaa 3540 agaaaggtgg caagaagaag ggttcttctt tccagaccgt gtcagctctt ttcagggaga 3600 atctgaacaa gctgatgacc aacctgagga gcacccaccc tcactttgtg cgctgcatca 3660 tccccaatga gaccaaaact cctggggcca tggagcacga actcgtcctg caccagctga 3720 ggtgtaacgg cgtgctggag ggcatccgca tctgcaggaa gggcttccca agcagaatcc 3780 tttatgcaga cttcaaacag agatacaagg ttctaaatgc aagtgccatc cctgagggtc 3840 agttcattga cagcaagaag gcttcggaga aacttctagg gtctattgat attgaccaca 3900 cccagtacaa atttggtcac accaaggttt tctttaaggc cggcctgttg ggaactctag 3960 aggagatgcg agatgaaaag ctagctcaac tcatcacacg cactcaagcc atgtgcagag 4020 ggttcctgat gagggtggag tttaggaaga tgatggagag gagagagtcc atcttctgca 4080 tccagtacaa tatccgtgcc ttcatgaatg tgaagcactg gccttggatg aagctgtatt 4140 tcaagatcaa gcccctcctc aagagcgcag agacagagaa ggagatggcc aacatgaagg 4200 aagaatttga gaagaccaaa gaagacctgg ctaagtcaga ggcaaaaagg aaagaacttg 4260 aagagaaaat ggtagctctg atgcaagaga aaaatgactt acaactccaa gttcaagctg 4320 aagcagatgg cttggctgat gcagaggaaa gatgtgacca gctgatcaaa accaaaatcc 4380 agctggaagc caaaatcaag gaggtgactg agagagctga ggatgaggaa gagatcaatg 4440 ccgagctgac ggccaagaag aggaaactgg aggatgagtg ctcagaactg aagaaagaca 4500 tcgatgacct tgagctgaca ctggccaagg ttgaaaagga gaaacatgcc acagagaaca 4560 aggtgaaaaa cctcacggaa gagatggcag gccttgatga aaacattgca aagctgacca 4620 aggagaagaa ggccctccag gaggcccacc agcagaccct ggatgacctg caggcagaag 4680 aggacaaagt caacaccctg accaaagcta aaaccaagct agagcagcaa gtggatgacc 4740 ttgaagggtc cttggagcaa gaaaagaaac ttcgcatgga cctagagaga gccaagagga 4800 aactggaagg tgacctcaag ttggcacaag agtccacaat ggatatagaa aatgacaaac 4860 agcaacttga tgagaaactc aaaaagaagg agtttgaaat gagcaatctg caaagcaaga 4920 ttgaagatga acaggccctt gcaatgcagc tgcagaagaa gatcaaggag ttacaggccc 4980 gtactgagga gctggaggaa gagatcgagg cagagcgggc ctccagggcc aaagcagaga 5040 agcagcgctc cgacctctcc cgggaactgg aggagatcag cgagaggctg gaagaagccg 5100 gcggggcgac gtcagcccag attgagatga acaagaagcg cgaggccgag ttccagaaga 5160 tgcgccggga cctggaggag gccaccctgc agcacgaggc cacggcagct gctcttagga 5220 agaagcacgc agacagcgtg gccgagctgg gggagcagat cgacaacctg cagagggtca 5280 agcagaagct ggagaaggag aagagcgagc tgaagatgga aattgatgac cttgctagca 5340 acatggagac cgtctccaaa gccaagggaa acctggaaaa aatgtgccgc acactggaag 5400 accagctcag cgaagtgaag acaaaggagg aggagcatca gcgcctaatc aatgaactgt 5460 cagcccagaa ggcacgttta cagacagaat caggtgaatt ttcacgacag ctagatgaga 5520 aggaagctct ggtgtctcag ctatcccgag gcaaacaagc atttacacaa cagattgagg 5580 agttaaagag gcagctagaa gaggagacta aggccaagag tgccctggcc catgctgtgc 5640 agtcctcccg ccacgactgt gacctgctac gggaacagta tgaggaggag caggaagcca 5700 aggccgaact gcagagggca atgtccaagg ccaacagcga ggttgcccag tggaggacca 5760 aatacgagac ggacgccatc cagcgcaccg aggagctgga ggaggccaag aagaagctgg 5820 cccagcgtct gcaggatgct gaggaacacg tagaagctgt gaatgccaag tgcgcctccc 5880 ttgagaagac caagcagcgg ctccagaatg aggtcgagga cctcatgctt gatgtggaga 5940 ggtccaatgc tgcctgtgcg gctctggata agaagcagag gaactttgac aagatcctag 6000 cagagtggaa acataagtat gaggaaactc aggctgaact tgaggcctcc cagaaggagt 6060 cccgttctct cagcactgag ctgttcaagg tgaagaatgc ctacgaggaa tccctggacc 6120 aactggaaac tctgaagcgg gagaataaga acttgcagca ggagatttct gacctgactg 6180 agcaaattgc agagggagga aagcatatcc atgaattgga gaaagtgaag aaacaaatag 6240 agcaagagaa gagtgaacta caggctgccc tagaggaagc agaggcatct ctagaacatg 6300 aagaaggcaa aatccttcgc atccaacttg agttaaatca ggtgaaatct gagattgacc 6360 gtaaaattgc tgagaaagat gaggaaatcg atcagatgaa gaggaaccac attagagtgg 6420 tagagtccat gcagagcacg ctggatgctg agatcaggag caggaatgat gccctgagga 6480 tcaagaagaa gatggaggga gacctcaatg aaatggaaat ccagctgaac cacgccaacc 6540 gccaagctac tgaggcaata aggaatctta gaaacacaca aggagtactg aaggacactc 6600 agctccattt ggatgatgcc atcagaggcc aggatgacct taaagaacaa ctggccatgg 6660 tggaacgcag agccaacctg atgcaggctg agattgaaga gctgagggca tcgctggagc 6720 agacagagag gagcaggaga gtggcagagc aagagcttct ggatgccagt gagcgtgtgc 6780 agctcttaca cacacagaac accagcctga tcaacaccaa gaagaagctg gagacagaca 6840 tctcccaaat ccagggagag atggaggaca ttgtccagga agctcgcaac gcagaagaga 6900 aggccaagaa ggccatcact gatgcagcca tgatggccga ggagctgaag aaggagcagg 6960 acaccagcgc ccacctagag cggatgaaga agaacctgga gcagacggtg aaggacctgc 7020 agcaccgcct ggacgaggcg gagcagctgg ccctgaaggg cgggaagaag cagatccaga 7080 agctggaggc cagggtgagg gagcttgaaa atgaggttga aaatgaacag aagcgcaatg 7140 ttgaggctgt caagggtctt cggaaacatg agagaagagt gaaggaactc acttaccaga 7200 ctgaggagga ccgaaagaat gttctcaggc tgcaggactt ggtggacaaa ctacaatcca 7260 aagttaaagc ttacaagaga caagcggaag aggcggagga acaatccaac gtcaacctct 7320 ccaagttccg caagctccag cacgagctgg aggaggccga ggaacgggct gacattgctg 7380 agtcccaggt caacaagctg cgggtcaaga gtcgggaggt tcacacaaaa gtcataagtg 7440 aagaggatta caaggatgac gacgataagt aagaattcac tcctcaggtg caggctgcct 7500 atcagaaggt ggtggctggt gtggccaatg ccctggctca caaataccac tgagatcttt 7560 ttccctctgc caaaaattat ggggacatca tgaagcccct tgagcatctg acttctggct 7620 aataaaggaa atttattttc attgcaatag tgtgttggaa ttttttgtgt ctctcactcg 7680 gaaggacata tgggagggca aatcatttaa aacatcagaa tgagtatttg gtttagagtt 7740 tggcaacata tgccatatgc tggctgccat gaacaaaggt ggctataaag aggtcatcag 7800 tatatgaaac agccccctgc tgtccattcc ttattccata gaaaagcctt gacttgaggt 7860 tagatttttt ttatattttg ttttgtgtta tttttttctt taacatccct aaaattttcc 7920 ttacatgttt tactagccag atttttcctc ctctcctgac tactcccagt catagctgtc 7980 cctcttctct tatgaagatc cctcgacctg cagttggggt tgcgcctttt ccaaggcagc 8040 cctgggtttg cgcagggacg cggctgctct gggcgtggtt ccgggaaacg cagcggcgcc 8100 gaccctgggt ctcgcacatt cttcacgtcc gttcgcagcg tcacccggat cttcgccgct 8160 acccttgtgg gccccccggc gacgcttcct gctccgcccc taagtcggga aggttccttg 8220 cggttcgcgg cgtgccggac gtgacaaacg gaagccgcac gtctcactag taccctcgca 8280 gacggacagc gccagggagc aatggcagcg cgccgaccgc gatgggctgt ggccaatagc 8340 ggctgctcag cagggcgcgc cgagagcagc ggccgggaag gggcggtgcg ggaggcgggg 8400 tgtggggcgg tagtgtgggc cctgttcctg cccgcgcggt gttccgcatt ctgcaagcct 8460 ccggagcgca cgtcggcagt cggctccctc gttgaccgaa tcaccgacct ctctccccag 8520 ggggatccac cggagcttac catgaccgag tacaagccca cggtgcgcct cgccacccgc 8580 gacgacgtcc ccagggccgt acgcaccctc gccgccgcgt tcgccgacta ccccgccacg 8640 cgccacaccg tcgatccgga ccgccacatc gagcgggtca ccgagctgca agaactcttc 8700 ctcacgcgcg tcgggctcga catcggcaag gtgtgggtcg cggacgacgg cgccgcggtg 8760 gcggtctgga ccacgccgga gagcgtcgaa gcgggggcgg tgttcgccga gatcggcccg 8820 cgcatggccg agttgagcgg ttcccggctg gccgcgcagc aacagatgga aggcctcctg 8880 gcgccgcacc ggcccaagga gcccgcgtgg ttcctggcca ccgtcggcgt ctcgcccgac 8940 caccagggca agggtctggg cagcgccgtc gtgctccccg gagtggaggc ggccgagcgc 9000 gccggggtgc ccgccttcct ggagacctcc gcgccccgca acctcccctt ctacgagcgg 9060 ctcggcttca ccgtcaccgc cgacgtcgag gtgcccgaag gaccgcgcac ctggtgcatg 9120 acccgcaagc ccggtgcctg acgcccgccc cacgacccgc agcgcccgac cgaaaggagc 9180 gcacgacccc atgcatcggt acctttaaga ccaatgactt acaaggcagc tgtagatctt 9240 agccactttt taaaagaaaa ggggggactg gaagggctaa ttcactccca acgaagacaa 9300 gatctgcttt ttgcttgtac tgggtctctc tggttagacc agatctgagc ctgggagctc 9360 tctggctaac tagggaaccc actgcttaag cctcaataaa gcttgccttg agtgcttcaa 9420 gtagtgtgtg cccgtctgtt gtgtgactct ggtaactaga gatccctcag acccttttag 9480 tcagtgtgga aaatctctag cagtagtagt tcatgtcatc ttattattca gtatttataa 9540 cttgcaaaga aatgaatatc agagagtgag aggaacttgt ttattgcagc ttataatggt 9600 tacaaataaa gcaatagcat cacaaatttc acaaataaag catttttttc actgcattct 9660 agttgtggtt tgtccaaact catcaatgta tcttatcatg tctgctgcag cccaagcttg 9720 gcgtaatcat ggtcatagct gtttcctgtg tgaaattgtt atccgctcac aattccacac 9780 aacatacgag ccggaagcat aaagtgtaaa gcctggggtg cctaatgagt gagctaactc 9840 acattaattg cgttgcgctc actgcccgct ttccagtcgg gaaacctgtc gtgccagcgg 9900 atccgcatct caattagtca gcaaccatag tcccgcccct aactccgccc atcccgcccc 9960 taactccgcc cagttccgcc cattctccgc cccatggctg actaattttt tttatttatg 10020 cagaggccga ggccgcctcg gcctctgagc tattccagaa gtagtgagga ggcttttttg 10080 gaggcctagg cttttgcaaa aagctaactt gtttattgca gcttataatg gttacaaata 10140 aagcaatagc atcacaaatt tcacaaataa agcatttttt tcactgcatt ctagttgtgg 10200 tttgtccaaa ctcatcaatg tatcttatca tgtctggatc cgctgcatta atgaatcggc 10260 caacgcgcgg ggagaggcgg tttgcgtatt gggcgctctt ccgcttcctc gctcactgac 10320 tcgctgcgct cggtcgttcg gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata 10380 cggttatcca cagaatcagg ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa 10440 aaggccagga accgtaaaaa ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct 10500 gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa 10560 agataccagg cgtttccccc tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg 10620 cttaccggat acctgtccgc ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcaatgctca 10680 cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa 10740 ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg 10800 gtaagacacg acttatcgcc actggcagca gccactggta acaggattag cagagcgagg 10860 tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag tggtggccta actacggcta cactagaagg 10920 acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc 10980 tcttgatccg gcaaacaaac caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg caagcagcag 11040 attacgcgca gaaaaaaagg atctcaagaa gatcctttga tcttttctac ggggtctgac 11100 gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg attttggtca tgagattatc aaaaaggatc 11160 ttcacctaga tccttttaaa ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag tatatatgag 11220 taaacttggt ctgacagtta ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc agcgatctgt 11280 ctatttcgtt catccatagt tgcctgactc cccgtcgtgt agataactac gatacgggag 11340 ggcttaccat ctggccccag tgctgcaatg ataccgcgag acccacgctc accggctcca 11400 gatttatcag caataaacca gccagccgga agggccgagc gcagaagtgg tcctgcaact 11460 ttatccgcct ccatccagtc tattaattgt tgccgggaag ctagagtaag tagttcgcca 11520 gttaatagtt tgcgcaacgt tgttgccatt gctacaggca tcgtggtgtc acgctcgtcg 11580 tttggtatgg cttcattcag ctccggttcc caacgatcaa ggcgagttac atgatccccc 11640 atgttgtgca aaaaagcggt tagctccttc ggtcctccga tcgttgtcag aagtaagttg 11700 gccgcagtgt tatcactcat ggttatggca gcactgcata attctcttac tgtcatgcca 11760 tccgtaagat gcttttctgt gactggtgag tactcaacca agtcattctg agaatagtgt 11820 atgcggcgac cgagttgctc ttgcccggcg tcaatacggg ataataccgc gccacatagc 11880 agaactttaa aagtgctcat cattggaaaa cgttcttcgg ggcgaaaact ctcaaggatc 11940 ttaccgctgt tgagatccag ttcgatgtaa cccactcgtg cacccaactg atcttcagca 12000 tcttttactt tcaccagcgt ttctgggtga gcaaaaacag gaaggcaaaa tgccgcaaaa 12060 aagggaataa gggcgacacg gaaatgttga atactcatac tcttcctttt tcaatattat 12120 tgaagcattt atcagggtta ttgtctcatg agcggataca tatttgaatg tatttagaaa 12180 aataaacaaa taggggttcc gcgcacattt ccccgaaaag tgccacctg 12229 <210> 3 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> pMYH4 F-primer <400> 3 gagggagctt gaaaatgagg t 21 <210> 4 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> pMYH4 R-primer <400> 4 ctcccatatg tccttccgag t 21

Claims (4)

1. 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 MYH4 유전자를 포함하는, 육질 향상용 재조합 벡터로서,
   상기 재조합 벡터는 MYH4 유전자를 과발현하는 것인, 벡터.
   
2. 삭제
3. 제1항에 있어서, 상기 육질은 근내지방함량, 육색, 보수력 및 전단력으로 구성된 군으로부터 선택되는 것인, 벡터.
   
4. 제1항에 있어서, 상기 벡터는 CAGGS 프로모터(CAGGS promoter)를 포함하는 것인, 벡터.

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