CN109929847B - 一种pex26基因、蛋白及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及抗病毒基因领域，具体公开了一种新的干扰素刺激基因人PEX26基因、蛋白及其应用。并首次利用分子生物学结合细胞生物学实验的方法，证明了PEX26基因具有抑制埃博拉病毒转录复制的作用。分析表明，相对于没有过表达PEX26基因的细胞，过表达PEX26基因的细胞可以显著抑制埃博拉病毒的复制，因此可以针对PEX26基因进行深入的功能研究，从而确定其抗埃博拉病毒的关键蛋白结构域或氨基酸。利用分子生物学方法，将PEX26基因序列构建成过表达质粒，利用病毒等载体，可将PEX26基因过表达于宿主细胞，从而增强宿主机体抗埃博拉病毒感染能力。

Description

一种PEX26基因、蛋白及其应用

技术领域

本发明涉及基因技术领域，具体地说，涉及干扰素刺激基因人PEX26基因、蛋白及其应用。

背景技术

埃博拉出血热是由埃博拉病毒（Ebola virus，EBOV）引起的一种急性出血性传染病。主要通过接触病人或感染动物的血液、体液、分泌物和排泄物等而感染，临床主要表现为突起发热、出血和多脏器损害。2014 年爆发的埃博拉病毒疫情席卷了西非各地，极高的致死率引起了全世界的恐慌。

埃博拉病毒（EBOV）属于丝状病毒科，呈长丝状，是单股负链RNA 病毒，有18959 个碱基，有囊膜。纯病毒粒子由一个螺旋形核糖核壳复合体构成，含负链线性RNA 分子和4个结构蛋白。埃博拉的病毒基因组编码含七个结构蛋白和一个非结构蛋白。基因的顺序是：3’端－NP－VP35－VP40－GP－VP30－VP24－L－5’端，其中每一种蛋白产物由一种单独的mRNA 所编码。至今，已发现5 种不同的埃博拉病毒。其中4 种首次发现于非洲，对人类和非人类灵长类动物具有致病能力。五种病毒分别为苏丹埃博拉病毒（SEBOV，发现于1976 年）、扎伊尔埃博拉病毒（ZEBOV，发现于1976 年）、科特迪瓦埃博拉病毒（CIEBOV，发现于1994年）和本迪布焦埃博拉病毒（BEBOV，发现于2007 年）。第5 种病毒，即雷斯顿埃博拉病毒（REBOV，发现于1989 年），仅发现于菲律宾，迄今似乎只在非人类、灵长类动物和家猪中引起疾病。不同的病毒株具有不同的毒性，其中扎伊尔埃博拉病毒（ZEBOV） 致死率最高。

由于尚无有效的经过系统研究的药物用于EBOV感染患者的治疗，目前的治疗方法以积极的对症和支持治疗为主，主要包括：维持水、电解质平衡，补充体液和电解质；预防和控制出血，维持血氧及血压平衡，及时控制继发感染；治疗肾功能衰竭和出血，弥散性血管内凝血等并发症。另外由于埃博拉康复者的血清在治疗疾病中无显著作用，常见的抗病毒方法，如干扰素，利巴韦林均无效。EBOV 的疫苗研发始于20年前，目前已有多种免疫策略和模型动物，但尚无一种疫苗通过FDA 批准。EBOV 糖蛋白是唯一处于病毒表面的糖蛋白，也是最主要的免疫靶标。EBOV 疫苗依据抗原递送方式主要分为三类包括基于非复制性病毒载体的疫苗，基于复制性病毒载体的疫苗和基于病毒蛋白抗原的疫苗，其中由葛兰素史克公司与美国国家过敏和传染病研究所联合开发的ChAd3-ZEBOV 和由加拿大公共卫生署开发的VSV-EBOV 混合型疫苗是最具潜力的，目前已进入临床研究阶段，但仍需更多研究证明其有效性。与疫苗相比，小分子药物生产迅速、产能大、性质稳定，能够耐受常温储存及运输，可以通过非侵入性的口服方式进行给药，无需依赖特殊设备，对于通过体液、接触传播的埃博拉病毒感染具有较好的治疗安全性，能够克服疫苗生产周期长、价格高、活性不稳定及抗原多样性的缺点。另外，以上市药物为基础，筛选能够有效阻断EBOV 进入和复制的小分子化合物，不仅能够使新药的研发机率大幅度提升而且可以有效的缩短生产周期和降低制药成本，为国家埃博拉病毒感染的紧急防治提供支持。

目前，有关抗埃博拉病毒的疫苗和小分子药物虽然已经有很多报道，但是对于天然免疫宿主细胞因子在抗埃博拉病毒感染中的报道却很少，因此，研究天然免疫宿主细胞因子的抗埃博拉机制将成为今后一项很重要的课题，并未将来抗埃博拉药物的开发提供新的靶点。

在先天免疫中，I型干扰素信号通路在监测和防御病毒感染以及调控随后的适应性免疫应答中发挥了关键作用。在病毒感染和复制过程中，宿主模式识别受体感知来自病毒的核酸和其他成分，称为病原体相关分子模式，以产生一系列信号级联反应（RIG-I/cGAS-MAVS/STING-TBK1/IKKi-IRF3/7），激活I型干扰素和其他细胞因子的产生。这些分泌的I型干扰素通过IFNAR-JAK-STAT途径进一步诱导和扩增大量干扰素刺激基因的转录激活，其促进宿主对病毒的控制和清除。

发明内容

为了寻找给抗埃博拉病毒感染提供新的研究方向，本发明的目的是提供抗病毒PEX26基因、蛋白及其应用，通过所述PEX26基因及蛋白在细胞中的过表达可特异性抑制丝状病毒在细胞中的转录复制。

为了实现本发明目的， 本发明人根据文献构建并进一步优化了埃博拉小型复制子系统（见附图1），该系统可以模拟埃博拉病毒基因组的转录和复制过程，是研究埃博拉病毒转录复制机制的重要工具。

本发明的一个目的在于，提供一种新的基因——PEX26基因，为SEQ ID NO .1所示的核苷酸序列或SEQ ID No .1所示核苷酸序列经取代、缺失和/或添加一个或几个核苷酸所获得的具有同等功能的由SEQ ID No .1衍生的核苷酸序列。本发明的一个目的在于，提供一种由其表达的蛋白，蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO .2所示。本发明的PEX26基因为一种新的干扰素刺激基因，为人的PEX26基因，并首次利用分子生物学结合细胞生物学实验的方法，证明了PEX26基因具有抑制埃博拉病毒转录复制的作用。

本发明的另一目的，在于提供一种重组载体，将PEX26基因的CDS序列构建到能够高效表达外源基因的载体中，得到重组载体，用于转染入人胚肾HEK293T细胞中，通过所述PEX26基因在细胞中的过表达可特异性抑制丝状病毒在细胞中的转录复制。

作为优选，所述载体为含有强启动子的真核表达载体，以实现PEX26基因的过表达。

更为优选的，为了更好的实现PEX26基因的过表达，载体核苷酸序列如SEQ IDNO.3所示。上述载体通过chicken β-actin 启动子启动PEX26基因在真核细胞里高表达。

利用上述载体构建重组载体时，将PEX26基因的CDS序列插入到SEQ ID NO .3所示序列的1768bp处。

本发明的再一目的在于，提供PEX26基因、蛋白或重组载体在抗病毒中的应用，所述应用包括通过PEX26基因在细胞中的过表达来抑制病毒在细胞中的转录复制，优选地，所述病毒为Cuevavirus病毒、马尔堡病毒和埃博拉病毒等丝状病毒，更优选地所述病毒为埃博拉病毒。

PEX26基因在转染埃博拉病毒小型复制子系统的细胞中过表达，能够显著抑制埃博拉病毒小型复制子系统的转录复制。需要说明的是，本发明请求保护所述PEX26基因在抗病毒（以埃博拉病毒为例）中的应用，由于抗埃博拉病毒并不等同于治疗埃博拉病毒感染，抑制埃博拉病毒的复制也并不等同于感染埃博拉病毒的个体能够被治愈，因此，本发明请求保护的技术方案不涉及疾病的诊断和治疗方法。PEX26基因本发明首次利用分子生物学结合细胞生物学实验的方法，证明了PEX26基因具有抑制埃博拉病毒转录复制的作用。PEX26基因由于埃博拉病毒和其他三种丝状病毒的病毒机理存在较高的相似性，因此申请人有理由相信本发明的PEX26基因对其他三种丝状病毒同样有效。

有益效果：本发明所提供PEX26基因、蛋白，其用于抑制病毒，特别是可以显著抑制埃博拉病毒的转录复制。相对于没有过表达PEX26基因的细胞，过表达PEX26基因的细胞可以显著抑制埃博拉病毒的复制，因此可以针对PEX26基因进行深入的功能研究，从而确定其抗埃博拉病毒的关键蛋白结构域或氨基酸。利用分子生物学方法，将PEX26基因序列构建成过表达质粒，利用病毒等载体，可将PEX26基因过表达于宿主细胞，从而增强宿主机体抗埃博拉病毒感染能力。

附图说明

图1为本发明所涉及的埃博拉小型复制子系统的模式图。

图2为本发明实施例1中所述载体pCAGGS的质粒图谱。

图3为本发明实施例2中在HEK293T细胞中过表达PEX26基因，抑制埃博拉病毒小型复制子系统的转录复制，其中IRF1（Interferon Regulatory Factor 1，干扰素调控因子1）为阳性对照。

实施方式

下面将结合实施例对本发明的优选实施方式进行详细说明。需要理解的是以下实施例的给出仅是为了起到说明的目的，并不是用于对本发明的范围进行限制。本领域的技术人员在不背离本发明的宗旨和精神的情况下，可以对本发明进行各种修改和替换。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

本实施例实验操作中包含：

1)基因亚克隆及载体构建

以本实验前期构建的含有PEX26基因（NM_001127649）的表达载体为模板，通过PCR扩增回收，双酶切后，利用T4连接酶将目的基因连接到相应的载体上。

2)细胞培养及转染

人胚肾HEK293T细胞系由本实验室前期所冻存。细胞复苏培养严格无菌操作，加完全培养基(DMEM+10％FBS)进行培养，37℃，5％CO2条件下培养，每两天换一次液。细胞转染参照lipfectamin2000（Thermo Fisher Scientific）说明书操作。

实施例1人PEX26基因过表达载体的构建

根据PEX26基因（NM_001127649）的CDS序列，设计其真核表达载体引物eBF/eBR（序列见SEQ ID No.4和SEQ ID No.5），上、下游引物都是分别引入EcoR I和Bgl II酶切位点(下划线标注GAATTC和AGATCT)；此外，上游引物在起始密码子ATG之前引入kozak(GCCACC)序列。引物序列如下：

eBF：5 '-TTT GAATTC GCCACCatgaagagcgattcttcgac-3 '，

eBR：5 '-GGG AGATCT tcagtcacggatgcggagct-3 '。

将扩增得到的PEX26基因的C D S序列(如序列表SEQ ID NO .1所示) 导入原始载体pCAGGS(载体图谱如图2所示)，构建得到pCAGGS-PEX26基因载体。由于pCAGGS空载体具有chicken β-actin强启动子，能够使导入其中的PEX26基因有效地高表达。

实施例2利用细胞学实验方法验证人PEX26基因抗埃博拉病毒小型复制子转录复制

转染前一天，按5×10⁴个细胞/孔的密度将HEK293T细胞接种到24孔板上。

利用lipfectamin2000转染试剂将pCAGGS-PEX26基因表达质粒以及pCAGGS空载对照质粒（2ug）转染入HEK293T细胞，8小时后，再转染埃博拉小型复制子体系（minigenome-Rluc 250ng、T7 250ng、L 1ug、NP 125ng、VP30 125ng、VP35 75ng），16小时后换为新鲜培养基，再过24小时将细胞裂解后利用荧光素酶报告系统和酶标仪检测Rluc活性。

结果显示：过表达PEX26基因对埃博拉小型复制子系统的抑制作用如图3所示，在野生型和干扰素受体敲除的HEK293T细胞中，过表达PEX26基因均能够显著抑制小型复制子荧光素酶的活性，表明PEX26基因对埃博拉病毒的转录和复制阶段具有显著的抑制作用，而且该作用不依赖于PEX26基因对I型干扰素通路的调控作用。

综上所述，本发明人通过比较过表达PEX26基因的HEK293T和阴性对照(NC)细胞中荧光素酶活性，从而分析PEX26基因对于埃博拉病毒小型复制子系统在HEK293T细胞中转录复制的影响。最终得出结论：人PEX26基因能够抑制埃博拉病毒的转录复制。

本发明所述的编码PEX26基因蛋白的基因可用于制备抗埃博拉药物及治疗方法，应用前景十分广阔。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

序列表

<110> 苏州系统医学研究所

<120> 一种PEX26基因、蛋白及其应用

<130> xzhc623

<141> 2019-02-27

<160> 5

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 918

<212> DNA

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 1

atgaagagcg attcttcgac ctctgcagcc cccctcaggg ggctcggggg acccctgcgc 60

agcagcgagc cggtgcgcgc ggtcccggcc cgggcgccgg ccgtggacct tctggaggag 120

gcggccgacc tcctggtggt gcacctggac ttccgggcgg cgctggagac ctgcgagcgg 180

gcctggcaga gtctggccaa ccacgccgtg gcagaggaac ccgcgggcac ctcattggag 240

gtgaagtgct ccctgtgtgt tgtggggatc caggccctgg cagaaatgga tcggtggcaa 300

gaagtcctct cctgggtcct tcagtattac caggtccctg aaaagctacc ccccaaagtc 360

ctggagctgt gcattctttt atacagcaaa atgcaagagc ctggagctgt gctggatgtg 420

gtgggtgcct ggctccaaga cccagccaat caaaaccttc cagaatatgg agccttggca 480

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gtggtgggct ctgcagcctt tggtgaggag cggcgactgg atgtacttca ggccattcac 600

acagcgaggc agcagcagaa acaggaacac tcaggctctg aggaggccca gaagccaaac 660

ctggaaggct ctgtctccca caagttcctg tcactaccga tgttggttcg ccagctttgg 720

gactctgcgg tgagccactt cttttctctg cccttcaaaa agagtctcct ggctgccttg 780

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tacaagctgg cccagctctt ccgctggatc cggaaggctg cattttctcg cctctaccag 900

ctccgcatcc gtgactga 918

<210> 2

<211> 305

<212> PRT

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 2

Met Lys Ser Asp Ser Ser Thr Ser Ala Ala Pro Leu Arg Gly Leu Gly

1 5 10 15

Gly Pro Leu Arg Ser Ser Glu Pro Val Arg Ala Val Pro Ala Arg Ala

20 25 30

Pro Ala Val Asp Leu Leu Glu Glu Ala Ala Asp Leu Leu Val Val His

35 40 45

Leu Asp Phe Arg Ala Ala Leu Glu Thr Cys Glu Arg Ala Trp Gln Ser

50 55 60

Leu Ala Asn His Ala Val Ala Glu Glu Pro Ala Gly Thr Ser Leu Glu

65 70 75 80

Val Lys Cys Ser Leu Cys Val Val Gly Ile Gln Ala Leu Ala Glu Met

85 90 95

Asp Arg Trp Gln Glu Val Leu Ser Trp Val Leu Gln Tyr Tyr Gln Val

100 105 110

Pro Glu Lys Leu Pro Pro Lys Val Leu Glu Leu Cys Ile Leu Leu Tyr

115 120 125

Ser Lys Met Gln Glu Pro Gly Ala Val Leu Asp Val Val Gly Ala Trp

130 135 140

Leu Gln Asp Pro Ala Asn Gln Asn Leu Pro Glu Tyr Gly Ala Leu Ala

145 150 155 160

Glu Phe His Val Gln Arg Val Leu Leu Pro Leu Gly Cys Leu Ser Glu

165 170 175

Ala Glu Glu Leu Val Val Gly Ser Ala Ala Phe Gly Glu Glu Arg Arg

180 185 190

Leu Asp Val Leu Gln Ala Ile His Thr Ala Arg Gln Gln Gln Lys Gln

195 200 205

Glu His Ser Gly Ser Glu Glu Ala Gln Lys Pro Asn Leu Glu Gly Ser

210 215 220

Val Ser His Lys Phe Leu Ser Leu Pro Met Leu Val Arg Gln Leu Trp

225 230 235 240

Asp Ser Ala Val Ser His Phe Phe Ser Leu Pro Phe Lys Lys Ser Leu

245 250 255

Leu Ala Ala Leu Ile Leu Cys Leu Leu Val Val Arg Phe Asp Pro Ala

260 265 270

Ser Pro Ser Ser Leu His Phe Leu Tyr Lys Leu Ala Gln Leu Phe Arg

275 280 285

Trp Ile Arg Lys Ala Ala Phe Ser Arg Leu Tyr Gln Leu Arg Ile Arg

290 295 300

Asp

305

<210> 3

<211> 4749

<212> DNA

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 3

gtcgacattg attattgact agttattaat agtaatcaat tacggggtca ttagttcata 60

gcccatatat ggagttccgc gttacataac ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc 120

ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag 180

ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggact atttacggta aactgcccac ttggcagtac 240

atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg 300

cctggcatta tgcccagtac atgaccttat gggactttcc tacttggcag tacatctacg 360

tattagtcat cgctattacc atgggtcgag gtgagcccca cgttctgctt cactctcccc 420

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gggcggggcg aggcggagag gtgcggcggc agccaatcag agcggcgcgc tccgaaagtt 600

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gggagtcgct gcgttgcctt cgccccgtgc cccgtcccgc gccgcctcgc gccgcccgcc 720

ccggctctga ctgaccgcgt tactcccaca ggtgagcggg cgggacggcc cttctcctcc 780

gggctgtaat tagcgcttgg tttaatgacg gctcgtttct tttctgtggc tgcgtgaaag 840

ccttaaaggg ctccgggagg gccctttgtg cgggggggag cggctcgggg ggtgcgtgcg 900

tgtgtgtgtg cgtggggagc gccgcgtgcg gcccgcgctg cccggcggct gtgagcgctg 960

cgggcgcggc gcggggcttt gtgcgctccg cgtgtgcgcg aggggagcgc ggccgggggc 1020

ggtgccccgc ggtgcggggg ggctgcgagg ggaacaaagg ctgcgtgcgg ggtgtgtgcg 1080

tgggggggtg agcagggggt gtgggcgcgg cggtcgggct gtaacccccc cctgcacccc 1140

cctccccgag ttgctgagca cggcccggct tcgggtgcgg ggctccgtgc ggggcgtggc 1200

gcggggctcg ccgtgccggg cggggggtgg cggcaggtgg gggtgccggg cggggcgggg 1260

ccgcctcggg ccggggcggg ctcgggggag gggcgcggcg gccccggagc gccggcggct 1320

gtcgaggcgc ggcgagccgc agccattgcc ttttatggta atcgtgcgag agggcgcagg 1380

gacttccttt gtcccaaatc tggcggagcc gaaatctggg aggcgccgcc gcaccccctc 1440

tagcgggcgc gggcgaagcg gtgcggcgcc ggcaggaagg aaatgggcgg ggagggcctt 1500

cgtgcgtcgc cgcgccgccg tccccttctc catctccagc ctcggggctg ccgcaggggg 1560

acggctgcct tcggggggga cggggcaggg cggggttcgg cttctggcgt gtgaccggcg 1620

gctctagagc ctctgctaac catgttcatg ccttcttctt tttcctacag ctcctgggca 1680

acgtgctggt tattgtgctg tctcatcatt ttggcaaaga attcgagctc gcggccgcat 1740

cgatcttaag tcgcgactcg agctagcaga tctttttccc tctgccaaaa attatgggga 1800

catcatgaag ccccttgagc atctgacttc tggctaataa aggaaattta ttttcattgc 1860

aatagtgtgt tggaattttt tgtgtctctc actcggaagg acatatggga gggcaaatca 1920

tttaaaacat cagaatgagt atttggttta gagtttggca acatatgccc atatgctggc 1980

tgccatgaac aaaggttggc tataaagagg tcatcagtat atgaaacagc cccctgctgt 2040

ccattcctta ttccatagaa aagccttgac ttgaggttag atttttttta tattttgttt 2100

tgtgttattt ttttctttaa catccctaaa attttcctta catgttttac tagccagatt 2160

tttcctcctc tcctgactac tcccagtcat agctgtccct cttctcttat ggagatccct 2220

cgacctgcag cccaagcttg gcgtaatcat ggtcatagct gtttcctgtg tgaaattgtt 2280

atccgctcac aattccacac aacatacgag ccggaagcat aaagtgtaaa gcctggggtg 2340

cctaatgagt gagctaactc acattaattg cgttgcgctc actgcccgct ttccagtcgg 2400

gaaacctgtc gtgccagcgg atccgcatct caattagtca gcaaccatag tcccgcccct 2460

aactccgccc atcccgcccc taactccgcc cagttccgcc cattctccgc cccatggctg 2520

actaattttt tttatttatg cagaggccga ggccgcctcg gcctctgagc tattccagaa 2580

gtagtgagga ggcttttttg gaggcctagg cttttgcaaa aagctaactt gtttattgca 2640

gcttataatg gttacaaata aagcaatagc atcacaaatt tcacaaataa agcatttttt 2700

tcactgcatt ctagttgtgg tttgtccaaa ctcatcaatg tatcttatca tgtctggatc 2760

cgctgcatta atgaatcggc caacgcgcgg ggagaggcgg tttgcgtatt gggcgctctt 2820

ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg gctgcggcga gcggtatcag 2880

ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg ggataacgca ggaaagaaca 2940

tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa ggccgcgttg ctggcgtttt 3000

tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt cagaggtggc 3060

gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc tggaagctcc ctcgtgcgct 3120

ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc ctttctccct tcgggaagcg 3180

tggcgctttc tcaatgctca cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc gttcgctcca 3240

agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta tccggtaact 3300

atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc actggcagca gccactggta 3360

acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag tggtggccta 3420

actacggcta cactagaagg acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag ccagttacct 3480

tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac caccgctggt agcggtggtt 3540

tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg atctcaagaa gatcctttga 3600

tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg attttggtca 3660

tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa ttaaaaatga agttttaaat 3720

caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta ccaatgctta atcagtgagg 3780

cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt tgcctgactc cccgtcgtgt 3840

agataactac gatacgggag ggcttaccat ctggccccag tgctgcaatg ataccgcgag 3900

acccacgctc accggctcca gatttatcag caataaacca gccagccgga agggccgagc 3960

gcagaagtgg tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc tattaattgt tgccgggaag 4020

ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt tgttgccatt gctacaggca 4080

tcgtggtgtc acgctcgtcg tttggtatgg cttcattcag ctccggttcc caacgatcaa 4140

ggcgagttac atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt tagctccttc ggtcctccga 4200

tcgttgtcag aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat ggttatggca gcactgcata 4260

attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt gactggtgag tactcaacca 4320

agtcattctg agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc ttgcccggcg tcaatacggg 4380

ataataccgc gccacatagc agaactttaa aagtgctcat cattggaaaa cgttcttcgg 4440

ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag ttcgatgtaa cccactcgtg 4500

cacccaactg atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt ttctgggtga gcaaaaacag 4560

gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg gaaatgttga atactcatac 4620

tcttcctttt tcaatattat tgaagcattt atcagggtta ttgtctcatg agcggataca 4680

tatttgaatg tatttagaaa aataaacaaa taggggttcc gcgcacattt ccccgaaaag 4740

tgccacctg 4749

<210> 4

<211> 35

<212> DNA

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 4

tttgaattcg ccaccatgaa gagcgattct tcgac 35

<210> 5

<211> 29

<212> DNA

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 5

gggagatctt cagtcacgga tgcggagct 29

Claims (6)

1.一种PEX26蛋白在制备抗病毒药物中的应用，其特征在于，所述病毒为埃博拉病毒，所述PEX26蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.一种PEX26编码基因及其重组载体在制备抗病毒药物中的应用，其特征在于，所述病毒为埃博拉病毒，通过所述PEX26基因在细胞中的过表达可特异性抑制病毒在细胞中的转录复制，所述PEX26基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求2所述的PEX26编码基因及其重组载体在制备抗病毒药物中的应用，其特征在于，将PEX26基因的CDS序列构建到能够高效表达外源基因的载体中，得到重组载体，将该重组载体导入人胚肾细胞HEK293T细胞中，通过所述PEX26基因在细胞中的过表达可特异性抑制病毒在细胞中的转录复制。

4.根据权利要求3所述的PEX26编码基因及其重组载体在制备抗病毒药物中的应用，其特征在于，所述载体为含有强启动子的真核表达载体。

5.根据权利要求4所述的PEX26编码基因及其重组载体在制备抗病毒药物中的应用，其特征在于，所述表达外源基因的载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，用于制备重组载体的表达外源基因的载体通过chicken β-actin 启动子启动PEX26基因在真核细胞里高表达。

6.根据权利要求5所述的编码基因及其重组载体在制备抗病毒药物中的应用，其特征在于，所述重组载体还包括将PEX26基因的CDS序列插入到SEQID NO.3所示序列的1768bp处。