KR101876236B1 - 천연물의 염장 발효 토굴 숙성 추출물을 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

천연물의 염장 발효 토굴 숙성 추출물을 함유하는 화장료 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 천연물의 발효 숙성 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 적소두, 녹두, 흑두, 의이인, 대맥, 현미 또는 해양 심층수에 일정량의 소금을 첨가하여 자연 발효시킨 후 이를 토굴 숙성하여 얻은 염장 발효 토굴 숙성 추출물을 함유함으로써 항산화 및 항노화 효과를 갖는 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

천연물의 염장 발효 토굴 숙성 추출물을 함유하는 화장료 조성물{Cosmetic composition containing fermented and aging extracts with salt of natural materials in underground cave}
본 발명은 천연물의 발효 숙성 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 적소두, 녹두, 흑두, 의이인, 대맥, 현미 또는 해양 심층수의 염장 발효 토굴 숙성 추출물을 함유함으로써 항산화 및 항노화 효능을 가지는 화장료 조성물에 관한 것이다.
인간의 피부는 나이가 들어감에 따라 여러 가지 내적, 외적 요인에 의해 변화를 겪는다. 즉, 내적으로는 신진대사를 조절하는 각종 호르몬의 분비가 감소하고, 면역 세포의 기능과 세포들의 활성이 저하되어 생체에 필요한 면역 단백질 및 생체 구성 단백질들의 생합성이 줄어들게 되며, 외적으로는 오존층 파괴로 인하여 태양 광선 중 지표에 도달하는 자외선의 함량이 증가하게 되고 환경 오염이 더욱 심화됨에 따라 자유 라디칼 및 활성 유해 산소 등이 증가함으로써, 피부의 두께가 감소하고, 주름이 증가되며, 탄력이 감소될 뿐 아니라 피부 혈색도 칙칙하게 되고, 피부트러블이 자주 발생하며, 기미와 주근깨 및 검버섯 또한 증가하는 등 여러 가지 변화를 일으키게 된다.
노화가 진행될수록 피부를 구성하는 물질인 콜라겐, 엘라스틴, 히알루론산, 및 당단백질의 함유량 및 배열이 변하거나 감소하는 증상들이 나타나게 되고, 자유 라디칼 및 활성 유해 산소에 의한 산화적 스트레스를 받게 된다. 또한 노화가 진행되거나 자외선에 의해서, 피부를 구성하는 대부분의 세포에서는, 염증을 일으킨다고 알려져 있는 전염증성 사이토카인(proinflammatory cytokine)을 생성하는 효소인 사이클로옥시게나제-2(Cox-2, cyclooxygenase)의 생합성이 증가하고, 이들 염증성 인자에 의해 피부조직을 분해하는 효소인 매트릭스 메탈로프로테이나아제(MMP, Matrix metalloproteinase)의 생합성이 증가하며, iNOS(inducible nitric oxide synthase)에 의한 NO(nitric oxide) 생성이 증가하는 것으로 알려져 있다.
즉 자연적으로 진행되는 내인성 노화에 따른 세포 활성의 감소 및 미세염증에 의해 기질물질의 생합성이 감소되고, 여러 가지 유해 환경에 의한 스트레스의 증가 및 태양 광선에 의한 활성 산소 종의 증가와 같은 외적 요인에 의해 기질 물질의 분해 및 변성이 가속화되어 피부기질이 파괴되고 얇아지면서 피부 노화의 제반 증상들이 나타나게 된다. 따라서, 이러한 노화의 현상들을 방지하고, 개선시킬 수 있는 활성성분에 대하여 많은 연구가 행해지고 있는 것이 현실이다.
한편, 체내 효소계, 환원대사, 화학약품, 공해물질 및 광화학반응 등의 각종 물리적, 화학적 및 환경적 요인 등에 의하여 생성되는 활성산소는 세포구성 성분들인 지질, 단백질, 당 및 DNA 등에 대하여 비선택적, 비가역적인 파괴작용을 함으로써 세포노화 또는 암을 비롯한 각종 질병을 일으키는 것으로 알려져 있다. 또한 이들 활성 산소에 의한 지질과산화의 결과로 생성되는 지질과산화물을 비롯한 여러 가지 체내 과산화물도 세포에 대한 산화적 파괴를 일으켜 각종 기능장애를 야기함으로써 여러 가지 질병의 원인이 되기도 한다. 따라서, 이와 같은 자유 라디칼을 소거할 수 있는 화합물(free radical scavengers) 또는 과산화물 생성 억제물질과 같은 항산화제들이 이들 산화물들에 기인하는 노화 및 각종 질환의 억제 또는 치료제로서 기대된다.
최근에는 웰빙 등의 추세에 따른 인공적인 요소가 가미되지 않은 천연 발효 방법을 이용한 천연물의 발효 방법에 대한 요구가 증가하고 있으며 이를 활용한 제품에 대한 요구가 계속 되고 있다. 하지만, 이런 천연 발효 방법은 인체에 유해한 대장균, 혐기성 세균 등에 의한 부패 및 오염에 대한 위험성으로 실제 제품으로 활용하는 데는 어려움이 있다. 이를 해결하기 위해 끓이는 방법 등의 발효 전 살균 방법이 고안되었지만 열에 의해 효능 성분 등이 파괴될 수 있기 때문에 비살균 방법에 의한 발효법의 개발이 필요한 현실이다.
토굴 숙성법은 전통적인 식품 저장법의 하나로서 동물성 식품 및 식물성 식품 모두에 대해 응용을 하여 왔다. 토굴 숙성법은 사계절 일정한 온도와 습도를 유지하는 지열을 이용하여 농산물 저장, 버섯 재배, 젓갈류 등의 숙성 등에 활용되고 있다. 최근 전통 발효 식품에 대한 관심이 높아지면서 이런 발효 기법들을 활용한 다양한 추출물의 제조 방법들이 개발되고 있다. 이에 따라 천연물 등을 발효시켜 기존 천연물의 성능보다 우수한 성능을 가진 천연물 추출물을 활용한 기능성 식품, 화장품 등의 개발이 이어지고 있다.
이에 본 발명자들은 천연유래의 유효물질 중 피부에 안전하면서도 항산화, 항노화 효과가 우수하고, 제품으로서의 안정성도 우수한 항산화 및 항노화 화장료를 제조하기 위하여 연구하던 중, 천연물을 소금에 절인 후 발효시키는 천연 발효 방법을 통해 제조된 염장 발효물을 토굴 내에서 천연 숙성 시켜서 얻은 추출물이 항산화 효과 및 항노화 효과가 매우 우수한 것을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서 본 발명은 천연물의 염장 발효 토굴 숙성 추출물을 함유하여 피부 항산화 및 항노화 효능이 우수한 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 적소두, 녹두, 흑두, 의이인, 대맥 및 현미로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 염장 발효 토굴 숙성 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명의 화장료 조성물은 상기 유효성분에 해양 심층수의 염장 발효 토굴 숙성 추출물을 더 함유할 수 있다.
본 발명에 의한 적소두, 녹두, 흑두, 의이인, 대맥, 현미 또는 해양 심층수의 염장 발효 토굴 숙성 추출물은 DPPH 산화 억제 실험을 통해 항산화 효능이 있음을 확인했고, 프로콜라겐 생성 촉진과 콜라게나제 발현 억제효과를 나타냈으며, 이 두 가지 활성의 복합 상승 작용으로 우수한 피부 주름 개선 효과를 기대할 수 있다.
본 발명이 제공하는 화장료 조성물은 적소두, 녹두, 흑두, 의이인, 대맥 및 현미로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 염장 발효 토굴 숙성 추출물을 유효성분으로 함유하며, 여기에 해양 심층수의 염장 발효 토굴 숙성 추출물을 더 함유할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 상기의 염장 발효 토굴 숙성 추출물을 조성물 총 중량에 대하여 0.0001~30중량%의 양으로 함유한다. 함량이 0.0001중량% 미만이면 상기 추출물에 의한 항산화 및 항노화 효과 등을 얻을 수 없고, 함량이 30중량% 초과이면 함량 증가에 비해 효과의 증가가 크지 않기 때문이다.
본 발명에서 사용되는 적소두는 일반적으로 팥이라 부르며 이뇨, 소염, 배농, 해열에 효능이 있고, 전신부종, 간경화, 황달, 종기, 화농성 질환, 수종, 각기병, 소갈, 이질설사 등에 쓰인다.
녹두는 안두(安豆), 길두(吉豆)라고도 한다. 따뜻한 기후의 양토에서 잘 자라며 높이가 30~80㎝ 이다. 줄기는 가늘고 세로로 난 맥이 있고 10여 개의 마디가 있으며 가지를 친다. 잎은 1쌍의 떡잎과 갓 생겨난 잎이 나온 뒤, 3개의 작은 잎으로 된 겹잎이 나온다. 품종을 나누지 않고 종자의 빛깔에 따라 노란색, 녹색을 띤 갈색, 검은빛을 띤 갈색 녹두로 구분하나 녹색 녹두가 전체의 90%를 차지한다. 성분은 녹말 53~54%, 단백질 25~26%로 영양가가 높고 향미가 좋다. 민간에서는 피부병을 치료하는데 쓰이며 해열, 해독 작용을 한다고 알려져 있다.
흑두는 검정콩 또는 흑대두(黑大豆)라고도 한다. 특정한 한 종류의 콩을 가리키는 것이 아니라 검은빛을 띠는 콩을 총칭한다. 흑태, 서리태, 서목태(여두) 등이 검은콩에 속한다. 검은콩은 일반 콩과 비교하여 영양소의 함량은 비슷하지만 노화방지 성분이 4배나 많고, 성인병 예방과 다이어트에 효과가 있다고 알려져 있다. <본초강목>에는 검은콩의 효능에 대하여 신장을 다스리고 부종을 없애며, 혈액 순환을 활발하게 하며 모든 약의 독을 풀어준다고 기록되어 있다. 또한 모발 성장에 필수 성분인 시스테인이 함유되어 있어 탈모를 방지하는 데도 효과가 있으며 꾸준히 복용하면 신장과 방광의 기능을 원활하게 해준다고 알려져 있다.
의이인은 율무, 염주의 종인으로 수종, 각기, 비위허약으로 소변이 잘 나오지 않는 증상, 설사, 식욕부진 등에 쓰인다. 사지마비, 동통, 굴신불리와 근육통, 해열, 배농, 맹장염 등에도 사용한다. 약리작용은 항암, 골격근수축억제, 장관자궁억제, 진정, 진통, 해열작용이 보고되었다.
대맥은 보리 및 쌀보리의 종자이다. 화위, 관장, 이수의 효능이 있으며 식체, 소변임통, 수종, 화상 등에 사용된다. 또한 대맥은 알란토닌(alantonin)을 함유하고 있는데 이를 환부에 사용하면 화농된 창상이나 완고한 창양의 유합을 촉진시킨다고 알려져 있다.
현미는 벼의 종인으로 건비, 명목, 지갈, 청열 등의 효능이 있으며 곽란, 소변불리, 설사, 식은땀 등의 증상에 사용한다.
해양 심층수는 수심 200m 이하의 깊은 곳에 존재하고 유기물이나 병원균 등이 거의 없을 뿐 아니라 연중 안정된 저온을 유지하고 있으며, 해양식물의 생장에 필수적인 영양 염류가 풍부하고 미네랄 균형성이 양호한 해수자원이다.
본 발명에서 사용되는 적소두, 녹두, 흑두, 의이인, 대맥, 현미 및 해양 심층수의 염장 발효 토굴 숙성 추출물은 하기의 방법으로 제조된다.
단계 1: 적소두, 녹두, 흑두 , 의이인 , 대맥 , 현미 및 해양 심층수의 발효 단계
먼저, 적소두, 녹두, 흑두, 의이인, 대맥, 현미 및 해양 심층수에 일정량의 소금을 첨가하여 장기 발효시킨다.
염장에 사용되는 소금으로는 정제한 고순도 염화나트륨, 천일염, 암염 및 죽염 등이 바람직하며, 소금의 농도는 전체 발효물에 대하여 10~30중량%가 바람직하다. 소금의 함량이 10중량% 미만에서는 기대하는 효과를 발휘하기가 어렵고, 30중량%를 초과하면 소금 사용량에 비해 염장효과의 상승효과가 미미하기 때문이다.
본 발명의 발효 공정은 4~40℃ 사이에서, 충분한 발효가 일어날 수 있도록 30일에서 1년 정도, 바람직하게는 6개월 내지 1년 정도로 발효시키는 것이 좋다.
단계 2: 염장 발효물의 토굴 숙성 단계
상기 단계 1의 염장 발효물을 토굴 내에서 장기 숙성시킨다.
이 때, 토굴은 온도가 10~15℃ 사이로 유지되는 것이 바람직하며, 충분한 숙성이 일어날 수 있도록 30일에서 1년 정도, 바람직하게는 6개월 내지 1년 정도로 숙성시키는 것이 좋다.
단계 3: 염장 발효 토굴 숙성 추출물을 수득하는 단계
상기 단계 2의 염장 발효 토굴 숙성 천연물에서 추출용매를 이용하여 염장 발효 토굴 숙성 추출물을 수득한다.
본 발명에서는 추출용매로 물 또는 유기용매를 사용할 수 있으며, 보다 구체적으로는 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌 글리콜, 디클로로메탄 및 헥산으로 이루어진 군에서 선택된 1종을 단독으로 또는 2종 이상 혼합하여 사용할 수 있다.
이때, 추출온도는 10~80℃가 바람직하며, 6~24시간 동안 추출할 수 있다. 상기 추출온도 및 추출시간을 벗어나면 추출 효율이 떨어지거나 성분의 변화가 생길 수 있다.
상기에서 용매를 이용하여 추출물을 얻은 이후 당업계에 알려진 통상적인 방법으로 상온에서 냉침, 가열 및 여과하여 액상물을 얻을 수 있으며, 또는 추가로 용매를 증발, 분무건조 또는 동결 건조함으로써 적소두, 녹두, 흑두, 의이인, 대맥, 현미 및 해양 심층수의 염장 발효 토굴 숙성 추출물의 제조할 수 있다.
상기와 같은 방법으로 제조한 염장 발효 토굴 숙성 추출물을 함유한 화장료 조성물은 DPPH 산화 억제 실험을 통해 항산화 효능이 있음을 확인할 수 있고, 프로콜라겐 생성 촉진과 콜라게나제 발현 억제효과가 있으며, 이 두 가지 활성의 복합 상승 작용으로 우수한 피부 주름 개선 효과를 제공할 수 있다.
본 발명에 의한 염장 발효 토굴 숙성 추출물은 그 사용에 특별히 제한되지 않으며, 예를 들면, 화장료 조성물 이외에도 건강 식품의 첨가물 및 약제 조성물 등에 사용될 수 있다.
이하, 실시예 및 시험예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하지만, 본 발명이 이들 예로만 한정되는 것은 아니다.
[실시예 1] 적소두, 녹두, 흑두, 의이인, 대맥, 현미 및 해양 심층수의 염장 발효 토굴 숙성 추출물의 제조
세척한 적소두, 녹두, 흑두, 의이인, 대맥, 현미 각 1kg과 해양 심층수 1L를 10중량% 농도의 소금 용액에 혼합한 후 옹기에 담아 준비하고 4℃에서 약 30일간 발효시켰다. 그 후, 발효물을 토굴 내 15℃에서 약 30일간 장기 숙성시켰다. 이후 여기에 80% 에탄올 수용액 5ℓ를 넣고, 3회 환류 추출한 다음, 15℃에서 1일간 침적시켰다. 그 후, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압농축하여 얻은 추출물을 물에 현탁한 후, 에테르 1ℓ로 5회 추출하여 색소를 제거하고, 수층을 1-부탄올 500㎖로 3회 추출하였다. 이로부터 얻은 총 1-부탄올층을 감압농축하여 1-부탄올 추출물을 얻고, 이를 소량의 메탄올에 녹인 다음, 대량의 에틸아세테이트에 추가하여, 생성된 침전물을 건조함으로써, 적소두, 녹두, 흑두, 의이인, 대맥, 현미 및 해양 심층수의 염장 발효 토굴 숙성 추출물 380g을 수득하였다.
[실시예 2] 적소두의 염장 발효 토굴 숙성 추출물의 제조
세척한 적소두 1kg을 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 염장 발효 토굴 숙성하여 적소두의 염장 발효 토굴 숙성 추출물 168g을 제조하였다.
[실시예 3] 녹두의 염장 발효 토굴 숙성 추출물의 제조
세척한 녹두 1kg을 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 염장 발효 토굴 숙성하여 녹두의 염장 발효 토굴 숙성 추출물 157g을 제조하였다.
[실시예 4] 흑두의 염장 발효 토굴 숙성 추출물의 제조
세척한 흑두 1kg을 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 염장 발효 토굴 숙성하여 흑두의 염장 발효 토굴 숙성 추출물 154g을 제조하였다.
[실시예 5] 의이인의 염장 발효 토굴 숙성 추출물의 제조
세척한 의이인 1kg을 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 염장 발효 토굴 숙성하여 의이인의 염장 발효 토굴 숙성 추출물 103g을 제조하였다.
[실시예 6] 대맥의 염장 발효 토굴 숙성 추출물의 제조
세척한 대맥 1kg을 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 염장 발효 토굴 숙성하여 대맥의 염장 발효 토굴 숙성 추출물 201g을 제조하였다.
[실시예 7] 현미의 염장 발효 토굴 숙성 추출물의 제조
세척한 현미 1kg을 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 염장 발효 토굴 숙성하여 현미의 염장 발효 토굴 숙성 추출물 186g을 제조하였다.
[실시예 8] 적소두와 해양 심층수의 염장 발효 토굴 숙성 추출물의 제조
세척한 적소두 1kg과 해양 심층수 1L를 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 염장 발효 토굴 숙성하여 적소두와 해양 심층수의 염장 발효 토굴 숙성 추출물 172g을 제조하였다.
[실시예 9] 녹두와 해양 심층수의 염장 발효 토굴 숙성 추출물의 제조
세척한 녹두 1kg과 해양 심층수 1L를 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 염장 발효 토굴 숙성하여 녹두와 해양 심층수의 염장 발효 토굴 숙성 추출물 196g을 제조하였다.
[실시예 10] 흑두와 해양 심층수의 염장 발효 토굴 숙성 추출물의 제조
세척한 흑두 1kg과 해양 심층수 1L를 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 염장 발효 토굴 숙성하여 흑두와 해양 심층수의 염장 발효 토굴 숙성 추출물 156g을 제조하였다.
[실시예 11] 의이인과 해양 심층수의 염장 발효 토굴 숙성 추출물의 제조
세척한 의이인 1kg과 해양 심층수 1L를 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 염장 발효 토굴 숙성하여 의이인과 해양 심층수의 염장 발효 토굴 숙성 추출물 115g을 제조하였다.
[실시예 12] 대맥과 해양 심층수의 염장 발효 토굴 숙성 추출물의 제조
세척한 대맥 1kg과 해양 심층수 1L를 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 염장 발효 토굴 숙성하여 대맥과 해양 심층수의 염장 발효 토굴 숙성 추출물 204g을 제조하였다.
[실시예 13] 현미와 해양 심층수의 염장 발효 토굴 숙성 추출물의 제조
세척한 현미 1kg과 해양 심층수 1L를 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 염장 발효 토굴 숙성하여 현미와 해양 심층수의 염장 발효 토굴 숙성 추출물 199g을 제조하였다.
[비교예 1] 적소두, 녹두, 흑두, 의이인, 대맥, 현미 및 해양 심층수 염장 발효 추출물의 제조
세척한 적소두, 녹두, 흑두, 의이인, 대맥, 현미 각 1kg과 해양 심층수 1L를 10중량% 농도의 소금 용액에 혼합한 후 옹기에 담아 준비하고 4℃에서 약 30일간 빛을 차단시킨 암실에서 저온 숙성 보관을 하였다. 이후 여기에 80% 에탄올 수용액 5ℓ를 넣고, 3회 환류 추출한 다음, 15℃에서 1일간 침적시켰다. 그 후, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압농축하여 얻은 추출물을 물에 현탁한 후, 에테르 1ℓ로 5회 추출하여 색소를 제거하고, 수층을 1-부탄올 500㎖로 3회 추출하였다. 이로부터 얻은 총 1-부탄올층을 감압농축하여 1-부탄올 추출물을 얻고, 이를 소량의 메탄올에 녹인 다음, 대량의 에틸아세테이트에 추가하여, 생성된 침전물을 건조함으로써, 적소두, 녹두, 흑두, 의이인, 대맥, 현미 및 해양 심층수 발효 추출물 364g을 수득하였다.
[비교예 2] 적소두, 녹두, 흑두, 의이인, 대맥, 현미 및 해양 심층수의 염장 발효 후 실온 숙성 추출물의 제조
세척한 적소두, 녹두, 흑두, 의이인, 대맥, 현미 각 1kg과 해양 심층수 1L를 10중량% 농도의 소금 용액에 혼합한 후 옹기에 담아 준비하고 4℃에서 약 30일간 발효시켰다. 그 후, 발효 추출물을 실온에서 약 30일간 장기 숙성시켰다. 이후 여기에 80% 에탄올 수용액 5ℓ를 넣고, 3회 환류 추출한 다음, 15℃에서 1일간 침적시켰다. 그 후, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압농축하여 얻은 추출물을 물에 현탁한 후, 에테르 1ℓ로 5회 추출하여 색소를 제거하고, 수층을 1-부탄올 500㎖로 3회 추출하였다. 이로부터 얻은 총 1-부탄올층을 감압농축하여 1-부탄올 추출물을 얻고, 이를 소량의 메탄올에 녹인 다음, 대량의 에틸아세테이트에 추가하여, 생성된 침전물을 건조함으로써, 적소두, 녹두, 흑두, 의이인, 대맥, 현미 및 해양 심층수의 염장 발효 실온 숙성 추출물 348g을 수득하였다.
[시험예 1] 항산화 효과 시험(DPPH 테스트)
상기 실시예 1~13의 천연물 염장 발효 토굴 숙성 추출물 및 비교예 1~2의 천연물 추출물의 DPPH 산화 억제 효능을 트롤록스와 비교하여 측정하였다.
유기 라디칼인 DPPH(1,1-디페닐-2-피크릴하이드라질, 1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl)의 환원에 의해(항산화제는 산화됨) 발생되는 흡광도의 변화를 통해 항산화능을 평가하는 방법을 사용하였다. 상기에서 수득한 추출물인 실시예 1~13 및 비교예 1~2에 대한 DPPH의 산화가 억제되어 흡광도가 대조군에 비해 감소되는 정도를 측정하여, 대조군의 흡광도에 비해서 50％ 이하의 흡광도를 나타내는 농도를 유효 항산화 농도로 평가하였다.
100μM(in 에탄올) DPPH 용액 190㎕와 상기에서 수득한 실시예 및 비교예와 대조시료를 각각 10㎕씩 넣어 반응액을 만들고 37℃에서 30분간 반응시킨 후 540nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조시료로는 널리 사용하고 있는 합성 항산화제인 트롤록스(Trolox)를 사용하였다. 각 물질의 DPPH 분석 결과는 하기 표 1에 나타내었으며, IC50은 첨가한 시료에 의해 흡광도가 50％ 감소했을 때의 시료 농도를 의미한다.
DPPH 분석 결과(억제 ％)
시료 IC50(ppm)
트롤록스 45
비교예 1 적소두+녹두+흑두+의이인+대맥+현미+해양 심층수 염장 발효 추출물 42
비교예 2 적소두+녹두+흑두+의이인+대맥+현미+해양 심층수 염장 발효 실온 숙성 추출물 70
실시예 1 적소두+녹두+흑두+의이인+대맥+현미+해양 심층수 염장 발효 토굴 숙성 추출물 24
실시예 2 적소두 염장 발효 토굴 숙성 추출물 36
실시예 3 녹두 염장 발효 토굴 숙성 추출물 34
실시예 4 흑두 염장 발효 토굴 숙성 추출물 35
실시예 5 의이인 염장 발효 토굴 숙성 추출물 37
실시예 6 대맥 염장 발효 토굴 숙성 추출물 31
실시예 7 현미 염장 발효 토굴 숙성 추출물 30
실시예 8 적소두+해양 심층수 염장 발효 토굴 숙성 추출물 29
실시예 9 녹두+해양 심층수 염장 발효 토굴 숙성 추출물 27
실시예 10 흑두+해양 심층수 염장 발효 토굴 숙성 추출물 28
실시예 11 의이인+해양 심층수 염장 발효 토굴 숙성 추출물 26
실시예 12 대맥+해양 심층수 염장 발효 토굴 숙성 추출물 27
실시예 13 현미+해양 심층수 염장 발효 토굴 숙성 추출물 27
상기 표 1에서 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명에 의한 적소두, 녹두, 흑두, 의이인, 대맥, 현미 또는 해양 심층수의 염장 발효 후 토굴 숙성 추출물인 실시예 1~13은 염장 발효 추출물인 비교예 1 및 염장 발효 후 실온 숙성 추출물인 비교예 2보다 항산화능이 훨씬 우수하며, 공지된 항산화제인 트롤록스보다도 항산화능이 현저하게 높음을 확인할 수 있다.
또한, 적소두, 녹두, 흑두, 의이인, 대맥 또는 현미 1종의 염장 발효 토굴 숙성 추출물보다 여기에 해양 심층수를 혼합한 염장 발효 토굴 숙성 추출물의 경우가 항산화능이 더 높음을 알 수 있다.
[시험예 2] 콜라게나제 발현 억제 효능 측정
상기 비교예 1의 천연물 염장 발효 추출물, 비교예2의 천연물 염장 발효 실온 숙성 추출물 및 실시예 1~13으로부터 얻은 천연물 염장 발효 토굴 숙성 추출물의 콜라게나제 발현 억제능을 토코페롤 및 EGCG와 비교하여 측정하였다. 콜라게나제의 발현 정도가 낮을수록 콜라게나제의 발현 억제능이 높고, 피부내의 콜라겐의 분해가 적게 일어나며, 따라서 생성되는 주름의 양이 적어진다. 또한 토코페롤 및 EGCG는 항산화물질로서 피부의 표피 세포를 재생시켜 피부의 노화를 방지하는 기능이 있는 것으로 알려진 물질이다.
시험은 2.5%의 우태아 혈청이 함유된 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Media) 배지가 들어 있는 96공 평판배양기(96-well microtiter plate)에 인간의 섬유아세포를 5,000 세포/공(well)이 되도록 넣고, 90% 정도 자랄 때까지 배양하였다. 그 후 무혈청 DMEM 배지에서 24시간 배양한 다음, 무혈청 DMEM 배지에 녹여진 상기 비교예 1~2 및 실시예 1~13, 토코페롤 및 EGCG를 10-4 몰농도로 24시간 동안 처리한 후, 세포배양액을 채취하였다.
채취한 세포배양액을 상업적으로 이용 가능한 콜라게나제 측정기구(미국 아머샴파마샤 사)를 이용하여 콜라게나제 생성 정도를 측정하였다. 먼저 1차 콜라게나제 항체가 균일하게 도포된 96-공 평판(96-well plate)에 채취된 세포 배양액을 넣고 3시간 동안 항원-항체 반응을 항온조에서 실시하였다.
3시간 후 발색단이 결합된 2차 콜라겐 항체를 96-공 평판(96-well plate)에 넣고 다시 15분간 반응시켰다. 15분 후 발색유발물질을 넣어 실온에서 15분간 발색을 유발시키고, 다시 1M 황산을 넣어 반응(발색)을 중지시키면 반응액의 색깔은 노란색을 띄며 반응 진행의 정도에 따라 노란색의 정도가 다르게 나타났다.
노란색을 띠는 96-공 평판(96-well plate)의 흡광도를 흡광계를 이용하여 405nm에서 측정하였고, 하기 수학식 1에 의해 콜라게나제의 합성정도를 계산하였다. 이때 조성물을 처리하지 않은 군에서 채취된 세포배양액의 반응 흡광도를 대조군으로 하였다. 즉, 비처리군에서의 콜라게나제의 발현정도를 100으로 하고, 이에 대비하여 조성물을 처리한 군에서의 콜라게나제의 발현정도를 구하였으며, 결과는 표 2에 나타내었다.
Figure 112011082366720-pat00001
물질 콜라게나제
발현 정도(%)
비처리군 100
토코페롤 75
EGCG 60
비교예 1 적소두+녹두+흑두+의이인+대맥+현미+해양 심층수 염장 발효 추출물 66
비교예 2 적소두+녹두+흑두+의이인+대맥+현미+해양 심층수 염장 발효 실온 숙성 추출물 90
실시예 1 적소두+녹두+흑두+의이인+대맥+현미+해양 심층수 염장 발효 토굴 숙성 추출물 54
실시예 2 적소두 염장 발효 토굴 숙성 추출물 70
실시예 3 녹두 염장 발효 토굴 숙성 추출물 68
실시예 4 흑두 염장 발효 토굴 숙성 추출물 65
실시예 5 의이인 염장 발효 토굴 숙성 추출물 67
실시예 6 대맥 염장 발효 토굴 숙성 추출물 66
실시예 7 현미 염장 발효 토굴 숙성 추출물 64
실시예 8 적소두+해양 심층수 염장 발효 토굴 숙성 추출물 61
실시예 9 녹두+해양 심층수 염장 발효 토굴 숙성 추출물 59
실시예 10 흑두+해양 심층수 염장 발효 토굴 숙성 추출물 57
실시예 11 의이인+해양 심층수 염장 발효 토굴 숙성 추출물 58
실시예 12 대맥+해양 심층수 염장 발효 토굴 숙성 추출물 61
실시예 13 현미+해양 심층수 염장 발효 토굴 숙성 추출물 57
상기 표 2에서 보면, 천연물 염장 발효 숙성 추출물에 따라 콜라게나제 발현의 정도에 차이가 있으나, 본 발명에 의한 적소두, 녹두, 흑두, 의이인, 대맥, 현미 또는 해양 심층수 염장 발효 토굴 숙성 추출물인 실시예 1~13은 시험관내(in vitro)에서 콜라게나제의 발현을 억제한다는 것을 확인할 수 있다. 또한, 콜라게나제의 발현 억제능이 항산화 물질로 알려져 있는 토코페롤보다 우수하다는 것을 확인할 수 있다.
또한, 적소두, 녹두, 흑두, 의이인, 대맥 또는 현미 1종의 염장 발효 토굴 숙성 추출물보다 여기에 해양 심층수를 혼합한 염장 발효 토굴 숙성 추출물의 경우가 콜라게나제 발현정도가 더 높음을 알 수 있다.
[시험예 3] 프로콜라겐 생성 촉진 효능 실험
상기 비교예 1의 천연물 염장 발효 추출물, 비교예2의 천연물 염장 발효 실온 숙성 추출물 및 실시예 1~13으로부터 얻은 천연물 염장 발효 토굴 숙성 추출물의 프로콜라겐 생성능을 비타민 C와 비교하여 측정하였다. 프로콜라겐은 콜라겐 생성 유도 물질로 콜라겐 생성과 노화 방지에 필요한 물질로서, 프로콜라겐의 생성 정도가 높을수록 콜라겐의 생성 정도가 높아지며 따라서 피부 주름의 생성을 방지할 수 있다. 또한 비타민 C는 콜라겐의 합성에 필수성분으로 알려져 있다.
시험은 2.5%의 우태아 혈청이 함유된 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Media) 배지가 들어 있는 96공 평판배양기(96-well microtiter plate)에 인간의 섬유아세포를 5,000 세포/공(well)이 되도록 넣고, 90% 정도 자랄 때까지 배양하였다. 그 후 무혈청 DMEM 배지에서 24시간 배양한 다음, 무혈청 DMEM 배지에 녹여진 상기 비교예 1~2 및 실시예 1~13, 비타민 C를 10-4 몰농도로 24시간 동안 처리한 후, 세포배양액을 채취하였다. 24시간 후에 배지 중에 유리된 프로콜라겐의 양을 프로콜라겐 타입-1 C-펩타이드 EIA 키트(procollagen type-1 C-peptide EIA kit) (MK101, Takara, Japan)를 사용하여 측정하였다.
측정한 결과는 하기 수학식 2에 의해 프로콜라겐의 생성 정도를 계산하였으며, 이때 조성물을 처리하지 않은 군에서 채취된 프로콜라겐 생성 정도를 대조군으로 하였다. 즉, 비처리군에서의 프로콜라겐 생성 정도를 100으로 하고, 이에 대비하여 조성물을 처리한 군에서의 프로콜라겐 생성 정도를 구하였으며, 결과는 표 3에 나타내었다.
Figure 112011082366720-pat00002
물질 프로콜라겐
생성 정도(%)
비처리군 100
비타민 C 120
비교예 1 적소두+녹두+흑두+의이인+대맥+현미+해양 심층수 염장 발효 추출물 105
비교예 2 적소두+녹두+흑두+의이인+대맥+현미+해양 심층수 염장 발효 실온 숙성 추출물 86
실시예 1 적소두+녹두+흑두+의이인+대맥+현미+해양 심층수 염장 발효 토굴 숙성 추출물 118
실시예 2 적소두 염장 발효 토굴 숙성 추출물 106
실시예 3 녹두 염장 발효 토굴 숙성 추출물 108
실시예 4 흑두 염장 발효 토굴 숙성 추출물 107
실시예 5 의이인 염장 발효 토굴 숙성 추출물 105
실시예 6 대맥 염장 발효 토굴 숙성 추출물 106
실시예 7 현미 염장 발효 토굴 숙성 추출물 108
실시예 8 적소두+해양 심층수 염장 발효 토굴 숙성 추출물 112
실시예 9 녹두+해양 심층수 염장 발효 토굴 숙성 추출물 113
실시예 10 흑두+해양 심층수 염장 발효 토굴 숙성 추출물 108
실시예 11 의이인+해양 심층수 염장 발효 토굴 숙성 추출물 115
실시예 12 대맥+해양 심층수 염장 발효 토굴 숙성 추출물 109
실시예 13 현미+해양 심층수 염장 발효 토굴 숙성 추출물 110
표 3에서 보면, 천연물 염장 발효 숙성 추출물에 따라 프로콜라겐 생성 정도에 차이가 있으나, 본 발명에 의한 적소두, 녹두, 흑두, 의이인, 대맥, 현미 또는 해양 심층수 염장 발효 토굴 숙성 추출물인 실시예 1~13은 시험관내(in vitro)에서 프로콜라겐의 생성을 촉진한다는 것을 확인할 수 있다.
또한, 적소두, 녹두, 흑두, 의이인, 대맥 또는 현미 1종의 염장 발효 토굴 숙성 추출물보다 여기에 해양 심층수를 혼합한 염장 발효 토굴 숙성 추출물의 경우가 프로콜라겐의 생성을 보다 촉진시킴을 알 수 있다.

Claims (15)

  1. 적소두, 녹두, 흑두, 의이인, 대맥 및 현미로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 식물과 해양 심층수의 혼합물에 소금을 첨가한 다음, 발효 및 토굴 숙성시켜 수득한 염장 발효 토굴 숙성 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 추출물은 물, 유기용매 및 이들의 혼합물로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 추출용매로 추출한 것임을 특징으로 하는, 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 염장 발효 토굴 숙성 추출물의 함량은 조성물의 총 중량을 기준으로 0.0001~30중량%인 것을 특징으로 하는, 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 소금은 염화나트륨, 천일염, 암염 및 죽염으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 발효는 4~40℃의 온도에서 30일 내지 1년의 기간 동안 수행되는 것임을 특징으로 하는, 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 상기 토굴 숙성은 토굴 내에서 10~15℃의 온도에서 30일 내지 1년의 기간 동안 수행되는 것임을 특징으로 하는, 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 상기 소금의 함량은 상기 식물의 총 중량을 기준으로, 10~30중량%인 것을 특징으로 하는, 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
  8. 제2항에 있어서, 상기 추출용매는 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌 글리콜, 디클로로메탄, 에테르, 1-부탄올 및 헥산으로 이루어진 군에서 선택되는 1종의 용매 또는 2종 이상의 용매로 구성된 혼합용매인 것을 특징으로 하는, 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
  9. (a) 적소두, 녹두, 흑두, 의이인, 대맥 및 현미로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 식물과 해양 심층수의 혼합물에 소금을 첨가한 다음, 발효시켜 염장 발효물을 수득하는 단계;
    (b) 상기 (a) 단계에서 수득한 염장 발효물을 토굴 내에서 숙성시켜 숙성 산물을 수득하는 단계; 및
    (c) 상기 (b) 단계에서 수득한 숙성 산물을 물, 유기용매 및 이들의 혼합물로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 추출용매로 추출하여 염장 발효 토굴 숙성 추출물을 수득하는 단계;를 포함하는 염장 발효 토굴 숙성 추출물의 제조방법.
  10. 제9항에 있어서, 상기 소금은 염화나트륨, 천일염, 암염 및 죽염으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 염장 발효 토굴 숙성 추출물의 제조방법.
  11. 제9항에 있어서, 상기 (a) 단계에서 발효는 4~40℃의 온도에서 30일 내지 1년의 기간 동안 수행되는 것임을 특징으로 하는, 염장 발효 토굴 숙성 추출물의 제조방법.
  12. 제9항에 있어서, 상기 (b) 단계에서 숙성은 토굴 내에서 10~15℃의 온도에서 30일 내지 1년의 기간 동안 수행되는 것임을 특징으로 하는, 염장 발효 토굴 숙성 추출물의 제조방법.
  13. 제9항에 있어서, 상기 소금의 함량은 상기 식물의 총 중량을 기준으로, 10~30중량%인 것을 특징으로 하는, 염장 발효 토굴 숙성 추출물의 제조방법.
  14. 제9항에 있어서, 상기 (c) 단계에서 추출용매는 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌 글리콜, 디클로로메탄, 에테르, 1-부탄올 및 헥산으로 이루어진 군에서 선택되는 1종의 용매 또는 2종 이상의 용매로 구성된 혼합용매인 것을 특징으로 하는, 염장 발효 토굴 숙성 추출물의 제조방법.
  15. 제9항에 있어서, 상기 적소두, 녹두, 흑두, 의이인, 대맥 및 현미로 이루어진 군에서 선택되는 식물이 2종 이상 혼합되어 식물 혼합물을 형성하는 경우, 상기 혼합물을 형성하는 각각의 식물은 동일한 중량으로 혼합된 것임을 특징으로 하는, 염장 발효 토굴 숙성 추출물의 제조방법.
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