KR101862719B1 - 단백질 키나제 억제제에 대한 감수성 예측용 바이오 마커 및 이의 용도 - Google Patents

단백질 키나제 억제제에 대한 감수성 예측용 바이오 마커 및 이의 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 단백질 키나제 억제제에 대한 감수성 예측용 바이오 마커 및 이의 용도에 관한 것으로, 단백질 키나제 억제제에 대한 감수성 예측용 마커, 조성물, 키트 및 예측 방법을 제공한다. 본 발명에 따르면, 단백질 키나제 억제제에 대한 감수성 예측 효과가 우수하므로, 본 발명은 암 치료에 유용하게 이용될 수 있다.

Description

단백질 키나제 억제제에 대한 감수성 예측용 바이오 마커 및 이의 용도{Novel Biomarker for Predicting Susceptibility to Protein Kinase and Uses Thereof}
본 발명은 단백질 키나제 억제제에 대한 감수성 예측용 바이오 마커 및 이의 용도에 관한 것이다.
일반적으로 항암 요법에서, 항암제를 투여하였을 때의 생체의 반응성은 약제의 표적이 되는 암세포의 이 약제에 대한 감수성에 크게 의존한다. 이러한 암세포의 약제에 대한 감수성은, 암세포마다 크게 상이하다. 이러한 감수성의 차이는, 이 약제의 표적 분자 또는 이에 관련하는 인자의 양적 또는 질적 차이, 또는 약제 내성의 획득 등에 기인한다. 이러한 배경을 근거로, 표적이 되는 암세포가 약제에 대하여 감수성을 나타낼 경우에 특이적으로 나타나는 암세포의 유전적 변화를 확인할 수 있다면, 조기에 약제의 효과 판정, 치료법의 확립, 새로운 치료법의 선택 등이 가능해져 대단히 유익하다. 또한, 치료에 앞서 생체 조직편 등에 의해 취득된 암 조직에서, 통상의 방법에 따라 암세포를 분리한 후 약제 처리를 실시하여, 이 암세포가 약제 감수성인지 여부를 상기 변화에 의해 측정하면, 이 약제에 의한 치료가 유효한지 여부를 미리 예측할 수 있기 때문에 임상적으로 매우 유용하다.
한편, 단백질 키나제는 다른 단백질을 인산화시켜 단백질의 활성, 위치 및 기능을 조절하여 다양한 세포 내 과정을 제어하는 효소이다. 이러한 단백질 키나제의 제어 기능 이상은 암, 면역질환, 신경질환, 대사질환 및 감염 등의 질병 기작과 밀접하게 연관되어 있다. 상기 단백질 키나제에는 Abl, ACK, ALK, Arg, ARK5, Aurora, Axl, Bmx, BTK, CDK, CHK, c-Kit, c-MET, c-RAF, c-SRC, EGFR, FAK, Fes, FGFR, Flt3, GSK3, IGF, IKK, JAK, Lck, LIMK, Lyn, MEK, Mer, MK-2, P38alpha, PDGFR, PDK, Pim, PKA, PKB, PKCR, Plk-1/3, Ret, RON, Ros, Rse, Tie, Trk, Tyro3, VEGFR, YES 등이 포함된다.
그 중 c-MET은 암세포에서의 비정상적인 c-MET 활성화는 항암 치료의 예후를 악화시키는 것과 밀접하게 관계가 있으며, c-MET의 과발현 및 돌연변이가 비소세포성 폐암과 같은 여러 가지 암에서 관찰되었다. 종양의 침윤 및 전이는 암환자의 주요 사망 원인이므로 c-MET 신호전달을 저해시키는 것은 암 치료에 효과적일 것으로 기대된다.
RON(Recepteur d'Origine Nantais)은 MET(c-MET) 계열에 속하는 단백질 수용체로서, 간에서 분비되며 대식세포의 작용을 조절하는 혈청 단백질 (macrophage-stimulating protein, MSP)의 수용체이다(Zhou YQ, He C, Chen YQ, Wang D, Wang MH: Altered expression of the RON receptor tyrosine kinase in primary human colorectal adenocarcinomas: generation of different splicing RON variants and their oncogenic potential. Oncogene 2003, 22(2):186-197). RON의 발현은 유방암 및 대장 직장암에서 비정상적으로 조절되어 있으며, 특히 대장직장암의 전이와 밀접히 관련되어 있다. 이러한 RON의 활성 정도는 진핵 생물에서 유전자 발현 조절의 중요한 과정 중 하나인 선택적 스플라이싱(alternative splicing)에 의해서 조절된다. RONΔ155, RONΔ160 및 RONΔ165는 이러한 스플라이싱에 의한 엑손들의 스키핑(skipping)에 의해 생성되는 형태로서 리간드 없이도 구조적으로 항상 활성화되어 있다.
또한, RON 유전자의 돌연변이는 여러 가지 암의 발병 및 악성도와 상관관계가 있다.
국내등록특허 제10-1350006호에 기재된 CJ12495, CJ12537, CJ12524 및 CJ12567은 암세포의 비정상적인 증식을 억제하는 기능을 가진 항암제로, 이러한 단백질 키나제의 활성을 저해하는 억제제이다.
상술한 바와 같이 항암제는 내성과 독성에 관해서 개인차가 크며 동일한 환자에서도 약 반수이상에서 내성을 보이는 문제가 있으므로 적합한 치료반응성 표식자를 이용한 선별은 항암제 치료의 획기적인 진보를 초래할 수 있다. 이에, 특정 유전자에 따른 개별 항암제의 치료반응성에 관한 연구가 최근 지속적으로 활발하게 전개되고 있다.
그러나 특정약제에 대한 생체반응 관련요소의 복합적 작용, 치료제 및 투여방식의 다양성과 방대한 시료확보의 어려움으로 아직 괄목할 만한 성과가 미약한 현실이다.
이러한 상황 하에서, 본 발명자들은 대장암에서 항암제인 단백질 키나제 억제제에 대한 감수성을 예측할 수 있는 바이오 마커를 개발하기 위하여 예의 노력하였다. 그 결과, 대장암에서의 감수성을 예측하는 바이오 마커로서 RON 유전자의 변이체 및 돌연변이를 분석하였고, RON의 활성화에 따른 감수성을 분석하였으며, 대장암 세포에서 RON의 활성화 또는 RON 유전자의 변이체 및 돌연변이의 발현 양상에 따라 특정 약물에 대한 감수성에 의한 암세포의 크기 및 무게 감소 정도가 상이한 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명의 목적은 단백질 키나제 억제제에 대한 감수성 예측용 바이오 마커, 조성물, 키트 및 방법을 제공하는 데 있다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위해서, 본 발명은 활성형 RON(Recepteur d'Origine Nantais)을 포함하는, 단백질 키나제 억제제에 대한 감수성 예측용 바이오 마커를 제공한다.
또한, 본 발명은 활성형 RON(Recepteur d'Origine Nantais)의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는, 단백질 키나제 억제제에 대한 감수성 예측용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 조성물을 포함하는, 단백질 키나제 억제제에 대한 감수성 예측용 키트를 제공한다.
또한, 본 발명은 단백질 키나제 억제제에 대한 감수성 예측방법을 제공한다.
이하, 본 발명에 대하여 보다 상세히 설명한다.
본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 활성형 RON(Recepteur d'Origine Nantais)을 포함하는, 단백질 키나제 억제제에 대한 감수성 예측용 바이오 마커를 제공한다.
본 발명에서 용어 "RON(Recepteur d'Origine Nantais)"은 MET(c-MET) 계열에 속하는 단백질 수용체로서, 간에서 분비되며 대식세포의 작용을 조절하는 혈청 단백질(macrophage stimulating protein, MSP)의 수용체이다. 상기 RON 단백질 및 유전자는 당업계에 공지되어 있으며, 공지된 데이터베이스에서 그 서열을 얻을 수 있다. 구체적으로, RON 단백질의 서열은 GenBank No. NP_002438.2 에 개시된 것일 수 있으며, RON 유전자의 서열은 GenBank No. NM_002447.1 에 개시된 것일 수 있다.
본 발명에서는 RON이 활성화되어 있거나 활성형으로 존재하는 경우, 단백질 키나제 억제제에 대한 감수성이 높은 것을 확인하였으며, 그에 따라 활성형 RON을 바이오 마커로서 이용할 수 있다. 상기 활성형 RON은 DNA 레벨, mRNA 레벨, 단백질 레벨 등 모든 발현 레벨에 있어 활성형임을 확인할 수 있는 모든 것을 포함하는 개념으로 이해될 수 있다. 일 례로, RON 단백질에 인산화, 예컨대 RON 단백질의 키나제 도메인에 인산화가 되어 있어 활성화된 형태로 존재하는 것일 수 있으며, MSP와 같은 리간드의 존재 하에 활성형으로 유도된 형태일 수 있다. 또한, 다른 일 례로, 리간드 없이도 항상 활성화되어 있는 형태로서 RON 유전자의 스플라이싱 변이체(Splicing variant) 또는 돌연변이(Mutant)를 포함할 수 있다.
따라서, 본 발명의 일 례로, RON(Recepteur d'Origine Nantais) 유전자의 스플라이싱 변이체(Splicing variant) 또는 돌연변이(Mutant)를 포함하는, 단백질 키나제 억제제에 대한 감수성 예측용 바이오 마커를 제공한다.
본 명세서에서 사용되는 용어, "변이체(variant)"는 해당 유전자가 선택적 스플라이싱(alternative splicing)에 의해 엑손 부위가 삭제되어 생성된 RON isoform을 의미한다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 변이체는 상기 RON(Recepteur d'Origine Nantais) 유전자의 엑손 5, 6 및 11로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상이 스플라이싱(alternative splicing)에 의해서 결손된 것일 수 있다. 보다 바람직하게는, 상기 RON 유전자의 변이체는 엑손 5, 6 및 11이 결손된 RONΔ155, 엑손 5 및 6이 결손된 RONΔ160 또는 엑손 11이 결손된 RONΔ165 일 수 있다.
상기 RON 유전자의 변이체 RONΔ155는 서열번호 1, RONΔ160은 서열번호 2, RONΔ165은 서열번호 3에 나타내었다.
본 발명에 따르면, 이러한 RON의 선택적 스플라이싱(Alternative splicing) 기작에 의하여 엑손이 결실되어 있는 스플라이싱 변이체들은 특이적으로 인간 대장암 세포와 환자의 조직에서 많이 발견되고, 그 발현 여부에 따라 약물에 대한 감수성이 상이하다.
본 명세서에서 사용되는 용어, "돌연변이(mutant)"는 해당 유전자의 해당 유전자의 뉴클레오티드 및 아미노산 서열이 염기 치환, 결실, 삽입, 증폭 및 재배열된 것을 포함한다. 뉴클레오티드 변이는 참조 서열(예를 들어, 야생형 서열)에 대한 뉴클레오티드 서열의 변화 (예를 들어, 1개 이상의 뉴클레오티드의 삽입, 결실, 역위 또는 치환, 예컨대 단일 뉴클레오티드다형성 (SNP))를 지칭한다. 이 용어는 또한 달리 나타내지 않는다면, 뉴클레오티드 서열의 보체에서의 상응하는 변화도 포함한다. 뉴클레오티드 변이는 체세포 돌연변이 또는 배선 다형성일 수 있다.
또한, 아미노산 변이는 참조 서열 (예를 들어, 야생형 서열)에 비해 아미노산 서열의 변화 (예를 들어, 1개 이상의 아미노산의 삽입, 치환 또는 결실, 예컨대 내부 결실 또는 N- 또는 C-말단의 말단절단(truncation))를 지칭한다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 돌연변이는 서열번호 4의 폴리펩타이드 내의 아미노산이 치환, 결실 또는 삽입된 것일 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 돌연변이는 서열번호 4의 폴리펩타이드 내 1254번째 아미노산이 M에서 T로 치환된 것, 서열번호 4의 폴리펩타이드 내 1335번째 아미노산이 R에서 G로 치환된 것, 서열번호 4의 폴리펩타이드 내 523번째 아미노산이 R에서 Q로 치환된 것, 서열번호 4의 폴리펩타이드 내 1232번째 아미노산이 D에서 V로 치환된 것, 및 서열번호 4의 폴리펩타이드 내 1268번째 아미노산이 M에서 T로 치환된 것으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있다.
본 발명의 바이오 마커는 단백질 키나제 억제제인 항암제에 대한 감수성의 지표가 될 수 있으며, 항암제에 대한 감수성 마커로서의 정확성 및 신뢰도도 탁월하므로 암의 발생, 발전 및/또는 전이의 치료에 이용될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "감수성"은 개개의 환자의 암에 대하여 특정약물이 효과를 나타내는지 여부를 의미한다.
예컨대, 상기 특정약물은 주로 항암제이며, 이들 항암제에는 암의 종류에 따라 효과를 나타내는 경우와 효과를 나타내지 않는 경우가 있다. 또한, 유효한 것으로 인정되고 있는 종류의 암이어도, 개개의 환자에 따라 효과를 나타내는 경우와 효과를 나타내지 않는 경우가 있는 것이 알려져 있다. 이와 같은 개개의 환자의 암에 대해 항암제가 효과를 나타내는 지 여부를 항암제 감수성이라고 한다. 따라서, 본 발명에 따라 치료 개시 전에 효과를 기대할 수 있는 환자(반응자)와, 효과를 기대할 수 없는 환자(무반응자)를 예측할 수 있으면, 유효성과 안전성이 높은 화학 요법이 실현될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "예측"은 본원에서 대상 환자가 약물 또는 약물 세트에 대해 유리하게 또는 불리하게 반응할 가능성을 지칭하는데 사용된다. 한 실시양태에서, 예측은 이러한 반응의 정도에 관한 것이다. 예컨대, 예측은 환자가 처치 후, 예를 들어 특정한 치료제의 처치 및/또는 원발성 종양의수술적 제거 및/또는 특정 기간 동안의 화학요법 후에 암 재발 없이 생존할 지의 여부 및/또는 그러할 확률에 관한 것이다. 본 발명의 예측은 대장암 환자에 대한 가장 적절한 치료 방식을 선택함으로써 치료를 결정하는데 임상적으로 사용될 수 있다. 본 발명의 예측은 환자가 치료 처치, 예컨대 주어진 치료적 처치, 예를 들어 주어진 치료제 또는 조합물의 투여, 수술적 개입, 화학요법 등에 유리하게 반응할 것인지 또는 치료적 처치 후에 환자의 장기 생존이 가능한 지의 여부를 예측하는데 있어서 유용한 도구이다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 단백질 키나제는 Abl, ACK, ALK, Arg, ARK5, Aurora, Axl, Bmx,BTK, CDK, CHK, c-Kit, c-MET, c-RAF, c-SRC, EGFR, FAK, Fes, FGFR, Flt3, GSK3, IGF, IKK, JAK, Lck, LIMK, Lyn, MEK, Mer, MK-2, P38alpha, PDGFR, PDK, Pim, PKA, PKB, PKCR, Plk-1/3, Ret, RON, Ros, Rse, Tie, Trk, Tyro3, VEGFR 및 YES로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있으며, 보다 구체적으로는 c-MET, c-RAF, c-SRC, EGFR, FAK, Fes, FGFR, MEK, Mer, MK-2, P38alpha, PDGFR, PDK, Pim, PKA, PKB, PKCR, Plk-1/3, Ret, RON 일 수 있고, 가장 구체적으로는 c-MET 및 RON 일 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 단백질 키나제 억제제는 CJ12495, CJ12537, CJ12524, CJ12567, K252a, SU11274, PHA-665752, ARQ-197, PF-02341066, PF-04217903, JNJ-38877605, 포레티닙(Foretinib), SGX523, MP470, AMG102, AMG706, LY2801653, XL-184, 플라보피돌(Flavopihdol), 올로모우신(olomoucine), 로스코비틴(roscovitine), 푸바놀올스(purvanolols), CGP74514A, 로스코비틴(roscovitine), 베바시주맙(bevacizumab), 세툭시맙(cetuximab), 게피티닙(gefitinib), 엘로티닙(erlotinib), 파니투무맙(panitumumab), PKI-166, EKB-569, HKI-272(WAY-177820), 라파티닙(lapatinib), 카네르티닙(canertinib), AEE788, XL647, BMS 5599626, 및 작티마(Zactima)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있다. 보다 구체적으로는 CJ12495, CJ12537, CJ12524, CJ12567, K252a, SU11274, PHA-665752, ARQ-197, PF-02341066, PF-04217903, JNJ-38877605, 포레티닙(Foretinib), SGX523, MP470, AMG102, AMG706, LY2801653 또는 XL-184 일 수 있고, 가장 구체적으로는 CJ12495, CJ12537, CJ12524, 또는 CJ12567 일 수 있다.
상기 CJ12495, CJ12537, CJ12524 및 CJ12567는 단백질 키나제의 활성을 저해하는 억제제로 한국등록특허 제10-1350006호에 기재되어 있으며 본 명세서에 참조로서 포함된다. 본 발명에서 상기 CJ12495, CJ12537, CJ12524 및 CJ12567는 암세포의 비정상적인 증식을 억제하는 기능을 가진 항암제로 이용된다.
구체적으로, 본 발명의 단백질 키나제 억제제는 한국등록특허 제10-1350006호에 기재된 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 염일 수 있다.
[화학식 1]
Figure 112015085954977-pat00001
보다 구체적으로, 본 발명의 단백질 키나제 억제제로서 CJ12495는 한국등록특허 제10-1350006호의 실시예 1에서 제조한 '4-에톡시-N-(3-플루오로-4-(2-(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)싸이에노[3,2-b]피리딘-7-일옥시)페닐)-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복스아미드'이며, 하기 화학식 2로 표시되는 화합물일 수 있다. 또한, CJ12537은 상기 CJ12495의 염산염(HCl salt)으로서, 즉 '4-에톡시-N-(3-플루오로-4-(2-(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)싸이에노[3,2-b]피리딘-7-일옥시)페닐)-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복스아미드의 염산염'이다.
[화학식 2]
Figure 112015085954977-pat00002
또한, 보다 구체적으로, 본 발명의 단백질 키나제 억제제로서 CJ12524는 한국등록특허 제10-1350006호의 실시예 8에서 제조한 '4-에톡시-N-(3-플루오로-4-(2-(피리딘-2-일)싸이에노[3,2-b]피리딘-7-일옥시)페닐)-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복스아미드'이며, 하기 화학식 3으로 표시되는 화합물일 수 있다. 또한, CJ12567은 상기 CJ12524의 염산염(HCl salt)으로서, 즉 '4-에톡시-N-(3-플루오로-4-(2-(피리딘-2-일)싸이에노[3,2-b]피리딘-7-일옥시)페닐)-1-(4-플루오로페닐)-2-옥소-1,2-디하이드로피리딘-3-카르복스아미드의 염산염'이다.
[화학식 3]
Figure 112015085954977-pat00003
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 활성형 RON(Recepteur d'Origine Nantais)의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는, 단백질 키나제 억제제에 대한 감수성 예측용 조성물을 제공한다. 상기 활성형 RON은 상기에서 설명한 바와 같으며, 구체적으로 상기 활성형 RON의 발현 수준은 RON 유전자의 스플라이싱 변이체(Splicing variant) 또는 돌연변이(Mutant)의 발현 수준을 포함하는 것일 수 있다. 본 발명에서 상기 발현 수준은 DNA 레벨, mRNA 레벨, 단백질 레벨 등 모든 발현 레벨의 발현 수준을 의미하는 것으로 이해될 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 단백질 키나제 억제제는 암, 건선, 류마티스성 관절염, 염증성 장질환 또는 만성폐쇄성 폐질환에 대한 치료제일 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 암은 ACTH 생성 종양, 급성 림프구성 또는 림프아구성 백혈병, 급성 또는 만성의 림포구성 백혈병, 급성 비림프구성 백혈병, 방광암, 뇌종양, 유방암, 경관암, 만성 골수성 백혈병, 장암, T-존 림프종, 자궁내막증, 식도암, 담즙 방광암, 에윙스 육종(Ewing's sarcoma), 두 및 목암, 설암, 홉킨스 림프종, 카포시스 육종, 신장암, 간암, 폐암, 중피종, 다발성 골수종, 신경아세포종, 비홉킨 림프종, 골육종, 난소암, 신경아세포종, 유선암, 경관암, 전립선암, 췌장암, 대장암, 페니스암, 레티노블라스토마, 피부암, 위암, 갑상선압, 자궁암, 고환암, 윌름스 종양, 및 트로포블라스토마로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다. 보다 구체적으로는 신경아세포종, 비홉킨 림프종, 골육종, 난소암, 신경아세포종, 유선암, 경관암, 전립선암, 췌장암, 대장암, 페니스암, 레티노블라스토마, 피부암, 위암, 갑상선압, 자궁암, 고환암, 윌름스 종양, 및 트로포블라스토마로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있며, 가장 구체적으로는 대장암일 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "대장암(colon cancer)"은 직장암, 결장암 및 항문암을 통칭하는 것을 의미한다.
본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 본 명세서에서 사용되는 표현 "발현 수준 측정"은 해당 시료 내에서 검출하고자 하는 대상을 검출하는 것을 의미한다. 본 발명에서는, 그 검출하고자 하는 대상은 시료 내 해당 단백질의 활성 형태 여부를 포함할 수 있으며, 유전자의 변이체 또는 돌연변이의 mRNA 및/또는 단백질을 모두 포함할 수 있다. 즉, 단백질의 활성 형태 여부 뿐만 아니라, 유전자 변이체 또는 돌연변이의 산물인 RNA 또는 유전자 산물인 단백질을 검출함으로써 상기 발현 여부를 확인할 수 있다.
상기 검출은 통상적으로는 시료부터 RNA 또는 단백질을 추출하여, 추출물 중의 RNA 또는 단백질을 검출함으로써 실시할 수 있다. 이러한 RNA 또는 단백질의 검출은 면역분석학적 방법, 하이브리드화 반응 및 증폭반응에 의해 측정될 수 있으나, 이에 제한되지 않고 당업계에 공지된 다양한 기술을 이용하여 용이하게 실시될 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 발현 수준을 측정하는 제제는 mRNA, 예컨대 상기 스플라이싱 변이체(Splicing variant) 또는 돌연변이(Mutant)의 mRNA에 특이적으로 결합하는 안티센스 올리고뉴클레오티드, 프라이머 쌍 또는 프로브를 포함할 수 있다.
상기 mRNA의 발현 여부를 측정하는 제제는 상기 유전자에 특이적인 안티센스 올리고뉴클레오티드, 프라이머 쌍, 프로브 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된다. 즉, 핵산의 검출은 유전자를 암호화하는 핵산 분자 또는 상기 핵산 분자의 상보물에 하이브리드화되는 하나 이상의 올리고뉴클레오타이드 프라이머를 사용하는 증폭반응에 의해 수행될 수 있다.
예컨대, 프라이머를 이용한 mRNA의 검출은 PCR과 같은 증폭 방법을 사용하여 유전자 서열을 증폭한 다음 당 분야에 공지된 방법으로 유전자의 증폭 여부를 확인함으로써 수행될 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 프라이머 쌍은 (a) 서열번호 5로 표시되는 정방향 프라이머; 및 (b) 서열번호 6로 표시되는 역방향 프라이머로 이루어질 수 있다.
또한, 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 발현 수준을 측정하는 제제는 RON 단백질, 예컨대 활성형 RON 단백질 또는 돌연변이 단백질에 특이적으로 결합하는 항체, 펩타이드 또는 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 또한, RON 단백질의 활성형 여부를 확인하기 위한 RON 인산화 검출 항체를 포함할 수 있다.
상기 단백질의 발현 여부를 측정하는 제제는 상기 단백질에 대하여 특이적으로 결합하는 항체를 의미하고, 다클론 항체, 단클론 항체, 재조합 항체 및 이들의 조합을 모두 포함할 수 있다.
상기 항체는 다클론 항체, 단클론 항체, 재조합 항체 및 2개의 전체 길이의 경쇄 및 2개의 전체 길이의 중쇄를 가지는 완전한 형태뿐만 아니라 및 항체 분자의 기능적인 단편, 예를 들어, Fab, F(ab'), F(ab')2및 Fv를 모두 포함한다. 항체 생산은 본 발명이 속하는 분야에 널리 공지된 기술을 이용하여 용이하게 제조할 수 있고, 제조되어 상업적으로 판매되는 항체를 이용할 수 있다.
본 발명의 조성물은 상술한 유전자의 발현 여부를 측정하는 제제뿐만 아니라, 항원-항체 복합체의 형성을 정량 또는 정성적으로 측정 가능하게 하는 라벨, 면역학적 분석에 사용되는 통상적인 도구, 시약 등을 더 포함할 수 있다.
항원-항체 복합체의 형성을 정성 또는 정량적으로 측정 가능하게 하는 라벨에는 효소, 형광물, 리간드, 발광물, 미소입자(microparticle), 산화환원 분자 및 방사선 동위원소 등이 있으며, 반드시 이로 제한되는 것은 아니다. 검출 라벨로 이용 가능한 효소에는 β-글루쿠로니다제, β-D-글루코시다제, β-D-갈락토시다제, 우레아제, 퍼옥시다아제, 알칼라인포스파타아제, 아세틸콜린에스테라제, 글루코즈옥시다제, 헥소키나제와 GDPase, RNase, 글루코즈옥시다제와루시페라제, 포스포프럭토키나제, 포스포에놀피루베이트카복실라제, 아스파르테이트아미노트랜스페라제, 포스페놀피루베이트데카복실라제, β-라타마제 등이 있으며 이로 제한되지 않는다. 형광물에는 플루오레신, 이소티오시아네이트, 로다민, 피코에리테린, 피코시아닌, 알로피코시아닌, o-프탈데히드, 플루오레스카민 등이 있으며 이로 제한되지 않는다. 리간드에는바이오틴 유도체 등이 있으며 이로 제한되지 않는다. 발광물에는 아크리디늄에스테르, 루시페린, 루시퍼라아제 등이 있으며 이로 제한되지 않는다. 미소입자에는 콜로이드 금, 착색된 라텍스 등이 있으며 이로 제한되지 않는다. 산화환원 분자에는 페로센, 루테늄착화합물, 바이올로젠, 퀴논, Ti 이온, Cs 이온, 디이미드, 1,4-벤조퀴논, 하이드로퀴논, K4 W(CN)8, [Os(bpy)3]2+, [RU(bpy)3]2 +, [MO(CN)8]4-등이 있으며 이로 제한되지 않는다. 방사선동위원소에는 3H, 14C, 32P, 35S, 36Cl, 51Cr, 57Co, 58Co, 59Fe, 90Y, 125I, 131I, 186Re 등이 있으며 이로 제한되지 않는다.
상기 도구 또는 시약의 일 예로, 적합한 담체, 용해제, 세정제, 완충제, 안정화제 등이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 표지물질이 효소인 경우에는 효소 활성을 측정할 수 있는 기질 및 반응 정지제를 포함할 수 있다. 담체는가용성 담체, 불용성 담체가 있고, 가용성 담체의 일 예로 당 분야에서 공지된 생리학적으로 허용되는 완충액, 예를 들어 PBS가 있고, 불용성 담체의 일 예로 폴리스틸렌, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리에스테르, 폴리아크릴로니트릴, 불소 수지, 가교 덱스트란, 폴리사카라이드, 기타 종이, 유리, 금속, 아가로오스 및 이들의 조합일 수 있다.
본 발명의 조성물은 상술한 바이오 마커를 유효성분으로 포함하므로, 중복된 내용은 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여 그 기재를 생략한다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상기 조성물을 포함하는, 단백질 키나제 억제제에 대한 감수성 예측용 키트를 제공한다.
상기 키트에는 상기 유전자의 발현 수준을 측정하는 제제뿐만 아니라, 면역학적 분석에 사용되는 당 분야에서 일반적으로 사용되는 도구, 시약 등이 포함될 수 있다.
상기 도구 또는 시약의 일 예로, 적합한 담체, 검출 가능한 신호를 생성할 수 있는 표지 물질, 발색단(chromophores), 용해제, 세정제, 완충제, 안정화제 등이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 표지물질이 효소인 경우에는 효소 활성을 측정할 수 있는 기질 및 반응 정지제를 포함할 수 있다. 담체는 가용성 담체, 불용성 담체가 있고, 가용성 담체의 일 예로 당 분야에서 공지된 생리학적으로 허용되는 완충액, 예를 들어 PBS가 있고, 불용성 담체의 일 예로 폴리스틸렌, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리에스테르, 폴리아크릴로니트릴, 불소 수지, 가교 덱스트란, 폴리사카라이드, 라텍스에 금속을 도금한 자성 미립자와 같은 고분자, 기타 종이, 유리, 금속, 아가로오스 및 이들의 조합일 수 있다.
본 발명의 키트는 상술한 바이오 마커를 구성으로 포함하므로, 중복된 내용은 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여 그 기재를 생략한다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 (a) 대상으로부터 수득된 생물학적 시료 내 활성형 RON(Recepteur d'Origine Nantais)의 발현 수준을 측정하는 단계; 및 (b) (a) 단계에서 측정한 결과에 기초하여 상기 대상의 단백질 키나제 억제제에 대한 감수성을 판정하는 단계; 를 포함하는 단백질 키나제 억제제에 대한 감수성 예측방법을 제공한다.
상기 측정되는 활성형 RON의 발현 수준은 상기에서 설명한 바와 같으며, 구체적으로 RON 유전자의 스플라이싱 변이체(Splicing variant) 또는 돌연변이(Mutant)의 발현 수준을 포함할 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 (a) 단계의 활성형 RON의 발현이 확인된 경우, 상기 대상은 단백질 키나제 억제제에 대한 감수성이 있는 것으로 판정한다.
본 발명의 예측 방법은, 대상 환자로부터 생물학적 시료를 획득하고, 상기 시료 내에서 상술한 유전자의 변이체 또는 돌연변이로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 1개 또는 복수개의 발현 수준을 측정한 후, 해당 발현이 확인되면, 당해 시료가 단백질 키나제 억제제에 대하여 감수성이 있다라고 판정하는 공정을 포함하여 이루어진다.
즉, 본 발명의 예측 방법은 시료 내에서의 특정 변이체 또는 돌연변이의 발현 여부를 암세포의 항암제에 대한 감수성의 지표로 하는 점을 특징으로 한다.
또한, 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 (a) 단계의 활성형 RON의 발현 수준이 대조군의 발현 수준에 비하여 고발현인 경우, 상기 대상은 단백질 키나제 억제제에 대한 감수성이 있는 것으로 판정한다.
본 발명은 상기 발현 수준을 대조군 시료의 발현 수준과 비교하는 것을 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명의 예측 방법은, 대상 환자로부터 생물학적 시료를 획득하고, 상기 시료 내에서 상술한 유전자의 변이체 또는 돌연변이로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 1개 또는 복수개의 발현 수준을 측정한 후, 대조군과 비교하여, 그 발현 양상에 따라, 당해 시료가 단백질 키나제 억제제에 대하여 감수성이 있다라고 판정하는 공정을 포함하여 이루어진다.
본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 본 명세서에서 사용되는 용어 "대조군"은 정상인 건강한 사람의 해당 유전자 변이체 또는 이의 단백질 발현 수준; 정상인 건강한 사람의 해당 유전자 야생형 또는 이의 단백질 발현 수준; 비교 대상인 해당 질환 환자의 해당 유전자 변이체 또는 이의 단백질 발현 수준; 또는 비교 대상인 해당 질환 환자의 해당 유전자 야생형 또는 이의 단백질 발현 수준을 의미한다.
보다 상세하게는, 본 발명의 상기 (b) 단계는 상기 (a) 단계에서 측정한 발현 수준 결과를 기초로 하여, 대조군의 활성형 RON, 예컨대 RON 유전자 변이체, 돌연변이 또는 야생형의 값에 비하여 고발현된 것으로 확인된 경우, 대상 환자로부터 획득된 당해 종양 세포가 항암제인 단백질 키나제 억제제에 대하여 감수성이 있는 것으로 판정하는 것이다.
본 명세서에서 상기 발현 수준을 언급하면서 사용되는 용어 "고발현"은 바이오 마커가 비정상 프로세스, 질환 혹은 개체 내 기타 병태를 나타내거나 이의 징후인 경우, 건강하거나 야생형(정상)인 개체로부터 획득된 생물학적 시료에서 검출되는 바이오 마커의 값 혹은 수준 범위 보다 높은 생물학적 시료 내의 바이오 마커의 값 혹은 수준을 지칭한다. 또한, 바이오 마커의 "정상" 발현 수준 혹은 값과 비교해서 "차동(differential) 수준" 혹은 "차동 값"을 지니거나 "상이하게 발현된" 것으로서 지칭될 수 있으며, 발현에 있어서 정량적 차이뿐만 아니라 정성적 차이의 둘 모두를 포함한다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 고발현은 상기 대상의 발현 수준이 대조군의 발현 수준과 비교하여 1.2 배 이상 증가된 것을 의미한다.
본 발명에서 상기 유전자의 변이체 또는 돌연변이의 존재 및 발현은 상술한 바와 같이 단백질 키나제 억제제에 대한 감수성에 영향을 미칠 수 있다.
상기 변이체 또는 돌연변이의 검출은 당업계에 널리 공지되어 있는 기술을 이용하여 표적 분자 클로닝 및 서열 분석에 의해 수행될 수 있다. 예컨대, DNA 서열분석; 대립유전자-특이적 뉴클레오티드 혼입 검정 및 대립유전자-특이적 프라이머 연장 검정 (예를 들어, 대립유전자-특이적 PCR, 대립유전자-특이적 라이게이션 연쇄 반응 (LCR) 및 갭-LCR)을 비롯한 프라이머 연장 검정; 대립유전자-특이적 올리고뉴클레오티드 혼성화 검정 (예를 들어, 올리고뉴클레오티드라이게이션검정); 절단제로부터의 보호를 이용하여 핵산 이중나선 내의 미스매치된 염기를 검출하는 절단 보호 검정; MutS단백질 결합 분석; 변이체 및 야생형 핵산 분자의 이동성을 비교하는 전기영동 분석; 변성-구배 겔 전기영동(DGGE, 예를 들어 문헌 [Myers et al. (1985) Nature 313:495]에서와 같음); 미스매치된 염기 쌍에서의 RNase절단의 분석; 헤테로 이중나선 DNA의 화학적 또는 효소적 절단의 분석; 질량 분광측정법 (예를 들어, MALDITOF); 유전적 비트 분석 (GBA); 5' 뉴클레아제 검정 (예를 들어, 택맨(TaqMan®); 및 분자 비콘을 사용하는 검정을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "생물학적 시료"란 본 발명의 바이오 마커의 발현이 검출될 수 있는 개체로부터 얻어지는 모든 시료를 의미한다.
상기 생물학적 시료는 타액(saliva), 생검(biopsy), 혈액, 피부 조직, 액체 배양물, 분변 및 소변으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나이며, 특별히 이에 제한되지 않고, 본 발명의 기술분야에서 통상적으로 사용되는 방법으로 처리하여 준비될 수 있다.
본 발명의 방법은 상술한 바이오 마커를 이용하여 감수성이 있는 것으로 판정하므로, 중복된 내용은 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여 그 기재를 생략한다.
본 발명의 단백질 키나제 억제제에 대한 감수성 예측용 바이오 마커를 이용하면, 개개의 환자의 상기 감수성을 치료 개시 전에 확실하게 판정할 수 있어, 치료 효과가 높은 항암제의 선택이 가능해진다. 또한, 효과가 얻어지지 않는 항암제의 사용을 회피할 수 있기 때문에 불필요한 부작용을 회피할 수 있다.
도 1a은 대장암 세포주(HT29, colo320hsr, MKN28) 및 대장암 환자 시료에서의 RON 야생형 또는 RONΔ155 또는 RONΔ160 변이체에 대한 RT-PCR 확인 결과를 보여준다. 도 1b는 대장암 세포주(HT29, colo320hsr, MKN28) 및 대장암 환자 시료에서의 RON 야생형 또는 RONΔ155 또는 RONΔ160 변이체에 대한 웨스턴 블롯 및 면역침강(IP) 확인 결과를 보여준다. 도 3c는 대장암 환자 시료에서의 P-RON에 대한 IHC 결과를 보여준다.
도 2a는 PDX-모델에서의 약물 감수성 테스트 과정을 도식적으로 보여준다. 도 2b는 PDX-모델 제작 과정에서의 RON 변이체에 대하여 양성으로 판단된 대장암 환자 시료인 116 번 시료를 이식한 경우, 그렇지 않은 130번 시료를 이식한 경우의 암의 크기를 측정한 결과를 보여준다.
도 3a는 대장암 환자 시료인 116번 및 87번을 누드 마우스에 이식한 환자 유래-대장암 조직 이식 모델(Xenograft model, PDX-model)에 CJ12567을 투여한 경우, 마우스에 생성된 암 조직을 보여주는 이미지이다. 도 3b는 상기 마우스들로부터 획득한 암 조직들의 크기를 측정한 결과를 보여준다. 도 3c는 상기 마우스들로부터 획득한 암 조직들의 무게를 측정한 결과를 보여준다. 도 3d는 상기 마우스들로부터 획득한 암 조직들의 IHC 결과를 보여준다. 도 3e는 상기 마우스들로부터 획득한 암 조직들의 웨스턴 블롯팅 결과를 보여준다.
도 4a는 CJ12495에 의한 RON 인산화 억제를 보여준다. 도 4b에 RON 돌연변이 유전자를 도입한 세포에서 RON의 인산화 억제를 보여준다. 도 4c는 RON 유전자 변이체에서 RON의 인산화 억제를 보여준다.
도 5a는 CJ12495에 의한 세포의 이동성 억제를 보여준다. 도 5b에 RON 돌연변이 유전자를 도입한 세포에서의 이동성 저해를 보여준다. 도 5c는 RON 유전자 변이체에서의 세포 이동성 저해를 보여준다.
도 6a는 CJ12495에 의한 세포 전이 억제를 보여준다. 도 6b는 RON 돌연변이 유전자를 도입한 세포에서의 세포 전이 억제를 보여준다. 도 6c는 RON 유전자 변이체에서의 세포 전이 억제를 보여준다.
도 7a는 CJ12524에 의한 RON 인산화 억제를 보여준다. 도 7b는 RON 유전자 변이체에서 RON의 인산화 억제를 보여준다. 도 7c는 CJ12524에 의한 세포 사멸을 보여준다. 도 7d는 RON 유전자 변이체에서의 세포 사멸을 보여준다. 도 7e는 CJ12524에 의한 세포의 전이 억제를 보여준다.
도 8a는 RON 활성 암세포-이식 모델(Xenograft model)에 CJ12524을 투여한 경우, 상기 마우스들로부터 획득한 암 조직들의 크기 및 무게를 측정한 결과를 보여준다. 도 8b는 상기 마우스에 생성된 암 조직의 크기를 보여주는 이미지이다. 도 8c는 상기 마우스들로부터 획득한 암 조직들의 IHC 결과를 보여준다. 도 8d는 상기 마우스들로부터 획득한 암 조직들의 웨스턴 블롯팅 결과를 보여준다.
도 9는 RON 활성이 없는 위암 조직 이식 모델에 CJ12537을 투여한 경우, 종양 부피를 측정한 결과를 보여준다.
이하, 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실험방법 및 조건
RT- PCR
대장암 세포주 또는 인간 대장암 환자 시료를 Trizol RNA 추출법으로 총 RNA를 추출하여 1 ㎍의 총 RNA를 cDNA로 재합성한 후, RON 프라이머 한쌍(서열번호 5의 정방향 프라이머 5'-CTCTGGGGACCAGGTTTTCC-3' 및 서열번호 6의 역방향 프라이머 5'-ACCATCAATGGCAGGGAGTG-3')를 이용하여 RT-PCR을 수행하여 1% agarose gel에 전기영동 후 Et-Br 염색을 하였다. RT-PCT 조건은 하기 표 1에 나타내었다.
Figure 112015085954977-pat00004
웨스턴 블롯
시료들을 RIPA 버퍼를 이용하여 세포들을 용해시킨 후 고속 원심분리기를 이용하여 단백질을 추출하여 각 세포들 당 30㎍의 단백질을 웨스턴 블롯(western blot)법으로 전기 영동하여 단백질을 분리 후 PDVF membrane에 트랜스퍼하여 RON 항체를 5% skim milk에 각 1:2000 비율로 희석하여 4℃에서 12시간 반응하였다. 그 다음, 15분간 3번씩 TBS-T 버퍼로 세척 후 2차 항체를 5% skim milk에 각 1:2000 비율로 희석하여 상온에서 2시간 반응시키고 15분간 3번씩 TBS-T 버퍼로 세척하여 ECL 버퍼를 이용하여 PDVF membrane의 발광을 유도하여 X-ray 필름을 이용하여 RON 단백질의 발현을 현상하였다. 또한 면역침강(immunoprecipitation)법으로 각 세포들 당 500㎍의 단백질에 1㎍의 RON 항체를 넣고 4℃에서 12시간 반응 후 항-항체 bead를 첨가하여 RON 항체를 침강시켜 웨스턴 블롯(western blot)법으로 전기 영동하여 단백질을 분리 후 PDVF membrane에 트랜스퍼하여 p-Tyr 항체를 5% skim milk에 각 1:1000 비율로 희석하여 4℃에서 12시간 반응하였다. 그 다음, 15분간 3번씩 TBS-T 버퍼로 세척 후 2차 항체를 5% skim milk에 각 1:2000 비율로 희석하여 상온에서 2시간 반응시키고 15분간 3번씩 TBS-T 버퍼로 세척하여 ECL 버퍼를 이용하여 PDVF membrane의 발광을 유도하여 X-ray 필름을 이용하여 p-Tyr RON 단백질의 발현을 현상하였다.
면역조직화학
약물 투여 종료 후 조직을 적출하여 10% formalin solution에 고정하여 다음 날 paraffin block을 제작한 후 5 ㎛로 조직을 section하여 Xylene 처리 후 100%, 95%, 70% EtOH로 처리를 진행한 다음 3% BSA로 Blocking 후 phospho-RON과 RON 항체를 1% BSA에 각 1:100 비율로 희석하여 4℃에서 12시간 반응하였다. 그 다음, 15분간 3번씩 PBS-T 버퍼로 세척 후 2차 항체를 1% BSA에 각 1:100 비율로 희석하여 상온에서 2시간 반응시키고 15분간 3번씩 TBS-T 버퍼로 세척하여 DAB substrate를 처리하고 Hematoxylin을 처리한 후에 dehydration 과정을 진행하고, mount solution을 1~2 drop 떨어뜨려 coverslip으로 덮은 후 단백질의 발현을 염색하였다.
대장암 조직 이식 모델( Xenograft model, PDX -model)
90% FBS + 10% DMSO 용액으로 동결보존 환자 조직 유래 mouse model의 종양을 ice에서 녹인 후 HBBS + 5% FBS + 1X penicillin/streptomycin + 1X Gentamicin /amphotericin B가 첨가된 media에 안정화를 시켜 3mm3 가량 잘라내어 마우스의 표피를 절개하여 이식 후 봉합하여 종양생성을 확인하고 종양의 크기가 400~500mm3이 되면, 조직을 적출하여 다시 3mm3씩 자른 후에 Balb/c nude mice에 이식하여 종양생성을 확인하고 약물투여를 하였다.
항암제 처리
본 발명에서 이용된 항암제는 c-MET 저해제로서, 국내등록특허 제10-1350006호에 기재된 CJ12567이며, 양성 대조군으로는 LY2801653 (Lily Co.)을 이용하였다.
종양생성 여부를 확인한 후 size가 100mm3 이 되었을 때 각 약물 투여 그룹으로 나눈 후 CJ12567과 LY-2801653를 0.5% Methyl cellulose로 용해하여 CJ12567은 30mpk와 100mpk로 투여하고, LY-2801653은 30mpk로 매일 경구투여로 14일 동안 진행하였고 약물 투여 진행 중에 3일마다 caliper를 이용하여 종양의 크기를 측정하고, 마우스 체중을 측정하였다.
RON 유전자 돌연변이
RON 돌연변이 유전자(RON M1254T, RON R1335G 및 RON R523Q)를 이용하였다.
실시예 1. 대장암 환자 조직의 RON 유전자의 변이체 선별
본 발명자들은 대장암 환자 조직 내 RON 유전자의 변이체를 확인하고자, 총 200 례의 대장암 환자의 조직 시료를 분석하였다.
먼저, 대장암 세포주(HT29, colo320hsr, MKN28) 및 대장암 환자 시료에서의 RON 야생형 또는 RONΔ155 또는 RONΔ160 변이체의 발현을 확인하기 위하여, 본 발명자들이 제작한 프라이머를 이용하여 RT-PCR을 실시하였다.
그 결과, 도 1a에 나타낸 바와 같이, 대장암 세포주인 HT29 세포주는 RONΔ160 변이체, colo320hsr 세포주는 RONΔ155 변이체가 발현되는 것으로 확인되었다. 또한, 대장암 환자의 시료인 87번 및 116번에서 RONΔ155 또는 RONΔ160 변이체의 발현을 확인하였다.
그 후, 상기 RT-PCR을 실시한 대장암 환자 시료와 동일한 시료에서의 RON의 발현을 확인하기 위하여 웨스턴 블롯(도 1b) 및 면역조직화학(도 1c)를 실시하였다.
그 결과, 도 1b 및 1c에 나타낸 바와 같이, RONΔ155 또는 RONΔ160 변이체가 확인된 대장암 환자의 시료인 87번 및 116번에서 RON의 단백질 크기가, 대장암 세포주인 HT29 세포주의 RONΔ160 변이체 단백질 크기와 같았다. 또한, p-Tyr RON 단백질의 발현을 갖는 것으로 보아 RONΔ160 변이체가 RON의 단백질의 활성화를 일으킴을 알 수 있었다.
실시예 2. RON 변이체 발현-환자 유래-대장암 조직 이식 모델( Xenograft model, PDX -model)에서의 CJ12567에 대한 약물 감수성 분석
인 비보 상에서 CJ12567의 약물 감수성을 분석하기 위하여, 본 발명자들은 상기 실시예 1의 mRNA 및 단백질 수준에서 RON 변이체에 대하여 양성으로 판단된 대장암 환자 시료인 87 번 및 116 번 시료를, 누드 마우스에 이식하여 환자 유래-대장암 조직 이식 모델(Xenograft model, PDX-model)을 제작하였다.
한편, 상기 조직 이식 모델을 제작하는 과정에서, 도 2b에 나타낸 바와 같이, RON 변이체에 대하여 양성으로 판단된 대장암 환자 시료인 116 번 시료를 이식한 경우, 그렇지 않은 130번 시료를 이식한 경우보다 암 조직의 크기가 훨씬 크고 빠르게 생성된 것을 확인할 수 있었다.
상기 환자 유래-대장암 조직 이식이 이식된 마우스들에게 각각 CJ12567 (30 mpk, 100 mpk), 양성 대조군으로서 LY2801653(30 mpk) 및 정상 대조군으로서 베히클(Vehicle, 0.5% Methyl cellulose)을 투여하고, 이들의 암 조직의 크기 및 무게를 측정하고, IHC 및 웨스턴 블롯팅을 실시하여 약물 감수성을 확인하였다.
2-1. 116번 환자 유래-대장암 조직 이식 모델( Xenograft model, PDX -model)에서의 CJ12567에 대한 약물 감수성
도 3a 내지 도 3c에 나타낸 바와 같이, 대장암 환자 시료인 116번을 누드 마우스에 이식한 환자 유래-대장암 조직 이식 모델(Xenograft model, PDX-model)에 CJ12567 30 mpk을 투여한 경우, 암의 크기 및 무게가 정상 대조군인 베히클 투여군에 비해, 각각 53.15%, 47.87%로 유의성 있게 감소하였다. 또한, 이는 양성 대조군인 LY2801653 투여군과 유사한 수치이다.
또한, CJ12567 100 mpk을 투여한 경우, 암의 크기 및 무게가 정상 대조군인 베히클 투여군에 비해, 각각 35.05%, 18.09%로 크게 감소하였다. 이는 양성 대조군인 LY2801653 투여군에 비해 보다 탁월하게 암의 크기 및 무게를 감소시킨 결과이다(도 3a 내지 도 3c).
또한, CJ12567 100 mpk을 투여한 경우, p-RON, RON, MSP 및 p-ERK 단백질에 대하여 면역조직화학법(도 3d) 및 웨스턴 블롯(도 3e)을 실시한 결과, CJ12567 100 mpk와 LY2801653 30mpk 모두 총 RON 단백질의 양은 변화가 없지만 RON의 활성형인 p-RON 단백질의 발현이 감소되고 MSP와 p-ERK 단백질의 발현도 감소되는 것이 확인된바, p-RON 단백질의 발현 감소를 통한 MSP와 p-ERK 단백질의 발현감소를 야기하여 감수성이 높아진다는 것을 보여준다.
2-2. 87번 환자 유래-대장암 조직 이식 모델( Xenograft model, PDX -model)에서의 CJ12567에 대한 약물 감수성
도 3a 내지 도 3c에 나타낸 바와 같이, 대장암 환자 시료인 87번을 누드 마우스에 이식한 환자 유래-대장암 조직 이식 모델(Xenograft model, PDX-model)에 CJ12567 30 mpk을 투여한 경우, 암의 크기 및 무게가 정상 대조군인 베히클 투여군에 비해, 각각 64.02%, 61.36%로 유의성 있게 감소하였다. 또한, 양성 대조군인 LY2801653 투여군에 비해 탁월하게 암의 크기 및 무게를 감소시켰다.
또한, CJ12567 100 mpk을 투여한 경우, 암의 크기 및 무게가 정상 대조군인 베히클 투여군에 비해, 각각 56.43%, 40.91%로 크게 감소하였다. 이는 양성 대조군인 LY2801653 투여군에 비해 보다 탁월하게 암의 크기 및 무게를 감소시킨 결과이다(도 3a 내지 도 3c).
이러한 결과들은 대장암 환자 시료 내에 RON 유전자의 변이체가 존재하는 경우, CJ12567에 대한 감수성이 높다는 것을 보여준다.
따라서, 활성화된 RON 및 RON 유전자 변이체는 c-MET 저해제인 CJ12567에 대한 감수성 예측용 바이오 마커로서의 가능성을 보여준다.
실시예 3. RON 유전자의 야생형, 돌연변이(mutant) 및 변이체(variant)에서의 CJ12495에 대한 약물 감수성 분석
3-1. CJ12495에 의한 RON 인산화 저해
본 발명자들은 CJ12495를 처리하여 RON 유전자의 야생형, 돌연변이(mutant) 및 변이체(variant)에서의 RON 인산화 저해능을 분석하였다.
먼저, 마우스 배아 섬유모세포주(NIH3T3)에 RON 야생형 유전자를 과발현시키고 MSP를 처리하여 활성화시킨 후, CJ12495를 처리하여 RON 인산화 억제 정도를 확인하였다.
그 결과, 도 4a에 나타낸 바와 같이, RON 단백질로 면역침강한 후 phospho-Tyrosine 항체로 웨스턴 블롯을 분석하였을 때, MSP에 의한 RON 인산화를 통해 활성화가 되었음을 알 수 있었고, CJ12495 화합물에 의해 활성화된 RON의 인산화가 억제되는 것을 확인할 수 있었다.
또한, 마우스 배아 섬유모세포주에 각각 RON 돌연변이 유전자(RON M1254T, RON R1335G 및 RON R523Q)를 과발현시키고 MSP를 처리하여 활성화시킨 후, CJ12495를 처리하여 RON의 인산화 억제 정도를 확인하였다.
그 결과, 도 4b에 나타낸 바와 같이, RON 단백질로 면역침강한 후 phospho-Tyrosine 항체로 웨스턴 블롯을 분석하였을 때, 각각의 RON 돌연변이 유전자를 도입한 세포에서 활성화된 RON의 인산화 저해를 확인할 수 있었다.
또한, 마우스 배아 섬유모세포주(NIH3T3)에 각각 RON 유전자 변이체인 RON 활성형 Δ160 유전자 및 RON 활성형 Δ165 유전자를 과발현 시킨 후, CJ12495를 처리하여 RON 인산화 억제 정도를 확인하였다.
그 결과, 도 4c(RON 활성형 Δ160 유전자) 및 도 4d(RON 활성형 Δ165 유전자)에 나타낸 바와 같이, RON 단백질로 면역침강한 후, phospho-Tyrosine 항체로 웨스턴 블롯을 분석하였을 때, 각각의 CJ12495를 처리한 그룹에서 활성형 RON의 인산화가 억제되는 것을 확인할 수 있었다.
이러한 결과를 통해, MSP를 통해 활성화되거나 활성형인 RON 유전자를 가지고 있는 경우 CJ12495에 대한 감수성이 높아지므로, CJ12495의 RON 인산화 억제 효능이 우수하게 발휘되는 것을 확인할 수 있었다.
3-2. CJ12495에 의한 RON 인산화 저해에 따른 세포 이동성 억제 효능
본 발명자들은 CJ12495를 처리하여 RON 유전자의 야생형, 돌연변이(mutant) 및 변이체(variant)에서의 RON 인산화 저해에 따른 세포 이동성 억제 효능을 분석하였다.
먼저, 마우스 배아 섬유모세포주(NIH3T3)에 RON 야생형 유전자를 과발현시키고 MSP를 처리하여 활성화시킨 후, CJ12495를 처리하여 세포 이동성을 확인하였다.
그 결과, 도 5a에 나타낸 바와 같이, 세포 이동 측정법(migration assay)으로 분석하였을 때, MSP에 의해 활성화되어 증가한 세포의 이동성이 CJ12495에 의해 억제되는 것을 확인할 수 있었다.
또한, 마우스 배아 섬유모세포주에 각각 RON 돌연변이 유전자(RON M1254T 및 RON R1335G)를 과발현 시키고 MSP를 처리하여 RON을 활성화 시킨 후, CJ12495를 처리하여 세포 이동성을 확인하였다.
그 결과, 도 5b에 나타낸 바와 같이, 세포 이동 측정법(migration assay)으로 분석하였을 때, 각각의 RON 돌연변이 유전자를 도입하고 CJ12495을 처리한 그룹 모두에서, MSP에 의해 활성화되어 증가한 세포 이동성이 억제되는 것을 확인할 수 있었다.
또한, 마우스 배아 섬유모세포주(NIH3T3)에 RON 유전자 변이체인 RON 활성형 Δ160 유전자 및 RON 활성형 Δ165 유전자를 과발현 시킨 후, CJ12495를 처리하여 세포 이동성 저해 효능을 확인하였다.
그 결과, 도 5c에 나타낸 바와 같이, 세포 이동 측정법(migration assay)으로 분석하였을 때, 각각의 CJ12495를 처리한 그룹 모두에서 세포 이동성이 억제되는 것을 확인할 수 있었다.
이러한 결과를 통해, MSP를 통해 활성화되거나 활성형인 RON 유전자를 가지고 있는 경우 CJ12495에 대한 감수성이 높아지므로, CJ12495에 따른 세포 이동성 억제 효능이 우수하게 발휘되는 것을 확인할 수 있었다.
3-3. CJ12495에 의한 RON 인산화 저해에 따른 세포 전이성 억제 효능
본 발명자들은 CJ12495를 처리하여 RON 유전자의 야생형, 돌연변이(mutant) 및 변이체(variant)에서의 RON 인산화 저해에 따른 세포 전이성 억제 효능을 분석하였다.
마우스 배아 섬유모세포주(NIH3T3)에 각각 RON 유전자 야생형 및 RON 돌연변이 유전자(R523Q)를 과발현시키고 MSP를 처리하여 RON을 활성화 시킨 후, CJ12495를 처리하여 세포 침윤 정도를 확인하였다.
그 결과, 도 6a에 나타낸 바와 같이, 각각 RON 야생형과 R523Q 돌연변이 유전자가 도입되고 MSP를 처리한 그룹 모두에서, CJ12495을 처리하였을 때, MSP에 의해 활성화되어 증가한 세포 전이가 억제되는 것을 확인할 수 있었다.
또한, 마우스 배아 섬유모세포주에 각각 RON 돌연변이 유전자(RON M1254T 및 RON R1335G)를 과발현시키고 MSP를 처리하여 RON을 활성화 시킨 후, CJ12495를 처리하여 세포 침윤 정도를 확인하였다.
그 결과, 도 6b에 나타낸 바와 같이, 각각의 RON 돌연변이 유전자를 도입하고 MSP를 처리한 그룹 모두에서, CJ12495을 처리하였을 때, MSP에 의해 활성화되어 증가한 세포 전이가 억제되는 것을 확인할 수 있었다.
또한, 마우스 배아 섬유모세포주(NIH3T3)에 RON 유전자 변이체인 RON 활성형 Δ160 유전자 및 RON 활성형 Δ165 유전자를 과발현 시킨 후, CJ12495를 처리하여 세포 침윤 정도를 확인하였다.
그 결과, 도 6c에 나타낸 바와 같이, 각각의 CJ12495를 처리한 그룹 모두에서, CJ12495을 처리하였을 때, MSP에 의해 활성화되어 증가한 세포 전이가 억제되는 것을 확인할 수 있었다.
이러한 결과들은 암세포 내에 RON이 활성화되어 있는 경우, 예를 들어 RON 유전자의 변이체 또는 돌연변이가 존재하는 경우, CJ12495에 대한 감수성이 높다는 것을 보여준다.
따라서, 활성형 RON, 예를 들어 RON 유전자의 변이체 또는 돌연변이는 CJ12495에 대한 감수성 예측용 바이오 마커로서의 가능성을 보여준다.
또한, 활성형 RON을 발현하는 경우, CJ12495는 이에 대한 항암제 약물로서 이용할 수 있다.
실시예 4. RON 유전자의 야생형, 돌연변이(mutant) 및 변이체(variant)에서의 CJ12524에 대한 약물 감수성 분석
4-1. CJ12524에 의한 RON 인산화 저해
본 발명자들은 CJ12524를 처리하여 RON 유전자의 야생형, 돌연변이(mutant) 및 변이체(variant)에서의 RON 인산화 저해능을 분석하였다.
항상 RON이 활성화되어 있어 p-RON 발현이 높은 대장암 세포주인 HT29와 HCT8에 CJ12524를 처리하여, CJ12524에 의한 RON의 인산화 저해능을 확인하였다.
그 결과, 도 7a에 나타낸 바와 같이, CJ12524를 농도 별로 처리한 세포에서 RON의 인산화가 억제되는 것을 확인하였다.
또한, RON이 발현되지 않는 대장암 세포주인 Colo320HSR에 상시 발현되는 RON 활성형 Δ155와 Δ160 유전자를 도입한 후 CJ12524를 처리하여, CJ12524에 의한 RON의 인산화 저해능을 확인하였다.
그 결과, 도 7b에 나타낸 바와 같이, RON 활성형 Δ155와 Δ160 유전자를 도입하고 CJ12524를 처리하였을 때, RON의 인산화가 감소하는 것을 확인하였다.
4-2. CJ12524에 의한 RON 인산화 저해에 따른 세포 사멸 유도
본 발명자들은 CJ12524를 처리하여 RON 인산화 저해에 따른 세포 사멸 유도 효능을 분석하였다.
항상 RON이 인산화되어 있어 p-RON 발현이 높은 대장암 세포주인 HT29와 HCT8에 CJ12524를 처리하여, 세포 사멸 유도 여부를 확인하였다.
그 결과, 도 7c에 나타낸 바와 같이, CJ12524를 농도 별로 처리하였을 때, 세포 사멸 또한 농도 별로 증가하는 것을 확인하였다. 이 때, RON의 인산화가 감소되고, cleaved caspase 3의 발현이 증가하였다.
또한, RON이 발현되지 않는 대장암 세포주인 Colo320HSR에 RON 상시 활성형 유전자인 Δ155와 Δ160을 도입하고 CJ12524를 농도 별로 처리하여, 세포 사멸의 유도 여부를 확인하였다.
그 결과, 도 7d에 나타낸 바와 같이, CJ12524를 농도 별로 처리하였을 때, 세포 사멸 또한 농도 별로 증가하는 것을 확인하였다. 이 때 RON의 인산화가 감소되었고, 아폽토시스(apoptosis) 마커인 cleaved caspase 3의 발현이 농도 별로 증가하는 것을 확인하였다.
4-3. CJ12524에 의한 RON 인산화 저해에 따른 세포 전이성 억제 효능
본 발명자들은 CJ12524를 처리하여 RON 인산화 저해에 따른 세포 전이성 억제 효능을 분석하였다.
RON이 항상 인산화되어 있는 대장암 세포주인 HCT8에 CJ12524를 처리하여 세포 침윤 정도를 확인하였다.
그 결과, 도 7e에 나타낸 바와 같이, CJ12524를 처리하였을 때, 세포의 전이 정도가 60% 정도 억제되는 것을 확인하였다.
실시예 5. RON 활성 암세포-이식 모델( Xenograft model)에서의 CJ12524에 대한 약물 감수성 분석
인 비보 상에서 CJ12524의 약물 감수성을 분석하기 위하여, 본 발명자들은 상기 RON 활성에 대하여 양성으로 판단된 암 세포주를, 누드 마우스에 이식하여 암세포 유래-조직 이식 모델(Xenograft model, PDX-model)을 제작하였다.
5-1. 인 비보 이식 모델(In vivo xenograft model)에서 CJ12524에 의한 종양 억제 확인
항상 RON이 활성을 보이는 HCT8 세포주를 이용한 동물 모델에 CJ12524을 농도 별로 14 일 동안 투여하였다.
그 결과, 도 8a에 나타낸 바와 같이, 종양 크기를 측정하였을 때, 종양 성장이 억제되는 것(왼쪽)을 확인할 수 있었다. 이 때, 마우스의 체중 감소는 거의 나타나지 않았다(오른쪽).
또한, 도 8b에 나타낸 바와 같이, 약물 투여 종료 후 종양 조직을 적출하여 종양의 무게를 측정하였을 때, CJ12524를 투여한 모든 그룹에서 종양 무게가 감소한 것을 확인할 수 있었다.
5-2. 인 비보 이식 모델(In vivo xenograft model)에서 CJ12524에 의한 RON 인산화 저해
CJ12524 투여를 종료한 후, 조직을 적출하여 RON 인산화 감소 여부를 확인하였다.
그 결과, 면역화학염색법(도 8c) 및 웨스턴 블롯(도 8d)으로 분석하였을 때, CJ12524 처리 그룹에서 RON의 인산화가 감소하는 것을 확인하였다.
이러한 결과들은 암세포 내에 RON이 활성을 보이는 경우, 예를 들어 RON 유전자의 변이체 또는 돌연변이가 존재하는 경우, CJ12524에 대한 감수성이 높다는 것을 보여준다.
따라서, 활성형 RON, 예를 들어 RON 유전자의 변이체 또는 돌연변이는 CJ12524에 대한 감수성 예측용 바이오 마커로서의 가능성을 보여준다.
또한, 활성형 RON을 발현하는 경우, CJ12495는 이에 대한 항암제 약물로서 이용할 수 있다.
실시예 6: RON 활성이 없는 암세포-이식 모델에서의 CJ12537에 대한 감수성 분석
6-1. 인 비보 이식 모델에서 CJ12537에 의한 종양 억제 확인
RON 활성이 없는 Colo320HSR 세포주를 이용한 동물 모델에서 CJ12537에 의해 종양 형성이 억제되는지 여부를 확인하였다.
구체적으로, RON 활성이 없는 Colo320HSR 세포주를 이용한 동물 모델(대조군)과 상기 Colo320HSR 세포주에 상시 발현되는 RON 활성형 Δ155와 Δ160 유전자, 또는 RON M1254T 돌연변이를 도입한 세포주를 이용한 동물 모델을 제작하였고, CJ12537에 의한 종양 형성 억제능을 비교하였다.
그 결과, 표 2에 나타낸 바와 같이, CJ12537을 농도 별로 처리하였을 때, RON 활성이 없는 대조군 동물 모델에서는 종양 형성이 전혀 억제되지 않았으나, RON 활성형 변이체 에서는 종양 형성이 억제되는 것을 확인할 수 있었다.
Figure 112015085954977-pat00005
6-2. RON 활성이 없는 위암 조직 이식 모델에서의 CJ12537에 의한 종양 억제 확인
RON 활성이 없는 위암 조직 이식 마우스 모델에서 CJ12537에 의한 종양 억제 효능을 확인하고자 하였다.
구체적으로, 5~6주령 Balb/c 누드 마우스에 1×107 세포 (MKN1 parent, MKN1 RONΔ160 stable cell) 를 매트리젤(Matrigel)과 1:1 (v/v) 로 피하주사 하였다. 종양의 크기가 90-100 mm3 이 되었을 때, 그룹을 나누어 약물 투여를 진행하였다. 베히클(vehicle), CJ12537 30 mpk, 100 mpk, 양성 대조군인 Amgen 30 mpk 을 2주 동안 경구로(oral) 매일 약물 투여하였다. 종양 크기는 3일에 한 번 측정하였고, 약물 투여 종료 후 희생시켜 조직을 적출하고 종양의 무게를 측정하였다. 이 때, 조직에서 단백질을 추출하여 p-RON과 관련 단백질들의 발현 변화를 웨스턴 블럿 분석방법을 통해 확인하였다. 또한, 약물 투여 종료 후 종양 크기 변화 확인을 위해 약물 투여 종료 후에도 3일에 한번씩 종양 크기를 측정하여 비교 분석하였다.
그 결과, MKN1 세포를 이식한 마우스 모델에서는 RON의 활성화가 확인되지 않았으며, RON 활성이 없는 경우 CJ12537을 투여하더라도 종양 부피에 별다른 변화가 관찰되지 않아(도 9), CJ12537에 대한 감수성이 없음을 확인할 수 있었다.
이러한 결과를 통해, RON 활성이 없는 경우에는 CJ12537에 대한 감수성이 없음을 알 수 있었다.
<110> CJ HealthCare Corporation <120> Novel Biomarker for Predicting Susceptibility to Protein Kinase and Uses Thereof <130> KPA150671-KR-P1 <150> KR 10-2014-0116787 <151> 2014-09-03 <160> 6 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 3732 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 atggagctcc tcccgccgct gcctcagtcc ttcctgttgc tgctgctgtt gcctgccaag 60 cccgcggcgg gcgaggactg gcagtgcccg cgcaccccct acgcggcctc tcgcgacttt 120 gacgtgaagt acgtggtgcc cagcttctcc gccggaggcc tggtacaggc catggtgacc 180 tacgagggcg acagaaatga gagtgctgtg tttgtagcca tacgcaatcg cctgcatgtg 240 cttgggcctg acctgaagtc tgtccagagc ctggccacgg gccctgctgg agaccctggc 300 tgccagacgt gtgcagcctg tggcccagga ccccacggcc ctcccggtga cacagacaca 360 aaggtgctgg tgctggatcc cgcgctgcct gcgctggtca gttgtggctc cagcctgcag 420 ggccgctgct tcctgcatga cctagagccc caagggacag ccgtgcatct ggcagcgcca 480 gcctgcctct tctcagccca ccataaccgg cccgatgact gccccgactg tgtggccagc 540 ccattgggca cccgtgtaac tgtggttgag caaggccagg cctcctattt ctacgtggca 600 tcctcactgg acgcagccgt ggctgccagc ttcagcccac gctcagtgtc tatcaggcgt 660 ctcaaggctg acgcctcggg attcgcaccg ggctttgtgg cgttgtcagt gctgcccaag 720 catcttgtct cctacagtat tgaatacgtg cacagcttcc acacgggagc cttcgtgtac 780 ttcctgactg tacagccggc cagcgtgaca gatgatccta gtgccctgca cacacgcctg 840 gcacggctta gcgccactga gccagagttg ggtgactatc gggagctggt cctcgactgc 900 agatttgctc caaaacgcag gcgccggggg gccccagaag gcggacagcc ctaccctgtg 960 ctgcgggtgg cccactccgc tccagtgggt gcccaacttg ccactgagct gagcatcgcc 1020 gagggccagg aagtactatt tggggtcttt gtgactggca aggatggtgg tcctggcgtg 1080 ggccccaact ctgtcgtctg tgccttcccc attgacctgc tggacacact aattgatgag 1140 ggtgtggagc gctgttgtga atccccagtc catccaggcc tccggcgagg cctcgacttc 1200 ttccagtcgc ccagtttttg ccccaacccg cctggcctgg aagccctcag ccccaacacc 1260 agctgccgcc acttccctct gctggtcagt agcagcttct cacgtgtgga cctattcaat 1320 gggctgttgg gaccagtaca ggtcactgca ttgtatgtga cacgccttga caacgtcaca 1380 gtggcacaca tgggcacaat ggatgggcgt atcctgcagg tggagctggt caggtcacta 1440 aactacttgc tgtatgtgtc caacttctca ctgggtgaca gtgggcagcc cgtgcagcgg 1500 gatgtcagtc gtcttgggga ccacctactc tttgcctctg gggaccaggt tttccaggta 1560 cctatccaag gccctggctg ccgccacttc ctgacctgtg ggcgttgcct aagggcatgg 1620 catttcatgg gctgtggctg gtgtgggaac atgtgcggcc agcagaagga gtgtcctggc 1680 tcctggcaac aggaccactg cccacctaag cttactgagg agccagtgct gatagcagtg 1740 caacccctct ttggcccacg ggcaggaggc acctgtctca ctcttgaagg ccagagtctg 1800 tctgtaggca ccagccgggc tgtgctggtc aatgggactg agtgtctgct agcacgggtc 1860 agtgaggggc agcttttatg tgccacaccc cctggggcca cggtggccag tgtccccctt 1920 agcctgcagg tggggggtgc ccaggtacct ggttcctgga ccttccagta cagagaagac 1980 cctgtcgtgc taagcatcag ccccaactgt ggctacatca actcccacat caccatctgt 2040 ggccagcatc taacttcagc atggcactta gtgctgtcat tccatgacgg gcttagggca 2100 gtggaaagca ggcagtgtga gaggcagctt ccagagcagc agctgtgccg ccttcctgaa 2160 tatgtggtcc gagaccccca gggatgggtg gcagggaatc tgagtgcccg aggggatgga 2220 gctgctggct ttacactgcc tggctttcgc ttcctacccc caccccatcc acccagtgcc 2280 aacctagttc cactgaagcc tgaggagcat gccattaagt ttgaggtctg cgtagatggt 2340 gaatgtcata tcctgggtag agtggtgcgg ccagggccag atggggtccc acagagcacg 2400 ctccttggta tcctgctgcc tttgctgctg cttgtggctg cactggcgac tgcactggtc 2460 ttcagctact ggtggcggag gaagcagcta gttcttcctc ccaacctgaa tgacctggca 2520 tccctggacc agactgctgg agccacaccc ctgcctattc tgtactcggg ctctgactac 2580 agaagtggcc ttgcactccc tgccattgat ggtctggatt ccaccacttg tgtccatgga 2640 gcatccttct ccgatagtga agatgaatcc tgtgtgccac tgctgcggaa agagtccatc 2700 cagctaaggg acctggactc tgcgctcttg gctgaggtca aggatgtgct gattccccat 2760 gagcgggtgg tcacccacag tgaccgagtc attggcaaag gccactttgg agttgtctac 2820 cacggagaat acatagacca ggcccagaat cgaatccaat gtgccatcaa gtcactaagt 2880 cgcatcacag agatgcagca ggtggaggcc ttcctgcgag aggggctgct catgcgtggc 2940 ctgaaccacc cgaatgtgct ggctctcatt ggtatcatgt tgccacctga gggcctgccc 3000 catgtgctgc tgccctatat gtgccacggt gacctgctcc agttcatccg ctcacctcag 3060 cggaacccca ccgtgaagga cctcatcagc tttggcctgc aggtagcccg cggcatggag 3120 tacctggcag agcagaagtt tgtgcacagg gacctggctg 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tcctggcgtg 1080 ggccccaact ctgtcgtctg tgccttcccc attgacctgc tggacacact aattgatgag 1140 ggtgtggagc gctgttgtga atccccagtc catccaggcc tccggcgagg cctcgacttc 1200 ttccagtcgc ccagtttttg ccccaacccg cctggcctgg aagccctcag ccccaacacc 1260 agctgccgcc acttccctct gctggtcagt agcagcttct cacgtgtgga cctattcaat 1320 gggctgttgg gaccagtaca ggtcactgca ttgtatgtga cacgccttga caacgtcaca 1380 gtggcacaca tgggcacaat ggatgggcgt atcctgcagg tggagctggt caggtcacta 1440 aactacttgc tgtatgtgtc caacttctca ctgggtgaca gtgggcagcc cgtgcagcgg 1500 gatgtcagtc gtcttgggga ccacctactc tttgcctctg gggaccaggt tttccaggta 1560 cctatccaag gccctggctg ccgccacttc ctgacctgtg ggcgttgcct aagggcatgg 1620 catttcatgg gctgtggctg gtgtgggaac atgtgcggcc agcagaagga gtgtcctggc 1680 tcctggcaac aggaccactg cccacctaag cttactgagg agccagtgct gatagcagtg 1740 caacccctct ttggcccacg ggcaggaggc acctgtctca ctcttgaagg ccagagtctg 1800 tctgtaggca ccagccgggc tgtgctggtc aatgggactg agtgtctgct agcacgggtc 1860 agtgaggggc agcttttatg tgccacaccc cctggggcca cggtggccag 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cattgatggt 2760 ctggattcca ccacttgtgt ccatggagca tccttctccg atagtgaaga tgaatcctgt 2820 gtgccactgc tgcggaaaga gtccatccag ctaagggacc tggactctgc gctcttggct 2880 gaggtcaagg atgtgctgat tccccatgag cgggtggtca cccacagtga ccgagtcatt 2940 ggcaaaggcc actttggagt tgtctaccac ggagaataca tagaccaggc ccagaatcga 3000 atccaatgtg ccatcaagtc actaagtcgc atcacagaga tgcagcaggt ggaggccttc 3060 ctgcgagagg ggctgctcat gcgtggcctg aaccacccga atgtgctggc tctcattggt 3120 atcatgttgc cacctgaggg cctgccccat gtgctgctgc cctatatgtg ccacggtgac 3180 ctgctccagt tcatccgctc acctcagcgg aaccccaccg tgaaggacct catcagcttt 3240 ggcctgcagg tagcccgcgg catggagtac ctggcagagc agaagtttgt gcacagggac 3300 ctggctgcgc ggaactgcat gctggacgag tcattcacag tcaaggtggc tgactttggt 3360 ttggcccgcg acatcctgga cagggagtac tatagtgttc aacagcatcg ccacgctcgc 3420 ctacctgtga agtggatggc gctggagagc ctgcagacct atagatttac caccaagtct 3480 gatgtgtggt catttggtgt gctgctgtgg gaactgctga cacggggtgc cccaccatac 3540 cgccacattg acccttttga ccttacccac ttcctggccc agggtcggcg cctgccccag 3600 cctgagtatt gccctgattc tctgtaccaa gtgatgcagc aatgctggga ggcagaccca 3660 gcagtgcgac ccaccttcag agtactagtg ggggaggtgg agcagatagt gtctgcactg 3720 cttggggacc attatgtgca gctgccagca acctacatga acttgggccc cagcacctcg 3780 catgagatga atgtgcgtcc agaacagccg cagttctcac ccatgccagg gaatgtacgc 3840 cggccccggc cactctcaga gcctcctcgg cccacttga 3879 <210> 3 <211> 2460 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 3 atggagctcc tcccgccgct gcctcagtcc ttcctgttgc tgctgctgtt gcctgccaag 60 cccgcggcgg gcgaggactg gcagtgcccg cgcaccccct acgcggcctc tcgcgacttt 120 gacgtgaagt acgtggtgcc cagcttctcc gccggaggcc tggtacaggc catggtgacc 180 tacgagggcg acagaaatga gagtgctgtg tttgtagcca tacgcaatcg cctgcatgtg 240 cttgggcctg acctgaagtc tgtccagagc ctggccacgg gccctgctgg agaccctggc 300 tgccagacgt gtgcagcctg tggcccagga ccccacggcc ctcccggtga cacagacaca 360 aaggtgctgg tgctggatcc cgcgctgcct gcgctggtca gttgtggctc cagcctgcag 420 ggccgctgct tcctgcatga cctagagccc caagggacag ccgtgcatct ggcagcgcca 480 gcctgcctct tctcagccca ccataaccgg cccgatgact gccccgactg tgtggccagc 540 ccattgggca cccgtgtaac tgtggttgag caaggccagg cctcctattt ctacgtggca 600 tcctcactgg acgcagccgt ggctgccagc ttcagcccac gctcagtgtc tatcaggcgt 660 ctcaaggctg acgcctcggg attcgcaccg ggctttgtgg cgttgtcagt gctgcccaag 720 catcttgtct cctacagtat tgaatacgtg cacagcttcc acacgggagc cttcgtgtac 780 ttcctgactg tacagccggc cagcgtgaca gatgatccta gtgccctgca cacacgcctg 840 gcacggctta gcgccactga gccagagttg ggtgactatc gggagctggt cctcgactgc 900 agatttgctc caaaacgcag gcgccggggg gccccagaag gcggacagcc ctaccctgtg 960 ctgcgggtgg cccactccgc tccagtgggt gcccaacttg ccactgagct gagcatcgcc 1020 gagggccagg aagtactatt tggggtcttt gtgactggca aggatggtgg tcctggcgtg 1080 ggccccaact ctgtcgtctg tgccttcccc attgacctgc tggacacact aattgatgag 1140 ggtgtggagc gctgttgtga atccccagtc catccaggcc tccggcgagg cctcgacttc 1200 ttccagtcgc ccagtttttg ccccaacccg cctggcctgg aagccctcag ccccaacacc 1260 agctgccgcc acttccctct gctggtcagt agcagcttct cacgtgtgga cctattcaat 1320 gggctgttgg gaccagtaca ggtcactgca ttgtatgtga 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Ser Ser Leu Gln Gly Arg Cys Phe 130 135 140 Leu His Asp Leu Glu Pro Gln Gly Thr Ala Val His Leu Ala Ala Pro 145 150 155 160 Ala Cys Leu Phe Ser Ala His His Asn Arg Pro Asp Asp Cys Pro Asp 165 170 175 Cys Val Ala Ser Pro Leu Gly Thr Arg Val Thr Val Val Glu Gln Gly 180 185 190 Gln Ala Ser Tyr Phe Tyr Val Ala Ser Ser Leu Asp Ala Ala Val Ala 195 200 205 Gly Ser Phe Ser Pro Arg Ser Val Ser Ile Arg Arg Leu Lys Ala Asp 210 215 220 Ala Ser Gly Phe Ala Pro Gly Phe Val Ala Leu Ser Val Leu Pro Lys 225 230 235 240 His Leu Val Ser Tyr Ser Ile Glu Tyr Val His Ser Phe His Thr Gly 245 250 255 Ala Phe Val Tyr Phe Leu Thr Val Gln Pro Ala Ser Val Thr Asp Asp 260 265 270 Pro Ser Ala Leu His Thr Arg Leu Ala Arg Leu Ser Ala Thr Glu Pro 275 280 285 Glu Leu Gly Asp Tyr Arg Glu Leu Val Leu Asp Cys Arg Phe Ala Pro 290 295 300 Lys Arg Arg Arg Arg Gly Ala Pro Glu Gly Gly Gln Pro Tyr Pro Val 305 310 315 320 Leu Gln Val Ala His Ser Ala Pro Val Gly Ala Gln Leu Ala Thr Glu 325 330 335 Leu Ser Ile Ala Glu Gly Gln Glu Val Leu Phe Gly Val Phe Val Thr 340 345 350 Gly Lys Asp Gly Gly Pro Gly Val Gly Pro Asn Ser Val Val Cys Ala 355 360 365 Phe Pro Ile Asp Leu Leu Asp Thr Leu Ile Asp Glu Gly Val Glu Arg 370 375 380 Cys Cys Glu Ser Pro Val His Pro Gly Leu Arg Arg Gly Leu Asp Phe 385 390 395 400 Phe Gln Ser Pro Ser Phe Cys Pro Asn Pro Pro Gly Leu Glu Ala Leu 405 410 415 Ser Pro Asn Thr Ser Cys Arg His Phe Pro Leu Leu Val Ser Ser Ser 420 425 430 Phe Ser Arg Val Asp Leu Phe Asn Gly Leu Leu Gly Pro Val Gln Val 435 440 445 Thr Ala Leu Tyr Val Thr Arg Leu Asp Asn Val Thr Val Ala His Met 450 455 460 Gly Thr Met Asp Gly Arg Ile Leu Gln Val Glu Leu Val Arg Ser Leu 465 470 475 480 Asn Tyr Leu Leu Tyr Val Ser Asn Phe Ser Leu Gly Asp Ser Gly Gln 485 490 495 Pro Val Gln Arg Asp Val Ser Arg Leu Gly Asp His Leu Leu Phe Ala 500 505 510 Ser Gly Asp Gln Val Phe Gln Val Pro Ile Arg Gly Pro Gly Cys Arg 515 520 525 His Phe Leu Thr Cys Gly Arg Cys Leu Arg Ala Trp His Phe Met Gly 530 535 540 Cys Gly Trp Cys Gly Asn Met Cys Gly Gln Gln Lys Glu Cys Pro Gly 545 550 555 560 Ser Trp Gln Gln Asp His Cys Pro Pro Lys Leu Thr Glu Phe His Pro 565 570 575 His Ser Gly Pro Leu Arg Gly Ser Thr Arg Leu Thr Leu Cys Gly Ser 580 585 590 Asn Phe Tyr Leu His Pro Ser Gly Leu Val Pro Glu Gly Thr His Gln 595 600 605 Val Thr Val Gly Gln Ser Pro Cys Arg Pro Leu Pro Lys Asp Ser Ser 610 615 620 Lys Leu Arg Pro Val Pro Arg Lys Asp Phe Val Glu Glu Phe Glu Cys 625 630 635 640 Glu Leu Glu Pro Leu Gly Thr Gln Ala Val Gly Pro Thr Asn Val Ser 645 650 655 Leu Thr Val Thr Asn Met Pro Pro Gly Lys His Phe Arg Val Asp Gly 660 665 670 Thr Ser Val Leu Arg Gly Phe Ser Phe Met Glu Pro Val Leu Ile Ala 675 680 685 Val Gln Pro Leu Phe Gly Pro Arg Ala Gly Gly Thr Cys Leu Thr Leu 690 695 700 Glu Gly Gln Ser Leu Ser Val Gly Thr Ser Arg Ala Val Leu Val Asn 705 710 715 720 Gly Thr Glu Cys Leu Leu Ala Arg Val Ser Glu Gly Gln Leu Leu Cys 725 730 735 Ala Thr Pro Pro Gly Ala Thr Val Ala Ser Val Pro Leu Ser Leu Gln 740 745 750 Val Gly Gly Ala Gln Val Pro Gly Ser Trp Thr Phe Gln Tyr Arg Glu 755 760 765 Asp Pro Val Val Leu Ser Ile Ser Pro Asn Cys Gly Tyr Ile Asn Ser 770 775 780 His Ile Thr Ile Cys Gly Gln His Leu Thr Ser Ala Trp His Leu Val 785 790 795 800 Leu Ser Phe His Asp Gly Leu Arg Ala Val Glu Ser Arg Cys Glu Arg 805 810 815 Gln Leu Pro Glu Gln Gln Leu Cys Arg Leu Pro Glu Tyr Val Val Arg 820 825 830 Asp Pro Gln Gly Trp Val Ala Gly Asn Leu Ser Ala Arg Gly Asp Gly 835 840 845 Ala Ala Gly Phe Thr Leu Pro Gly Phe Arg Phe Leu Pro Pro Pro His 850 855 860 Pro Pro Ser Ala Asn Leu Val Pro Leu Lys Pro Glu Glu His Ala Ile 865 870 875 880 Lys Phe Glu Tyr Ile Gly Leu Gly Ala Val Ala Asp Cys Val Gly Ile 885 890 895 Asn Val Thr Val Gly Gly Glu Ser Cys Gln His Glu Phe Arg Gly Asp 900 905 910 Met Val Val Cys Pro Leu Pro Pro Ser Leu Gln Leu Gly Gln Asp Gly 915 920 925 Ala Pro Leu Gln Val Cys Val Asp Gly Glu Cys His Ile Leu Gly Arg 930 935 940 Val Val Arg Pro Gly Pro Asp Gly Val Pro Gln Ser Thr Leu Leu Gly 945 950 955 960 Ile Leu Leu Pro Leu Leu Leu Leu Val Ala Ala Leu Ala Thr Ala Leu 965 970 975 Val Phe Ser Tyr Trp Trp Arg Arg Lys Gln Leu Val Leu Pro Pro Asn 980 985 990 Leu Asn Asp Leu Ala Ser Leu Asp Gln Thr Ala Gly Ala Thr Pro Leu 995 1000 1005 Pro Ile Leu Tyr Ser Gly Ser Asp Tyr Arg Ser Gly Leu Ala Leu Pro 1010 1015 1020 Ala Ile Asp Gly Leu Asp Ser Thr Thr Cys Val His Gly Ala Ser Phe 1025 1030 1035 1040 Ser Asp Ser Glu Asp Glu Ser Cys Val Pro Leu Leu Arg Lys Glu Ser 1045 1050 1055 Ile Gln Leu Arg Asp Leu Asp Ser Ala Leu Leu Ala Glu Val Lys Asp 1060 1065 1070 Val Leu Ile Pro His Glu Arg Val Val Thr His Ser Asp Arg Val Ile 1075 1080 1085 Gly Lys Gly His Phe Gly Val Val Tyr His Gly Glu Tyr Ile Asp Gln 1090 1095 1100 Ala Gln Asn Arg Ile Gln Cys Ala Ile Lys Ser Leu Ser Arg Ile Thr 1105 1110 1115 1120 Glu Met Gln Gln Val Glu Ala Phe Leu Arg Glu Gly Leu Leu Met Arg 1125 1130 1135 Gly Leu Asn His Pro Asn Val Leu Ala Leu Ile Gly Ile Met Leu Pro 1140 1145 1150 Pro Glu Gly Leu Pro His Val Leu Leu Pro Tyr Met Cys His Gly Asp 1155 1160 1165 Leu Leu Gln Phe Ile Arg Ser Pro Gln Arg Asn Pro Thr Val Lys Asp 1170 1175 1180 Leu Ile Ser Phe Gly Leu Gln Val Ala Arg Gly Met Glu Tyr Leu Ala 1185 1190 1195 1200 Glu Gln Lys Phe Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Cys Met Leu 1205 1210 1215 Asp Glu Ser Phe Thr Val Lys Val Ala Asp Phe Gly Leu Ala Arg Asp 1220 1225 1230 Ile Leu Asp Arg Glu Tyr Tyr Ser Val Gln Gln His Arg His Ala Arg 1235 1240 1245 Leu Pro Val Lys Trp Met Ala Leu Glu Ser Leu Gln Thr Tyr Arg Phe 1250 1255 1260 Thr Thr Lys Ser Asp Val Trp Ser Phe Gly Val Leu Leu Trp Glu Leu 1265 1270 1275 1280 Leu Thr Arg Gly Ala Pro Pro Tyr Arg His Ile Asp Pro Phe Asp Leu 1285 1290 1295 Thr His Phe Leu Ala Gln Gly Arg Arg Leu Pro Gln Pro Glu Tyr Cys 1300 1305 1310 Pro Asp Ser Leu Tyr Gln Val Met Gln Gln Cys Trp Glu Ala Asp Pro 1315 1320 1325 Ala Val Arg Pro Thr Phe Arg Val Leu Val Gly Glu Val Glu Gln Ile 1330 1335 1340 Val Ser Ala Leu Leu Gly Asp His Tyr Val Gln Leu Pro Ala Thr Tyr 1345 1350 1355 1360 Met Asn Leu Gly Pro Ser Thr Ser His Glu Met Asn Val Arg Pro Glu 1365 1370 1375 Gln Pro Gln Phe Ser Pro Met Pro Gly Asn Val Arg Arg Pro Arg Pro 1380 1385 1390 Leu Ser Glu Pro Pro Arg Pro Thr 1395 1400 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> RON forward primer <400> 5 ctctggggac caggttttcc 20 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> RON reverse primer <400> 6 accatcaatg gcagggagtg 20

Claims (24)

  1. 활성형 RON(Recepteur d'Origine Nantais)을 포함하는, 단백질 키나제 억제제에 대한 감수성 예측용 바이오 마커로서,
    상기 단백질 키나제는 c-MET, Lck, 또는 VEGFR인 것인, 바이오 마커.
  2. 제1항에 있어서, 상기 활성형 RON은 RON 유전자의 스플라이싱 변이체(Splicing variant) 또는 돌연변이(Mutant)를 포함하는 것인, 바이오 마커.
  3. 제2항에 있어서, 상기 스플라이싱 변이체는 서열번호 1의 RONΔ155, 서열번호 2의 RONΔ160 및 서열번호 3의 RONΔ165로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 것인, 바이오 마커.
  4. 제2항에 있어서, 상기 돌연변이는 서열번호 4의 폴리펩타이드 내 1254번째 아미노산이 M에서 T로 치환된 것, 서열번호 4의 폴리펩타이드 내 1335번째 아미노산이 R에서 G로 치환된 것, 서열번호 4의 폴리펩타이드 내 523번째 아미노산이 R에서 Q로 치환된 것, 서열번호 4의 폴리펩타이드 내 1232번째 아미노산이 D에서 V로 치환된 것, 및 서열번호 4의 폴리펩타이드 내 1268번째 아미노산이 M에서 T로 치환된 것으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 것인, 바이오 마커.
  5. 삭제
  6. 제1항에 있어서, 상기 단백질 키나제 억제제는 CJ12495, CJ12537, CJ12524, CJ12567, K252a, SU11274, PHA-665752, ARQ-197, PF-02341066, JNJ-38877605, 포레티닙(Foretinib), SGX523, MP470, AMG102, AMG706, LY2801653, XL-184, 베바시주맙(bevacizumab), XL647, 및 작티마(Zactima)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 것인, 바이오 마커.
  7. 활성형 RON(Recepteur d'Origine Nantais)의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는, 단백질 키나제 억제제에 대한 감수성 예측용 조성물로서,
    상기 단백질 키나제는 c-MET, Lck, 또는 VEGFR인 것인, 조성물.
  8. 제7항에 있어서, 상기 활성형 RON의 발현 수준은 RON 유전자의 스플라이싱 변이체(Splicing variant) 또는 돌연변이(Mutant)의 발현 수준을 포함하는 것인, 조성물.
  9. 제8항에 있어서, 상기 스플라이싱 변이체는 서열번호 1의 RONΔ155, 서열번호 2의 RONΔ160 및 서열번호 3의 RONΔ165로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 것인, 조성물.
  10. 제8항에 있어서, 상기 돌연변이는 서열번호 4의 폴리펩타이드 내의 아미노산이 치환, 결실 또는 삽입된 것인, 조성물.
  11. 제10항에 있어서, 상기 돌연변이는 서열번호 4의 폴리펩타이드 내 1254번째 아미노산이 M에서 T로 치환된 것, 서열번호 4의 폴리펩타이드 내 1335번째 아미노산이 R에서 G로 치환된 것, 서열번호 4의 폴리펩타이드 내 523번째 아미노산이 R에서 Q로 치환된 것, 서열번호 4의 폴리펩타이드 내 1232번째 아미노산이 D에서 V로 치환된 것, 및 서열번호 4의 폴리펩타이드 내 1268번째 아미노산이 M에서 T로 치환된 것으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 것인, 조성물.
  12. 삭제
  13. 제7항에 있어서, 상기 단백질 키나제 억제제는 CJ12495, CJ12537, CJ12524, CJ12567, K252a, SU11274, PHA-665752, ARQ-197, PF-02341066, JNJ-38877605, 포레티닙(Foretinib), SGX523, MP470, AMG102, AMG706, LY2801653, XL-184, 베바시주맙(bevacizumab), XL647, 및 작티마(Zactima)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 것인, 조성물.
  14. 제7항에 있어서, 상기 단백질 키나제 억제제는 암, 건선, 류마티스성 관절염, 염증성 장질환 또는 만성폐쇄성 폐질환에 대한 치료제인 것인, 조성물.
  15. 제14항에 있어서, 상기 암은 ACTH 생성 종양, 급성 림프구성 또는 림프아구성 백혈병, 급성 또는 만성의 림포구성 백혈병, 급성 비림프구성 백혈병, 방광암, 뇌종양, 유방암, 경관암, 만성 골수성 백혈병, 장암, T-존 림프종, 자궁내막증, 식도암, 담즙 방광암, 에윙스 육종(Ewing's sarcoma), 두 및 목암, 설암, 홉킨스 림프종, 카포시스 육종, 신장암, 간암, 폐암, 중피종, 다발성 골수종, 신경아세포종, 비홉킨 림프종, 골육종, 난소암, 신경아세포종, 유선암, 경관암, 전립선암, 췌장암, 대장암, 페니스암, 레티노블라스토마, 피부암, 위암, 갑상선압, 자궁암, 고환암, 윌름스 종양, 및 트로포블라스토마로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인 것인, 조성물.
  16. 제7항에 있어서, 상기 발현 수준을 측정하는 제제는 mRNA에 특이적으로 결합하는 안티센스 올리고뉴클레오티드, 프라이머 쌍 또는 프로브를 포함하는 것인, 조성물.
  17. 제16항에 있어서, 상기 프라이머 쌍은 (a) 서열번호 5로 표시되는 정방향 프라이머; 및 (b) 서열번호 6로 표시되는 역방향 프라이머로 이루어진 것인, 조성물.
  18. 제7항에 있어서, 상기 발현 수준을 측정하는 제제는 단백질에 특이적으로 결합하는 항체, 펩타이드 또는 뉴클레오티드를 포함하는 것인, 조성물.
  19. 제7항에 있어서, 상기 발현 수준을 측정하는 제제는 RON의 인산화를 검출할 수 있는 항체를 포함하는 것인, 조성물.
  20. 제7항 내지 제11항, 및 제13항 내지 제19항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는, 단백질 키나제 억제제에 대한 감수성 예측용 키트.
  21. (a) 대상으로부터 수득된 생물학적 시료 내 활성형 RON(Recepteur d'Origine Nantais)의 발현 수준을 측정하는 단계; 및
    (b) (a) 단계에서 측정한 결과에 기초하여 상기 대상의 단백질 키나제 억제제에 대한 감수성을 판정하는 단계;
    를 포함하는 단백질 키나제 억제제에 대한 감수성 예측방법으로서,
    상기 단백질 키나제는 c-MET, Lck, 또는 VEGFR인 것인, 방법.
  22. 제21항에 있어서, 상기 활성형 RON의 발현 수준은 RON 유전자의 스플라이싱 변이체(Splicing variant) 또는 돌연변이(Mutant)의 발현 수준을 포함하는 것인, 방법.
  23. 제21항에 있어서, 상기 활성형 RON의 발현이 확인된 경우, 상기 대상은 단백질 키나제 억제제에 대한 감수성이 있는 것으로 판정하는 것인, 방법.
  24. 제22항에 있어서, 상기 활성형 RON의 발현 수준이 대조군의 발현 수준에 비하여 고발현인 경우, 상기 대상은 단백질 키나제 억제제에 대한 감수성이 있는 것으로 판정하는 것인, 방법.
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Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR112020008663A2 (pt) * 2018-03-08 2020-10-06 Wellmarker Bio Co., Ltd. composto derivado de tienopiridina, composição farmacêutica compreendendo dito composto e usos terapêuticos do mesmo
US20220267855A1 (en) * 2019-05-03 2022-08-25 Dcgen Co, Ltd. A Method for Predicting Prognosis of Cancer and the Composition Thereof
EP3819300A4 (en) * 2019-09-06 2021-11-24 Wellmarker Bio Co., Ltd. THERAPEUTIC COMPOSITION BASED ON BIOMARKERS
CN115003307A (zh) * 2020-02-06 2022-09-02 伟迈可生物有限公司 用于预防或治疗与kras突变相关的癌症的药物组合物
JP2023516381A (ja) * 2020-03-03 2023-04-19 ウェルマーカー・バイオ・カンパニー・リミテッド Ｋｒａｓ変異および活性化ｒｏｎが存在する癌の予防または治療のための医薬組成物
CN113388680B (zh) * 2020-03-14 2023-07-04 复旦大学附属妇产科医院 上皮性卵巢癌靶点ret及其在诊断和治疗中的作用
EP4154892A4 (en) * 2020-05-18 2023-12-06 Wellmarker Bio Co., Ltd. PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR PREVENTION OR TREATMENT OF SMALL CELL LUNG CANCER ASSOCIATED WITH RON MUTANTS AND METHOD USING SAME
CN116685324A (zh) * 2020-05-18 2023-09-01 伟迈可生物有限公司 用于预防或治疗与ron突变相关的胰腺癌的药物组合物及其使用方法
CN116390729A (zh) * 2020-05-18 2023-07-04 伟迈可生物有限公司 用于预防或治疗与ron突变相关的非小细胞肺癌的药物组合物及其使用方法
WO2023190967A1 (ja) * 2022-03-31 2023-10-05 Ｃｈｏｒｄｉａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ株式会社 イミダゾ［４，５－ｂ］ピリジン誘導体による固形癌治療のためのバイオマーカー
KR20230144483A (ko) * 2022-04-06 2023-10-16 웰마커바이오 주식회사 Ron 돌연변이와 관련된 두경부암 예방 또는 치료용 약학 조성물

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009051992A1 (en) 2007-10-19 2009-04-23 Bausch & Lomb Incorporated Compositions and methods for treating diseases involving ocular angiogenesis by inhibiting one or more selected receptor tyrosine kinases
KR101350006B1 (ko) 2012-09-06 2014-02-13 씨제이제일제당 (주) 피리돈 유도체를 포함하는 단백질 키나제 억제제

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005026329A2 (en) * 2003-09-12 2005-03-24 Cornell Research Foundation, Inc. Methods for identifying target nucleic acid molecules
US20080113874A1 (en) * 2004-01-23 2008-05-15 The Regents Of The University Of Colorado Gefitinib sensitivity-related gene expression and products and methods related thereto
WO2008066498A1 (en) * 2006-12-01 2008-06-05 Agency For Science, Technology And Research Cancer-related protein kinases
CL2008003449A1 (es) * 2007-11-21 2010-02-19 Imclone Llc Anticuerpo o fragmentos del mismo contra el receptor de proteína estimulante de macrófagos/ron; composición farmacéutica que lo comprende; uso para inhibir angiogénesis, crecimiento tumoral, proliferación, migración e invasión de células tumorales, activación de ron o fosforilación de mapk y/o akt; y uso para tratar cáncer.
CA2806726A1 (en) * 2010-08-02 2012-02-09 The Broad Institute, Inc. Prediction of and monitoring cancer therapy response based on gene expression profiling
KR101245559B1 (ko) * 2012-06-29 2013-03-22 한국화학연구원 신규 다중치환 벤즈옥사졸로 치환된 피리딘 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 이상세포 성장 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물
CN107517590B (zh) * 2014-07-29 2021-11-12 威马克生物有限公司 与表皮生长因子受体-靶制剂有关的感受性预测用新型生物标志物及其用途

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009051992A1 (en) 2007-10-19 2009-04-23 Bausch & Lomb Incorporated Compositions and methods for treating diseases involving ocular angiogenesis by inhibiting one or more selected receptor tyrosine kinases
KR101350006B1 (ko) 2012-09-06 2014-02-13 씨제이제일제당 (주) 피리돈 유도체를 포함하는 단백질 키나제 억제제

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HEAD & NECK (2013), vol. 35(8), pp 1106-1113.
Molecular Cancer Therapeutics (2012), vol. 11(4), pp 1036-1047.
Oncogene (2003), vol. 22, pp 186-197.

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