CN107406492A

CN107406492A - 用于预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的生物标记物及其用途

Info

Publication number: CN107406492A
Application number: CN201580059847.XA
Authority: CN
Inventors: 阵东勋; 洪承佑; 文哉喜; 伸在植
Original assignee: Asan Foundation
Current assignee: Well Labeled Organisms
Priority date: 2014-09-03
Filing date: 2015-09-03
Publication date: 2017-11-28
Anticipated expiration: 2035-09-03
Also published as: JP6761798B2; CN107406492B; EP3190416B1; WO2016036172A1; EP3190416A4; US20180180616A1; JP2020202839A; JP7037836B2; JP2017527287A; ES2876232T3; US11946934B2; KR101862719B1; KR20160028399A; EP3190416A1

Abstract

本发明涉及一种用于预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的生物标记物及其用途，并提供一种用于预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的标记、组合物、试剂盒和预测方法。根据本发明，预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的效果优异，因此本发明可以用于癌症治疗。

Description

用于预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的生物标记物及其用途

技术领域

本发明涉及一种用于预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的生物标记物及其用途。

背景技术

通常，对于抗癌治疗，对抗癌药物的体内反应性很大程度上取决于药物靶向的癌细胞对药物的敏感性。癌细胞对给定药物的这种敏感性根据不同癌细胞而变化很大。癌细胞的敏感性归因于药物的靶分子或其中涉及的因素的定量差异或定性差异、耐药性的获得等。基于这样的背景，确认癌细胞的遗传变化(该变化特别是在癌细胞对给定抗癌药物显示敏感性时出现)将是非常有益的，因为所述确认将使得能够早期确定药物的作用、治疗的建立、新治疗的选择等。此外，从临床观点来看非常有用的是：根据常规方法，通过将癌细胞与活检组织等治疗前获得的癌组织分离后，通过用药物治疗癌细胞，基于遗传变化而测量给定癌细胞对药物的敏感性的存在，原因是这种测量将能够预测药物在治疗中的有效性。

同时，蛋白激酶是通过磷酸化调节其它蛋白质的活性、位置和功能从而控制各种细胞内过程的酶。蛋白激酶的功能异常与诸如癌症、免疫疾病、神经疾病、代谢疾病、感染等疾病的机制密切相关。蛋白激酶的实例可以包括Abl、ACK、ALK、Arg、ARK5、Aurora、Axl、Bmx、BTK、CDK、CHK、c-Kit、c-MET、c-RAF、c-SRC、EGFR、FAK、Fes、FGFR、Flt3、GSK3、IGF、IKK、JAK、Lck、LIMK、Lyn、MEK、Mer、MK-2、P38α、PDGFR、PDK、Pim、PKA、PKB、PKCR、Plk-1/3、Ret、RON、Ros、Rse、Tie、Trk、Tyro3、VEGFR、YES等。

其中，关于c-MET，c-MET的异常活化与抗癌治疗预后的恶化密切相关，并且在诸如非小细胞肺癌等各种癌症中观察到c-MET的过表达和突变。由于肿瘤的侵袭和转移是癌症患者死亡的主要原因，因此预期c-MET信号传导的抑制对于癌症治疗是有效的。

Recepteur d'Origine Nantais(RON)是属于MET(c-MET)系列的蛋白受体。它在肝脏中分泌，并且是调节巨噬细胞作用的血清蛋白(巨噬细胞刺激蛋白，MSP)的受体(ZhouYQ,He C,Chen YQ,Wang D,Wang MH:改变原发性人结肠直肠腺癌中RON受体酪氨酸激酶的表达：不同剪接RON变体的产生及其致癌潜力。Oncogene 2003,22(2):186-197)。RON表达在乳腺癌和结肠直肠癌中被异常调节，更具体地，其与结肠直肠癌的转移密切相关。RON活性的程度由选择性剪接调控，其为调节真核生物的基因表达的主要过程之一。RONΔ155、RONΔ160和RONΔ165是通过这种剪接跳过外显子而产生的形式，并且即使没有配体，它们也总是处于结构活化状态。

此外，RON基因的突变与各种癌症的发生和分级相关。

在韩国专利号10-1350006中描述的CJ12495、CJ12537、CJ12524和CJ12567是能够抑制癌细胞异常增殖的抗癌药物，并且它们是能够抑制蛋白激酶活性的抑制剂。

如上所述，抗癌药物在耐药性和毒性方面显示出个体差异，并且具有超过约一半的患者表现出抗性的问题，因此选择合适的治疗-反应性标记物可带来创新性改善。因此，目前正在积极且持续地开发根据特定基因对单个癌症药物治疗的反应性的研究。

然而，由于与对特定药物体内反应相关的因素的复杂作用、治疗药物的多样性和给药模式、以及难以获得足够的样品，所以成果仍然可以忽略。

发明内容

[技术问题]

在这种情况下，本发明人努力开发能够预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的生物标记物，所述蛋白激酶抑制剂是针对结肠癌的抗癌药物。作为结果，他们已经根据RON基因的活化分析了RON基因的变体和突变体以及敏感性，并且根据RON基因的变体和突变体的RON活化或表达特征，确认了由于对特定药物的敏感性导致的癌细胞的大小和重量的降低程度根据结肠癌细胞不同而变化，从而完成本发明。

因此，在一个目的中，本发明提供用于预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的生物标记物、组合物、试剂盒及其方法。

[技术方案]

为了实现上述目的，本发明的一个目的提供一种用于预测对蛋白激酶抑制剂(包括活性Recepteur d'Origine Nantais(RON))的敏感性的生物标记物。

此外，本发明提供一种用于预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的组合物，其包含用于测量活性RON的表达水平的试剂。

此外，本发明提供一种用于预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的试剂盒，其包含所述组合物。

此外，本发明提供一种用于预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的方法。

[本发明的有益效果]

使用本发明的生物标记物来预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性可以肯定地确定在开始治疗之前个体患者的敏感性，因此可以选择具有高治疗效果的抗癌药物。此外，可以避免使用没有显著效果的抗癌药物，因此可以防止不必要的副作用。

附图说明

图1a示出了结肠癌细胞系(HT29、colo320hsr和MKN28)和结肠癌患者的样品中野生型RON或RONΔ155或RONΔ160变体的RT-PCR结果。图1b示出了结肠癌细胞系(HT29、colo320hsr和MKN28)和结肠癌患者的样品中野生型RON或RONΔ155或RONΔ160变体的蛋白质印迹和免疫沉淀(IP)结果。图1c示出了结肠癌患者的样品中P-RON的IHC结果。

图2a表示说明PDX模型中药物敏感性试验过程的示意图。图2b示出了当在PDX模型制备过程中关于RON变体确定为阳性的结肠癌患者的样品的第116号样品被移植时的情况下肿瘤大小以及当在PDX模型制备过程中关于RON变体确定为阳性的第130号样品被移植时的情况下肿瘤大小的测量结果。

图3a表示当CJ12567施用于患者来源的结肠癌组织异种移植模型(PDX模型)中时在裸小鼠中形成的癌组织的图像，所述PDX模型是移植有结肠癌患者的第87和第116号样品的裸小鼠。图3b示出了从上述小鼠获得的肿瘤组织大小的测量结果。图3c示出了从上述小鼠获得的肿瘤组织重量的测量结果。图3d示出了从上述小鼠获得的肿瘤组织的IHC结果。图3e示出了从上述小鼠获得的肿瘤组织的蛋白质印迹结果。

图4a示出了CJ12495对RON磷酸化的抑制。图4b示出了在导入了RON突变基因的细胞中RON磷酸化的抑制。图4c示出了RON基因变体中RON磷酸化的抑制。

图5a示出了CJ12495对细胞运动性的抑制。图5b示出了在导入了RON突变基因的细胞中细胞运动性的抑制。图5c示出了RON基因变体中细胞运动性的抑制。

图6a示出了CJ12495对细胞转移的抑制。图6b示出了在导入了RON突变基因的细胞中细胞转移的抑制。图6c示出了RON基因变体中细胞转移的抑制。

图7a示出了CJ12524对RON磷酸化的抑制。图7b示出了RON基因变体中RON磷酸化的抑制。图7c示出了通过CJ12524的凋亡。图7d示出了RON基因变体中的凋亡。图7e示出了CJ12524对细胞转移的抑制。

图8a示出了在将CJ12524施用于RON-活性癌细胞-异种移植模型之后从小鼠获得的肿瘤组织大小和重量的测量结果。图8b示出了在小鼠中形成的肿瘤组织大小的图像。图8c示出了从小鼠获得的肿瘤组织的IHC结果。图8d示出了从小鼠获得的肿瘤组织的蛋白质印迹结果。

图9示出了将CJ12537施用于RON-失活胃癌细胞-异种移植模型之后的肿瘤体积的测量结果。

具体实施方式

在下文中，更详细地解释本发明。

在一个方面，本发明提供了一种用于预测对蛋白激酶抑制剂(包括活性Recepteurd'Origine Nantais(RON))的敏感性的生物标记物。

如本文所用，术语“Recepteur d'Origine Nantais(RON)”是指属于MET(c-MET)系列的蛋白质受体，其在肝脏中分泌并且用作血清蛋白(巨噬细胞-刺激蛋白，MSP)的受体，调节巨噬细胞的作用。RON蛋白和RON基因是本领域已知的，并且可以从已知的数据库获得。具体地，RON蛋白的序列可以是基因库号NP_002438.2中公开的那些，并且RON基因的序列可以是基因库号NM_002447.1中公开的那些。

在本发明中，确认了当RON处于活化状态或以活性形式存在时，对蛋白激酶抑制剂的敏感性变得更高。因此，活性RON可以用作生物标记物。活性RON可以理解为涵盖可以在所有表达水平例如DNA、mRNA、蛋白质水平等中被确认为活性形式的所有概念。在一个示例性实施方式中，活性RON可以是具有磷酸化的RON，例如，活性RON可以以其中RON蛋白在激酶结构域中磷酸化，因此以活性形式存在的形式存在，或者活性RON可以是在存在配体(例如MSP)时诱导为活性形式的形式。此外，活性RON可以包括RON基因的剪接变体或突变体，其中RON总是处于活性形式。

因此，在示例性实施方式中，本发明提供了一种用于预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的生物标记物，其包括RON基因的剪接变体或突变体。

如本文所用，术语“变体”是指通过选择性剪接缺失相应基因的外显子区而形成的RON同种型。

在本发明的优选实施方式中，本发明的变体可以是其中通过选择性剪接缺失选自由RON基因的外显子5、6和11组成的组中的至少一种。更优选地，本发明的变体可以是RONΔ155(缺失RON基因的外显子5、6和11的变体)、RONΔ160(缺失RON基因的外显子5和6的变体)或RONΔ165(缺失RON基因的外显子11的变体)。

RON基因的变体RONΔ155由序列号1表示，RONΔ160由序列号2表示，RONΔ165由序列号3表示。

根据本发明，通常在人结肠癌患者的细胞和组织中特异性地发现剪接变体，其中外显子通过RON基因的可变剪接机制缺失，并且它们对药物的敏感性根据其表达而变化。

如本文所用，术语“突变体”包括其中相应基因的核苷酸或氨基酸序列经过碱基取代、缺失、插入、扩增和重排的那些。核苷酸修饰表示核苷酸序列相对于参考序列(例如，野生型序列)的改变，例如至少一个核苷酸的插入、缺失、倒位或取代，例如单核苷酸多态性(SNP)。除非另有说明，该术语还可以包括核苷酸序列的互补序列的变化。核苷酸修饰可以是体细胞突变或种系多态性。

此外，氨基酸修饰可以指示氨基酸序列相对于参考序列(例如，野生型序列)的改变，例如至少一个氨基酸的插入、取代或缺失，例如内部缺失或N-或C-末端截短。

在优选的实施方式中，本发明的突变体可以是序列号4的多肽中氨基酸被取代、缺失或插入的突变体。

在优选的实施方式中，本发明的突变体可以是选自由序列号4的多肽中第1254位氨基酸从M取代为T的突变体；序列号4的多肽中第1335位氨基酸从R取代为G的突变体；序列号4的多肽中第523位氨基酸从R取代为Q的突变体；序列号4的多肽中第1232位氨基酸从D取代为V的突变体；和序列号4的多肽中第1268位氨基酸从M取代为T的突变体组成的组中的至少一种。

本发明的生物标记物可以是对作为抗癌药物的蛋白激酶抑制剂的敏感性的指示剂。由于本发明的生物标记物对于用于敏感标记物的抗癌药物具有优异的准确性和保真度，因此其可以用于治疗癌症的发生、发展和/或转移。

如本文所用，术语“敏感性”是指特定药物对个体癌症患者的癌症表现出任何效果。

例如，特定药物主要是指抗癌药物，在这些抗癌药物中，已知一些药物表现出抗癌作用，而其它药物则不具有抗癌作用。此外，即使对于显示药物有效的癌症，已知根据个体患者，药物可能有或没有效果。抗癌药物对个体癌症患者存在的作用称为抗癌药物敏感性。因此，如果可以在开始治疗之前根据本发明预测患者，则预测是否在患者(响应性患者)中预期显示药物效果或在患者(无响应性的患者)中预期不显示药物效果，可以实施具有高效力和安全性的化疗。

如本文所用，术语“预测”用于指示药物或药物组是否可以对受试患者有利地或不利地反应的可能性。在一个方面，预测可以涉及这种反应性的程度。例如，预测涉及在用特定治疗剂治疗和/或原发性肿瘤的手术切除和/或化疗后在预定时间段内没有癌症复发的患者的存活，和/或其概率。本发明的预测可以在临床上用于通过选择对结肠癌患者最合适的治疗方法来确定治疗。本发明的预测是用于预测患者是否可以有利地对治疗处理做出反应的有效工具，例如，给定的治疗处理(例如，施用给定的治疗剂或组合的药剂，引入手术、化疗等)或患者是否能在治疗处理后长期存活。

在本发明的优选实施方案中，蛋白激酶可以是选自由Ab1、ACK、ALK、Arg、ARK5、Aurora、Axl、Bmx、BTK、CDK、CHK、c-Kit、c–MET、c-RAF、c-SRC、EGFR、FAK、Fes、FGFR、Flt3、GSK3、IGF、IKK、JAK、Lck、LIMK、Lyn、MEK、Mer、MK-2、P38α、PDGFR、PDK、Pim、PKA、PKB、PKCR、Plk-1/3、Ret、RON、Ros、Rse、Tie、Trk、Tyro3、VEGFR和YES组成的组中的至少一种，更具体地，c-MET、c-RAF、c-SRC、EGFR、FAK、Fes、FGFR、MEK、Mer、MK-2、P38α、PDGFR、PDK、Pim、PKA、PKB、PKCR、Plk-1/3、Ret或RON，最具体地，c-MET和RON。

在本公开的优选实施方案中，蛋白激酶抑制剂可以是选自由CJ12495、CJ12537、CJ12524、CJ12567、K252a、SU11274、PHA-665752、ARQ-197、PF-02341066、PF-04217903、JNJ-38877605、Foretinib、SGX523、MP470、AMG102、AMG706、LY2801653、XL-184、Flavopihdol、Olomoucine、Roscovitine、Purvanolols、CGP74514A、Roscovitine、Bevacizumab、Cetuximab、Gefitinib、Erlotinib、Panitumumab、PKI-166、EKB-569、HKI-272(WAY-177820)、Lapatinib、Canertinib、AEE788、XL647、BMS 5599626和Zactima组成的组中的至少一种，更具体地，CJ12495、CJ12537、CJ12524、CJ12567、K252a、SU11274、PHA-665752、ARQ-197、PF-02341066、PF-04217903、JNJ-38877605、Foretinib、SGX523、MP470、AMG102、AMG706、LY2801653或XL-184，最具体地，CJ12495、CJ12537、CJ12524或CJ12567。

上述CJ12495、CJ12537、CJ12524和CJ12567是抑制蛋白激酶活性的抑制剂，如韩国专利号10-1350006中所述，将其并入本文作为参考。在本发明中，CJ12495、CJ12537、CJ12524和CJ12567用作具有抑制癌细胞异常增殖功能的抗癌药物。

具体地，本发明的蛋白激酶抑制剂可以是在韩国专利号10-1350006中描述的由下式1表示的化合物或其盐。

[式1]

更具体地，作为本发明的蛋白激酶抑制剂的CJ12495是韩国专利号10-1350006的实施例1中制备的“4-乙氧基-N-(3-氟-4-(2-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)噻吩并[3,2-b]吡啶-7-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺”，并且可以是由下面所示的式2表示的化合物。此外，CJ12537是CJ12495的HCl盐，即“4-乙氧基-N-(3-氟-4-(2-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)噻吩并[3,2-b]吡啶-7-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺”的HCl盐。

[式2]

此外，更具体地，作为本发明的蛋白激酶抑制剂的CJ12524是韩国专利号10-1350006的实施例8中制备的“4-乙氧基-N-(3-氟-4-(2-(吡啶-2-基)噻吩并[3,2-b]吡啶-7-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺”，并且可以是由下面所示的式3表示的化合物。此外，CJ12567是CJ12524的HCl盐，即“4-乙氧基-N-(3-氟-4-(2-(吡啶-2-基)噻吩并[3,2-b]吡啶-7-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺”的HCl盐。

[式3]

根据另一方面，本发明提供一种用于预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的组合物，其含有用于测量活性Recepteur d’Origine Nantais(RON)表达水平的试剂。活性RON与上述相同，具体地，活性RON的表达水平可以包括剪接变体或突变体的表达水平。在本发明中，活性RON的表达水平可以理解为指包括DNA、mRNA、蛋白质等水平的所有种类的表达水平。

根据优选实施方式，本发明的蛋白激酶抑制剂可以是用于癌症、牛皮癣、类风湿性关节炎、炎性肠病或慢性阻塞性肺病的治疗剂。

根据优选实施方式，癌症可以是选自由ACTH产生性癌症、急性淋巴细胞性或淋巴母细胞性白血病、急性或慢性淋巴细胞白血病、急性非淋巴细胞性白血病、膀胱癌、脑肿瘤、乳腺癌、宫颈癌、慢性骨髓性白血病、肠癌、T区淋巴瘤、子宫内膜异位症、食管癌、胆囊癌、尤因氏肉瘤、头颈癌、舌癌、霍奇金淋巴瘤、卡波西肉瘤、肾癌、肝癌(liver cancer)、肺癌、间皮瘤、多发性骨髓瘤、神经母细胞瘤、非霍奇金淋巴瘤、骨肉瘤、卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、结肠癌、肝癌(penine cancer)、视网膜母细胞瘤、皮肤癌、胃癌、甲状腺癌、子宫癌、睾丸癌、维尔姆斯氏瘤和滋养层细胞瘤组成的组中至少一种。更具体地，癌症可以是选自由神经母细胞瘤、非霍奇金淋巴瘤、骨肉瘤、卵巢癌、乳腺癌、宫颈癌、前列腺癌、胰腺癌、结肠癌、肝癌、视网膜母细胞瘤、皮肤癌症、胃癌、甲状腺癌、子宫癌、睾丸癌、维尔姆斯氏瘤和滋养层细胞瘤组成的组中至少一种，最具体地，结肠癌。

如本文所用，术语“结肠癌”共同地指直肠癌、结肠直肠癌和肛门癌。

在本发明中，除非另有说明，表述“表达水平的测量”是指检测给定样品中待检测的受试者。在本发明中，待检测的受试者可以包括给定样品中的相应蛋白质的活化形式，并且可以包括基因突变体的变体的mRNA和/或蛋白质。也就是说，通过检测作为基因变体或突变体产物的RNA或作为基因产物的蛋白质以及通过检测蛋白质的活化形式，可以确认表达的存在。

检测可以通过从样品中常规提取RNA或蛋白质或通过检测提取物中存在的RNA或蛋白质来进行。RNA或蛋白质的检测可以通过免疫测定方法、杂交方法和扩增方法来测量，但是检测方法不限于此，并且可以使用本领域已知的各种技术容易地进行检测。

根据本发明的优选实施方式，用于测量表达水平的试剂可以包括特异性结合mRNA(特别是剪接变体或突变体的mRNA)的反义寡核苷酸、引物对或探针。

用于测量mRNA表达存在的试剂可以选自对上述基因特异性的反义寡核苷酸、引物对和探针及其组合。也就是说，核酸的检测可以通过至少一种扩增反应进行，其使用与编码核酸分子的基因或互补产物的核酸分子杂交的至少一种寡核苷酸引物。

例如，使用引物检测mRNA可以通过采用扩增方法例如PCR扩增基因的序列后，通过本领域公知的方法确认基因扩增的存在来进行。

根据本发明的优选实施方式，引物对可以由(a)序列号5的正向引物；和(b)序列号6的反向引物组成。

另外，根据本发明的优选实施方式，用于测量表达水平的试剂可以包括RON蛋白，例如特异性结合活性RON或突变蛋白的抗体、肽或核苷酸。此外，用于测量表达水平的试剂可以包括用于检测RON磷酸化以确认存在活性形式的RON蛋白的抗体。

用于测量蛋白质表达存在的试剂是指与蛋白质特异性结合的抗体，并且可以包括所有的多克隆抗体、单克隆抗体、重组抗体及其组合。

抗体不仅可以包括多克隆抗体、单克隆抗体、重组抗体和具有两条全长轻链和两条全长重链的完整形式的抗体，而且还可以包括所有的功能片段抗体分子，例如Fab、F(ab')、F(ab')2和Fv。抗体可以使用本发明所属领域中已知的技术容易地制备，并且也可以使用在商业市场上制备和可获得的任何抗体。

尽管本发明的组合物含有用于测定上述基因表达的存在的试剂，但是该组合物还可以含有能够定量或定性地测定抗原抗体复合物形成的标记、用于免疫测定的现有装置、试剂等。

能够定量或定性测量抗原-抗体复合物形成的标记的实例可以包括酶、荧光材料、配体、发光材料、微粒、氧化还原分子、放射性同位素等，但不限于此。用作检测标记的酶的实例可以包括β-葡糖醛酸糖苷酶、β-D-葡萄糖苷酶、β-D-半乳糖苷酶、脲酶、过氧化物酶、碱性磷酸酶、乙酰胆碱酯酶、葡萄糖氧化酶、己糖激酶和GDPase、RNase、葡萄糖氧化酶和荧光素酶、磷酸果糖激酶、磷酸烯醇丙酮酸羧激酶、天冬氨酸转氨酶、磷酸烯醇丙酮酸脱羧酶、β-折叠酶等，但不限于此。荧光材料的实例可以包括荧光素、异硫氰酸酯、罗丹明、藻红蛋白、藻蓝蛋白、别藻蓝蛋白、邻苯二甲醛、荧光胺等，但不限于此。配体的实例可以包括生物素衍生物，但不限于此。发光材料的实例可以包括吖啶酯、荧光素、荧光素酶等，但不限于此。微粒的实例可以包括胶体金、有色胶乳等，但不限于此。氧化还原分子的实例可以包括二茂铁、钌络合物、紫精、醌、Ti离子、Cs离子、二酰亚胺、1,4-苯醌、氢醌、K4W(CN)₈、[Os(bpy)₃]²⁺、RU(bpy)₃]²⁺、[MO(CN)₈]^4-等，但不限于此。放射性同位素的实例可以包括³H、¹⁴C、³²P、³⁵S、³⁶Cl、⁵¹Cr、⁵⁷Co、⁵⁸Co、⁵⁹Fe、⁹⁰Y、¹²⁵I、¹³¹I、¹⁸⁶Re等，但不限于此。

装置或试剂的实例可以包括适当的载体、增溶剂、清洁剂、缓冲剂、稳定剂，但不限于此。当标记材料是酶时，可以包括能够测量酶活性的底物和反应终止物。载体可以是可溶性载体或不溶性载体。可溶性载体的实例可以包括本领域已知的生理学上可接受的缓冲液，例如PBS。不溶性载体的实例可以包括聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、聚酯、聚丙烯腈、氟树脂、交联葡聚糖、多糖、纸、玻璃、金属、琼脂糖及其组合。

由于本发明的组合物包含上述生物标记物作为活性成分，因此在此省略对内容物的重复描述，以避免本发明的过度复杂性。

根据另一方面，本发明提供一种用于预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的试剂盒，其包括所述组合物。

试剂盒不仅可以包括用于测量基因表达水平的试剂，而且可以包括用于免疫测定领域中通常使用的试剂盒、试剂等。

在试剂盒或试剂的示例性实施方式中，可以包括能够形成可检测信号的标记材料、发色团、增溶剂、清洁剂、缓冲剂、稳定剂等，但不限于此。当标记材料是酶时，可以包括能够测量酶活性的底物和反应终止物。载体可以是可溶性载体或不溶性载体。可溶性载体的实例可以包括本领域已知的生理学上可接受的缓冲液，例如PBS。不溶性载体的实例可以包括聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、聚酯、聚丙烯腈、氟树脂、交联葡聚糖、多糖、纸、玻璃、金属、琼脂糖及其组合。

由于本发明的组合物含有上述生物标记物作为构成，因此在此省略对内容的重复描述，以避免本发明的过度复杂性。

根据另一方面，本发明提供了一种用于预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的方法，包括(a)测量从受试者获得的生物样品内的活性Recepteur d’OrigineNantais(RON)的表达水平；和(b)基于步骤(a)中测量的结果，确定受试者对蛋白激酶抑制剂的敏感性。

待测量的活性RON的表达水平与上述相同，并具体地，其可以包括RON基因的剪接变体或突变体的表达水平。

根据本发明的优选实施方式，在确认步骤(a)的活性RON表达的情况下，确定受试者对蛋白激酶抑制剂具有敏感性。

本发明的预测方法通过获得从受试患者获得的生物样品来进行；测量样品中选自由RON基因的变体或突变体组成的组中的一种或多种的表达水平；并且在确认表达后，确定相应的样品对蛋白激酶抑制剂具有敏感性。

也就是说，本发明的预测方法的特征在于，样品中特定变体或突变体的表达的存在被用作抗癌药物对癌细胞的敏感性的指标。

此外，根据本发明的优选实施方式，在步骤(a)的活性RON的表达水平高于对照组的表达水平的情况下，确定受试者对蛋白激酶抑制剂具有敏感性。

本发明还可以包括将样品的表达水平与对照组的表达水平进行比较。

本发明的预测方法通过获得从受试患者获得的生物样品来进行；测量样品中选自由RON基因的变体或突变体组成的组中的一种或多种的表达水平；并且在比较表达水平和基于其表达特征时，确定相应的样品对蛋白激酶抑制剂具有敏感性。

除非另有说明，如本文所用，术语“对照组”是指正常健康人的相应基因或其蛋白质的变体的表达水平；正常健康人的相应基因或其蛋白的野生型的表达水平；具有用于比较的疾病的受试患者的相应基因或其蛋白质的变体的表达水平；或具有用于比较的疾病的受试患者的相应基因或其蛋白质的野生型的表达水平。

更具体地，本发明的步骤(b)是这样的过程，当对照组(例如，RON基因变体、突变体或野生型)的活性RON的表达水平被确认为高于步骤(a)中测量的表达水平的情况下，确定从受试患者获得的相应癌细胞具有对作为抗癌剂的蛋白激酶抑制剂的敏感性。

如本文所用，术语“高表达”表示生物样品中生物标记物的值或水平，在生物标记物表现出异常过程、疾病或个体中的其它疾病状况或其标志的情况下，其高于从健康或野生型(正常)个体获得的生物样品中检测到的生物标记物的值或水平。此外，与生物标记物的“正常”表达水平或值相比，术语“高表达”可以指示“差异水平”或“差异值”或“不同表达”，并且可以包括表达水平中的定量差异和定性差异。

根据本发明的优选实施方式，高表达意指受试者的表达水平与对照组的表达水平相比增加1.2倍。

在本发明中，基因的变体和突变体的存在和表达可以影响对蛋白激酶抑制剂的敏感性，如上所述。

变体或突变体的检测可以使用本领域广泛已知的技术通过靶分子克隆和序列分析来进行，例如DNA序列分析；引物延伸测定例如等位基因特异性核苷酸掺入测定和等位基因特异性引物延伸测定(例如，等位基因特异性PCR、等位基因特异性连接链反应(LCR)和gap-LCR)；等位基因特异性寡核苷酸杂交测定(例如，寡核苷酸连接测定)；裂解保护测定法，用于使用来自裂解剂的保护来检测核酸双螺旋内的错配核苷酸；MutS蛋白结合测定；电泳分析，用于比较变体和野生型的核酸的迁移率；变性梯度凝胶电泳(DGGE，例如如[Myers等.(1985)Nature 313:495]中所述)；在错配碱基对中的核糖核酸酶切割测定；异双螺旋DNA的化学或酶裂解分析；分光光度法(例如MALDITOF)；遗传比特分析(GBA)；5'核酸酶测定(例如)；以及使用分子信标的测定，但是该技术不限于此。

如本文所用，术语“生物样品”是指可以从受试者获得的任何样品，其中可以检测本发明的生物标记物的表达。

生物样品可以是选自由唾液、活组织检查、血液、皮肤组织、液体培养物、粪便和尿液组成的组中的任一种。然而，生物样品不特别限于此，并且其可以通过本领域中常规使用的任何方法制备。

根据本发明的方法，使用上述生物标记物确定敏感性，并且在此省略对该内容的重复描述，以避免本发明的过度复杂性。

实施例

在下文中，将参考以下实施例更详细地描述本发明。然而，这些实施例仅用于说明的目的，并且本发明不受这些实施例的限制。

实验方法和条件

RT-PCR

通过Trizol RNA提取方法从结肠癌细胞系或人结肠癌患者的样品提取总RNA，并将1μg总RNA重新合成为cDNA。然后，使用RON引物对(序列号5的正向引物5'-CTCTGGGGACCAGGTTTTCC-3'和序列号6的反向引物5’'-ACCATCAATGGCAGGGAGTG-3')进行RT-PCR，将PCR产物在1％琼脂糖凝胶中电泳并用溴化乙锭染色。PCR条件如下表1中所示。

[表1]

蛋白质印迹

使用RIPA缓冲液裂解样品中的细胞，并使用高速离心机从中提取蛋白质。通过电泳以30μg/细胞的量分离蛋白质，通过蛋白质印迹转移到PDVF膜上，并使其与在5％脱脂乳中以1：2000比例稀释的RON抗体在4℃下反应12小时。然后，将所得物用TBS-T缓冲液洗涤3次，每次洗涤15分钟，与在5％脱脂乳中以1：2000比例稀释的二抗在室温下反应2小时，用TBS-T缓冲液洗涤3次，每次洗涤15分钟。使用ECL缓冲液诱导PDVF膜的照明，并使用X射线胶片显现RON蛋白的表达。此外，通过免疫沉淀法将1μg的RON抗体以500μg/细胞的量加入到蛋白质中，在4℃下反应12小时，并向其中加入抗抗体珠以免疫沉淀RON抗体。通过电泳分离所得物，通过蛋白质印迹转移到PDVF膜上，并使其与在5％脱脂乳中以1：1000比例稀释的p-Tyr抗体在4℃下反应12小时。然后，将所得物用TBS-T缓冲液洗涤3次，每次洗涤15分钟，与在5％脱脂乳中以1:2000比例稀释的二抗在室温下反应2小时，并用TBS-T缓冲液洗涤3次，每次洗涤15分钟。使用ECL缓冲液诱导PDVF膜的照明，并使用X射线胶片显现p-Tyr RON蛋白的表达。

免疫组织化学

完成给药时，将组织切除，固定在10％福尔马林溶液中，并在第二天由其制备石蜡块。将组织切成5μm的大小，用二甲苯处理，用100％、95％和70％EtOH处理，用3％BSA封闭，并使其与在1％BSA中以1:100比例各自稀释的磷酸-RON和RON抗体在4℃下反应12小时。然后，将所得物用PBS-T缓冲液洗涤3次，每次洗涤15分钟，使其与在1％BSA中以1：100比例稀释的二抗在室温下反应2小时，用TBS-T缓冲液洗涤3次，每次洗涤15分钟，用DAB底物处理，用苏木精处理，并进行脱水过程。然后，向其上滴加固定溶液，用盖玻片覆盖，并且染色蛋白质表达。

结肠癌异种移植模型(PDX-模型)

将来源于冷冻保存患者组织的小鼠模型的肿瘤在冰上解冻并在培养基(其中加入HBBS、5％FBS、1X青霉素/链霉素和1X庆大霉素/两性霉素B)中稳定。切出大小约为3mm³的所得物，并在切出其皮肤后移植到小鼠的皮肤表面，并缝合表面。在确认肿瘤形成后，当肿瘤生长至400mm³至500mm³的大小时，组织被切除并再次切成3mm³的大小并移植到Balb/c裸鼠中。确认肿瘤形成后，对小鼠进行给药。

用抗癌药物治疗

本发明中使用的抗癌药物是c-MET抑制剂，其为韩国专利号10-1350006中描述的CJ12567，并且LY2801653(Lily Co.)用作阳性对照。

在确认肿瘤形成后，当肿瘤大小达到100mm³时，将实验动物分成各种给药组，并施用溶解于0.5％甲基纤维素中的CJ12567和LY-2801653。CJ12567以30mpk和100mpk的浓度每天口服给药14天，LY-2801653以30mpk的浓度每天口服给药14天。在给药期间，使用测径器以3天的间隔测量肿瘤大小，并测量小鼠体重。

RON基因突变体

使用RON基因突变体(RON M1254T、RON R1335G和RON R523Q)。

实施例1、从结肠癌患者的组织中选择RON基因变体

为了在结肠癌患者的组织中确认RON基因变体，本发明人分析了总共200个结肠癌患者的组织样品。

首先，为了确认结肠癌细胞系(HT29、colo320hsr和MKN28)和结肠癌患者样品中的RON野生型或RONΔ155或RONΔ160变体的表达，使用通过本发明人制备的引物进行RT-PCR。

作为结果，如图1a中所示，确认了HT29细胞系表达RONΔ160变体，而colo320hsr细胞系表达RONΔ155变体。此外，确认了在结肠癌患者的样品87和116号中表达RONΔ155或RONΔ160变体。

然后，为了确认与进行RT-PCR的结肠癌患者相同的样品中的RON表达，进行蛋白质印迹(图1b)和免疫组织化学(图1c)。

作为结果，如图1b和1c中所示，确认了RONΔ155变体或RONΔ160变体的结肠癌患者的样品87和116号中的RON蛋白大小与HT29细胞系中RONΔ160变体的蛋白大小相同。此外，考虑到RONΔ160变体可以表达p-Tyr RON蛋白，确认了RONΔ160变体可以活化RON蛋白。

实施例2、在RON变体表达的患者来源的结肠癌异种移植物模型(PDX模型)中对CJ12567的药物敏感性分析

为了分析在体内状态下对CJ12567的药物敏感性，本发明人将被确定为对RON变体为阳性的结肠癌患者的样品87和116号移植到裸鼠中，从而获得患者来源的结肠癌症异种移植模型(PDX模型)。

同时，在制备异种移植模型的过程中，如图2b中所示，当移植了被确定为对RON变体为阳性的结肠癌患者的样品116号时，与移植了未被确定为对RON变体为阳性的样品130号相比，肿瘤组织更大且更快地形成。

向其中移植患者来源的结肠癌组织的小鼠施用CJ12567(30mpk，100mpk)，LY2801653(30mpk)作为阳性对照组，以及载体(0.5％甲基纤维素)作为正常对照组。然后，测量癌组织的大小和重量，并进行IHC和蛋白质印迹分析，从而确认药物敏感性。

2-1、患者样品116号来源的结肠癌异种移植模型(PDX模型)中对CJ12567的药物敏感性

如图3a至3c中所示，当向患者来源的异种移植模型(PDX模型)(将结肠癌患者的样品116号移植到裸鼠中)施用CJ12567(30mpk)时，癌症细胞的大小和重量与正常对照组(给予载体的组)相比显著降低了53.15％和47.87％。此外，这些值与施用LY2801653的阳性对照组的值相似。

此外，当施用CJ12567(100mpk)时，与阳性对照组(给予载体的组)相比，癌细胞的大小和重量分别显著降低了35.05％和18.09％。这些值表示与施用LY2801653(图3a至3c)的阳性对照组相比，癌细胞的大小和重量显著降低的结果。

此外，当施用CJ12567(100mpk)时，如通过免疫组织化学方法(图3d)和蛋白质印迹(图3e)确认，共同施用CJ12567(100mpk)和LY2801653(30mpk)，总RON蛋白的量没有变化。然而，作为活性RON的p-RON蛋白的表达降低，并且MSP和p-ERK蛋白的表达也降低，因此表明施用CJ12567(100mpk)导致MSP和p-ERK表达的减少，从而增加敏感性。

2-2、患者样品87号来源的结肠癌异种移植模型(PDX模型)中对CJ12567的药物敏感性

如图3a至3c中所示，当向患者来源的异种移植模型(PDX模型)(将结肠癌患者的样品87号移植到裸鼠中)施用CJ12567(30mpk)时，癌症细胞的大小和重量与正常对照组(给予载体的组)相比分别显著降低了64.02％和61.36％。此外，这些值与施用LY2801653的阳性对照组的值相似。

此外，当施用CJ12567(100mpk)时，与阳性对照组(给予载体的组)相比，癌细胞的大小和重量分别显著降低了56.43％和40.91％。这些值表示与施用LY2801653(图3a至3c)的阳性对照组相比，癌细胞的大小和重量显著降低的结果。

这些结果表明，在结肠癌患者的样品中存在RON基因变体增加了对CJ12567的敏感性。

因此，活化RON基因和RON基因变体显示出其作为生物标记物的潜在用途，用于预测对作为c-MET抑制剂的CJ12567的敏感性。

实施例3、在野生型、突变体和RON基因变体中对CJ12495的药物敏感性分析

3-1、CJ12495对RON磷酸化的抑制

本发明人分析了CJ12495处理对RON基因的野生型、突变体和变体中的RON磷酸化的抑制作用。

首先，在小鼠胚胎成纤维细胞系(NIH3T3)中过表达野生型RON基因，通过用MSP处理活化，并用CJ12495处理以确认对RON磷酸化的抑制水平。

作为结果，如图4a中所示，使用磷酸酪氨酸抗体在与RON蛋白免疫沉淀后的蛋白质印迹分析确认了RON基因被MSP活化，并且活化RON的磷酸化被CJ12495化合物抑制。

此外，在小鼠胚胎成纤维细胞系中过表达每种RON突变基因(RON M1254T、RONR1335G和RON R523Q)，通过用MSP处理活化并用CJ12495处理以确认对RON磷酸化的抑制水平。

作为结果，如图4b中所示，使用磷酸酪氨酸抗体在与RON蛋白质免疫沉淀后的蛋白质印迹分析确认了RON基因被MSP活化，并且活化RON的磷酸化在引入每种RON突变基因的细胞中被抑制。

此外，在小鼠胚胎成纤维细胞系(NIH3T3)中过表达每种RON基因变体(RON活性Δ160基因和RON活性Δ165基因)，并用CJ12495处理以确认对RON磷酸化的抑制水平。

作为结果，如图4c(RON活性Δ160基因)和图4d(RON活性Δ165基因)中所示，在用RON蛋白免疫沉淀后使用磷酸酪氨酸抗体的蛋白质印迹分析确认了在用CJ12495处理的每个组中，活性RON的磷酸化被抑制。

由上述结果确认了由MSP或活性RON基因活化的RON基因的存在可以增加对CJ12495的敏感性，从而使得CJ12495对RON磷酸化具有优异的抑制作用。

3-2、由于CJ12495对RON磷酸化的抑制对细胞运动性的抑制作用

本发明人分析了由于在野生型、突变体和RON基因的变体中由CJ12495处理引起的RON磷酸化的抑制对细胞运动性的抑制作用。

首先，在小鼠胚胎成纤维细胞系(NIH3T3)中过表达野生型RON基因，通过用MSP处理活化，并用CJ12495处理以确认细胞运动性。

作为结果，如图5a中所示，细胞迁移测定确认了由于MSP活化而增加的细胞运动性被CJ12495抑制。

此外，在小鼠胚胎成纤维细胞系中过表达每种RON突变基因(RON M1254T和RONR1335G)，通过用MSP处理活化，并用CJ12495处理以确认细胞运动性。

作为结果，如图5b中所示，细胞迁移测定确认了在两组中都抑制了由于MSP活化而导致的细胞运动性增加，其中每组引入每种RON突变基因并用CJ12495处理。

此外，在小鼠胚胎成纤维细胞系(NIH3T3)中过表达每种RON基因变体(RON活性Δ160基因和RON活性Δ165基因)，并用CJ12495处理以确认对细胞运动性的抑制作用。

作为结果，如图5c中所示，细胞迁移测定确认了在用CJ12495处理的两组中细胞运动性被抑制。

由上述结果确认了由MSP或活性RON基因活化的RON基因的存在增加了对CJ12495的敏感性，因此对CJ12495显示出对细胞运动性的优异抑制效果。

3-3、由于CJ12495对RON磷酸化的抑制对细胞转移的抑制作用

本发明人分析了由于在RON基因的野生型、突变体和变体中由CJ12495处理引起的RON磷酸化的抑制对细胞转移的抑制作用。

在小鼠胚胎成纤维细胞系(NIH3T3)中分别过表达野生型RON基因和突变型RON基因(R523Q)，并通过用MSP处理活化RON，并且用CJ12495处理以确认细胞侵袭的程度。

作为结果，如图6a中所示，确认了在两组中通过CJ12495处理抑制了由于MSP活化引起的细胞转移增加，其中每组引入每种野生型RON基因和R523Q突变基因并用CJ12495处理。

此外，在小鼠胚胎成纤维细胞系中过表达每种RON突变基因(RON M1254T和RONR1335G)，通过用MSP处理活化，并用CJ12495处理以确认细胞侵袭的程度。

作为结果，如图6b中所示，确认了在两组中通过CJ12495处理抑制了由于MSP活化引起的细胞转移增加，其中每组引入每种RON基因突变基因并用CJ12495处理。

此外，在小鼠胚胎成纤维细胞系中过表达每种RON突变基因(RON活性Δ160基因和RON活性Δ165基因)，通过用MSP处理活化，并用CJ12495处理以确认细胞侵袭的程度。

作为结果，如图6c中所示，确认了在两组中通过CJ12495处理抑制了由于MSP活化引起的细胞转移增加。

这些结果表明，当RON在癌细胞中被活化时，例如当存在RON基因变体或RON基因突变体时，可以增加对CJ12495的敏感性。

因此，活性RON，例如RON基因变体或RON基因突变体，显示出其作为生物标记物的潜在用途，用于预测对CJ12567的敏感性。

此外，在表达活性RON的情况下，CJ12495可以用作其抗癌药物。

实施例4、在野生型、突变体和RON基因的变体中对CJ12524的药物敏感性分析

4-1、CJ12524对RON磷酸化的抑制

本发明人分析了CJ12524处理对RON基因的野生型，突变体和变体中的RON磷酸化的抑制作用。

用CJ12524处理因为RON总是被活化而具有高p-RON表达水平的结肠癌细胞系HT29和HCT8，以确认对RON磷酸化的抑制水平。

作为结果，如图7a中所示，确认了在用各种浓度的CJ12524处理的细胞中RON磷酸化被抑制。

此外，向其中不表达RON的结肠癌细胞系Colo320HSR中引入在Colo320HSR中持续表达的RON活性Δ155基因和RON活性Δ160基因，并用CJ12524处理以确认通过CJ12524处理对RON磷酸化的抑制作用。

作为结果，如图7b中所示，确认了当向细胞系中引入RON活性Δ155基因和RON活性Δ160基因并用CJ12524处理时，RON磷酸化降低。

4-2、由于CJ12524对RON磷酸化的抑制引起的细胞凋亡的诱导

本发明人分析了由于CJ12524处理对RON磷酸化的抑制而诱导凋亡的效果。

用CJ12524处理因为RON总是磷酸化而具有高p-RON表达水平的结肠癌细胞系HT29和HCT8，以确认细胞凋亡的存在。

作为结果，如图7c中所示，确认了不同浓度的CJ12524处理也根据浓度增加了凋亡。特别地，RON磷酸化降低，切割半胱天冬酶3的表达增加。

此外，向其中不表达RON的结肠癌细胞系Colo320HSR中引入在Colo320HSR中持续活性的RON活性Δ155基因和RON活性Δ160基因，并且用不同浓度的CJ12524处理以确认凋亡的存在。

作为结果，如图7d中所示，确认了各种浓度的CJ12524处理也根据浓度增加了凋亡。特别地，RON磷酸化降低，并且作为凋亡标记物的切割半胱天冬酶3的表达根据浓度增加。

4-3、由于CJ12524对RON磷酸化的抑制引起的细胞转移的抑制

本发明人分析了通过CJ12524处理抑制RON磷酸化而抑制细胞转移的效果。

用CJ12524处理其中RON总是磷酸化的结肠癌细胞系HCT8，以确认细胞侵袭的程度。

作为结果，如图7e中所示，确认了CJ12524处理抑制约60％细胞转移程度。

实施例5、在RON-活性癌细胞异种移植模型(PDX-模型)中对CJ12524的药物敏感性分析

为了分析在体内状态下对CJ12524的药物敏感性，本发明人将确定为对RON活性呈阳性的癌细胞系移植到裸鼠中，从而制备癌细胞来源的异种移植模型(PDX模型)。

5-1、在体内异种移植模型中通过CJ12524确认肿瘤抑制

用不同浓度的CJ12524处理其中RON总是显示活性的HCT8细胞系14天。

作为结果，如图8a中所示，确认了当测量肿瘤大小时，肿瘤生长被抑制(上)。特别地，小鼠的体重几乎没有下降(下)。

此外，如图8b中所示，当在给药完成时消融肿瘤组织并测量肿瘤重量时，确认了在用CJ12524处理的所有组中肿瘤重量降低。

5-2、在体内异种移植模型中CJ12524对RON磷酸化的抑制

在施用CJ12524完成后，消融组织并确认RON磷酸化的存在。

作为结果，基于免疫化学染色法(图8c)和蛋白质印迹(图8d)的分析，确认了在用CJ12524处理的组中RON磷酸化降低。

这些结果表明，当RON在癌细胞中表现出活性时，例如当存在RON基因变体或RON基因突变体时，可以增加对CJ12524的敏感性。

因此，活性RON，例如RON基因变体或RON基因突变体，显示出其作为生物标记物的潜在用途，用于预测对CJ12524的敏感性。

此外，在表达活性RON的情况下，CJ12524可以用作其抗癌药物。

实施例6：在RON-失活的癌细胞异种移植模型中对CJ12537的敏感性分析

6-1、在体内异种移植模型中通过CJ12537确认肿瘤抑制

在使用其中RON显示无活性的Colo320HSR细胞系的动物模型中确认了CJ12537是否可以抑制肿瘤形成。

具体地，制备使用不具有RON活性的Colo320HSR细胞系的动物模型(对照组)和使用导入有持续表达的RON活性Δ155基因和RON活性Δ160基因的细胞系的动物模型，或RONM1254T突变体，并比较它们用CJ12537抑制肿瘤形成的作用。

作为结果，如下表2中所示，确认了在不具有RON活性的对照动物模型中，各种浓度的CJ12537处理完全不抑制肿瘤形成；然而，在RON活性变体中CJ12537处理抑制肿瘤形成。

[表2]

6-2、在没有RON活性的胃癌细胞异种移植模型中通过CJ12537确认肿瘤抑制

在没有RON活性的胃癌异种移植小鼠模型中确认了CJ12537是否可以抑制肿瘤形成。

具体地，向5至6周龄的Balb/c裸鼠皮下以1：1(v/v)比率注射1×10⁷个细胞(MKN1亲本，MKN1RONΔ160稳定细胞)和Matrigel。当肿瘤大小增长至90mm³至100mm³的大小时，将小鼠分成组并施用药物。每天口服施用载体、CJ12537(30mpk)、CJ12537(100mpk)和阳性对照(Amgen；30mpk)。在三天内测量肿瘤大小一次。在施用完成后，处死小鼠并切除组织，并测量肿瘤的重量。特别地，从组织中提取蛋白质，并且通过蛋白质印迹分析确认p-RON和相关蛋白的表达模式的变化。此外，为了确认肿瘤大小的变化，每三天测量肿瘤大小一次，并且甚至在药物施用完成后进行比较和分析。

作为结果，在移植了MKN1细胞的小鼠模型中未确认到RON活化，并且在没有RON活性的情况下，即使施用CJ12537时肿瘤体积也没有显著变化(图9)，因此确认了对CJ12537没有敏感性。

从上述结果确认了在没有RON活性的情况下，对CJ12537没有敏感性。

<110> CJ医药健康株式会社

<120> 用于预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的生物标记物及其用途

<130> OPA15160

<150> KR 10-2014-0116787

<151> 2014-09-03

<160> 6

<170> KopatentIn 2.0

<210> 1

<211> 3732

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 1

atggagctcc tcccgccgct gcctcagtcc ttcctgttgc tgctgctgtt gcctgccaag 60

cccgcggcgg gcgaggactg gcagtgcccg cgcaccccct acgcggcctc tcgcgacttt 120

gacgtgaagt acgtggtgcc cagcttctcc gccggaggcc tggtacaggc catggtgacc 180

tacgagggcg acagaaatga gagtgctgtg tttgtagcca tacgcaatcg cctgcatgtg 240

cttgggcctg acctgaagtc tgtccagagc ctggccacgg gccctgctgg agaccctggc 300

tgccagacgt gtgcagcctg tggcccagga ccccacggcc ctcccggtga cacagacaca 360

aaggtgctgg tgctggatcc cgcgctgcct gcgctggtca gttgtggctc cagcctgcag 420

ggccgctgct tcctgcatga cctagagccc caagggacag ccgtgcatct ggcagcgcca 480

gcctgcctct tctcagccca ccataaccgg cccgatgact gccccgactg tgtggccagc 540

ccattgggca cccgtgtaac tgtggttgag caaggccagg cctcctattt ctacgtggca 600

tcctcactgg acgcagccgt ggctgccagc ttcagcccac gctcagtgtc tatcaggcgt 660

ctcaaggctg acgcctcggg attcgcaccg ggctttgtgg cgttgtcagt gctgcccaag 720

catcttgtct cctacagtat tgaatacgtg cacagcttcc acacgggagc cttcgtgtac 780

ttcctgactg tacagccggc cagcgtgaca gatgatccta gtgccctgca cacacgcctg 840

gcacggctta gcgccactga gccagagttg ggtgactatc gggagctggt cctcgactgc 900

agatttgctc caaaacgcag gcgccggggg gccccagaag gcggacagcc ctaccctgtg 960

ctgcgggtgg cccactccgc tccagtgggt gcccaacttg ccactgagct gagcatcgcc 1020

gagggccagg aagtactatt tggggtcttt gtgactggca aggatggtgg tcctggcgtg 1080

ggccccaact ctgtcgtctg tgccttcccc attgacctgc tggacacact aattgatgag 1140

ggtgtggagc gctgttgtga atccccagtc catccaggcc tccggcgagg cctcgacttc 1200

ttccagtcgc ccagtttttg ccccaacccg cctggcctgg aagccctcag ccccaacacc 1260

agctgccgcc acttccctct gctggtcagt agcagcttct cacgtgtgga cctattcaat 1320

gggctgttgg gaccagtaca ggtcactgca ttgtatgtga cacgccttga caacgtcaca 1380

gtggcacaca tgggcacaat ggatgggcgt atcctgcagg tggagctggt caggtcacta 1440

aactacttgc tgtatgtgtc caacttctca ctgggtgaca gtgggcagcc cgtgcagcgg 1500

gatgtcagtc gtcttgggga ccacctactc tttgcctctg gggaccaggt tttccaggta 1560

cctatccaag gccctggctg ccgccacttc ctgacctgtg ggcgttgcct aagggcatgg 1620

catttcatgg gctgtggctg gtgtgggaac atgtgcggcc agcagaagga gtgtcctggc 1680

tcctggcaac aggaccactg cccacctaag cttactgagg agccagtgct gatagcagtg 1740

caacccctct ttggcccacg ggcaggaggc acctgtctca ctcttgaagg ccagagtctg 1800

tctgtaggca ccagccgggc tgtgctggtc aatgggactg agtgtctgct agcacgggtc 1860

agtgaggggc agcttttatg tgccacaccc cctggggcca cggtggccag tgtccccctt 1920

agcctgcagg tggggggtgc ccaggtacct ggttcctgga ccttccagta cagagaagac 1980

cctgtcgtgc taagcatcag ccccaactgt ggctacatca actcccacat caccatctgt 2040

ggccagcatc taacttcagc atggcactta gtgctgtcat tccatgacgg gcttagggca 2100

gtggaaagca ggcagtgtga gaggcagctt ccagagcagc agctgtgccg ccttcctgaa 2160

tatgtggtcc gagaccccca gggatgggtg gcagggaatc tgagtgcccg aggggatgga 2220

gctgctggct ttacactgcc tggctttcgc ttcctacccc caccccatcc acccagtgcc 2280

aacctagttc cactgaagcc tgaggagcat gccattaagt ttgaggtctg cgtagatggt 2340

gaatgtcata tcctgggtag agtggtgcgg ccagggccag atggggtccc acagagcacg 2400

ctccttggta tcctgctgcc tttgctgctg cttgtggctg cactggcgac tgcactggtc 2460

ttcagctact ggtggcggag gaagcagcta gttcttcctc ccaacctgaa tgacctggca 2520

tccctggacc agactgctgg agccacaccc ctgcctattc tgtactcggg ctctgactac 2580

agaagtggcc ttgcactccc tgccattgat ggtctggatt ccaccacttg tgtccatgga 2640

gcatccttct ccgatagtga agatgaatcc tgtgtgccac tgctgcggaa agagtccatc 2700

cagctaaggg acctggactc tgcgctcttg gctgaggtca aggatgtgct gattccccat 2760

gagcgggtgg tcacccacag tgaccgagtc attggcaaag gccactttgg agttgtctac 2820

cacggagaat acatagacca ggcccagaat cgaatccaat gtgccatcaa gtcactaagt 2880

cgcatcacag agatgcagca ggtggaggcc ttcctgcgag aggggctgct catgcgtggc 2940

ctgaaccacc cgaatgtgct ggctctcatt ggtatcatgt tgccacctga gggcctgccc 3000

catgtgctgc tgccctatat gtgccacggt gacctgctcc agttcatccg ctcacctcag 3060

cggaacccca ccgtgaagga cctcatcagc tttggcctgc aggtagcccg cggcatggag 3120

tacctggcag agcagaagtt tgtgcacagg gacctggctg cgcggaactg catgctggac 3180

gagtcattca cagtcaaggt ggctgacttt ggtttggccc gcgacatcct ggacagggag 3240

tactatagtg ttcaacagca tcgccacgct cgcctacctg tgaagtggat ggcgctggag 3300

agcctgcaga cctatagatt taccaccaag tctgatgtgt ggtcatttgg tgtgctgctg 3360

tgggaactgc tgacacgggg tgccccacca taccgccaca ttgacccttt tgaccttacc 3420

cacttcctgg cccagggtcg gcgcctgccc cagcctgagt attgccctga ttctctgtac 3480

caagtgatgc agcaatgctg ggaggcagac ccagcagtgc gacccacctt cagagtacta 3540

gtgggggagg tggagcagat agtgtctgca ctgcttgggg accattatgt gcagctgcca 3600

gcaacctaca tgaacttggg ccccagcacc tcgcatgaga tgaatgtgcg tccagaacag 3660

ccgcagttct cacccatgcc agggaatgta cgccggcccc ggccactctc agagcctcct 3720

cggcccactt ga 3732

<210> 2

<211> 3879

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 2

atggagctcc tcccgccgct gcctcagtcc ttcctgttgc tgctgctgtt gcctgccaag 60

cccgcggcgg gcgaggactg gcagtgcccg cgcaccccct acgcggcctc tcgcgacttt 120

gacgtgaagt acgtggtgcc cagcttctcc gccggaggcc tggtacaggc catggtgacc 180

tacgagggcg acagaaatga gagtgctgtg tttgtagcca tacgcaatcg cctgcatgtg 240

cttgggcctg acctgaagtc tgtccagagc ctggccacgg gccctgctgg agaccctggc 300

tgccagacgt gtgcagcctg tggcccagga ccccacggcc ctcccggtga cacagacaca 360

aaggtgctgg tgctggatcc cgcgctgcct gcgctggtca gttgtggctc cagcctgcag 420

ggccgctgct tcctgcatga cctagagccc caagggacag ccgtgcatct ggcagcgcca 480

gcctgcctct tctcagccca ccataaccgg cccgatgact gccccgactg tgtggccagc 540

ccattgggca cccgtgtaac tgtggttgag caaggccagg cctcctattt ctacgtggca 600

tcctcactgg acgcagccgt ggctgccagc ttcagcccac gctcagtgtc tatcaggcgt 660

ctcaaggctg acgcctcggg attcgcaccg ggctttgtgg cgttgtcagt gctgcccaag 720

catcttgtct cctacagtat tgaatacgtg cacagcttcc acacgggagc cttcgtgtac 780

ttcctgactg tacagccggc cagcgtgaca gatgatccta gtgccctgca cacacgcctg 840

gcacggctta gcgccactga gccagagttg ggtgactatc gggagctggt cctcgactgc 900

agatttgctc caaaacgcag gcgccggggg gccccagaag gcggacagcc ctaccctgtg 960

ctgcgggtgg cccactccgc tccagtgggt gcccaacttg ccactgagct gagcatcgcc 1020

gagggccagg aagtactatt tggggtcttt gtgactggca aggatggtgg tcctggcgtg 1080

ggccccaact ctgtcgtctg tgccttcccc attgacctgc tggacacact aattgatgag 1140

ggtgtggagc gctgttgtga atccccagtc catccaggcc tccggcgagg cctcgacttc 1200

ttccagtcgc ccagtttttg ccccaacccg cctggcctgg aagccctcag ccccaacacc 1260

agctgccgcc acttccctct gctggtcagt agcagcttct cacgtgtgga cctattcaat 1320

gggctgttgg gaccagtaca ggtcactgca ttgtatgtga cacgccttga caacgtcaca 1380

gtggcacaca tgggcacaat ggatgggcgt atcctgcagg tggagctggt caggtcacta 1440

aactacttgc tgtatgtgtc caacttctca ctgggtgaca gtgggcagcc cgtgcagcgg 1500

gatgtcagtc gtcttgggga ccacctactc tttgcctctg gggaccaggt tttccaggta 1560

cctatccaag gccctggctg ccgccacttc ctgacctgtg ggcgttgcct aagggcatgg 1620

catttcatgg gctgtggctg gtgtgggaac atgtgcggcc agcagaagga gtgtcctggc 1680

tcctggcaac aggaccactg cccacctaag cttactgagg agccagtgct gatagcagtg 1740

caacccctct ttggcccacg ggcaggaggc acctgtctca ctcttgaagg ccagagtctg 1800

tctgtaggca ccagccgggc tgtgctggtc aatgggactg agtgtctgct agcacgggtc 1860

agtgaggggc agcttttatg tgccacaccc cctggggcca cggtggccag tgtccccctt 1920

agcctgcagg tggggggtgc ccaggtacct ggttcctgga ccttccagta cagagaagac 1980

cctgtcgtgc taagcatcag ccccaactgt ggctacatca actcccacat caccatctgt 2040

ggccagcatc taacttcagc atggcactta gtgctgtcat tccatgacgg gcttagggca 2100

gtggaaagca ggcagtgtga gaggcagctt ccagagcagc agctgtgccg ccttcctgaa 2160

tatgtggtcc gagaccccca gggatgggtg gcagggaatc tgagtgcccg aggggatgga 2220

gctgctggct ttacactgcc tggctttcgc ttcctacccc caccccatcc acccagtgcc 2280

aacctagttc cactgaagcc tgaggagcat gccattaagt ttgagtatat tgggctgggc 2340

gctgtggctg actgtgtggg tatcaacgtg accgtgggtg gtgagagctg ccagcacgag 2400

ttccgggggg acatggttgt ctgccccctg cccccatccc tgcagcttgg ccaggatggt 2460

gccccattgc aggtctgcgt agatggtgaa tgtcatatcc tgggtagagt ggtgcggcca 2520

gggccagatg gggtcccaca gagcacgctc cttggtatcc tgctgccttt gctgctgctt 2580

gtggctgcac tggcgactgc actggtcttc agctactggt ggcggaggaa gcagctagtt 2640

cttcctccca acctgaatga cctggcatcc ctggaccaga ctgctggagc cacacccctg 2700

cctattctgt actcgggctc tgactacaga agtggccttg cactccctgc cattgatggt 2760

ctggattcca ccacttgtgt ccatggagca tccttctccg atagtgaaga tgaatcctgt 2820

gtgccactgc tgcggaaaga gtccatccag ctaagggacc tggactctgc gctcttggct 2880

gaggtcaagg atgtgctgat tccccatgag cgggtggtca cccacagtga ccgagtcatt 2940

ggcaaaggcc actttggagt tgtctaccac ggagaataca tagaccaggc ccagaatcga 3000

atccaatgtg ccatcaagtc actaagtcgc atcacagaga tgcagcaggt ggaggccttc 3060

ctgcgagagg ggctgctcat gcgtggcctg aaccacccga atgtgctggc tctcattggt 3120

atcatgttgc cacctgaggg cctgccccat gtgctgctgc cctatatgtg ccacggtgac 3180

ctgctccagt tcatccgctc acctcagcgg aaccccaccg tgaaggacct catcagcttt 3240

ggcctgcagg tagcccgcgg catggagtac ctggcagagc agaagtttgt gcacagggac 3300

ctggctgcgc ggaactgcat gctggacgag tcattcacag tcaaggtggc tgactttggt 3360

ttggcccgcg acatcctgga cagggagtac tatagtgttc aacagcatcg ccacgctcgc 3420

ctacctgtga agtggatggc gctggagagc ctgcagacct atagatttac caccaagtct 3480

gatgtgtggt catttggtgt gctgctgtgg gaactgctga cacggggtgc cccaccatac 3540

cgccacattg acccttttga ccttacccac ttcctggccc agggtcggcg cctgccccag 3600

cctgagtatt gccctgattc tctgtaccaa gtgatgcagc aatgctggga ggcagaccca 3660

gcagtgcgac ccaccttcag agtactagtg ggggaggtgg agcagatagt gtctgcactg 3720

cttggggacc attatgtgca gctgccagca acctacatga acttgggccc cagcacctcg 3780

catgagatga atgtgcgtcc agaacagccg cagttctcac ccatgccagg gaatgtacgc 3840

cggccccggc cactctcaga gcctcctcgg cccacttga 3879

<210> 3

<211> 2460

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 3

atggagctcc tcccgccgct gcctcagtcc ttcctgttgc tgctgctgtt gcctgccaag 60

cccgcggcgg gcgaggactg gcagtgcccg cgcaccccct acgcggcctc tcgcgacttt 120

gacgtgaagt acgtggtgcc cagcttctcc gccggaggcc tggtacaggc catggtgacc 180

tacgagggcg acagaaatga gagtgctgtg tttgtagcca tacgcaatcg cctgcatgtg 240

cttgggcctg acctgaagtc tgtccagagc ctggccacgg gccctgctgg agaccctggc 300

tgccagacgt gtgcagcctg tggcccagga ccccacggcc ctcccggtga cacagacaca 360

aaggtgctgg tgctggatcc cgcgctgcct gcgctggtca gttgtggctc cagcctgcag 420

ggccgctgct tcctgcatga cctagagccc caagggacag ccgtgcatct ggcagcgcca 480

gcctgcctct tctcagccca ccataaccgg cccgatgact gccccgactg tgtggccagc 540

ccattgggca cccgtgtaac tgtggttgag caaggccagg cctcctattt ctacgtggca 600

tcctcactgg acgcagccgt ggctgccagc ttcagcccac gctcagtgtc tatcaggcgt 660

ctcaaggctg acgcctcggg attcgcaccg ggctttgtgg cgttgtcagt gctgcccaag 720

catcttgtct cctacagtat tgaatacgtg cacagcttcc acacgggagc cttcgtgtac 780

ttcctgactg tacagccggc cagcgtgaca gatgatccta gtgccctgca cacacgcctg 840

gcacggctta gcgccactga gccagagttg ggtgactatc gggagctggt cctcgactgc 900

agatttgctc caaaacgcag gcgccggggg gccccagaag gcggacagcc ctaccctgtg 960

ctgcgggtgg cccactccgc tccagtgggt gcccaacttg ccactgagct gagcatcgcc 1020

gagggccagg aagtactatt tggggtcttt gtgactggca aggatggtgg tcctggcgtg 1080

ggccccaact ctgtcgtctg tgccttcccc attgacctgc tggacacact aattgatgag 1140

ggtgtggagc gctgttgtga atccccagtc catccaggcc tccggcgagg cctcgacttc 1200

ttccagtcgc ccagtttttg ccccaacccg cctggcctgg aagccctcag ccccaacacc 1260

agctgccgcc acttccctct gctggtcagt agcagcttct cacgtgtgga cctattcaat 1320

gggctgttgg gaccagtaca ggtcactgca ttgtatgtga cacgccttga caacgtcaca 1380

gtggcacaca tgggcacaat ggatgggcgt atcctgcagg tggagctggt caggtcacta 1440

aactacttgc tgtatgtgtc caacttctca ctgggtgaca gtgggcagcc cgtgcagcgg 1500

gatgtcagtc gtcttgggga ccacctactc tttgcctctg gggaccaggt tttccaggta 1560

cctatccaag gccctggctg ccgccacttc ctgacctgtg ggcgttgcct aagggcatgg 1620

catttcatgg gctgtggctg gtgtgggaac atgtgcggcc agcagaagga gtgtcctggc 1680

tcctggcaac aggaccactg cccacctaag cttactgagg agccagtgct gatagcagtg 1740

caacccctct ttggcccacg ggcaggaggc acctgtctca ctcttgaagg ccagagtctg 1800

tctgtaggca ccagccgggc tgtgctggtc aatgggactg agtgtctgct agcacgggtc 1860

agtgaggggc agcttttatg tgccacaccc cctggggcca cggtggccag tgtccccctt 1920

agcctgcagg tggggggtgc ccaggtacct ggttcctgga ccttccagta cagagaagac 1980

cctgtcgtgc taagcatcag ccccaactgt ggctacatca actcccacat caccatctgt 2040

ggccagcatc taacttcagc atggcactta gtgctgtcat tccatgacgg gcttagggca 2100

gtggaaagca ggcagtgtga gaggcagctt ccagagcagc agctgtgccg ccttcctgaa 2160

tatgtggtcc gagaccccca gggatgggtg gcagggaatc tgagtgcccg aggggatgga 2220

gctgctggct ttacactgcc tggctttcgc ttcctacccc caccccatcc acccagtgcc 2280

aacctagttc cactgaagcc tgaggagcat gccattaagt ttgaggtctg cgtagatggt 2340

gaatgtcata tcctgggtag agtggtgcgg ccagggccag atggggtccc acagagcacg 2400

ctccttggta tcctgctgcc tttgctgctg cttgtggctg cactggcgac tgcactggtc 2460

2460

<210> 4

<211> 1400

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 4

Met Glu Leu Leu Pro Pro Leu Pro Gln Ser Phe Leu Leu Leu Leu Leu

1 5 10 15

Leu Pro Ala Lys Pro Ala Ala Gly Glu Asp Trp Gln Cys Pro Arg Thr

20 25 30

Pro Tyr Ala Ala Ser Arg Asp Phe Asp Val Lys Tyr Val Val Pro Ser

35 40 45

Phe Ser Ala Gly Gly Leu Val Gln Ala Met Val Thr Tyr Glu Gly Asp

50 55 60

Arg Asn Glu Ser Ala Val Phe Val Ala Ile Arg Asn Arg Leu His Val

65 70 75 80

Leu Gly Pro Asp Leu Lys Ser Val Gln Ser Leu Ala Thr Gly Pro Ala

85 90 95

Gly Asp Pro Gly Cys Gln Thr Cys Ala Ala Cys Gly Pro Gly Pro His

100 105 110

Gly Pro Pro Gly Asp Thr Asp Thr Lys Val Leu Val Leu Asp Pro Ala

115 120 125

Leu Pro Ala Leu Val Ser Cys Gly Ser Ser Leu Gln Gly Arg Cys Phe

130 135 140

Leu His Asp Leu Glu Pro Gln Gly Thr Ala Val His Leu Ala Ala Pro

145 150 155 160

Ala Cys Leu Phe Ser Ala His His Asn Arg Pro Asp Asp Cys Pro Asp

165 170 175

Cys Val Ala Ser Pro Leu Gly Thr Arg Val Thr Val Val Glu Gln Gly

180 185 190

Gln Ala Ser Tyr Phe Tyr Val Ala Ser Ser Leu Asp Ala Ala Val Ala

195 200 205

Gly Ser Phe Ser Pro Arg Ser Val Ser Ile Arg Arg Leu Lys Ala Asp

210 215 220

Ala Ser Gly Phe Ala Pro Gly Phe Val Ala Leu Ser Val Leu Pro Lys

225 230 235 240

His Leu Val Ser Tyr Ser Ile Glu Tyr Val His Ser Phe His Thr Gly

245 250 255

Ala Phe Val Tyr Phe Leu Thr Val Gln Pro Ala Ser Val Thr Asp Asp

260 265 270

Pro Ser Ala Leu His Thr Arg Leu Ala Arg Leu Ser Ala Thr Glu Pro

275 280 285

Glu Leu Gly Asp Tyr Arg Glu Leu Val Leu Asp Cys Arg Phe Ala Pro

290 295 300

Lys Arg Arg Arg Arg Gly Ala Pro Glu Gly Gly Gln Pro Tyr Pro Val

305 310 315 320

Leu Gln Val Ala His Ser Ala Pro Val Gly Ala Gln Leu Ala Thr Glu

325 330 335

Leu Ser Ile Ala Glu Gly Gln Glu Val Leu Phe Gly Val Phe Val Thr

340 345 350

Gly Lys Asp Gly Gly Pro Gly Val Gly Pro Asn Ser Val Val Cys Ala

355 360 365

Phe Pro Ile Asp Leu Leu Asp Thr Leu Ile Asp Glu Gly Val Glu Arg

370 375 380

Cys Cys Glu Ser Pro Val His Pro Gly Leu Arg Arg Gly Leu Asp Phe

385 390 395 400

Phe Gln Ser Pro Ser Phe Cys Pro Asn Pro Pro Gly Leu Glu Ala Leu

405 410 415

Ser Pro Asn Thr Ser Cys Arg His Phe Pro Leu Leu Val Ser Ser Ser

420 425 430

Phe Ser Arg Val Asp Leu Phe Asn Gly Leu Leu Gly Pro Val Gln Val

435 440 445

Thr Ala Leu Tyr Val Thr Arg Leu Asp Asn Val Thr Val Ala His Met

450 455 460

Gly Thr Met Asp Gly Arg Ile Leu Gln Val Glu Leu Val Arg Ser Leu

465 470 475 480

Asn Tyr Leu Leu Tyr Val Ser Asn Phe Ser Leu Gly Asp Ser Gly Gln

485 490 495

Pro Val Gln Arg Asp Val Ser Arg Leu Gly Asp His Leu Leu Phe Ala

500 505 510

Ser Gly Asp Gln Val Phe Gln Val Pro Ile Arg Gly Pro Gly Cys Arg

515 520 525

His Phe Leu Thr Cys Gly Arg Cys Leu Arg Ala Trp His Phe Met Gly

530 535 540

Cys Gly Trp Cys Gly Asn Met Cys Gly Gln Gln Lys Glu Cys Pro Gly

545 550 555 560

Ser Trp Gln Gln Asp His Cys Pro Pro Lys Leu Thr Glu Phe His Pro

565 570 575

His Ser Gly Pro Leu Arg Gly Ser Thr Arg Leu Thr Leu Cys Gly Ser

580 585 590

Asn Phe Tyr Leu His Pro Ser Gly Leu Val Pro Glu Gly Thr His Gln

595 600 605

Val Thr Val Gly Gln Ser Pro Cys Arg Pro Leu Pro Lys Asp Ser Ser

610 615 620

Lys Leu Arg Pro Val Pro Arg Lys Asp Phe Val Glu Glu Phe Glu Cys

625 630 635 640

Glu Leu Glu Pro Leu Gly Thr Gln Ala Val Gly Pro Thr Asn Val Ser

645 650 655

Leu Thr Val Thr Asn Met Pro Pro Gly Lys His Phe Arg Val Asp Gly

660 665 670

Thr Ser Val Leu Arg Gly Phe Ser Phe Met Glu Pro Val Leu Ile Ala

675 680 685

Val Gln Pro Leu Phe Gly Pro Arg Ala Gly Gly Thr Cys Leu Thr Leu

690 695 700

Glu Gly Gln Ser Leu Ser Val Gly Thr Ser Arg Ala Val Leu Val Asn

705 710 715 720

Gly Thr Glu Cys Leu Leu Ala Arg Val Ser Glu Gly Gln Leu Leu Cys

725 730 735

Ala Thr Pro Pro Gly Ala Thr Val Ala Ser Val Pro Leu Ser Leu Gln

740 745 750

Val Gly Gly Ala Gln Val Pro Gly Ser Trp Thr Phe Gln Tyr Arg Glu

755 760 765

Asp Pro Val Val Leu Ser Ile Ser Pro Asn Cys Gly Tyr Ile Asn Ser

770 775 780

His Ile Thr Ile Cys Gly Gln His Leu Thr Ser Ala Trp His Leu Val

785 790 795 800

Leu Ser Phe His Asp Gly Leu Arg Ala Val Glu Ser Arg Cys Glu Arg

805 810 815

Gln Leu Pro Glu Gln Gln Leu Cys Arg Leu Pro Glu Tyr Val Val Arg

820 825 830

Asp Pro Gln Gly Trp Val Ala Gly Asn Leu Ser Ala Arg Gly Asp Gly

835 840 845

Ala Ala Gly Phe Thr Leu Pro Gly Phe Arg Phe Leu Pro Pro Pro His

850 855 860

Pro Pro Ser Ala Asn Leu Val Pro Leu Lys Pro Glu Glu His Ala Ile

865 870 875 880

Lys Phe Glu Tyr Ile Gly Leu Gly Ala Val Ala Asp Cys Val Gly Ile

885 890 895

Asn Val Thr Val Gly Gly Glu Ser Cys Gln His Glu Phe Arg Gly Asp

900 905 910

Met Val Val Cys Pro Leu Pro Pro Ser Leu Gln Leu Gly Gln Asp Gly

915 920 925

Ala Pro Leu Gln Val Cys Val Asp Gly Glu Cys His Ile Leu Gly Arg

930 935 940

Val Val Arg Pro Gly Pro Asp Gly Val Pro Gln Ser Thr Leu Leu Gly

945 950 955 960

Ile Leu Leu Pro Leu Leu Leu Leu Val Ala Ala Leu Ala Thr Ala Leu

965 970 975

Val Phe Ser Tyr Trp Trp Arg Arg Lys Gln Leu Val Leu Pro Pro Asn

980 985 990

Leu Asn Asp Leu Ala Ser Leu Asp Gln Thr Ala Gly Ala Thr Pro Leu

995 1000 1005

Pro Ile Leu Tyr Ser Gly Ser Asp Tyr Arg Ser Gly Leu Ala Leu Pro

1010 1015 1020

Ala Ile Asp Gly Leu Asp Ser Thr Thr Cys Val His Gly Ala Ser Phe

1025 1030 1035 1040

Ser Asp Ser Glu Asp Glu Ser Cys Val Pro Leu Leu Arg Lys Glu Ser

1045 1050 1055

Ile Gln Leu Arg Asp Leu Asp Ser Ala Leu Leu Ala Glu Val Lys Asp

1060 1065 1070

Val Leu Ile Pro His Glu Arg Val Val Thr His Ser Asp Arg Val Ile

1075 1080 1085

Gly Lys Gly His Phe Gly Val Val Tyr His Gly Glu Tyr Ile Asp Gln

1090 1095 1100

Ala Gln Asn Arg Ile Gln Cys Ala Ile Lys Ser Leu Ser Arg Ile Thr

1105 1110 1115 1120

Glu Met Gln Gln Val Glu Ala Phe Leu Arg Glu Gly Leu Leu Met Arg

1125 1130 1135

Gly Leu Asn His Pro Asn Val Leu Ala Leu Ile Gly Ile Met Leu Pro

1140 1145 1150

Pro Glu Gly Leu Pro His Val Leu Leu Pro Tyr Met Cys His Gly Asp

1155 1160 1165

Leu Leu Gln Phe Ile Arg Ser Pro Gln Arg Asn Pro Thr Val Lys Asp

1170 1175 1180

Leu Ile Ser Phe Gly Leu Gln Val Ala Arg Gly Met Glu Tyr Leu Ala

1185 1190 1195 1200

Glu Gln Lys Phe Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Cys Met Leu

1205 1210 1215

Asp Glu Ser Phe Thr Val Lys Val Ala Asp Phe Gly Leu Ala Arg Asp

1220 1225 1230

Ile Leu Asp Arg Glu Tyr Tyr Ser Val Gln Gln His Arg His Ala Arg

1235 1240 1245

Leu Pro Val Lys Trp Met Ala Leu Glu Ser Leu Gln Thr Tyr Arg Phe

1250 1255 1260

Thr Thr Lys Ser Asp Val Trp Ser Phe Gly Val Leu Leu Trp Glu Leu

1265 1270 1275 1280

Leu Thr Arg Gly Ala Pro Pro Tyr Arg His Ile Asp Pro Phe Asp Leu

1285 1290 1295

Thr His Phe Leu Ala Gln Gly Arg Arg Leu Pro Gln Pro Glu Tyr Cys

1300 1305 1310

Pro Asp Ser Leu Tyr Gln Val Met Gln Gln Cys Trp Glu Ala Asp Pro

1315 1320 1325

Ala Val Arg Pro Thr Phe Arg Val Leu Val Gly Glu Val Glu Gln Ile

1330 1335 1340

Val Ser Ala Leu Leu Gly Asp His Tyr Val Gln Leu Pro Ala Thr Tyr

1345 1350 1355 1360

Met Asn Leu Gly Pro Ser Thr Ser His Glu Met Asn Val Arg Pro Glu

1365 1370 1375

Gln Pro Gln Phe Ser Pro Met Pro Gly Asn Val Arg Arg Pro Arg Pro

1380 1385 1390

Leu Ser Glu Pro Pro Arg Pro Thr

1395 1400

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> RON正向引物

<400> 5

ctctggggac caggttttcc 20

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> RON反向引物

<400> 6

accatcaatg gcagggagtg 20

Claims

1.一种用于预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的生物标记物，其包括活性Recepteur d’Origine Nantais即RON。

2.根据权利要求1所述的生物标记物，其中，所述活性RON包括RON基因的剪接变体或突变体。

3.根据权利要求2所述的生物标记物，其中，所述剪接变体为选自由序列号1的RONΔ155、序列号2的RONΔ160和序列号3的RONΔ165组成的组中的至少一种。

4.根据权利要求2所述的生物标记物，其中，所述突变体为选自由序列号4的多肽中第1254位氨基酸从M取代为T的突变体；序列号4的多肽中第1335位氨基酸从R取代为G的突变体；序列号4的多肽中第523位氨基酸从R取代为Q的突变体；序列号4的多肽中第1232位氨基酸从D取代为V的突变体；和序列号4的多肽中第1268位氨基酸从M取代为T的突变体组成的组中的至少一种。

5.根据权利要求1所述的生物标记物，其中，所述蛋白激酶为选自由Abl、ACK、ALK、Arg、ARK5、Aurora、Axl、Bmx、BTK、CDK、CHK、c-Kit、c-MET、c-RAF、c-SRC、EGFR、FAK、Fes、FGFR、Flt3、GSK3、IGF、IKK、JAK、Lck、LIMK、Lyn、MEK、Mer、MK-2、P38α、PDGFR、PDK、Pim、PKA、PKB、PKCR、Plk-1/3、Ret、RON、Ros、Rse、Tie、Trk、Tyro3、VEGFR和YES组成的组中的至少一种。

6.根据权利要求1所述的生物标记物，其中，所述蛋白激酶抑制剂为选自由CJ12495、CJ12537、CJ12524、CJ12567、K252a、SU11274、PHA-665752、ARQ-197、PF-02341066、PF-04217903、JNJ-38877605、Foretinib、SGX523、MP470、AMG102、AMG706、LY2801653、XL-184、Flavopihdol、Olomoucine、Roscovitine、Purvanolols、CGP74514A、Roscovitine、Bevacizumab、Cetuximab、Gefitinib、Erlotinib、Panitumumab、PKI-166、EKB-569、HKI-272(WAY-177820)、Lapatinib、Canertinib、AEE788、XL647、BMS5599626和Zactima所组成的组中的至少一种。

7.一种用于预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的组合物，其包括用于测量活性Recepteur d’Origine Nantais即RON的表达水平。

8.根据权利要求7所述的组合物，其中，所述活性RON的表达水平包括剪接变体或突变体的表达水平。

9.根据权利要求8所述的组合物，其中，所述剪接变体为选自由序列号1的RONΔ155、序列号2的RONΔ160和序列号3的RONΔ165组成的组中的至少一种。

10.根据权利要求8所述的组合物，其中，所述突变体为其中序列号4的多肽中的氨基酸被取代、缺失或插入的突变体。

11.根据权利要求8所述的组合物，其中，所述突变体为选自由序列号4的多肽中第1254位氨基酸从M取代为T的突变体；序列号4的多肽中第1335位氨基酸从R取代为G的突变体；序列号4的多肽中第523位氨基酸从R取代为Q的突变体；序列号4的多肽中第1232位氨基酸从D取代为V的突变体；和序列号4的多肽中第1268位氨基酸从M取代为T的突变体组成的组中的至少一种。

12.根据权利要求7所述的组合物，其中，所述蛋白激酶为选自由Abl、ACK、ALK、Arg、ARK5、Aurora、Axl、Bmx、BTK、CDK、CHK、c-Kit、c-MET、c-RAF、c-SRC、EGFR、FAK、Fes、FGFR、Flt3、GSK3、IGF、IKK、JAK、Lck、LIMK、Lyn、MEK、Mer、MK-2、P38α、PDGFR、PDK、Pim、PKA、PKB、PKCR、Plk-1/3、Ret、RON、Ros、Rse、Tie、Trk、Tyro3、VEGFR和YES组成的组中的至少一种。

13.根据权利要求7所述的组合物，其中，所述蛋白激酶抑制剂选自由CJ12495、CJ12537、CJ12524、CJ12567、K252a、SU11274、PHA-665752、ARQ-197、PF-02341066、PF-04217903、JNJ-38877605、Foretinib、SGX523、MP470、AMG102、AMG706、LY2801653、XL-184、Flavopihdol、Olomoucine、Roscovitine、Purvanolols、CGP74514A、Roscovitine、Bevacizumab、Cetuximab、Gefitinib、Erlotinib、Panitumumab、PKI-166、EKB-569、HKI-272(WAY-177820)、Lapatinib、Canertinib、AEE788、XL647、BMS 5599626和Zactima组成的组中的至少一种。

14.根据权利要求7所述的组合物，其中，所述蛋白激酶抑制剂是用于治疗癌症、牛皮癣、类风湿性关节炎、炎性肠病或慢性阻塞性肺病的药剂。

15.根据权利要求14所述的组合物，其中，所述癌症为选自由ACTH产生性癌症、急性淋巴细胞性或淋巴母细胞性白血病、急性或慢性淋巴细胞白血病、急性非淋巴细胞性白血病、膀胱癌、脑肿瘤、乳腺癌、宫颈癌、慢性骨髓性白血病、肠癌、T区淋巴瘤、子宫内膜异位症、食管癌、胆囊癌、尤因氏肉瘤、头颈癌、舌癌、霍奇金淋巴瘤、卡波西肉瘤、肾癌、肝癌、肺癌、间皮瘤、多发性骨髓瘤、神经母细胞瘤、非霍奇金淋巴瘤、骨肉瘤、卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、结肠癌、肝癌、视网膜母细胞瘤、皮肤癌、胃癌、甲状腺癌、子宫癌、睾丸癌、维尔姆斯氏瘤和滋养层细胞瘤组成的组中的至少一种。

16.根据权利要求7所述的组合物，其中，用于测量表达水平的试剂包括特异性结合mRNA的反义寡核苷酸、引物对或探针。

17.根据权利要求16所述的组合物，其中，所述引物对由序列号5的正向引物和序列号6的反向引物组成。

18.根据权利要求7所述的组合物，其中，所述用于测量表达水平的试剂包括抗体、多肽或核苷酸。

19.根据权利要求7所述的组合物，其中，所述用于测量表达水平的试剂包括能够监测RON磷酸化的抗体。

20.一种用于预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的试剂盒，其包括根据权利要求7至19中任一项所述的组合物。

21.一种用于预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的方法，其包括：

(a)测量从受试者获得的生物样品内的活性Recepteur d’Origine Nantais即RON的表达水平；和

(b)基于步骤(a)中测量的结果，确定受试者对蛋白激酶抑制剂的敏感性。

22.根据权利要求21所述的方法，其中，所述活性RON的表达水平包括RON基因的剪接变体或突变体的表达水平。

23.根据权利要求21所述的方法，其中，当确认活性RON的表达时，确定受试者对蛋白激酶抑制剂具有敏感性。

24.根据权利要求22所述的方法，其中，当活性RON的表达水平高于对照组的表达水平时，确定受试者对蛋白激酶抑制剂具有敏感性。