KR101822518B1 - 강화된 질산염 함량을 가지는 아마란스 추출물 기원의 의약 조성물 및 그의 제조방법 - Google Patents

강화된 질산염 함량을 가지는 아마란스 추출물 기원의 의약 조성물 및 그의 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 강화된 질산염 함량, L-아르기닌, 플라보노이드, 사포닌, 알칼로이드, 탄수화물, 단백질, 칼륨, 및 미량의 옥살산 또는 옥살산염 함량을 가지는 아마란스 추출물을 게시한다. 아마란스 추출물은 아마란스의 신선한 또는 건조된 잎들 및 줄기로부터 제조될 수 있다. 이는 다른 투여 즉. 급속 용해 태블릿, 드롭스(lozenge) 캔디, 츄잉껌, 음료, 태블릿, 캡슐, 알약, 및 분말로 환자에게 투여될 수 있다. 상기 아마란스의 강화된 추출물은 혈액 뿐만 아니라 타액 내의 산화 질소 농도, 질산염 수준 농도, 및 아질산염 수준을 향상시키는 능력을 가진다. 따라서 그의 투여에 의해 인간에서 혈압을 낮추고, 신체 지구력을 증가시키며, 수영 지구력을 증가시키고, 달리기 지구력을 증가시키고, 성적 수행을 향상시킨다.

Description

강화된 질산염 함량을 가지는 아마란스 추출물 기원의 의약 조성물 및 그의 제조방법{A MEDICINAL COMPOSITION OF AMARANTH EXTRACT ORIGIN HAVING ENRICHED NITRATE CONTENT AND A METHOD OF PREPARING THE SAME}
본 발명은 강화된 질산염 함량, L-아르기닌, 플라보노이드, 사포닌, 알칼로이드, 탄수화물, 단백질, 칼륨, 및 미량의 옥살산 또는 옥살산염 함량을 가지는 아마란스 추출물 및 그 제조방법에 관한 것이다.
산화질소는 많은 물리적 및 병리학적 공정들에 포함된 중요한 세포성 신호 분자이다. 이는 혈액내에서 몇초의 짧은 반감기를 가지는 강력한 혈관확장제이다. 상기 산화질소는 우리 몸에서 세포들에 의해 생산된 가스의 자유 형태이다. 이는 몸속의 효소가 아미노산 아르기닌을 분해할때 생산되고, 주로 세포간 의사소통에 사용된다. 산화질소는 우리 몸 내에서 핵심적 생리적 작용들을 위하여 필요하다. 이는 다양한 생물학적 작용들을 도우면서 하나의 세포에서 다른 세로로 자유롭게 이동한다. 상기 필요에 의해, 산화질소는 호르몬, 신경전달물질 및 세포간 메신저로서 역할을 할 수 있다.
산화질소는 다양한 신체 작용들을 위해 중요하며, 상기 세포들이 우리 몸속에서 적합한 양의 이러한 가스를 생산하는데 필수적이다. 바디빌더들 또는 엄격한 신체 활동들을 수행하는 사람들은 더 많은 양의 NO가 필요하며, 따라서 이는 근육 생성 동안 혈액 흐름에서의 증가를 가능하게 한다. NO 결핍의 신호들은 극도의 피로 및 신체의 허약을 포함한다. 이는 불면증, 비만, 당뇨 및 성적 문제들과 같은 다양한 질환들을 치료하는데 유용하다. 심장혈관계에서, NO는 기초 혈관 긴장도의 중요한 결정 요인이며, 혈소판 활성화를 막고, 내피에의 백혈구 접착을 제한하며, 심근 수축성을 조절한다. NO는 또한 쇼크 상태들을 동반하는 고혈압, 본태성 고혈압, 및 아테롬성 동맥 경화증을 포함하는 흔한 심장혈관 질환들의 발병에 역할을 할 수 있다. 산화질소는 몸 전체의 혈액순환을 조절하며, 혈관 직경을 증가시키며, 혈전의 형성을 막는다. 이는 혈관들을 조절 및 이완시키는데 있어서 내피세포를 돕는다. 산화질소는 대식세포, 뉴우런의 메신저 분자, 및 내피세포에 의해 생산된 혈관확장신경의 세포독성 약품이다. 우리 몸속의 면역 세포들은 감염을 유발하는 박테리아, 바이러스 및 다른 해로운 외부 미생물들을 파괴시키기 위해 산화질소를 방출한다. NO는 또한 몸의 세포들 내에서 종양 및 독성의 성장들을 막는 것으로 알려져 있다.
산화질소는 발기성의 작용의 매개자임이 알려져 왔다. 산화질소는 몸속의 성적 반응 메커니즘을 자극하고, 활성화하며 증폭시킨다. 감각의 및 정신의 자극은 신경세포가 산화질소를 방출하도록 유발한다. 이는 음경 근육들을 이완시키게 하고, 혈액이 음경 내로 흐르도록 하여 발기를 일으킨다. 상기 과정은 여자들에 대해서도 혈류가 그들의 질의 조직들에서 증가함으로써 동일하다. 산화질소는 근육 세포들의 지구력 수준을 증가시키고, 더 무거운 짐(load)을 들고 격렬한 활동을 쉽게 할 수 있게 한다. 산화질소는 신경세포들을 포함하여 몸속의 다양한 세포들 사이의 세포간 메신저로서 역할을 한다. 몸 속에 존재하는 적합한 양의 NO와 함께, 신경세포들 사이의 의사소통은 더 빠르고, 빠른 반응을 이끌고 촛점 및 경계에서 증가한다. 고혈압, 고지혈증, 및 당뇨병과 같은 아테롬성 동맥경화증을 촉진하는 공통 장애들은 모두 비정상적인 내분비 작용과 연관되어 있고, 그의 하나의 징후는 생리활성 NO의 상대적 결핍이다. 위장관에서 뉴우런들을 생산하는 NO의 결핍은 히루스프림그병, 무이완증, 및 만성 가성 장폐쇄증과 같은 위장의 유동성에서 특정 이상들에 대해 원인이 되는 것으로 믿어져왔다. NO는 또한 가능하게는 증가된 점막의 혈류량 및 위 상피 세포 기능의 조절 방식에 의해 위세포 보호작용에서 중요한 역할을 하는 것으로 믿어져왔다.
인체에서의 산화질소의 생산(생합성)
NO는 산화질소 합성효소(NOS)의 효소작용에 의해 아미노산 L-아르기닌으로부터 생산된다. NOS의 두가지 내피형태 즉, 구성적(CONSTITUTIVE) NOS(cNOS;Ⅲ타입) 및 유도가능한 NOS(iNOS;Ⅱ타입)가 있다. NOS에 대한 공동 인자는 산소, NADPH, 테트라하이드로비오프테린 및 플라빈 아데닌 뉴클레오티드를 포함한다. 내피의 NOS 뿐만 아니라, 신경의 NOS(nNOS;Ⅰ타입)가 있으며 이들은 뇌에서 및 말초신경계의 다른 신경들에서의 전달자로서 기여하며, 비-아드레날린 작용성의, 비-콜린효능성의 자율신경과 같이 혈관확장을 만들기 위하여 음경의 발기 조직 및 몸의 다른 특화된 조직들을 신경을 자극시킨다.
혈관의 보통의, 기저의 조건 하에서, NO는 cNOS 에 의해 지속적으로 생산된다. cNOS 의 활성은 칼슘 및 칼모듈린 의존적이다. cNOS 의 자극을 위해서는 두가지 기본 경로가 있으며, 두가지 모두 세포막 밑 저장 부위로부터의 칼슘이온의 방출을 포함한다. 첫째, 혈류에 의해 생성된 혈관 내피에 작용하는 전단력(shearing force)은 칼슘 방출 및 그 다음의 cNOS 활성화를 초래한다. 따라서, 혈류량의 증가는 NO 형성(흐름 의존 NO 형성)을 자극한다. 둘째, 다양한 리간드들에 대한 내피세포의 수용체들은 칼슘 방출 및 그 다음의 NO 생산(수용체-자극된 NO 형성)을 자극한다. 포함된 것들은 아세틸콜린, 브래디키닌, P 물질, 아데노신, 및 많은 다른 혈관활성 물질들에 대한 수용체들이다.
내피의 NOS 의 아형(isoform)은 iNOS 이다. 이는 그의 활성화는 칼슘 독립적이다는 점에서 cNOS 와 일부 다르다. 정상적, 기저의 조건들에서, iNOS 의 활성은 매우 낮다. iNOS 의 활성은 세균성 엔도톡신들(예를들면, 리포다당류) 및 종양 괴사 인자(TNF) 및 인터류킨들과 같은 사이토카인들에 의한 감염 동안 자극된다. 감염 동안, iNOS 에 의해 생산된 NO의 양은 cNOS 에 의해 생산된 것보다 1,000 배 더 클 것이다.
식이성 질산염으로부터 NO 의 생산
식이성 질산염은 포유동물에서 산화질소의 중요한 공급원이다. 푸른 잎줄기채소 및 몇몇 뿌리 채소들(예로서 비트)은 고농도의 질산염을 가지고 있다. 섭취 및 혈류 내로 흡수된때 질산염은 타액에서 농축되고(약 10배) 혀 표면에서 조건적 혐기성 세균의 세균막에 의해 아질산염으로 환원된다. 이러한 아질산염은 삼켜져서 산과 반응하고 위 내의 물질들을 환원시켜(예로서 아스코르브산염) 고농도의 산화질소를 생산한다.
60 Kg 성인에 대하여 222 mg 질산염과 같은, 질산염 3.7 mg/kg b.w/일 에 대한 하루 허용 섭취량(ADI)은 이전의 식품과학위원회(SCF)에 의해 확립되었으며 식품 첨가물의 공동 FAO/WHO 전문 협의회(JECFA)에 의해 재확인되었다.
식이성 또는 내생적 출처들로부터의 질산염의 생활성화는 그의 아질산염으로의 초기 환원을 필요로 하며, 포유동물은 특별한고 효과적인 질산염 환원 효소들이 부족하기 때문에, 이러한 전환은 주로 위장관 내 및 신체 표면의 조건적 세균에 의해 수행된다. 아질산염은 산화적(NO2 라디칼) 및 환원적(NO 라디칼) 신호 사이에서의 그의 산화환원 반응 위치 및 그의 혈액 및 조직에서의 상대적 안정성에 있어서 산화질소들에 특유한(unique) 것이다. 일단 아질산염이 형성되면, 몸속에서는 헤모글로빈, 미오글로빈, 크산틴 산화환원 효소, 아스코르브산염, 폴리페놀 및 단백질들을 포함하는 그의 NO 로의 추가 환원을 위한 많은 경로들이 존재한다. 이러한 경로들에 의한 NO 의 환원은 저산소증 및 산과다증(acidosis) 동안 크게 증가하며, 따라서 산소-의존적 NOS 효소 활성들이 타협에 이르기 위한 상황들에서 NO 생산을 보장한다. 식이성 질산염은 상부 위장관에서 빠르게 흡수된다. 혈액내에서, 이는 NOS 효소들로부터 생산된 내생의 NO 의 산화로부터 형성된 질산염과 혼합된다.
일단 구강에서는, 호흡동안 공생하는 조건적 혐기성 세균들이 질산염을 산소에 대한 선택적 전자 수용체로서 이용하여 질산염 환원효소들의 작용에 의해 타액의 질산염을 아질산염으로 효과적으로 환원시킨다. 포유동물 세포들은 이런 음이온을 효과적으로 대사시키지 못하기 때문에, 인간 질산염 환원은 이러한 세균들의 존재를 필요로 한다- 기능적 공생 관계를 제시함. 식이성 질산염 로드 이후에 타액의 질산염 수준들은 10 mM 및 아질산염 수준들 1-2 mM 에 이를 수 있다. 타액이 산성의 위에 들어가면(1-1.5 l per day), 많은 아질산염이 재빨리 양성자화되어 아질산(HNO2; pKa ~3.3)을 형성하며, 이는 추가로 분해되어 NO 및 다른 질소산화물들을 형성한다. NO로의 아질산염 환원은 비타민 C 및 폴리페놀들(이들 둘다 식사에 풍부하다)과 같은 화합물들을 환원함으로써 매우 증가된다.
잎줄기 채소 내의 질산염 함량 퍼센티지는 매우 낮아서 구강으로 섭취된 때 혈액내 산화질소 수준을 매우 증가시킨다. 상당한 수준의 혈액내 산화질소를 얻기 위하여 많은 양이 규칙적인 간격으로 섭취될 필요가 있다. 정기적으로 다량의 잎줄기 채소들의 소비는 바쁜 생활에서는 간편하지 않다. 따라서, 질산염 포함 식물로부터 개발된 보충제를 간편한 수송 시스템의 형태로 제공하는 것이 혈액 내에서 더 높은 산화질소 함량을 생성하기 위한 편리한 대안이 될 것이다. 나아가, 질산염들은 입속에서 자체로 아질산염으로 전환될 필요가 있으므로(공생하는 조건적 혐기성 세균들에 의해), 만일 질산염 풍부 제제가 츄잉껌, 정제, 캔디 등의 형태로 구강으로 배송될 수 있다면 더욱 이익이 될 것이다. 구강을 통한 배송은 의약들의 종래의 배송을 넘어 확실한 장점들을 제공한다.
구강에서 약물 투여 위치들은 입의 바닥(설하), 빰의 내부(구강의) 및 치은(잇몸의)을 포함한다. 구강을 통한 약물 투여는 몇몇 확실한 장점들을 제공한다:
· 구강 점막(buccal mucosa)은 많은 혈액 공급에 상대적으로 투과적이며, 다른 점막 조직들에 비하여 튼튼하다.
· 위장의 액체들에 대한 약물의 첫번째 효과의 우회 및 비-노출
· 점막에 지속된 접촉을 가지기 때문에 많은 약물들의 작용을 향상시킨다.
· 다른 비경구의 약물 투여 경로에 비하여 많은 환자 수용
· 접착력 및 친밀한 접촉의 결과로서, 제제는 질병치료를 위하여 보다 낮은 API 농도를 이용하여 API 생체학적 이용가능성을 향상시키면서 배달 위치에 오래 머무른다.
· 약물의 경구의 배달에 존재하는 가혹한 환경 요인이 구강의 약물 배달에 의해 회피된다.
인간의 혈액속의 산화질소 수준 및 자연에서 풍부한 이용가능한 식물들(식물 원천)로부터 기원된 것들을 포함하는 의약들/제제들의 투여 방법을 증가시키기 위하여 많은 작업들이 행해져왔다.
몇몇 종래 기술의 짧은 리뷰는 다른 종래 기술들에 비하여 우리가 어떻게 상기 주제에 도달했는지 어떻게 효과적으로 인간에 대하여 혈액속의 산화질소 수준 및 인간의 특정 결핍들을 극복하기 위한 근원으로서 뿐만 아니라 질병들의 치료 방법을 향상시키는 데 도달할 수 있을지 해명할 것이다.
US 특허 No.8303995, Bryan 등은, 아질산 제제 및 그들의 산화질소 전구약물들로서의 용도를 설명한다. 상기 조성물은 약 40 중량부 내지 약 1000 중량부의 식물 질산염 근원; 약 20 중량부 내지 약 500 중량부의 식물 근원의 아질산염 환원 활성; 및 약 4 중량부 내지 약 100 중량부의 아질산 염을 포함한다.
아질산염 환원 활성의 식물 근원은 호쏜베리(hawthorn berry),　오미자, 녹차, 비트, 파인박(pine bark), 홀리 바질, 당살초(gymnema sylvestre), ashwagandha 뿌리, 샐비어, 고추나물(St. John wort), 브로콜리, 스테비아, 시금치, 은행, 켈프, 트리뷸러스(tribulus), 가시오갈피(eleuthero), 삼지구엽초(epimedium), 두충(eucommia), 홍경천(rhodiola), 녹차, codonopsys,　인삼, 황기(astragalus), 토사자(dodder seed), 동충하초(cordyceps), 베리들, 차, 맥주, 포도, 와인, 올리브 오일, 쵸콜릿, 코코아, 커피, 호두, 땅콩, 보로조(borojo), 석류, 팝콘, 예르바 마테, 및 그의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택된다. 트리글리세라이드 감소 또는 C-반응성 단백질 수준의 감소 방법들이 또한 제공된다. US 특허 No.8298589, Bryan 등은, '아질산염 제제 및 나트륨과 칼륨의 아질산 염 (10mg to 100mg), 질산염 (50mg to 500 mg), 아스코르브산 (100mg to 2000mg)을 포함하는 조성을 가지는 산화질소 전구약물로서의 그의 용도에 관한 것이다.
특허 공개 No US 20130071494, Bryan 등은 또한 아질산염 제제 및 산화질소 전구약물로서의 그의 용도를 설명한다. 상기 조성물은 약 40 중량부 내지 약 1000 중량부의 식물 질산염 공급원; 약 20 중량부 내지 약 500 중량부의 아질산염 환원 활성의 식물 공급원원; 및 약 4 중량부 내지 약 100 중량부의 아질산염을 포함한다. 트리글리세라이드 감소 또는 C-반응성 단백질 수준의 감소 방법에서의 상기 조성물의 용도가 또한 여기에서 설명된다.
특허 공개 No US 20120321724, 및 WO 201323217 Bryan 등은, 타액의 아질산염 테스트 기질을 제공하고, 상기 테스트 기질과 함께 타액의 아질산염 수준을 테스트하고, 테스팅에서 탐지된 아질산염 수준들을 측정하며; 및 상기 측정된 아질산염 수준을 생체내 산화질소 생물학적 이용가능성과 상호연관시킴으로써 개개인에서의 생체내 산화질소 및 아질산염 수준들을 측정하는 방법을 설명한다.
특허 US 8435570, Bryan et al, 는 아질산염, 질산염 및 아스코르브산을 포함하는 조성물을 설명한다. 포유동물에서 심장 혈관 성능을 향상시키거나 또는 심장 혈관의 이상 반응을 치료하는 방법이 또한 제공된다.
특허 공개 20130071371, Bryan 등은 조성물 및 방법 산화질소 및 아질산 치료법을 환자에게 제공하는 방법에 관한 것으로 그것에 의해 분산가능한 매체를 포함한 치료량은 대략 30분의 투여를 포함하는 범위 내에서 생물학적으로 이용가능하다. 공개된 실시예에서, 산화질소는 구강내에서 생산된다.
상기 특허들에서, 상기 질산염 공급원은 합성의 것이거나 또는 시금치, 비트, 아티쵸크, 홀리바질, 녹차 등을 포함하는 식물의 질산염 공급원 중의 하나이다.
질산염이 강화된 아마란스 추출물 보충제는 몸속의 질산염 및 아질산염 수준을 향상시킨다. 비타민 C의 존재는 몸속의아질산염의 산화질소로의 전환을 촉진시킴으로써 몸속의 잠재적 산화방지제를 증가시킨다. 현 제형에서 비타민 C를 가지는 질산염 강화된 아마란스 추출물은 아마란스 추출물로부터 배달된 아질산의 전환을 촉진시킴으로써 몸속의 산화질소의 생성을 추가로 향상시킨다. 사용된 비타민 C 는 합성 또는 천연 기원의 것일 수 있다.
아마란서스(Amaranthus)는 아마란시아(Amaranthaceae) 과에 속하는 식이성 잎줄기 채소들이다. 아마란스는 Amaranthus dubius , Amaranthus spinosus , Amaranthus fimbriatus , Amaranthus 시floridanus , Amaranthus graecizans 등을 포함한다. 질산염의 다른 식이성 공급원은 시금치(Spinacia oleracia, family: Amaranthaceae), 비트(Beta vulgaris, family: Amaranthaceae), 래터스 (Lactuca sativa, family: Asteraceae) 등을 포함하는 아마란서스(Amaranthus)속 및 다양한 종종들에 속한다.
아마란서스(amaranthus) 속은 비름, 워터 헴프(water hemps), 및 곡물 아마란서스를 포함하여 대략 70 종의 전세계 분포를 포함한다. 인간 소비를 위해 경작된 곡물 아마란스 -A. caudatus , A. cruentus 및 A. hypochondriacus 및 채소 아마란스 - 주로 A. dubius , A.tricolor 및 A. cruentus가 있다. 노르웨이에서, 곡물 아마란서스는 온대에서 열대지대까지 경작되며 채소 아마한스는 주로 남아프리카 및 남아시아에서 경작된다.
90 ~ 150 센티미터 크기까지 자라는 이러한 식물들은 세계 많은 부분들에서 풍부한 잡초이다. 모든 아마란스는 번갈아나오는 단순한 잎들을 가진다. 그들의 줄기에 몇몇 붉은 색깔 존재를 가질 수 있다. 그들은 식물들의 꼭대기의 밀집 클러스터에 극히 작은 녹색을 띠는 꽃들을 가진다. 그들의 씨앗들은 잡초 종류들에서 갈색 또는 검정색일 수 있고 국내 종들에서는 밝은 색상일 수 있다. 몇몇 아마란스 종들은 곡류 작물 및 텃밭 채소로서 세계 다양한 지역들, 특히 남아프리카에서 재배되어 왔다.
아마란서스는 매우 유망한 작물이다. 주요 이유는 단백질 함량, 지방 및 활성 물질들일 수 있다. 씨앗 단백질의 함량은 매우 좋은 균형잡힌 아미노산들을 가지며 13 ~ 18% 범위이다. 라이신 함량은 일반적 곡류에 비하여 상대적으로 높다. 잎의 가공하지 않은 단백질들의 함량은 d.m.의 27~49% 이며 시금치의 잎에서의 함량이상이다. 아마란서스는 전체 달걀 단백질과 상당하거나 또는 더 높은 함량의 필수 아미노산들을 가지고 있다. 지방 함량은 0.8-8.0% 범위이다. 리놀레산은 더 작은 양의 올레익산 및 팔미틱산보다 우세한 지방산이다.
상기 내용은 강화된 질산염 내용물, L-아르기닌, 플라보노이드들, 탄수화물, 단백질, 사포닌들, 알칼로이드들, 칼륨을 가지며 무시해도 될 정도의 양의 옥살산 또는 옥살산염 내용물을 가지며 혈압(고혈압)을 낮추고 포유동물 특히 인간의 지구력(endurance)을 증가시키는 아마란스 추출물 기원의 의약 조성물에 관한 것이다.
상기 강화된 아마란스 추출물은 혈장 및 타액 내의 산화질소의 수준을 높이는데 유용하다. 상기 강화된 아마란스 추출물은 또한 혈장 및 타액의 질산염의 수준을 높이고 혈압(고혈압)을 낮추고 지구력을 증가시키는데 유용하다.
상기 내용은 또한 무시해도 될 정도의 양의 옥살산 또는 옥살산염 내용물을 가지는 상기 강화된 아마란스 추출물의 제조공정에 관한 것이다. 더욱 특별하게는, 상기 내용은 3~20% 범위 퍼센티지의 질산염을 얻기 위하여 주로 질산염과 함께 아마란스의 추출 및 상기 추출물의 강화에 관한 것이다. 또한 상기 내용은 또한 혈장 및 타액 내의 산화질소의 수준을 높이기 위한 치료 방법을 공개하고 있고 또한 혈장 및 타액 내의 질소 및 질산염의 수준을 높이는데 유용하다. 내용은 상기 질산염 강화된 제제들을 입에서 흡수가 편리하게 하기 위한 급속용해성 태블릿, 정제(lozenge), 캔디, 츄잉껌, 음료 등과 같이 또한 위에서 흡수될 수 있는 태블릿, 캡슐, 알약, 분말 등의 형태로 경구적으로 수송함으로써 혈압(고혈압)을 낮추고 지구력을 증가시키는 치료 방법을 공개한다.
공개는 아마란스 추출물로부터 수득한 의약 조성물을 제공한다. 공개는 낮은 옥살산 함량을 가지는 아마란스 추출물을 제공한다. 상기 아마란스 추출물은 하기를 포함한다.
약 0.1% 내지 약 20% 질산염;
약 0.1% 내지 약 10% 의 L-아르기닌;
약 0.001% 내지 약 10% 의 플라보노이드;
약 0.01% 내지 약 15% 의 사포닌;
약 0.01% 내지 약 10% 의 알칼로이드;
약 10% 내지 약 30% 의 탄수화물;
약 5% 내지 약 25% 의 단백질;
약 5 % 내지 약 25% 칼륨; 및,
약 0.01% 내지 약 50% 의 총 옥살산. 총 옥살산 함량의 결정은 추출물 내의 자유 옥살산 및 옥살산염의 측정에 포함된다. 상기 공개는 또한 구강의 흡수에 용이하게 만들기 위하여 상기 아마란스 조성물의 빨리 녹는 드롭스, 츄잉껌 등과 같은 경구투약형태를 제공한다. 상기 공개는 또한 위에서 흡수를 위하여 알약, 캡슐, 정제, 분말 등과 같은 투여형태를 제공한다.
상기 공개는 아마란스 추출물의 제조방법들을 제공한다. 아마란스 추출물은 아마란스의 신선한 또는 건조된 잎들 및 줄기로부터 제조될 수 있다.
상기 조성물의 몇몇 실시형태는 혈장내 산화질소의 양을 증가시키는데 유용하다고 발견하였다. 일부 실시형태들은 타액의 산화질소의 양을 증가시킨다. 일부 실시형태들은 혈장내 질산염 및 아질산염의 수준을 증가시킨다. 상기 추출물의 일부 실시형태들은 타액내 질산염 및 아질산염의 수준을 증가시킨다. 일부 실시형태들은 포유동물내 항산화제 활성을 증가시킨다. 일부 실시형태들에서, 상기 조성물은 혈압(고혈압)을 낮추며, 상기 조성물의 일부 실시형태들은 지구력을 증가시킨다.
일부 실시예에서, 상기 아마란스 추출물은 암라 추출물을 추가함으로써 강화될 수 있다.
아마란스 추출물은 아마란스의 신선한 또는 건조된 잎들 및 줄기로부터 제조될 수 있다. 이는 다른 투여 즉. 급속 용해 태블릿, 드롭스(lozenge) 캔디, 츄잉껌, 음료, 태블릿, 캡슐, 알약, 및 분말로 환자에게 투여될 수 있다. 상기 아마란스의 강화된 추출물은 혈액 뿐만 아니라 타액 내의 산화 질소 농도, 질산염 수준 농도, 및 아질산염 수준을 향상시키는 능력을 가진다. 따라서 그의 투여에 의해 인간에서 혈압을 낮추고, 신체 지구력을 증가시키며, 수영 지구력을 증가시키고, 달리기 지구력을 증가시키고, 성적 수행을 향상시킨다.
상기 명세서의 다른 특징들 및 장점들은 하기의 바람직한 공정들의 설명으로부터 명백해질 것이며, 수반된 도면의 도와 함께 이해되어야 하며, 이는 상기 발견들 및 발명들의 특정의 바람직한 구체 예에서 수행된 다양한 공정 시도들에 포함된 상기 공정들의 단계들을 증명한다.
도. 1: 흐름도- 메탄올로 신선한 아마란스의 추출.
도. 2: 흐름도- 물로 신선한 아마란스의 추출.
도. 3: 흐름도- 메탄올로 건조된 아마란스의 추출.
도. 4:흐름도- 물로 건조된 아마란스의 추출.
도. 5: 흐름도- 펙티나아제로 처리에 의한 신선한 아마란스의 추출.
도. 6: 흐름도- 펙티나아제로의 처리 및 옥살산의 제거에 의한 신선한 아마란스의 추출.
도. 7: 흐름도- 펙티나아제로의 처리 및 옥살산의 제거 이후 신선한 아마란스의 헥산 추출.
도. 8: 흐름도- 펙티나아제로의 처리 및 옥살산의 제거 이후 신선한 아마란스의 클로로포름 추출물.
도. 9: 흐름도- 펙티나아제로의 처리 및 옥살산의 제거 이후 신선한 아마란스의 EDC 추출물.
도. 10: 흐름도- 암라의 추출.
도. 11: 흐름도- 펙티나아제로의 처리 및 옥살산의 제거 이후 신선한 아마란스의 암라와 결합결한 헥산 추출물.
도. 12: 흐름도- 건조된 아마란스 잎 분말의 제조.
도. 13: 흐름도 - 아마란스 쥬스의 제조.
도. 14 (A 부분): 표는 다른 아마란스 추출물 및 급속 용해 태블릿들에서 활성의 퍼센티지를 나타낸다.
도. 14 (B 부분): 표는 다른 아마란스 추출물 및 급속 용해 태블릿들에서 활성의 퍼센티지를 나타낸다.
상기 공개는 독특한 추출방법에 의해 질산염으로서 아마란스로부터 제조된 차원이 다른 의약 조성물을 제공한다. 상기 공개된 공정들은 질산염, L-아르기닌, 플라보노이드, 탄수화물, 단백질, 사포닌, 알칼로이드, 칼륨 이 강화되었으며 미량의 옥살산 또는 옥살산염 함량을 가지는 아마란스 추출물을 제공한다. 많은 채소들은 높은 함량의 자유 옥살산 또는 옥살산염 형태의 전체 옥살산을 포함하고 상기 옥살산 또는 옥살산염의 함량은 인간 건강에 유독성이다. 야채들로부터 추출물은 다른 활성의 구성성분들과 함께 옥살산을 함유한다. 아마란스 추출물 또한 옥살산 및 옥살산염을 함유한다. 그러나, 상기 공개된 방법들에서, 우리는 미량의 옥살산 또는 옥살산염 함량을 가지는 아마란스 추출물을 제공하기 위하여 아마란스 추출물로부터 상기 옥살산 및 옥살산염들을 제거하였다. 총 옥살산 함량은 HPLC 방법에 의해 측정되었고 상기 추출물에서 자유 옥살산 및 옥살산염 모두를 제공한다.
강화된 아마란스 추출물로부터 수득된 상기 조성물은 혈압(고혈압)을 낮추고, 혈장 및 타액내의 산화질소의 수준을 향상시키고, 혈장 및 타액내의 질산염 및 아질산염의 수준을 향상시키고, 항산화 활성을 증가시키고 지구력을 증가시키는데 유용하다.
상기 공개는 아마란스 추출물의 의약 조성물에 관한 것이다. 상기 조성물은 강화된 질산염 함량, L-아르기닌, 플라보노이드, 탄수화물, 단백질, 사포닌, 알칼로이드, 칼륨 및 미량의 옥살산 또는 옥살산염을 가진다.
상기 아마란스 추출물은 아마란스의 신선한 그리고 건조된 잎들 모두 및 줄기로부터 수득될 수 있다. 포유동물 특히 인간에게 투여된 때 상기 조성물은 혈압(고혈압)을 낮투고 지구력을 증가시킨다. 만일 동일한 추출물이 효소 처리에 의해 더욱 강화된다면 이는 혈압(고혈압) 을 낮추고 지구력을 증가시키는 능력을 향상시킬 수 있다.
강화된 아마란스 추출물 기원의 조성물은 혈장 내 및 타액의 산화질소의 양을 증가시키는 특성을 가질뿐만 아니라 혈장 및 타액의 질산염 및 아질산염의 수준을 향상시키는 특성을 가진다는 점이 추가로 알려졌다. 상기 조성물은 또한 항산화 활성을 향상시키는데 유용한 것으로 밝혀졌다.
몇몇 실시예는 아마란스의 신선한 잎들 및 줄기로부터의 아마란스 추출물로부터 수득된 조성물을 제공하며, 강화된 질산염 함량, L-아르기닌, 플라보노이드, 사포닌, 알칼로이드, 칼륨을 포함하고 미량의 옥살산 또는 옥살산염 함량을 가지며, 여기서 질산염들은 3% 내지 20% 범위로 상기 추출물에 존재하고, L-아르기닌은 1% 내지 10% 로 추출물에 존재하고, 플라보노이드는 1% 내지 10% 범위로 추출물에 존재하고, 사포닌은 5% 내지 15% 범위로 존재하며, 알칼로이드는 3% 내지 10% 범위로 존재한다. 상기 추출물은 또한 10% 내지30% 탄수화물, 5% 내지 25% 칼륨을 함유하고 및 단백질은 5% 내지 25% 범위로 존재한다.
몇몇 실시예들은 낮은 전체 옥살산 함량을 가지는 아마란스 추출물을 제공한다.상기 추출물은 포함한다:
약 0.1% 내지 약 20% 질산염;
약 0.1% 내지 약 10% 의 L-아르기닌; (0.1-2%; 0.1-6%; 0.1-10%);
약 0.001% 내지 약 10% 의 플라보노이드;
약 0.01% 내지 약 15% 의 사포닌;
약 0.01% 내지 약 10% 의 알칼로이드; (0.01-5%);
약 10% 내지 약 30% 의 탄수화물;
약 5% 내지 약 25% 의 단백질;
약 5 % 내지 약 25% 칼륨; 및,
약 0.01% 내지 약 50% 의 총 옥살산. 총 옥살산은 추출물에서 자유 옥살산 및 옥살산염을 포함한다.
추출물의 몇몇 실시예들에서, 질산염은 약 0.1% 내지 약 3 % 범위이다. 추출물의 몇몇 실시예들에서, 질산염은 약 1% 내지 약 10% 범위이다. 추출물의 몇몇 실시예들에서, 질산염은 약 10% 내지 약 20 % 범위이다. 추출물의 몇몇 실시예들에서, 질산염은 약 3% 내지 약 20 % 범위이다. 추출물의 몇몇 실시예들에서, L-아르기닌은 약 0.1% 내지 약 2% 범위이다. 추출물의 몇몇 실시예들에서, L-아르기닌은 약 0.1% 내지 약 6% 범위이다. 추출물의 몇몇 실시예들에서, L-아르기닌은 약 0.1% 내지 약 10% 범위이다. 추출물의 몇몇 실시예들에서, 알킬로이드는 약 0.01% 내지 약 5% 범위이다. 추출물의 몇몇 실시예들에서, 총 옥살산은 약 0.01% 내지 약 0.1% 범위이다. 추출물에서 총 옥살산 함량은 상기 추출물 내의 자유 옥살산 및 옥살산염 함량 모두를 측정하기 위하여 HPLC 방법에 의해 결정되었다. 추출물의 몇몇 실시예들에서, 총 옥살산은 약 0.01% 내지 약 1% 의 범위이다. 추출물의 몇몇 실시예들에서, 총 옥살산은 약 0.1% 내지 약 1% 의 범위이다. 추출물의 몇몇 실시예들에서, 총 옥살산은 약 1% 내지 약 10% 의 범위이다. 추출물의 몇몇 실시예들에서, 총 옥살산은 약 1% 내지 약 20% 의 범위이다. 추출물의 몇몇 실시예들에서, 총 옥살산은 약 1% 내지 약 30% 범위이다. 추출물의 몇몇 실시예들에서, 총 옥살산은 약 1% 내지 약 40% 범위이다. 추출물의 몇몇 실시예들에서, 총 옥살산은 약 1% 내지 약 50% 범위이다. 추출물의 몇몇 실시예들에서, 총 옥살산은 약 10% 내지 약 20% 범위이다.
몇몇 실시예들은 낮은 총 옥살산 함량을 가지는 아마란스 추출물을 제공한다. 상기 추출물은 하기의 성분들을 포함한다.
약 3% 내지 약 20% 질산염;
약 1% 내지 약 10% 의 L-아르기닌;
약 1% 내지 약 10% 의 플라보노이드;
약 5% 내지 약 15% 의 사포닌;
약 3% 내지 약 10% 의 알칼로이드;
약 10% 내지 약 30% 의 탄수화물;
약 5% 내지 약 25% 의 단백질;
약 1% 내지 약 5% 의 칼륨; 및,
약 0.1% 총 옥살산. 총 옥살산은 추출물에서 자유 옥살산 및 옥살산염을 결정하기 위하여 HPLC 방법에 의해 측정되었다.
상기 공개는 강화된 질산염, L-아르기닌, 플라보노이드, 탄수화물, 단백질, 사포닌, 알칼로이드, 칼륨을 가지고 미량의 옥살산 또는 옥살산염 함량을 가지는 추출물을 제공하며 상기 추출물은 레드 아마란스 또는 스플린 아마란스(Spleen amaranth) 또는 레드 시금치 (Amaranthus dubius) 또는 A. caudatus , A. cruentus , A. hypochondriacus , A.tricolor, A. blitum , A, viridus 등과 같은 어떠한 아마란스 관련된 종들로부터 수득될 수 있다.
상기 공개는 또한 입에서 흡수가 편리하도록 하기 위하여 구강에서 빨리 용해되는 태블릿, 드롭스, 캔디, 츄잉껌, 음료 등 또한 위에서 흡수되도록 태블릿, 캡슐, 알약, 분말 등의 형태의 질산염이 강화된 제형들의 수송을 설명한다. 몇몇 실시예는 아마란스 추출물을 가지는 투여형태를 제공한다. 상기 투여 형태는 급속 용해 태블릿, 드롭스, 캔디, 츄잉껌, 음료, 태블릿, 캡슐, 알약 및 분말로 구성되는 군으로부터 선택된다.
몇몇 실시예는 아마란스 추출물을 투여함으로써 혈압을 낮추는 방법을 제공한다. 몇몇 실시예는 아마란스 추출물의 투여에 따른 혈액내 산화질소 농도를 증가시키는 방법을 제공한다. 몇몇 실시예는 아마란스 추출물의 투여에 의한 신체 지구력을 증가시키는 방법을 제공한다. 몇몇 실시예는 아마란스 추출물의 투여에 의한 수영 지구력을 증가시키는 방법을 제공한다. 몇몇 실시예는 아마란스 추출물의 투여에 의한 달리기 지구력을 증가시키는 방법을 제공한다. 몇몇 실시예는 아마란스 추출물의 투여에 의해 혈액내 질산염 수준을 향상시키는 방법을 제공한다. 몇몇 실시예는 아마란스 추출물의 투여에 의해 혈액내 아질산염을 증가시키는 방법을 제공한다. 몇몇 실시예는 아마란스 추출물의 투여에 의해 타액내 질산염의 수준을 향상시키는 방법을 제공한다. 몇몇 실시예는 아마란스 추출물의 투여에 의한 타액내 아질산염의 수준을 향상시키는 방법을 제공한다. 몇몇 실시예는 아마란스 추출물의 투여에 의한 타액내 산화질소 수준을 향상시키는 방법을 제공한다.
실시예 26에서 보여지는 몇몇 실시예에서, 질산염으로 강화된 아마란스 추출물을 포함하는 급속 용해 태블릿의 투여는 태브릿의 투여 이전의 혈장 수준들에 비하여 증가된 혈장내 NO3, NO2 및 NO 함량을 이끈다. 몇몇 실시예에서, NO3 수준은 1시간 이후 기저값의 약 6배 증가한다. 몇몇 실시예에서, NO2 수준은 6배 이상 증가한다. 몇몇 실시예에서, NO 수준은 약 6배까지 증가한다.
실시예 27에서 보여지는 몇몇 실시예에서, 질산염으로 강화된 아마란스 추출물을 포함하는 급속 용해 태블릿의 투여는 태브릿의 투여 이전의 기준선과 비교했을때 타액내 증가된 NO3 NO2 및 NO 수준을 이끈다. 몇몇 실시예에서, NO3 수준은 1시간 이후 기준 값의 약 6.9 배 증가한다. 몇몇 실시예에서, NO2 수준은 9.2 배 이상 증가한다. 몇몇 실시예에서, NO 수준은 7.5 배 증가한다.
실시예 28에서 보여지는 몇몇 실시예에서, 물과 혼합된 질산염으로 강화된 아마란스 추출물의 투여는, 추출물의 투여 이전의 타액내 수준들과 비교했을때 타액내 증가된 수준의 NO3, NO2 and NO 수준을 이끈다. 몇몇 실시예에서, NO3 수준은 1시간 이후 기준값의 6.6배 증가한다. 몇몇 실시예에서, NO2 수준은 9.1배 증가한다. 몇몇 실시예에서는, NO 수준은 7.3 배 증가한다.
몇몇 실시예에서, 아마란스 추출물의 투여는 질산염의 혈장 수준을 2배 내지 10배까지 향상시켰다. 몇몇 실시예에서, 아마란스 추출물의 투여는 약 3배 내지 약 15배까지 아질산염의 혈장 수준을 향상시켰다. 몇몇 실시예에서, 아마란스 추출물의 투여는 약 2배 내지 약 10배까지 산화질소의 혈장 수준을 향상시켰다.
몇몇 실시예에서, 아마란스 추출물의 투여는 질산염의 타액 수준을 2배 내지 10배까지 향상시겼다. 몇몇 실시예에서, 아마란스 추출물의 투여는, 아질산의 타액 수준을 약 3 내지 약 15배까지 향상시켰다. 몇몇 실시예에서, 아마란스 추출물의 투여는 산화질소의 타액 수준을 약 2내 내지 약 10배까지 향상시켰다.
몇몇 실시예에서, 질산염으로 강화된 아마란스 추출물의 투여는 질산염 및 아질산염 수준들을 향상시켰다. 비타민 C의 존재는 몸속에서 아질산의 산화질소로의 전환을 상승시키고 따라서 몸속의 항산화제 포텐셜을 증가시킬 것이다. 몇몇 실시예는 비타민 C 를 가지는 질산염 강화된 아마란스 추출물의 제제를 제공하며, 여기서, 상기 제제의 투여는 몸속에서 아마란스 추출물로부터 배달된 아질산의 산화질소로의 전환을 촉진시킴으로써 추가로 산화질소의 생성을 향상시킨다. 아마란스 추출물에 첨가된 비타민 C 는 합성의 또는 천연의 기원일 수 있다.
상기 공개는 물, 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, n-부탄올, 메틸 아세테이트, 에틸 아세테이트, 프로필 아세테이트, n-부틸 아세테이트 및 그의 조합들과 같은 용매들을 사용함으로써 추출된 다른 아마란스 추출물을 제공한다.
상기 추출물의 제조에 사용될 수 있는 저분자량의 알코올들은 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, n-부탄올 및 그의 조합들을 포함한다. 추출물 제조를 위해 사용될 수 있는 에스테르들은 메틸 아세테이트, 에틸 아세테이트, 프로필 아세테이트, n-부틸 아세테이트 및 그의 조합들을 포함한다. 상기 추출물의 제조를 위하여 사용될 수 있는 알칸들은 펜탄, 헥산, 헵탄, 이소옥탄, 및 그의 조합들을 포함한다. 그로부터 추출물이 제조될 수 있는 다양한 아마란스의 종들은 Amaranthus acanthochiton, Amaranthus acutilobus, Amaranthus viridis, Amaranthus albus, Amaranthus arenicola, Amaranthus australis, Amaranthus bigelovii, Amaranthus blitoides, Amaranthus blitum, Amaranthus brownie, Amaranthus californicus, Amaranthus cannabinus, Amaranthus caudatus, Amaranthus chihuahuensis, Amaranthus chlorostachys, Amaranthus crassipes, Amaranthus crispus, Amaranthus cruentus, Amaranthus deflexus, Amaranthus dubius, Amaranthus fimbriatus, Amaranthus floridanus, Amaranthus graecizans, Amaranthus greggii, Amaranthus hybridus, Amaranthus hypochondriacus, Amaranthus leucocarpus, Amaranthus lineatus, Amaranthus lividus, Amaranthus mantegazzianus, Amaranthus minimus, Amaranthus muricatus, Amaranthus obcordatus, Amaranthus oleraceous, Amaranthus palmeri, Amaranthus paniculus, Amaranthus polygonoides, Amaranthus powellii, Amaranthus pringlei, Amaranthus pumilus, Amaranthus quitensis, Amaranthus retroflexus 등을 포함한다.
몇몇 실시예에서, 아마란스 추출물은 2차 추출물을 포함한다. 2차 추출물은 암라 추출물, 강황 추출물, 포도씨 추출물, 녹차 추출물, 석류 추출물, 코코아 추출물, 코코넛 뿌리 추출물, 로즈마리 추출물, 민트 잎 추출물, 스타 아니스, 스위트 바질 추출물, 시나몬 추출물/클로브 추출물, 생강 추출물, 쿠민 씨앗 추출물, 흑후추 추출물, 호로파(fenugreek) 추출물, 또는 그의 조합들로 구성되는 군으로부터 선택된다.
아마란스 추출물의 몇몇 실시예에서, 상기 아마란스는 Amaranthus caudatus, Amaranthus cruentus, Amaranthus tricolor, Amaranthus blitum, Amaranthus viridis, Amaranthus dubis 또는 그의 조합들로 구성되는 군으로부터 선택된다.
아마란스의 신선한 잎들의 추출에 의한 질산염 함량, L-아르기닌, 플라보노이드, 탄수화물, 단백질, 사포닌, 알칼로이드, 칼슘이 강화되고 미량의 옥살산 옥살산염 함량을 가지는 추출물의 제조를 위한 다양한 방법들은 하기와 같다:
몇몇 실시예들에서(도. 1 참조), 아마란스의 신선한 잎들 및 줄기가 세척되고 파쇄되고 65oC 에서 속슬레 추출기(Soxhlet extractor)에서 메탈올을 사용하여 5시간동안 추출되고 나서 여과되었다. 결과의 추출물은 농축된 추출물을 형성하기 위하여 60oC 온도에서 교반식 박막 증발기(ATFE) 내에서 농축된다. 그 후 상기 농축된 추출물은 신선한 아마란스의 "메탄올 추출물"의 분말을 형성하기 위하여 진공하에서 500 mm 이상의 수은에서 건조된다.
몇몇 실시예들에서, 신선한 아마란스의 분말화된 추출물을 제조하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 파쇠된 물질을 얻기 위하여 아마란스의 신선한 잎들 및 줄기를 파쇄하는 것을 포함한다. 그리고 나서 상기 파쇄된 물질을 메탄올로 추출하고 상청액 및 잔여물을 얻는다. 그리고 나서 상기 상청액을 여과하여 여과된 액체를 얻는다. 그리고 나서 상기 여과된 액체를 농축하여 농축된 여과된 액체를 얻는다. 그리고나서 상기 농축된 여과된 액체를 건조하여 신선한 아마란스의 분말화된 추출물을 얻는다.
또 다른 실시예(도 2 참조)에 따라서, 상기 아마란스의 신선한 잎들 및 줄기는 세척되고, 분쇄되고 및 잔여물 및 상청액을 얻기 위하여 환류 컨덴서를 가지는 추출기에서 약 1시간 동안 물을 사용하여 약 추출된다. 상기 잔여물 및 상청액은 상기 상청액을 거름천을 통과하여 여과기 바닥으로부터 흘려보내 없앰으로써 분리된다. 상기 결과의 상청액은 교반식 박막 증발기(ATFE) 에서 85oC 의 온도에서 농축되어 농축된 추출물을 형성한다. 이후에 상기 농축된 추출물은 진공하에서 500 mm 이상의 수은에서 건조되어 신선한 아마란스의 "물 추출물" 의 분말을 형성한다.
몇몇 실시예들은 신선한 아마란스의 분말화된 추출물을 제조하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 분쇄된 물질을 얻기 위해 아마란스의 신선한 잎들 및 줄기를 분쇄하는 것을 포함한다. 그리고 나서 상기 상청액 및 잔여물을 얻기 위하여 물로 파쇄된 물질을 추출한다. 그 다음 농축된 물 추출물을 얻기 위하여 상기 상청액을 농축한다. 그리고나서 분말화된 신선한 아마란스 추출물을 얻기 위해 상기 농축된 물 추출물을 건조한다.
몇몇 실시예들에서(도-3 참조), 상기 아마란스의 신선한 잎들 및 줄기는 세척되고 건조 및 분말화된다. 그리고나서 상기 분말은 속슬레 추출기(Soxhlet extractor)에서 65oC 에서 메탄올을 사용하여 5시간동안 추출되고 나서 여과되었다. 결과의 추출물은 교반식 박막 증발기(ATFE) 에서 60oC 의 온도에서 농축되어 농축된 추출물을 형성한다. 이후에 상기 농축된 추출물은 이후에 상기 농축된 추출물은 진공하에서 500 mm 이상의 수은에서 건조되어 건조된 아마란스의 "메탄올 추출물" 의 분말을 형성한다.
몇몇 실시예들은 건조된 아마란스의 분말화된 추출물을 제조하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 분말화된 물질을 얻기 위하여 아마란스의 건조된 잎들 및 줄기를 분말화하는 것을 포함한다. 그 다음, 상기 분말화된 물질은 메탄올로 추출되어 상청액을 얻는다. 그리고나서 상기 상청액은 여과되어 여과액을 얻는다. 그 다음, 상기 여과액을 농축하여 농축된 메탄올 여과물을 얻는다. 그리고나서 상기 농축된 메탄올 여과액을 건조하여 건조된 아마란스의 분말화된 추출물을 얻는다.
다른 실시예(도 4 참조)에 따르면, 아마란스의 신선한 잎들 및 줄기가 세척되고 건조 및 분말화된다. 상기 분말은 물을 사용하여 환류 컨덴서를 가지는 여과기에서 약 1시간 동안 추출되어 잔여물 및 상청액을 얻는다.
상기 잔여물 및 상청액은 여과천을 통과하여 상기 여과기 바닥으로부터 상청액을 흘려보내 없앰으로써 분리된다. 상기 결과의 상청액은 농축된다. 결과의 추출물은 교반식 박막 증발기(ATFE) 에서 85oC 의 온도에서 농축되어 농축된 추출물을 형성한다. 이후에 상기 농축된 추출물은 이후에 상기 농축된 추출물은 진공하에서 500 mm 이상의 수은에서 건조되어 건조된 아마란스의 "물 추출물" 의 분말을 형성한다.
몇몇 실시예들은 건조된 아마란스의 분말화된 추출물의 제조방법을 제공한다. 상기 방법은 분말화된 물질을 얻기 위하여 아마란스의 건조된 잎들 및 줄기를 분말화하는 것을 포함한다. 그리고나서, 상기 분말화된 물질은 물로 추출되어 상청액 및 잔여물을 얻는다. 그다음, 상기 상청액은 농축되어 농축된 물 추출물을 얻는다. 상기 농축된 물 추출물은 건조되어 건조된 아마란스의 분말화된 추출물을 얻는다.
또 다른 실시예에서(도 5 참조), 상기 아마란스의 신선한 잎들 및 줄기는 세척 및 파쇄되어 슬러리를 형성한다. 상기 슬러리는 2시간 동안 펙티나아제(1%)로 처리된다. 그리고 나서 상기 효소는 상기 슬러리를 90℃에서 10분 동안 가열함으로써 비활성화된다. 펙티나아제 처리된 아마란스 슬러리는 환류 컨덴서를 가지는 추출기에서 물을 이용하여 약 1시간 동안 추출되어 잔여물 및 상청액을 얻는다. 상기 잔여물 및 상청액은 여과천을 통과하여 상기 여과기 바닥으로부터 상기 상청액을 흘려보내 없앰으로써 분리된다. 결과의 상청액은 교반식 박막 증발기(ATFE) 에서 85oC 의 온도에서 농축되어 농축된 추출물을 형성한다. 이후에 상기 농축된 추출물은 이후에 상기 농축된 추출물은 진공하에서 500 mm 이상의 수은에서 건조되어 아마란스의 펙티나아제 처리된 "물 추출물" 의 분말을 형성한다.
아마란스 추출물을 제조하는 방법의 몇몇 실시예에서, 상기 방법은 슬러리를 얻기 위해 신선한 잎들 및 줄기를 파쇄하는 것을 포함한다. 그리고나서 상기 스럴리를 펙티나아제로 처리하여 펙티나아제 처리된 물질을 얻는다. 그리고나서 상기 펙티나아제 처리된 물질을 가열하여 펙티나아제-비활성화된 물질을 얻는다. 그 다음, 상기 펙티나아제-비활성화된 물질을 물로 추출하여 상청액 및 잔여물을 얻는다. 그리고나서 상기 상청액을 농축하여 농축된 상청액을 얻는다. 그리고 상기 농축된 상청액을 건조하여 신선한 아마란스의 분말화된 추출물을 얻는다.
그러나 또다른 실시예에서, (도 6 참조), 상기 아마란스의 신선한 잎들 및 줄기는 세척되고 되어 슬러리를 형성한다. 상기 슬러리는 펙티나아제(1%)로 2시간 동안 처리된다. 그리고나서 상기 효소는 슬러리를 90℃에서 10분동안 가열함으로써 비활성화된다. 상기 펙티나아제 처리된 아마란스 슬러리는 환류 컨덴서를 가지는 추출기에서 물을 이용하여 약 1시간 동안 추출되어 잔여물 및 상청액을 얻는다.
상기 잔여물 및 상청액은 여과천을 통과하여 추출기 바닥으로부터 상기 상청액을 흘려보내 없앰으로써 분리된다. 결과의 상청액은 교반식 박막 증발기(ATFE) 에서 85oC 의 온도에서 농축되어 농축된 추출물을 형성한다. 상기 농축된 물 추출물을 10oC 에서 48 시간 동안 유지하고 옥살산 또는 옥살산염으로 결정화시킨다. 상기 상청액을 옮겨 붓고 다시 상기 상청액은 10oC 에서 또다시 24시간 동안 유지하여 남아있는 옥살산 또는 옥살산염들을 결정화시킨다. 상기 상청액을 옮겨붓고 여과하고 진공하에서 500 mm 이상의 수은에서 건조하여 아마란스의 옥살산 또는 옥살산염 자유 추출물을 얻는다.
몇몇 실시예에서 아마란스 추출물의 제조방법이 제공된다. 상기 방법은 아마란스의 신선한 잎들 및 줄기를 파쇄하여 슬러리를 얻고, 그리고고나서 상기 슬러리를 펙티나아제로 처리하여 펙티나아제 처리된 물질을 얻고, 상기 펙티나아제 처리된 물질을 가열함으로써 펙티나아제-비활성화된 물질을 얻는다. 그다음 상기 펙티나아제-비활성화된 물질은 물로 추출되어 상청액 및 잔여물을 얻는다. 상기 상청액은 농축되어 농축된 물 추출물을 얻는다. 농축된 물 추출물은 10℃ 에서 48시간 동안 냉각되고 여과되어 옥살산 또는 옥살산염 결정 및 2차 상청액을 얻는다. 2차 상청액은 10℃에서 24시간 동안 냉각되어 3차 상청액 및 2차 옥살산 또는 옥살산염 결정을 얻는다. 그리고 나서 3차 상청액이 여과되어 여과액을 얻는다. 그리고 나서 여과액은 농축되어 농축된 여과액을 얻는다. 그리고 농축된 여과액은 건조되어 아마란스의 분말화된 추출물을 얻는다. 몇몇 실시예들에서, 분말화된 추출물은 0.1% 미만의 옥살산을 가진다. 또다른 실시예(도 7 참조)에 따르면 강화된 질산염 함량을 가지는 아마란스 추출물이 제공된다. 아마란스의 옥살산 또는 옥살산염 자유 추출물의 건조된 분말은 펙티나아제로 처리되고 옥살산의 제거 이후에 수득되며 속슬레 추출기에서 6시간 동안 헥산으로 더 추출된다. 그리고나서 상기 헥산 추출물을 교반식 박막 증발기(ATFE)에서 박막 여과 및 농축한다. 상기 농축된 헥산 추출물은 펙티아나제로 처리 및 옥살산의 제거 이후에 진공하에서 건조되어 강화된 질산염 함량을 가지는 신선한 아마란스의 핵산 추출물의 분말을 얻는다.
몇몇 실시예들은 강화된 질산염 함량을 가지는 아마란스 추출물의 제조방법을 제공한다. 상기 방법은 슬러리를 얻기 위해 아마란스의 신선한 잎들 및 줄기를 파쇄하는 것을 포함한다. 상기 슬러리는 펙티나아제로 처리되어 펙티나아제 처리된 물질을 얻는다. 그다음 상기 펙티아나제 처리된 물질은 펙티나아제를 가열되어 펙티나아제를 비활성화시키고 펙티나아제-비활성화된 물질을 얻는다. 그다음, 상기 펙티나아제-비활성화된 물질은 물로 추출되어 상청액 및 잔여물을 얻는다. 그다음, 상청액은 농축되어 농축된 물 추출물을 얻는다. 농축된 물 추출물은 10℃에서 48시간 동안 냉각되고 나서 여과되어 옥살산 또는 옥살산염의 결정들 및 2차 상청액을 얻는다. 2차 상청액은 10℃에서 24시간 동안 냉각되어 3차 상청액 및 2차 옥살산 또는 옥살산염 결정들을 얻는다. 3차 상청액은 여과되어 여과액을 얻는다. 상기 여과액은 농축되어 농축된 여과액을 얻는다. 상기 농축된 여과액은 건조되어 분말화화된 추출물을 얻는다. 다음 분말화된 추출물은 헥산으로 처리되어 혼합물을 얻는다. 그리고나서 상기 혼합물은 여과되어 여과액을 얻는다. 그리고 나서 상기 여과액은 농축되어 농축된 헥산 추출물을 얻는다. 그리고 나서 상기 농축된 헥산 추출물은 건조되어 분말화된 헥산 추출물을 얻는다.
또 다른 실시예(도. 8 참조), 펙티나아제 처리 및 옥살산염 제거 이후 수득된 아마란스의 옥살산 또는 옥살산염 자유 추출물의 건조된 분말은 헥산 대신에 클로로포름과 차가운 추출에 의해 추가로 추출된다. 교반식 박막 증발기(ATFE)에서 상기 클로로포름 추출물을 여과 및 농축시킨다. 그리고 나서 펙티나아제로 처리 및 옥살산의 제거 이후에 신선한 아마란스의 클로로포름 추출물의 분말을 얻는다.
몇몇 실시예들은 아마란스 추출울을 제조하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 슬러리를 얻기 위해 아마란스의 신선한 잎들 및 줄기를 파쇄하는 것을 포함한다. 슬러리는 펙티나아제로 처리되어 펙티나아제 처리된 물질을 얻는다. 그리고나서 상기 펙티나아제 처리된 물질은 가열되어 펙티나아제-비활성화된 물질을 얻는다. 그리고 나서 상기 펙티나아제-비활성화된 물질은 물로 추출되어 상청액 및 잔여물을 얻는다. 그리고 나서 상기 상청액은 농축되어 농축된 물 추출물을 얻는다. 그리고 나서 상기 농축된 물 추출물은 10℃에서 48시간 동안 냉각된 다음 여과되어 옥살산 또는 옥살산염의 2차 상청액을 얻는다. 그리고 나서 2차 상청액은 10℃에서 24시간 동안 냉각되어 3차 상청액 및 2차 옥살산 또는 옥살산염 결정을 얻는다. 그리고 나서 3차 상청액은 여과되어 여과액을 얻는다. 그리고나서 상기 여과액은 농축되어 농축된 여과액을 얻는다. 그리고 나서 농축된 여과액은 건조되어 분말화된 추출물을 얻는다. 그리고 나서 분말화된 추출물은 클로로포름으로 처리되어 혼합물을 얻는다. 상기 혼합물은 여과되어 여과액을 얻는다. 상기 여과액은 농축되어 농축된 클로로포름 추출물을 얻는다. 농축된 클로로포름 추출물은 건조되어 분말화된 클로로포름 추출물을 얻는다.
또다른 실시예에 따르면 (도.9 참조), 펙티나아제로 처리 및 옥살산의 제거 이후에 얻은 아마란스의 옥살산 또는 옥살산염 자유 추출물의 건조된 분말은 헥산/클로로포름 대신에 에틸렌 디클로라이드(EDC)로 속슬레 추출기에서 6시간 동안 더 추출되었다. 상기 클로로포름 추출물은 교반식 박막 증발기(ATFE)에서 여과 및 농축되었다. 그리고 나서 펙티나아제로 처리 및 옥살산의 제거 이후에 신선한 아마란스의 클로로포름 추출물의 분말을 얻기 위해 진공하에서 건조되었다.
몇몇 실시예는 아마란스 추출물을 제조하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 아마란스의 신선한 잎들 및 줄기를 파쇄하여 슬러리를 얻는 것을 포함한다. 슬러리는 펙티나아제로 처리되어 펙티나아제 처리된 물질을 얻는다. 상기 펙티나아제 처리된 물질은 가열되어 펙티나아제-비활성화된 물질을 얻는다. 상기 펙티나아제-비활성화된 물질은 물로 추출되어 상청액 및 잔여물을 얻는다. 상청액은 농축되어 농축된 물 추출물을 얻는다. 농축된 물 추출물은 10℃에서 48시간 동안 냉각되고 그다음 여과되어 옥살산 또는 옥살산염의 결정 및 2차 상청액을 얻는다. 2차 상청액은 10℃에서 24시간 동안 냉각되어 3차 상청액 및 2차 옥살산 또는 옥살산염의 결정 세트를 얻는다. 3차 상청액은 여과되어 여과액을 얻는다. 상기 여과액은 농축되어 농축된 여과액을 얻는다. 상기 농축된 여과액은 건조되어 분말화된 추출물을 얻는다. 상기 분말화된 추출물은 에틸렌 디클로라이드로 건조되어 혼합물을 얻는다. 혼합물은 여과되어 2차 여과액을 얻는다. 2차 여과액은 농축되어 농축된 에틸렌 디클로라이드 추출물을 얻는다. 농축된 에틸렌 디클로라이드 추출물은 건조되어 분말화된 에틸렌 디클로라이드 추출물을 얻는다.
또다른 실시예에서(도. 11 참조), 펙티나아제로 처리 및 옥살산의 제거 이후에 얻은 아마란스의 옥살산 또는 옥살산염 자유 추출물의 건조된 분말은 속슬레 추출기에서 6시간 동안 헥산으로 더 추출된다. 그리고 나서 상기 헥산 추출물은 교반식 박말 증발기(ATFE)에서 여과 및 농축한다. 상기 농축된 헥산 추출물은 진공하에서 건조되어 헥산 추출물 분말을 얻는다. 메탄올에서 용해되고 미리 준비된 암라 추출물이 추가되고 기계식 교반기를 이용하여 100rpm 에서 1시간동안 교반되었다. 진공하에서 증발 및 건조하여 분말을 형성하였다. 따라서 암라와 함께 펙티나아제로 처리 및 옥살산의 제거 이후의 신선한 아마란스의 헥산 추출물이 수득되었다.
여기서 사용된 암라 추출물(도. 10 참조)은 다음의 방법에 따라서 제조될 수 있다.
암라의 열매들을 걸쭉하게 만들고 그 펄프를 메탄올을 이용하여 65o 에서 속슬레 추출기에서 5시간 동안 추출한다. 결과의 메탄올 추출물은 교반식 박막 증발기(ATFE)에서 60oC에서 여과 및 농축되어 농축된 추출물을 형성한다. 상기 농축된 추출물을 진공하에서 500 mm 이상의 수은에서 건조하고 암라의 메탄올 추출물의 분말을 형성한다.
몇몇 실시예들은 아마란스의 추출물을 제조하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 슬러리를 얻기 위해 아마란스의 신선한 잎들과 줄기를 파쇄하는 것을 포함한다. 그리고나서 슬러리를 펙티나아제로 처리하여 펙티나아제 처리된 물질을 얻는다. 펙티나아제 처리된 물질은 가열되어 펙티나아제 비활성화된 물질을 얻는다. 펙티나아제-비활성화된 물질은 물로 추출되어 상청액 및 잔여물을 얻는다. 상청액은 농축되어 농축된 물 추출물을 얻는다. 상기 농축된 물 추출물은 10℃에서 48시간 동안 냉각된 후 여과되어 옥살산 또는 옥살산염의 결정 및 2차 상청액을 얻는다. 2차 상청액은 10℃에서 24시간 동안 냉각되어 3차 상청액 및 2차 옥살산 또는 옥살산염 결정들을 얻는다. 3차 상청액은 여과되어 여과액을 얻는다. 상기 여과액은 농축되어 농축된 여과액을 얻는다. 농축된 여과액은 건조되어 분말화된 추출물을 얻는다. 분말화된 추출액은 헥산으로 처리되어 혼합물을 얻는다. 혼합물은 여과되어 2차 여과액을 얻는다. 2차 여과액은 농축되어 농축된 헥산 추출물을 얻는다. 농축된 헥산 추출물은 건조되어 분말화된 헥산 추출물을 얻는다. 분말화된 헥산 추출물은 메탄올에 용해되어 아마란스의 헥산 추출물 용액을 얻는다. 암라의 메탄올 추출물 분말이 아마란스의 헥산 추출물 용액에 첨가되어 2차 혼합물을 얻는다. 2차 혼합물은 증발되어 증발물(evaporate)을 얻는다. 상기 증발물은 건조되어 아마란스 및 암라 추출물의 분말을 얻는다. 암라 추출물의 분말화된 메탄올 추출물이 신선한 암라(Emblica officinalis) 열매를 으깨어 걸쭉하게 만들어 펄프를 얻는 것을 포함하는 공정에 의해 제조된다. 상기 펄프는 메탄올로 추출되어 여과액을 얻는다. 상기 여과액은 농축되어 암라의 농축된 메탄올 추출물을 얻는다. 상기 농축된 암라의 메탄올 추출물은 건조되고 암라의 분말화된 메탄올 추출물을 얻는다.
몇몇 실시예에서, 암라 추출물/ 울금 추출물/ 포도씨 추출물/녹차 추출물/ 석류 추출물/코코아 추출물/ 코코넛 뿌리 추출물/ 로즈마리 추출물/ 민트 잎 추출물/ 스타 아니스 /스위트 바질 추출물/시나몬 추출물/콜로브 추출물/생강 추출물/커민씨 추출물/흑후추 추출물/ 호로파 추출물이 아마란스 추출물을 강화시키기 위하여 낮은 총 옥살산 또는 옥살산염 함량을 가지는 펙티나아제 처리된 아마란스의 신선한 잎들에 첨가된다. 상기 조합 추출물들은 포유동물들에 혈액내 산화질소의 양을 증가시키기 위하여 투여될 수 있다.
몇몇 실시예에서(도. 13 참조), 아마란스의 신선한 잎들은 세척되고 스크류 익스펠러에서 파쇄된다. 스크류 익스펠러의 트레이에서 얻어진 초기의 쥬스는 27℃ 의 실온하에서 저수조에서 수집된다. 초기의 쥬스는 원심분리되어 여과액을 얻고 잔여물은 제거된다. 여과액은 회전원판 타입 정화기(RPM- 18000)에서 정화되어 최종 여과액 및 잔여물을 얻는다. 잔여물은 제거되고 최종 여과액이 수집된다(아마란스 잎의 정화된 액체쥬스)
수행된 몇몇 시험/ 실험들 및 결과들의 상세가 하기에서 실시예들의 방식으로 설명된다.
실시예 1
메탄올로 아마란스 신선한 잎 추출물 제조
신선한 아마란스를 수집하였다(100 Kg). 신선한 아마란스의 잎들 및 줄기는 세척되고 파쇄되었다. 파쇄된 물질들을 속슬레 추출기에 채우고 메탄올(300 L)로 추출하였다. 추출은 약 65o C에서 5시간 동안 수행되었다. 추출 완료 후, 상청액이 여과되고 교반식 박막 증발기(ATFE)에서 60oC 온도에서 농축되어 농축된 메탄올 추출물을 형성하였다. 농축된 메탄올 추출물은 진공하에서 500 mm 이상의 수은에서 건조하여 신선한 아마란스의 메탄올 추출물 분말을 얻었다.(수율 2Kg). 도 1의 추출물 제조 참조. 신선한 아마란스의 메탄올 추출물에서의 질산염 함량은 이온 크로마토그래피에 의해 1.5%인 것으로 확인되었다.
실시예 2
물로 아마란스 신선한 잎 추출물의 제조
신선한 아마란스를 수집하였다(100 Kg). 신선한 아마란스의 잎들 및 줄기는 세척되고 파쇄되었다. 아마란스의 파쇄된 물질의 양의 10배 물이 첨가되어 혼합물을 형성하였다. 환류 컨덴서를 가지는 추출기를 사용하여 추출이 수행되었다. 추출기의 바닥은 폴리프로필렌(100 마이크론) 여과천으로 맞췄다. 상기 혼합물은 1시간 동안 환류되어 1차 잔여물 및 상청액을 얻었다. 상기 잔여물 및 상청액은 원심펌프를 이용하여 상기 상청액을 폴리프로필렌 여과천을 통과하여 추출기 바닥으로부터 흘려보내 없앰으로써 분리되었다. 1차 추출 이후, 1차 잔여물은 10배의 양의 물로 더 추출되었고 2차 잔여물 및 상청액을 얻었다. 2차 잔여물은 10배의 물로 추가로 추출되었고 3차 잔여물 및 상청액을 얻었다. 상청액 모두는 모아져서 85oC 온도에서 교반식 박막 증발기(ATFE)에서 농축되어 농축된 물 추출물을 형성하였다. 농축된 물 추출물은 진공하에서 500 mm 이상의 수은에서 건조되어 신선한 아마란스 물 추출물의 분말을 얻었다.(수율 35%) 도 2의 추출물 제조 참조. 신선한 아마란스의 물 추출물 내의 질산염 함량은 이온 크로마토그래피에 의해 1.6%로 확인되었다.
실시예 3
메탄올로 아마란스 건조된 잎 추출물의 제조
신선한 아마란스를 수집한다. (100 Kg). 신선한 아마란스의 잎과 줄기는 세척 및 건조되었다. 건조된 잎과 줄기는 분말화되었다. 분말화된 아마란스는 속슬레 장치에 채워지고 메탄올(500 L)로 추출되었다. 상기 추출은 약 65o C의 온도에서 5시간 동안 수행되었다. 추출의 완료 후에, 상청액은 여과되고 교반식 박막 증발기 (ATFE)에서 600C 온도에서 농축되어 농축된 메탄올 추출물을 형성하였다. 농축된 메탄올 추출물은 진공하에서 500 mm 이상의 수은에서 건조되어 건조된 아마란스의 메탄올 추출물의 분말을 얻었다. 100 kg 의 신선한 아마란스로 출발한때 24 Kg 의 건조한 아마란스의 메탄올 추출물의 분말이 수득되었다. 도 3의 추출물 제조 참조. 건조된 아마란스의 메탄올 추출물 내의 질산염 함량은 이온크로마토그래피에 의해 1.65%로 확인되었다.
실시예 4
물로 아마란스 건조 잎 추출물의 제조
신선한 아마란스를 수집하였다.(100 Kg). 신선한 아마란스의 잎과 줄기는 세척 및 건조되었다. 건조된 아마란스는 분말화되었다. 건조 아마란스의 분말의 10배의 물이 아마란스 분말에 첨가되어 혼합물을 형성하였다. 환류 컨덴서를 가지는 추출기를 이용하여 추출이 수행되었다. 추출기의 바닥은 폴리프로필렌(100 마이크론) 여과천으로 맞춰졌다. 상기 혼합물은 1시간동안 환류되어 1차 잔여물 및 상청액을 얻었다. 상기 잔여물 및 상청액은 원심펌프를 이용하여 상기 상청액을 폴리프로필렌 여과천을 통과하여 추출기 바닥으로부터 흘려보내 없앰으로써 분리되었다.
1차 추출 이후에, 1차 잔여물은 10배의 물로 추가로 추출되었고 2차 잔여물 및 상청액을 얻었다. 2차 잔여물은 10배의 물로 추가로 추출되어 3차 잔여물 및 상청액을 얻었다. 상청액 모두는 모아지고 교반식 박막 증발기(ATFE)에서 850C 의 온도에서 농축되어 농축된 물 추출물을 형성하였다. 농축된 물 추출물은 진공하에서 500 mm 이상의 수은에서 건조되어 건조된 아마란스의 물 추출물의 분말을 얻었다 (수율 25%). 도 4 의 추출물 제조 참조. 건조된 아마란스의 물 추출물 내의 질산염 함량은 이온 크로마토그래피에 의해 1.7% 로 확인되었다.
실시예 5
펙티나아제 처리에 의한 아마란스 추출물의 향상된 수율
신선한 아마란스를 수집하였다(100 Kg). 신선한 아마란스의 잎과 줄기는 세척되고 파쇄되어 슬러리를 만들었다. 상기 슬러리는 펙티나아제(1%)로 2시간 동안 처리되었다. 상기 효소는 슬러리를 90℃에서 10분동안 가열함으로써 비활성화되었다. 상기 효소 처리 이후, 펙티나아제 처리된 신선한 잎들은 물로 추출되었다. 상기 추출은k환류 컨덴서를 가지는 추출기를 이용하여 수행되었다. 추출기 바닥은 폴리프로필렌 (100 마이크론) 여과천으로 맞춰졌다. 혼합물은 1시간 동안 환류되어 1차 잔여물 및 상청액을 얻었다. 상기 잔여물 및 상청액은 원심펌프를 이용하여 상기 상청액을 폴리프로필렌 여과천을 통과하여 추출기 바닥으로부터 흘려보내 없앰으로써 분리되었다. 1차 추출 이후에, 1차 잔여물은 10배의 물로 추가로 추출되었고 2차 잔여물 및 상청액을 얻었다. 2차 잔여물은 10배의 물로 추가로 추출되어 3차 잔여물 및 상청액을 얻었다. 상청액 모두는 모아지고 교반식 박막 증발기(ATFE)에서 850C 의 온도에서 농축되어 농축된 물 추출물을 형성하였다. 농축된 물 추출물은 진공하에서 500 mm 이상의 수은에서 건조되어 신선한 아마란스의 물 추출물의 분말을 얻었다 (수율 3.5Kg). 도 5 의 추출물 제조 참조. 상기 추출물 내의 질산염 함량은 이온 크로마토그래피에 의해 2 % 로 확인되었다.
실시예 6
옥살산 또는 옥살산염 자유 아마란스 추출물
신선한 아마란스를 수집하였다(100 Kg). 신선한 아마란스의 잎과 줄기는 ㅅ세척되고 파쇄되어 슬러리를 만들었다. 상기 슬러리는 펙티나아제 (1%)로 2시간 동안 처리되었다. 상기 효소는 슬러리를 90℃ 에서 10분 동안 가열함으로써 비활성화되었다. 상기 효소 처리 이후에, 펙티나아제 처리된 신선한 잎들은 물로 추출되었다. 추출은 환류 컨덴서를 가지는 추출기를 이용하여 물로 수행되었다. 추출기 바닥은 폴리프로필렌 (100 마이크론) 여과천으로 맞춰졌다. 혼합물은 1시간 동안 환류되어 1차 잔여물 및 상청액을 얻었다. 혼합물은 1시간 동안 환류되어 1차 잔여물 및 상청액을 얻었다. 상기 잔여물 및 상청액은 원심펌프를 이용하여 상기 상청액을 폴리프로필렌 여과천을 통과하여 추출기 바닥으로부터 흘려보내 없앰으로써 분리되었다. 1차 추출 이후에, 1차 잔여물은 10배의 물로 추가로 추출되었고 2차 잔여물 및 상청액을 얻었다. 2차 잔여물은 10배의 물로 추가로 추출되어 3차 잔여물 및 상청액을 얻었다. 상청액 모두는 모아지고 교반식 박막 증발기(ATFE)에서 850C 의 온도에서 농축되어 농축된 물 추출물을 형성하였다. 농축된 물 추출물은 10oC 에서 48시간 동안 유지되어 옥살산 또는 옥살산염을 결정화하였다. 상청액은 따라부어 제거되고 다시 10oC 에서 24 시간 동안 유지되어 남아있는 옥살산 또는 옥살산염을 결정화하였다. 이 용액으로부터 상기 상청액은 옮겨부어지고 여과 및 증발되어 건조되어 진공하에서 옥살산 또는 옥살산염 자유 아마란스 추출물(2.2 Kg)을 얻었다. 도 6의 추출물 제조 참조. 추출물의 질산염 함량은 이온 크로마토그래피에 의해 5% 로 결정되었다.
실시예 7
헥산으로 추출에 의한 아마란스 추출물에서 질산염의 강화
신선한 아마란스를 수집하였다(100 Kg). 신선한 아마란스의 잎과 줄기는 세척 및 파쇄되어 슬러리를 만들었다. 슬러리는 펙티나아제 (1%) 로 2시간 동안 처리되었다. 효소는 90℃에서 10분 동안 슬러리를 가열함으로써 비활성화되었다. 상기 추출은 물로 환류 컨덴서를 가지는 추출기를 이용하여 수행되었다. 추출기 바닥은 폴리프로필렌 (100 마이크론) 여과천으로 맞춰졌다. 혼합물은 1시간 동안 환류되어 1차 잔여물 및 상청액을 얻었다. 혼합물은 1시간 동안 환류되어 1차 잔여물 및 상청액을 얻었다. 상기 잔여물 및 상청액은 원심펌프를 이용하여 상기 상청액을 폴리프로필렌 여과천을 통과하여 추출기 바닥으로부터 흘려보내 없앰으로써 분리되었다. 1차 추출 이후에, 1차 잔여물은 10배의 물로 추가로 추출되었고 2차 잔여물 및 상청액을 얻었다. 2차 잔여물은 10배의 물로 추가로 추출되어 3차 잔여물 및 상청액을 얻었다. 상청액 모두는 모아지고 교반식 박막 증발기(ATFE)에서 850C 의 온도에서 농축되어 농축된 물 추출물을 형성하였다. 농축된 물 추출물은 10oC 에서 48시간 동안 유지되어 옥살산 또는 옥살산염을 결정화하였다. 상청액은 따라부어 제거되고 다시 10oC 에서 24 시간 동안 유지되어 남아있는 옥살산 또는 옥살산염을 결정화하였다. 이 용액으로부터 상기 상청액은 옮겨부어지고 여과 및 증발되어 건조되어 진공하에서 옥살산 또는 옥살산염 자유 아마란스 추출물(2.2 Kg)을 얻었다. 이러한 옥살산 또는 옥살산염 자유 아마란스 추출물은 속슬레 추출기에서 헥산으로 6시간 동안 추가로 추출되었다. 상기 추출물은 진공하에서 여과되고 증발되어 건조되어 질산염 강화된 아마란스 추출물(1.6 Kg)을 얻었다. 상기 추출물의 질산염 함량은 이온 크로마토그래피에 의해 18% 로 확인되었다. 도 7의 추출물 제조 참조.
실시예 8
클로로포름으로 추출에 의한 아마란스 추출물에서의 질산염 강화
신선한 아마란스를 수집하였다(100 Kg). 신선한 아마란스의 잎과 줄기는 세척 및 파쇄되어 슬러리를 만들었다. 슬러리는 펙티나아제 (1%) 로 2시간 동안 처리되었다. 효소는 90℃에서 10분 동안 슬러리를 가열함으로써 비활성화되었다. 상기 추출은 물로 환류 컨덴서를 가지는 추출기를 이용하여 수행되었다. 추출기 바닥은 폴리프로필렌 (100 마이크론) 여과천으로 맞춰졌다. 혼합물은 1시간 동안 환류되어 1차 잔여물 및 상청액을 얻었다. 혼합물은 1시간 동안 환류되어 1차 잔여물 및 상청액을 얻었다. 상기 잔여물 및 상청액은 원심펌프를 이용하여 상기 상청액을 폴리프로필렌 여과천을 통과하여 추출기 바닥으로부터 흘려보내 없앰으로써 분리되었다. 1차 추출 이후에, 1차 잔여물은 10배의 물로 추가로 추출되었고 2차 잔여물 및 상청액을 얻었다. 2차 잔여물은 10배의 물로 추가로 추출되어 3차 잔여물 및 상청액을 얻었다. 상청액 모두는 모아지고 교반식 박막 증발기(ATFE)에서 850C 의 온도에서 농축되어 농축된 물 추출물을 형성하였다. 농축된 물 추출물은 10oC 에서 48시간 동안 유지되어 옥살산 또는 옥살산염을 결정화하였다. 상청액은 따라부어 제거되고 다시 10oC 에서 24 시간 동안 유지되어 남아있는 옥살산 또는 옥살산염을 결정화하였다. 이 용액으로부터 상기 상청액은 옮겨부어지고 여과 및 증발되어 건조되어 진공하에서 옥살산 또는 옥살산염 자유 아마란스 추출물(2.2 Kg)을 얻었다. 이러한 옥살산 또는 옥살산염 자유 아마란스 추출물은 속슬레 추출기에서 헥산으로 6시간 동안 추가로 추출되었다. 상기 추출물은 진공하에서 여과되고 증발되어 건조되어 질산염 강화된 아마란스 추출물(1.6 Kg)을 얻었다. 도 8의 추출물 제조 참조.상기 추출물의 질산염 함량은 이온 크로마토그래피에 의해 16% 로 확인되었다.
실시예 9
*에틸렌 디클로라이드(EDC)로의 추출에 의한 아마란스 추출물에서의 질산염의 강화
신선한 아마란스를 수집하였다(100 Kg). 신선한 아마란스의 잎과 줄기는 세척 및 파쇄되어 슬러리를 만들었다. 슬러리는 펙티나아제 (1%) 로 2시간 동안 처리되었다. 효소는 90℃에서 10분 동안 슬러리를 가열함으로써 비활성화되었다. 상기 추출은 물로 환류 컨덴서를 가지는 추출기를 이용하여 수행되었다. 추출기 바닥은 폴리프로필렌 (100 마이크론) 여과천으로 맞춰졌다. 혼합물은 1시간 동안 환류되어 1차 잔여물 및 상청액을 얻었다. 혼합물은 1시간 동안 환류되어 1차 잔여물 및 상청액을 얻었다. 상기 잔여물 및 상청액은 원심펌프를 이용하여 상기 상청액을 폴리프로필렌 여과천을 통과하여 추출기 바닥으로부터 흘려보내 없앰으로써 분리되었다. 1차 추출 이후에, 1차 잔여물은 10배의 물로 추가로 추출되었고 2차 잔여물 및 상청액을 얻었다. 2차 잔여물은 10배의 물로 추가로 추출되어 3차 잔여물 및 상청액을 얻었다. 상청액 모두는 모아지고 교반식 박막 증발기(ATFE)에서 850C 의 온도에서 농축되어 농축된 물 추출물을 형성하였다. 농축된 물 추출물은 10oC 에서 48시간 동안 유지되어 옥살산 또는 옥살산염을 결정화하였다. 상청액은 따라부어 제거되고 다시 10oC 에서 24 시간 동안 유지되어 남아있는 옥살산 또는 옥살산염을 결정화하였다. 이 용액으로부터 상기 상청액은 옮겨부어지고 여과 및 증발되어 건조되어 진공하에서 옥살산 또는 옥살산염 자유 아마란스 추출물(2.2 Kg)을 얻었다.
이러한 옥살산 또는 옥살산염 자유 아마란스 추출물은 속슬레 추출기에서 EDC로 8시간 동안 추가로 추출되었다. 상기 추출물은 진공하에서 여과되고 증발되어 건조되어 질산염 강화된 아마란스 추출물(1.6 Kg)을 얻었다. 도 9의 추출물 제조 참조.
상기 추출물의 질산염 함량은 이온 크로마토그래피에 의해 17% 로 확인되었다.
실시예 10
암라 추출물의 제조
신선한 암라 열매 10 Kg 을 으깨어 걸쭐하게 만들고 그 펄프는 속슬레 장치에서 65oC 에서 8 시간 동안 메탄올로 추출되었다. 추출 완료 후에, 상청액은 60oC 에서 여과 및 농축되어 암라의 농축된 메탄올 추출물을 형성하였다. 농축된 메탄올 추출물은 진공하에서 500 mm 이상의 수은에서 건조되어 신선한 암라 열매들의 메탄올 추출물을 얻었다(수율: 500 gm). 도 10의 추출물 제조 참조.
실시예 11
암라 추출물로 강화된 아마란스 추출물
1.5 Kg 의 신선한 아마란스 잎 추출물(실시예 7로부터)을 비이커에 넣고 메탄올(5 L)에 용해하였다. 150 gm 의 암라 추출물(실시예 10으로부터)을 이 용액에 첨가하고 기계식 교반기를 이용하여 100 rpm 에서 1시간 동안 교반하였다. 상기 수득된 혼합물은 진공하에서 증발되어 건조되어 혼합된 추출물을 얻었다. 도 11의 추출물 제조 참조. 이러한 혼합된 추출물의 질산염 함량은 17% 였다.
실시예 12
아마란스 잎 분말의 제조방법
신선한 아마란스를 수집하였다(100 Kg). 신선한 아마란스의 잎은 세척되고 건조되었다. 건조된 잎들은 분말화되고 아마란스 잎 분말을 얻었다. 도 12의 추출물 제조 참조.
실시예 13
아마란스 잎으로부터 쥬스의 제조방법
신선한 아마란스 잎을 수집하였다(2 Kg). 신선한 아마란스의 잎을 세척하였다. 세척된 잎들은 스크류 익스펠러에서 파쇄되었다. 스크류 익스펠러의 트레이상에서 얻어진 초기의 쥬스는 27℃ 의 실온하에서 저수조에서 수집된다. 초기의 쥬스는 원심분리되어 여과액을 얻고 잔여물은 제거된다. 여과액은 회전원판 타입 정화기(RPM- 18000)에서 정화되어 최종 여과액 및 잔여물을 얻는다. 잔여물은 제거되고 최종 여과액이 2Kg 아마란스 잎으로부터 750 ml 쥬스 수율로 수집되었다(아마란스 잎의 정화된 액체쥬스) 도 13의 추출물 제조 참조
실시예 14
여러가지 다른 종류의 아마란스를 이용하여 아마란스 신선한 잎을의 메탄올 추출물의 제조
Amaranthus tricolor 의 신선한 잎과 줄기를 수집하였다(100Kg). Amaranthus tricolor 의 잎들과 줄기는 세척되고 파쇄되었다. 파쇄된 물질들은 속슬레 추출기에 채워지고 메탄올(300 L)로 추출되었다. 추출은 약 65oC 에서 5시간 동안 수행되었다. 추출의 완료 후에, 상청액은 교반식 박막 증발기(ATFE)에서 60oC의 온도에서 여과되고 농축되어 농축된 메탄올 추출물을 형성하였다. 농출된 메탄올 추출물은 500nm 수은 이상의 진공하에서 건조되고 신선한 Amaranthus tricolor (생산물 1) 의 메탄올 추출물의 분말을 얻었다(수율 2.1Kg).
HPLC 에 의한 신선한 Amaranthus tricolour 의 메탄올 추출물에서의 질산염 함량은 1.48% 로 확인되었다.
서로 다른 종류의 아마란스의 메탄올 추출물이 상기 언급한 바와 동일한 절차에 따라서 제조되었다.
추출에 사용된 서로 다른 종류의 Amaranthus는 Amaranthus caudatus, Amaranthus cruentus, Amaranthus blitum 및 Amaranthus viridis 이다. 서로 다른 종들의 메탄올 추출 후의 수율
1. 신선한 Amaranthus caudatus의 메탄올 추출물 분말(생산물 II) (수율 1.95Kg).
HPLC에 의한 신선한 Amaranthus caudatus 의 메탄올 추출물 내의 질산염 함량은 1.55% 인 것으로 확인되었다.
2. 신선한 Amaranthus cruentus 의 메탄올 추출물 분말 (생산물 III) (Yield 2 Kg).
HPLC에 의한 신선한 Amaranthus cruentus 의 메탄올 추출물 내의 질산염 함량은 1.53% 인 것으로 확인되었다.
3. 신선한 Amaranthus blitum 의 메탄올 추출물의 분말(생산물 IV) (수율 2.05Kg).
HPLC에 의한 신선한 Amaranthus blitum 메탄올 추출물 내의 질산염 함량은 1.5% 로 확인되었다.
4. 신선한 Amaranthus viridis 의 메탄올 추출물의 분말 (Product V) (수율 2.15Kg).
HPLC 에 의한 신선한 Amaranthus viridus 의 메탄올 추출물 내의 질산염 함량은 1.49%로 확인되었다.
실시예 15
헥산으로 추출에 의한 아마란스 (서로 다른 종류) 추출물에서 질산염의 강화
Amaranthus tricolor의 신선한 잎들과 줄기를 수집하였다 (100 Kg). 신선한 Amaranthus tricolor의 잎들과 줄기는 세척되고 파쇄되어 슬러리를 만들었다. 슬러리는 펙티나아제 (1%) 로 2시간 동안 처리되었다. 효소는 90℃에서 10분 동안 슬러리를 가열함으로써 비활성화되었다. 상기 추출은 물로 환류 컨덴서를 가지는 추출기를 이용하여 수행되었다. 추출기 바닥은 폴리프로필렌 (100 마이크론) 여과천으로 맞춰졌다. 혼합물은 1시간 동안 환류되어 1차 잔여물 및 상청액을 얻었다. 혼합물은 1시간 동안 환류되어 1차 잔여물 및 상청액을 얻었다. 상기 잔여물 및 상청액은 원심펌프를 이용하여 상기 상청액을 폴리프로필렌 여과천을 통과하여 추출기 바닥으로부터 흘려보내 없앰으로써 분리되었다. 1차 추출 이후에, 1차 잔여물은 10배의 물로 추가로 추출되었고 2차 잔여물 및 상청액을 얻었다. 2차 잔여물은 10배의 물로 추가로 추출되어 3차 잔여물 및 상청액을 얻었다. 상청액 모두는 모아지고 교반식 박막 증발기(ATFE)에서 850C 의 온도에서 농축되어 농축된 물 추출물을 형성하였다. 농축된 물 추출물은 10oC 에서 48시간 동안 유지되어 옥살산 또는 옥살산염을 결정화하였다. 상청액은 따라부어 제거되고 다시 10oC 에서 24 시간 동안 유지되어 남아있는 옥살산 또는 옥살산염을 결정화하였다. 이 용액으로부터 상기 상청액은 옮겨부어지고 여과 및 증발되어 건조되어 진공하에서 옥살산 또는 옥살산염 없는 Amaranthus tricolor 추출물(2.2 Kg)을 얻었다.
이러한 옥살산 또는 올살산염 없는 Amaranthus tricolor 추출물은 속슬레 추출기에서 6시간 동안 헥산으로 추가로 추출되었다. 상기 추출물은 진공하에서 여과 및 증발되어 건조되고 질산염 강화된 Amaranthus tricolor 추출물을 얻었다(생산물 I) (1.63 Kg).
상기 추출물의 질산염 함량은 HPLC 에 의해 17.7% 로 확인되었다.
서로다른 종류의 Amaranthus 의 질산염 강화된 추출물은 상기 언급된 것과 동일한 절차에 따라서 제조되었다.
상기 추출에 사용된 서로 다른 종류의 Amaranthus 는 Amaranthus caudatus, Amaranthus cruentus, Amaranthus blitum 및 Amaranthus viridis 이다. 서로 다른 종들의 추출 이후 수율은
1. 신선한 Amaranthus caudatus 의 질산염 강화된 추출물의 분말(생산물 II) (수율 1.62Kg)
신선한 Amaranthus caudatus 의 질산염 강화된 추출물 내의 질산염 함량은 HPLC 에 의해 17.9% 로 확인되었다.
2. 신선한 Amaranthus cruentus의 질산염 강화된 추출물의 분말 (생산물 III) (수율 1.6 Kg)
HPLC에 의한 신선한 Amaranthus cruentus의 질산염 강화된 추출물 내의 질산염 함량은 18% 로 확인되었다.
3. 신선한 Amaranthus blitum의 질산염 강화된 추출물의 분말 (생산물 IV) (수율 1.58Kg)
HPLC 에 의한 신선한 Amaranthus blitum 의 질산염 강화된 추출물의 질산염 함량은 18.3% 로 확인되었다.
4. 신선한 Amaranthus viridis 의 질산염 강화된 추출물의 분말(생산물 V) (수율 1.61Kg)
HPLC 에 의한 신선한 Amaranthus viridus 의 질산염 강화된 추출물의 질산염 함량은 18.1% 인 것으로 확인되었다.
실시예 16
이온 크로마토그래피에 의한 아마란스 내 질산염 및 아질산염 함량의 결정
샘플의 50 마이크로리터 표본이 300 마이크로리터 유리튜브 내로 피펫되었다(Sci-Vi, Chromacol, Welwyn, UK). 아세토니트릴 (50 마이크로리터)이 첨가되고, 오토샘플러 리미티드-볼륨 인서트 스프링(autosampler limited-volume insert spring )을 가지는 상기 튜브를 4-ml WISP 바이알 내로 집어넣고 뚜껑을 덮고, 혼합 및 2000 g 에서 2 분 동안 원심분리하였다. 상청액은 분석을 위해 주입되었다.
882 Compact IC 플러스 크로마토그래피 (Metrohm, USA) 는 WISP 오토샘플러 (Waters, Watford, UK)에 맞춰졌다. 상기 컬럼은 Metrosep A Supp 5 - 150/4.0 이온-교환 컬럼, 150 mm x 4 mm (Metrohm)이고, 용리액(eluent)은 1.7 mM 중탄산 나트륨 (NaHCO3), 1.8 mM 탄산나트륨 (Na2CO3)이며, 1.5 ml/분 에서 펌프되었다. 탐지는 아연 램프가 갖춰진 441 디텍터(Waters)를 이용하여 전도성 (DX100) 및 214 nm 에서의 흡광도에 의한다. 데이터는 840 데이터 시스템 (Waters)을 이용하여 요청 및 진행되었다.
실시예 17
HPLC 방법에 의한 질산염 및 아질산염의 결정.
기준 플라스크에 대하여 81.53 mg 질산 칼륨 (99% 순도) 을 무게를 달고 물로 표시까지 채워 질산염 (NO3) 에 대한 기준이 준비되었다. 100 ml 용액으로부터 1 ml 가 50 ml 기준 플라스크 내로 피펫되었고 물로 표시까지 채웠다.
100 ml 기준 플라스크에 대하여 92.49 mg 아질산 칼륨 (96% pure)을 무게를 달고 물로 표시까지 채워 아질산 (NO2)에 대한 기준이 준비되었다. 100 ml 용액으로부터 1 ml 가 50 ml 기준 플라스크 내로 피펫되었고 물로 표시까지 채웠다. 다시 50 ml 용액으로부터 1 ml 가 50 ml 기준 플라스크 내로 피펫되었고 다시 물로 표시까지 채웠다.
첨가된 1ml 기준 아질산염 및 1ml 이동 상 A (1.3 g 의 테트라 부틸 수산화 암모늄 용액(10%aqu)을 1000ml 기준 플라스크에 대하여 계량하였다. 표시까지 물로 채웠다. 그리고나서 Con: H2SO4 로 pH 를 2.50 으로 맞췄다), 200μ 그리스 A (50.00mg 술파닐산 및 1.5 ml 아세트산을 계량하고 3 ml 정제수가 첨가되고 용해되었다) 그리고 2 분 후 200 μ 그리스 B (계량된 4.00mg 1-나프틸아민 및 4.0 ml 아세트산이 첨가되고 용해되었다)를 플라스틱 튜브에 첨가하였다. 주입 전 0.45μm 막 필터를 통과하여 여과하였다.
샘플(아마란스 추출물) 20-25 mg 의 추출물 분말을 25 ml 기준 플라스크에 대하여 정밀하게 무게를 달고 탈염수로 채워서 준비하였다. 0.45 마이크론 막 필터를 통과하여 여과되고 2 부분으로 분할되었다. 한 부분은 질산염을 위하여 사용되고 다른 부분은 아질산염 결정을 위하여 사용되었다.
NO3 는 탈이온수, 아세토니트릴, 및 메탄올 내의 테트라 부틸 수산화 암모늄을 이동 상으로 사용하여 BETASIL C-18 컬럼 (250 x 4.6mm) 상에서 HPLC 에 의해 및 222 nm에서 광 다이오드 배열 검출에 의해 분석되었다. NO2 는 동일한 조건들을 사용하여 520 nm 에서 분석되었다.
아질산염 % = 샘플 내 아질산염 피크 영역 X Std 양 X Std 순도
기준 내 아질산염 피크의 영역 X 샘플의무게
질산염 % = 샘플 내 질산염 피크의 영역 X Std 의 양 X Std의 순도
기준 내 질산염의 영역 X 샘플의 무게
실시예 18
산화 질소(NO)의 결정.
혈장 내 총 NO 함량 혈장 내 총 질산염(NO3) 및 아질산염(NO2)의 합으로 해석될 수 있다. (Journal of Medical sciences (2010):3(3): 153-159, Plasma Endothelin -1, Homocysteine, and Oxide Levels in a Multiethnic Hypertensive Cochot from the United Arab Emirates.)
NO 수준은 NO 의 두개의 주요 대사산물 인 아질산염 및 질산염의 합으로서 기록되었다.
실시예 19
총 옥살상 함량의 결정
옥살산은 C18 컬럼 (250x 4.6 mm, Gemini 5μm, USA.) 상에서 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC- DAD)에 의해 평가되었다. 이동성 상은 5mM H2SO4 이었고 1 ml/분의 용리제 유량으로 이소크레이팅(isocrating) 조건 하에서 사용되었다. 옥살산은 210 nm 에서 발견되었다.
기준은 5 mg 의 기준 옥살산(95% 순도)을 정량하여 준비되고 6mM H2SO4 로 50 ml까지 채웠다. 샘플은 50 mg 의 아마란스의 건조 추출물을 정량하여 준비되었고 6mM H2SO4 로 50 ml 까지 채워졌다. 샘플 및 기준 모두는 HPLC 컬럼 내부로의 주입 전에 0.2 μm 막 필터를 통과하여 분리되어 여과되었다. 주입 부피는 20μl 였다. 옥살산은 210 nm 에서 발견되었다. 기준과 샘플의 영역을 비교함으로써, 샘플 내 존재하는 옥살산의 퍼센티지가 수량화되었다.
옥살산 % = 샘플의 영역 X 기준의 양 x 기준의 순도
샘플의 양 x 기준의 영역
실시예 20
칼륨 함량의 결정
칼륨은 원자흡수 분광학 (AAS)에 의해 결정되었다. 칼륨 기준 (KCl)의 100 ppm 용액이 제조되었다. 다른 농도의 7개의 다른 칼륨의 기준들이 100 ppm 이상의 용액의 간단한 희석에 의해 제조되었다. 상기 샘플 용액 및 기준이 AAS 기계에서 766.5nm 에서 측정되었고 상기 샘플 용액들 내의 칼륨 함량의 결정을 위하여 검정곡선(calibration curve )을 생성하였다.
실시예 21
급속 용해 태블릿의 제조
급속 용해 태블릿은 Fast-Melt (119.2 gm)를 아마란스 질산염 강화된 (18% nitrate) 추출물 (80 gm)과 혼합함으로써 만들어졌다 (실시예 7에 따라).
마그네슘 스테아레이트 (0.8 gm)가 태블릿 펀칭(punching) 이전에 상기 혼합물에 첨가되었다. 200 mg 무게가 나가는 태블릿들은 자동 태블릿 펀치 기계상에서 8 mm 다이(die)를 이용하여 펀치되었고 5 Kg 경도를 얻었다. 각 태블릿의 최종 조성은 119.2 mg F-Melt, 80 mg 추출물 (거의. 14.4mg 질산염) 및 0.8 mg 의 마그네슘 스테아레이트였다. 태블릿의 분해 시간은 거의 30 초였다.
실시예 22
급속 용해되는 태블릿의 제조
급속 용해되는 태블릿 Fast-Melt (745 gm) 를 실시예 7에 따라 제조된아마란스 질산염 강화된 (18% 질산염) 추출물 (500 gm) 과 혼합함으로써 만들어졌다.
마그네슘 스테아레이트(5 gm)가 태블릿 펀칭(punching) 이전에 상기 혼합물에 첨가되었다. 1250 mg 무게가 나가는 태블릿들은 자동 태블릿 펀치 기계상에서 12 mm 다이(die)를 이용하여 펀치되었고 5 Kg 경도를 얻었다. 각 태블릿의 최종 조성은 745 mg F-Melt, 500 mg 추출물 (거의. 90mg 질산염) 및 5 mg 의 마그네슘 스테아레이트였다. 태블릿의 분해 시간은 거의 30초였다.
유사하게 급속 용해 태블릿이 상기 추출물을 하기와 치환에 의해 만들어졌다.
1. 신선한 아마란스 잎의 메탄올 추출물 (1.5% 질산염) (급속 용해 태블릿의 최종 조성은 750 mg F-Melt, 500 mg 추출물 (거의 7.5 mg 질산염) 및 5 mg 의 마그네슘 스테아레이트를 포함한다)
2. 신선한 아마란스 잎의 물 추출물 (1.6% 질산염) (급속 용해 태블릿의 최종 조성은 750 mg F-Melt, 500 mg 추출물 (거의 8 mg 질산염) 및 5 mg 의 마그네슘 스테아레이트를 포함한다)
3. 건조된 아마란스 잎의 메탄올 추출물 (1.65% 질산염) (급속 용해 태블릿의 최종 조성은 750 mg F-Melt, 500 mg 추출물 (거의 8.25 mg 질산염) 및 5 mg 의 마그네슘 스테아레이트를 포함한다)
4. 건조된 아마란스 잎의 물 추출물 (1.7% 질산염) (급속 용해 태블릿의 최종 조성은 750 mg F-Melt, 500 mg 추출물 (거의 8.5 mg 질산염) 및 5 mg 의 마그네슘 스테아레이트를 포함한다)
5. 신선한 아마란스 잎의 펙티나아제 처리된 물 추출물 (2% 질산염) (급속 용해 태블릿의 최종 조성은 750 mg F-Melt, 500 mg 추출물 (거의 10 mg 질산염) 및 5 mg 의 마그네슘 스테아레이트를 포함한다)
6. 강화된 질산염을 가지는 Amaranthus blitum 추출물(18.3% 질산염) ( 급속 용해 태블릿의 최종 조성은 750 mg F-Melt, 500 mg 추출물 (거의 91.5mg 질산염) 및 5 mg 의 마그네슘 스테아레이트를 포함한다)
7. 강화된 질산염을 가지는 Amaranthus viridus 추출물(18.1% 질산염) ( 급속 용해 태블릿의 최종 조성은 750 mg F-Melt, 500 mg 추출물 (거의 90.5mg 질산염) 및 5 mg 의 마그네슘 스테아레이트를 포함한다)
실시예 23
츄잉껌의 제조
츄잉껌은 아마란스 질산염 강화된 추출물 (하나의 츄잉껌에 대해 80 mg)을 원료 (하나의 츄잉껌에 대해 920 mg)에 첨가함으로써 제조되었다. 원료는 약 38 중량 % 폴리비닐 아세테이트, 약 10 중량%의 천연고무, 약 11중량%의 부분 수소화 대두유, 약 12 중량%의 폴리이소부틸렌, 약 13.92 중량%의 디칼슘 포스페이트, 약 3중량% 의 트리아세틴, 약 7중량% 의 모노-디-글리세리드들, 약 5중량%의 액상 글루코오스 및 약 0.08 중량%의 BHT (butylated hydroxyl toluene)으로 구성된다.
상기 츄잉껌 성분들 (액상 글루코오스 및 BHT 제외)은강하게 수평으로 위치한 Z-블레이드들을 가지는 믹서에서 혼합되었고, 상기 성분들을 균일한 검 매스로 처리하였다. 상기 믹서는 거의 50-60℃의 온도에서 가열되었다. 상기 혼합 공정은 상기 껌 베이스를 3분동안 혼합 및 녹이는 것으로 시작된다.
액상 글루토오스는 그리고나서 첨가되어 4분동안 혼합되었다. 그다음, 아마란스 질산염 강화된 추출물은 상기 혼합물에 첨가되고 상기 혼합물은 6분 동안 더 혼합되었다. BHT 이 그리고 나서 첨가되고 5분 동안 더 혼합되었다.
상기 혼합이 완성된때, 껌 덩어리가 트레이 상에 놓여지고 1-2 cm 두께 시트로 말아졌다. 츄잉껌은 그다음 껌 덩어리의 가벼운 질감이 될 때까지 거의 15-20 분간 냉각되었다. 상기 형성된 및 냉각된 츄잉껌 중심들은 그리고나서 코팅 및 광택 공정 동안 회전하는 둥근 스테인레스 스틸 케틀에서 코팅 서스펜션으로 코팅 및 광택을 냈다.
상기 코팅 서스펜션은 잘리톨 (58.2%), 만니톨 (10.6%), 젤라틴 (1.2%), 이산화티탄 (0.9%), 아세설팜 K (0.1%) 및 물 (29%)로 구성된다. 상기 광택은 회전 케틀에서 행해졌고 카르나우바 왁스 (0.1%) 가 상기 코팅된 츄잉껌에 한 부분에 첨가되었다. 광택공정은 윤이나는 표면이 될때까지 일반적으로 10-20분 동안 실행되었다. 각 츄잉껌은 80 mg 추출물을 포함하였다.(거의. 14.4 mg 질산염).
실시예 24
쥐에서 산화질소 수준
200-250 gm 무게의 18 마리 알비노 쥐들(Sprague-Dawley (SD) strain) 이 본 연구에 채택되었다. 상기 쥐들은 1주일 동안 동물 집 조건(24±2℃ 온도, 65% 상대습도, 12 시간 빛/어둠 사이클)에 익숙해졌다. 상기 쥐들을 각 그룹 당 6 마리로 이루어진 세 개의 그룹으로 나누었다. 상기 쥐들은 하루밤동안 단식되었고 혈액이 기본 산화질소 수준을 결정하기 위하여 수집되었다.
상기 쥐들은 하기와 같이 처리되었다:
그룹 1: 비히클 대조군
그룹 2: 아마란스 건조 잎 분말 1gm/kg
그룹 3: 아마란스 질산염 강화된 추출물 (실시예 7 로부터) - 100 mg/kg
사료먹인 후 30분 후, 혈액은 모든 쥐들로부터 EDTA (ethylenediaminetetra acetic acid)코팅된 튜브에 수집되었고 혈장은 상기 튜브를 4000 rpm (분당 회전) 에서 10분 동안 원심분리함으로써 즉시 분리되었다. 혈장은 분석까지 -80℃ 이하에서 저장되었다.
혈장의 산화질소(NO) 함량은μmol/L 로서 보고되었다.
Figure 112017061927816-pat00001
실시예 25
생쥐에서 산화질소의 수준
25-30 gm 무게의 18 스위스 알비노 생쥐들이 본 연구를 위해 채택되었다. 상기 생쥐들은 1주일 동안 동물 집 조건(24±2℃ 온도, 65% 상대습도, 12 시간 빛/어둠 사이클)에 익숙해졌다. 상기 쥐들을 각 그룹 당 6 마리로 이루어진 세 개의 그룹으로 나누었다. 상기 쥐들은 하루밤동안 단식되었고 혈액이 기본 산화질소 수준을 결정하기 위하여 수집되었다.
상기 쥐들은 하기와 같이 처리되었다:
그룹 1: 비히클 대조군
그룹 2: 아마란스 건조 잎 분말 (실시예 12로부터) - 1gm/kg
그룹 3: 암라 추출물로 강화된 아마란스 추출물 (실시예 11로부터) - 200 mg/kg
사료먹인 후 30분 후, 혈액은 모든 쥐들로부터 EDTA (ethylenediaminetetra acetic acid)코팅된 튜브에 수집되었고 혈장은 상기 튜브를 4000 rpm (분당 회전) 에서 10분 동안 원심분리함으로써 즉시 분리되었다. 혈장은 분석까지 -80℃ 이하에서 저장되었다.
혈장의 산화질소(NO) 함량은μmol/L 로서 보고되었다.
Figure 112017061927816-pat00002
실시예 26
쥐에서의 경구 독성 연구
본 연구는 화학물의 테스트에 대한 OECD 가이드라인 (Organisation for economic co-operation and development)(No.-408)에 따라 수행되었다. 100 위스타 알비노 쥐 (50 수컷들/50 암컷들)들은 20 쥐들 (10 수컷들 및 10 암컷들)의 4개 그룹으로 각각 그리고 각 그룹에는 10 쥐들 (5 수컷들 및 5 암컷들)의 두개의 그룹(Satellite groups)으로 나뉜다. 상기 동물들은 복용 시작 전에 7일 동안 익숙해졌다. 20 쥐들의 세 그룹 각각 (10 수컷 및 10 암컷)에 아마란스 질산염 강화된 추출물 (실시예 8로부터)을 100 mg/kg 체중 (저 용량), 500 mg/kg b.wt (체중) (중간 용량) 및 1000 mg/kg 체중 (고 용량) 의 복용량 수준으로 주사기가 부착된 캐뉼라(cannula)의 도움으로 90일 동안 일주일 내내 각각 투여하였다. 유사하게, 20 쥐들 (10 수컷 및 10 암컷 쥐들)의 4번째 그룹은 90 일 동안 오직 옥수수유가(vehicle) 경구적으로 투여되었고 대조군으로 지정되었다.
10 쥐들 (5 수컷 및 5 암컷) 의 두개의 추가의 위성 그룹 각각 '위성 대조군' 및 '위성 고 용량'으로 유지 및 지정되었고 옥수수유(비히클) 및 아마란스 질산염 강화된 추출물 (1000 mg/kg)이 각각 90일 동안 투여되었다. 테스트 및 대조군 그룹 동물들의 최종 희생 이후에, 위성 그룹 동물들(위성 대조군 및 위성 고용량) 모두는 만일 있다면 가역성, 지속성, 또는 지연된 독성 효과를 체크하기 위하여 추가 28일 동안 관찰하에서 유지되었다. 동물들은 행동, 외관 및 독물학상의 신호 및 증상들에 대해 매일 관찰되었다. 자세한 혈액학상의 및 생화확적 평가를 위하여 최종 희생 이전에 모든 동물들로부터 혈액을 채집하였다. 오줌 샘플들 또한 실험 종료에서 모든 동물들로부터 채집되었다. 화합물 관련 효과들을 평가하는 데 사용된 기준은 하기를 포함한다; 외관, 행동, 질병률(morbidity), 사망수(mortality), 및 체중, 사료 섭취량, 혈액학적 및 생화학적 분석, 오줌 분석, 장기 중량, 해부 및 조직병리학.
저용량 (100 mg/kg 체중), 중간 용량(500 mg/kg 체중), 고 용량(1000 mg/kg 체중) and 위성(satellite) 고용량 (1000 mg/kg body weight) 그룹 동물들에서는 그들의 각각의 대조군 대응물들과 비교했을때 치료와 관련된 독성 신호 및 증상들이 관찰되지 않았다. 모든 테스트 및 대조군 그룹 동물들의 체중이 약하게 기록되었다. 모든 치료 그룹들 및 위성 그룹 동물들(LD, ID, HD & satellite HD)의 체중 증가는 그들의 대조군 대응물들과 비슷하였다. 저용량, 중간 용량, 고용량 및 위성 고용량의 동물들의 사료 소비는 대조군 그룹 및 위성 대조군 그룹 동물들과 맞먹었다. 대조군 그룹 동물들과 비교한때 저용량 (100 mg/kg 체중), 중간 용량 (500 mg/kg 체중), 고용량 (1000 mg/kg 체중) 및 위성 고용량 (1000 mg/kg 체중) 그룹의 동물들의 혈액학상의 파라미터들에서 변화가 없었다. 유사하게, 모든 치료 그룹들 즉, 저용량, 중간 용량 및 고용량의 동물의 생화학 파라미터들은 최종 희생에서의 대조군 그룹 동물들의 생화학 파라미터들과 비슷하였다. 위성 고용량 그룹들의 생화학 파라미터들 역시 그의 위성 대조군 대응물들과 비슷하였다. 테스트 그룹들의 생화학적 파라미터들 뿐만 아니라 혈액학상 파라미터들은 각각의 대조군 그룹들과 상당히 다르지 않았다.
상기 실험의 종료시 오줌 샘플들을 모든 동물들로부터 채집하였다. 대조군 그룹과 비교했을때 어떠한 복용량 그룹 동물들의 오줌 파라미터들에서는 중요한 변화들은 감지되지 않았다. 위성 그룹들의 동물들은 치료 이후 28일 후에 희생되었다. 어떠한 치료 그룹들 뿐만 아니라 위성 그룹들에서 상기 연구 동안 동물들은 죽지 않았다. 90일의 복용 기간의 완성 이후, 위성 그룹들 모두를 제외한 모든 그룹들(치료 및 대조군)은 희생되었고 총 병리학적 소견을 찾아 조사되었다. 모든 동물들(치료 및 대조군)의 장기는 어떠한 붙어있는 지방조직 및 주어진 그들 중량으로 손질되었다. 모든 치료 그룹들의 동물들의 장기 중량은 그들의 각각의 대조군 대응물들과 비슷했다. 저복용량 그룹, 중간복용량 그룹, 고복용량 그룹 및 위성 고복용량 그룹의 동물들에서 중요한 조직병리학적 변화들은 그들의 대조군 대응물들에 비교했을때 없었다.
본 연구에서, 복용량 수준 1000 mg/kg 체중으로 위스타 쥐에게 90일 동안, 경구의, 반복된 아마란스 질산염 강화된 추출물의 투여는 해당하는 동물 대조군 그룹들과 비교했을때 어떠한 식별할 수 있는 독성 효과들을 유도하지 않았다.
실시예 27
인간 대상들에서 산화질소 수준
18명의 건강한 인간 지원자들(35-55세)이 상기 연구를 위하여 채택되었다.
상기 대상자들은 연구 이전 일주일 표준식이(질산염/아질산염이 없는 식품)에 놓여졌다. 상기 대상자들은 3 그룹으로 나누고 각 그룹에는 6명의 대상자를 포함한다.대상자들은 하룻밤동안 단식되었고 혈액은 기준치 산화질소 수준을 결정하기 위해 채집되었다. 혈액 채집 이후, 대상자들은 다음과 같이 치료되었다:
그룹 1: 비히클 대조군
그룹 2: 아마란스 신선한 잎 - 100 gm
그룹 3: 아마란스 질산염 강화된 추출물(실시예 21에 따라 제조된 태블릿 당 14.4 mg 질산염 및 실시예 7에 따라 제조된 태블릿을 만드는데 사용된 추출물)을 포함하는 아마란스 급속 용해 태블릿
식사한 뒤 30분 후, 혈액은 모든 대상자들로부터 EDTA (ethylene di amine tetra acetic acid) 코팅된 튜브에 채집되었고 혈장은 4000 rpm 에서 10 분동안 상기 튜브를 원심분리함으로써 즉시 분리되었다. 상기 혈장은 산화 질소 함량에 대한 분석까지 -80℃ 이하에서 저장되었다. 상기 혈장의 산화질소 (NO) 함량은 μmol/L 로서 보고되었다.
Figure 112017061927816-pat00003
실시예 28
인간 대상들에서의 항-고혈압 활성
40 내지 60 세의 고혈압 전단계[SBP (최대혈압), 130 내지 140 mmHg 및 DBP (확장기 혈압), 85 내지 90 mmHg) 또는 고혈압 (SBP (최대혈압), 140 mmHg 또는 더 높음 및 DBP (확장기 혈압), 90 mmHg 또는 더 높음)] 를 가지는 10 대상들 (6 남성 및 4 여성)이 본 연구에 등록되었다. 배제 기준은 임산부 및 수유부, 이전 3개월 내에 미량원소 보충제를 섭취한 사람, 위 또는 이뇨제 치료를 받고있는 사람, 급성 신부전을 가진 환자 또는 최근 수술 또는 급성감염의 이력을 가지는 사람을 포함한다. 본 발명의 목적을 많이 아는 모든 대상들은 마음껏 질문을 할 수 있고, 조사관들 중 한명에 의해 증언된 피험자 동의서에 사인하였다.
Figure 112017061927816-pat00004
환자들은 60 급속 용해 구강 용해 태블릿(실시예 21 로부터)을 포함하는 병이 제공되고 매일 두번 하나의 태블릿을 30일 동안 12 시간 간격으로 섭취하도록 지시되었다. 식습관은 치료 동안 제한되지 않았다. 그러나 PG의 효과와 가능한 충돌을 피하기 위하여 비타민 보충제 및 기능성 식품의 소비는 상기 시도 동안 금지되었다. 각 대상들의 BP (혈압) 는 상기 시도의 시작, 15일 및 마지막에서 측정되었다. 그들의 BP (혈압) 디지털 BP 분석기를 이용하여 측정되고 및 두 측정값의 평균으로서 기록되었다. 측정값은 항상 동일 장소 및 휴식 15 분 후에 이루어졌다.
*실시예 29
생쥐에서 수영 지구력 테스트
수영 지구력 연구를 위하여, 실험에 앞서, 각 생쥐들은 가능성 시험을 위해 테스트되었다. 수영 그룹들의 모든 생쥐들은 수영을 할 수 있었다. 상기 생쥐들은 3 그룹으고 나뉘었고 각 그룹에는 6 동물으로 구성되었다.
하기 치료가 생쥐들의 각 그룹에 주어졌다:
그룹 1: 비히클 대조군
그룹 2: 아마란스 건조 잎 분말(실시예 12로부터)- 1gm/kg
그룹 3: 아마란스 질산염 강화된 추출물 (실시예 8로부터) - 100 mg/kg
치료는 4주 동안 주어졌다.
모든 생쥐들은 25℃로 유지된 19 인치 깊이의 물로 채워진 워터풀 (48x28x24 인치)에서 수영을 하도록 하였다. 수영 테스트 동안, 각 생쥐는 꼬리에 플라스틱 스트링을 가진 4개의 페이퍼 클립들로 고정되었다. 상기 페이퍼 클립 및 플라스틱 스트링은 약 1.81 그램의 무게이다. 이 무게를 견디면서, 모든 생쥐들이 매우 열심히 수영하도록 하였다. 모든 생쥐들이 탈진(팔다리의 이동을 멈투고 물에 뜬)할때까지 수영을 시켰다. 생쥐들이 탈진할때까지 최대 수영 시간은 수영 지구력 능력의 지표로 사용되었다. 상기 테스트는 시작에서 그리고나서 4주까지 매주 수행되었다. 혈액 역시 혈장의 산화질소 수준을 결정하기 위하여 시작 및 각 주 이후에 채집되었다.
Figure 112017061927816-pat00005
산화 질소 수준
Figure 112017061927816-pat00006
실시예 30
생쥐에서 달리기 지구력 테스트
달리기 지구력 테스트를 위하여, 각각의 생쥐들은 달리기 연구 이전에 3일간 Rota-Rod apparatus (treadmill) 상에서 달리기를 위해 훈련되었다. 훈련 동안, 동물 운동을 더욱 강하게 하고 적어도 1분 동안 달리게 만들기 위하여 Rota-rod 의 속력을 증가시켰다. 생쥐는 3 그룹으로 나누고 각 그룹당 6 동물들을 포함하였다.
다음의 치료들이 각 그룹의 생쥐에게 주어졌다:
그룹 1: 비히클 대조군
그룹 2: 아마란스 건조 잎 분말(실시예 12 로부터) - 1gm/kg
그룹 3: 아마란스 질산염 강화된 추출물(실시예 9 로부터) - 100 mg/kg
치료는 4주 동안 주어졌다.
The Rota-Rod 트레드밀은 5개 테스트 존을 가지고, 각 존은 상기 동물이 트레드밀에서 드롭오프(dropped off)된 때를 감지하는 포토빈(photo bean)을 가지고 컴퓨터와 연결되어 트레드밀 상의 달리기 시간을 자동으로 계산한다. Rota-rod 의 속력은 35 RPM (분당 회전)으로 맞췄다. 탈진(Rota-rod 로부터 떨어짐)까지 최대 시간 달리기는 달리기 지구력 능력의 지표로 사용되었다. 각 생쥐들에서의 탈진때까지 최대 달리기 시간이 기록되었다. 테스트는 시작에서 수행되었고 그리고 나서 4 주까지 매주 수행되었다.
Figure 112017061927816-pat00007
실시예 31
쥐들에서 성적 수행능력 연구
12 위스타 쥐(200-250 gm) 를 무작위로 2그룹으로 나누고 이는 각각 6마리를 포함한다. 쥐는 비히클/추추물로 30일간 테스트되었고 다양한 파라미터들이 평가되었다.
그룹 I (비히클만) 대조군으로서 역할함.
그룹 II 암라 추출물로 강화된 아마란스 추출물(실시예 11로부터) - 100 mg/Kg (p.o.) 매일
방향 행동 분석(Orientation behavior analysis)
방향 활성의 분석이 3개의 세그먼트에서 수행 및 분석되었다.
수컷 쥐의 방향행동은 다음의 점수 방법을 이용하여 결정되었다:
암컷을 향한 방향 - (1 모든 킁킁거리며 냄새맡기(sniffing) 및 2 모든 핥기(licking) )
자신을 향한 방향 - (1 비 성기애무 및 2 성기애무)
환경을 향한 방향 - (1 탐색, 2 양육 및 3 교배)
쥐들은 매일 그들의 방향 활성에 대하여 관찰되었다. 상기 치료의 0, 15, 30일 이후 누계의 점수가 기록되었다.
성적 행동 분석
수컷 쥐는 케이지 환경에 익숙해지게 하기 위해 관찰 유리 챔버에 놓았다.
성적으로 수용적인 암컷 쥐는 그리고나서 상기 케이지 내부의 옆문으로부터 조용히 테스트 케이지로 들어가도록 하였다.
행동 관찰들이 다음의 파라미터들을 고려하여 수행되었다.
교배(Mounting) 행동 - 다음의 파라미터들에 의해 결정 및 특징화되었다.
(A) 교배 빈도 - 30분 관찰 동안 평균 교배 수.
(B) 교배 지연 - 케이지에서 암컷의 도입으로부터 처음 마운트까지 지연시간(leg time)
삽입 행동 - 다음과 같이 평가되었다.
(A) 삽입 빈도 - 30분 관찰 동안 평균 삽입 수
(B) 삽입 지연(Intromission latency) - 삽입 잠재 (IL) 은 케이지 내에서 암컷의 도입 후 최초 삽입 동안의 시간으로 고려되었다.
음경 발기 지수
음경 발기 ( PE ) 은 관찰 기간 동안 쥐들이 그들의 발기한 음경을 핥기 위해 몸을 아래로 굽힌 때 결정되었다. 음경 발기 지표 (PI) 는 30-분 관찰 기간 동안 적어도 1회의 음경 발기를 나타내는 쥐들의 퍼센티지를 평균 음경 발기 수와 곱함으로써 결정되었다.
PI = 음경 발기를 나타내는 쥐들의 % X 평균 발기 수
표: 수컷 쥐들에서 방향 활성들에 대한 강화된 아마란스 추출물의 효과
Figure 112017061927816-pat00008
표: 수컷 쥐들에서 성적 수행능력 파라미터들에 대한 강화된 아마란스 추출물의 효과
Figure 112017061927816-pat00009
실시예 32
인간 대상들의 혈장 내 질산염 (NO3) 아질산염 (NO2) 및 산화 질소 (NO) 함량
32 건강한 사람 지원자들 (35-55 세)이 연구를 위해 채택되었다. 대상자들은 연구 전 1주일 표준 식이를 하였다. 대상자들은 8그룹으로 나뉘고 각 그룹은 4명으로 구성되었다. 대상자 등은 하룻밤 동안 단식하였고 기준의 NO3 및 NO2 수준들을 결정하기 위하여 혈액이 채집되었다. 기준의 혈액 채집 이후, 대상들은 다음과 같이 치료되었다:
그룹 1: 비히클 대조군
그룹 2: 아마란스 잎 신선 쥬스 -100 ml (100 mg 질산염 /100ml 쥬스) (실시예 No-13 에 따라 제조됨)
그룹 3: 아마란스 신선 잎들의 메탄올 추출물 (태블릿 당 7.5mg 질산염) 을 포함하는 아마란스 급속 용해 태블릿 (실시예 22에 따라 제조된 태블릿 및 상기 태블릿의 제조를 위해 사용된 추출물은 실시예 1에 따른 것이다)
그룹 4: 아마란스 건조 잎들의 메탄올 추출물(태블릿 당 8.25mg 질산염)을 포함하는 아마란스 급속 용해 태블릿 (실시예 22에 따라 제조된 태블릿 및 상기 태블릿의 제조를 위해 사용된 추출물은 실시예 3에 따른 것이다)
그룹 5: 아마란스 신선 잎들의 추출물을 포함하는 아마란스 급속 용해 태블릿(태블릿 당 8 mg 질산염) (실시예 22 에 따라 제조된 태블릿 및 상기 태블릿의 제조에 사용된 추출물은 실시예 2에 따른 것이다.)
그룹 6: 아마란스 건조된 잎들의 물 추출물을 포함하는 아마란스 급속 용해 태블릿(태블릿 당 8.5mg 질산염)(실시예 22 에 따라 제조된 태블릿 및 상기 태블릿의 제조에 사용된 추출물은 실시예 4에 따른 것이다.)
그룹 7: 아마란스 신선 잎들의 펙티나아제 처리된 물 추출물을 포함하는 아마란스 급속 용해 태블릿 (태블릿 당 10 mg 질산염) (실시예 22 에 따라 제조된 태블릿 및 상기 태블릿의 제조에 사용된 추출물은 실시예 5에 따른 것이다.)
그룹 8: 아마란스 질산염 강화된 추출물을 포함하는 아마란스 급속 용해 태블릿 (태블릿 당 90 mg 질산염) (실시예 22 에 따라 제조된 태블릿 및 상기 태블릿의 제조에 사용된 추출물은 실시예 7에 따른 것이다.) 모든 대상들은 상기 물/쥬스를 입으로 섭취하도록 하였다.(그룹 1-2) 아마란스 태블릿은 구강 내에서 유지되고 용해되도록 하였다(그룹 3-8).
태블릿/쥬스/비히클을 먹은지 1시간, 2시간, 3시간 후, 혈액은 모든 환자들로부터 EDTA 코팅된 튜브에 뽑아내었다. 상기 튜브를 5000 rpm 에서 15분 동안 원심분리 함으로써 혈장은 즉시 분리되었다. 상기 혈장 샘플들은 분석까지 섭씨 -80 도 이하에서 저장되었다. 그렇게 얻은 혈장은 아세토니트릴을 이용하여 단백질이 제거되었고 상청액은 HPLC 를 이용하여 질산염/아질산염 결정을 위해 사용되었다.
NO3 는 이동 상으로서 탈이온화된 물, 아세토니트릴 및 메탄올 내의 테트라 부틸 암모늄 히드록사이드를 이용하여 BETASIL C-18 칼럼 (250 x 4.6mm) 상에서 HPLC 및 222 nm 에서 광다이오드 어래이 탐지에 의해 분석되었다. NO2 는 520 nm 상기와 동일한 조건들을 이용하여 분석되었다. 혈장의 NO3 및NO2 수준은 μmol/L 로서 보고되었다.
표: 혈장 내 질산염 (NO3) 함량
Figure 112017061927816-pat00010
표: 혈장 내 아질산염 (NO2) 함량
Figure 112017061927816-pat00011
표: 혈장 내 총 산화 질소 (NO) 함량
Figure 112017061927816-pat00012
이와 같은 아마란스 신선한 쥬스 소비는 1 시간 후 NO3 함량을 약간 증가시켰다. 아마란스 신선한 잎들 및 건조된 잎들부터의 메탄올 추출물 역시 NO3 함량의 약간의 증가를 보였다. 아마란스 신선한 잎의 펙티나아제 처리된 물 추출물로 만들어진 태블릿은 다른 태블릿들의 소비보다 약간의 증가를 보였다. 그러나, 질산염으로 강화된 아마란스 추출물을 포함하는 급속 용해 태블릿의 소비 후, NO3 수준은 1시간 후 기준치의 6배로 증가했고 기준치로부터 증가는 3시간까지 유지되었다. 비히클을 투여한 후에는 NO3 수준의 중요한 변화가 없었다.
NO2 의 경우 또한, 질산염으로 강화된 아마란스 추출물을 포함하는 급속 용해 태블릿은 NO2 수준을 6 배 이상 증가시켰고 더 높은 수준들이 3시간 동안 유지되었다. 아마란스 신선 쥬스 1시간 후 그와 같이 약하게 NO2 함량을 증가시켰다. 아마란스 신선한 잎들 및 건조된 잎들로부터 메탄올 추출물은 또한 NO2 함량의 약간의 증가를 보였다. 여기서 역시 비히클은 대상들에서의 NO2 수준의 영향을 미치지 않았다.
최종 결론은 아마란스 급속 용해 태블릿에서 관찰된 NO3 및 NO2 증가의 증가된 수준은 아마란스 신선한 쥬스 및 신선한 건조잎들로부터 메탄올 추출물의 질산염 및 아질산염 수준과 비교했을때 더 많았다. "질산염의 강화된 추출물을 포함하는 아마란스 급속 용해 태블릿" 의 총 산화질소(NO) 함량의 증가는 기준치로부터 6배이고 3시간 동안 증가된 상태로 유지되었다. 총 NO 는 총 NO3 및 NO2 의 합으로부터 결정된다(즉. NO3 및 NO2 수준은 인체내 NO 수준의 측정으로 설명될 수 있다) 따라서 NO3 및 NO2 수준의 증가는 NO 수준의 증가로 설명될 수 있다. NO 수준은 NO 의 두가지 주요 대사산물인, 아질산염 및 질산염의 합으로서 기록되었다.
실시예 33
인간 대상자들의 타액 내 질산염 (NO3), 아질산염 (NO2) 및 산화질소 ( NO) 함량
32 건강한 사람 지원자들 (35-55 세)이 연구를 위해 채택되었다. 상기 대상자들은 연구 1주 전에 조절된 식이에 놓여졌다. 대상자들은 8개 그룹으로 나뉘고 각 그룹은 4면의 대상자를 포함한다. 대상자들은 하룻밤동안 단식되고 기준의 NO3 및 NO2 수준을 결정하기 위하여 타액이 채집되었다. 타액의 채집 후, 상기 대상자들은 다음고 같이 치료되었다.
그룹 1: 비히클 대조군
그룹 2: 아마란스 잎 신선 쥬스 -100 ml (100 mg 질산염 /100ml 쥬스) (실시예 No-13 에 따라 제조됨)
그룹 3: 아마란스 신선 잎들의 메탄올 추출물 (태블릿 당 7.5mg 질산염) 을 포함하는 아마란스 급속 용해 태블릿 (실시예 22에 따라 제조된 태블릿 및 상기 태블릿의 제조를 위해 사용된 추출물은 실시예 1에 따른 것이다)
그룹 4: 아마란스 건조 잎들의 메탄올 추출물(태블릿 당 8.25mg 질산염)을 포함하는 아마란스 급속 용해 태블릿 (실시예 22에 따라 제조된 태블릿 및 상기 태블릿의 제조를 위해 사용된 추출물은 실시예 3에 따른 것이다)
그룹 5: 아마란스 신선 잎들의 추출물을 포함하는 아마란스 급속 용해 태블릿(태블릿 당 8 mg 질산염) (실시예 22 에 따라 제조된 태블릿 및 상기 태블릿의 제조에 사용된 추출물은 실시예 2에 따른 것이다.)
그룹 6: 아마란스 건조된 잎들의 물 추출물을 포함하는 아마란스 급속 용해 태블릿(태블릿 당 8.5mg 질산염)(실시예 22 에 따라 제조된 태블릿 및 상기 태블릿의 제조에 사용된 추출물은 실시예 4에 따른 것이다.)
그룹 7: 아마란스 신선 잎들의 펙티나아제 처리된 물 추출물을 포함하는 아마란스 급속 용해 태블릿 (태블릿 당 10 mg 질산염) (실시예 22 에 따라 제조된 태블릿 및 상기 태블릿의 제조에 사용된 추출물은 실시예 5에 따른 것이다.)
그룹 8: 아마란스 질산염 강화된 추출물을 포함하는 아마란스 급속 용해 태블릿 (태블릿 당 90 mg 질산염) (실시예 22 에 따라 제조된 태블릿 및 상기 태블릿의 제조에 사용된 추출물은 실시예 7에 따른 것이다.) 모든 대상들은 상기 물/쥬스를 입으로 섭취하도록 하였다.(그룹 1-2) 아마란스 태블릿은 구강 내에서 유지되고 용해되도록 하였다(그룹 3-8). 먹은지 1시간, 2시간, 3시간 각 지점 이후, 모든 환자들로부터 타액은 5.0ml PTFE 튜브에 채집되었다. 이 타액은 NO3 및 NO2 함량의 분석까지 섭씨 -80 도 이하에서 저장되었다. 이렇게 얻은 타액은 아세토니트릴을 이용하여 단백질이 제거되었고 상청액은 HPLC 를 이용하여 NO3 및 NO2 결정을 위해 사용되었다. NO3 는 이동 상으로서 탈이온화된 물, 아세토니트릴 및 메탄올 내의 테트라 부틸 암모늄 히드록사이드를 이용하여 BETASIL C-18 칼럼 (250 x 4.6mm) 상에서 HPLC 및 222 nm 에서 광다이오드 어래이 탐지에 의해 분석되었다. NO2 는 520 nm 상기와 동일한 조건들을 이용하여 분석되었다. 질산염 및 아질산염 수준은 μmol/L 로서 보고되었다.
표: 타액 내 질산염 (NO3) 함량
Figure 112017061927816-pat00013
표: 타액 내 아질산염 (NO2) 함량
Figure 112017061927816-pat00014
표: 타액 내 총 산화 질소 (NO) 함량
Figure 112017061927816-pat00015
이와 같은 아마란스 신선한 쥬스 소비는 1 시간 후 NO3 함량을 약간 증가시켰다. 아마란스 신선한 잎들 및 건조된 잎들부터의 메탄올 추출물 역시 NO3 함량의 약간의 증가를 보였다. 아마란스 신선한 잎의 펙티나아제 처리된 물 추출물로 만들어진 태블릿은 다른 태블릿들의 소비보다 약간의 증가를 보였다. 그러나, 질산염으로 강화된 아마란스 추출물을 포함하는 급속 용해 태블릿의 소비 후, NO3 수준은 1시간 후 기준치의 6.9 배로 증가했고 기준치로부터 증가는 3시간까지 유지되었다. 비히클을 투여한 후에는 NO3 수준의 중요한 변화가 없었다.
NO2 의 경우 또한, 질산염으로 강화된 아마란스 추출물을 포함하는 급속 용해 태블릿은 NO2 수준을 9.2 배 이상 증가시켰고 NO2 의 증가는 3시간 동안 유지되었다. 아마란스 신선 쥬스 소비는 1시간 후 그와 같이 약하게 NO2 함량을 증가시켰다. 아마란스 신선한 잎들 및 건조된 잎들로부터 메탄올 추출물은 또한 NO2 함량의 약간의 증가를 보였다. 여기서 또한 비히클은 대상들에서의 NO2 수준의 영향을 미치지 않았다.
최종 결론은 NO3 및 NO2 수준 증가가 아마란스 급속 용해 태블릿에서 관찰되었고 아마란스 신선한 쥬스 및 신선한 건조잎들로부터 메탄올 추출물의 질산염 및 아질산염 수준과 비교했을 때 더 많았다. "질산염의 강화된 추출물을 포함하는 아마란스 급속 용해 태블릿"의 총 산화질소(NO) 함량의 증가는 기준치로부터 7.5배이고 3시간 동안 증가된 상태로 유지되었다. 총 NO 는 총 NO3 및 NO2 의 합으로부터 결정된다(즉. NO3 및 NO2 수준은 인체내 NO 수준의 측정으로 설명될 수 있다) 따라서 NO3 및 NO2 수준의 증가는 NO 수준의 증가로 설명될 수 있다. NO 수준은 NO 의 두가지 주요 대사산물인, 즉 아질산염 및 질산염의 합으로서 기록되었다.(Journal of Medical sciences (2010):3(3): 153-159, Plasma Endothelin -1, Homocysteine, and Oxide Levels in a Multiethnic Hypertensive Cohort from the United Arab Emirates.)
실시예 34
인간 대상자의 타액내 질산염 (NO3) 아질산염 (NO2) 및 산화질소(NO) 함량
18 건강한 사람 지원자들 (35-55 세)이 연구를 위해 채택되었다. 대상자들은 연구 전 1주일 조절 식이를 하였다. 대상자들은 3그룹으로 나뉘고 각 그룹은 6명으로 구성되었다. 대상자등은 하룻밤동안 단식하였고 기준의 NO3 및 NO2 수준들을 결정하기 위하여 타액이 채집되었다. 기준의 타액 채집 이후, 대상들은 다음과 같이 치료되었다:
그룹 1: 비히클 대조군(물)
그룹 2: 아마란스 잎 신선 쥬스 -100 ml (100 mg 질산염 /100ml 쥬스) (실시예 No-13 에 따라 제조됨)
그룹 3: 강화된 질산염 (실시예 7에 따라서 제조된 18% 질산염)을 가지는 아마란스 추출물은 물과 혼합되었다.(300 ml 물에 560 mg의 추출물)
모든 대상자들은 상기 물/쥬스를 입으로 섭취하도록 하였다.(그룹 1-2) 물과 혼합된 질산염으로 강화된 아마란스 추출물은 구강내에서 직접 소비되었다. (그룹 3).
먹은지 1시간, 2시간, 3시간 후, 타액은 모든 대상자들로부터 5.0ml PTFE 튜브에 채집되었다. 상기 타액은 NO3 및 NO2 함량의 분석까지 섭씨 -80 도 이하에서 저장되었다. 그렇게 얻은 타액은 아세토니트릴을 이용하여 단백질이 제거되었고 상청액은 HPLC 를 이용하여 NO3 및 NO2 결정을 위해 사용되었다. NO3 는 이동 상으로서 탈이온화된 물, 아세토니트릴 및 메탄올 내의 테트라 부틸 암모늄 히드록사이드를 이용하여 BETASIL C-18 칼럼 (250 x 4.6mm) 상에서 HPLC 및 222 nm 에서 광다이오드 어래이 탐지에 의해 분석되었다. NO2 는 520 nm 상기와 동일한 조건들을 이용하여 분석되었다. 타액의 질산염 및 아질산염 수준은 μmol/L 로서 보고되었다.
표: 타액 내 질산염 (NO3) 함량
Figure 112017061927816-pat00016
표: 타액 내 아질산염 (NO2) 함량
Figure 112017061927816-pat00017
표: 타액 내 총 산화 질소 (NO) 함량
Figure 112017061927816-pat00018
이와 같은 아마란스 신선한 쥬스 소비는 1 시간 후 NO3 함량을 약간 증가시켰다. 그러나 물과 혼합된 강화된 질산염을 가진 아마란스 추출물의 소비 후에, NO3 수준은 1시간 후 기준치보다 6.6 배 증가하였고 3시간 동안 증가된 상태로 유지되었다. 비히클을 투여한 후에는 NO3 수준의 중요한 변화가 없었다. NO2 의 경우 또한, 물과 혼합된 질산염으로 강화된 아마란스 추출물은 NO2 수준을 9.1 배 증가시켰고 증가된 상태로 3시간 동안 유지되었다.
최종 결론은 물과 혼합된 아마란스 강화된 추출물에 의해 관찰된 NO3 및 NO2 수준 증가는 아마란스 신선한 쥬스와 비교 했을때 더 많았다. "물과 혼합된 아마란스 강화된 추출물" 의 총 산화질소(NO) 함량의 증가는 기준치로부터 7.3배이고 3시간 동안 증가된 상태로 유지되었다.
실시예 35
강화된 질산염을 가지는 Amaranthus blitum 및 Amaranthus viridus 추출물의 투여 후 인간 대상자의 혈장 및 타액 내 질산염 (NO3), 아질산염 (NO2) 및 산화질소 (NO) 함량
9명의 건강한 사람 지원자들 (35-55 세)이 연구를 위해 채택되었다. 상기 대상자들은 연구 1주 전에 표준 식이에 놓여졌다. 대상자들은 3개 그룹으로 나뉘고 각 그룹은 3명의 대상자를 포함한다. 대상자들은 하룻밤동안 단식되고 기준의 NO3 및 NO2 수준을 결정하기 위하여 혈액 및 타액이 채집되었다. 기준의 혈액 및 타액의 채집 후, 상기 대상자들은 다음고 같이 치료되었다.
그룹 1: 비히클 대조군
그룹 2: 강화된 질산염을 가지는 Amaranthus blitum 추출물을 포함하는 아마란스 급속 용해 태블릿(태블릿 당 91.5 mg 질산염) (실시예 22에 따라 제조된 태블릿 및 상기 태블릿의 제조를 위해 사용된 추출물은 실시예 15에 따른 것이다)
그룹 3: 강화된 질산염을 가지는 Amaranthus viridus 추출물을 포함하는 아마란스 급속 용해 태블릿(태블릿 당 90.5 mg 질산염)(실시예 22에 따라 제조된 태블릿 및 상기 태블릿의 제조를 위해 사용된 추출물은 실시예 15에 따른 것이다)
모든 대상들은 상기 물을 입으로 섭취하도록 하였다.(그룹 1) 아마란스 태블릿은 구강 내에서 유지되고 용해되도록 하였다(그룹 2-3).
태블릿/비히클을 먹은지 1시간, 2시간, 3시간 후, 혈액은 모든 환자들로부터 EDTA 코팅된 튜브에 뽑아내었고, 타액은 5.0ml PTFE 튜브에 채집되었다. 혈장은 상기 튜브를 5000 rpm 에서 15분 동안 원심분리 함으로써 즉시 분리되었다. 상기 혈장 샘플들 및 타액은 분석까지 섭씨 -80 도 이하에서 저장되었다. 혈장 및 타액은 아세토니트릴을 이용하여 단백질이 제거되었고 상청액은 HPLC 를 이용하여 질산염/아질산염 결정을 위해 사용되었다. NO3 는 이동 상으로서 탈이온화된 물, 아세토니트릴 및 메탄올 내의 테트라 부틸 암모늄 히드록사이드를 이용하여 BETASIL C-18 칼럼 (250 x 4.6mm) 상에서 HPLC 및 222 nm 에서 광다이오드 어래이 탐지에 의해 분석되었다. NO2 는 520 nm 상기와 동일한 조건들을 이용하여 분석되었다. 혈장의 NO3 및 NO2 수준은 μmol/L 로서 보고되었다.
혈장 내 질산염 (NO 3 ), 아질산염 (NO 2 ) 및 산화질소(NO) 수준
표: 혈장 내 질산염 (NO3) 함량
Figure 112017061927816-pat00019
표: 혈장 내 아질산염 (NO2) 함량
Figure 112017061927816-pat00020
표: 혈장 내 총 산화질소 (NO) 함량
Figure 112017061927816-pat00021
강화된 질산염을 가지는 Amaranthus blitum 및 Amaranthus viridus 추출물을 포함하는 급속 용해 태블릿의 소비 이후, NO3 수준은 1시간 후 기준치의 6배로 증가했고 기준치로부터 증가는 3시간까지 유지되었다. 비히클을 투여한 후에는 NO3 수준의 중요한 변화가 없었다. NO2 의 경우 또한, 질산염으로 강화된 Amaranthus blitum 및 Amaranthus viridus 추출물을 포함하는 급속 용해 태블릿은 NO2 수준을 6 배 이상 증가시켰고 더 높은 수준들이 3시간 동안 유지되었다. 여기서 역시 비히클은 대상들에서의 NO2 수준의 영향을 미치지 않았다. "질산염이 강화된 Amaranthus blitum 및 Amaranthus viridus 추출물을 포함하는 아마란스 급속 용해 태블릿" 의 총 산화질소(NO) 함량의 증가는 기준치로부터 6배이고 3시간 동안 증가된 상태로 유지되었다. 총 NO 는 총 NO3 및 NO2 의 합으로부터 결정된다(즉. NO3 및 NO2 수준은 인체내 NO 수준의 측정으로 설명될 수 있다) 따라서 NO3 및 NO2 수준의 증가는 NO 수준의 증가로 설명될 수 있다.
타액 내 질산염 (NO 3 ), 아질산염 (NO 2 ) 및 산화질소 (NO) 수준
표: 타액 내 질산염 (NO3) 함량
Figure 112017061927816-pat00022
표: 타액 내 아질산염 (NO2) 함량
Figure 112017061927816-pat00023
표: 타액 내 총 산화질소 (NO) 함량
Figure 112017061927816-pat00024
질산염이 강화된 Amaranthus blitum 및 Amaranthus viridus 추출물을 포함하는 아마란스 급속 용해 태블릿의 소비 후, NO3 수준은 1시간 후 기준치의 6.9 배로 증가했고 NO3 에서의 증가는 3시간까지 유지되었다. 비히클을 투여한 후에는 NO3 수준의 중요한 변화가 없었다.
NO2 의 경우 또한, 질산염이 강화된 Amaranthus blitum 및 Amaranthus viridus 추출물을 포함하는 아마란스 급속 용해 태블릿은, NO2 수준을 9.2 배 이상 증가시켰고 NO2 에서의 증가는 3시간동안 유지되었다. 여기서 역시 비히클은 대상들에서의 NO2 수준의 영향을 미치지 않았다.
"질산염이 강화된 Amaranthus blitum 및 Amaranthus viridus 추출물을 포함하는 아마란스 급속 용해 태블릿" 의 총 NO 함량은 기준선의 7.5 배이고 이는 3시간 동안 증가된채 유지되었다. 총 NO 는 총 NO3 및 NO2 의 합으로부터 결정된다(즉. NO3 및 NO2 수준은 인체내 NO 수준의 측정으로 설명될 수 있다) 따라서 NO3 및 NO2 수준의 증가는 NO 수준의 증가로 설명될 수 있다.
상기 발명 하에서 바람직한 실시예들을 설명함으로써 본 발명의 신규한 특징들을 이해하기 쉽게 만들었고 그들을 기술분야에서 상기 설명을 이해하고 가시화하도록 하였다. 본 발명은 그 출원에서 상기 설명 및 예시된 실시예로서 나타난 상세에 한정되지 않는 것으로 이해되어야 할 것이다. 비록 발명이 그들의 특정 바람직한 실시예들을 참조하여 매우 상세하게 기재되었다 하더라도 상기 기재된 본 발명의 의도 및 범위로부터 분리되지 않고 다양한 변형들이 만들어질 수 있다.

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  15. 아마란스의 신선한 잎들과 줄기를 파쇄하여 슬러리를 얻는 단계,
    상기 슬러리를 펙티나아제로 처리하여 펙티나아제 처리된 재료를 얻는 단계,
    상기 펙티나아제 처리된 재료를 가열하여 펙티나아제- 비활성화된 재료를 얻는 단계,
    상기 펙티나아제-비활성화된 재료를 물로 추출하여 상청액 및 잔여물을 얻는 단계,
    상기 상청액을 교반식 박막증발기(ATFE)에서 85℃ 에서 농축하여 농축된 물 추출물을 얻는 단계,
    상기 농축된 물 추출물을 10℃ 에서 48시간 동안 냉각시키고 나서 옥살산 및 옥살산염 결정들 중 적어도 하나 이상 및 2차 상청액을 얻는 단계,
    상기 2차 상청액을 10℃ 에서 24시간 동안 냉각시켜 3차 상청액 및 2차 옥살산 및 옥살산염 결정들 중 적어도 하나 이상을 얻는 단계;
    상기 3차 상청액을 여과하여 여과액을 얻는 단계;
    상기 여과액을 농축하여 농축된 여과액을 얻는 단계;
    상기 농축된 여과액을 건조시켜 0.1% 미만의 옥살산 또는 옥살산염을 포함하는 분말화된 추출물을 얻는 단계,
    상기 분말화된 추출물을 6시간동안 속슬레 추출기에서 헥산으로 처리하여 혼합물을 얻는 단계, 및
    상기 혼합물을 여과 및 증발시켜 분말화된 아마란스의 헥산 추출물을 얻는 단계를 포함하는 아마란스 추출물의 제조 방법.
  16. 아마란스의 신선한 잎들 및 줄기를 파쇄하여 슬러리를 얻는 단계,
    상기 슬러리를 펙티나아제로 처리하여 펙티나아제 처리된 재료를 얻는 단계,
    상기 펙티나아제 처리된 재료를 가열하여 펙티나아제- 비활성화된 재료를 얻는 단계,
    상기 펙티나아제-비활성화된 재료를 물로 추출하여 상청액 및 잔여물을 얻는 단계,
    상기 상청액을 교반식 박막증발기(ATFE)에서 85℃ 에서 농축하여 농축된 물 추출물을 얻는 단계,
    상기 농축된 물 추출물을 10℃ 에서 48시간 동안 냉각시키고 나서 옥살산 및 옥살산염 결정들 중 적어도 하나 이상 및 2차 상청액을 얻는 단계,
    상기 2차 상청액을 10℃ 에서 24시간 동안 냉각시켜 3차 상청액 및 2차 옥살산 및 옥살산염 결정들 중 적어도 하나 이상을 얻는 단계,
    상기 3차 상청액을 여과하여 여과액을 얻는 단계,
    상기 여과액을 농축하여 농축된 여과액을 얻는 단계,
    상기 농축된 여과액을 건조시켜 0.1% 미만의 옥살산 또는 옥살산염을 포함하는 분말화된 추출물을 얻는 단계,
    상기 분말화된 추출물을 클로로포름으로 냉각추출에 의해 처리하여 혼합물을 얻는 단계, 및
    상기 혼합물을 여과 및 증발시켜 분말화된 아마란스의 클로로포름 추출물을 얻는 단계를 포함하는 아마란스 추출물의 제조 방법.
  17. 아마란스의 신선한 잎들 및 줄기를 파쇄하여 슬러리를 얻는 단계,
    상기 슬러리를 펙티나아제로 처리하여 펙티나아제 처리된 재료를 얻는 단계,
    상기 펙티나아제 처리된 재료를 가열하여 펙티나아제- 비활성화된 재료를 얻는 단계,
    상기 펙티나아제-비활성화된 재료를 물로 추출하여 상청액 및 잔여물을 얻는 단계,
    상기 상청액을 교반식 박막증발기(ATFE)에서 85℃ 에서 농축하여 농축된 물 추출물을 얻는 단계,
    상기 농축된 물 추출물을 10℃ 에서 48시간 동안 냉각시키고 나서 옥살산 및 옥살산염 결정들 중 적어도 하나 이상 및 2차 상청액을 얻는 단계,
    상기 2차 상청액을 10℃ 에서 24시간 동안 냉각시켜 3차 상청액 및 2차 옥살산 및 옥살산염 결정들 중 적어도 하나 이상을 얻는 단계;
    상기 3차 상청액을 여과하여 여과액을 얻는 단계;
    상기 여과액을 농축하여 농축된 여과액을 얻는 단계;
    상기 농축된 여과액을 건조시켜 0.1% 미만의 옥살산 또는 옥살산염을 포함하는 분말화된 추출물을 얻는 단계,
    상기 분말화된 추출물을 에틸렌 디클로라이드(ethylene dichloride)로 8시간동안 속슬레 추출기에서 처리하여 혼합물을 얻는 단계, 및
    상기 혼합물을 여과 및 증발시켜 분말화된 아마란스의 에틸렌 디클로라이드 추출물을 얻는 단계를 포함하는 아마란스 추출물의 제조 방법.
  18. 아마란스의 신선한 잎들 및 줄기를 파쇄하여 슬러리를 얻는 단계,
    상기 슬러리를 펙티나아제로 처리하여 펙티나아제 처리된 재료를 얻는 단계,
    상기 펙티나아제 처리된 재료를 가열하여 펙티나아제- 비활성화된 재료를 얻는 단계,
    상기 펙티나아제-비활성화된 재료를 물로 추출하여 상청액 및 잔여물을 얻는 단계,
    상기 상청액을 교반식 박막증발기(ATFE)에서 85℃ 에서 농축하여 농축된 물 추출물을 얻는 단계,
    상기 농축된 물 추출물을 10℃ 에서 48시간 동안 냉각시키고 나서 옥살산 및 옥살산염 결정들 중 적어도 하나 이상 및 2차 상청액을 얻는 단계,
    상기 2차 상청액을 10℃ 에서 24시간 동안 냉각시켜 3차 상청액 및 2차 옥살산 및 옥살산염 결정들 중 적어도 하나 이상을 얻는 단계;
    상기 3차 상청액을 여과하여 여과액을 얻는 단계;
    상기 여과액을 농축하여 농축된 여과액을 얻는 단계; 및
    상기 농축된 여과액을 건조시켜 0.1% 미만의 옥살산 또는 옥살산염을 포함하는 분말화된 추출물을 얻는 단계,
    상기 분말화된 추출물을 속슬레 추출기에서 6시간동안 헥산으로 처리하여 혼합물을 얻는 단계,
    상기 혼합물을 여과 및 증발시켜 분말화된 아마란스의 헥산 추출물을 얻는 단계,
    상기 분말화된 헥산 추출물을 메탄올 내에 용해시켜 질산염이 강화된 아마란스의 헥산 추출물 용액을 얻는 단계,
    암라의 메탄올 추출물 분말을 상기 아마란스의 헥산 추출물 용액에 첨가하여 2차 혼합물을 얻는 단계,
    상기 2차 혼합물을 증발시켜 농축물을 얻는 단계, 및
    상기 농축물을 건조시켜 아마란스 및 암라 추출물 분말을 얻는 단계를 포함하며,
    여기서 상기 분말화된 암라 추출물의 메탄올 추출물은
    신선한 암라 열매를 걸쭉하게 만들어서 펄프를 얻는 단계,
    상기 펄프를 65℃ 에서 8시간 동안 속슬레 추출기에서 메탄올로 추출하여 여과액을 얻는 단계,
    상기 여과액을 60℃ 에서 농축하여 농축된 암라의 메탄올 추출물을 얻는 단계,
    상기 농축된 암라의 메탄올 추출물을 진공하에서 500mm 이상의 수은에서 건조시켜 분말화된 암라의 메탄올 추출물을 얻는 단계를 포함하는 공정에 의해 제조되는 것을 특징으로 하는, 암라 추출물이 첨가된 아마란스 추출물의 제조방법.
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