KR101793537B1 - 견사단백질을 갖는 누에를 함유하는 알코올성 간염의 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents

견사단백질을 갖는 누에를 함유하는 알코올성 간염의 예방 또는 치료용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 견사단백질을 갖는 누에를 함유하는 조성물에 관한 것으로서, 상기 견사단백질을 갖는 누에가 포함된 조성물은 acetaldehyde 농도를 낮추며, 염증성 물질의 생성을 저해하면서 간손상 물질의 생성을 억제로 인한 간 보호 효과가 뛰어나 알코올성 간염의 예방 또는 치료용 조성물 또는 이를 개선하기 위한 건강기능식품으로서 용이하게 이용될 수 있다.

Description

견사단백질을 갖는 누에를 함유하는 알코올성 간염의 예방 또는 치료용 조성물 {Composition comprising silkworm having silk protein for preventing or treating alcoholic hepatitis}
본 발명은 견사단백질을 갖는 누에를 함유하는 알코올성 간염의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 보다 자세하게는 5령3일 이후의 4면잠 누에부터 숙잠기까지의 누에로부터 선택되는 생누에를 물에 넣어 익히거나 또는 증기의 열로 익힌 견사단백질을 갖는 누에를 함유하는 알코올성 간염의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
누에고치를 생산하는 양잠산업은 고조선시대부터 이어온 우리나라의 전통산업으로써 1970년대에는 연간 100만 상자 이상의 누에를 농가에서 사육하였으나, 경제발전과 고급 화학섬유의 영향으로 현재는 크게 위축된 상황이다. 이에, 현재의 양잠산업은 건조누에, 숫번데기, 동충하초 등 건강기능식품원료를 생산하는 산업으로 전환하였는데, 그 중 농가의 주 생산품목은 5령3일 건조누에이다. 5령3일 건조누에를 이용하는 이유는 4면잠의 경우 5령3일이 지나 5령 4일부터는 견사단백질이 누에의 몸속에서 급속히 증가하여 누에의 강도가 강해지며 비대해져 식용으로 사용하기에 매우 어려워지기 때문이다. 견사단백질은 견사선의 형태로 누에 몸속에 저장되어 있다가 누에가 숙잠(grown-up silkworm)이 되면 이 견사단백질을 뱉어내면서 실크의 원료인 누에고치를 짓게 된다.
이처럼 식용가능한 시기를 지난 숙잠은 실크의 생산을 위한 용도로서 사용되는 것 이외에는 특별하게 이용되지 못하고 있었으나, 본 발명자들이 대한민국 등록특허 제10-1388455호와 대한민국 등록특허 제10-1546446호에서 처음으로 이러한 견사단백질이 함유된 누에를 가압 또는 상압 조건하에서 80~125℃로 익혀 이를 피부개선용 화장료 조성물로서 개발한 바 있다. 그렇지만 아직까지도 누에와 관련된 의약품에 관한 연구에 있어서는 주로 실크펩타이드와 관련된 연구만이 진행되고 있을 뿐, 이러한 견사단백질이 함유된 누에(또는 숙잠)를 활용한 연구는 미비한 편이다.
적당량의 알코올은 맥주의 경우 맥주잔으로, 소주의 경우 소주잔으로 하루 1 내지 2잔 정도이며, 이 정도의 알코올 섭취는 알코올이 혈전 생성을 줄이고 혈류개선을 통해 신체 대사를 원활하게 해주게 되어 당뇨병을 포함한 고혈압, 고지혈증 및 심혈관질환과 같은 만성대사질환의 발생을 줄인다고 하고 있다. 하지만, 우리나라의 알코올 섭취량은 세계 4위를 기록하고 있을 정도로 알코올의 과다섭취가 문제되고 있다. 이렇게 과다섭취된 알코올은 체내에 저장되지 못하고 간에서 산화작용에 의하여 완전히 없어지게 되는데, 구체적으로 보면, 간에서 알코올은 크게 알코올 탈수소효소(alcohol dehydrogenase : ADH) 경로, 미소체 알코올 산화체계(microsomal ethanol oxidizing system : MEOS) 경로 및 카탈라제(catalase) 경로의 세가지 경로에 의해 대사되어 아세트알데히드로 변환되고, 이는 다시 탈수소효소(aldehyde dehydrogenase : ALDH)에 의하여 아세트염으로 대사된다. 이때, 아세트알데히드는 독성이 있어 간세포에 손상을 줄 수 있고, 급성 간염 또는 만성 간염을 초래하는 원인이 된다.
한편, 본 발명자들은 대한민국 등록특허 제10-1388455호와 대한민국 등록특허 제10-1546446호에 개시된 익힌 숙잠이 갖는 다양한 생리활성을 연구하던 중, 상기 익힌 숙잠의 분말이 간염의 치료 효과가 있음을 발견하여 본 발명을 완성할 수 있었다.
견사단백질을 갖는 누에는 본 발명자가 관련 기술(대한민국 등록특허 제10-1388455호 및 대한민국 등록특허 제10-1546446호)을 개발하기 전까지는 식품, 화장료 또는 의약품으로서의 사용용도가 전무하였기에 이러한 견사단백질을 갖는 누에를 이용하여 간염을 치료할 수 있는 치료제로서 사용할 수 있다는 것에서 큰 의의가 있다.
대한민국 등록특허 제10-1373940호 (발명의 명칭 : 생리활성물질의 양이 증가된 누에고치 발효 효소 가수분해물의 제조 방법, 이로부터 얻어진 가수분해물 및 이러한 가수분해물의 항염 활성 용도, 출원인 : 고창희 외 1인, 등록일 : 2014.03.06) 대한민국 공개특허 제10-2008-0043062호 (발명의 명칭 : 누에체액을 함유하는 항염증제, 출원인 : 주식회사 핸슨바이오텍, 등록일 : 2008.05.16) 대한민국 등록특허 제10-1388455호 (발명의 명칭 : 견사단백질을 갖는 누에의 가공방법 및 그 누에가공물, 출원인 : 대한민국(농촌진흥청), 등록일 : 2014.04.17) 대한민국 등록특허 제10-1546446호 (발명의 명칭 : 견사단백질이 함유된 누에가공물을 포함하는 건강기능식품 및 화장료 조성물, 출원인 : 대한민국(농촌진흥청), 등록일 : 2015.08.17)
본 발명의 목적은 견사단백질을 갖는 누에를 함유하는 알코올성 간염의 예방 또는 치료용 조성물을 제공하는 데에 있다. 보다 자세하게는 5령3일 이후의 4면잠 누에부터 숙잠기까지의 누에로부터 선택되는 생누에를 물에 넣어 익히거나 또는 증기의 열로 익힌 견사단백질을 갖는 누에를 함유하는 알코올성 간염의 예방 또는 치료용 조성물을 제공하는 데에 있다.
본 발명은 견사단백질을 갖는 누에를 함유하는 알코올성 간염의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
상기 간염은 알코올의 섭취로 유도되는 급성 간염 또는 만성 간염에서 선택되는 질환일 수 있다.
상기 견사단백질을 갖는 누에는 바람직하게는 5령3일 이후의 4면잠 누에부터 숙잠기까지의 누에 중 선택될 수 있다.
또한 상기 견사단백질을 갖는 누에는 생누에를 물에 넣어 익히거나 또는 증기의 열로 익힌 것을 사용할 수 있다.
상기 견사단백질을 갖는 누에를 익힌 후, 열풍건조 또는 진공동결건조 중 선택된 어느 하나를 통해 건조시켜 분말화하는 단계를 더 포함할 수 있다.
상기 견사단백질을 갖는 누에는 추출물 형태로 제조될 수도 있다. 상기 추출물은 견사단백질을 갖는 누에를 물, 탄소수 1 내지 4개의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출하여 제조될 수 있다.
본 발명은 상기 견사단백질을 갖는 누에를 함유하는 간염의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명은 견사단백질을 갖는 누에를 함유하는 알코올성 간염의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 상기 견사단백질을 갖는 누에는 3면잠, 4면잠 등의 견사단백질이 포함된 모든 누에를 의미한다. 즉, 견사단백질을 갖는 누에는 바람직하게는 4면잠 누에 중 5령3일 이후의 누에부터 또는 숙잠기까지의 누에 중 선택될 수 있다. 이 때, 바람직하게는 5령3일 이후의 누에로서 바람직하게는 5령4일의 누에부터 사용할 수 있으며, 더 바람직하게는 숙잠기의 누에를 사용하는 것이 가장 좋다. 5령 3일의 누에도 사용할 수는 있으나 5령 4일 이후의 누에에 비해서 누에가 갖는 견사선이 작은 편이다.
또한 상기 견사단백질을 갖는 누에는 생누에를 물에 넣어 익히거나 또는 증기의 열로 익힌 것을 사용할 수 있다.
한편, 숙잠기의 누에라 함은 누에 몸 속에 견사단백질이 가득 차 있는 누에로서 고치를 짓기 전까지의 누에를 의미한다. 숙잠기의 누에는 누에똥이 대부분 배출되어 있기 때문에 견사단백질을 갖는 누에로서 가장 사용하기에 적합하다. 한편, 5령3일 이전의 어린 누에는 주로 누에똥이 포함된 채로 약용물질로서 가공되는데, 혈당 강하 효과가 있어 당뇨 치료제로서 사용된다는 차이점이 있다.
상기 생누에는 5~10℃에서 냉장보관된 것을 사용할 수 있다. 상기 생누에를 익히는 시간은 특별히 제한되지는 않으나 바람직하게는 55~125℃의 온도에서 30분~24시간 동안 익힐 수 있으며, 바람직하게는 80~104℃의 온도에서 90분~15시간 동안 익힐 수 있다. 상기 생누에를 익히는 과정은 1~3회 반복될 수 있다.
상기 견사단백질을 갖는 누에는 익힌 후, 통상의 방법으로 건조할 수 있으며, 자연건조, 열풍건조 또는 진공동결건조 중 선택된 어느 하나를 통해 건조시켜 분말화하는 단계를 더 포함하는 것이 특징이며, 바람직하게는 진공동결건조 방법이 가장 적합하다. 상기 견사단백질을 갖는 누에는 익힌 후 가공하여 건조분말, 겔 또는 액상 형태로 제조할 수도 있다.
상기 견사단백질을 갖는 누에는 추출물 형태로 제조될 수 있다. 이 때, 상기 견사단백질은 생누에를 물에 넣어 익히거나 또는 증기의 열로 익힌 것을 추출물 형태로 제조할 수도 있고, 익히기 전의 생누에를 추출물 형태로 제조할 수도 있다. 바람직하게는 생누에를 물에 넣어 익히거나 증기의 열로 익힌 것을 사용하는 것이 상기 견사단백질을 갖는 누에의 유용성분을 추출하기에 더 바람직하다.
또한 상기 추출물은 다시 가공하여 건조분말, 겔 또는 액상 형태로 제조될 수 있다.
상기 추출물은 견사단백질을 갖는 누에를 물, 탄소수 1 내지 4개의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출하여 제조될 수도 있다. 상기 탄소수 1 내지 4개의 저급 알코올은 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올 및 이소부탄올로 이루어진 군에서 선택될 수 있다. 상기 물, 탄소수 1 내지 4개의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용액은 견사단백질을 갖는 누에 사용 중량 기준 1~40배 부피(1kg 기준 1~40ℓ)를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 5~40배 부피를 사용할 수 있다. 상기 추출물의 추출조건은 20~100℃에서 1분~48시간일 수 있다. 상기 과정은 1~4번까지 반복할 수 있다. 또한, 당분야의 통상적인 방법으로서 견사단백질을 갖는 누에의 물, 탄소수 1 내지 4개의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용액 추출물을 물에 녹인 후에 n-헥산, 메틸렌클로라이드, 아세톤, 클로로포름, 에틸아세테이트 및 n-부탄올로 이루어진 군 중에서 선택되는 1종 이상의 용매를 사용하여 추가적으로 분획하여 분획물로 제조할 수 있다.
또 다른 방법으로는, 견사단백질을 갖는 누에를 물, 탄소수 1 내지 4개의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출 농축하여 얻은 추출물에, 물을 가하여 현탁한 후, 바람직하게는 추출물의 중량의 1~1000배, 더 바람직하게는 1~500배, 가장 바람직하게는 1~50배의 물을 가하여 현탁한 후, 상기 현탁물에 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 및, 부탄올로 이루어진 군에서 선택되는 용매를 가하여 얻은 분획물로 제조할 수 있다.
상기 추출물 또는 이의 분획물의 제조온도는 20 내지 100℃일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 추출 또는 분획 시간은 특별히 제한되는 것은 아니나, 10분 내지 2일 이내에 추출하는 것이 바람직하며, 추출용 기기로는 통상의 추출기기, 초음파분쇄추출기 또는 분획기를 이용할 수 있다. 이렇게 제조된 추출물 또는 분획물은 열풍건조, 감압건조 또는 동결건조하여 용매를 제거할 수 있다. 또한, 상기 추출물 또는 분획물은 칼럼크로마토그래피를 이용하여 정제하여 사용할 수도 있다. 상기 크로마토그래피는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography), 엘에이취-20 컬럼 크로마토그래피(LH-20 column chromatography), 이온교환수지 크로마토그래피(ion exchange resin chromatography), 중압 액체 크로마토그래피(medium pressure liquid chromatography), 박층 크로마토그래피(TLC; thin layer chromatography), 실리카겔 진공 액체 크로마토그래피(silica gel vacuum liquid chromatography) 및 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography) 중에서 선택될 수 있다.
또한, 본 발명은 견사단백질을 갖는 누에를 함유하는 알코올성 간염의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공할 수 있다. 상기 견사단백질을 갖는 누에를 함유하는 알코올성 간염의 예방 또는 치료용 약학 조성물은 통상의 방법에 따라 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 추출물 또는 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다. 상기 견사단백질을 갖는 누에는 본 발명의 조성물에 0.1~100 중량%로 포함될 수 있다.
본 발명의 조성물의 투여량은 치료받을 대상의 연령, 성별, 체중과, 치료할 특정 질환 또는 병리 상태, 질환 또는 병리 상태의 심각도, 투여경로 및 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 일반적으로 투여량은 0.01㎎/㎏/일 내지 대략 2000㎎/㎏/일의 범위이다. 더 바람직한 투여량은 1㎎/㎏/일 내지 500㎎/㎏/일이다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 조성물은 쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 주사에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물은 독성 및 부작용이 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용시에도 안심하고 사용할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 조성물, 바람직하게는, 견사단백질을 갖는 누에 및 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 간염의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다. 상기 견사단백질을 갖는 누에는 본 발명의 건강기능식품에 0.001~100 중량%로 하여 첨가될 수 있다. 본 발명의 건강기능식품은 정제, 캡슐제, 환제 또는 액제 등의 형태를 포함하며, 본 발명의 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 드링크제, 육류, 소세지, 빵, 캔디류, 스넥류, 면류, 아이스크림, 유제품, 스프, 이온음료, 음료수, 알코올 음료, 껌, 차 및 비타민 복합제 등이 있다.
본 발명은 견사단백질을 갖는 누에를 함유하는 알코올성 간염의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로서, 상기 견사단백질을 갖는 누에가 포함된 약학 조성물 또는 건강기능식품은 알코올 섭취로 인한 acetaldehyde 농도를 낮추며, 염증성 물질의 생성을 저해하면서 간 보호 효과가 뛰어나 알코올성 간염의 예방 또는 치료용 조성물이나 이를 함유한 건강기능식품으로서 용이하게 이용될 수 있다. 기존에 백강잠, 누에 또는 실크펩타이드를 이용한 건강기능식품이 다양하게 이용되고 있기는 하지만, 실크펩타이드가 갖는 성분과 누에의 성분이 다름은 명백하며, 누에의 각 시기별에 있어서도 생것일 때와 이를 익혔을 때의 각 성분의 함량이 다름이 확인된다. 백강잠 또한 누에의 성장시기가 다르고 균사 배양이 된 것이기 때문에 견사단백질을 갖는 누에와 비교할 때 약리학적 활성을 갖는 구성성분이 다른 것이라고 할 수 있다. 따라서, 기존에는 식용하지 못하고 견사 생성용 누에고치를 만들기 위해 사육하는 것 이외에는 별다른 용도가 없었던 견사단백질을 갖는 누에를 알코올성 간염의 예방 또는 치료용 조성물로서 이용할 수 있다는 점에서 본 발명이 의의가 있다.
본 발명의 도면의 각 사진과 그래프에서 EtOH는 99.9% 에탄올을 투여했음을, 0.1, 0.5, 1, 10의 숫자표시는 실시예 1에서 제조한 견사단백질을 갖는 누에의 분말을 투여했음을, 1h 및 3h는 에탄올 투여 후의 시간이 1시간과 3시간이 지났음을 나타낸다.
또한 자세하게는 도 1은 10일간 실시예 1의 견사단백질을 갖는 누에 분말을 섭취한 SD rat에 에탄올(EtOH) 투여 1시간 또는 3시간 후 적출하여 얻은 간 전체의 사진과 상기 간 조직을 Hematoxylin & Eosin 염색한 사진을 나타낸다.
도 2는 10일간 실시예 1의 견사단백질을 갖는 누에 분말을 섭취한 SD rat에 에탄올(EtOH) 투여 1시간 또는 3시간 후 적출한 간 전체의 무게, 체중 대비 간 전체 무게를 대비한 결과값을 나타낸다.
도 3은 10일간 실시예 1의 견사단백질을 갖는 누에 분말을 섭취한 SD rat에 에탄올(EtOH) 투여 1시간 또는 3시간 후 얻은 혈액에서의 acetaldehyde 농도를 확인한 결과를 나타낸다.
도 4는 10일간 실시예 1의 견사단백질을 갖는 누에 분말을 섭취한 SD rat에 에탄올(EtOH) 투여 1시간 후 얻은 혈액에서의 TNF-α와 IL-1β의 농도를 측정한 결과를 나타낸다.
도 5는 10일간 실시예 1의 견사단백질을 갖는 누에 분말을 섭취한 SD rat에 에탄올(EtOH) 투여 3시간 후 얻은 혈액에서의 MDA의 농도를 측정한 결과를 나타낸다.
도 6은 10일간 실시예 1의 견사단백질을 갖는 누에 분말을 섭취한 SD rat에 에탄올(EtOH) 투여 1시간 또는 3시간 후 얻은 혈액에서 ALT 및 AST를 측정한 결과를 나타낸다.
이하 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명은 여기서 설명되는 실시예에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 오히려, 여기서 소개되는 내용이 철저하고 완전해지도록, 당업자에게 본 발명의 사상을 충분히 전달하기 위해 제공하는 것이다.
<실시예 1. 견사단백질을 갖는 누에 분말(익힌 숙잠 분말)의 제조>
견사단백질을 갖는 생누에로서 숙잠기의 누에를 준비하였다. 이를 위해 5령 7일경이 되어 숙잠기에 이른 누에를 100℃ 수증기로 10시간 동안 익힌 후 식혀 이를 진공동결건조하였다. 건조된 익힌 숙잠은 햄머밀과 롤러밀을 이용하여 0.1mm이하의 직경을 가지는 가루로 분쇄하여, 최종적으로 익힌 숙잠 분말을 제조하였다. 이 때 성분 분석용 비교군으로 사용하기 위해 익히기 전의 숙잠 또한 생것인채로 바로 급속냉동하여 진공동결건조 후 분말로 제조하였다.
<실시예 2. 익힌 숙잠의 성분 분석>
익히기 전의 숙잠과 익힌 숙잠의 주요성분 분석을 실시하여 표 1 내지 표 4에 나타내었다.
구분 익히기 전의 숙잠 익힌 숙잠
수분 4.15 2.85
조단백질 62.43 68.66
조지방 11.66 10.99
조회분 3.63 3.26
조섬유 1.74 1.77
구분 익히기 전의 숙잠 익힌 숙잠
시스테인(CYS) 0.463 0.427
메치오닌(MET) 0.756 0.644
아스파르트산(ASP) 4.850 4.679
트레오닌(THR) 2.265 2.185
세린(SER) 6.194 6.757
글루탐산(GLU) 4.071 3.824
글리신(GLY) 9.265 12.335
알라닌(ALA) 7.460 9.778
발린(VAL) 2.292 2.399
이소루신(IIe) 1.181 1.214
루신(Leu) 2.114 1.983
타이로신(Tyr) 3.901 4.560
페닐알라닌(Phe) 1.740 1.746
라이신(Lys) 2.396 2.193
히스티딘(His) 1.160 1.083
아르기닌(Arg) 2.123 1.958
프롤린(Pro) 1.217 1.148
트립토판(Trp) 0.437 0.425
구분 익히기 전의 숙잠 익힌 숙잠
Myristicacid (C14:0) 0.15 0.17
Palmiticacid (C16:0) 23.98 24.49
Palmitoleicacid (C16:lΩ7) 0.82 0.86
Stearicacid (C18:0) 8.37 8.55
Oleicacid (C18:lΩ9) 31.13 31.22
Vaccenicacid (C18:lΩ7) 0.00 0.00
Linoleicacid (C18:2Ω6) 6.42 6.50
γ-Linoleicacid (C18:3Ω6) 0.09 0.13
Linolenicacid (C18:3Ω3) 28.75 27.86
Eicosenoicacid (C20:lΩ9) 0.28 0.23
Arachidonicacid (C20:4Ω6) 0.00 0.00
Eicosapentaenoicacid(EPA) (C20:5Ω3) 0.00 0.00
Docosatetraenoicacid (C22:4Ω6) 0.00 0.00
Docosahexaenoicacid(DHA) (C22:6Ω3) 0.00 0.00
지방산(합계) 100.00 100.00
포화지방산 32.51 33.21
불포화지방산 67.49 66.79
-단가 지방산 32.23 32.31
-다가 지방산 35.27 34.49
구분 익히기 전의 숙잠 익힌 숙잠
Ca(칼슘) 197.83 198.90
Cu(구리) 1.04 1.20
Fe(철) 8.49 3.17
K(칼륨) 1176.37 1045.44
Mg(마그네슘) 211.94 199.25
Mn(망간) 1.70 1.60
Na(나트륨) 11.03 14.93
P(인) 749.79 688.27
Zn(아연) 5.99 5.76
S(황) 289.61 327.00
상기 결과를 통해, 익히기 전의 숙잠 내에 있던 각종 구성성분의 함량이 익힌 숙잠이 되면서 다양하게 변화된 것으로 확인된다. 특히 표 1에서 조단백질의 함량, 표 2에서 세린, 글리신, 알라닌의 함량이 현저하게 증가한 것을 알 수 있으며 이러한 익힌 숙잠의 성분 변화로 인해 상기 익힌 숙잠이 갖는 약리학적 효과에도 변화가 있을 것임을 확인할 수 있다.
<실시예 3. 실험동물 준비>
알코올 유도 간염 실험을 위한 실험동물로는 7주령의 SD rat을 각 군당 6~10마리씩 준비하였고, SD rat을 위한 일반사료는 rodent diet인 AIN-76A를 사용하였다. 이 AIN-76A에 매일 실시예 1의 견사단백질을 갖는 누에 분말을 SD rat의 체중 kg당 0.1~10g을 혼합하여 투여하였다. 열흘 후에 99.9%의 에탄올(EtOH)을 SD rat의 체중 kg당 3g을 투여하였다. 열흘 동안 SD rat의 체중은 주기적으로 측정되었다.
<실시예 4. 간 육안 소견 및 병리학적 조직상태 확인>
열흘 간 견사단백질을 갖는 누에 분말이 투여된 SD rat에 에탄올을 SD rat의 체중 kg당 3g을 투여한 후 1~3시간 후 CO2 안락사하고 부검하여 간과 혈액을 채취하였고, 각 그룹별 간의 육안소견 관찰하였다. 이 후, 간조직을 적출하여 그 일부를 10% formalin에 고정 후, 고정된 조직을 일정두께로 삭정한 다음, 파라핀 포매하여 조직 절편을 제작하고, Hematoxylin & Eosin 염색을 실시하였다. 적출된 간과 Hematoxylin & Eosin 염색사진은 도 1에 나타내었다. Hematoxylin & Eosin 염색법은 검푸른 색을 내는 hematoxylin과 붉은 색을 내는 eosin을 이용하여 동물 조직을 염색하는 방법으로서, 세포핵은 검푸르게 염색되며 대부분의 세포질 성분은 분홍색 또는 붉은색으로 염색된다. 이 염색법을 이용하여 세포의 핵과 세포질을 관찰할 수 있다.
도 1을 참고하면 에탄올 투여시간이 1시간 또는 3시간(1h 및 3h)으로 짧았기 때문에 간 육안 소견(A) 및 병리학적으로(B) 그룹 간 큰 차이는 보이지 않은 것으로 확인된다.
<실시예 5. 체중, 간 무게, 체중대비 간 무게 관찰>
실시예 4에서 안락사 하기 전의 SD rat의 체중을 측정하였고, CO2 안락사하고 부검하여 얻은 간 무게, 체중대비 간 무게를 관찰하였으며, 이를 도 2에 나타내었다.
도 2를 참고하면, 역시 에탄올 투여시간이 1시간 또는 3시간(1h 및 3h)로 짧았기 때문에 모든 그룹의 체중, 간 무게, 체중대비 간 무게에서 그룹 간 큰 차이는 나타나지 않은 것으로 확인된다.
<실시예 6. acetaldehyde 농도 확인>
실시예 4에서 안락사한 SD rat의 혈액에서 acetaldehyde 농도를 측정하였다. 자세하게는 Abcam의 kit(ab112113)를 사용하여 혈액 중에 존재하는 aldehyde와 반응하는 dye가 포함된 시약과 혈액을 1시간 동안 실온에서 반응시킨 후, 405 nm나 550 nm에서 흡광도를 측정하였고, 이에 대한 결과를 도 3에 나타내었다.
도 3을 참고하면, 에탄올만을 단독으로 투여한 그룹에 비해 실시예 1의 견사단백질을 갖는 누에 분말이 전처리된 SD rat에서 농도 의존적으로 acetaldehyde 농도가 통계적으로 유의하게 감소되는 것이 관찰된다. 따라서 실시예 1의 견사단백질을 갖는 누에 분말이 전처리된 SD rat의 경우 acetaldehyde의 농도를 감소시키는 효과가 우수한 것을 알 수 있다.
<실시예 7. 염증 및 산화적 스트레스 억제 효과 확인>
실시예 4에서 안락사한 SD rat의 혈액에서 염증 cytokine인 TNF-α와 IL-1β, 그리고 oxidative stress를 의미하는 lipid peroxidation marker인 malondialdehyde(MDA) level을 측정하였으며 이에 대한 결과는 도 4 및 도 5에 나타내었다. 각 실험은 R&D systems에서 제공하는 kit(TNF-α, RTA00; IL-1β, RLB00)를 이용하여 확인하였고, 간단히 설명하자면, 혈액 중에 존재하는 각 cytokine와 결합할 수 있는 antibody가 pre-coating된 96 well plate에 본 실험에서 얻은 혈청을 실온에서 2시간 동안 반응시킨 후, 2차 항체를 반응시키고, 그 후 결합된 양을 알 수 있는 substrate solution을 처리하여 540 nm 또는 570 nm에서 흡광도를 측정하였다.
MDA level은 OxisResearch에서 제공하는 kit인 MDA-586 assay kit(cat # 21044)를 사용하여 측정하였고, 상기 혈액으로부터 얻은 혈청과 시약을 45℃에서 한 시간 동안 반응시킨 후 586 nm에서 흡광도를 측정하였다. 이 방법은 MDA 한 분자가 N-methyl-2-phenylindole(NMPI) 두 분자와 결합하여 색을 나타낼 수 있는 carbocyanine dye를 형성하는 원리를 이용한다.
도 4 및 도 5를 참고하면, 알코올 단독 투여 SD rat에서는 TNF-α와 IL-1β, MDA의 발현이 모두 증가되어 있으나, 실시예 1의 견사단백질을 갖는 누에 분말이 전처리된 SD rat의 경우 이들 사이토카인과 마커의 발현이 현저하게 감소되어, 알코올 섭취로 인한 염증물질의 생성이 억제되고, 항산화 효과가 우수함을 확인할 수 있다.
<실시예 7. 혈중 간손상 인자 확인>
실시예 4에서 안락사한 SD rat의 각 군에서 혈액을 수거하여 ALT(ALanine Transaminase(aminoTransferase) 또는 Serum Glutamate Pyruvate Transaminase)와 AST(ASpartate Transaminase(aminoTransferase) 또는 Serum Glutamic Oxaloacetic Transaminase)를 측정하였고 이를 도 6에 나타내었다. 이를 위해 상기 혈액에서 혈청을 분리한 후, Olympus Diagnostics AU480 Chemistry Analyzer를 이용하여 간 손상 marker인 ALT와 AST를 측정하였다.
도 6을 참고하면, 알코올 투여 그룹의 혈액에서 ALT 및 AST 수치가 현저하게 증가되어 알코올 유도 간손상 정도가 심한 것으로 관찰되나, 실시예 1의 견사단백질을 갖는 누에 분말이 전처리된 그룹에서는 ALT 및 AST 수치가 통계적으로 유의하게 감소되는 것이 확인되어, 실시예 1의 견사단백질을 갖는 누에 분말의 간 보호 효과가 우수함을 알 수 있다.
<실시예 8. 각종 누에 관련 분말의 효과 비교>
실시예 1의 견사단백질을 갖는 누에 분말, 백강잠 분말(누에나방의 새끼가 흰가루병에 걸려 죽은 것을 말린 것)(한약방에서 구입), 5령 1일 누에를 실시예 1의 방법으로 분말화 한 것, 번데기를 실시예 1의 방법으로 분말화한 것, 시중에 유통 중인 실크 단백질 분말을 이용하여 실시예 3의 방법으로 열흘간 매일 체중 kg당 1g씩 실험동물에 급여하고 에탄올을 SD rat의 체중 kg당 3g을 투여한 후 3시간 후에 안락사하여 각 동물의 혈액에서 acetaldehyde 농도와 TNF-α발현 정도를 측정하였다. 표 5의 결과를 참고하면, 본 발명의 실시예 1의 분말이 갖는 acetaldehyde와 TNF-α 저하 효과가 다른 분말이 갖는 효과에 비해 가장 우수한 것으로 확인된다.
조건 에탄올 투여 3시간 째의 acetaldehyde 농도 (μM) TNF-α(pg/㎖)
무처리군 - 6.8
에탄올만 투여한 군 55.8 16.5
실시예 1의 분말 급여 후
에탄올 투여한 군		 14.5 9.7
백강잠 분말 급여 후
에탄올 투여한 군		 45.9 14.8
5령 1일 누에 분말 급여 후
에탄올 투여한 군		 40.4 13.9
번데기 분말 급여 후
에탄올 투여한 군		 52.5 15.6
실크 단백질 분말 급여 후
에탄올 투여한 군		 49.6 14.5
<제제예 1. 약학적 제제>
실시예 1의 견사단백질을 갖는 누에(익힌 숙잠 분말) 200g을 락토오스 175.9g, 감자전분 180g 및 콜로이드성 규산 32g과 혼합하였다. 이 혼합물에 10% 젤라틴 용액을 첨가시킨 후, 분쇄해서 14 메쉬체를 통과시켰다. 이것을 건조시키고 여기에 감자전분 160g, 활석 50g 및 스테아린산 마그네슘 5g을 첨가해서 얻은 혼합물을 정제로 만들었다.
<제제예 2. 식품 제조>
제제예 2-1. 조리용 양념의 제조
실시예 1의 견사단백질을 갖는 누에(익힌 숙잠 분말)를 조리용 양념에 1 중량%로 첨가하여 건강 증진용 조리용 양념을 제조하였다.
제제예 2-2. 밀가루 식품의 제조
실시예 1의 견사단백질을 갖는 누에(익힌 숙잠 분말)를 밀가루에 0.1 중량%로 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.
제제예 2-3. 스프 및 육즙(gravies)의 제조
실시예 1의 견사단백질을 갖는 누에(익힌 숙잠 분말)를 스프 및 육즙에 0.1 중량%로 첨가하여 건강 증진용 수프 및 육즙을 제조하였다.
제제예 2-4. 유제품(dairy products)의 제조
실시예 1의 견사단백질을 갖는 누에(익힌 숙잠 분말)를 우유에 0.1 중량%로 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
제제예 2-5. 야채주스 제조
실시예 1의 견사단백질을 갖는 누에(익힌 숙잠 분말) 0.5g을 토마토주스 또는 당근주스 1,000㎖에 가하여 건강 증진용 야채주스를 제조하였다.
제제예 2-6. 과일주스 제조
실시예 1의 견사단백질을 갖는 누에(익힌 숙잠 분말) 0.1g을 사과주스 또는 포도주스 1,000㎖에 가하여 건강 증진용 과일주스를 제조하였다.

Claims (12)

  1. 5령4일의 4면잠 누에부터 숙잠기까지의 누에 중에서 선택되는 견사단백질을 갖는 누에를 함유하는 조성물로서, 상기 견사단백질을 갖는 누에는 생누에를 55~125℃의 온도에서 30분~24시간 동안 물에 넣어 익히거나 증기의 열로 익힌 것을 특징으로 하는 알코올성 간염의 예방 또는 치료용 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 간염은 급성 간염 또는 만성 간염인 것을 특징으로 하는 알코올성 간염의 예방 또는 치료용 조성물.
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 제1항에 있어서,
    상기 견사단백질을 갖는 누에를 익힌 후, 열풍건조 또는 진공동결건조 중 선택된 어느 하나를 통해 건조시켜 분말화하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 알코올성 간염의 예방 또는 치료용 조성물.
  6. 제5항에 있어서,
    분말화된 누에를 물, 탄소수 1 내지 4개의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출하여 추출물 형태로 제조하는 것을 특징으로 하는 알코올성 간염의 예방 또는 치료용 조성물.
  7. 5령4일의 4면잠 누에부터 숙잠기까지의 누에 중에서 선택되는 견사단백질을 갖는 누에를 함유하는 식품으로서, 상기 견사단백질을 갖는 누에는 생누에를 55~125℃의 온도에서 30분~24시간 동안 물에 넣어 익히거나 증기의 열로 익힌 것을 특징으로 하는 알코올성 간염의 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 간염은 급성 간염 또는 만성 간염인 것을 특징으로 하는 알코올성 간염의 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  9. 삭제
  10. 삭제
  11. 제7항에 있어서,
    상기 견사단백질을 갖는 누에를 익힌 후, 열풍건조 또는 진공동결건조 중 선택된 어느 하나를 통해 건조시켜 분말화하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 알코올성 간염의 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  12. 제11항에 있어서,
    분말화된 누에를 물, 탄소수 1 내지 4개의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출하여 추출물 형태로 제조하는 것을 특징으로 하는 알코올성 간염의 예방 또는 개선용 건강기능식품.
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