KR101785100B1 - 후자리움 아르메니아쿰 검출용 프라이머쌍 및 이를 이용한 검출방법 - Google Patents

후자리움 아르메니아쿰 검출용 프라이머쌍 및 이를 이용한 검출방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 후자리움속 검출용 프라이머 및 이를 이용하여 후자리움속을 검출하는 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 프라이머쌍을 이용하면, 후자리움(Fusarium)속에 속하는 종(species) 중 후자리움 아르메니아쿰(Fusarium armeniacum)만을 특이적으로 우수한 효율로 단시간 내에 검출할 수 있다.

Description

후자리움 아르메니아쿰 검출용 프라이머쌍 및 이를 이용한 검출방법{Primer set for detecting Fusarium armeniacum and detecting method using the same}
본 발명은 후자리움속 검출용 프라이머 및 이를 이용하여 후자리움속을 검출하는 방법에 관한 것이다.
곰팡이독소(mycotoxin)는 작물의 생육·저장·유통과정에서 오염된 곰팡이에 의해 생성되는 2차대사산물(secondary metabolites)로서 사람이나 가축에 급성적, 만성적 중독증(mycotoxicoses)을 일으킨다(Marasas, 1984; Desjardins, 2006). 독소생성 곰팡이에 의한 작물병해와 독소오염 농산물·식품의 섭취로 인한 인축의 중독증 피해는 매년 전 세계적으로 꾸준히 발생되기 때문에 WHO, FAO 등과 선진국에서는 곰팡이독소를 농산물·식품 내 위험물질로 간주하여 오염 허용치 설정 등을 통해 발생과 전파를 규제하고 있다.
곰팡이독소 중에서 T-2 또는 HT-2 곰팡이독소는 후자리움속 곰팡이에 의해 주로 생성되며, 후자리움 아르메니아쿰(Fusarium armeniacum)에 의한 피해가 큰 것으로 알려져 있다. T-2 또는 HT-2 독소는 옥수수, 밀, 보리, 귀리, 쌀 등의 원료곡물과 이를 이용한 가공식품에서 오염이 발생하는 것으로 보고되고 있다.
T-2 독소는 후자리움속 곰팡이독소 중에서 가장 독성이 강한 것으로 알려져 있다. T-2 독소는 생체 내에서 주요 대사산물인 HT-2 독소 및 다른 대사산물로 빠르게 대사되는데, T-2 독소 그 자체보다 대사산물들이 더 독성이 높거나 동등한 독성을 나타내기도 한다. 이에, 농작물에 큰 피해를 입히는 후자리움 아르메니아쿰(Fusarium armeniacum)을 진단하는 방법을 개발하고자 하는 많은 시도가 있어 왔다.
대한민국 공개특허 제10-2014-0125197호
이에, 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 후자리움(Fusarium)속에 속하는 종(species) 중 후자리움 아르메니아쿰(Fusarium armeniacum)만을 특이적으로 우수한 효율로 단시간 내에 검출하기 위한 프라이머쌍 및 이를 이용한 후자리움 아르메니아쿰(Fusarium armeniacum) 검출방법을 제공하는 것이다.
본 발명은 상기 과제를 달성하기 위하여, 일 양태로 서열번호 1 및 서열번호 2의 염기서열로 표시되는 프라이머쌍을 포함하는 후자리움 아르메니아쿰(Fusarium armeniacum) 특이적 검출용 조성물을 제공한다.
본 발명에서 제공하는, 상기 프라이머쌍은 PCR(Polymerase chain reaction)을 통해 후자리움 아르메니아쿰(Fusarium armeniacum)만을 특이적으로 검출할 수 있도록 개발된 것으로, 후자리움 아르메니아쿰과 형태학적으로 유사한 종 또는 후자리움 아르메니아쿰이 생성하는 T-2 독소 또는 HT-2 독소를 생성하는 다른 종과 혼입되어 있는 경우에도 후자리움 아르메니아쿰만을 특이적으로 검출할 수 있다. 따라서, 본 발명에 다른 프라이머쌍을 이용하여 후자리움 아르메니아쿰에 오염된 경우 정확하게 진단하여 대책을 강구하는데 용이하다.
더욱 상세하게는, 후자리움 아르메니아쿰은 T-2 독소, HT-2 독소 또는 이들의 혼합물을 생성할 수 있는데, T-2 독소 또는 HT-2 독소가 검출되는 경우 이를 생성하는 오염 균주를 정확하게 진단하지 못한다면 그에 따른 대책을 세우는 것에 매우 난항을 겪을 수 있지만, 본 발명에 따른 프라이머쌍을 이용하는 경우 후자리움 아르메니아쿰의 오염 여부를 정확하게 알 수 있어, 후자리움 아르메니아쿰이 오염된 경우라면 그에 따라 빠르게 대처할 수 있고, 후자리움 아르메니아쿰에 오염된 경우가 아니라면 다른 종에 대한 진단을 신속하게 할 수 있다.
즉, 본 발명에 따른 프라이머쌍을 이용하여 후자리움 아르메니아쿰 이외에 다른 속에 속하는 균주들과 혼입된 경우는 물론이고, 후자리움(Fusarium)속에 속하는 후자리움 아르메니아쿰과 형태학적으로 유사한 경우는 물론, T-2 독소 또는 HT-2 독소를 생성하는 다른 종과 혼입되어 있는 경우에도 후자리움 아르메니아쿰만을 특이적으로 검출할 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 프라이머쌍은 PHO 유전자를 증폭시키도록 작제된 것으로서, 상기 PHO 유전자는 포스페이트 퍼미아제(Phosphate permease)를 코딩하는 유전자의 일부일 수 있다. 더욱 상세하게는 본 발명에 따른 프라이머쌍을 이용하여 유전자 증폭시 PHO 유전자 외의 다른 유전자는 증폭되지 않으며, 313bp의 밴드(band)가 뚜렷하게 검출되므로 정확하고 용이한 검출이 가능하다.
본 발명에 따른 프라이머쌍을 이용하여 상기 PHO 유전자를 포함하고 있는 모든 후자리움속을 검출할 수 있는 것이 아니라, 본 발명의 실시예에서 확인할 수 있는 바와 같이, 후자리움 아르메니아쿰만을 검출할 수 있다는 것에 기술적 특징이 있다.
상기 서열번호 1의 염기서열로 표시되는 FarspF1 프라이머는 정방향(forward) 프라이머이고, 상기 서열번호 2의 염기서열로 표시되는 FarspR1 프라이머는 역방향(reverse) 프라이머이다.
본 발명에 따른 명세서에 있어서, 용어 "프라이머(primer)"는 카피하려는 핵산 가닥에 상보적인 단일 가닥 올리고뉴클레오티드 서열을 말하며, 프라이머 연장 산물의 합성을 위한 개시점으로서 작용할 수 있다. 프라이머 설계시, 프라이머의 A, G, C, T 함량비, 프라이머 결합체(dimer) 형성 방지, 같은 염기서열의 3회 이상 반복금지 등 여러 가지 제약이 따르며, 그 외에 단독 PCR 반응조건에 있어서 주형(template) DNA의 양, 프라이머의 농도, dNTP의 농도, Mg2 + 의 농도, 반응온도, 반응시간 등의 조건이 적정해야 한다.
본 발명에 따른 프라이머쌍은 서열번호 1 및 2로 표시되는 염기서열에 대하여 1개 이상의 염기가 결실, 치환 또는 부가된 염기서열도 포함할 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 프라이머쌍은 기본 성질을 변화시키지 않은 추가의 특징을 포함할 수 있다. 즉, 염기서열이 당해 분야에 공지된 많은 수단을 이용하여 변형될 수 있다. 이러한 변형의 예로는 메틸화, 캡화, 뉴클레오타이드의 하나 이상의 동족체로의 치환 및 포스포네이트, 포스포트리에스테르, 포스포로아미데이트 또는 카바메이트 등의 하전되지 않은 연결체나 포스포로티오에이트 또는 포스포로디티오에이트 등의 하전된 연결체로의 뉴클레오타이드의 변형이 가능하다. 또한 핵산은 뉴클레아제, 독소, 항체, 시그날 펩타이드, 폴리 L 리신 등의 단백질, 아크리딘 또는 프소랄렌 등의 삽입제, 금속, 방사성 금속, 철 산화성 금속 등의 킬레이트화제 및 알킬화제 등의 하나 이상의 부가적인 공유 결합된 잔기를 가질 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 프라이머쌍의 염기서열은 검출 가능한 시그날을 직접적 또는 간접적으로 제공할 수 있는 표지를 이용하여 변형시킬 수 있다. 상기 프라이머쌍은 분광학, 광화학, 생화학, 면역화학 또는 화학적 수단을 이용하여 검출될 수 있는 표지를 포함할 수 있다. 유용한 표지는 32P, 형광 염료, 전자 밀집 시약, 효소(일반적으로 ELISAS 에 이용되는 것), 바이오틴 또는 합텐 및 항혈청 또는 단일클론성 항체가 이용가능한 단백질을 포함한다.
본 발명에 따른 프라이머쌍은 적절한 서열의 클로닝 및 제한효소 분해 및 나랭(Narang)등의 포스포트리에스테르 방법(1979, Meth, Enzymol.68:90-99), 보카지(Beaucage)등의 디에틸포스포라미다이트 방법(1981, Tetrahedron Lett. 22: 1859-1862), 및 미국특허 제4,458,066호의 고형물 지지 방법과 같은 직접적인 화학적 합성법을 포함하는 임의의 기타 널리 공지된 방법을 사용하여 화학적으로 합성할 수 있다.
본 발명에 따른 프라이머쌍을 이용하여 증폭반응을 수행하면 표적서열, 즉 PHO 유전자를 증폭할 수 있으며, 바람직하게는 후자리움 아르메니아쿰의 PHO 유전자를 특이적으로 증폭할 수 있다. 표적핵산을 증폭하는 방법은 중합효소연쇄반응(PCR), 리가아제 연쇄반응(ligase chain reaction), 핵산 서열 기재 증폭(nucleic acid sequence-based amplification), 전사 기재 증폭 시스템(transcription-based amplification system), 가닥 치환 증폭(strand displacement amplification) 또는 레플리카제(replicase)를 통한 증폭 또는 당업계에 알려진 핵산 분자를 증폭하기 위한 임의의 기타 적당한 방법이 가능하다.
이 중에서, "중합효소 연쇄반응(PCR)"이란 중합효소를 이용하여 표적핵산에 특이적으로 결합하는 프라이머쌍으로부터 표적핵산을 증폭하는 방법이다. 이러한 PCR 방법은 당업계에 잘 알려져 있으며, 상업적으로 이용가능한 키트를 이용할 수도 있다.
본 발명에 있어서, 증폭된 표적서열은 검출가능한 표지물질로 표지될 수 있다. 일 구현예에서, 상기 표지물질은 형광, 인광 또는 방사성을 발하는 물질일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 또한, 방사성 물질을 이용한 표지는 PCR 수행시 32P 또는 35S 등과 같은 방사성 동위원소를 PCR 반응액에 첨가하면 증폭산물이 합성되면서 방사성이 증폭산물에 혼입되어 증폭산물이 방사성으로 표지될 수 있다.
본 발명은 다른 양태로, 서열번호 1 및 서열번호 2의 염기서열로 표시되는 프라이머쌍을 포함하는 후자리움 아르메니아쿰(Fusarium armeniacum) 특이적 검출용 조성물을 포함하는, 후자리움 아르메니아쿰(Fusarium armeniacum) 특이적 검출용 PCR 키트를 제공한다.
상기 키트에는 상기 프라이머쌍 외에 이에 제한되지 않지만, 핵산 추출, 증폭 및 생성물 검출용 시약과 이에 대한 지시사항을 추가로 포함할 수 있다. 예컨대, 핵산 추출용 시약, 데옥시뉴클레오티드, 핵산 증폭 반응을 수행하기에 필요한 시약, 열 안정 핵산 중합효소, 완충액, 및 dNTP 등이 포함될 수 있다. 상기 프라이머 및 핵산 추출, 증폭 및 생성물 검출용 시약은 동결 건조된 상태로 플라스틱 튜브에 담아 제공될 수 있으며, 상기 핵산은 바람직하게 DNA 일 수 있다.
또 다른 양태로, 본 발명은 서열번호 1 및 서열번호 2의 염기서열로 표시되는 프라이머쌍을 이용하는, 후자리움 아르메니아쿰(Fusarium armeniacum) 특이적 검출을 위한 PCR 방법을 제공한다.
보다 구체적으로, 하기의 후자리움 아르메니아쿰(Fusarium armeniacum) 특이적 검출을 위한 PCR 방법을 제공한다:
S1) 시료의 핵산을 추출하는 단계; S2) 서열번호 1 및 서열번호 2의 염기서열로 표시되는 프라이머쌍을 이용하여 상기 S1) 단계의 핵산으로부터 PCR을 수행하는 단계; 및 S3) 상기 S2) 단계의 산물을 전기영동으로 분리하여 PCR 산물을 확인하는 단계를 포함할 수 있다.
상기 S1) 단계는 시료에서 핵산을 추출하는 단계로서, 바람직하게는 DNA일 수 있다. 핵산을 추출하기 위한 방법으로서, 분쇄 버퍼, 예를 들어, EDTA, Tris-Cl, NaCl 또는 이들의 혼합물을 첨가할 수 있다. 이후에, 시료를 용이하게 분쇄하기 위하여 이에 한정되는 것은 아니지만 pellet pestle을 장착한 드릴 등을 이용할 수 있다.
상기 분쇄된 시료에 페놀(phenol), 클로로포름(chloroform), 이소아밀-알코올(isoamyl-alcohol) 또는 이들의 혼합물을 첨가하여 볼텍스로 교반한 후 원심분리하여 핵산, 바람직하게는 DNA를 분리할 수 있다.
상기 S1) 단계의 시료는 후자리움 아르메니아쿰(Fusarium armeniacum)의 포함 여부가 의심되는 것은 모두 포함될 수 있으며, 예컨대 후자리움 아르메니아쿰 자체, 후자리움 아르메니아쿰이 포함된 것으로 예상되는 농식품, 후자리움 아르메니아쿰에 감염된 것으로 예상되는 인간 포함 동물 유래 조직 등일 수 있다.
상기 S3) 단계에서의 정성분석은 DNA칩, 전기영동, 방사성 측정, 형광 측정 또는 인광 측정 결과를 통해 시료 내 후자리움 아르메니아쿰의 포함 여부를 확인할 수 있으며, 바람직하게는 전기영동 결과를 통해 PCR 산물의 밴드크기를 통해 시료 내 후자리움 아르메니아쿰의 포함 여부를 확인할 수 있다.
본 발명에 따른 프라이머쌍을 이용하면, 후자리움(Fusarium)속에 속하는 종(species) 중 후자리움 아르메니아쿰(Fusarium armeniacum)만을 특이적으로 우수한 효율로 단시간 내에 검출할 수 있다.
도 1은 서열번호 1 및 서열번호 2의 프라이머를 이용하여 각각의 균주로부터 유전자를 증폭한 결과를 나타낸 사진이다(각 균주의 번호는 표 2 참고).
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안된다. 본 발명의 실시예들은 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
<실시예 1>
게놈 DNA(gDNA)의 분리
실험에서 실험군으로 사용된 후자리움 아르메니아쿰(Fusarium armeniacum) 1. 10Rhcnta5-5-R4; 2. 10Rhcnta5-15-W4; 3. 10Rhcnta5-7-P1; 4. 10Rhcnta5-2-R1; 5. 10Rhcnta8-4-R6; 6. 10Rhcnta8-7-P1; 7. 10Rhcnta8-9-W1; 8. 10Rhcnsch1-11-R7; 9. 10Rhcngj1-R5W; 10. 10Rhcngj1-R14; 11. 10Rhcngj1-W2; 12. 10Rhcngj1-W6; 13. 10Rhcngj1-P1; 14. 13RhGn01-7; 15. 13RhGn04-3-1; 16. 13RhGn04-5; 17. 13RhGn04-6; 18. 13RhGn04-10; 19. 13RhGn04-12; 20 . 13RhGn05-3; 21. 10RhGWR9W3; 22. 14RRCb0401-10; 및 23. 14RRCn0701-P3 은 국립농업과학원 보유 균주를 사용하였으며, 24. KSU 20968 은 후자리움 워크샵(Fusarium Laboratory Workshop)에서 분양받은 균주를 사용하였다.
또한, 실험에서 비교군으로 사용된 후자리움 아쿠미나툼(Fusarium acuminatum, KSU 20965), 후자리움 아쿠타툼(Fusarium acutatum, KSU 10769), 후자리움 안디야지(Fusarium andiyazi, KSU 4647), 후자리움 에퀴세티(Fusarium equiseti, KSU 20979), 후자리움 후지쿠로이(Fusarium fujikuroi, KSU C-1933), 후자리움 랑세치에(Fusarium langsethiae, KSU 19084), 후자리움 니시카도이(Fusarium nisikadoi, KSU 10758), 후자리움 포에(Fusarium poae, KSU 11470), 후자리움 프로리페라툼(Fusarium proliferatum, KSU D-4853), 후자리움 싸이르피(Fusarium scirpi, KSU 20985), 후자리움 세미텍툼(Fusarium semitectum, KSU 11432), 후자리움 스포로트리키오이데스(Fusarium sporotrichioides, KSU 11552), 후자리움 서브글루티난스(Fusarium subglutinans, KSU E-0990), 후자리움 버티실리오이데스(Fusarium verticillioides, KSU A-0149), 후자리움 그래미네아룸(Fusarium graminearum, KSU Z-3639)은 후자리움 워크샵(Fusarium Laboratory Workshop)에서 분양받은 균주를 사용하였다.
게놈 DNA의 분리를 위해 감자한천배지에서 5일간 배양한 균사체를 긁어 1.5ml 튜브에 넣은후 분쇄 버퍼(EDTA 20mM, Tris-Cl 100mM, NaCl 8.19%) 400μl를 추가하고 pellet pestle을 장착한 드릴로 균사체를 분쇄하였다. 이후에 phenol:chloroform:isoamyl-alcohol(25:24:1)액을 동량 넣고 vortex 한 후 4℃ 12000rpm에서 10분간 원심분리하여 DNA를 분리하였다. DNA가 포함된 상층액은 새 튜브에 옮긴 후 이소프로판올(isopropanol)을 상층액과 동량 추가하여 위아래로 섞어준 후 위의 조건으로 원심분리하여 DNA를 침전시켰다. 침전된 DNA는 70% 에탄올로 세척하여 건조시킨 후 TE버퍼에 용해하여 4℃에 보관하였다.
< 실시예 2>
PCR의 실시
<2-1> 후자리움 아르메니아쿰 ( Fusarium armeniacum ) 특이적 프라이머쌍 제작
본 발명자들은 후자리움 아르메니아쿰의 진단을 위해 포스페이트 퍼미아제(Phosphate permease) 유전자의 염기서열을 바탕으로 후자리움 아르메니아쿰 특이적 프라이머쌍, 정방향 프라이머 FarspF1(서열번호 1: 5'-GGGATGGTAAGACGATCTAC-3') 및 역방향 프라이머 FarspR1(서열번호 2: 5'-CTTCCATCATCACCTCTGAG-3')를 작제하였다. 이들 프라이머쌍은 후자리움 아르메니아쿰의 PHO 유전자를 특이적으로 인식하며, 이들 프라이머쌍을 이용한 PCR 증폭산물의 크기는 313bp이며, Tm 은 52/54℃이다(표 1).
Primer Sequence(5'-3') size(bp) Tm(℃)
FarspF1 GGGATGGTAAGACGATCTAC 313 52
FarspR1 CTTCCATCATCACCTCTGAG 54
<2-2> 제작 프라이머쌍의 특이성 확인
상기 표 1의 프라이머쌍을 이용해, 하기 표 2에 해당하는 후자리움(Fusarium)속에 속하는 종(species)을 대상으로 Myclcler(Bio-Rad Laboratories, Inc.,CA, 미국)과 TaKaRa Ex Taq(TaKaRa Biotechnology, 일본)을 사용하여 PCR을 실시하였다.
번호 종명 Strain number 증폭유무
M 1kb ladder 마커 -
C Negative control water -
1-24 Fusarium armeniacum 1, 10Rhcnta5-5-R4; 2, 10Rhcnta5-15-W4;
3. 10Rhcnta5-7-P1; 4. 10Rhcnta5-2-R1;
5, 10Rhcnta8-4-R6; 6. 10Rhcnta8-7-P1;
7, 10Rhcnta8-9-W1; 8, 10Rhcnsch1-11-R7;
9, 10Rhcngj1-R5W; 10, 10Rhcngj1-R14;
11, 10Rhcngj1-W2; 12, 10Rhcngj1-W6;
13, 10Rhcngj1-P1; 14, 13RhGn01-7;
15, 13RhGn04-3-1; 16, 13RhGn04-5;
17, 13RhGn04-6; 18, 13RhGn04-10;
19, 13RhGn04-12; 20, 13RhGn05-3;
21, 10RhGWR9W3; 22, 14RRCb0401-10;
23, 14RRCn0701-P3; 24, KSU 20968		 +
25 Fusarium acuminatum KSU 20965 -
26 Fusarium acutatum KSU 10769 -
27 Fusarium andiyazi KSU 4647 -
28 Fusarium equiseti KSU 20979 -
29 Fusarium fujikuroi KSU C-1933 -
30 Fusarium langsethiae KSU 19084 -
31 Fusarium nisikadoi KSU 10758 -
32 Fusarium poae KSU 11470 -
33 Fusarium proliferatum KSU D-4853 -
34 Fusarium scirpi KSU 20985 -
35 Fusarium semitectum KSU 11432 -
36 Fusarium sporotrichioides KSU 11552 -
37 Fusarium subglutinans KSU E-0990 -
38 Fusarium verticillioides KSU A-0149 -
39 Fusarium graminearum KSU Z-3639 -
보다 구체적으로, 표 1의 프라이머쌍 (10 pM) 및 상기 표 2의 각각의 균주의 gDNA(100 ng)를 포함하는 PCR 반응 혼합물 25 μl를 96℃에서 1분 30초간 변성한 후, 94℃에서 30초, 52℃에서 30초, 72℃에서 30초간 반응시키는 싸이클을 1 싸이클(cycle)로 하여 35 싸이클을 실시한 다음, 72℃에서 7분간 반응시켰다. 수득된 PCR 산물 3μl를 Loading STAR(DyneBio Inc., 성남, 한국)와 3:1의 부피비로 혼합한 후, 1% 아가로스겔에 전기영동한 후 자외선 조사기(UV transilluminator)에서 확인하여 그 결과를 도 1에 나타내었다. 즉, 표 2의 균주 목록을 대상으로 PCR 및 전기영동한 결과를 도 1에 나타내었다. 도 1에 표시한 각 번호는 상기 표 2에 표시된 균주를 의미하며, 사용한 Ladder는 1kb DNA Ladder(Bioneer, 대전, 한국)이다.
그 결과, 표 1의 프라이머쌍이 후자리움 아르메니아쿰 균주만 증폭시켰음을 알 수 있었다. 즉, 도 1의 전기영동 결과로부터, 본 발명의 프라이머쌍(FarspF1, FarspR1)은 후자리움 아르메니아쿰(#1~24)만 특이적으로 증폭시키며 후자리움 아르메니아쿰과 형태적으로 유사한 후자리움 아쿠미나툼(Fusarium acuminatum, #25) 뿐만 아니라 T-2 및 HT-2 독소를 생성하면서 유전적으로 매우 가까운 종인 후자리움 랑세치아(Fusarium langsethiae, #30)와 후자리움 스포로트리키오이데스(Fusarium sporotrichioides, #36) 및 공지된 다른 후자리움속 균주는 증폭되지 않는다는 것을 알 수 있었다.
따라서, 본 발명의 프라이머쌍을 이용하면 특이적으로 후자리움 아르메니아쿰 균주만을 특이적으로 우수한 효율로 검출할 수 있음을 알 수 있었다.
<110> REPUBLIC OF KOREA(MANAGEMENT : RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION) <120> Primer set for detecting Fusarium armeniacum and detecting method using the same <130> P15-268 <160> 2 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> primer <400> 1 gggatggtaa gacgatctac 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> primer <400> 2 cttccatcat cacctctgag 20

Claims (5)

  1. 서열번호 1 및 서열번호 2의 염기서열로 표시되는 프라이머쌍을 포함하는 후자리움 아르메니아쿰(Fusarium armeniacum) 종(species) 특이적 검출용 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 프라이머쌍은 PH0 유전자를 증폭시키는 것을 특징으로 하는 후자리움 아르메니아쿰(Fusarium armeniacum) 종(species) 특이적 검출용 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 후자리움 아르메니아쿰은 T-2 독소, HT-2 독소 또는 이들의 혼합물을 생성하는 것을 특징으로 하는 후자리움 아르메니아쿰(Fusarium armeniacum) 종(species) 특이적 검출용 조성물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 따른 후자리움 아르메니아쿰(Fusarium armeniacum) 특이적 검출용 조성물을 포함하는, 후자리움 아르메니아쿰(Fusarium armeniacum) 종(species) 특이적 검출용 PCR 키트.
  5. 서열번호 1 및 서열번호 2의 염기서열로 표시되는 프라이머쌍을 이용하는, 후자리움 아르메니아쿰(Fusarium armeniacum) 종(species) 특이적 검출을 위한 PCR 방법.
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International Journal fo Food Microbiology (2011),Vol.147, pp.58-68.
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