KR101759635B1 - 퇴행성 뇌신경계 질환 개선용 건강기능성 식품 - Google Patents

퇴행성 뇌신경계 질환 개선용 건강기능성 식품 Download PDF

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Abstract

본 발명은 뇌질환 예방 또는 개선용 건강기능성 식품에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 천연물 또는 천연물 유래 추출물을 포함하여 독성이 없으며 높은 뇌신경보호 활성을 가져 뇌질환 예방 또는 개선용으로 적합한 건강기능성 식품에 관한 것이다.

Description

퇴행성 뇌신경계 질환 개선용 건강기능성 식품{Health functional food for preventing neurodegenerative disease}
본 발명은 뇌질환 예방 또는 개선용 건강기능성 식품에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 천연물 또는 천연물 유래 추출물을 포함하여 독성이 없으며 높은 뇌신경보호 활성을 가져 뇌질환 예방 또는 개선용으로 적합한 건강기능성 식품에 관한 것이다.
뇌졸중(stroke)은 암이나 심혈관질환과 함께 사망에 이르게 하는 가장 빈번한 질환 중 하나이고, 뇌졸중이 발생한 후 6시간 내에 신경보호제를 투여하게 되면 뇌졸중에 의해 유도되는 저산소증에 의한 신경세포의 사멸을 감소시킬 수 있는 것으로 알려져 있다(Jiang et al., 2010). 그러나, 뇌졸중 발생 직후 3시간 내에 t-PA(tissue-type plasminogen activator)를 사용하여 혈류를 회복시키는 방법 이외에, 뇌허혈을 치료하는데 임상적으로 효율적인 신경보호제가 제공되어 있지 않다(The National Institute of Neurological Disorders and Stroke rt-PA Stroke Study Group, 1995; Lee et al., 2006).
한편, 뇌질환의 증상을 호전시키는 약물로서 콜린 에스테라제 저해제(choline esterase inhibitors ; ChEIs)가 많이 사용되고 있다. 제1세대 ChEIs로서 최초로 항치매 작용에 있어 적용 승인을 받은 tacrine은 작용지속 기간이 짧아 하루 4번 투여해야 하며, 간 독성이 있어 모니터링에 번거로움이 있다. 요즈음 주목받고 있는 제2세대 ChEIs들로는 일본 에자이사에서 개발되어 96년말 미국 FDA 승인을 받고 97년부터 세계 30여국에서 판매되고 있는 donepezil로 하루 한번 복용할 수 있고, 선택적인 저해로 말초 부작용을 줄였다. Rivastingmine은 미국 노바티스사에서 개발한 약물로, 스위스에서 1997년 12월 승인받아 EU와 남아메리카 국가들에서 사용되고 있고, 미국, 캐나다에서도 승인 준비 중이며, 우리나라에서는 97년 9월 도입되었다. Rivastingmine은 하루 2번 복용이 가능하고 중추신경계에 특이성이 높아 말초 부작용을 크게 감소시켰고, 신장에서 대사되므로 간 독성이 거의 없는 것으로 보고되고 있다. Metrifonate가 치매환자에 3상 임상실험이 진행 중이며, 비가역적인 AChEIs로서 작용 기간이 긴 것으로 보고되고 있다.
종래기술들 중 공개특허 10-2013-0010042(공개일자: 2013년01월24일)에는 흑삼 건조분말 또는 흑삼 추출물을 유효성분으로 함유하는 건망증 개선 및 퇴행성 뇌질환의 예방 및 치료를 위한 조성물, 특히 기억력 감퇴 동물군의 학습증진 및 공간지각 능력을 높은 수준으로 향상시키는 탁월한 효능을 나타내므로 건망증 개선 및 퇴행성 뇌질환 치료에 유용한 의약품 및 건강기능식품 또는 식품첨가물을 기재하고 있다.
그러나 상기 약물들은 일시적으로 증상만 완화시킬 뿐이므로 병을 근원적으로 치료하거나 병의 진행 자체를 억제하는 약물 개발 기술이 절실히 요구되고 있다. 또한, 아밀로이드 베타 단백질의 생성과 아밀로이드 베타 단백질-유도된 세포독성(cytotoxicity)을 저해 또는 차단(blocking) 시켜주는 연구가 계속되고 있으나 이를 실현시켜 주는 신소재나 약은 현재 전무한 실정이다.
본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위하여 안출된 것으로, 천연물 또는 천연물 유래 추출물을 포함하여 독성이 없으며 높은 뇌신경보호 활성을 가져 뇌질환 예방 또는 개선용으로 적합한 건강기능성 식품을 제공하려는 목적이 있다.
본 발명은 율무 및 검정콩을 포함하는 뇌질환 예방 또는 개선용 건강기능성 식품을 제공한다.
본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 율무는 율무 가루, 율무 분획물 및 율무 추출물로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함하고, 상기 검정콩은 검정콩 추출물, 검정콩 가루 및 검정콩 분획물로 이루어진 군 중 1종 이상의 식물로부터 추출한 것일 수 있다.
본 발명의 바람직한 다른 일실시예에 따르면, 상기 건강기능성 식품은 율무 100 중량부에 대하여 검정콩 10 ~ 150 중량부로 포함할 수 있다.
본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상기 건강기능성 식품은 개상사화(Lycoris aurea), 대추, 오가피, 감태(Ecklonia cava) 및 미역으로 이루어진 군 중 1종 이상을 더 포함할 수 있다.
본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상기 건강기능성 식품은 율무 100 중량부에 대하여 개상사화 10 ~ 130 중량부로 포함할 수 있다.
본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상기 건강기능성 식품은 율무 100 중량부에 대하여 대추 70 ~ 250 중량부로 포함할 수 있다.
본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상기 건강기능성 식품은 율무 100 중량부에 대하여 오가피 20 ~ 80 중량부로 포함할 수 있다.
본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상기 건강기능성 식품은 율무 100 중량부에 대하여 감태 30 ~ 200 중량부로 포함할 수 있다.
본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상기 건강기능성 식품은 율무 100 중량부에 대하여 미역 20 ~ 150 중량부로 포함할 수 있다.
본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상기 뇌질환은 뇌졸중, 뇌경색, 뇌허혈 및 저산소성 뇌손상으로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함할 수 있다.
본 발명의 "아세틸콜린에스터레이즈 저해 활성"은 아세틸콜린에스테라제를 억제함으로써 시냅스(synapse) 내의 아세틸콜린(acetylcholine) 농도를 증가시키고, 신경보호작용(neuroprotective effect) 및 신경손상을 회복시키는 작용을 의미한다. 예를 들어, 뇌경색, 뇌출혈과 같은 병변과 같은 뇌의 혈관성 질환에 의한 뇌손상으로 인해 유발된 알츠하이머성 질환의 경우, 뇌 안에서의 아밀로이드 베타 단백질의 축적에 의한 아세틸콜린(acetylcholine, ACh; neurotransmitter)의 레벨(level) 감소가 그 원인의 하나로 지목되고 있는바 아세틸콜린에스터레이즈 저해 활성이 알츠하이머성 질환의 치료를 위한 핵심요소가 될 수 있다.
또한, 상기 "아세틸콜린에스테라제"는 아세틸콜린 가수 분해 효소를 말한다. 뇌조직의 모든 신경세포에서 발견되는 신경전달물질로서 아세틸콜린(Acetylcholine; ACh)은 시냅스(synapse)와 시냅스 사이의 신경전달에 관계하는 중요한 신경전달물질로 알려져 있다. 뇌신경계의 특정부위에서 아세틸콜린(ACh)이 시냅스 전 말단에서 분비되면 그것이 시냅스 후 수용체와 결합하여 신경세포 사이의 자극을 전달한다. 그러나 제 2의 자극이 시냅스를 통해 전달하기 전에 제 1의 자극 시에 분비된 아세틸콜린(ACh)은 아세틸콜린에스터라제(acetylcholinesterase; AChE)에 의하여 가수분해되어야 한다. 그런데 아세틸콜린(ACh)의 함량과 합성효소로서 콜린아세틸트랜스퍼라제(choline acetyltransferase; ChAT)의 활성이 대부분의 사람 및 설치동물에서 연령과 함께 감소하는 것으로 알려져 있다. 또한 아세틸콜린에스터라제의 활성도 아세틸콜린(ACh)와 마찬가지로 감소한다는 사실도 밝혀지고 있다.
본 발명은 천연물 또는 천연물 유래 추출물을 포함하여 독성이 없으며 높은 뇌신경보호 활성을 가져 뇌질환 예방 또는 개선용으로 적합한 건강기능성 식품을 제공하는 효과가 있다.
도 1 내지 4는 실험예 1에서 측정한 산화적 스트레스에 의한 뇌신경 독성으로부터 뇌신경 세포 보호 활성 그래프이다.
도 5 내지 6은 실험예 2에서 측정한 아세틸콜린에스테라제 저해 활성 그래프이다.
이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다.
상술한 바와 같이 현재까지 뇌질환의 약물 개발의 주 표적은 병에서 나타나는 신경전달물질 이상으로 콜린성 신경 세포를 표적으로 한 콜린에스테라제 억제제들(Aricept, Exelon, Reminyl 등)과 글루타메이트 길항제인 Memantine이 FDA 승인을 얻어 현재 시판 중에 있는 것이 전부이다. 하지만 상기 언급한 바와 같이 이들 약물은 일시적으로 증상만 완화시킬 뿐이므로 병을 근원적으로 치료하거나 병의 진행 자체를 억제하는 약물 개발 기술이 절실히 요구되고 있다.
이에 본 발명은 율무 및 검정콩을 포함하는 뇌질환 예방 또는 개선용 건강기능성 식품을 제공함으로써 상술한 문제의 해결을 모색하였다. 이를 통해, 일시적인 증상 완화뿐 아니라 뇌질환을 근원적으로 치료하거나 병의 진행을 억제할 수 있는 뇌신경보호 활성이 높은 건강기능성 식품을 제공하는 효과가 있다.
상기 율무(Coix lachryma - jobi var . ma - yuen)는 통상적으로 수확 및/또는 구매할 수 있는 것이라면 특별히 제한하지 않으며, 그 형태 또한 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 율무 가루, 율무 분획물 및 율무 추출물로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함할 수 있다.
상기 율무 가루는 통상적으로 수확 및/또는 구매할 수 있는 것이라면 특별히 제한하지 않는다. 예를 들면, 율무의 열매를 분쇄 및/또는 파쇄하여 수득한 가루를 사용할 수 있다.
상기 율무 분획물은 율무를 이용하여 수득할 수 있는 통상적인 율무 분획물이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 율무를 유기용매 1로 추출한 후 유기용매 2로 분획하여 제조한 것일 수 있다.
상기 율무 추출물은 율무를 이용하여 수득할 수 있는 통상적인 율무 추출물이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 율무를 유기용매 1로 추출하여 제조한 것일 수 있다.
상기 유기용매 1은 통상적으로 천연물에서 추출물을 추출하는데 사용하는 것이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 물, C1 ~ C4 알코올, 클로로포름, 디클로로메탄, 아세트로나이트릴, 헥산 및 아세트산으로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함하는 것일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 물, 에탄올, 클로로포름, 헥산 및 디클로로메탄으로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함할 수 있다.
상기 추출은 통상적으로 천연물에서 추출물을 추출하는데 사용하는 것이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 초임계추출, 아임계추출, 고온추출, 고압추출 또는 초음파추출법을 사용할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 고온추출, 고압추출 또는 초음파추출법을 사용할 수 있다.
상기 유기용매 2는 통상적으로 천연물에서 추출물을 추출하는데 사용하는 것이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 헥산, C1 ~ C4 알코올, 클로로포름, 디클로로메탄, 아세트로나이트릴, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트 및 물로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트, 헥산, 부탄올 및 메탄올로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함할 수 있다.
상기 분획은 통상적으로 천연물에서 분획물을 분획하는데 사용하는 것이라면 특별히 제한하지 않는다. 예를 들면, 크로마토그래피법, 용매 분획 또는 전기영동법을 수행할 수 있다.
상기 검정콩은 통상적으로 제조 및/또는 구매할 수 있는 것이라면 특별히 제한하지 않으며, 그 형태 또한 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 검정콩 가루, 검정콩 분획물 및 검정콩 추출물로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함할 수 있다.
상기 검정콩 가루는 통상적으로 제조 및/또는 구매할 수 있는 것이라면 특별히 제한하지 않는다. 예를 들면, 검정콩을 분쇄 및/또는 파쇄하여 수득한 가루를 사용할 수 있다.
상기 검정콩 추출물은 통상적으로 제조 및/또는 구매할 수 있는 검정콩 추출물이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 검정콩과 추출용매를 포함하는 혼합물을 추출하여 제조한 것일 수 있다.
상기 추출용매는 통상적으로 천연물에서 추출물을 추출하는데 사용하는 것이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 물, C1 ~ C4 알코올, 디클로로메탄, 아세토나이트릴, 메틸렌클로라이드, 헥산 및 아세트산으로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함하는 것일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 물, 메탄올, 에탄올, 헥산 및 디클로로메탄으로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함할 수 있다.
상기 추출은 통상적으로 천연물에서 추출물을 추출하는데 사용하는 것이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 초임계추출, 아임계추출, 고온추출, 고압추출 또는 초음파추출법을 사용할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 고온추출, 고압추출 또는 초음파추출법을 사용할 수 있다.
상기 검정콩 분획물은 통상적으로 제조 및/또는 구매할 수 있는 검정콩 유래 분획물이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 검정콩에 추출용매를 첨가하여 검정콩 추출물을 제조한 후 검정콩 추출물에 분획용매를 첨가하고 분획하여 검정콩 분획물 제조한 것일 수 있다.
상기 분획용매는 통상적으로 천연물에서 추출물을 추출하는데 사용하는 것이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 물, C1 ~ C4 알코올, 디클로로메탄, 아세토나이트릴, 메틸렌클로라이드, 헥산 및 아세트산으로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함하는 것일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 물, 메탄올, 에탄올, 헥산 및 디클로로메탄으로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함할 수 있다.
상기 건강기능성 식품은 율무와 검정콩을 포함하는 것이라면 그 함량을 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 율무 100 중량부에 대하여 검정콩 10 ~ 150 중량부를 포함할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 율무 100 중량부에 대하여 검정콩 30 ~ 100 중량부로 포함할 수 있다.
만약, 율무 100 중량부에 대하여 검정콩 10 중량부 미만으로 포함할 경우, 뇌신경보호 활성이 낮아 건강기능성 식품으로 사용하기에 힘든 문제점이 발생할 수 있으며, 율무 100 중량부에 대하여 검정콩 150 중량부를 초과하여 포함할 경우, 첨가한 검정콩 함량 대비 뇌신경보호 활성이 낮아 경제적이지 못한 문제점을 발생할 수 있다.
또한, 본 발명의 일구현예에 따르면, 상기 건강기능성 식품은 개상사화(Lycoris aurea), 대추, 오가피, 감태(Ecklonia cava) 및 미역으로 이루어진 군 중 1종 이상을 더 포함할 수 있다.
상기 개상사화(Lycoris aurea)은 통상적으로 재배 및/또는 구매할 수 있는 것이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 개상사화 뿌리 추출물 및 개상사화 뿌리 분획물로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함할 수 있다.
상기 개상사화 뿌리 추출물은 통상적으로 제조 및/또는 구매할 수 있는 것이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 개상사화 뿌리에 유기용매 3을 첨가하여 추출한 것일 수 있다.
상기 유기용매 3은 통상적으로 천연물에서 추출물을 추출하는데 사용하는 것이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 물, C1 ~ C4 알코올, 디클로로메탄, 아세토나이트릴(acetonitrile), 에틸아세테이트(ethyl acetoacetate) 및 아세트산으로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함하는 것일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 물, 에탄올, 메탄올 및 에틸아세테이트(ethyl acetoacetate)로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함할 수 있다.
상기 추출은 통상적으로 천연물에서 추출물을 추출하는데 사용하는 것이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 초임계추출, 아임계추출, 고온추출, 고압추출 또는 초음파추출법을 사용할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 고온추출, 고압추출 또는 초음파추출법을 사용할 수 있다.
상기 개상사화 뿌리 분획물은 통상의 분획 방법으로 수득할 수 있는 개상사화 유래 분획물이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 개상사화를 유기용매 3으로 추출한 후 유기용매 4로 분획하여 제조한 것일 수 있다.
상기 유기용매 4는 통상적으로 천연물에서 분획물을 분획하는데 사용하는 것이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 헥산, C1 ~ C4 알코올, 디클로로메탄, 아세트로나이트릴, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트 및 물로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트, 부탄올 및 메탄올로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함할 수 있다.
상기 분획은 통상적으로 천연물에서 분획물을 분획하는데 사용하는 것이라면 특별히 제한하지 않는다. 예를 들면, 크로마토그래피법, 용매 분획 또는 전기영동법을 수행할 수 있다.
나아가, 상기 건강기능성 식품은 율무 100 중량부에 대하여 개상사화 10 ~ 130 중량부로 포함할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 율무 100 중량부에 대하여 개사상화 50 ~ 120 중량부로 포함할 수 있다.
만약, 율무 100 중량부에 대하여 개상사화를 10 중량부 미만으로 포함할 경우, 개상사화의 첨가로 인해 유발될 수 있는 뇌신경보호 활성이 낮은 문제가 발생할 수 있으며, 율무 100 중량부에 대하여 130 중량부를 초과하는 개상사화를 포함할 경우, 첨가한 개상사화 함량에 비해 뇌신경보호 활성이 낮아 경제적이지 않은 문제점을 발생할 수 있다.
상기 대추는 통상적으로 제조 및/또는 구매할 수 있는 것이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 대추 분말, 대추 추출물 및 대추 분획물로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함할 수 있다.
상기 대추 추출물은 통상적으로 제조 및/또는 구매할 수 있는 것이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 대추에 유기용매 5를 첨가하여 추출한 것일 수 있다.
상기 유기용매 5는 통상적으로 천연물에서 추출물을 추출하는데 사용하는 것이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 물, C1 ~ C4 알코올, 아세트로나이트릴, 메틸렌클로라이드 및 에틸 아세테이트로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함하는 것일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 물, 메탄올, 에탄올 및 헥산으로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함할 수 있다.
상기 추출은 통상적으로 천연물에서 추출물을 추출하는데 사용하는 것이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 초임계추출, 아임계추출, 고온추출, 고압추출 또는 초음파추출법을 사용할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 고온추출, 고압추출 또는 초음파추출법을 사용할 수 있다.
상기 대추 분획물은 통상의 분획 방법으로 수득할 수 있는 대추 분획물이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 대추를 유기용매 5로 추출한 후 유기용매 6으로 분획하여 제조한 것일 수 있다.
상기 유기용매 6은 통상적으로 천연물에서 분획물을 분획하는데 사용하는 것이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 헥산, C1 ~ C4 알코올, 클로로포름, 디클로로메탄, 아세트로나이트릴, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트 및 물로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 클로로포름, 에틸아세테이트, 헥산, 디클로로메탄, 부탄올 및 메탄올로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함할 수 있다.
상기 분획은 통상적으로 천연물에서 분획물을 분획하는데 사용하는 것이라면 특별히 제한하지 않는다. 예를 들면, 크로마토그래피법, 용매 분획 또는 전기영동법을 수행할 수 있다.
더불어, 상기 건강기능성 식품은 율무 100 중량부에 대하여 대추 70 ~ 250 중량부로 포함할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 율무 100 중량부에 대하여 대추 80 ~ 200 중량부로 포함할 수 있다.
만약, 율무 100 중량부에 대하여 대추를 70 중량부로 포함할 경우, 대추의 첨가로 인해 유발될 수 있는 뇌신경보호 활성이 낮은 문제가 발생할 수 있으며, 율무 100 중량부에 대하여 250 중량부를 초과하는 대추를 포함할 경우, 첨가한 대추 함량에 비해 뇌신경보호 활성이 낮아 경제적이지 않은 문제점을 발생할 수 있다.
상기 오가피는 오갈피나무(Acanthopanax sessiliflorum) 또는 동속 식물의 뿌리, 줄기 및 가지의 껍질로, 통상적으로 재배 및/또는 구매할 수 있는 것이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 오갈피나무 뿌리, 줄기, 가지 및 이들의 껍질로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함하는 부분 유래 오가피 추출물; 및 상기 부분 유래 오가피 분획물;로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함할 수 있다.
상기 오가피 추출물은 통상적으로 제조 및/또는 구매할 수 있는 것이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 오갈피나무 뿌리, 줄기, 가지 및 이들의 껍질로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함하는 부분에 유기용매 7을 첨가하여 추출한 것일 수 있다.
상기 유기용매 7은 통상적으로 천연물에서 추출물을 추출하는데 사용하는 것이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 물, C1 ~ C4 알코올, 아세토나이트릴, 헥산 및 아세트산으로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함하는 것일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 물, 헥산, 에탄올, 메탄올 및 부탄올로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함할 수 있다.
상기 추출은 통상적으로 천연물에서 추출물을 추출하는데 사용하는 것이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 초임계추출, 아임계추출, 고온추출, 고압추출 또는 초음파추출법을 사용할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 고온추출, 고압추출 또는 초음파추출법을 사용할 수 있다.
상기 오가피 분획물은 통상의 분획 방법으로 수득할 수 있는 오가피 유래 분획물이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 오갈피나무 뿌리, 줄기, 가지 및 이들의 껍질로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함하는 부분 유기용매 7로 추출한 후 유기용매 8로 분획하여 제조한 것일 수 있다.
상기 유기용매 8은 통상적으로 천연물에서 분획물을 분획하는데 사용하는 것이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 C1 ~ C4 알코올, 클로로포름, 디클로로메탄, 아세토나이트릴, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트 및 물로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 클로로포름, 에틸아세테이트, 헥산, 부탄올, 물 및 메탄올로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함할 수 있다.
상기 분획은 통상적으로 천연물에서 분획물을 분획하는데 사용하는 것이라면 특별히 제한하지 않는다. 예를 들면, 크로마토그래피법, 용매 분획 또는 전기영동법을 수행할 수 있다.
게다가, 상기 건강기능성 식품은 율무 100 중량부에 대하여 오가피 20 ~ 80 중량부로 포함할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 율무 100 중량부에 대하여 오가피 30 ~ 70 중량부로 포함할 수 있다.
만약, 율무 100 중량부에 대하여 오가피를 20 중량부 미만으로 포함할 경우, 오가피의 첨가로 인해 유발될 수 있는 뇌신경보호 활성이 낮은 문제가 발생할 수 있으며, 율무 100 중량부에 대하여 80 중량부를 초과하는 오가피를 포함할 경우, 첨가한 오가피 양에 비해 뇌신경보호 활성이 낮아 경제적이지 않은 문제점을 발생할 수 있다.
상기 감태(Ecklonia cava)는 통상적으로 재배 및/또는 구매할 수 있는 것이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 감태 추출물 및 감태 가루로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함할 수 있다.
상기 감태 추출물은 통상적으로 제조 및/또는 구매할 수 있는 것이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 감태에 유기용매 9를 첨가하여 추출한 것일 수 있다.
상기 유기용매 9는 통상적으로 천연물에서 추출물을 추출하는데 사용하는 것이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 물, C1 ~ C4 알코올, 아세토나이트릴 및 아세트산으로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함하는 것일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 물, 메탄올, 에탄올 및 디클로로메탄으로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함할 수 있다.
상기 추출은 통상적으로 천연물에서 추출물을 추출하는데 사용하는 것이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 초임계추출, 아임계추출, 고온추출, 고압추출 또는 초음파추출법을 사용할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 고온추출, 고압추출 또는 초음파추출법을 사용할 수 있다.
또한, 상기 건강기능성 식품은 율무 100 중량부에 대하여 감태 30 ~ 200 중량부로 포함할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 율무 100 중량부에 대하여 감태 50 ~ 150 중량부로 포함할 수 있다.
만약, 율무 100 중량부에 대하여 감태를 30 중량부 미만으로 포함할 경우, 감태의 첨가로 인해 유발될 수 있는 뇌신경보호 활성이 낮은 문제가 발생할 수 있으며, 율무 100 중량부에 대하여 200 중량부를 초과하는 감태를 포함할 경우, 첨가한 감태 함량에 비해 뇌신경보호 활성이 낮아 경제적이지 않은 문제점을 발생할 수 있다.
상기 미역은 통상적으로 재배 및/또는 구매할 수 있는 것이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 미역 추출물 및 미역 가루로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함할 수 있다.
상기 미역 가루는 통상적으로 제조 및/또는 구매할 수 있는 것이라면 특별히 제한하지 않는다. 예를 들면, 건조한 미역을 분쇄한 가루일 수 있다.
상기 미역 추출물은 통상적으로 제조 및/또는 구매할 수 있는 것이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 미역에 유기용매 10을 첨가하여 추출한 것일 수 있다.
상기 유기용매 10은 통상적으로 천연물에서 추출물을 추출하는데 사용하는 것이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 물, C1 ~ C4 알코올, 디클로로메탄, 아세토나이트릴, 메틸렌클로라이드 및 아세트산으로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함하는 것일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 물, 에탄올, 메탄올, 부탄올 및 디클로로메탄으로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함할 수 있다.
상기 추출은 통상적으로 천연물에서 추출물을 추출하는데 사용하는 것이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 초임계추출, 아임계추출, 고온추출, 고압추출 또는 초음파추출법을 사용할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 고온추출, 고압추출 또는 초음파추출법을 사용할 수 있다.
또한, 상기 건강기능성 식품은 율무 100 중량부에 대하여 미역 20 ~ 150 중량부로 포함할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 율무 100 중량부에 대하여 미역 80 ~ 130 중량부로 포함할 수 있다.
만약, 율무 100 중량부에 대하여 미역을 20 중량부 미만으로 포함할 경우, 미역 첨가로 인해 유발될 수 있는 뇌신경보호 활성이 낮은 문제가 발생할 수 있으며, 율무 100 중량부에 대하여 150 중량부를 초과하는 미역을 포함할 경우, 첨가한 미역 함량에 비해 뇌신경보호 활성이 낮아 경제적이지 않은 문제점을 발생할 수 있다.
본 발명의 다른 일구현예에 따르면, 상기 뇌질환은 뇌졸중, 뇌경색, 뇌허혈 및 저산소성 뇌손상으로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 일구현예에 따르면, 상기 건강기능성 식품은 개사상화, 대추, 오가피, 감태 및 미역을 1: 0.5 ~ 2: 0.1 ~ 1: 0.7 ~ 2.5: 0.1 ~ 1.2 중량비로 포함할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 개사상화, 대추, 오가피, 감태 및 미역을 1: 0.7 ~ 1.5: 0.3 ~ 0.8: 0.8 ~ 1.5: 0.4 ~ 1 중량비로 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 일구현예에 따르면, 상기 건강기능성 식품은 대추 수추출물 및 감태 수추출물을 0.5 ~ 2 : 0.7 ~ 2.5 중량비로 포함할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 대추 수추출물, 오가피 수추출물 및 감태 수추출물을 0.5 ~ 2 : 0.1 ~ 1 : 0.7 ~ 2.5 중량비로 포함할 수 있으며, 이를 통해 현저히 우수한 뇌질환 예방 및 개선의 효과가 있을 수 있다.
상기 건강기능성 식품의 종류에는 통상적으로 제조 및/또는 판매되는 것이라면 특별히 제한하지 않는다. 예를 들면, 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 환제, 분말, 과립, 침제, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있고 통상적인 의미에서의 건강기능성 식품을 모두 포함한다.
본 발명의 건강 음료 조성물은 상술한 바와 같은 천연물 또는 천연물 유래 물질을 함유하는 것 외에는 액체성분에는 특별한 제한은 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.
통상적으로, 건강기능성 식품 조성물에 포함되는 상술한 바와 같은 천연물 또는 천연물 유래 물질의 함량은 전체 식품 중량의 0.1 ~ 50 중량%을, 바람직하게는 1 ~ 40 중량%을 포함할 수 있다. 또한, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용할 수도 있다.
이하 첨부된 하기 실시예를 통해 본 발명을 보다 상세히 설명한다. 그러나 이러한 도면과 하기 실시예는 본 발명의 기술적 사상의 내용과 범위를 쉽게 설명하기 위한 예시일 뿐, 이에 의해 본 발명의 기술적 범위가 한정되거나 변경되는 것은 아니다. 또한 이러한 예시에 기초하여 본 발명의 기술적 사상의 범위 안에서 다양한 변형과 변경 가능함은 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
[ 실시예 ]
준비예 1. 율무 가루
본 발명에서 사용한 율무는 경기도 연천군의 전곡시장에서 한국산으로 구매하여 세척한 후 동결 건조한 다음 분쇄하여 율무 가루 1㎏을 준비하였다.
준비예 2.
준비예 1에서 수득한 율무 가루 1㎏과 에탄올을 1 : 5 부피비로 혼합한 후 25 ℃에서 3회 추출하여 추출물을 제조하고, 추출물은 여과지에 여과한 후 감압농축하여 200 g의 율무 에탄올 추출물을 수득하였다.
준비예 3.
추출 용매로 물을 사용하고, 율무 가루와 물을 1 : 10 부피비로 혼합하며, 80 ℃에서 추출한 것을 제외하고는 준비예 2와 동일한 방법으로 율무 수추출물 100 g을 수득하였다.
준비예 4.
추출 용매로 메탄올을 사용한 것을 제외하고는 준비예 2와 동일한 방법으로 율무 메탄올 추출물 200 g을 수득하였다. 이후 율무 메탄올 추출물 200 g을 증류수 2 ℓ에 현탁하고 헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트, 부탄올로 분획하고, 각각 분획된 회전식 진공농축기를 이용하여 농축한 후 헥산 분획물, 디클로로메탄 분획물, 에틸아세테이트 분획물 및 부탄올 분획물을 수득하였다. 그 중 헥산 분획물과 부탄올 분획물을 선발하였다.
준비예 5.
경기도 연천군 전곡재래시장에서 구매한 검정콩을 수세하고 건조한 후 분쇄기로 분쇄하여 검정콩 가루를 제조하였다. 이후 검정콩 가루 중량대비 7배의 헥산을 첨가하고 25 ℃에서 24시간 동안 추출하는 것을 1회로 3회 추출하여 지질성분을 제거한 후 남은 여과물에 중량대비 5배의 메탄올을 첨가하고 70 ℃에서 5시간 동안 추출하는 것을 1회로 3회 환류 추출하였다. 이후 whatman No.42 여과지로 여과한 후 증발기(EYELA사, N-1000, 일본)를 이용하여 감압농축하여 검정콩 메탄올 추출물을 수득하였다.
준비예 6.
준비예 5에서 수득한 검정콩 메탄올 추출물을 물에 현탁한 후 헥산, 에틸아세테이트, 부탄올로 액-액분배하여 헥산 분획물, 에틸아세테이트 분획물과 부탄올 분획물을 수득하였다.
구체적으로, 검정콩 메탄올 추출물을 현탁한 물에 헥산을 가하여 진탕 추출하고 분액깔대기에서 분획하여 헥산층과 물층을 분취한 후, 헥산층을 감압농축하여 헥산 분획물을 수득하였다. 이후 남은 물층에 에틸아세테이트를 첨가하여 진탕 추출하고 분액깔대기에서 분획하여 에틸아세테이트층과 물층을 분취한 후, 에틸아세테이트층을 감압농축하여 에틸아세테이트 분획물을 수득하였다. 이후 남은 물층에 상술한 바와 동일한 방법으로 부탄올을 첨가, 진탕추출, 분획 및 감압농축하여 부탄올 분획물을 수득하였다. 이후 물층을 농축하여 물 분획물을 수득하였다. 이중 에틸아세테이트 분획물을 선별하였다.
준비예 7.
경기도 연천군 전곡재래시장에서 구매한 개상사화(Lycoris aurea)의 뿌리를 수세하고 세절 및 0.1 ㎝ 이내로 분쇄한 후 중량대비 3배의 메탄올을 첨가하고 70 ℃에서 3 시간 동안 환류 추출하는 것을 1회로 3회 추출하여 추출물을 제조하고, 추출물은 여과지에 여과한 후 감압농축하여 개상사화 메탄올 추출물을 수득하였다.
준비예 8.
준비예 7의 개상사화 메탄올 추출물을 물에 현탁한 후 헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트, 부탄올로 액-액분배하여 헥산 분획물, 디클로로메탄 분획물, 에틸아세테이트 분획물과 부탄올 분획물을 수득하였다.
구체적으로, 방풍 메탄올 추출물을 현탁한 물에 헥산을 가하여 진탕 추출하고 분액깔대기에서 분획하여 헥산층과 물층을 분취한 후, 헥산층을 감압농축하여 헥산 분획물을 수득하였다.
이후 남은 물층에 디클로로메탄을 첨가하여 진탕 추출하고 분액깔대기에서 분획하여 디클로로메탄층과 물층을 분취한 후, 디클로로메탄층을 감압농축하여 디클로로메탄 분획물을 수득하였다.
이후 남은 물층에 상술한 바와 동일한 방법으로 에틸아세테이트를 첨가하여 진탕 추출, 분액깔대기 분획 및 감압농축하여 에틸아세테이트 분획물을 수득하였다.
이후 남은 물층에 상술한 바와 동일한 방법으로 부탄올을 첨가, 진탕추출, 분획 및 감압농축하여 부탄올 분획물을 수득하였다. 이후 물층을 농축하여 물 분획물을 수득하였다. 이중 에틸아세테이트 분획물을 선별하였다.
준비예 9.
본 발명에서 사용한 대추는 경기도 연천군 전곡재래시장에서 구매하여 증류수로 세척하고 대추 과육과 대추 씨를 분리하고 대추 과육을 건조한 후 분쇄하여 대추 분쇄물(대추 가루)을 수득하였다.
준비예 10.
준비예 9의 대추 가루에 중량대비 12배의 물을 첨가한 후 80 ℃에서 4 시간 동안 추출하는 것을 1회로 총 3회 추출하여 추출물을 제조한 후 여과지에 여과한 후 증발기(EYELA사, N-1000, 일본)를 이용하여 감압농축하여 대추 수추출물을 수득하였다.
준비예 11.
본 발명에서 사용한 오가피는 경기도 연천군 전곡재래시장의 한약재상에서 오갈피나무의 줄기, 줄기 껍질, 뿌리 및 가지를 포함하는 것으로서, 국내산으로 구매하고 분쇄하여 오가피 가루를 준비하였다. 이후 오가피 가루 중량대비 10배의 증류수를 첨가한 후 100 ℃에서 4 시간 동안 환류 추출하는 것을 1회로 총 3회 추출하여 추출물을 제조하고, 추출물은 여과지에 여과한 후 증발기(EYELA사, N-1000, 일본)를 이용하여 감압농축하여 오가피 수추출물을 수득하였다.
준비예 12.
본 발명에서 사용한 감태는 경기도 연천군 전곡재래시장에서 국내산으로 구매하고 수세, 건조 및 분쇄하여 감태 가루를 준비하였다.
준비예 13.
준비예 12에서 준비한 감태 가루와 증류수를 1 : 10 중량비로 혼합하고, 25 ℃에서 24 시간 동안 진탕추출하는 것을 1회로 총 3회 추출한 후 여과지에 여과하고 증발기(EYELA사, N-1000, 일본)를 이용하여 감압농축하여 감태 수추출물을 수득하였다.
준비예 14.
본 발명에서 사용한 미역은 경기도 연천군의 전곡시장에서 한국산으로 구매하고 수세한 후 건조하고 세절 및 분쇄하여 미역 가루 1㎏을 준비하였다.
준비예 15.
준비예 14에서 준비한 미역 가루 100g당 1ℓ의 물을 혼합한 후 80 ℃에서 4 시간 동안 추출하는 것을 1회로, 총 3회 추출하여 미역 추출물을 제조하고, 미역 추출물을 2,000 rpm으로 원심분리하고 상등액만 분리하였다. 이후 상등액을 여과지에 여과한 후 증발기(EYELA사, N-1000, 일본)를 이용하여 감압농축하여 미역 수추출물을 수득하였다.
실시예 1.
준비예 1의 율무 가루 100 g과 준비예 5의 검정콩 메탄올 추출물 50g을 혼합하여 혼합물을 제조하였다.
실시예 2 ~ 15.
하기 표 1의 혼합비로 혼합하여 혼합물을 제조하였다.
성분 및 함량
실시예 2 준비예 1 율무 가루 100g 준비예 5 검정콩 메탄올 추출물 50g 준비예 7 개상사화 메탄올 추출물 100g
실시예 3 준비예 2의 율무 에탄올 추출물 100g 준비예 5 검정콩 메탄올 추출물 50g 준비예 8 개상사화 에틸아세테이트 분획물 100g
실시예 4 준비예 2의 율무 에탄올 추출물 100g 준비예 6 검정콩 에틸아세테이트 분획물 50g 준비예 8 개상사화 에틸아세테이트 분획물 100g
실시예 5 준비예 3의 율무 수추출물 100g 준비예 6 검정콩 에틸아세테이트 분획물 50g 준비예 9 대추 가루 100 g
실시예 6 준비예 3의 율무 수추출물 100g 준비예 6 검정콩 에틸아세테이트 분획물 10g 준비예 10 대추 수추출물 100 g
실시예 7 준비예 4의 율무 헥산 분획물 100g 준비예 5 검정콩 메탄올 추출물 50g 준비예 10 대추 수추출물 100 g
실시예 8 준비예 4 율무 디클로로메탄 분획물 100g 준비예 5 검정콩 메탄올 추출물 50g 준비예 10 대추 수추출물 100 g
실시예 9 준비예 4 율무 부탄올 분획물 100g 준비예 5 검정콩 메탄올 추출물 50g 준비예 10 대추 수추출물 100 g 준비예 12 감태 가루 100g
실시예 10 준비예 4의 율무 부탄올 분획물 100g 준비예 5 검정콩 메탄올 추출물 50g 준비예 10 대추 수추출물 100 g 준비예 13 감태 수추출물 100g
실시예 11 준비예 4의 율무 부탄올 분획물 100g 준비예 6 검정콩 에틸아세테이트 분획물 50g 준비예 10 대추 수추출물 100 g 준비예 11 오가피 수추출물 50 g 준비예 13 감태 수추출물 100 g
실시예 12 준비예 3의 율무 수추출물 100g 준비예 5 검정콩 메탄올 추출물 50g 준비예 8 개상사화 에틸아세테이트 분획물 100g 준비예 14 미역 가루 100 g
실시예 13 준비예 1 율무 가루 100g 준비예 6 검정콩 에틸아세테이트 분획물 50g 준비예 9 대추 가루 100 g 준비예 13 감태 수추출물 100g
실시예 14 준비예 2의 율무 에탄올 추출물 100g 준비예 5 검정콩 메탄올 추출물 50g 준비예 10 대추 수추출물 100 g 준비예 14 미역 가루 100g
실시예 15 준비예 2의 율무 에탄올 추출물 100g 준비예 6 검정콩 에틸아세테이트 분획물 50g 준비예 11 오가피 수추출물 50g 준비예 15 미역 수추출물 100 g
실험예 1. 뇌 신경 세포 보호 활성 확인
실시예 1 내지 15의 혼합물 및 준비예 1 내지 15의 천연물 또는 천연물 유래 물질의 신경 세포 괴사 저해능을 측정하였다.
PC12 세포(ATCC, CRL-1721)를 항진균제/항생제(antimycotics/ antibiotics) 를 함유하는 RPMI-1640 배지(GIBCO-Invitrogen Corp.,Grand Island, NY, USA)에서 배양하여 세포수가 104 ~ 106 cell/㎖가 되었을 때 100 μM의 과산화수소를 처리하여 산화 스트레스를 유도하였다. 산화적 손상 정도를 DCF-DA(2',7'-dichlorofluorescin diacetate)(Sigma-Aldrich Inc., St. Louis, MO, USA) 분석법을 이용하여 형광분광광도계(spectrofluorometer)를 통해서 측정함으로써 실시예 1 내지 15의 혼합물 및 준비예 1 내지 15의 천연물 또는 천연물 유래 물질의 산화적 스트레스로 인한 독성에 대한 뇌 신경 세포 보호활성을 확인하였다.
구체적으로, PC12 cell을 이용하여 세포 수가 105 cells/㎖일 때 96 well에 100 ㎕씩 분주(seeding)한 후 하루밤 경과(overnight) 후에 실시예 1 내지 15의 혼합물 및 준비예 1 내지 15의 천연물 또는 천연물 유래 물질을 증류수(distilled water; DW)로 녹여 1 ㎎/㎖로 20 ㎕씩 전처리하였다. 전처리 이틀(48시간) 후 세포에 상해를 줄 수 있는 과산화수소(H2O2)(최종 농도: 100 μM)를 처리하고 2시간 후 DCF-DA용액을 제조하여 세포에 처리한 후 어두운 조건 하에 인큐베이터(incubator)에서 50분 배양하고 spectrofluorometer(파장: excitation 485 ㎚, emission 535 ㎚)를 이용하여 측정한다. 과산화수소(H2O2)의 독성을 견뎌낸 세포가 있다면 DCF-DA는 세포 내부의 슈퍼옥사이드(superoxide)와 반응하여 아세트초산염(diacetate; DA)이 떨어져 나가면서 형광을 나타내게 된다. 이를 이용한 DCF-DA assay로 이 형광의 정도로 세포 독성(cell cytotoxicity)을 측정하였다. 측정 결과는 도 1 내지 2 및 표 2에 나타냈다.
또한, 세포 생존율(Cell viability)은 MTT Sigma-Aldrich Inc., St. Louis, MO, USA) reduction assay를 통해 측정하였다. PC12 cell을 이용하여 세포 수가 105 cell/㎖일 때 96 well에 실시예 1 내지 15의 혼합물 또는 준비예 1 내지 14의 천연물 또는 천연물 유래 물질을 증류수(distilled water; DW)로 녹여 1 ㎎/㎖로 100 ㎕씩 분주(seeding)한 후 하루밤 경과(overnight) 후에 실시예 1 내지 15의 혼합물 및 준비예 1 내지 15의 천연물 또는 천연물 유래 물질을 증류수로 녹여 1 ㎎/㎖로 30 ㎕씩 전처리하였다. 이틀(48시간) 후 세포에 상해를 줄 수 있는 과산화수소(H2O2)를 처리하고 2시간 후 MTT 용액을 2.5 ㎎/㎖로 제조하여 세포에 처리해주어 어두운 조건하에 인큐베이터(incubator)에서 3시간 배양하였다. 그 후에 디메틸설폭사이드(DMSO; Dimethyl sulfoxide)를 처리한 후 microplate reader(파장: measurement 570 ㎚, reference 630 ㎚)를 이용하여 흡광도를 측정하였다. 살아있는 세포들은 호흡을 통하여 환원된 니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드(Nicotinamide adenine dinucleotide H; NADH)를 생성하게 되고 이 NADH는 MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)와 반응하여 보라색의 포르마잔 결정(formazan crystal)을 형성한다. MTT reduction assay를 통하여 이 보라색의 formazan crystal의 흡광도를 측정하였다. 측정한 세포 생존율은 도 3 내지 4 및 표 2에 나타냈다.
DCF 형성(%) 세포 생존율(%)
무처리구 100 100
H2O2 처리구 245 28
실시예 1 221 36
실시예 2 213 37
실시예 3 205 38
실시예 4 179 45
실시예 5 198 40
실시예 6 200 39
실시예 7 185 43
실시예 8 190 42
실시예 9 143 60
실시예 10 126 68
실시예 11 120 71
실시예 12 152 57
실시예 13 135 64
실시예 14 157 55
실시예 15 162 52
준비예 1 230 30
준비예 2 222 33
준비예 3 225 30
준비예 4(헥산) 215 36
준비예 5 226 31
준비예 6 217 37
준비예 7 235 29
준비예 8
(에틸아세테이트; EtAc)		 228 35
준비예 9 238 29
준비예 10 227 30
준비예 11 225 29
준비예 12 223 30
준비예 13 218 34
준비예 14 236 31
준비예 15 225 33
도 1 내지 4 및 표 2에서 확인되는 바와 같이, 실시예 1 내지 15의 혼합물이 준비예 1 내지 15의 천연물 또는 천연물 유래 물질보다 뇌신경세포 보호 활성이 높은 것을 알 수 있었다. 특히, 실시예 10의 율무 부탄올 분획물, 검정콩 에틸아세테이트 분획물, 대추 수추출물 및 감태 수추출물을 포함하는 혼합물이 뇌신경세포 보호 활성이 높았고, 산화적 스트레스에 의한 뇌신경 독성으로부터 뇌신경세포 보호 활성이 가장 높은 것은 실시예 11의 율무 부탄올 분획물, 검정콩 에틸아세테이트 분획물, 대추 수추출물, 오가피 수추출물 및 감태 수추출물을 포함하는 혼합물임을 확인할 수 있었다.
실험예 2. 아세틸콜린에스테라제 ( acetylcholinesterase , AChE ) 저해 활성
아세틸콜린에스테라제 저해 활성 측정은 아세틸콜린 아이오다이드 (acetylcholine iodide)를 기질을 사용하여 측정하였다.
구체적으로, 효소는 PC12 세포배양액 1 ㎖에 균질화를 위한 버퍼(1 M NaCl, 50 mM MgCl2, 1% Triton X-100 혼합액에 10 mM Tris-HCl로 pH 7.2로 조정) 5 ㎖를 첨가하여 글라스-콜 호모게나이져(Glass-Col homogenizer)로 균질화하였다. 균질화한 세포배양액을 10,000 rpm에서 30분 동안 원심 분리하였으며, 그 상징액을 효소실험을 위하여 사용하였다. 모든 추출공정은 4℃에서 수행하였으며, 추출한 효소액의 단백질 함량을 측정하기 위하여 BCA kit(bicin-choninic acid; Sigma Co., St. Louis, Mo, USA)를 이용하였고, 소혈청 알부민(vine serum albumin)으로 작성한 검량곡선에 준하여 함량을 환산하였다. 정제효소(단백질 함량: 2.38 ㎎/㎖) 10 ㎕에 실시예 1 내지 15의 혼합물 및 준비예 1 내지 15의 천연물 또는 천연물 유래 물질을 증류수(distilled water; DW)로 녹여 1 ㎎/㎖로 30 ㎕를 넣어 37℃에서 15분간 반응시켰으며, 반응 혼합물에 50 mM 소디움 포스페이트 버퍼(sodium phosphate buffer ; pH 8.0)에 용해시킨 Ellman's reaction mixture[0.5 mM acetylthiocholine, 1 mM 5,5'dithio-bis(2-nitro benzoic acid)] 70 ㎕를 첨가한 후 405 ㎚에서 10분 동안 2분 간격으로 흡광도를 측정하였다. 측정 결과는 도 5 내지 6 및 표 3에 나타냈다.
아세틸콜린에스터라제의 저해활성(%)
무처리구 100
실시예 1 65
실시예 2 66
실시예 3 67
실시예 4 75
실시예 5 69
실시예 6 68
실시예 7 73
실시예 8 71
실시예 9 90
실시예 10 97
실시예 11 98
실시예 12 87
실시예 13 94
실시예 14 85
실시예 15 82
준비예 1 45
준비예 2 48
준비예 3 45
준비예 4(헥산) 51
준비예 5 47
준비예 6 52
준비예 7 44
준비예 8(에틸아세테이트; EtAc) 50
준비예 9 44
준비예 10 46
준비예 11 49
준비예 12 46
준비예 13 48
준비예 14 47
준비예 15 49
도 5 내지 6 및 표 3에서 확인되는 바와 같이, 실시예 1 내지 15의 혼합물이 준비예 1 내지 15의 천연물 또는 천연물 유래 물질보다 아세틸콜린에스터라제의 저해 활성이 높은 것을 알 수 있었다. 특히, 실시예 10의 율무 부탄올 분획물, 검정콩 에틸아세테이트 분획물, 대추 수추출물 및 감태 수추출물을 포함하는 혼합물이 아세틸콜린에스터라제의 저해 활성이 현저히 높았으며, 가장 높은 아세틸콜린에스터라제의 저해 활성을 보인 것은 실시예 11의 율무 부탄올 분획물, 검정콩 에틸아세테이트 분획물, 대추 수추출물, 오가피 수추출물 및 감태 수추출물을 포함하는 혼합물임을 확인할 수 있었다.
준비예, 실시예 및 실험예에서 확인되는 바와 같이, 본 발명의 천연물 또는 천연물 유래 추출물을 포함하는 혼합물은 독성이 없으며 높은 뇌신경보호 활성을 가져 뇌질환 예방 또는 개선용으로 적합한 건강기능성 식품을 제공하는 것을 알 수 있었다.
이하, 본 발명의 바람직한 일구현예에 따른 뇌질환 예방 또는 개선용 건강 기능성 식품을 포함하는 함유하는 건강기능식품의 제조예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
[제조예]
뇌질환 예방 또는 개선용 건강기능성 식품 65중량%, 인삼 추출물 5중량%, 헛개나무 열매 추출물 5중량%, 포도당 1중량%, 꿀 1중량%, 솔비톨(sorbitol) 1중량%, 자일리톨(xylitol) 1중량%, 만니톨(mannitol) 1중량%, 람니톨(rhamnitol) 1중량%, 이노시톨(Inositol) 1중량%, 에리스리톨(Erythritol) 1중량%, 파라티노스 1중량%, 쿠에르시톨(quercitol) 1중량% 및 잔량을 정제수로 첨가하여 기능성 음료를 제조하였다.

Claims (11)

  1. 율무 메탄올 추출물의 부탄올 분획물, 검정콩 추출물, 대추 수추출물 및 감태 수 추출물을 유효성분으로 포함하는, 퇴행성 뇌신경계 질환의 예방용 건강기능성 식품으로서;
    상기 검정콩 추출물은 검정콩 메탄올 추출물 또는 이의 에틸아세테이트 분획물이고; 및
    상기 율무 메탄올 추출물의 부탄올 분획물 100 중량부에 대하여, 상기 검정콩 추출물 30 ~ 100 중량부로 포함하고, 상기 대추 수추출물 80 ~ 200 중량부를 포함하며, 상기 감태 수 추출물을 50 ~ 150 중량부로 포함하는;
    퇴행성 뇌신경계 질환의 예방용 건강기능성 식품.
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  10. 제1항에 있어서, 상기 건강기능성 식품은 유효성분으로서 율무 메탄올 추출물의 부탄올 분획물 100 중량부에 대하여 오가피 수추출물을 30 ~ 70 중량부로 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 퇴행성 뇌신경계 질환의 예방용 건강기능성 식품.
  11. 제1항에 있어서, 상기 퇴행성 뇌신경계 질환은 뇌졸중, 뇌경색, 뇌허혈 및 저산소성 뇌손상으로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 퇴행성 뇌신경계 질환의 예방용 건강기능성 식품.
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