KR101743018B1 - 이산화탄소로부터의 바이오디젤 생산능을 갖는 형질전환된 시네코코커스 일롱게투스 균주 및 이를 이용한 바이오디젤 생산방법 - Google Patents
이산화탄소로부터의 바이오디젤 생산능을 갖는 형질전환된 시네코코커스 일롱게투스 균주 및 이를 이용한 바이오디젤 생산방법 Download PDFInfo
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Abstract
본 명세서에는 이산화탄소로부터 직접 바이오디젤을 생성할 수 있는 형질전환된 시네코코커스 일롱게투스 균주(Synechococcus elongatus), 이를 이용한 바이오디젤의 생산방법 및 이산화탄소 제거방법이 개시된다. 일 측면에 있어서, 본 발명의 형질전환된 시네코코커스 일롱게투스균주는, 이산화탄소를 탄소원으로 사용하여 바이오디젤을 대량생산할 수 있다. 상기 시네코코커스 일롱게투스 균주는 대기중에 존재하는 이산화탄소를 탄소원으로 사용하여, 경제적이고, 미생물을 사용하여, 대기 중의 이산화탄소를 제거 또는 저감하는데 활용될 수 있으므로, 친환경적이다. 본 발명의 균주는 다른 광합성 미생물과 비교하여 성장 속도가 빠르고 이산화탄소 고정력이 뛰어나 바이오디젤을 대량 생산할 수 있는 이점이 있다.
Description
본 명세서에는 이산화탄소로부터 직접 바이오디젤을 생성할 수 있는 형질전환된 시네코코커스 일롱게투스 균주, 이를 이용한 바이오디젤의 생산방법 및 이산화탄소 제거방법이 개시된다.
화석연료의 대량소비로 인하여 한정된 에너지 자원의 고갈 위기에 직면하게 되면서 원유의 수급차질에 따른 고유가 문제가 계속되고 있고, 화석연료의 소비량에 비례하여 지구온난화 및 환경오염의 문제가 지속적으로 대두되고 있다. 이로 인해 세계 각국에서는 화석연료를 대체할 수 있는 다양한 형태의 에너지원에 대한 연구가 활발하게 이루어지고 있으며, 막대한 에너지 자원의 대부분을 수입에 의존하고 있는 우리나라에서 또한 대체에너지 개발에 관계된 많은 연구와 노력이 기울여지고 있다. 현재 대체 에너지원 탐색의 일환으로 재생 가능 에너지라 불리는 바이오 에너지의 개발이 상당히 진척되고 있는데, 그 중 재생성을 갖는 동, 식물성 기름으로부터 생산 가능한 청정 대체 연료인 바이오디젤에 대한 관심이 높아지고 있는 실정이다.
바이오디젤은 대부분 대두유나 팜유 등 식물성 작물의 유지로부터 생산되고 있다. 그러나 바이오디젤의 원료인 대두유나 팜유는 대한민국의 경우 주로 수입에 의존하
고 있는 실정이며 식량과 연계된 자원으로 국제적인 환경변화에 크게 영향을 받아 가격이 높고 불안정하다는 문제점이 존재한다. 이러한 상황에서 국내의 에너지 안보는 석유뿐만 아니라 석유 대체연료에서도 위협을 받고 있는 실정으로 저가의 원료 또는 국내자원을 이용할 수 있는 방안을 마련하는 것이 절실하다.
바이오에너지 시장동향과 대응과제, 산은경제연구소, 1-21pages, 2007.7.
일 측면에서, 본 발명의 목적은, 바이오디젤 생산 능력이 있는 시네코코커스 일롱게투스(Synechococcus elongatus) 균주를 제공하는 것이다.
다른 측면에서, 본 발명의 목적은, 미생물을 이용하여 친환경적 방법으로 바이오디젤을 생산하는 것이다.
다른 측면에서, 본 발명의 목적은, 시네코코커스 일롱게투스 균주를 이용하여, 바이오디젤을 대량생산하는 것이다.
다른 측면에서, 본 발명의 목적은, 대기 중의 이산화탄소를 제거하면서, 바이오디젤을 생산하는 것이다.
일 측면에서, 본 발명은, 피루빈산(pyruvate)으로부터 아세트알데히드를 생산하는 효소를 코딩하는 유전자; 아세트알데히드로부터 에탄올을 생산하는 효소를 코딩하는 유전자; 및 아실조효소에이(acyl-coenzyme A) 및 에탄올로부터 바이오디젤을 생산하는 효소를 코딩하는 유전자를 포함하는, 시네코코커스 일롱게투스(Synechococcus elongatus) 균주를 제공한다.
다른 측면에서, 본 발명은, 시네코코커스 일롱게투스(Synechococcus elongatus) 균주를 배양하는 단계를 포함하는, 바이오디젤 생산방법을 제공한다.
다른 측면에서, 본 발명은, 시네코코커스 일롱게투스(Synechococcus elongatus) 균주를 배양하는 단계를 포함하는, 이산화탄소 제거방법을 제공한다.
일 측면에 있어서, 본 발명의 형질전환된 시네코코커스 일롱게투스(Synechococcus elongatus) 균주는, 이산화탄소를 탄소원으로 사용하여 바이오디젤을 대량생산할 수 있다. 상기 시네코코커스 일롱게투스 균주는 대기중에 존재하는 이산화탄소를 탄소원으로 사용하여, 경제적이고, 생산된 바이오디젤은 균주 세포외로 분비되어, 별도의 공정을 거치지 않고도 바이오디젤을 얻을 수 있어서 편리하다. 또한, 미생물을 사용하여, 대기 중의 이산화탄소를 제거 또는 저감하는데 활용될 수 있으므로, 친환경적이다. 본 발명의 균주는 다른 광합성 미생물과 비교하여 성장 속도가 빠르고 이산화탄소 고정력이 뛰어나 바이오디젤을 대량 생산할 수 있는 이점이 있다.
도1은, 형질전환된 시네코코커스 일롱게투스 균주의 지방산 에틸 에스테르(FAEE) 생산 경로를 보이는 도이다.
도 2는, 각 벡터의 모식도이다(도2a: pSe2Bb1k-pdc,adh 벡터, 도2b: pSe1Bb1s-atfA 벡터, 도2c: pSe[FadE]Bb1c-tesA 벡터).
도3은, pSe2Bb1k-pdc,adh 벡터로 형질전환된 균주의 세포성장(도3a)와 에탄올 생산(도3b)을 확인한 도이다.
도4은, pSe2Bb1k-pdc,adh 벡터와 pSe1Bb1s-atfA 벡터로 형질전환된 균주(사각형 점으로 표시됨)와, pSe2Bb1k-pdc,adh 벡터와 pSe1Bb1s-Ws2 벡터로 형질전환된 균주(둥근 점으로 표시됨)의 세포성장(도4a)와 에탄올 생산(도4b)을 확인한 도이다.
도5는, pSe2Bb1k-pdc,adh 벡터와 pSe1Bb1s-atfA 벡터로 형질전환된 균주(도5a)와 pSe2Bb1k-pdc,adh 벡터와 pSe1Bb1s-Ws2 벡터로 형질전환된 균주(도5b)의 지방산 에틸 에스테르 생산량을 보이는 도이다.
도6은, pSe2Bb1k-pdc,adh 벡터, pSe1Bb1s-atfA 벡터 및 pSe[FadE]Bb1c-tesA 벡터로 형질전환된 균주(사각형 점으로 표시됨)와 pSe2Bb1k-pdc,adh 벡터, pSe1Bb1s-Ws2 벡터 및 pSe[FadE]Bb1c-tesA 벡터로 형질전환된 균주(둥근 점으로 표시됨)의 세포성장(도6a)와 에탄올 생산(도6b)을 확인한 도이다.
도7은, pSe2Bb1k-pdc,adh 벡터, pSe1Bb1s-atfA 벡터 및 pSe[FadE]Bb1c-tesA 벡터로 형질전환된 균주(도7a)와 pSe2Bb1k-pdc,adh 벡터, pSe1Bb1s-Ws2 벡터 및 pSe[FadE]Bb1c-tesA 벡터로 형질전환된 균주(도7b)의 지방산 에틸 에스테르 생산량을 보이는 도이다.
도 8은 pdc 유래 유전자 서열을 보이는 도이다.
도 9는 adh 유래 유전자 서열을 보이는 도이다.
도 10은 atfA 유래 유전자 서열을 보이는 도이다.
도 11은 Ws2 유래 유전자 서열을 보이는 도이다.
도 12는 tesA 유래 유전자 서열을 보이는 도이다.
도 13은 차례대로 pSe2Bb1k-pdc,adh 벡터의 서열을 보이는 도이다.
도 14는 차례대로 pSe1Bb1s-atfA 벡터의 서열을 보이는 도이다.
도 15는 차례대로 pSe1Bb1s-Ws2 벡터의 서열을 보이는 도이다.
도 16은 차례대로 pSe[FadE]Bb1c-tesA 벡터의 서열을 보이는 도이다.
도 2는, 각 벡터의 모식도이다(도2a: pSe2Bb1k-pdc,adh 벡터, 도2b: pSe1Bb1s-atfA 벡터, 도2c: pSe[FadE]Bb1c-tesA 벡터).
도3은, pSe2Bb1k-pdc,adh 벡터로 형질전환된 균주의 세포성장(도3a)와 에탄올 생산(도3b)을 확인한 도이다.
도4은, pSe2Bb1k-pdc,adh 벡터와 pSe1Bb1s-atfA 벡터로 형질전환된 균주(사각형 점으로 표시됨)와, pSe2Bb1k-pdc,adh 벡터와 pSe1Bb1s-Ws2 벡터로 형질전환된 균주(둥근 점으로 표시됨)의 세포성장(도4a)와 에탄올 생산(도4b)을 확인한 도이다.
도5는, pSe2Bb1k-pdc,adh 벡터와 pSe1Bb1s-atfA 벡터로 형질전환된 균주(도5a)와 pSe2Bb1k-pdc,adh 벡터와 pSe1Bb1s-Ws2 벡터로 형질전환된 균주(도5b)의 지방산 에틸 에스테르 생산량을 보이는 도이다.
도6은, pSe2Bb1k-pdc,adh 벡터, pSe1Bb1s-atfA 벡터 및 pSe[FadE]Bb1c-tesA 벡터로 형질전환된 균주(사각형 점으로 표시됨)와 pSe2Bb1k-pdc,adh 벡터, pSe1Bb1s-Ws2 벡터 및 pSe[FadE]Bb1c-tesA 벡터로 형질전환된 균주(둥근 점으로 표시됨)의 세포성장(도6a)와 에탄올 생산(도6b)을 확인한 도이다.
도7은, pSe2Bb1k-pdc,adh 벡터, pSe1Bb1s-atfA 벡터 및 pSe[FadE]Bb1c-tesA 벡터로 형질전환된 균주(도7a)와 pSe2Bb1k-pdc,adh 벡터, pSe1Bb1s-Ws2 벡터 및 pSe[FadE]Bb1c-tesA 벡터로 형질전환된 균주(도7b)의 지방산 에틸 에스테르 생산량을 보이는 도이다.
도 8은 pdc 유래 유전자 서열을 보이는 도이다.
도 9는 adh 유래 유전자 서열을 보이는 도이다.
도 10은 atfA 유래 유전자 서열을 보이는 도이다.
도 11은 Ws2 유래 유전자 서열을 보이는 도이다.
도 12는 tesA 유래 유전자 서열을 보이는 도이다.
도 13은 차례대로 pSe2Bb1k-pdc,adh 벡터의 서열을 보이는 도이다.
도 14는 차례대로 pSe1Bb1s-atfA 벡터의 서열을 보이는 도이다.
도 15는 차례대로 pSe1Bb1s-Ws2 벡터의 서열을 보이는 도이다.
도 16은 차례대로 pSe[FadE]Bb1c-tesA 벡터의 서열을 보이는 도이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
시네코코커스 일롱게투스(Synechococcus elongatus)는, 시아노박테리아(cyanobacteeria)의 일종이다. 원핵세포인 시아노박테리아는 유전자 조작이 용이하여, 대사경로를 바꾸거나 대사물질을 인위적으로 조절하는데 유리하다. 본 발명자들은 시아노박테리아의 이러한 특성과 합성생물학/대사공학적 기법을 이용하여, 본 발명을 완성하게 되었다.
일 측면에서, 본 발명은, 피루빈산(pyruvate)으로부터 아세트알데히드를 생산하는 효소를 코딩하는 유전자; 아세트알데히드로부터 에탄올을 생산하는 효소를 코딩하는 유전자; 및 아실조효소에이(acyl-coenzyme A) 및 에탄올로부터 바이오디젤을 생산하는 효소를 코딩하는 유전자를 포함하는, 시네코코커스 일롱게투스(Synechococcus elongatus) 균주이다.
본 명세서에서, 바이오디젤이란, 식물성 유지나 동물성 지방의 주성분인 트리글리세라이드를 알코올과 반응시켜 에스테르의 형태로 전환시킨 물질을 의미할 수 있다. 예컨대, 트리글리세라이드 1분자와 알코올 3분자가 촉매 하에서 반응한 결과 글리세린 1분자와 바이오디젤 3분자가 생산될 수 있다. 또한, 예컨대, 에탄올과 아실조효소 A가 반응하여 바이오디젤이 생산될 수 있다.
일 구현예에서, 상기 균주는 아실-아실 운송 단백질(acyl-acyl carrier protein, acyl-ACP)로부터 유리 지방산을 생산하는 효소를 코딩하는 유전자를 더 포함할 수 있다. 상기 생산된 유리 지방산은, 바이오디젤의 생산에 사용될 수 있다.
상기와 같은 측면에서, 피부빈산으로부터 아세트알데히드를 생산하는 효소는, 피루브산탈카복시효소(pyruvate decarboxylase)일 수 있고, 아세트알데히드로부터 에탄올을 생산하는 효소는, 알코올 탈수소효소(alcohol dehydrogenase)일 수 있으며, 아실조효소A 및 에탄올로부터 바이오디젤을 생산하는 효소는, 왁스-에스테르 합성효소(wax-ester synthase)일 수 있다.
또한, 아실-아실 운송 단백질(acyl-ACP)로부터 유리 지방산을 생산하는 효소는 티오에스터라제(thioesterase)일 수 있다.
본 명세서에서, 모듈이란, 특정 기능, 예컨대, 특정 단백질의 발현 능력을 갖는 유전자들의 집합과 같은 기능단위를 의미할 수 있다. 본 명세서에서, 피루빈산으로부터 에탄올의 생산능이 있는 모듈을 모듈 A라고 하며, 또한, 아실-아실 운송 단백질로부터 유리지방산 및 아실조효소A의 생산능이 있는 모듈을 모듈 C라고 하며, 에탄올과 아실조효소 A로부터 바이오디젤의 생산능이 있는 모듈을 모듈 B라고 한다. 따라서, 피루빈산(pyruvate)으로부터 아세트알데히드를 생산하는 효소를 코딩하는 유전자와 아세트알데히드로부터 에탄올을 생산하는 효소를 코딩하는 유전자를 모듈 A를 구성하는 유전자라고 할 수 있고, 아실-아실 운송 단백질(acyl-ACP)로부터 유리 지방산을 생산하는 효소를 코딩하는 유전자는 모듈 C를 구성하는 유전자라 할 수 있으며, 아실조효소에이 및 에탄올로부터 바이오디젤을 생산하는 효소를 코딩하는 유전자를 모듈 B를 구성하는 유전자라고 할 수 있다.
상기와 같은 측면에서, 피루브산탈카복시효소를 코딩하는 유전자는 서열번호 1의 서열을 포함할 수 있고, 알코올 탈수소효소를 코딩하는 유전자는 서열번호 2의 서열을 포함할 수 있으며, 왁스-에스테르 합성효소를 코딩하는 유전자는 서열번호 3 또는 서열번호 4의 서열을 포함할 수 있다. 또한, 티오에스터라제를 코딩하는 유전자는 서열번호 5의 서열을 포함할 수 있다.
예컨대, 상기 피루브산탈카복시효소를 코딩하는 유전자는 지모모나스 모빌리스(Zymomonas mobilis)의 pdc 유전자로부터 유래할 수 있고, 상기 알코올 탈수소효소를 코딩하는 유전자는 지모모나스 모빌리스의 adh 유전자로부터 유래할 수 있으며, 상기 왁스-에스테르 합성효소를 코딩하는 유전자는 아시네토박터(Acinetobacter sp.)균주atfA 유전자 또는 마리노박터 하이드로카보노클라티쿠스 ATCC49840(Marinobacter hydrocarbonoclasticus ATCC 49840) 균주의 Ws2 유전자로부터 유래한 것일 수 있다. 상기 유전자들은, 아래 문헌을 참고하여 얻을 수 있다: Microbial production of fatty-acid-derived fuels and chemicals from plant biomass(2010). Nature, 463(7280), 559-562. Steen, E. J., Kang, Y., Bokinsky, G., Hu, Z., Schirmer, A., McClure, A., Del Cardayre SB ＆ Keasling, J. D.
또한, 상기 티오에스터라제를 코딩하는 유전자는, 대장균(E.coli)의 tesA 유전자로부터 유래할 수 있다.
pdc와 adh는 지모모나스 모빌리스 균주의 피루브산탈카복시효소를 코딩하는 유전자이며, 아시네토박터 균주의 atfA와 마리노박터 하이드로카보노클라티쿠스 ATCC 49840 균주의 Ws2는 왁스-에스테르 합성효소를 코딩하는 유전자이며, tesA는 E. coli의 티오에스터라제를 코딩하는 유전자이다.
상기 유전자들은, 모균주인 시네코코커스 일롱게투스에서의 안정적인 발현을 위해 코돈 최적화된 것이다.
일 구현예에서, 상기 균주는, 지모모나스 모빌리스의 pdc 유전자로부터 유래된 서열, 지모모나스 모빌리스의adh 유전자로부터 유래된 서열을 포함하는 제1벡터; 및 아시네토박터의 atf A유전자 또는 마리노박터 하이드로카보노클라티쿠스 의Ws2유전자로부터 유래된 서열을 포함하는 제2벡터로 형질전환된 시네코코커스 일롱게투스 균주일 수 있다. 예컨대, 상기 제1벡터는 pSe2Bb1k-pdc,adh 벡터로 표시될 수 있고, 상기 제2벡터는, pSe1Bb1s-atfA 벡터 또는 pSe1Bb1s-Ws2 벡터로 표시될 수 있으며, 상기 제3벡터는 pSe[FadE]Bb1c-tesA 벡터로 표시될 수 있다.
또한, 일 구현예에서, 상기 균주는 상기 제1벡터 및 제2 벡터와, 대장균의tesA 유전자로부터 유래된 서열을 포함하는 제3벡터로 더 형질전환된 시네코코커스 일롱게투스 균주일 수 있다.
본 명세서에 개시된 모든 벡터 내의 유전자들은 서로 작동 가능하게 연결된다. 작동 가능하다는 것의 의미는 타겟 유전자가 정상적으로 발현될 수 있음을 의미하는 것이다.
상기와 같은 측면에서, 상기 균주는 제1벡터가 모균주인 시네코코커스 일롱게투스의 뉴트럴 사이트II(neutral site II, NSII)에 삽입되며, 상기 제2벡터가 모균주인 시네코코커스 일롱게투스의 뉴트럴 사이트I(neutral siteI, NSI)에 삽입된 결과 형질전환된 시네코코커스 일롱게투스 균주일 수 있다. 또한, 상기와 같은 측면에서, 상기 제3벡터는, 모균주인 시네코코커스 일롱게투스의 FadE 사이트(FadE site)에 삽입될 수 있다.
상기와 같은 측면에서, 제1벡터는, 순서대로, 카나마이신(kanamycin) 저항성 유전자; lacI 리프레서; trc 프로모터; 상기 피루브산탈카복시효소 코딩 유전자; 및 상기 알코올 탈수소효소 코딩 유전자를 포함할 수 있다.
또한, 제2벡터는, 순서대로, 스펙티노마이신(spectinomycin) 저항성 유전자; lacI 리프레서; trc 프로모터; 및 상기 왁스-에스테르 합성효소 코딩 유전자를 포함할 수 있다.
또한, 제3벡터는, 순서대로, 클로람페니콜(chloramphenicol) 저항성 유전자; lacI 리프레서; trc 프로모터; 및 티오에스터라제를 코딩하는 유전자를 포함할 수 있다. 상기 벡터들에 포함된 유전자들은, 상기에서 설명된 바와 같은 것이다.
일 측면에서, 상기 제1벡터는, 서열번호 6의 서열을 포함하는 것일 수 있고, 제2벡터는, 서열번호 7 또는 서열번호 8의 서열을 포함하는 것일 수 있다. 또한, 상기 제3벡터는, 서열번호 9의 서열을 포함하는 것일 수 있다.
일 구현예에서, 상기 균주는, 상기 벡터들이 모균주인 시네코코커스 일롱게투스 PCC7942 (ATCC 33912)에 형질전환된 것이다.
본 발명의 일 측면인 시네코코커스 일롱게투스 균주에 있어서, 상기 바이오 디젤은, 지방산 에틸 에스테르(fatty acid ethyl ester, FAEE)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 특히, 상기 지방산 에틸 에스테르는, 헥사데칸산 에틸 에스테르(hexadecanoic acid ethyl ester) 또는 옥타데칸산 에틸 에스테르(octadecanoic acid ethyl ester)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
일 구현예에서, 본 발명의 균주는 기탁번호 KCTC 12883BP 또는 기탁번호 KCTC 12884BP 인, 시네코코커스 일롱게투스 균주이다.
상기 기탁번호 KCTC 12883BP 균주는 pSe2Bb1k-pdc,adh 벡터로 형질전환된 균주일 수 있고, 상기 기탁번호 KCTC 12884BP 균주는 pSe2Bb1k-pdc,adh 벡터, pSe1Bb1s-atfA 벡터 및 pSe[FadE]Bb1c-tesA 벡터로 형질전환된 균주일 수 있다.
본 발명의 균주는 이산화탄소를 흡수하여 고정하는 것일 수 있다.
다른 측면에서, 본 발명은, 상기 시네코코커스 일롱게투스(Synechococcus elongatus) 균주를 배양하는 단계를 포함하는 바이오디젤 생산방법이다.
상기와 같은 측면에서, 상기 균주를 배양하는 단계는, 이산화탄소를 공급하는 것을 포함할 수 있다.
또한, 상기와 같은 측면에서, 상기 방법은, 소수성 솔벤트에 용해된 바이오 디젤을 분리하여 수득하는 단계를 더 포함할 수 있다. 소수성 솔벤트는, 공지의 것이라면 제한되지 않고 사용할 수 있으며, 상기 소수성 솔벤트 내에 균주가 생산해 낸 바이오디젤이 축적될 수 있다. 본 발명의 시네코코커스 일롱게투스 균주는 생산한 바이오디젤을 세포외로 분비하며, 분비된 바이오디젤이 소수성 솔벤트에 용해되는 것이다.
본 발명은, 다른 측면에서, 상기 시네코코커스 일롱게투스 균주룰 배양하는 단계를 포함하는 이산화탄소 제거방법이다.
이하, 하기의 실시예를 통하여 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 하기의 실시에는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐, 본 발명의 범주 및 범위가 이에 한정되 않는다.
[실시예 1] 시네코코커스 일롱게투스 PCC7942 균주에서 지방산 에틸 에스테르(FAEE)를 생산하기 위한 전략 수립
선행논문을 참고하여 glycolysis를 거쳐 pyruvate에서 FAEE에 이르는 대사경로를 새로 만들었다 (Steen et al., 2010). 지모모나스 모빌리스(Zymomonas mobilis)의 pdc 유전자와 adh 유전자, 아시네토박터(Acinetobacter sp.) 의 atfA 유전자, 마리노박터 하이드로카보노클라스티쿠스(Marinobacter hydrocarbonoclasticus) ATCC 49840 의 Ws2 유전자, E. coli의 tesA유전자의 DNA 시퀀스를 코돈 최적화 과정을 거친 후 Genescript® 에서 그 시퀀스를 합성 주문 제작하였다. 모균주인 시네코코커스 일롱게투스의 NSII사이트(Neutral siteII)에 pdc, adh 유전자가 도입된 경로 (모듈 A), NSI 사이트(Neutral siteI)에 atfA나 Ws2 유전자가 도입된 경로(모듈 B), FadE 결손 사이트에 tesA 유전자가 도입된 경로 (모듈 C) 이렇게 3가지 모듈을 이용하여 균주를 순서대로 형질전환 하였다 (도 1).
[실시예 2] 지방산 에틸 에스테르(FAEE)를 생산하는 균주 제작
[실시예 2-1] 벡터의 제작
시네브릭 벡터(SyneBrick vector)인 pSe2Bb1k-GFP 벡터와 합성 주문한 pdc 유전자가 삽입되어있는 pUC57-pdc 벡터와 adh 유전자가 삽입되어있는 pUC57-adh 벡터를 준비하였다. 시네브릭 벡터의 GFP부분을 pdc와 adh로 각각 대체하기 위하여 EcoRI/BamHI 제한효소를 이용하여 GFP를 제외시킨 후, EcoRI/BamHI 으로 잘린 pUC57-pdc와 pUC57-adh의 pdc, adh 각각의 유전자를 라이게이즈 효소를 이용하여 삽입하였다. 그렇게 하여 pSe2Bb1K-pdc, pSe2Bb1K-adh 벡터를 제작하였고, pdc 유전자 뒷부분에 adh 유전자를 삽입하기 위하여, 완성된 pSe2Bb1k-pdc벡터에 BamHI-XhoI 제한효소 처리하고 pSe2Bb1k-adh에 BglII-XhoI 제한효소를 처리하여 pSe2Bb1k-pdc 벡터와 adh 유전자를 준비하였고, 라이게이즈 효소를 이용해 pdc 유전자 뒷부분에 adh시퀀스를 삽입하였다. 이렇게 하여 pSe2Bb1k-pdc,adh 벡터(제1벡터)를 완성하였다(도2a).
또한, pSe1Bb1s-GFP의 GFP부분을EcoRI-BamHI 제한효소를 이용하여 제거한 후, 그 자리에 합성 주문한 atfA 또는 Ws2 유전자의 DNA 시퀀스를 삽입하여 pSe1Bb1s-atfA벡터와 pSe1Bb1s-Ws2 벡터(제2벡터)를 완성하였다(도2b).
마지막으로, pSe[FadE]Bb1c-RFP의 RFP부분을 EcoRI-BamHI 제한효소를 이용하여 제거한 후 그 자리에 합성 주문한 tesA 유전자의 DNA 시퀀스를 삽입하여 pSe[FadE]Bb1c-tesA 벡터(제3벡터)를 완성하였다(도2c).
상기 벡터들에 삽입되는 유전자들은 모두 TenescriptR에서 주문 제작하였다.
[실시예 2-2] 형질전환 균주의 제작
완성된 pSe2Bb1k-pdc,adh 벡터는 시네코코커스 일롱게투스 PCC7942 야생형 균주의 뉴트럴사이트II에 삽입되었다. 이렇게 모듈 A가 도입되어있는 균주에 pSe1Bb1s-atfA 또는 pSe1Bb1s-Ws2 벡터를 Neutral Site-I에 각각 삽입하여 모듈 A,B가 함께 도입된 균주를 만들었다. 마지막으로 모듈 A 및B가 도입되어 있는 균주에 pSe[FadE]Bb1c-tesA 벡터를 FadE 사이트에 삽입하여 모듈 A,B,C가 모두 도입되어 있는 바이오 디젤 생산 균주를 제작하였다.
[실시예 3] 형질전환 균주의 지방산 에틸 에스테르(FAEE) 생산능력 확인
실시예 2에서 제작한 형질전환 균주의 바이오디젤 생산능력을 확인하기 위하여, 아래 실험 조건에서, 각 균주를 배양하였다. 구체적인 배양 조건은 100 ml 병에, 10 mM MOPS buffer가 포함된 BG-11 배지 100 ml을 넣고, 형질전환 균주를 처음 배양 시 O.D730 0.6으로 희석하여 넣어주었다. 또한 스펙티노마이신 항생제 10ug/ml, 카나마이신 항생제 5ug/ml, 클로람페니콜 항생제 5ug/ml 을 넣어준 후, 30 ℃, 100 uE·m-2·s-1의 정치배양기에서 5 % CO2를 연속하는 공급하는 조건 하에 배양하였다. 배양 시작 1일 후에는 유전자 발현에 필요한 인듀서 0.5 mM IPTG(Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside)와, 생산된 지방산 에틸 에스테르(FAEE)로부터의 세포 독성을 감소시키고자 20% 헥사데칸을 처리하였고, 배양 후 7일 동안 세포의 730 nm 파장에서의 광학밀도와 헥사데칸 층 내의 지방산 에틸 에스테르 생산량을 측정하였다.
그 결과 pdc 유전자와 adh유전자가 도입된 형질전환 균주에서는 배양 시간동안 최대 250 mg/L 에탄올을 생산함을 확인하였다(도 3b). pdc, adh 및 atfA 유전자가 삽입된 균주와 pdc,adh 및 Ws2 유전자가 삽입된 균주에서는 에탄올 생산량이 100-150 mg/L로 감소하면서 지방산 에틸 에스테르(FAEE) 생산 피크가 확인되었다(도 4a, 4b). 매스분석 결과 도면에 표시된 각각의 피크는, 1은 헥사데칸산 에틸 에스테르(Hexadecanoic acid ethyl ester, C18H36O2)이고, 2는 옥타테칸산 에틸 에스테르(Octadecanoic acid ethyl ester, C20H40O2)임을 확인하였다. 분석에 사용된 기기는 Agilent 6890와 Leco사의 Time Of Flight mass spectrometer(LECO PEGASUSⅢ)였다.
또한 pdc, adh, atfA 및tesA 유전자가 삽입된 균주에서는 헥사데칸산 에틸 에스테르의 피크가 크게 증가하였으며, pdc, adh, Ws2 및tesA 유전자가 삽입된 균주에서는 헥사데칸산 에틸 에스테르(C18H36O2), 옥타테칸산 에틸 에스테르(C20H40O2) 의 피크 모두 증가함을 확인하였다.
<110> KOREA INSTITUTE OF SCIENCE AND TECHNOLOGY
<120> TRANSFORMED SYNECHOCOCCUS ELONGATES HAVING CAPABILITY OF
PRODUCING BIODIESEL FROM CARBON DIOXIDE AND METHOD FOR PRODUCING
BIODIESEL USING THE SAME
<130> 15P400IND
<160> 9
<170> KopatentIn 2.0
<210> 1
<211> 1707
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pdc gene
<400> 1
atgagctaca ccgtgggcac ctacctggcc gaacgcctgg tgcagatcgg cctgaaacac 60
cactttgccg tggccggcga ttacaacctg gtgctgctgg ataacctgct gctgaacaaa 120
aacatggaac aggtgtactg ctgcaacgaa ctgaactgcg gctttagcgc cgaaggctac 180
gcccgcgcca aaggcgccgc cgccgccgtg gtgacctaca gcgtgggcgc cctgagcgcc 240
tttgatgcca tcggcggcgc ctacgccgaa aacctgcccg tgatcctgat cagcggcgcc 300
cccaacaaca acgatcacgc cgccggccac gtgctgcacc acgccctggg caaaaccgat 360
taccactacc agctggaaat ggccaaaaac atcaccgccg ccgccgaagc catctacacc 420
cccgaagaag cccccgccaa aatcgatcac gtgatcaaaa ccgccctgcg cgaaaaaaaa 480
cccgtgtacc tggaaatcgc ctgcaacatc gccagcatgc cctgcgccgc ccccggcccc 540
gccagcgccc tgtttaacga tgaagccagc gatgaagcca gcctgaacgc cgccgtggaa 600
gaaaccctga aatttatcgc caaccgcgat aaagtggccg tgctggtggg cagcaaactg 660
cgcgccgccg gcgccgaaga agccgccgtg aaatttgccg atgccctggg cggcgccgtg 720
gccaccatgg ccgccgccaa aagctttttt cccgaagaaa acccccacta catcggcacc 780
agctggggcg aagtgagcta ccccggcgtg gaaaaaacca tgaaagaagc cgatgccgtg 840
atcgccctgg cccccgtgtt taacgattac agcaccaccg gctggaccga tatccccgat 900
cccaaaaaac tggtgctggc cgaaccccgc agcgtggtgg tgaacggcat ccgctttccc 960
agcgtgcacc tgaaagatta cctgacccgc ctggcccaga aagtgagcaa aaaaaccggc 1020
gccctggatt tttttaaaag cctgaacgcc ggcgaactga aaaaagccgc ccccgccgat 1080
cccagcgccc ccctggtgaa cgccgaaatc gcccgccagg tggaagccct gctgaccccc 1140
aacaccaccg tgatcgccga aaccggcgat agctggttta acgcccagcg catgaaactg 1200
cccaacggcg cccgcgtgga atacgaaatg cagtggggcc acatcggctg gagcgtgccc 1260
gccgcctttg gctacgccgt gggcgccccc gaacgccgca acatcctgat ggtgggcgat 1320
ggcagctttc agctgaccgc ccaggaagtg gcccagatgg tgcgcctgaa actgcccgtg 1380
atcatctttc tgatcaacaa ctacggctac accatcgaag tgatgatcca cgatggcccc 1440
tacaacaaca tcaaaaactg ggattacgcc ggcctgatgg aagtgtttaa cggcaacggc 1500
ggctacgata gcggcgccgg caaaggcctg aaagccaaaa ccggcggcga actggccgaa 1560
gccatcaaag tggccctggc caacaccgat ggccccaccc tgatcgaatg ctttatcggc 1620
cgcgaagatt gcaccgaaga actggtgaaa tggggcaaac gcgtggccgc cgccaacagc 1680
cgcaaacccg tgaacaaact gctgtag 1707
<210> 2
<211> 1152
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> adh gene
<400> 2
atggccagca gcacctttta catccccttt gtgaacgaaa tgggcgaagg cagcctggaa 60
aaagccatca aagacctgaa cggcagcggc tttaaaaacg ccctgatcgt gagcgatgcc 120
tttatgaaca aaagcggcgt ggtgaaacag gtggccgatc tgctgaaagc ccagggcatc 180
aacagcgccg tgtacgatgg cgtgatgccc aaccccaccg tgaccgccgt gctggaaggc 240
ctgaaaatcc tgaaagataa caacagcgat tttgtgatca gcctgggcgg cggcagcccc 300
cacgattgcg ccaaagccat cgccctggtg gccaccaacg gcggcgaagt gaaagattac 360
gaaggcatcg ataaaagcaa aaaacccgcc ctgcccctga tgagcatcaa caccaccgcc 420
ggcaccgcca gcgaaatgac ccgcttttgc atcatcaccg atgaagtgcg ccacgtgaaa 480
atggccatcg tggatcgcca cgtgaccccc atggtgagcg tgaacgatcc cctgctgatg 540
gtgggcatgc ccaaaggcct gaccgccgcc accggcatgg atgccctgac ccacgccttt 600
gaagcctaca gcagcaccgc cgccaccccc atcaccgatg cctgcgccct gaaagccgcc 660
agcatgatcg ccaaaaacct gaaaaccgcc tgcgataacg gcaaagatat gcccgcccgc 720
gaagccatgg cctacgccca gtttctggcc ggcatggcct ttaacaacgc cagcctgggc 780
tacgtgcacg ccatggccca ccagctgggc ggctactaca acctgcccca cggcgtgtgc 840
aacgccgtgc tgctgcccca cgtgctggcc tacaacgcca gcgtggtggc cggccgcctg 900
aaagatgtgg gcgtggccat gggcctggat atcgccaacc tgggcgataa agaaggcgcc 960
gaagccacca tccaggccgt gcgcgatctg gccgccagca tcggcatccc cgccaacctg 1020
accgaactgg gcgccaaaaa agaagatgtg cccctgctgg ccgatcacgc cctgaaagat 1080
gcctgcgccc tgaccaaccc ccgccagggc gatcagaaag aagtggaaga actgtttctg 1140
agcgcctttt ag 1152
<210> 3
<211> 1377
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> atfA gene
<400> 3
atgcgccccc tgcaccccat cgattttatc tttctgagcc tggaaaaacg ccagcagccc 60
atgcacgtgg gcggcctgtt tctgtttcag atccccgata acgcccccga tacctttatc 120
caggatctgg tgaacgatat ccgcatcagc aaaagcatcc ccgtgccccc ctttaacaac 180
aaactgaacg gcctgttttg ggatgaagat gaagaatttg atctggatca ccactttcgc 240
cacatcgccc tgccccaccc cggccgcatc cgcgaactgc tgatctacat cagccaggaa 300
cacagcaccc tgctggatcg cgccaaaccc ctgtggacct gcaacatcat cgaaggcatc 360
gaaggcaacc gctttgccat gtactttaaa atccaccacg ccatggtgga tggcgtggcc 420
ggcatgcgcc tgatcgaaaa aagcctgagc cacgatgtga ccgaaaaaag catcgtgccc 480
ccctggtgcg tggaaggcaa acgcgccaaa cgcctgcgcg aacccaaaac cggcaaaatc 540
aaaaaaatca tgagcggcat caaaagccag ctgcaggcca cccccaccgt gatccaggaa 600
ctgagccaga ccgtgtttaa agatatcggc cgcaaccccg atcacgtgag cagctttcag 660
gccccctgca gcatcctgaa ccagcgcgtg agcagcagcc gccgctttgc cgcccagagc 720
tttgatctgg atcgctttcg caacatcgcc aaaagcctga acgtgaccat caacgatgtg 780
gtgctggccg tgtgcagcgg cgccctgcgc gcctacctga tgagccacaa cagcctgccc 840
agcaaacccc tgatcgccat ggtgcccgcc agcatccgca acgatgatag cgatgtgagc 900
aaccgcatca ccatgatcct ggccaacctg gccacccaca aagatgatcc cctgcagcgc 960
ctggaaatca tccgccgcag cgtgcagaac agcaaacagc gctttaaacg catgaccagc 1020
gatcagatcc tgaactacag cgccgtggtg tacggccccg ccggcctgaa catcatcagc 1080
ggcatgatgc ccaaacgcca ggcctttaac ctggtgatca gcaacgtgcc cggcccccgc 1140
gaacccctgt actggaacgg cgccaaactg gatgccctgt accccgccag catcgtgctg 1200
gatggccagg ccctgaacat caccatgacc agctacctgg ataaactgga agtgggcctg 1260
atcgcctgcc gcaacgccct gccccgcatg cagaacctgc tgacccacct ggaagaagaa 1320
atccagctgt ttgaaggcgt gatcgccaaa caggaagata tcaaaaccgc caactag 1377
<210> 4
<211> 1422
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ws2 gene
<400> 4
atgaaacgcc tgggcaccct ggatgccagc tggctggccg tggaaagcga agataccccc 60
atgcacgtgg gcaccctgca gatttttagc ctgcccgaag gcgcccccga aacctttctg 120
cgcgatatgg tgacccgcat gaaagaagcc ggcgatgtgg cccccccctg gggctacaaa 180
ctggcctgga gcggctttct gggccgcgtg atcgcccccg cctggaaagt ggataaagat 240
atcgatctgg attaccacgt gcgccacagc gccctgcccc gccccggcgg cgaacgcgaa 300
ctgggcatcc tggtgagccg cctgcacagc aaccccctgg attttagccg ccccctgtgg 360
gaatgccacg tgatcgaagg cctggaaaac aaccgctttg ccctgtacac caaaatgcac 420
cacagcatga tcgatggcat cagcggcgtg cgcctgatgc agcgcgtgct gaccaccgat 480
cccgaacgct gcaacatgcc ccccccctgg accgtgcgcc cccaccagcg ccgcggcgcc 540
aaaaccgata aagaagccag cgtgcccgcc gccgtgagcc aggccatgga tgccctgaaa 600
ctgcaggccg atatggcccc ccgcctgtgg caggccggca accgcctggt gcacagcgtg 660
cgccaccccg aagatggcct gaccgccccc tttaccggcc ccgtgagcgt gctgaaccac 720
cgcgtgaccg cccagcgccg ctttgccacc cagcactacc agctggatcg cctgaaaaac 780
ctggcccacg ccagcggcgg cagcctgaac gatatcgtgc tgtacctgtg cggcaccgcc 840
ctgcgccgct ttctggccga acagaacaac ctgcccgata cccccctgac cgccggcatc 900
cccgtgaaca tccgccccgc cgatgatgaa ggcaccggca cccagatcag ctttatgatc 960
gccagcctgg ccaccgatga agccgatccc ctgaaccgcc tgcagcagat caaaaccagc 1020
acccgccgcg ccaaagaaca cctgcagaaa ctgcccaaaa gcgccctgac ccagtacacc 1080
atgctgctga tgagccccta catcctgcag ctgatgagcg gcctgggcgg ccgcatgcgc 1140
cccgtgttta acgtgaccat cagcaacgtg cccggccccg aaggcaccct gtactacgaa 1200
ggcgcccgcc tggaagccat gtaccccgtg agcctgatcg cccacggcgg cgccctgaac 1260
atcacctgcc tgagctacgc cggcagcctg aactttggct ttaccggctg ccgcgatacc 1320
ctgcccagca tgcagaaact ggccgtgtac accggcgaag ccctggatga actggaaagc 1380
ctgatcctgc cccccaaaaa acgcgcccgc acccgcaaat ag 1422
<210> 5
<211> 552
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> tesA gene
<400> 5
atggccgata ccctgctgat cctgggcgat agcctgagcg ccggctaccg catgagcgcc 60
agcgccgcct ggcccgccct gctgaacgat aaatggcaga gcaaaaccag cgtggtgaac 120
gccagcatca gcggcgatac cagccagcag ggcctggccc gcctgcccgc cctgctgaaa 180
cagcaccagc cccgctgggt gctggtggaa ctgggcggca acgatggcct gcgcggcttt 240
cagccccagc agaccgaaca gaccctgcgc cagatcctgc aggatgtgaa agccgccaac 300
gccgaacccc tgctgatgca gatccgcctg cccgccaact acggccgccg ctacaacgaa 360
gcctttagcg ccatctaccc caaactggcc aaagaatttg atgtgcccct gctgcccttt 420
tttatggaag aagtgtacct gaaaccccag tggatgcagg atgatggcat ccaccccaac 480
cgcgatgccc agccctttat cgccgattgg atggccaaac agctgcagcc cctggtgaac 540
cacgatagct ag 552
<210> 6
<211> 8148
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pSe2Bb1k-pdc,adh vector
<400> 6
gataatctca tgaccaaaat cccttaacgt gagttttcgt tccactgagc gtcagacccc 60
gtagaaaaga tcaaaggatc ttcttgagat cctttttttc tgcgcgtaat ctgctgcttg 120
caaacaaaaa aaccaccgct accagcggtg gtttgtttgc cggatcaaga gctaccaact 180
ctttttccga aggtaactgg cttcagcaga gcgcagatac caaatactgt tcttctagtg 240
tagccgtagt taggccacca cttcaagaac tctgtagcac cgcctacata cctcgctctg 300
ctaatcctgt taccagtggc tgctgccagt ggcgataagt cgtgtcttac cgggttggac 360
tcaagacgat agttaccgga taaggcgcag cggtcgggct gaacgggggg ttcgtgcaca 420
cagcccagct tggagcgaac gacctacacc gaactgagat acctacagcg tgagctatga 480
gaaagcgcca cgcttcccga agggagaaag gcggacaggt atccggtaag cggcagggtc 540
ggaacaggag agcgcacgag ggagcttcca gggggaaacg cctggtatct ttatagtcct 600
gtcgggtttc gccacctctg acttgagcgt cgatttttgt gatgctcgtc aggggggcgg 660
agcctatgga aaaacgccag caacgcggcc tttttacggt tcctggcctt ttgctggcct 720
tttgctcaca tgtgtgctgg gccctaagcg ggccacggca gcgaaagggc gacggcgcga 780
tcgccggtat ggaaaacgct tgctgcagca tcagatcgat gcgatcgccg aagactgtga 840
cctagatgag gaagcatgag cgaactgggc ttgagtctga cggcgatcgc gatttttacc 900
acgacggcat tagctttggt gggaccaatg ctgggtagtt ctccgctgct accggcggga 960
ttgggtttta gcctcttggt gctgttcagt ctggatgcgg tgacttggca ggggcggggt 1020
gccacgttac tgctcgatgg cattcagcag cgatcgcccg aatatcgtca gcggattttg 1080
catcacgaag cgggtcacta cttggtagca accgcgctgg ggttacccgt gacgggctac 1140
accctctcag cgtgggaagc gctgcgccaa ggacaacctg gtcgcggggg tgtgcagttc 1200
caagcagctg cgctagaagc cgaagccgca caggggcaac tcagtcagcg atcgctggaa 1260
cagtggtgtc aggtgttgat ggccggtgca gcggcagagc aactggtcta cggcaacgtg 1320
gaagggggag ctgacgatcg cgcccagtgg aaacaactgt ggcggcaact cgatcgcaat 1380
cctgccgaag cggatttacg cagtcgctgg ggattgttac gggcgaagac tttactggag 1440
caacaacgtc ccgcctacga tgctttggtg gcggcgatgg ctgcagaggc cagcattgaa 1500
gactgcaatc aagcgatcgc cactgcttgg gtagaagaac ctgcgatcgc cgcttagtga 1560
agagtccaga agattcccct cccctctcgc ccaatggaca agggaaatgt gattcagcat 1620
gagtcaagtc cccagtgcat ggatgggtgt gcaatgagag ctctcgaacc ccagagtccc 1680
gctcagaaga actcgtcaag aaggcgatag aaggcgatgc gctgcgaatc gggagcggcg 1740
ataccgtaaa gcacgaggaa gcggtcagcc cattcgccgc caagctcttc agcaatatca 1800
cgggtagcca acgctatgtc ctgatagcgg tccgccacac ccagccggcc acagtcgatg 1860
aatccagaaa agcggccatt ttccaccatg atattcggca agcaggcatc gccatgggtc 1920
acgacgagat cctcgccgtc gggcatgcgc gccttgagcc tggcgaacag ttcggctggc 1980
gcgagcccct gatgctcttc gtccagatca tcctgatcga caagaccggc ttccatccga 2040
gtacgtgctc gctcgatgcg atgtttcgct tggtggtcga atgggcaggt agccggatca 2100
agcgtatgca gccgccgcat tgcatcagcc atgatggata ctttctcggc aggagcaagg 2160
tgagatgaca ggagatcctg ccccggcact tcgcccaata gcagccagtc ccttcccgct 2220
tcagtgacaa cgtcgagcac agctgcgcaa ggaacgcccg tcgtggccag ccacgatagc 2280
cgcgctgcct cgtcctgcag ttcattcagg gcaccggaca ggtcggtctt gacaaaaaga 2340
accgggcgcc cctgcgctga cagccggaac acggcggcat cagagcagcc gattgtctgt 2400
tgtgcccagt catagccgaa tagcctctcc acccaagcgg ccggagaacc tgcgtgcaat 2460
ccatcttgtt caatcatgcg aaacgatcct catcctgtct cttgatcaga tcatgatccc 2520
ctgcgccatc agatccttgg cggcaagaaa gccatccagt ttactttgca gggcttccca 2580
accttaccag agggcgcccc agctggcaat tccgacgtcg acaccatcga atggtgcaaa 2640
acctttcgcg gtatggcatg atagcgcccg gaagagagtc aattcagggt ggtgaatgtg 2700
aaaccagtaa cgttatacga tgtcgcagag tatgccggtg tctcttatca gaccgtttcc 2760
cgcgtggtga accaggccag ccacgtttct gcgaaaacgc gggaaaaagt ggaagcggcg 2820
atggcggagc tgaattacat tcccaaccgc gtggcacaac aactggcggg caaacagtcg 2880
ttgctgattg gcgttgccac ctccagtctg gccctgcacg cgccgtcgca aattgtcgcg 2940
gcgattaaat ctcgcgccga tcaactgggt gccagcgtgg tggtgtcgat ggtagaacga 3000
agcggcgtcg aagcctgtaa agcggcggtg cacaatcttc tcgcgcaacg cgtcagtggg 3060
ctgatcatta actatccgct ggatgaccag gatgccattg ctgtggaagc tgcctgcact 3120
aatgttccgg cgttatttct tgatgtctct gaccagacac ccatcaacag tattattttc 3180
tcccatgaag acggtacgcg actgggcgtg gagcatctgg tcgcattggg tcaccagcaa 3240
atcgcgctgt tagcgggccc attaagttct gtctcggcgc gtctgcgtct ggctggctgg 3300
cataaatatc tcactcgcaa tcaaattcag ccgatagcgg aacgggaagg cgactggagt 3360
gccatgtccg gttttcaaca aaccatgcaa atgctgaatg agggcatcgt tcccactgcg 3420
atgctggttg ccaacgatca gatggcgctg ggcgcaatgc gcgccattac cgagtccggg 3480
ctgcgcgttg gtgcggatat ctcggtagtg ggatacgacg ataccgaaga cagctcatgt 3540
tatatcccgc cgttaaccac catcaaacag gattttcgcc tgctggggca aaccagcgtg 3600
gaccgcttgc tgcaactctc tcagggccag gcggtgaagg gcaatcagct gttgcccgtc 3660
tcactggtga aaagaaaaac caccctggcg cccaatacgc aaaccgcctc tccccgcgcg 3720
ttggccgatt cattaatgca gctggcacga caggtttccc gactggaaag cgggcagtga 3780
gcgcaacgca attaatgtaa gttagcgcga attgatctgg tttgacagct tatcatcgac 3840
tgcacggtgc accaatgctt ctggcgtcag gcagccatcg gaagctgtgg tatggctgtg 3900
caggtcgtaa atcactgcat aattcgtgtc gctcaaggcg cactcccgtt ctggataatg 3960
ttttttgcgc cgacatcata acggttctgg caaatattct gaaatgagct gttgacaatt 4020
aatcatccgg ctcgtataat gtgtggaatt gtgagcggat aacaatttca gaattcaaaa 4080
gatctaatca ccccaccgcc taagatagag acgagacgca atgagctaca ccgtgggcac 4140
ctacctggcc gaacgcctgg tgcagatcgg cctgaaacac cactttgccg tggccggcga 4200
ttacaacctg gtgctgctgg ataacctgct gctgaacaaa aacatggaac aggtgtactg 4260
ctgcaacgaa ctgaactgcg gctttagcgc cgaaggctac gcccgcgcca aaggcgccgc 4320
cgccgccgtg gtgacctaca gcgtgggcgc cctgagcgcc tttgatgcca tcggcggcgc 4380
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cattaagttc tgtctcggcg cgtctgcgtc tggctggctg gcataaatat ctcactcgca 3420
atcaaattca gccgatagcg gaacgggaag gcgactggag tgccatgtcc ggttttcaac 3480
aaaccatgca aatgctgaat gagggcatcg ttcccactgc gatgctggtt gccaacgatc 3540
agatggcgct gggcgcaatg cgcgccatta ccgagtccgg gctgcgcgtt ggtgcggata 3600
tctcggtagt gggatacgac gataccgaag acagctcatg ttatatcccg ccgttaacca 3660
ccatcaaaca ggattttcgc ctgctggggc aaaccagcgt ggaccgcttg ctgcaactct 3720
ctcagggcca ggcggtgaag ggcaatcagc tgttgcccgt ctcactggtg aaaagaaaaa 3780
ccaccctggc gcccaatacg caaaccgcct ctccccgcgc gttggccgat tcattaatgc 3840
agctggcacg acaggtttcc cgactggaaa gcgggcagtg agcgcaacgc aattaatgta 3900
agttagcgcg aattgatctg gtttgacagc ttatcatcga ctgcacggtg caccaatgct 3960
tctggcgtca ggcagccatc ggaagctgtg gtatggctgt gcaggtcgta aatcactgca 4020
taattcgtgt cgctcaaggc gcactcccgt tctggataat gttttttgcg ccgacatcat 4080
aacggttctg gcaaatattc tgaaatgagc tgttgacaat taatcatccg gctcgtataa 4140
tgtgtggaat tgtgagcgga taacaatttc agaattcaaa agatctgtta ccataagtca 4200
agaaggaggt attaaatgaa acgcctgggc accctggatg ccagctggct ggccgtggaa 4260
agcgaagata cccccatgca cgtgggcacc ctgcagattt ttagcctgcc cgaaggcgcc 4320
cccgaaacct ttctgcgcga tatggtgacc cgcatgaaag aagccggcga tgtggccccc 4380
ccctggggct acaaactggc ctggagcggc tttctgggcc gcgtgatcgc ccccgcctgg 4440
aaagtggata aagatatcga tctggattac cacgtgcgcc acagcgccct gccccgcccc 4500
ggcggcgaac gcgaactggg catcctggtg agccgcctgc acagcaaccc cctggatttt 4560
agccgccccc tgtgggaatg ccacgtgatc gaaggcctgg aaaacaaccg ctttgccctg 4620
tacaccaaaa tgcaccacag catgatcgat ggcatcagcg gcgtgcgcct gatgcagcgc 4680
gtgctgacca ccgatcccga acgctgcaac atgccccccc cctggaccgt gcgcccccac 4740
cagcgccgcg gcgccaaaac cgataaagaa gccagcgtgc ccgccgccgt gagccaggcc 4800
atggatgccc tgaaactgca ggccgatatg gccccccgcc tgtggcaggc cggcaaccgc 4860
ctggtgcaca gcgtgcgcca ccccgaagat ggcctgaccg ccccctttac cggccccgtg 4920
agcgtgctga accaccgcgt gaccgcccag cgccgctttg ccacccagca ctaccagctg 4980
gatcgcctga aaaacctggc ccacgccagc ggcggcagcc tgaacgatat cgtgctgtac 5040
ctgtgcggca ccgccctgcg ccgctttctg gccgaacaga acaacctgcc cgataccccc 5100
ctgaccgccg gcatccccgt gaacatccgc cccgccgatg atgaaggcac cggcacccag 5160
atcagcttta tgatcgccag cctggccacc gatgaagccg atcccctgaa ccgcctgcag 5220
cagatcaaaa ccagcacccg ccgcgccaaa gaacacctgc agaaactgcc caaaagcgcc 5280
ctgacccagt acaccatgct gctgatgagc ccctacatcc tgcagctgat gagcggcctg 5340
ggcggccgca tgcgccccgt gtttaacgtg accatcagca acgtgcccgg ccccgaaggc 5400
accctgtact acgaaggcgc ccgcctggaa gccatgtacc ccgtgagcct gatcgcccac 5460
ggcggcgccc tgaacatcac ctgcctgagc tacgccggca gcctgaactt tggctttacc 5520
ggctgccgcg ataccctgcc cagcatgcag aaactggccg tgtacaccgg cgaagccctg 5580
gatgaactgg aaagcctgat cctgcccccc aaaaaacgcg cccgcacccg caaataggga 5640
tccaaactcg agtaaggatc tccaggcatc aaataaaacg aaaggctcag tcgaaagact 5700
gggcctttcg ttttatctgt tgtttgtcgg tgaacgctct ctactagagt cacactggct 5760
caccttcggg tgggcctttc tgcgtttata cctagggcgt tcggctgcgg cgagcggtat 5820
cagctcactc aaaggcggta atacgtccct gctcgtcacg ctttcaggca ccgtgccaga 5880
tatcgacgtg gagtcgatca ctgtgattgg cgaaggggaa ggcagcgcta cccaaatcgc 5940
tagcttgctg gagaagctga aacaaaccac gggcattgat ctggcgaaat ccctaccggg 6000
tcaatccgac tcgcccgctg cgaagtccta agagatagcg atgtgaccgc gatcgcttgt 6060
caagaatccc agtgatcccg aaccatagga aggcaagctc aatgcttgcc tcgtcttgag 6120
gactatctag atgtctgtgg aacgcacatt tattgccatc aagcccgatg gcgttcagcg 6180
gggtttggtc ggtacgatca tcggccgctt tgagcaaaaa ggcttcaaac tggtgggcct 6240
aaagcagctg aagcccagtc gcgagctggc cgaacagcac tatgctgtcc accgcgagcg 6300
ccccttcttc aatggcctcg tcgagttcat cacctctggg ccgatcgtgg cgatcgtctt 6360
ggaaggcgaa ggcgttgtgg cggctgctcg caagttgatc ggcgctacca atccgctgac 6420
ggcagaaccg ggcaccatcc gtggtgattt tggtgtcaat attggccgca acatcatcca 6480
tggctcggat gcaatcgaaa cagcacaaca ggaaattgct ctctggttta gcccagcaga 6540
gctaagtgat tggaccccca cgattcaacc ctggctgtac gaataaggtc tgcattcctt 6600
cagagagaca ttgccatgcc g 6621
<210> 9
<211> 6621
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pSe[FadE]Bb1c-tesA vector
<400> 9
gataatctca tgaccaaaat cccttaacgt gagttttcgt tccactgagc gtcagacccc 60
gtagaaaaga tcaaaggatc ttcttgagat cctttttttc tgcgcgtaat ctgctgcttg 120
caaacaaaaa aaccaccgct accagcggtg gtttgtttgc cggatcaaga gctaccaact 180
ctttttccga aggtaactgg cttcagcaga gcgcagatac caaatactgt tcttctagtg 240
tagccgtagt taggccacca cttcaagaac tctgtagcac cgcctacata cctcgctctg 300
ctaatcctgt taccagtggc tgctgccagt ggcgataagt cgtgtcttac cgggttggac 360
tcaagacgat agttaccgga taaggcgcag cggtcgggct gaacgggggg ttcgtgcaca 420
cagcccagct tggagcgaac gacctacacc gaactgagat acctacagcg tgagctatga 480
gaaagcgcca cgcttcccga agggagaaag gcggacaggt atccggtaag cggcagggtc 540
ggaacaggag agcgcacgag ggagcttcca gggggaaacg cctggtatct ttatagtcct 600
gtcgggtttc gccacctctg acttgagcgt cgatttttgt gatgctcgtc aggggggcgg 660
agcctatgga aaaacgccag caacgcggcc tttttacggt tcctggcctt ttgctggcct 720
tttgctcaca tgtgtgctgg gccccaatgc cttctccaag ggcggcattc ccctgactgt 780
tgaaggcgtt gccaatatca agattgctgg ggaagaaccg accatccaca acgcgatcga 840
gcggctgctt ggcaaaaacc gtaaggaaat cgagcaaatt gccaaggaga ccctcgaagg 900
caacttgcgt ggtgttttag ccagcctcac gccggagcag atcaacgagg acaaaattgc 960
ctttgccaaa agtctgctgg aagaggcgga ggatgacctt gagcagctgg gtcaagtcct 1020
cgatacgctg caagtccaga acatttccga tgaggtcggt tatctctcgg ctagtggacg 1080
caagcagcgg gctgatctgc agcgagatgc ccgaattgct gaagccgatg cccaggctgc 1140
ctctgcgatc caaacggccg aaaatgacaa gatcacggcc ctgcgtcgga tcgatcgcga 1200
tgtagcgatc gcccaagccg aggccgagcg ccggattcag gatgcgttga cgcggcgcga 1260
agcggtggtg gccgaagctg aagcggacat tgctaccgaa gtcgctcgta gccaagcaga 1320
actccctgtg cagcaggagc ggatcaaaca ggtgcagcag caacttcaag ccgatgtgat 1380
cgccccagct gaggcagctt gtaaacgggc gatcgcggaa gcgcgggggg ccgccgcccg 1440
tatcgtcgaa gatggaaaag ctcaagcgga agggacccaa cggctggcgg aggcttggca 1500
gaccgctggt gctaatgccc gcgacatctt cctgctccag aagtctagac cagccaggac 1560
agaaatgcct cgacttcgct gctacccaag gttgccgggt gacgcacacc gtggaaacgg 1620
atgaaggcac gaacccagtg gacataagcc tgttcggttc gtaagctgta atgcaagtag 1680
cgtatgcgct cacgcaactg gtccagaacc ttgaccgaac gcagcggtgg taacggcgca 1740
gtggcggttt tcatggcttg ttatgactgt ttttttgggg tacagtctat gcctcgggca 1800
tccaagcagc aagcgcgtta cgccgtgggt cgatgtttga tgttatggag cagcaacgat 1860
gttacgcagc agggcagtcg ccctaaaaca aagttaaaca ttatgaggga agcggtgatc 1920
gccgaagtat cgactcaact atcagaggta gttggcgtca tcgagcgcca tctcgaaccg 1980
acgttgctgg ccgtacattt gtacggctcc gcagtggatg gcggcctgaa gccacacagt 2040
gatattgatt tgctggttac ggtgaccgta aggcttgatg aaacaacgcg gcgagctttg 2100
atcaacgacc ttttggaaac ttcggcttcc cctggagaga gcgagattct ccgcgctgta 2160
gaagtcacca ttgttgtgca cgacgacatc attccgtggc gttatccagc taagcgcgaa 2220
ctgcaatttg gagaatggca gcgcaatgac attcttgctg gtatcttcga gccagccacg 2280
atcgacattg atctggctat cttgctgaca aaagcaagag aacatagcgt tgccttggta 2340
ggtccagcgg cggaggaact ctttgatccg gttcctgaac aggatctatt tgaggcgcta 2400
aatgaaacct taacgctatg gaactcgccg cccgactggg ctggcgatga gcgaaatgta 2460
gtgcttacgt tgtcccgcat ttggtacagc gcagtaaccg gcaaaatcgc gccgaaggat 2520
gtcgctgccg actgggcaat ggagcgcctg ccggcccagt atcagcccgt catacttgaa 2580
gctagacagg cttatcttgg acaagaagaa gatcgcttgg cctcgcgcgc agatcagttg 2640
gaagaatttg tccactacgt gaaaggcgag atcaccaagg tagtcggcaa ataacctcat 2700
tttcgccaga tatcgacgtc gacaccatcg aatggtgcaa aacctttcgc ggtatggcat 2760
gatagcgccc ggaagagagt caattcaggg tggtgaatgt gaaaccagta acgttatacg 2820
atgtcgcaga gtatgccggt gtctcttatc agaccgtttc ccgcgtggtg aaccaggcca 2880
gccacgtttc tgcgaaaacg cgggaaaaag tggaagcggc gatggcggag ctgaattaca 2940
ttcccaaccg cgtggcacaa caactggcgg gcaaacagtc gttgctgatt ggcgttgcca 3000
cctccagtct ggccctgcac gcgccgtcgc aaattgtcgc ggcgattaaa tctcgcgccg 3060
atcaactggg tgccagcgtg gtggtgtcga tggtagaacg aagcggcgtc gaagcctgta 3120
aagcggcggt gcacaatctt ctcgcgcaac gcgtcagtgg gctgatcatt aactatccgc 3180
tggatgacca ggatgccatt gctgtggaag ctgcctgcac taatgttccg gcgttatttc 3240
ttgatgtctc tgaccagaca cccatcaaca gtattatttt ctcccatgaa gacggtacgc 3300
gactgggcgt ggagcatctg gtcgcattgg gtcaccagca aatcgcgctg ttagcgggcc 3360
cattaagttc tgtctcggcg cgtctgcgtc tggctggctg gcataaatat ctcactcgca 3420
atcaaattca gccgatagcg gaacgggaag gcgactggag tgccatgtcc ggttttcaac 3480
aaaccatgca aatgctgaat gagggcatcg ttcccactgc gatgctggtt gccaacgatc 3540
agatggcgct gggcgcaatg cgcgccatta ccgagtccgg gctgcgcgtt ggtgcggata 3600
tctcggtagt gggatacgac gataccgaag acagctcatg ttatatcccg ccgttaacca 3660
ccatcaaaca ggattttcgc ctgctggggc aaaccagcgt ggaccgcttg ctgcaactct 3720
ctcagggcca ggcggtgaag ggcaatcagc tgttgcccgt ctcactggtg aaaagaaaaa 3780
ccaccctggc gcccaatacg caaaccgcct ctccccgcgc gttggccgat tcattaatgc 3840
agctggcacg acaggtttcc cgactggaaa gcgggcagtg agcgcaacgc aattaatgta 3900
agttagcgcg aattgatctg gtttgacagc ttatcatcga ctgcacggtg caccaatgct 3960
tctggcgtca ggcagccatc ggaagctgtg gtatggctgt gcaggtcgta aatcactgca 4020
taattcgtgt cgctcaaggc gcactcccgt tctggataat gttttttgcg ccgacatcat 4080
aacggttctg gcaaatattc tgaaatgagc tgttgacaat taatcatccg gctcgtataa 4140
tgtgtggaat tgtgagcgga taacaatttc agaattcaaa agatctgtta ccataagtca 4200
agaaggaggt attaaatgaa acgcctgggc accctggatg ccagctggct ggccgtggaa 4260
agcgaagata cccccatgca cgtgggcacc ctgcagattt ttagcctgcc cgaaggcgcc 4320
cccgaaacct ttctgcgcga tatggtgacc cgcatgaaag aagccggcga tgtggccccc 4380
ccctggggct acaaactggc ctggagcggc tttctgggcc gcgtgatcgc ccccgcctgg 4440
aaagtggata aagatatcga tctggattac cacgtgcgcc acagcgccct gccccgcccc 4500
ggcggcgaac gcgaactggg catcctggtg agccgcctgc acagcaaccc cctggatttt 4560
agccgccccc tgtgggaatg ccacgtgatc gaaggcctgg aaaacaaccg ctttgccctg 4620
tacaccaaaa tgcaccacag catgatcgat ggcatcagcg gcgtgcgcct gatgcagcgc 4680
gtgctgacca ccgatcccga acgctgcaac atgccccccc cctggaccgt gcgcccccac 4740
cagcgccgcg gcgccaaaac cgataaagaa gccagcgtgc ccgccgccgt gagccaggcc 4800
atggatgccc tgaaactgca ggccgatatg gccccccgcc tgtggcaggc cggcaaccgc 4860
ctggtgcaca gcgtgcgcca ccccgaagat ggcctgaccg ccccctttac cggccccgtg 4920
agcgtgctga accaccgcgt gaccgcccag cgccgctttg ccacccagca ctaccagctg 4980
gatcgcctga aaaacctggc ccacgccagc ggcggcagcc tgaacgatat cgtgctgtac 5040
ctgtgcggca ccgccctgcg ccgctttctg gccgaacaga acaacctgcc cgataccccc 5100
ctgaccgccg gcatccccgt gaacatccgc cccgccgatg atgaaggcac cggcacccag 5160
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ggcggccgca tgcgccccgt gtttaacgtg accatcagca acgtgcccgg ccccgaaggc 5400
accctgtact acgaaggcgc ccgcctggaa gccatgtacc ccgtgagcct gatcgcccac 5460
ggcggcgccc tgaacatcac ctgcctgagc tacgccggca gcctgaactt tggctttacc 5520
ggctgccgcg ataccctgcc cagcatgcag aaactggccg tgtacaccgg cgaagccctg 5580
gatgaactgg aaagcctgat cctgcccccc aaaaaacgcg cccgcacccg caaataggga 5640
tccaaactcg agtaaggatc tccaggcatc aaataaaacg aaaggctcag tcgaaagact 5700
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caagaatccc agtgatcccg aaccatagga aggcaagctc aatgcttgcc tcgtcttgag 6120
gactatctag atgtctgtgg aacgcacatt tattgccatc aagcccgatg gcgttcagcg 6180
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ccccttcttc aatggcctcg tcgagttcat cacctctggg ccgatcgtgg cgatcgtctt 6360
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ggcagaaccg ggcaccatcc gtggtgattt tggtgtcaat attggccgca acatcatcca 6480
tggctcggat gcaatcgaaa cagcacaaca ggaaattgct ctctggttta gcccagcaga 6540
gctaagtgat tggaccccca cgattcaacc ctggctgtac gaataaggtc tgcattcctt 6600
cagagagaca ttgccatgcc g 6621
Claims (24)
- 서열번호 1의 서열로 이루어지는 피루브산탈카복시효소(pyruvate decarboxylase) 유전자; 서열번호 2의 서열로 이루어지는 알코올 탈수소효소(alcohol dehydrogenase) 유전자; 및 서열번호 3 또는 서열번호 4의 서열로 이루어지는 왁스-에스테르 합성효소(wax-ester synthase) 유전자를 포함하는, 시네코코커스 일롱게투스(Synechococcus elongatus) 균주.
- 제1항에 있어서,
균주는,
서열번호 5의 서열로 이루어지는 티오에스터라제(thioesterase) 유전자를 더 포함하는, 시네코코커스 일롱게투스 균주. - 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 제1항에 있어서,
상기 균주는,
지모모나스 모빌리스(Zymomonas mobilis)의 피루브산탈카복시효소(pyruvate decarboxylase, pdc) 유전자로부터 유래된 서열, 지모모나스 모빌리스의 알코올 탈수소효소(alcohol dehydrogenase, adh) 유전자로부터 유래된 서열을 포함하는 제1벡터; 및
아시네토박터(Acinetobacter sp.)의 아실트렌스퍼라제(acyltransferase, atf) 유전자 또는 마리노박터 하이드로카보노클라티쿠스(Marinobacter hydrocarbonoclasticus)의 왁스-에스테르 합성효소 2(wax-ester synthase 2, Ws2) 유전자로부터 유래된 서열을 포함하는 제2벡터로 형질전환된 것인, 시네코코커스 일롱게투스 균주. - 제7항에 있어서,
상기 균주는 대장균(E.coli)의 티오에스터라제 A(thioesterase A, tesA) 유전자로부터 유래된 서열을 포함하는 제3벡터로 더 형질전환된 것인, 시네코코커스 일롱게투스 균주. - 제7항에 있어서,
상기 제1벡터는, 모균주인 시네코코커스 일롱게투스의 뉴트럴 사이트II(neutral site II, NSII)에 삽입되며,
상기 제2벡터는, 모균주인 시네코코커스 일롱게투스의 뉴트럴 사이트I(neutral siteI, NSI)에 삽입되는, 시네코코커스 일롱게투스 균주. - 제8항에 있어서,
상기 제3벡터는, 모균주인 시네코코커스 일롱게투스의 FadE 사이트(FadE site)에 삽입되는, 시네코코커스 일롱게투스 균주. - 제7항에 있어서,
제1벡터는, 순서대로,
카나마이신(kanamycin) 저항성 유전자;
lacI 리프레서;
trc 프로모터;
상기 피루브산탈카복시효소 유전자; 및
상기 알코올 탈수소효소 유전자를 포함하는, 시네코코커스 일롱게투스 균주. - 제7항에 있어서,
제2벡터는, 순서대로,
스펙티노마이신(spectinomycin) 저항성 유전자;
lacI 리프레서;
trc 프로모터; 및
상기 왁스-에스테르 합성효소 유전자를 포함하는, 시네코코커스 일롱게투스 균주. - 제8항에 있어서,
제3벡터는, 순서대로,
클로람페니콜(chloramphenicol) 저항성 유전자;
lacI 리프레서;
trc 프로모터; 및
티오에스터라제 유전자를 포함하는, 시네코코커스 일롱게투스 균주. - 제7항에 있어서,
제1벡터는, 서열번호 6의 서열로 이루어지는 것이고,
제2벡터는, 서열번호 7 또는 서열번호 8의 서열로 이루어지는 것이며, 시네코코커스 일롱게투스 균주. - 제8항에 있어서,
제3벡터는, 서열번호 9의 서열로 이루어지는 것인, 시네코코커스 일롱게투스 균주. - 제8항에 있어서,
상기 균주는,
상기 벡터가 모균주인 시네코코커스 일롱게투스(Synechococcus elongates) PCC7942 (ATCC 33912)에 형질전환된 것인, 시네코코커스 일롱게투스 균주. - 제1항 에 있어서,
상기 왁스-에스테르 합성효소는 바이오디젤을 생산하는 효소로서,
상기 바이오디젤은,
지방산 에틸 에스테르(fatty acid ethyl ester, FAEE)인, 시네코코커스 일롱게투스 균주. - 제17항에 있어서,
상기 지방산 에틸 에스테르는, 헥사데칸산 에틸 에스테르(hexadecanoic acid ethyl ester) 또는 옥타데칸산 에틸 에스테르(octadecanoic acid ethyl ester)인, 시네코코커스 일롱게투스 균주. - 제1항에 있어서,
균주는,
기탁번호 KCTC 12883BP 또는 기탁번호 KCTC 12884BP 인, 시네코코커스 일롱게투스 균주. - 제1항, 제2항 및 제7항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서,
균주는,
이산화탄소를 흡수하여 고정하는 것인, 시네코코커스 일롱게투스 균주. - 제20항의 시네코코커스 일롱게투스(Synechococcus elongatus) 균주를 배양하는 단계를 포함하는, 바이오디젤 생산방법.
- 제21항에 있어서,
균주를 배양하는 단계는, 이산화탄소를 공급하는 것을 포함하는, 바이오디젤 생산방법. - 제21항에 있어서,
소수성 솔벤트에 용해된 바이오디젤을 수득하는 단계를 더 포함하는, 바이오디젤 생산방법. - 제20항의 시네코코커스 일롱게투스(Synechococcus elongatus) 균주를 배양하는 단계를 포함하는, 이산화탄소 제거방법.
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| KR1020150147216A KR101743018B1 (ko) | 2015-10-22 | 2015-10-22 | 이산화탄소로부터의 바이오디젤 생산능을 갖는 형질전환된 시네코코커스 일롱게투스 균주 및 이를 이용한 바이오디젤 생산방법 |
Country Status (2)
| Country | Link |
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| KR (1) | KR101743018B1 (ko) |
Families Citing this family (1)
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|---|---|---|---|---|
| KR102242467B1 (ko) * | 2019-09-20 | 2021-04-21 | 성균관대학교산학협력단 | 변형된 시아노박테리아 유전자 발현 시스템 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| KR101349295B1 (ko) | 2011-10-20 | 2014-01-10 | 경북대학교 산학협력단 | 호냉성 신종 남조류 오실라토리아 세종엔시스를 이용한 바이오디젤의 제조 방법 |
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Also Published As
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