KR101723402B1

KR101723402B1 - 세리포리아 락세라타 배양액의 유효성분이 함유된 당뇨, 당뇨합병증 또는 당뇨로 인한 질환을 예방, 개선하기 위한 조성물 및 이의 제조방법

Info

Publication number: KR101723402B1
Application number: KR1020160177875A
Authority: KR
Inventors: 한상선
Original assignee: 한상선
Priority date: 2016-12-23
Filing date: 2016-12-23
Publication date: 2017-04-05

Abstract

본 발명은 세리포리아 락세라타 균사체 배양액의 제조, 배양액으로부터 균체 분리, 균체 농축, 농축 균체의 동결건조 및 동결건조한 균체를 분말화하는 과정을 거쳐 이루어지는 세리포리아 락세라타 배양액의 유효성분이 함유된 당뇨, 당뇨합병증 또는 당뇨로 인한 질환을 예방, 개선하기 위한 배양액 조성물 제조방법과 이로부터 제조된 배양액 조성물에 관한 것이다.

Description

세리포리아 락세라타 배양액의 유효성분이 함유된 당뇨, 당뇨합병증 또는 당뇨로 인한 질환을 예방, 개선하기 위한 조성물 및 이의 제조방법{METHOD OF PREPARING COMPOSITIONI CONTAINING ACTIVE INGREDIENT OF CULTURE MEDIUM OF CERIPORIA LACERATA FOR PREVENTION AND IMPROVEMENT OF DIABETES, DIABETIC COMPLICATIONS DISEASE FROM DIABETES}

본 발명은 세리포리아 락세라타 균사체 배양액의 제조, 배양액으로부터 균체 분리, 균체 농축, 추출물, 농축 균체의 동결건조 및 동결건조한 균체를 분말화하는 과정을 거쳐 이루어지는 세리포리아 락세라타 배양액의 유효성분이 함유된 당뇨, 당뇨합병증 또는 당뇨로 인한 질환을 예방, 개선하기 위한 배양액 조성물 제조방법과 이로부터 제조된 배양액 조성물에 관한 것이다.

세리포리아 락세라타(Ceriporia lacerata)는 일종의 구멍장이과 버섯으로 활엽수 또는 참나무나 적송의 나무껍질에 부생하는 백색 부후균의 일종이다. 전통적으로 세리포리아 락세라타(Ceriporia lacerata)는 중국, 일본 및 우리나라에서 의학적 치료의 목적으로 사용되거나, 리그닌 분해 작용이 있어 자연의 생물정화제(natural bioremediation)로 이용되어 왔다.

국내외 많은 연구를 통해 다양한 종류의 천연 약용 버섯에 의한 항당뇨 효능이 알려지고 있으며, 이들을 활용한 당뇨의 예방 및 치료 용도의 건강기능성 식품 또는 천연물 신약 개발 연구가 활발하게 진행되고 있다.

본 발명은 세리포리아 락세타라 균사체 배양액을 제조함에 있어, 당뇨에 효능이 있는 한약재를 이용한 배지를 조성하고, 최적 배양을 위한 배지를 조성함으로써 이를 통해 생산된 배양액 조성물을 활용하는 기술이다.

본 발명과 관련하여, 대한민국 등록특허 10-1031605(등록일자 2011년04월20일)호는 '당뇨병 질환의 예방 및 치료를 위한 세리포리아 락세라타 배양액 추출물의 제조방법 및 이에 따른 세리포리아 락세라타 배양액 추출물'에 대한 기술을 개시한 바 있다.

본 발명은 세리포리아 락세라타의 유효성분과 배지의 조성을 통해 혈당조절을 통해 당뇨병을 예방하거나 또는 당뇨병 환자로부터 발생할 수 있는 합병증을 예방할 수 있도록 하고, 또한 배양액 내의 농도 및 성장속도를 높이고자 하는 발명으로서, 상기 등록특허에 제시된 기술로부터 이와 같은 효과를 도출해내기는 어렵다.

대한민국 등록특허 10-1031605(등록일자 2011년04월20일)

본 발명은 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 제조하기 위한 배지로서, 기본 배지 조성에 한방배지원, 탄소원, 질소원, 복합배지원을 첨가한 후 최적의 배양조건에서 배양함으로써 높은 혈당조절기능에 의해 당뇨, 당뇨합병증 또는 당뇨로 인한 질환을 예방, 개선효과를 갖는 세리포리아 락세라타 배양액의 유효성분이 함유된 배양액 조성물 및 이의 제조방법을 제공하고자 하는 것을 발명의 목적으로 한다.

상기의 목적을 달성하기 위하여,

본 발명은 글루코스(Glucose) 40~70wt%, 효모추출물(Yeast extract) 5~30wt%, 펩톤(Peptone) 5~30wt%, 황산망간(MnSO₄ ·H₂O) 0.1~1.5wt%, 황산철(FeSO₄ ·7H₂O) 0.01~0.05wt%, 황산아연(ZnSO₄ ·7H₂O) 0.001~0.009wt%, 질산나트륨(NaNO₃) 0.50~0.87wt%, 염화칼슘(CaCl₂) 0.1~0.5wt%, 염화망간(MnCl₂ ·4H₂O) 0.001~0.009wt%, 황산구리(CuSO₄ ·5H₂O) 0.001~0.009wt%의 혼합으로 조성된 100wt%의 기본배지원(A) 95~99.5wt%와,

여주, 어성초, 삼백초, 둥글레, 계피, 포공영, 백강잠, 산약, 감잎, 구기자, 서목태, 흑지마, 돼지감자, 삼백초, 상엽, 감국, 산사, 황기, 천문동, 진피 중 선택되는 어느 1종 또는 2종 이상의 한약재로부터 추출된 한방 추출물:물(water)을 1:1~1.5의 중량비율로 혼합하여 조성된 한방배지원(B) 0.1~4.7wt%와,

녹말, 덱스트린(dextrin), 유청(whey), 전분, 포도당, 사과산, 구연 산, 주석산, 초산, 지방산, 파라핀, 탄화수소, 옥수수 전분(Corn starch), 트레할로오스(trehalose), 락토오스(lactose), 글리세롤(glycerol), 가용성 전분(soluble starch), 덱스트린(dextrin), 설탕(sucrose), 탈토오스(maltose), 솔비톨(sorbitol), 마니톨(mannitol), 프록토오스(fructose) 중 선택되는 어느 1종 또는 2종 이상의 탄소원(C) 0.1~1wt%와,

황산암모늄, 인산수소암모늄, 옥수수 침출액(corn steep liquor), 효모추출액(yeast extract), 펩톤(peptone), 대두박(soybean meal), 맥아추출물(malt extract), 요소(urea), 글리신(glycine) 중 선택되는 어느 1종 또는 2종 이상의 질소원(D) 0.1~1wt%와,

보리(Barley), 옥수수(Corn), 귀리(Oats), 쌀(Rice), 밀(Wheat), 당밀(Molasses), 옥수수 침지액(Corn Steep liquor), 옥수수글루텐박(Corn gluten meal), 면실박(Cotton seed meal), 어분(Fish meal) 중 선택되는 어느 1종 또는 2종 이상의 복합배지원(E) 0.1~1wt%를 혼합(A+B+C+D+E)하여 조성된 배지를 110~120℃에서 15~20분간 살균하고, 살균과정을 거친 배지에 세리포리아 락세라타(Ceriporia lacerata) 균사체를 배지 전체 중량의 4~5wt%로 접종하여 배양기에서 24~30℃, 120~180rpm으로 9~11일간 배양하여 균사체 배양액을 제조하는 단계(S10)와,

상기 배양액을 동결건조하는 단계(S20)와,

상기 동결건조된 배양액에 대하여 5~20배수의 물을 가하여 90~98℃에서 5~15시간씩 3회 추출하고, 여과지로 여과한 다음 여액을 모두 모아 원심분리하는 단계(S30)와,

상기 원심분리한 상층액을 감압농축기로 1/8~1/10로 농축하는 단계(S40)와,

상기 농축한 상층액을 동결건조한 후 분쇄하여 분말화하는 단계(S50)를 포함하여 이루어지는 세리포리아 락세라타 배양액의 유효성분이 함유된 당뇨, 당뇨합병증 또는 당뇨로 인한 질환을 예방, 개선하기 위한 배양액 조성물 제조방법과 이로부터 제조된 배양액 조성물을 제공한다.

본 발명의 제조방법에 따라 제조된 세리포리아 락세라타 균사체 배양액은 세리포리아 락세라타 균사체와 배지를 조성하는 한방배지원에 의한 혈당조절기능성이 매우 뛰어나고, 이로 인한 당뇨, 당뇨합병증 또는 당뇨로 인한 질환을 예방, 개선 효과가 뛰어나다.

그리고 배지 조성을 통해 배양액 내의 세리포리아 락세라타 균사체의 성장속도와 농도를 높이는 효과를 갖는다.

도 1은 본 발명에 따른 세리포리아 락세라타 배양액의 유효성분이 함유된 조성물에 의한 일반 SD-rat의 단기 혈당 강화 효과를 보인 그래프.
도 2는 본 발명에 따른 세리포리아 락세라타 배양액의 유효성분이 함유된 조성물에 의한 당뇨 유발 SD-rat의 단기 혈당 강화 효과를 보인 그래프.
도 3은 본 발명에 따른 세리포리아 락세라타 배양액의 유효성분이 함유된 조성물에 의한 α-Glucosidase 저해 활성 측정 결과를 보인 그래프.
도 4는 본 발명에 따른 세리포리아 락세라타 배양액의 유효성분이 함유된 조성물에 의한 혈청 ALT 활성 측정 결과를 보인 그래프.
도 5는 본 발명에 따른 세리포리아 락세라타 배양액의 유효성분이 함유된 조성물에 의한 혈청 AST 활성 측정 결과를 보인 그래프.

이하, 본 발명에 따른 세리포리아 락세라타 배양액의 유효성분이 함유된 당뇨, 당뇨합병증 또는 당뇨로 인한 질환을 예방, 개선하기 위한 조성물 및 이의 제조방법에 대해 구체적으로 살펴보도록 한다.

본 발명에 따른 당뇨, 당뇨합병증 또는 당뇨로 인한 질환을 예방, 개선하기 위한 세리포리아 락세라타 배양액 조성물 제조방법은 글루코스(Glucose) 40~70wt%, 효모추출물(Yeast extract) 5~30wt%, 펩톤(Peptone) 5~30wt%, 황산망간(MnSO₄ ·H₂O) 0.1~1.5wt%, 황산철(FeSO₄ ·7H₂O) 0.01~0.05wt%, 황산아연(ZnSO₄ ·7H₂O) 0.001~0.009wt%, 질산나트륨(NaNO₃) 0.50~0.87wt%, 염화칼슘(CaCl₂) 0.1~0.5wt%, 염화망간(MnCl₂ ·4H₂O) 0.001~0.009wt%, 황산구리(CuSO₄ ·5H₂O) 0.001~0.009wt%의 혼합으로 조성된 100wt%의 기본배지원(A) 95~99.5wt%와,

상기 배양액을 동결건조하는 단계(S20)와,

상기 농축한 상층액을 동결건조한 후 분쇄하여 분말화하는 단계(S50)를 포함하여 이루어진다.

배지(culture medium)는 미생물의 증식과 대사산물 생성에 필요한 영양소 공급과 환경을 제공하는 것이다. 이때 미생물의 증식과 대사산물의 생성은 배양환경과 배지 성분에 의하여 민감하게 영향을 받는다.

배지의 멸균은 미생물 사멸, 영양소 파괴 최소화를 위해 고온 단시간에 처리하는 것이 바람직하다. 일반적으로 가압수증기를 사용하여 멸균한다.

본 발명에서는 배지가 100℃에 도달할 때까지 지속적으로 스팀을 가하고, 배지의 온도가 100℃에 도달하게 되면 동 온도에서 10~20분간 유지한다.

다음으로 온도를 110~120℃까지 올린 후 15~20분 동안 멸균한 후에 방냉한다.

상기 배지는 기본배지원(A) 95~99.5wt%, 한방배지원(B) 0.1~4.7wt%, 탄소원(C) 0.1~1wt%, 질소원(D) 0.1~1wt%, 복합배지원(E) 0.1~1wt%의 혼합(A+B+C+D+E)으로 조성한다.

상기 기본배지원(A)은 가장 기본적인 조건을 충족하는 배지원을 제시한 것이다. 즉 글루코스(Glucose) 65.0wt%, 효모추출물(Yeast extract) 25.0wt%, 펩톤(Peptone) 8.298wt%, 황산망간(MnSO₄ ·H₂O) 0.5wt%, 황산철(FeSO₄ ·7H₂O) 0.02wt%, 황산아연(ZnSO₄ ·7H₂O) 0.004wt%, 질산나트륨(NaNO₃) 0.87wt%, 염화칼슘(CaCl₂) 0.3wt%, 염화망간(MnCl₂ ·4H₂O) 0.007wt%, 황산구리(CuSO₄ ·5H₂O) 0.001wt%의 혼합으로 조성된다.

본 발명은 상기 기본배지원(A)에 한방배지원(B), 탄소원(C), 질소원(D), 복합배지원(E)을 더 첨가하여 배지를 조성함으로써 균사체 배양액에 의한 혈당조절기능을 강화시킴으로써 당뇨병 예방과, 당뇨병 환자의 혈당 조절에 의해 합병증 발생 위험을 줄일 수 있도록 한다.

또한 이와 같은 배지의 조성은 세리포리아 락세라타 균사체 성장과 증식을 향상시킬 수 있는 최적의 배지를 제공함으로써 배양액 내의 세리포리아 락세라타 균사체의 농도 증가에 따른 혈당조절기능의 향상 효과를 제공할 수 있다.

상기 한방배지원(B)은 한방 추출물:물(water)을 1:1~1.5의 중량비율로 혼합하여 조성된다.

상기 한방 추출물은 여주, 어성초, 삼백초, 둥글레, 계피, 포공영, 백강잠, 산약, 감잎, 구기자, 서목태, 흑지마, 돼지감자, 삼백초, 상엽, 감국, 산사, 황기, 천문동, 진피 중 선택되는 어느 1종 또는 2종 이상의 한약재로부터 추출된 것이다.

더욱 바람직하게는,

어성초 10~50wt%, 감잎 10~50wt%, 서목태 10~50wt%, 흑지마 10~50wt%, 황기 10~50wt%의 혼합으로 조성된 한약재로 부터 추출된 추출물이거나,

둥글레 10~50wt%, 여주 10~50wt%, 감국 10~50wt%, 산사 10~50wt%, 천문동 10~50wt%의 혼합으로 조성된 한약재로 부터 추출된 추출물이거나,

또는 삼백초 10~50wt%, 계피 10~50wt%, 포공영 10~50wt%, 백강잠 10~50wt%, 산약 10~50wt%의 혼합으로 조성된 한약재로 부터 추출된 추출물을 사용한다.

상기 혼합 한약재로부터 추출된 추출물은 추출예를 살펴보면 다음과 같다.

상기 어성초, 감잎, 서목태, 흑지마, 황기를 동 중량비율로 배합하여 100wt%의 한약재혼합물을 조성하고, 상기 100wt%의 한약재혼합물 중 500g을 4.5ℓ의 증류수에 첨가한다.

실온에서 40분간 침지시킨 후 100℃에서 1시간 동안 추출한다.

추출한 후에는 2000×g로 20분간 원심분리하여 상등액을 취한다.

상기 상등액을 기공 크기(pore size)가 0.2㎛인 필터를 이용하여 여과한 후 감압농축기를 이용하여 1/10으로 농축한 것을 사용한다.

상기 둥글레, 여주, 감국, 산사, 천문동의 혼합으로 조성된 한약재혼합물과, 삼백초, 계피, 포공영, 백강잠, 산약의 혼합으로 조성된 한약재혼합물 또한 상기 방법과 동일한 과정을 거쳐 추출한다.

상기 여주는 박과 식물로서 학명은 Momordica charantia L.으로 불린다. 여주의 대표적인 효능은 항암작용, 항괴사작용, 항고혈당작용, 당뇨합병증 예방 등이 있고 그 외의 효능으로는 피부병(습진, 건선), 야맹증, 기생충, 류머티스, 통풍, 소화궤양, 폐렴, 말라리아 등이 있다. 그리고 성분으로는 글루코사이드, 사포닌, 알칼로이드, 오일, 트리트펜, 단백질, 스테로이드계가 있으며, 비타민C와 체내에서 비타민A로 바뀌는 β-카로틴과 칼륨, 철 등의 미네랄도 많다. 또한 여주의 쓴맛에는 식물스테롤 배당체들과 많은 종류의 아미노산, 갈락트론산, 시트룰린, 펙틴 등의 성분이 들어 있어 이 성분들은 혈당강하 기능이탁월한 것으로 알려져 있다.

여주의 성분들 중에서 특히 주목받고 있는 것은 당뇨병에 효과가 있는 것으로 밝혀진 식물 insulin(p-insulin)과 카란틴(charantin)이란 성분이다. 식물 insulin은 체내에서 insulin과 비슷한 작용을 하는 peptide의 일종으로 여주의 열매와 씨에 많이 들어있다.

상기 어성초(Houttuynia cordata Thunb)는 잎과 줄기에서 특유의 ‘생선비린내’가 나기 때문에 어성초(魚腥草)라고 불리는 삼백초과의 다년생 초본이다. kaempferol, quercitrin, quercetin 같은 polyphenol류와 piperolactam, aristolactam, splendidine 같은 alkaloids가 함유되어 있어 항암 및 항산화 기능이 강하다.

상기 삼백초(Saururus Chinensis Baill)는 삼백초과(Saururuaceae)에 속하는 다년초이다. 삼백초의 잎은 quercetin, quercitrin, isoquercetin, avicularin, rutin, tannin 등의 flavonoids를 유효성분으로 함유하고 있으며, flavonoids는 항산화능이 우수하고 자유라디칼의 공격으로부터 조직과 세포를 보호한다.

상기 둥글레(Polygonatum odoratum var pluriflorum Ohwi)는 백합과에 속하는 초본식물이다. 근경의 추출물이 혈당강하, 자양·강장효과 외에도 강심작용, 말기 암의 보조치료, 갈증해소, 영양불량, 폐결핵, 당뇨 등에 효과가 있다.

상기 계피(Cortex Cinnamonum cassia)는 계수나무(Cinnamomum cassia, 녹나무과 Lauraceae) 수간피(樹幹皮)이다. 계피 정유에는 cinnamaldehyde, cinnamyl acetate, cinnamyl alcohol, eugenol, carvacrol 등이 있다.

한방에서 알려진 계피의 효능은 구풍제, 진정작용, 말초혈관확장, 해열, 건위, 가향제, 장내 가스제거, 방부제 등으로 중요한 약재로 이용되어 왔다. 또한 계피는 항 응고 작용, 항염증, 혈당조절, 뇌기능 향상, 동맥경화증 예방, 당뇨병, 심혈관 질환예방 등의 약리작용 및 기능성이 보고되고 있고 이러한 생리활성 물질은 계피의 정유와 향 성분에 많이 함유되어있다.

상기 포공영(Herba taraxaci)은 국화과(Asterace)에 속하는 민들레(Taraxacum platycarpum)의 전초를 말린 것이다.

약리작용으로는 항세균, 항진균작용, 면역증강작용, 항암작용이 있으며, 해열, 발한, 소염, 건위, 이뇨, 최유약으로 위염, 이담, 황달 등에 쓴다. 주요 성분으로는 austricin, luteolin, chrysoeriol, quercetin, caffeic acid, scopoletin, esculetin, cichoriin 등을 함유하고 있다.

상기 백강잠(Bombyx Batryticatus)은 누에나비과(Bombyxcidae)에 속하는 누에나비(Bombyx mori)의 새끼벌레(누에)가 흰가루병균(Batrytis bassiana)에 감염되어 흰가루병에 걸려 죽은 것을 말린 것이다. 백강잠의 당뇨에 대한 현대 약리 연구로는 STZ-유도 당뇨 흰쥐에서의 고혈당 억제, 지방간 억제, 총콜레스테롤감소, 소변알부민감소, BUN과 크레아티닌 감소, TGF-beta1/Smad3 기전차단에 의한 신장손상 억제 등의 효과가 보고된 바 있다.

상기 산약(Dioscoreae Radix)은 참마 Dioscorea japonica 또는 마 D. batatas(마과, Dioscoreae)의 덩이뿌리의 주피를 벗겨 그대로 또는 쪄서 말린 것이다. 산약에 포함된 성분은 주로 saponin, 점액질, choline, allantoin, sopamine, batasine, abscine, amylase, glycoprotein, vitamin C, polyphenoloxidase, mannan, phytic acid 등의 성분과 17종 이상의 아미노산이 있는데, 이중 arginine, glutamic acid, aspartic acid 등의 아미노산이 가장 많이 함유 되어 있으며, 이 외에 미량원소로 Fe, Cu, Zn, Co, Cy 등이 있다.

상기 감잎(Diospyros kaki Folium)은 감나무과(Ebenaceae)에 속하는 낙엽교목인 감나무의 잎이다. 감나무잎에는 아스트라가린, 미시스트린 등의 플라보노이드 배당체, 탄닌, 페놀류, 수지, 카큐민류 화합물, 다당, 엽록소 등이 함유되어 있다. 4~6월의 감잎에는 비타민C가 풍부하여 100g중에 500∼1000mg정도 함유되어 있다.

상기 구기자(Lycium chinensis Miller)는 가지과에 속하는 낙엽관목인 구기자나무의 열매이다. carotenoid, cholin, meliscic acid, zeaxanthin, physlien(dipalmityl-zeaxanthin), betaine, β-sitosterol, 비타민 B1과 불포화지방산이 다량 함유되어 있다. 약리적 효능은 항산화, 혈당강하 작용 및 심혈관 관련 질환의 예방 등이 있다.

상기 서목태(Rhynchosia Nulubilis)는 콩과의 여러 해살이 덩굴풀인데 검은 콩의 일종이다. 서목태 껍질에는 글리시테인(glycitein)이라는 항암 물질이 들어 있고. 이소플라본 성분은 일반 콩보다 5∼6배 많이 함유 되어있고 서목태에 함유된 인(燐)중합체 폴리포스페이트(polyphosphate)는 자외선에 의한 피부 노화를 억제하고, 불포화 지방산인 리눌렌산(linolenic acid)은 콜레스테롤을 녹여 주어 혈관을 청소하고 뇌출혈 등 심혈관관계질환을 예방해준다.

상기 흑지마(Seaami semen nigrumk)는 참깨과(Pedaliaceae)에 속하는 참깨(脂麻), Sesamum indicum의 여문씨를 말린 것이다. 흑지마는 피속의 혈소판을 많아지게 하므로 피를 빨리 응고 시킨다. 항염증작용, 영양작용도 나타낸다. 화학분석에서는 호마유(胡麻油)40~45%를 함유하고 그 조성은 oleic acid 48.1%, linoleic acid 36.8%, palmitic acid 7.7%, stearicacid 4.6% 및 기타 sesamin 1%, sesamol 0.1%, sesamolin 등을 함유하고 있다. 약리작용에서는 신선한 멸균 마유(麻油)를 점막에 바르면 자극을 경감시켰고, 염증을 회복시키는 작용을 한다. 아유산(亞油酸)은 혈중 콜레스테롤의 함양을 낮추고 동맥경화를 예방한다.

상기 돼지감자(HelianthustuberosusL.)는 국화과 해바라기속의 여러 해 살이 식물이다. 돼지감자는 민간요법에서 당뇨병과 류마티스의 치료를 위해 사용되어 왔으며, 변비개선, 장 질환예방, 대장암 발생 억제, 혈청 콜레스테롤 감소, 혈중지질 저하, 혈당 강화 및 비만 개선 효과 등 다양한 약리활성이 있는 것으로 알려져 있다.

상기 삼백초(Saururus chinensis Baill.)는 삼백초과에 속하는 다년생 초본이다. 삼백초의 함유성분으로 quercetin, quercetrin, isoquercitrin,rutin,lignan및 수용성 tannin등으로 알려져 있으며,이중 삼백초의 주성분은 flavonoid성분로 알려진 quercetin과 quercetrin이다.

상기 상엽(Morus alba L)은 뽕나무과에 속하는 뽕나무의 잎이다. flavones, steroids 및 triterpenes와 같은 다양한 생리활성물질을 함유하고 있어 민간에서는 오래전부터 약제로 이용해 왔다. 특히 뛰어난 항산화능과 콜레스테롤 감소 기능이 있어 당뇨, 고혈압, 동맥경화, 중풍 등 성인병의 예방에 효과가 큰 것으로 알려져 있다.

상기 감국(Chrysanthemi Flos)은 국화 C. morifolium (국화과 Compositae)의 꽃이다. luteolin, apigenin, acacetin 등의 플라보노이드 성분의 분리 동정, 결핵균과 각종 바이러스 대한 억제 효과가 있다.

상기 산사(Crataegi Fructus)는 산사나무 Crataegus pinnatifida var. typica 및 동속 근연식물(장미과 Rosaceae)의 열매를 건조한 것이다. 소화흡수 기능을 증진시키고 소아의 소화불량에 효과를 보이며 혈압강하, 콜레스테롤 저하 등 다양한 효과를 보이는 약재로서 Crataegolic acid, Malic acid, Citric acid, Vitamin C, Tannin, Saponin 등 여러 성분을 함유하고 있다.

상기 황기(Astragali Radix)는 콩과(Legumiosae에 속하는 다년생 초본인 단너삼(Astragalus membranaceus Bunge)의 뿌리로써, 뿌리의 주피를 벗겨 건조한 것이다. 황기의 주요성분은 isoflavonoid와 triterpene saponin이며, 그 외에도 canavanine, phenol glycoside류, γ-aminobutyric acid 등이 함유되어 있다. 이뇨작용, 혈합강하작용, 강장작용, 세포성 및 체액성 면역증강작용, 항염작용, 간과 비장의 alkaline RNase 활성감소 등의 효능이 있다.

상기 천문동(Asparagus cochinchiinensis Merrill)은 백합과(Liliaceae)에 속하는 다년생 초본식물이다. 한방에서는 강화, 윤조, 자음, 청폐의 효능이 있다고 알려져 있다.

예로부터 진해, 완화,자 양, 해열, 거담, 지갈, 이뇨, 강장의 효능이 있는 것으로 알려져 있다. 특히 덩이뿌리는 주로 약용, 식용으로 널리 사용되며, 덩이뿌리에는 aspargine, β-sitosterol, 5-methoxy-methylfurfural, 점액질, steroid saponin이 함유되어 있다. 천문동은 맛이 달고 쓰며 성질이 차고 폐경,신경에 작용하여 폐,신의 음식을 보하고 기침멎이 작용 및 항암작용 같은 약리적인 기능을 가지고 있으나 비슷한 약효를 지닌 맥문동에 비해 사용량이 적은편이며 무분별한 남획으로 인해 멸종위기에 처해 있는 약재이다.

상기 진피(Citri Pericarpium)는 운향과(Rutaceae)에 속한 상록 소교목(常綠小喬木)인 귤나무(橘) Citrus unshiu Markovich 및 동속 근연식물의 성숙한 과피를 건조한 것으로 귤피, 지실, 지각 등의 이름으로 사용되어진 한약재이다.

껍질이 얇고 조각이 크며, 붉은 빛이고 윤기가 있으며 향기가 진한 것이 좋다. 주요 성분은 limonene, α,β-pinene 등이다. Flavonoids 화합물로는 hesperidin이 약 8.4% 정도 함유되어 있고 neohesperidin, tangeritin, citromitin, 5-ο-desmethyl citromitin 등이 있다. 이 외에 inositol, vitamin C, Vitamin B1 및 pectin 등이 함유되어 있다.

진피의 약리작용은 정유성분에 의해 소화기관에 완만한 자극 작용이 있어서 소화촉진을 나타내며, 자극성 거담 작용이 있고 천식을 가라앉히며, 항궤양 작용 및 항위액분비 작용이 있다. 또한 심혈관 계통에 강심 작용이 있고, 혈압을 올리며, 항알레르기 효과, 담즙 분비 촉진으로 인한 지방소화효소의 활성증가, 자궁 평활근 억제작용 및 항균작용 등이 있다.

상기 물(water)은 증류수 등을 사용할 수 있으나, 균사체의 성장 및 증식을 고려하여 유리수를 사용한다.

상기 유리수는 자유수(free water)라고도 하는 것으로서, 식품 중에서 자유로이 운동할 수 있는 물을 지칭한다.

상기 유리수의 특징을 살펴보면, 극성이 크기 때문에 용질(염류, 당류, 수용성 단백질)에 대해 용매로 작용하며, 건조시키면 제거되고, 0℃ 이하로 냉각시키면 동결되는 특징이 있다. 4℃에서 밀도가 가장 크고, 동결에 의해 부피 팽창하며 쌍극자로서 전자파에 의해 분자가 회전하여 발열에 관여한다. 그리고 미생물 번식과 성장에 유용하고, 비점과 융점이 높고 증발열, 용해열, 비열, 표면장력과 점도가 크다는 특징이 있다.

미생물을 배양하기 위해서는 성장에 필요한 영양분을 적절히 배합하여 공급하여야한다. 미생물의 영양요소는 주로 탄소원, 질소원, 인산, 마그네슘염, 기타 무기염류, 비타민등으로 대별할 수 있다.

상기 탄소원은 미생물의 성장시 에너지원 및 세포의 구성요소로 주로 사용된다. 본 발명에서는 기본배지원 외에 탄소원을 추가로 첨가하여 배지를 조성한다.

상기 탄소원은 녹말, 덱스트린(dextrin), 유청(whey), 전분, 포도당, 사과산, 구연 산, 주석산, 초산, 지방산, 파라핀, 탄화수소, 옥수수 전분(Corn starch), 트레할로오스(trehalose), 락토오스(lactose), 글리세롤(glycerol), 가용성 전분(soluble starch), 덱스트린(dextrin), 설탕(sucrose), 탈토오스(maltose), 솔비톨(sorbitol), 마니톨(mannitol), 프록토오스(fructose) 중 선택되는 어느 1종 또는 2종 이상을 사용한다.

바람직하게는 트레할로오스(trehalose) 0.1~50wt%, 락토오스(lactose) 0.1~50wt%, 글리세롤(glycerol) 0.1~50wt%, 가용성 전분(soluble starch) 0.1~50wt%, 덱스트린(dextrin) 0.1~50wt%, 설탕(sucrose) 0.1~50wt%, 탈토오스(maltose) 0.1~50wt%, 솔비톨(sorbitol) 0.1~50wt%, 마니톨(mannitol) 0.1~50wt%, 프록토오스(fructose) 0.1~50wt%의 혼합으로 조성된 것을 사용한다.

상기 질소원 역시 미생물을 구성하는 단백질의 생합성을 위하여 필수적으로 배지에 공급되어야한다. 암모늄염 형태로 공급될 경우, 질소원을 공급하는 기능외에 pH를 조절하는 기능도 동시에 수행한다.

미생물의 성장시 pH를 변화시키는 주 요인은 배지 내의 암모니아의 소비 및 유기산의 생산이다. 이때 암모니아 기체 및 암모니아수를 공급하여 pH를 일정 수준으로 유지시킨다. 유기산의 생산이 과다한 경우 pH의 조절을 위하여 과량의 암모니아가 공급되어 배지내 암모니아의 농도를 상승시키는 경우가 많다. 복합배지에서는 단백질 분해물 및 Yeast Extract등이 주로 질소원으로 사용된다.

본 발명에서는 기본배지원 외에 질소원을 추가로 첨가하여 배지를 조성한다.

상기 질소원은 황산암모늄, 인산수소암모늄, 옥수수 침출액(corn steep liquor), 효모추출액(yeast extract), 펩톤(peptone), 대두박(soybean meal), 맥아추출물(malt extract), 요소(urea), 글리신(glycine) 중 선택되는 어느 1종 또는 2종이다.

바람직하게는 펩톤(peptone) 0.1~50wt%, 대두박(soybean meal) 0.1~50wt%, 맥아추출물(malt extract) 0.1~50wt%, 요소(urea) 0.1~50wt%, 글리신(glycine) 0.1~50wt% 의 혼합으로 조성된 것을 사용한다.

상기 탄소원과 질소원 외에 균사체의 성장 및 증식을 강화시키기 위하여, 본 발명에서는 보리(Barley), 옥수수(Corn), 귀리(Oats), 쌀(Rice), 밀(Wheat), 당밀(Molasses), 옥수수 침지액(Corn Steep liquor), 옥수수글루텐박(Corn gluten meal), 면실박(Cotton seed meal), 어분(Fish meal) 중 선택되는 어느 1종 또는 2종 이상의 복합배지원(E)을 더 첨가한다.

상기 복합배지원(E)은 바람직한 예는 옥수수글루텐박(Corn gluten meal) 0.1~50wt%, 면실박(Cotton seed meal) 0.1~50wt%, 어분(Fish meal) 0.1~50wt%의 혼합으로 조성된 것을 사용하는 것이다.

상기 제시된 성분들을 이용하여 배지를 조성한 후에는 배지를 살균처리하고, 살균처리 후 세리포리아 락세라타(Ceriporia lacerata) 균사체를 배지 전체 중량의 4~5wt%로 접종하여 배양한다.

배양기 내에서 24~30℃, 120~180rpm으로 9~11일간 배양을 하게 되며, 이때 pH는 4.5~6.5를 유지한다.

상기 온도 및 pH 조건은 세리포리아 락세라타의 증식 및 성장을 위한 최적의 조건을 제시한 것으로서, 배지의 조성 외에 이와 같은 배양 조건을 충족시키는 것이 바람직하다.

이와 같은 과정을 거쳐 생산된 균사체 배양액은 일정 성분으로 첨가하여 항당뇨 효과를 갖는 약리학적 조성물을 제공한다.

이때 균사체 배양액의 첨가량은 약리학적 조성물의 전체 중량 대비 0.1~50wt%로 첨가하는 것이 바람직하다.

본 발명에 따른 혈당조절용 세리포리아 락세라타 배양액 조성물 제조공정에 대해 구체적으로 살펴보면 다음의 실시예 1과 같다.

1. 기본배지원(A) 조성: 글루코스(Glucose) 60wt%, 효모추출물(Yeast extract) 19.5wt%, 펩톤(Peptone) 18.6wt%, 황산망간(MnSO₄ ·H₂O) 0.485wt%, 황산철(FeSO₄ ·7H₂O) 0.03wt%, 황산아연(ZnSO₄ ·7H₂O) 0.005wt%, 질산나트륨(NaNO₃) 0.87wt%, 염화칼슘(CaCl₂) 0.5wt%, 염화망간(MnCl₂ ·4H₂O) 0.005wt%, 황산구리(CuSO₄ ·5H₂O) 0.005wt%를 혼합하여 기본배지원을 조성한다.

2. 한방배지원(B) 조성: 어성초 20wt%, 감잎 20wt%, 서목태 20wt%, 흑지마 20wt%, 황기 20wt%를 혼합하여 한방배지원을 조성한다.

3. 탄소원(C) 조성: 트레할로오스(trehalose) 10wt%, 락토오스(lactose) 10wt%, 글리세롤(glycerol) 10wt%, 가용성 전분(soluble starch) 10wt%, 덱스트린(dextrin) 10wt%, 설탕(sucrose) 10wt%, 탈토오스(maltose) 10wt%, 솔비톨(sorbitol) 10wt%, 마니톨(mannitol) 10wt%, 프록토오스(fructose) 10wt%를 혼합하여 탄소원을 조성한다.

4. 질소원(D) 조성: 펩톤(peptone) 20wt%, 대두박(soybean meal) 20wt%, 맥아추출물(malt extract) 20wt%, 요소(urea) 20wt%, 글리신(glycine) 20wt%를 혼합하여 질소원을 조성한다.

5. 복합배지원(E) 조성: 옥수수글루텐박(Corn gluten meal) 50wt%, 면실박(Cotton seed meal) 30wt%, 어분(Fish meal) 20wt%를 혼합하여 복합배지원을 조성한다.

6. 상기 기본배지원(A) 100wt% 중 96wt%; 상기 한방배지원(B) 100wt% 중 3wt%; 상기 탄소원(C) 100wt% 중 0.3wt%; 상기 질소원(D) 100wt% 중 0.3wt%; 상기 복합배지원(E) 100wt% 중 0.4wt%;를 혼합하여 배지를 조성한다.

7. 상기 배지를 110℃에서 15분간 살균한다.

8. 살균한 배지에 세리포리아 락세라타(Ceriporia lacerata) 균사체를 접종한다. 이때 세리포리아 락세라타(Ceriporia lacerata) 균사체를 배지 전체 중량에 대해 5wt%로 접종한다.

9. 상기 세리포리아 락세라타 균사체를 접종한 배지를 배양기에서 27℃, 150rpm으로 10일간 배양한다.

10. 10일간의 배양을 마친 배양액을 -40℃에서 15시간 동안 동결시킨 후, 건조기에 투입하여 0.05torr에서 30시간 동안 진공 건조한다.

11. 상기 동결건조한 배양액을 10배수의 증류수에 가하여 65℃에서 5시간씩 3회 추출하고, 여과지로 여과한 다음 여액을 모두 모아 원심분리한다.

12. 원심분리한 상등액을 감압농축기로 1/10로 농축한다.

13. 상기 농축과정을 거친 상등액을 -40℃에서 15시간 동안 동결시킨 후, 건조기에 투입하여 0.05torr에서 30시간 동안 진공 건조한다.

14. 동결건조시킨 배양액을 분쇄하여 30mesh 표준체를 사용해 체질하여 배양액 분말을 제조함으로써 세리포리아 락세라타 배양액의 유효성분이 함유된 당뇨, 당뇨합병증 또는 당뇨로 인한 질환을 예방, 개선하기 위한 조성물이 완성된다.

다음으로 상기 실시예 1을 통해 제조된 조성물의 당뇨, 당뇨합병증 또는 당뇨로 인한 질환을 예방, 개선 가능성에 대해 실험을 통해 살펴보고자 한다.

[시험예 1]

상기 실시예 1을 통해 제조된 세리포리아 락세라타 배양액 조성물의 항당뇨 효과를 확인하기 위하여, 일반 SD-rat의 단기 혈당 강화 효과, 당뇨 유발 SD-rat의 단기 혈당 강화 효과, α-Glucosidase 저해 활성, 혈청 ALT 및 AST 활성에 대해 살펴보고자 한다.

1) 일반 SD-rat의 단기 혈당 강화 효과

수컷 SD-rat(생후 5주령, 140~150 g)을 온도 23℃, 습도 56%의 조건에서, 마우스 렛 전용사료 15~20g과 물을 주면서 1주일간 적응시켰다.

포도당을 상기 수컷 SD-rat에 3 g/kg의 양으로 경구투여한 후, 바로 상기 세리포리아 락세라타 배양액 조성물을 500 mg/㎏, 1,000 mg/㎏의 농도로 투여하여 시간에 따른 혈중 포도당 함량의 변화를 측정하였다.(실험구)

그리고 대조구로서, 상기 수컷 SD-rat에 3 g/kg의 양으로 경구투여한 후, 바로 멸균수를 투여하여 시간에 따른 혈중 포도당 함량의 변화를 측정하였다.(대조구) 측정결과는 도 1에 도시된 바와 같다.

포도당을 투여하지 않은 수컷 SD-rat의 평균 혈중 포도당 함량은 86±5 ㎎/㎗로 나타났다.

포도당을 3 g/kg의 양으로 경구투여한 다음 바로 멸균수를 투여한 후 10분이 경과하여 측정한 수컷 SD-rat의 평균 혈중 포도당 함량은 198±3 ㎎/㎗이었으며, 이후 지속적으로 떨어져 2시간 후에는 정상의 혈중 포도당 함량을 보였다.(대조구 1)

포도당을 3 g/kg의 양으로 경구투여한 다음 바로 세리포리아 락세라타 배양액 조성물을 500 mg/㎏ 농도로 투여한 후 10분이 경과하여 측정한 수컷 SD-rat의 평균 혈중 포도당은 함량은 118±5 ㎎/㎗이었으며, 이후 지속적으로 떨어져 1시간 30분 후에는 정상상태의 혈중 포도당 함량을 보였다.(실험구 1)

포도당을 3 g/kg의 양으로 경구투여한 다음 바로 세리포리아 락세라타 배양액 조성물을 1000 mg/㎏ 농도로 투여한 후 10분이 경과하여 측정한 수컷 SD-rat의 평균 혈중 포도당은 함량은 101±5 ㎎/㎗이었으며, 이후 지속적으로 떨어져 1시간 후에는 정상상태의 혈중 포도당 함량을 보였다.(실험구 2)

이상의 결과를 볼 때 세리포리아 락세라타 배양액 조성물을 투여한 실험구 1 및 2는 상기 세리포리아 락세라타 배양액 조성물을 투여하지 않은 대조구 1과 빅하여 혈중 포도당 함량의 차이가 컸으며, 또한 세리포리아 락세라타 배양액 조성물의 농도가 증가할 수록 혈중 포도당 함량이 낮아지는 것을 확인하였다. 이로써 상기 세리포리아 락세라타 배양액 조성물의 단기 혈당 강화효과가 있음을 알 수 있었다.

2) 당뇨 유발 SD-rat의 단기 혈당 강화 효과

1주간의 적응기간이 지난 후 0.1 M citrate buffer (pH 4.5)에 용해시킨 streptozotocin (STZ, Sigma Co., USA, 65 mg/kg)을 동물의 복강에 주사하여 당뇨를 유발하였다. 그리고 5일 후 간이 혈당계 (Glucotrend, Roche, Germany)로 측정한 혈당이 250 mg/dL 이상일 때 당뇨병이 유발된 것으로 간주하고 실험에 사용한다. 측정결과는 도 2에 도시된 바와 같다.

상기 당뇨유발 SD-rat에 멸균수를 경구 투여하고 30분이 경과한 후에 측정한 혈중 포도당 함량은 520±10 ㎎/㎗로 급격히 증가하였고 시간이 지남에 따라 점점 낮아지는 경향을 보이다가, 120분 후 다시 초기의 혈중 포도당 함량을 보였다.(대조구 2)

상기 당뇨유발 SD-rat에 세리포리아 락세라타 배양액 조성물을 500 mg/㎏ 농도로 투여한 후 30분이 경과하여 측정한 수컷 SD-rat의 평균 혈중 포도당은 함량은 380±5 ㎎/㎗이었으며, 이후 지속적으로 떨어져 1시간 30분 후에는 초기 혈중 포도당 함량을 보였다.(실험구 3)

상기 당뇨유발 SD-rat에 세리포리아 락세라타 배양액 조성물을 1000 mg/㎏ 농도로 투여한 후 30분이 경과하여 측정한 수컷 SD-rat의 평균 혈중 포도당은 함량은 365±5 ㎎/㎗이었으며, 이후 지속적으로 떨어져 1시간 후에는 초기 혈중 포도당 함량을 보였다.(실험구 4)

이와 같은 결과는 상기 세리포리아 락세라타 배양액 조성물이 당뇨 유발 SD-rat에서도 혈당 강하의 효과가 있음을 알 수 있다.

3) α-Glucosidase 저해 활성 측정

α-Glucosidase는 소장점막에서 분비되는 효소로서 소화과정에서 마지막단계를 촉진시키는 역할을 한다. 구체적으로는 탄수화물을 포도당으로 분해시켜 체내로 흡수시키는 역할을 한다. 따라서 α-Glucosidase의 활성을 조절하면 식후의 급격한 혈당상승을 억제할 수 있으며 이로 인해 당뇨나 비만 환자의 관리에 유용한다.

상기 α-Glucosidase 저해 활성 측정은 nitrophenol 분석법을 변형하여 측정하였다. 0.5 U/mL α-glucosidase 효소액 50 μL, 2.4 mM p-nitrophenyl-α-D-glucopyranoside 75μL, 농도별 세리포리아 락세라타 배양액 조성물 50 μL 및 50 mM potassium phosphat buffer (pH 6.8) 825 μL를 혼합하여 Multimicroplate reader를 사용하여 400 nm에서 흡광도를 측정하였다.(실험구 5)

측정 결과 α-Glucosidase 저해 활성은 균사체 배양액의 농도가 증가할수록 저해 활성이 증가하는 것으로 나타났다(도 3).

4) 혈청 ALT 및 AST 활성 측정

ALT 및 AST 활성은 간 조직 손상의 지표로 활용되는 것으로서, 약물이나 외부적 스트레스에 의해 간조직이 손상을 받으면 혈액 중 ALT 및 AST 활성이 증가하게 된다. 상기 ALT 및 AST는 생체내 아미노산을 형성하는 효소로서 간 조직에 많은 양이 존재한다. ALT 및 AST는 일반적으로 간 조직에 많은 양이 존재하지만 간 손상에 의해 혈액 내로 유입된다.

앞서 단기 혈당 강화 효과에 이용된 바와 동일한, 1주일간 당뇨증상이 없는 수컷 SD-rat(생후 5주령, 140~150 g)과 상기 당뇨 유발 수컷 SD-rat(생후 5주령, 140~150 g)의 ALT 및 AST 활성을 측정한 후, 상기 실시예 1의 세리포리아 락세라타 배양액 조성물을 투여한 후 혈청 ALT 및 AST 활성의 감소정도를 비교하였다.

혈청 ALT(alanine aminotransferase) 및 AST(aspartate aminotransferase) 활성도는 Reitman과 Freankel 방법에 준하여 측정하였다.

상기 정상군 1의 수컷 SD-rat과 당뇨군 1 및 2의 수컷 SD-rat(각 그룹별 6마리)의 혈청 ALT(alanine aminotransferase) 및 AST(aspartate aminotransferase) 측정 결과는 표 1, 도 4 및 5에 제시된 바와 같다.

혈청 ALT 및 AST 활성(Karmen U/L)
구분	ALT	AST
정상군 1(대조구 3)	30.54±8.15	92.54±23.21
당뇨군 1(대조구 4)	46.21±10.31	117.52±31.45
당뇨군 2(실험구 6)	27.21±10.52	91.21±27.25
◇ 정상군 (대조구 3) : 실시예 1의 세리포리아 락세라타 배양액 조성물 미투여 ◇ 당뇨군 1(대조구 4) : 실시예 1의 세리포리아 락세라타 배양액 조성물 미투여 ◇ 당뇨군 2(실험구 6) : 실시예 1의 세리포리아 락세라타 배양액 조성물 투여

측정결과, 실시예 1에 따라 제조된 세리포리아 락세라타 배양액 조성물을 투여한 수컷 SD-rat의 혈청 내 ALT 및 AST 활성이 확연하게 줄어드는 것을 확인할 수 있었다. 이로써 세리포리아 락세라타 배양액 조성물의 투여가 당뇨에 의해 손상된 간 조직을 회복시키는 효과가 있음을 예상할 수 있다.

본 발명에 따른 혈당조절용 세리포리아 락세라타 배양액 조성물 제조방법 및 이로부터 제조된 세리포리아 락세라타 배양액 조성물은 혈당조절기능성이 뛰어나고, 이로 인해 당뇨병 예상과, 당뇨병 환자의 지속적인 혈당 조절을 통한 합병증 발명비율을 현저하게 낮출 수 있어 산업상 이용가능성이 크다.

Claims

글루코스(Glucose) 40~70wt%, 효모추출물(Yeast extract) 5~30wt%, 펩톤(Peptone) 5~30wt%, 황산망간(MnSO₄ ·H₂O) 0.1~1.5wt%, 황산철(FeSO₄ ·7H₂O) 0.01~0.05wt%, 황산아연(ZnSO₄ ·7H₂O) 0.001~0.009wt%, 질산나트륨(NaNO₃) 0.50~0.87wt%, 염화칼슘(CaCl₂) 0.1~0.5wt%, 염화망간(MnCl₂ ·4H₂O) 0.001~0.009wt%, 황산구리(CuSO₄ ·5H₂O) 0.001~0.009wt%의 혼합으로 조성된 100wt%의 기본배지원(A) 95~99.5wt%와,
여주, 어성초, 삼백초, 둥글레, 계피, 포공영, 백강잠, 산약, 감잎, 구기자, 서목태, 흑지마, 돼지감자, 삼백초, 상엽, 감국, 산사, 황기, 천문동, 진피 중 선택되는 어느 1종 또는 2종 이상의 한약재로부터 추출된 한방 추출물:물(water)을 1:1~1.5의 중량비율로 혼합하여 조성된 한방배지원(B) 0.1~4.7wt%와,
녹말, 덱스트린(dextrin), 유청(whey), 전분, 포도당, 사과산, 구연 산, 주석산, 초산, 지방산, 파라핀, 탄화수소, 옥수수 전분(Corn starch), 트레할로오스(trehalose), 락토오스(lactose), 글리세롤(glycerol), 가용성 전분(soluble starch), 덱스트린(dextrin), 설탕(sucrose), 탈토오스(maltose), 솔비톨(sorbitol), 마니톨(mannitol), 프록토오스(fructose) 중 선택되는 어느 1종 또는 2종 이상의 탄소원(C) 0.1~1wt%와,
황산암모늄, 인산수소암모늄, 옥수수 침출액(corn steep liquor), 효모추출액(yeast extract), 펩톤(peptone), 대두박(soybean meal), 맥아추출물(malt extract), 요소(urea), 글리신(glycine) 중 선택되는 어느 1종 또는 2종 이상의 질소원(D) 0.1~1wt%와,
보리(Barley), 옥수수(Corn), 귀리(Oats), 쌀(Rice), 밀(Wheat), 당밀(Molasses), 옥수수 침지액(Corn Steep liquor), 옥수수글루텐박(Corn gluten meal), 면실박(Cotton seed meal), 어분(Fish meal) 중 선택되는 어느 1종 또는 2종 이상의 복합배지원(E) 0.1~1wt%를 혼합(A+B+C+D+E)하여 조성된 배지를 110~120℃에서 15~20분간 살균하고, 살균과정을 거친 배지에 세리포리아 락세라타(Ceriporia lacerata) 균사체를 배지 전체 중량의 4~5wt%로 접종하여 배양기에서 24~30℃, 120~180rpm으로 9~11일간 배양하여 균사체 배양액을 제조하는 단계(S10)와,
상기 배양액을 동결건조하는 단계(S20)와,
상기 동결건조된 배양액에 대하여 5~20배수의 물을 가하여 90~98℃에서 5~15시간씩 3회 추출하고, 여과지로 여과한 다음 여액을 모두 모아 원심분리하는 단계(S30)와,
상기 원심분리한 상층액을 감압농축기로 1/8~1/10로 농축하는 단계(S40)와,
상기 농축한 상층액을 동결건조한 후 분쇄하여 분말화하는 단계(S50)를 포함하여 이루어지는 것임을 특징으로 하는 세리포리아 락세라타 배양액의 유효성분이 함유된 당뇨, 당뇨합병증 또는 당뇨로 인한 질환을 예방, 개선하기 위한 배양액 조성물 제조방법.
청구항 1에 있어서,
한방 추출물은 어성초 10~50wt%, 감잎 10~50wt%, 서목태 10~50wt%, 흑지마 10~50wt%, 황기 10~50wt%의 혼합으로 조성된 100wt%의 조성물임을 특징으로 하는 세리포리아 락세라타 배양액의 유효성분이 함유된 당뇨, 당뇨합병증 또는 당뇨로 인한 질환을 예방, 개선하기 위한 배양액 조성물 제조방법.
청구항 1에 있어서,
한방 추출물은 둥글레 10~50wt%, 여주 10~50wt%, 감국 10~50wt%, 산사 10~50wt%, 천문동 10~50wt%의 혼합으로 조성된 100wt%의 조성물임을 특징으로 하는 세리포리아 락세라타 배양액의 유효성분이 함유된 당뇨, 당뇨합병증 또는 당뇨로 인한 질환을 예방, 개선하기 위한 배양액 조성물 제조방법.
청구항 1에 있어서,
한방 추출물은 삼백초 10~50wt%, 계피 10~50wt%, 포공영 10~50wt%, 백강잠 10~50wt%, 산약 10~50wt%의 혼합으로 조성된 100wt%의 조성물임을 특징으로 하는 세리포리아 락세라타 배양액의 유효성분이 함유된 당뇨, 당뇨합병증 또는 당뇨로 인한 질환을 예방, 개선하기 위한 배양액 조성물 제조방법.
청구항 1에 있어서,
한방배지원(B)의 조성에 사용되는 물(water)은 유리수임을 특징으로 하는 세리포리아 락세라타 배양액의 유효성분이 함유된 당뇨, 당뇨합병증 또는 당뇨로 인한 질환을 예방, 개선하기 위한 배양액 조성물 제조방법.
청구항 1에 있어서,
탄소원(C)은 트레할로오스(trehalose) 0.1~50wt%, 락토오스(lactose) 0.1~50wt%, 글리세롤(glycerol) 0.1~50wt%, 가용성 전분(soluble starch) 0.1~50wt%, 덱스트린(dextrin) 0.1~50wt%, 설탕(sucrose) 0.1~50wt%, 탈토오스(maltose) 0.1~50wt%, 솔비톨(sorbitol) 0.1~50wt%, 마니톨(mannitol) 0.1~50wt%, 프록토오스(fructose) 0.1~50wt%의 혼합으로 조성된 100wt%의 조성물임을 특징으로 하는 세리포리아 락세라타 배양액의 유효성분이 함유된 당뇨, 당뇨합병증 또는 당뇨로 인한 질환을 예방, 개선하기 위한 배양액 조성물 제조방법.
청구항 1에 있어서,
질소원(D)은 펩톤(peptone) 0.1~50wt%, 대두박(soybean meal) 0.1~50wt%, 맥아추출물(malt extract) 0.1~50wt%, 요소(urea) 0.1~50wt%, 글리신(glycine) 0.1~50wt%의 혼합으로 조성된 100wt%의 조성물임을 특징으로 하는 세리포리아 락세라타 배양액의 유효성분이 함유된 당뇨, 당뇨합병증 또는 당뇨로 인한 질환을 예방, 개선하기 위한 배양액 조성물 제조방법.
청구항 1에 있어서,
복합배지원(E)은 옥수수글루텐박(Corn gluten meal) 0.1~50wt%, 면실박(Cotton seed meal) 0.1~50wt%, 어분(Fish meal) 0.1~50wt%의 혼합으로 조성된 100wt%의 조성물임을 특징으로 하는 세리포리아 락세라타 배양액의 유효성분이 함유된 당뇨, 당뇨합병증 또는 당뇨로 인한 질환을 예방, 개선하기 위한 배양액 조성물 제조방법.
청구항 1에 있어서,
배양기에서의 배양조건은 pH 4.5~6.5임을 특징으로 하는 세리포리아 락세라타 배양액의 유효성분이 함유된 당뇨, 당뇨합병증 또는 당뇨로 인한 질환을 예방, 개선하기 위한 배양액 조성물 제조방법.
청구항 1 내지 청구항 9 중 선택되는 어느 하나의 항으로부터 제조된 것임을 특징으로 하는 세리포리아 락세라타 배양액의 유효성분이 함유된 당뇨, 당뇨합병증 또는 당뇨로 인한 질환을 예방, 개선하기 위한 배양액 조성물.