KR101693190B1 - 인유두종바이러스 검사와 mkrn1 발현 패턴에 따른 자궁경부암 예측 및 진단 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 인유두종바이러스 검사와 MKRN1 발현 패턴에 따른 자궁경부암 예측 및 진단 방법에 관한 것이다. 본 발명의 진단법을 이용하는 경우, 자궁경부암 진단의 정확도가 증가하므로, 효과적인 자궁경부암 예측 및 진단에 큰 활용이 기대된다.

Description

인유두종바이러스 검사와 MKRN1 발현 패턴에 따른 자궁경부암 예측 및 진단 방법{Prediction and diagnosis method of cervical cancer using HPV test and MKRN1 expression pattern}

본 발명은 인유두종바이러스 검사와 MKRN1 발현 패턴에 따른 자궁경부암 예측 및 진단 방법에 관한 것이다.

자궁경부암은 여성에게서 발생되는 악성 종양 가운데 두 번째로 발병 빈도가 높은 것으로, 매년 전세계적으로 35만 명 이상의 환자가 자궁경부암으로 사망하고 있으며, 그 수가 계속 증가하고 있다(Pisani P, 등. Int J Cancer 2002;97(1):72-81.). 일반적으로 자궁경부암을 진단을 위해 자궁경부 액상 세포 검사(Pap stain in Liquid based cytology specimen)를 사용하고 있다. 자궁경부 액상 세포 검사는 자궁경부 표면에서 떨어져 나오는 세포를 채취하여 유리 슬라이드에 바른 후, 현미경으로 세포의 이상 유무를 검사하는 것으로, 현미경으로 이상 세포를 발견하는 것이 목적이다. 검사의 특성 상, 빠른 시간 내의 많은 검체를 검사할 수 있다는 장점이 있으나, 보통 한 환자의 시료 중에 포함된 30만~50만개의 세포 중에서 단 몇 개의 이상세포를 발견하여야 하므로 진단의 정확성이 낮다는 문제점이 지적되고 있다.

이에 따라, 최근 인유두종바이러스(human papillomavirus: 인유두종바이러스)를 이용한 자궁경부암 진단법이 개발되고 있다. 인유두종바이러스는 자궁경부암의 주원인으로 알려져 있으며, 100여종이 넘는 인유두종바이러스 중 40여종이 여성 생식기에서 작용하는 것으로 밝혀졌다(de Villiers EM, 등. Virology 2004; 324:17-27). 인유두종바이러스가 정상 세포에 감염되면 viral oncogene이 숙주세포(host cell)의 유전자에 삽입되어 여러 바이러스성 단백질(viral protein)을 발현하게 되므로, 최근 인유두종바이러스 또는 인유두종바이러스 기원의 바이러스성 단백질 측정을 통한 자궁경부암 예측 및 진단 방법이 개발되고 있는 추세이다(유럽 등록 EP1253934, 한국 공개 KR2013-0012512).

그러나, 인유두종바이러스를 이용한 자궁경부암 진단은 음성 시료에서 정확도가 매우 낮아 자궁경부암의 초기 진단에 이용하기 어려운 문제점이 있으므로, 보다 정확한 자궁경부암 진단을 위하여 인유두종바이러스 및 다양한 자궁경부암 유전자 마커를 결합한 새로운 진단법의 개발이 요구되고 있는 실정이다.

본 발명은 상기와 같은 종래의 기술상의 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로, 인유두종바이러스 검사와 MKRN1 발현 패턴에 따른 자궁경부암 예측 및 진단 방법에 관한 것이다.

그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당 업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

이하, 본원에 기재된 다양한 구체예가 도면을 참조로 기재된다. 하기 설명에서, 본 발명의 완전한 이해를 위해서, 다양한 특이적 상세사항, 예컨대, 특이적 형태, 조성물 및 공정 등이 기재되어 있다. 그러나, 특정의 구체예는 이들 특이적 상세 사항 중 하나 이상 없이, 또는 다른 공지된 방법 및 형태와 함께 실행될 수 있다. 다른 예에서, 공지된 공정 및 제조 기술은 본 발명을 불필요하게 모호하게 하지 않게 하기 위해서, 특정의 상세사항으로 기재되지 않는다. "한 가지 구체예" 또는 "구체예"에 대한 본 명세서 전체를 통한 참조는 구체예와 결부되어 기재된 특별한 특징, 형태, 조성 또는 특성이 본 발명의 하나 이상의 구체예에 포함됨을 의미한다. 따라서, 본 명세서 전체에 걸친 다양한 위치에서 표현된 "한 가지 구체예에서" 또는 "구체예"의 상황은 반드시 본 발명의 동일한 구체예를 나타내지는 않는다. 추가로, 특별한 특징, 형태, 조성, 또는 특성은 하나 이상의 구체예에서 어떠한 적합한 방법으로 조합될 수 있다.

명세서에서 특별한 정의가 없으면 본 명세서에 사용된 모든 과학적 및 기술적인 용어는 본 발명이 속하는 기술분야에서 당업자에 의하여 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다.

본 발명의 일 구체예에서 인유두종바이러스 감염 의심 질환이란, 인체 감염 시 사마귀, 자궁경부암의 발생 원인이 되는 파포바 바이러스과에 속하는 이중 나선상 DNA 바이러스인 인유두종바이러스(human papillomavirus; HPV)의 감염이 원인이 되어 발생하는 것으로 의심되는 질환이다. 현재까지 알려진 100여 종의 인유두종바이러스 중에서 40여종이 생식 기관에서 발견되며, 자궁경부 상피 내에 병적인 변화를 일으키는 것으로 알려져 있다. 이 중 고위험군(high-risk group)인 발암성 인유두종바이러스가 자궁경부암과 연관성이 높다고 알려져 있으며, 발암성 인유두종바이러스 중 16, 18번이 가장 중요하고 전 세계적으로 70% 이상의 자궁경부암에서 발견된다. 이 외에도 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68, 69, 73번이 고위험군 바이러스에 속한다. 자궁경부의 양성 병리적 변화인 사마귀 또는 곤지름(성병성 사마귀) 등에서 발견되는 저위험군(low risk group) 바이러스는 6, 11, 34, 40, 42, 3, 44, 54, 61, 70, 72, 81번 등이다.

본 발명의 일 구체예에서 자궁경부암이란, 자궁경부에 발생하는 악성 종양으로, 자궁목암이라고도 한다. 자궁경부암 전단계인 자궁경부이형증에서 자궁경부상피내암으로 진행되는 데 걸리는 시간은 7년 정도이고, 상피내암에서 미세침윤성암으로 진행하는 데는 약 14년이 걸린다. 미세침윤암의 경우에는 진행 속도가 빨라서 육안으로 암이 보일 때까지 약 3년이 걸린다. 이렇게 암 전단계를 거치는 시간이 상대적으로 길기 때문에 조기진단이 가능하고 조기에 치료하면 완치가 가능하기 때문에 조기 진단이 중요하게 강조되는 암이다. 주로 45∼55세의 경산부에게 많이 나타난다. 이 암의 발생 평균연령은 0기가 35세이고, 1기 이상은 발생 평균연령이 45세 정도이며, 최근에는 젊은 나이에도 암이 진단되는 경우가 증가하는 경향이 있다. 이 질환은 우리나라에서 발생하는 전체 암 중에서 4위, 여성에게 발생하는 암 중에서는 1위를 차지한다. 자궁경부암의 원인으로는 성접촉성 감염질환이 가장 널리 알려져 있다. 또한 일찍 시작된 성관계, 다수의 성교 상대자, 남성 요인, 인유두종바이러스(HPV)감염, 인간면역결핍바이러스(HIV)감염 등이 그 위험요인으로 알려져 있는데, 이 중에서 인유두종바이러스 감염이 가장 유력한 원인인자로 추정된다. 자궁경부암의 주요 증세는 성교 후 질출혈로 이는 간헐적으로 발생하거나 폐경 이후의 출혈로 나타날 수 있다. 병변이 진행된 환자의 경우에는 지속적이며 대량의 질출혈, 악취를 동반한 질분비물이 나올 수 있으며, 요관, 골반벽, 좌골신경 등에 전이되었을 때에는 측복부나 하지로 뻗치는 통증이 나타날 수 있다. 또한 방광이나 직장에 전이되었을 때에는 배뇨곤란, 혈뇨, 직장출혈, 변비 등의 증세가 나타날 수 있다. 합병증은 주로 수술 후에 나타나는데, 급성 합병증으로는 출혈, 요관질누공, 방광질누공, 폐색전증, 소장폐쇄, 발열성이환증 등이 있다. 이 중에서 폐색전증은 수술 후 사망을 초래하기 쉬운 합병증이므로 주의해야 한다. 아급성 합병증에는 방광기능장애, 림프낭종 등이 있고, 만성 합병증에는 방광무긴장증, 요관협착 등이 있다. 방사선 치료 후 합병증으로 자궁천공, 발열, 복통, 혈뇨, 혈변, 직장결장염, 직장질누공, 방광질누공, 방광누공, 장협착, 요관협착 등이 있을 수 있으나 이제 한정하는 것은 아니다. 기본적인 치료는 수술이나 방사선 치료를 선택하는데, 방사선 치료는 모든 병기에서 시행할 수 있다. 수술은 보통 근치적 자궁절제술 및 골반 림프절 절제술을 시행한다. 수술은 자궁경부암의 초기 단계에서만 시행하며, 다음과 같은 경우에 적절하다. ① 젊은 여성 중 난소기능을 보존해야 하는 경우, ② 질의 성기능을 보존해야 하는 경우, ③ 임신에 합병된 자궁경부암인 경우, ④ 장의 염증성 질환을 동반했을 경우, ⑤ 방사선 치료를 받은 과거력이 있을 경우, ⑥ 골반 장기염을 동반한 경우, ⑦ 자궁 부속기 종양을 동반한 경우에 시행한다. 수술절제 경계부위가 암병소에 근접하거나 암의 침윤이 있는 경우, 골반 림프절 전이가 발견되었을 때에는 재발의 위험을 줄이기 위해 보조적으로 방사선 치료를 시행할 수 있다. 한편 화학요법은 국소적인 암뿐 아니라 파종성 암도 치료할 수 있다는 장점이 있지만, 자궁경부암의 95％에 해당하는 편평상피암에는 효과가 없다. 성관계를 시작한 가임여성은 특별한 증세가 없더라도 적어도 6개월에 한 번씩 자궁경부 세포진검사를 시행하여 자궁경부의 이상 유무를 확인하면 자궁경부암을 예방할 수 있다.

본 명세서에 있어서, 자궁경부 이형성의 진행 단계는 세포 형태 이상을 기준으로 정상(Normal 또는 Negative), 낮은 수준의 평편 상피내 병변(Low-grade squamous intraepithelial lesion; LSIL), 높은 수준의 평편 상피내 병변(High-grade squamous intraepithelial lesion; HSIL) 및 침윤성 암의 4단계로 구분할 수 있고, 자궁경부 상피내 종양(Cervical intraepithelial neoplasia; CIN)을 기준으로 정상(Normal 또는 Negative), 편평 콘딜로마(Flat condyloma), 자궁경부 상피내 종양 1(CIN 1), 자궁경부 상피내 종양 2(CIN 2), 자궁경부 상피내 종양 3(CIN 3) 및 침윤성 암의 6 단계로 구분할 수 있으며, 레이건 분류에 따른 이형성증을 기준으로 정상(Normal 또는 Negative), 편평 콘딜로마(Flat condyloma), 경도 이형성증(Mild dysplasia), 중도 이형성증(Moderate dysplasia), 고도 이형성증(Severe dysplasia), 상피내 암종(Carcinoma in situ) 및 침윤성 암의 7단계로 구분할 수 있다. 여기서 편평 콘딜로마(Flat condyloma)와 자궁경부 상피내 종양 1(CIN 1)은 낮은 수준의 평편 상피내 병변(LSIL)에 포함되고, 자궁경부 상피내 종양 2(CIN 2)와 자궁경부 상피내 종양 3(CIN 3)은 높은 수준의 평편 상피내 병변(HSIL)에 포함된다. 또한 자궁경부 상피내 종양 1(CIN 1)은 경도 이형성증(Mild dysplasia)을 나타내고, 자궁경부 상피내 종양 2(CIN 2)는 중도 이형성증(Moderate dysplasia)을 나타내며, 자궁경부 상피내 종양 3(CIN 3)은 고도 이형성증(Severe dysplasia)과 상피내 암종(Carcinoma in situ)을 포함하여 나타낸다. 이를 도 1에 기재하였다.

경우에 따라, 세포 형태 이상을 기준으로 구분할 때 정상(Normal 또는 Negative)과 낮은 수준의 평편 상피내 병변(LSIL)의 중간 단계로 비정형 편평 상피 세포(Atypical squamous cells of undetermined significance, ASCUS)를 추가할 수 있으며, 이는 파파니콜로 염색에서 세포 형태의 이상 소견은 보이지만, 명확하게 구분되지는 않는 상태를 의미한다. 낮은 수준의 평편 상피내 병변(LSIL)는 파파니콜로 염색에서 자궁경부 표면 세포의 크기, 모양 및 수가 변화하는 단계를 의미하며, 높은 수준의 평편 상피내 병변(HSIL)은 낮은 수준의 평편 상피내 병변(LSIL)보다 이상부위가 증가된 상태지만, 침윤이 깊이 이루어지지는 않은 상태를 의미한다. 이를 도 2에 기재하였다.

본 발명의 일 구체예에서 자궁경부 세포검사란, 자궁경부에서 탈락된 세포를 이용하여 병의 발생 유무나 원인, 또는 성상을 밝혀내는 진단 목적의 검사이다. 가장 많이 이용되는 목적은 자궁경부암 진단을 위한 세포검사이다. 특수하게 제작된 솔(브러쉬)를 이용하여 자궁 경부 부위의 세포를 채취하여 이상 형태의 세포가 있는지 여부를 관찰하여 진단한다. 관찰시에는 세포 형태 분별의 용이함을 위하여 파파니콜로 염색(Papanicolaou's stain)을 추가로 수행한다. 세포 도말을 채취 즉시 에테르 또는 알콜등량액으로 고정하고 70% 에타놀, 50% 에타놀, 증류수를 통과한 후, 하리스의 헤마톡실린으로 4분간 염색한다. 이를 수세하고 0.5% 염산용액으로 분별한다. 다시 유수중에서 7분간 수세하고, 50%에서 95%의 에타놀액을 통과한다. OG6에서 1분 30초 반응하고 95% 에타놀에 2회 통과, EA 50에서 2분간 염색, 95~100% 에타놀로 탈수, 키실로로 봉입한다. 핵은 청자색, 세포질은 녹색이나 적색으로 염색된다. 세포 표본의 상태 및 검사 환경에 따라서 반응액의 조성 및 반응시간은 달라질 수 있다. 1990년대 후반 들어 세포검사 채취시 발생할 수 있는 오류를 줄이고, 좀 더 나음 세포표본을 제작하기 위해 액상세포검사 기법이 개발되었다. 이는 임상의사가 솔(브러쉬)를 이용하여 자궁 경부 부위의 세포를 채취한 뒤, 특수 보존액이 들어있는 검체 통에 솔 부분을 담구는 것이다. 이러한 방법으로 세포 소실에 대한 우려를 줄이고, 슬라이드 도말 전까지 세포의 상태를 양호하게 보존할 수 있으므로, 암 진단율 향상에 기여하였다.

본 발명의 일 구체예에서 MKRN1이란, 마코린 1(Makorin ring finger protein 1; MKRN1)으로도 명명되는 유비퀴틴접합단백질(Ubiquitin ligase)로서, 암 억제 유전자(Tumor suppressor) p53 및 p14ARF 단백질의 유비퀴틴화 및 분해를 유도함으로써 암 발생에 기여한다고 알려져 있다.

본 발명의 일 구체예에서 p16INK4a란, CDKN2A 유전자에 의해 코딩되는, 종양 억제 단백질이다. p16INK4a은 원래 정상세포에서는 발현되지 않지만, 벤젠 등 노화를 일으키는 물질이 체내에 들어오면 발현되기 시작한다. 이 유전자가 발현되면 세포는 분열을 멈추고, 염증 반응을 일으키는 여러 신호물질을 내보낸 뒤 죽음을 맞는다. 따라서 정상 세포보다는 자연사세포나 암세포에서 많이 발견되며, 자궁암의 경우 자궁암 진단을 위한 마커 유전자로 사용되고 있다.

본 발명의 일 구체예에서 민감도(sensitivity)란, 질병에 실제로 이환된 사람이 검사시 양성으로 판정 받는 비율을 나타내는 것으로, 하기 수식으로 나타낼 수 있다.

(진양성, 위음성 정의는 표 1 참조)

민감도가 높은 검사는 보통 위음성 비율이 낮은 것으로, 질병을 잘 잡아낸다는 의미로 받아들여 질 수 있다. 즉, 검사에서 음성으로 판정되었을 경우, 실제 정상이거나 정상일 확률이 높다는 것이다.

	질병에 이환된 환자	질병이 없는 정상인
검사결과 양성	진양성(A)	위양성(B)
검사결과 음성	위음성(C)	진음성(D)

본 발명의 일 구체예에서 특이도(specificity)란, 질병에 이환되지 않은 정상인이 검사시 음성으로 판정 받는 비율을 나타내는 것으로, 하기 수식으로 나타낼 수 있다.

(진음성, 위양성 정의는 표 1 참조)

특이도가 높은 검사는 보통 정상 판정 비율이 높은 것으로, 검사에서 양성으로 판정되었을 경우, 실제 질병이 발생되었거나 앞으로 발생할 확률이 높다는 것이다.

본 발명의 일 구체예에서 예측율이란, 예측변수로 사용되는 어떤 한 변수 또는 변수집단에 기초하여 다른 변수(준거 변수)의 값을 추론하는 통계값을 의미한다. 흔히 회귀분석을 사용해서 예측방정식을 구하고 거기에 예측변수의 값을 대입하여 예측되는 준거변수의 값을 구한다. 이때의 예측은 동일한 상황에서 자료를 다시 수집하는 경우, 준거변수들이 어떤 특정한 값으로 나타날지를 예측변수들의 예측방정식에 기초하여 ‘미루어 짐작한다’는 정도의 뉘앙스를 갖는다. 이 때 준거변수의 예측치가 실제값에 얼마나 가까운가에 관심을 가진다.

본 명세서에 있어서 예측율이란, 자궁경부암이 의심되는 환자 집단에서 진짜 자궁경부암 환자의 값을 추론하는 통계값을 의미하며, 양성예측율과 음성예측율로 구분할 수 있다.

양성예측율이란, 검사 결과가 양성으로 나온 경우 실제로 질환이 있는 비율을 의미하는 것으로, 하기 수식으로 나타낼 수 있다.

(진양성, 위양성 정의는 표 1 참조)

음성예측율이란, 검사 결과가 음성으로 나온 경우 실제로 정상인 비율을 의미하는 것으로, 하기 수식으로 나타낼 수 있다.

(진음성, 위음성 정의는 표 1 참조)

본 발명의 일 구체예에서 펩타이드란, 아미노산의 중합체로서, 아미노산 간의 연결은 아미드 결합 또는 펩타이드 결합으로 이루어진 폴리머를 의미한다.

본 발명의 일 구체예에서 핵산이란, 뉴클레오타이드가 긴 사슬 모양으로 중합된 고분자 유기물로서, 본 명세서상의 특정 펩타이드를 코딩하는 유전 정보이다.

본 발명에서 개제된 펩타이드들과 그 펩타이드를 코딩하는 핵산은 인유두종바이러스에 의한 기원이거나, 인유두종바이러스에서 기원한 펩타이드에 대항하는 펩타이드일 수 있다. 인유두종바이러스에서 기원한 펩타이드에 대항하는 펩타이드일 경우, 인유두종바이러스에 의하여 감염된 것으로 알려졌거나, 인유두종바이러스에 의하여 감염된 것이 의심스럽거나, 인유두종바이러스에 의하여 감염될 수 있는 대상에서 예방 또는 치료적인 백신으로 사용될 수 있다. 다른 적당한 대상들은 인유두종바이러스 관련 질환의 증상을 나타내거나 질환이 발생할 것 같은 사람들을 포함한다. 본 발명의 펩타이드는 인유두종바이러스의 감염과 관련된 질환들, 예를 들어 보웬성 구진(bowenoid papulosis), 항문 이형성(anal dysplasia), 호흡기 또는 결막 유두종, 자궁 경부 이형성증, 자궁경부암, 외음암(vulval cancer), 또는 전립선암을 치료하거나 예방하는 백신으로 사용될 수 있다. 면역 반응을 야기하는 본 발명의 펩타이드 및 핵산의 능력은 당업계에 주지된 면역 반응을 측정하는 방법들을 사용하여 분석할 수 있다. 예를 들어 세포 독성T 세포들의 생성은 MHC 테트라머를 사용하거나 세포내 사이토카인 발현을 측정하거나 표준 51Cr release 분석에서 나타낼 수 있다. ELISA 또는 ELISPOT와 같은 표준 분석도 T 세포 활성화에 기여하는 사이토카인 프로화일을 측정하는데 사용될 수 있다. T 세포 증식은 또 당업계에 공지된 다른 분석들과 3H-thymidine 업테이크와 같은 분석을 사용하여 측정될 수 있다. B 세포 반응들은 ELISA와 같은 분석을 사용하여 측정될 수 있다.

본 발명의 일 구체예에서 진단이란, 병리 상태의 존재 또는 특징을 확인하는 것을 의미하며, 본 발명의 목적상 진단은 인유두종바이러스 감염 여부 또는 자궁경부암 발병 여부를 확인하는 것이다. 본 발명에 있어서, 자궁경부암 진단은 인유두종바이러스의 DNA, mRNA 또는 단백질로 이루어지는 군에서 1종 이상의 존재를 확인하고, MKRN1을 코딩하는 mRNA 또는 단백질의 발현 수준이 향상되는 것을 측정하는 방법으로 이루어질 수 있다.

또한 본 발명에서의 "진단용 마커, 진단하기 위한 마커 또는 진단 마커"란, 암 세포를 정상 세포와 구분하여 진단할 수 있는 물질로서, 정상 세포에 비하여 암을 가진 세포에서 증가 또는 감소를 보이는 폴리펩타이드 또는 핵산(예: mRNA 등), 지질, 당지질, 당단백질 또는 당(단당류, 이당류, 올리고당류 등) 등과 같은 유기 생체 분자 등을 포함한다. 본 발명의 목적상, 본 발명의 암 진단 마커는 정상 대상 조직의 세포에 비하여, 인유두종바이러스 감염으로 인한 질환에서 특이적으로 높은 수준의 발현을 보이는 MKRN1 유전자의 mRNA 및 이에 의해 코딩되는 단백질이다.

상기 "mRNA 발현 수준 측정”이란, 암을 진단하기 위하여 생물학적 시료에서 암 마커 유전자들의 mRNA 존재 여부와 발현 정도를 확인하는 과정으로서, mRNA의 양을 측정함으로써 알 수 있다. 이를 위한 분석 방법으로는 역전사 중합효소반응(RT-PCR), 경쟁적 역전사 중합효소반응(Competitive RT-PCR), 실시간 역전사 중합효소반응(Real-time RT-PCR), RNase 보호 분석법(RPA; RNase protection assay), 노던 블랏팅(Northern blotting) 또는 DNA 칩 등이 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 유전자의 mRNA 발현 수준을 측정하는 제제는 암 세포에서 발현이 증가하는 MKRN1 유전자의 발현수준을 확인함으로써 마커의 검출에 사용될 수 있는 분자를 의미하며, 이에 제한되지는 않으나 바람직하게는 상기 유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머 또는 프로브를 포함하는 것일 수 있다. MKRN1의 폴리뉴클레오타이드 서열을 바탕으로 당업자는 이들 유전자의 특정 영역을 특이적으로 증폭하는 프라이머 또는 프로브를 디자인할 수 있다.

본 발명에서의 "프라이머" 란, 짧은 자유 3말단 수산화기(free 3' hydroxyl group)를 가지는 핵산 서열로 상보적인 템플레이트(template)와 염기쌍(base pair)을 형성할 수 있고 템플레이트 가닥 복사를 위한 시작 지점으로 기능을 하는 짧은 핵산 서열을 의미한다. 프라이머는 적절한 완충용액 및 온도에서 중합반응(즉, DNA 폴리머레이즈 또는 역전사효소)을 위한 시약 및 상이한 4가지 뉴클레오사이드 트리포스페이트의 존재하에서 DNA 합성을 개시할 수 있다. 본 발명에서는 MKRN1 폴리뉴클레오타이드의 센스 및 안티센스 프라이머를 이용하여 PCR 증폭을 실시하여 원하는 생성물의 생성 여부를 통해 암을 진단할 수 있다. PCR 조건, 센스 및 안티센스 프라이머의 길이는 당업계에 공지된 것을 기초로 변형할 수 있다.

또한 "프로브”란, mRNA와 특이적 결합을 이룰 수 있는 짧게는 수 염기 내지 길게는 수백 염기에 해당하는 RNA 또는 DNA 등의 핵산 단편을 의미하며, 라벨링되어 있어서 특정 mRNA의 존재 유무를 확인할 수 있다. 프로브는 올리고뉴클레오타이드(oligonucleotide) 프로브, 단쇄 DNA(single stranded DNA) 프로브, 이중쇄 DNA(double stranded DNA) 프로브, RNA 프로브 등의 형태로 제작될 수 있다. 본 발명에서는 MKRN1 폴리뉴클레오타이드와 상보적인 프로브를 이용하여 혼성화를 실시하여, 혼성화 여부를 통해 암을 진단할 수 있다. 적당한 프로브의 선택 및 혼성화 조건은 당업계에 공지된 것을 기초로 변형할 수 있다.

본 발명의 프라이머 또는 프로브는 포스포르아미다이트 고체 지지체 방법, 또는 기타 널리 공지된 방법을 사용하여 화학적으로 합성할 수 있다. 이러한 핵산 서열은 또한 당해 분야에 공지된 많은 수단을 이용하여 변형시킬 수 있다. 이러한 변형의 비-제한적인 예로는 메틸화, "캡화", 천연 뉴클레오타이드 하나 이상의 동족체로의 치환, 및 뉴클레오타이드 간의 변형, 예를 들면, 하전되지 않은 연결체(예: 메틸 포스포네이트, 포스포트리에스테르, 포스포로아미데이트, 카바메이트 등) 또는 하전된 연결체(예: 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트 등)로의 변형이 있다.

또한 본 발명에서의“단백질 발현수준 측정”이란, 암을 진단하기 위하여 생물학적 시료에서 암 마커 유전자로부터 발현된 단백질의 존재 여부와 발현 정도를 확인하는 과정으로, 바람직하게는 상기 유전자의 단백질에 대하여 특이적으로 결합하는 항체를 이용하여 단백질의 양을 확인할 수 있다. 이를 위한 분석 방법으로는 웨스턴 블랏, ELISA(enzyme linked immunosorbent assay), 방사선면역분석(RIA: Radioimmunoassay), 방사 면역 확산법(radioimmunodiffusion), 오우크테로니(Ouchterlony) 면역 확산법, 로케트(rocket) 면역전기영동, 조직면역 염색, 면역침전 분석법(Immunoprecipitation Assay), 보체 고정 분석법(Complement Fixation Assay), 유세포분석(Fluorescence Activated Cell Sorter, FACS), 단백질 칩(protein chip) 등이 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 단백질의 발현수준을 측정하는 제제는 암 세포에서 발현이 증가하는 마커인 MKRN1 유전자로부터 발현되는 단백질의 발현수준을 확인함으로써 마커의 검출에 사용될 수 있는 분자를 의미하며, 이에 제한되지는 않으나 바람직하게는 상기 단백질에 특이적인 항체를 포함하는 것일 수 있다. MKRN1 유전자로부터 발현되는 단백질의 아미노산 서열을 바탕으로 당업자는 상기 단백질에 특이적인 항체를 디자인할 수 있다.

본 발명의 일 구체예에서, "항체"란, 상기에서 설명한 바와 같으며, 항원성 부위에 대해서 지시되는 특이적인 단백질 분자를 의미한다. 본 발명의 목적상, 항체는 본 발명의 인유두종바이러스 펩타이드에 대해 특이적으로 결합하는 항체를 의미하며, 상기 단백질에 대한 모노클로날 항체는 당업계에 통상적인 모노클로날 항체 제작 방법을 통해 제작되어 사용될 수도 있고, 시판되는 것을 사용할 수 있다. 또한, 모노클로날 항체 대신에 상기 단백질을 인식하는 폴리클로날 항체를 사용할 수도 있고, 이는 당업계에 통상적인 항혈청 제작 방법을 통해 제작되어 사용될 수도 있다. 또한 본 발명에서의 항체는 상기 단백질에서 만들어질 수 있는 부분 펩티드도 포함되며, 본 발명의 부분 펩티드로는, 최소한 7개 아미노산, 바람직하게는 9개 아미노산, 보다 바람직하게는 12개 이상의 아미노산을 포함한다. 본 발명의 항체의 형태는 특별히 제한되지 않으며 폴리클로날 항체, 모노클로날 항체 또는 항원 결합성을 갖는 것이면 그것의 일부도 본 발명의 항체에 포함되고 모든 면역 글로불린 항체가 포함된다. 나아가, 본 발명의 항체에는 인간화 항체 등의 특수 항체도 포함된다. 본 발명의 암 진단 마커의 검출에 사용되는 항체는 2개의 전체 길이의 경쇄(Light chain) 및 2개의 전체 길이의 중쇄(Heavy chain)를 가지는 완전한 형태뿐만 아니라 항체 분자의 기능적인 단편을 포함한다. 항체 분자의 기능적인 단편이란 적어도 항원 결합 기능을 보유하고 있는 단편을 뜻하며 Fab, F(ab'), F(ab') 2 및 Fv 등이 있다.

본 발명의 일 구체예에서 진단키트란, 특정한 목적을 위해 필요한 조성물 및 부속품들을 모아놓은 세트를 의미한다. 본 발명의 목적상, 본 발명의 진단키트는 인유두종바이러스 감염으로 인한 자궁경부암 발병 여부를 확인하는 것이다. 본 발명의 키트에는 인유두종바이러스 감염 여부를 측정하기 위한 프라이머, 프로브, 선택적으로 펩타이드를 인지하는 항체 또는 인유두종바이러스 감염시 특이적으로 발현이 향상되는 특정 펩타이드를 인지하는 항체뿐만 아니라 분석방법에 적합한 한 종류 또는 그 이상의 다른 구성성분 조성물, 용액 또는 장치가 포함될 수 있다.

본 발명의 일 구체예에서, 환자로부터 분리된 생물학적 시료로부터 인유두종바이러스 DNA 또는 mRNA의 존재 여부를 확인하는 단계 및 MKRN1 mRNA의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 인유두종바이러스 감염 관련 질환의 진단에 관한 정보를 제공하는 방법을 제공하고, 환자로부터 분리된 생물학적 시료로부터 인유두종바이러스 DNA 또는 mRNA의 존재 여부를 확인하는 단계 및 MKRN1 단백질의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 인유두종바이러스 감염 관련 질환의 진단에 관한 정보를 제공하는 방법을 제공하며, 환자로부터 분리된 생물학적 시료로부터 인유두종바이러스 단백질의 존재 여부를 확인하는 단계 및 MKRN1 mRNA의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 인유두종바이러스 감염 관련 질환의 진단에 관한 정보를 제공하는 방법을 제공하며, 환자로부터 분리된 생물학적 시료로부터 인유두종바이러스 단백질의 존재 여부를 확인하는 단계 및 MKRN1 단백질의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 인유두종바이러스 감염 관련 질환의 진단에 관한 정보를 제공하는 방법을 제공하며, 상기 인유두종바이러스는 서브타입 6, 11, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 42, 43, 44, 45, 51, 52, 56, 58, 59 및 68 중 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 인유두종바이러스 감염 관련 질환의 진단에 관한 정보를 제공하는 방법을 제공하며, 상기 인유두종바이러스 감염 관련 질환은 보웬성 구진(bowenoid papulosis), 항문 이형성(anal dysplasia), 호흡기 또는 결막 유두종, 자궁 경부 이형성증, 자궁경부암, 외음암(vulval cancer), 또는 전립선암인 것을 특징으로 하는 인유두종바이러스 감염 관련 질환의 진단에 관한 정보를 제공하는 방법을 제공한다.

본 발명의 다른 구체예에서, 인유두종바이러스 DNA 또는 mRNA에 특이적으로 결합하는 프라이머 또는 프로브 및 MKRN1 mRNA에 특이적으로 결합하는 프라이머 또는 프로브를 포함하는, 인유두종바이러스 감염 관련 질환의 진단 키트를 제공하고, 인유두종바이러스 DNA 또는 mRNA에 특이적으로 결합하는 프라이머 또는 프로브 및 MKRN1 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는, 인유두종바이러스 감염 관련 질환의 진단 키트를 제공하며, 인유두종바이러스 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 및 MKRN1 mRNA에 특이적으로 결합하는 프라이머 또는 프로브를 포함하는, 인유두종바이러스 감염 관련 질환의 진단 키트를 제공하며, 인유두종바이러스 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 및 MKRN1 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는, 인유두종바이러스 감염 관련 질환의 진단 키트를 제공하며, 상기 인유두종바이러스는 서브타입 6, 11, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 42, 43, 44, 45, 51, 52, 56, 58, 59 및 68 중 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 인유두종바이러스 감염 관련 질환의 진단 키트를 제공하며, 상기 인유두종바이러스 감염 관련 질환은 보웬성 구진(bowenoid papulosis), 항문 이형성(anal dysplasia), 호흡기 또는 결막 유두종, 자궁 경부 이형성증, 자궁경부암, 외음암(vulval cancer), 또는 전립선암인 것을 특징으로 하는 인유두종바이러스 감염 관련 질환의 진단 키트를 제공한다.

이하 상기 본 발명을 단계별로 상세히 설명한다.

자궁경부암은 여성에게서 발생되는 악성 종양 가운데 두 번째로 발병 빈도가 높고, 발병 원인이 인유두종바이러스(인유두종바이러스)로 밝혀져 있음에도 불구하고, 음성 시료에서 정확도가 매우 낮아 자궁경부암의 초기 진단에 이용하기 어려운 문제점이 있다. 그러나 본 발명의 인유두종바이러스 검사와 MKRN1 발현 패턴에 따른 자궁경부암 예측 및 진단 방법은 자궁경부 세포검사, 인유두종바이러스 검사 및 자궁경부암 유전자 마커를 단일하게 사용하는 검사에 비해 진단의 정확도가 증가하므로, 효과적인 자궁경부암 예측 및 진단에 큰 활용이 기대된다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 자궁경부 이형성의 진행 단계를 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 조직 병변에 따른 암 전단계의 자궁 경부를 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 자궁경부 세포검사 검체 수집 현황의 예시를 나타낸 것이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 자궁경부 액상 세포 검사의 세포학적 및 조직학적 검사 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 음성 및 HISL 검체에서의 면역세포화학염색 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른 면역세포화학염색 결과를 나타낸 것이다.
도 7은 본 발명의 일 실시예에 따른 전체 검체를 대상으로 한 자궁경부암 진단 정확도 향상 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 8은 본 발명의 일 실시예에 따른 ASCUS/LSIL 검체를 대상으로 한 자궁경부암 진단 정확도 향상 분석 결과를 나타낸 것이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

실시예 1: 자궁경부암 검사 대상 검체의 수집

12개월 동안 강남세브란스병원과 세브란스병원 산부인과 및 삼성서울병원 병리과에 내원하여 자궁경부 세포검사 및 인유두종바이러스 검사를 시행 받을 만 18세 이상의 여성을 대상으로 하였다. 나이는 최초 검진일을 기준으로 하기의 만 나이 공식을 통해 산출하였다.

만 나이 계산법= 현재년도- 출생년 (-1 : 생일이 지나지 않은 경우)

상기에 따른 자궁경부 세포검사 검체 수집 현황의 예시를 도 3에 기재하였다.

만 나이가 18세 미만이거나, 자궁 적출을 시행한 여성, 다른 암으로 진단 받은 적이 있는 여성, 간경 변, 신부전, 고혈압을 제외한 심혈관계 질환 여성, 기타 면역력이 저하된 만성 질환 여성, 정신과적 질환으로 치료 병력이 있는 여성 및 알코올 중독자는 본 연구대상에서 제외하였다.

또한, 연구에 참여하는 모든 피험자를 대상으로 연구 개시 전 본 시험에 스스로 참여한다는 동의를 서면으로 받았으며, 피험자가 동의를 철회하거나 거부하는 경우, 피험자 및 연구자가 연구절차를 준수하지 않는 경우, 및 기타 연구자가 연구 중지가 필요하다고 판단할 때에는 연구를 중지하였다.

본 연구의 모든 과정은 임상시험관리기준 (KGCP) 및 헬싱키선언의 근본 정신에 따라서 계획되었으며, 시험책임자 및 담당자는 상기 계획에 의거하여 시험을 실시하였다.

실시예 2: 자궁경부암 진단을 위한 검사 수행

실시예 2-1. 전향적 자궁경부 세포검사

실시예 1의 방법으로 선정된 연구 대상자 중 자궁경부세포 이상이 의심되는 환자에게서 자궁경부 검체를 수집하였고, 수집된 187 건의 검체에 대하여 자궁경부 세포검사를 실시하였다.

자궁경부 액상 세포 검사를 위해서 자궁경부 브러쉬(Cervix-brush)를 이용하여 자궁경부 세포를 채취하였고, 검체를 보존액과 혼합하여 세포도말 표본을 제작하였다. 슬라이드 상의 세포도말 표본은 파파니콜로 염색(Papanicolaou staining)을 수행하였다. 염색 결과및 검체의 질환 유무는 병리과 의사가 판독하였다. 판독 결과 187 건의 검체는 세포학적 기준에 따라 음성, ASCUS 또는 AGUS, LSIL, ASC-H, HSIL 및 암의 6단계로 구분하였으며, 조직학적 기준에 따라서는 음성, CIN1, CIN2, CIN3 및 암의 5단계로 구분하였다. 그 결과, 세포학적 기준에 따른 음성 환자는 47명이었으나, 조직학적 기준에 따른 음성 환자는 32명으로 나타났다. 이는 자궁경부 액상 세포 검사의 문제점으로 지적되는 낮은 정확도를 의미한다. 자궁경부 액상 세포 검사의 세포학적 및 조직학적 검사 결과를 도 4에 기재하였다.

실시예 2-2. 인유두종바이러스 DNA 검사

상기 187 건의 검체에 대하여 인유두종바이러스 DNA 검사를 실시하였다.

본 인유두종바이러스 검출에 사용한 방법은 인유두종바이러스 감염 진단을 위해 미국 FDA에 승인을 받은 진단 키트로서(HC2 HPV DNA Test, QIAGEN), 인유두종바이러스 전체 유전자 RNA 프로브를 이용한다. 인유두종바이러스 중 고위험 군으로 분류된 13가지 인유두종바이러스 서브타입(16/18/31/33/35/39/45/51/52/56/58/59/68; Book-Robbins basic pathology 8 ed. Chapter 19 및 Vaccine 24 (3): S1-S10. Chapter 1 참조)과 저위험군으로 분류된 5가지 인유두종바이러스 서브타입(6/11/42/43/44; Book-Robbins basic pathology 8 ed. Chapter 19 참조)을 검출해낼 수 있다. 상기 키트를 이용하여, 인유두종바이러스 타겟 DNA에 특이적이고 상보적인 RNA 프로브를 결합시켰고, DNA-RNA 하이브리드를 제조하였다. 그리고 상기 DNA-RNA 하이브리드를 고체상 코팅(solid phase coated)된 DNA-RNA 하이브리드에 특이적인 항체를 이용하여 검출하였다. 이후 상기 항체를 알카라인 포스파타아제(alkaline phosphatase)가 결합된 항체와 결합시키고, 화학발광법을 이용하여 발광을 측정하는 방법으로 인유두종바이러스의 유무를 확인하였다.

실시예 2-3. 면역세포화학염색을 이용한 단백질 발현 검사

자궁경부 액상 세포 검사 및 인유두종바이러스 DNA 검사 실시 후 남은 잉여의 검체로 세포 파라핀 블록을 제작하였고, 이를 이용하여 MKRN1, p16INK4a, p21, p57 및 Ki-67의 단백질 발현 측정을 위한 면역세포화학염색을 실시하였다. 음성 및 HISL 검체에서의 면역세포화학염색 결과를 도 5에 기재하었다. 면역세포화학염색 결과는 병리과 의사가 판독하여, 그 결과를 도 6에 기재하였다. 도 6에서 나타내듯이, 기존 자궁경부암 일차선별검사인 액상 세포 검사 및 인유두종바이러스 DNA 검사의 경우, 암의 경우는 정확성이 92.9%로 매우 높으나, 음성 검체에서는 정확도가 42.9%로 낮으므로 초기 진단에 어려움이 발생한다. 그러나 MKRN1 단백질의 경우, CIN1, CIN2, CIN3, CIS 및 암으로 진행될수록 단백질 양성 발현율이 21.4%, 31.6%, 62.5%, 74.2% 및 92.9%로 증가하였다. 이는 최근 진단용으로 연구되고 있는 p16INK4a 단백질과 마찬가지로, MKRN1 단백질이 자궁경부암 의심 환자에게서 자궁경부 액상 세포검사와 인유두종바이러스 DNA 검사의 정확도를 높이기 위해 보조적 역할을 할 수 있음을 의미한다.

실시예 2-4. MKRN1 단백질을 이용한 자궁경부암 진단 정확도 향상 분석

전체 검체 또는 ASCUS/LSIL 검체를 대상으로 자궁경부 액상 세포검사, 인유두종바이러스 DNA검사, MKRN1 단백질 발현 검사, p16INK4a 단백질 발현 검사, 및 상기 검사의 각각 또는 혼합 검사시 자궁경부암 진단 민감도(sensitiviey), 특이도(specificity), 양성예측율(Positive Predictive Value, PPV), 및 음성예측율(Negative Predictive Value, NPV)을 정상대조군(자궁경부 액상 세포검사 및 인유두종바이러스 DNA 검사 정상인)과 비교하여 분석하였다. 상기 분석의 전체 검체를 대상으로 한 결과를 도 7에 기재하였고, ASCUS/LSIL 검체를 대상으로 한 결과를 도 8에 기재하였다. 도 7에서 나타내듯이, 자궁경부 액상 세포검사, 인유두종바이러스 DNA검사, MKRN1 단백질 발현 검사 및 p16INK4a 단백질 발현 검사의 어느 하나의 검사를 단독으로 수행하였을 때보다 2종류 이상의 검사를 혼합으로 수행하였을 때 자궁경부암 진단의 정확도가 향상되었다. 또한 MKRN1 단백질 발현 검사가 포함된 조합에서 진단의 정확도가 가장 높게 나타났다. 즉, 자궁경부 액상 세포검사와 MKRN1 단백질 발현 검사의 조합, 인유두종바이러스 DNA검사와 MKRN1 단백질 발현 검사의 조합, 및 p16INK4a 단백질 발현 검사와 MKRN1 단백질 발현 검사의 조합에서의 정확도가 각각 74.3%, 78.1%, 및 71.7%로써, 자궁경부 액상 세포검사(67.4%), 인유두종바이러스 DNA검사(74.3%) 및 p16INK4a 단백질 발현 검사(63.6%)를 각각 독자적으로 시행하였을 때보다 높게 나타났다. 특히 인유두종바이러스 DNA검사와 MKRN1 단백질 발현 검사의 조합의 경우, 진단 정확도가 78.1%로써, 기존에 사용하고 있는 자궁경부 액상 세포검사와 인유두종바이러스 DNA검사의 조합과 동일한 수치의 정확도를 나타내었다.

ASCUS/LSIL 검체를 대상으로 한 경우(도 8)에는 인유두종바이러스 DNA검사와 MKRN1 단백질 발현 검사의 조합에서 진단 정확도가 73.1%로 나타났다. 이는 실시된 다른 모든 경우의 조합보다 월등히 높은 정확도를 나타내는 것이다.

Claims (12)

1. 환자로부터 분리된 생물학적 시료로부터 인유두종바이러스 DNA 또는 mRNA의 존재 여부를 확인하는 단계 및 MKRN1 mRNA의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 인유두종바이러스 감염 관련 질환의 진단에 관한 정보를 제공하는 방법으로써,
   상기 인유두종바이러스 감염 관련 질환은 보웬성 구진(bowenoid papulosis), 항문 이형성(anal dysplasia), 호흡기 또는 결막 유두종, 자궁 경부 이형성증, 자궁경부암, 외음암(vulval cancer), 또는 전립선암인, 방법.
   
2. 환자로부터 분리된 생물학적 시료로부터 인유두종바이러스 DNA 또는 mRNA의 존재 여부를 확인하는 단계 및 MKRN1 단백질의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 인유두종바이러스 감염 관련 질환의 진단에 관한 정보를 제공하는 방법으로써,
   상기 인유두종바이러스 감염 관련 질환은 보웬성 구진(bowenoid papulosis), 항문 이형성(anal dysplasia), 호흡기 또는 결막 유두종, 자궁 경부 이형성증, 자궁경부암, 외음암(vulval cancer), 또는 전립선암인, 방법.
   
3. 환자로부터 분리된 생물학적 시료로부터 인유두종바이러스 단백질의 존재 여부를 확인하는 단계 및 MKRN1 mRNA의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 인유두종바이러스 감염 관련 질환의 진단에 관한 정보를 제공하는 방법으로써,
   상기 인유두종바이러스 감염 관련 질환은 보웬성 구진(bowenoid papulosis), 항문 이형성(anal dysplasia), 호흡기 또는 결막 유두종, 자궁 경부 이형성증, 자궁경부암, 외음암(vulval cancer), 또는 전립선암인, 방법.
   
4. 환자로부터 분리된 생물학적 시료로부터 인유두종바이러스 단백질의 존재 여부를 확인하는 단계 및 MKRN1 단백질의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 인유두종바이러스 감염 관련 질환의 진단에 관한 정보를 제공하는 방법으로써,
   상기 인유두종바이러스 감염 관련 질환은 보웬성 구진(bowenoid papulosis), 항문 이형성(anal dysplasia), 호흡기 또는 결막 유두종, 자궁 경부 이형성증, 자궁경부암, 외음암(vulval cancer), 또는 전립선암인, 방법.
   
5. 제 1항 내지 4항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 인유두종바이러스는 서브타입 6, 11, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 42, 43, 44, 45, 51, 52, 56, 58, 59 및 68 중 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 인유두종바이러스 감염 관련 질환의 진단에 관한 정보를 제공하는 방법.
   
6. 삭제
7. 인유두종바이러스 DNA 또는 mRNA에 특이적으로 결합하는 프라이머 또는 프로브 및 MKRN1 mRNA에 특이적으로 결합하는 프라이머 또는 프로브를 포함하는, 인유두종바이러스 감염 관련 질환의 진단 키트로써,
   상기 인유두종바이러스 감염 관련 질환은 보웬성 구진(bowenoid papulosis), 항문 이형성(anal dysplasia), 호흡기 또는 결막 유두종, 자궁 경부 이형성증, 자궁경부암, 외음암(vulval cancer), 또는 전립선암인, 키트.
   
8. 인유두종바이러스 DNA 또는 mRNA에 특이적으로 결합하는 프라이머 또는 프로브 및 MKRN1 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는, 인유두종바이러스 감염 관련 질환의 진단 키트로써,
   상기 인유두종바이러스 감염 관련 질환은 보웬성 구진(bowenoid papulosis), 항문 이형성(anal dysplasia), 호흡기 또는 결막 유두종, 자궁 경부 이형성증, 자궁경부암, 외음암(vulval cancer), 또는 전립선암인, 키트.
   
9. 인유두종바이러스 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 및 MKRN1 mRNA에 특이적으로 결합하는 프라이머 또는 프로브를 포함하는, 인유두종바이러스 감염 관련 질환의 진단 키트로써,
   상기 인유두종바이러스 감염 관련 질환은 보웬성 구진(bowenoid papulosis), 항문 이형성(anal dysplasia), 호흡기 또는 결막 유두종, 자궁 경부 이형성증, 자궁경부암, 외음암(vulval cancer), 또는 전립선암인, 키트.
   
10. 인유두종바이러스 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 및 MKRN1 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는, 인유두종바이러스 감염 관련 질환의 진단 키트로써,
    상기 인유두종바이러스 감염 관련 질환은 보웬성 구진(bowenoid papulosis), 항문 이형성(anal dysplasia), 호흡기 또는 결막 유두종, 자궁 경부 이형성증, 자궁경부암, 외음암(vulval cancer), 또는 전립선암인, 키트.
    
11. 제 7항 내지 10항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 인유두종바이러스는 서브타입 6, 11, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 42, 43, 44, 45, 51, 52, 56, 58, 59 및 68 중 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 인유두종바이러스 감염 관련 질환의 진단 키트.
    
12. 삭제

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