KR101878974B1

KR101878974B1 - 신장암 진단용 조성물과 진단 마커 검출 방법

Info

Publication number: KR101878974B1
Application number: KR1020160022480A
Authority: KR
Inventors: 김성훈; 박민철; 찰스 고흐너 피터
Original assignee: 재단법인 의약바이오컨버젼스연구단
Priority date: 2016-02-25
Filing date: 2016-02-25
Publication date: 2018-07-16
Also published as: KR20170100213A; WO2017146530A1

Abstract

본 발명은 신장암 진단용 조성물과 진단 마커 검출 방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는, GRS(glycyl-tRNA synthetase), HRS(histidyl-tRNA synthetase) 및 AIMP1(aminoacyl-tRNA synthetase complex-interacting multifunctional Protein 1)으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 mRNA 또는 이의 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는 신장암 진단용 조성물 및 신장암 진단에 필요한 정보를 제공하기 위하여 피검체로부터 수득한 시료로부터 상기 마커를 검출하는 방법에 관한 것이다.
GRS, HRS 및 AIMP1으로 이루어진 본 발명의 신장암 진단 마커는 신장암 환자의 혈청에서 정상 대조군과 비교해 그 발현수준이 증가해 있다. 따라서, GRS, HRS 및 AIMP1로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 마커의 발현 수준을 측정함으로써 신장암 유무를 정확하고 신속하게 판단할 수 있다.

Description

신장암 진단용 조성물과 진단 마커 검출 방법{Composition and method for detecting a diagnostic marker for renal cell carcinoma}

본 발명은 신장암 진단용 조성물과 진단 마커 검출 방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는, GRS(glycyl-tRNA synthetase), HRS(histidyl-tRNA synthetase) 및 AIMP1(aminoacyl-tRNA synthetase complex-interacting multifunctional Protein 1)으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 mRNA 또는 이의 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는 신장암 진단용 조성물 및 신장암 진단에 필요한 정보를 제공하기 위하여 피검체로부터 수득한 시료로부터 상기 마커를 검출하는 방법에 관한 것이다.

우리나라 암(악성신생물) 사망자 수는 2002년 우리나라 총 사망자 246,515명(조사망률 인구 10만 명당 512명) 가운데 25.5%(남성 사망자의 29.6%, 여성 사망자의 20.5%)인 62,887명으로 암으로 인한 사망(사망률 인구 10만명당 130.7명)이 사망원인 1위를 차지하고 있다. 암 사망순위는 폐암, 위암, 간암, 대장암 및 췌장암 순으로, 이들 5대 암에 의한 사망이 전체 암 사망의 약 70%를 차지하고 있다. 또한 남성에 있어 주요 암 사망원인은 폐암, 위암, 간암 및 대장암 등으로 이들 4대 암에 의한 사망자 수(28,147명)가 전체 남성 암 사망자 수(40,177명)의 70%를 차지하고 있으며, 여성에 있어 주요 암 사망원인은 위암, 폐암, 간암, 대장암 및 췌장암 등으로 이들 5대 암에 의한 사망자 수(13,630명)가 전체 여성 암 사망자 수(22,710명)의 60%를 차지하고 있다.

신장암은 종양의 크기가 작을 때는 증상이 거의 없으며, 종양이 어느 정도 커져서 장기를 밀어낼 정도가 되어야 비로소 증상이 나타난다. 따라서 진단이 늦어지는 경우가 많아 처음 진단될 때 환자의 30% 정도는 이미 전이된 상태로 나타나게 된다. 가장 흔한 증상은 혈뇨(hematuria)이지만 이것도 환자의 60%에서만 나타난다. 오히려 전이된 부위에 따라 호흡곤란, 기침, 두통 등의 증상이 나타나 이러한 전이 증상 때문에 신장암을 진단하게 되는 경우도 전체 환자의 30%에 이른다. 신장암은 특별히 암세포가 생산하는 특정 호르몬 때문에 고혈압, 고칼슘혈증, 간기능 이상 등을 일으킬 수 있기 때문에 이런 다른 증상을 검사하던 중 종양이 발견되는 경우도 있다. 그러나 최근에는 아무 증상 없이 건강진단을 받던 중 우연히 영상검사상에서 발견되는 경우가 많은데, 이런 경우는 주로 초기에 발견되기 때문에 치료 결과가 비교적 좋다.

신장암은 미국에서는 성인암의 약 3%를 차지하여, 연간 약 32,000명 정도의 새로운 환자가 발생하고 있다. 또한 약 12,000명 정도가 신장암으로 인해 사망하는 것으로 추정되고 있으며 전 세계적으로 매년 그 발생빈도가 증가하고 있다.

우리나라에서는 이보다는 발생 빈도가 낮아 2002년 중앙암등록 자료에 따르면 1,578명의 환자가 새로 등록되어 전체 암 발생의 1.6%를 차지하고 있다. 특히 남성이 여성에 비해 2배 정도 많이 발생하는데, 2002년의 경우 남성에게서 1,104명의 환자가 발생하여 남성암의 장기별 등록분율 2.0%를 나타내며, 발생빈도에 있어서 열번째로 많이 발생하는 암으로 기록되어 있다.

신장암은 40대~60대에서 흔히 발생하여, 연령별 발생현황(2002년 중앙암등록자료)을 보면 60대가 가장 흔하며(479명, 30.2%), 50대(412명, 26.0%), 40대(268명, 16.9%)의 순으로 많이 발생한다.

따라서 신장암의 조기 진단을 위한 마커의 개발이 매우 중요하다고 할 수 있다.

이에 본 발명자들은 신장암을 효과적으로 진단할 수 있는 바이오 마커를 개발하고자 예의 노력한 결과, 신장암 환자의 혈청에서 간단하고 신속하게 검출이 가능하고, 민감도 및 특이도가 높은 바이오 마커를 발견하고 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 GRS(glycyl-tRNA synthetase), HRS(histidyl-tRNA synthetase) 및 AIMP1(aminoacyl-tRNA synthetase complex-interacting multifunctional Protein 1)으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 mRNA 또는 이의 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는 신장암 진단용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기 GRS, HRS 및 AIMP1 으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 mRNA 또는 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는 신장암 진단용 키트를 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 신장암 진단에 필요한 정보를 제공하기 위하여,

(a) 피검체로부터 시료를 제공하는 단계;

(b) 상기 시료에서 GRS, HRS 및 AIMP1 으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 mRNA의 발현 수준 또는 단백질의 발현 수준을 측정하는 단계; 및

(c) 상기 유전자 mRNA의 발현 수준 또는 단백질의 발현 수준을 정상 대조구 시료의 해당 유전자 mRNA의 발현 수준 또는 단백질 발현 수준과 비교하여 발현 수준이 증가한 피검체를 신장암에 걸린 것으로 판정하는 단계를 포함하는 신장암의 마커를 검출하는 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 신장암의 치료 후보물질의 투여 후, GRS, HRS 및 AIMP1으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 mRNA의 발현 수준 또는 단백질의 발현 수준을 측정하는 것을 포함하는, 신장암 치료제의 스크리닝 방법을 제공하는 것이다.

상기한 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 GRS(glycyl-tRNA synthetase), HRS(histidyl-tRNA synthetase) 및 AIMP1(aminoacyl-tRNA synthetase complex-interacting multifunctional Protein 1)으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 mRNA 또는 이의 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는 신장암 진단용 조성물을 제공한다.

본 발명의 다른 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 GRS, HRS 및 AIMP1 으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 mRNA 또는 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는 신장암 진단용 키트를 제공한다.

본 발명의 다른 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 신장암 진단에 필요한 정보를 제공하기 위하여,

(a) 피검체로부터 시료를 제공하는 단계;

본 발명의 다른 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 신장암의 치료 후보물질의 투여 후, GRS, HRS 및 AIMP1로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 mRNA의 발현 수준 또는 단백질의 발현 수준을 측정하는 것을 포함하는, 신장암 치료제의 스크리닝 방법을 제공하는 것이다.

이하 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명은 GRS(glycyl-tRNA synthetase), HRS(histidyl-tRNA synthetase) 및 AIMP1(aminoacyl-tRNA synthetase complex-interacting multifunctional Protein 1)으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 mRNA 또는 이의 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는 신장암 진단용 조성물을 제공한다.

본 발명자들은 GRS(glycyl-tRNA synthetase), HRS(histidyl-tRNA synthetase) 및 AIMP1(aminoacyl-tRNA synthetase complex-interacting multifunctional Protein 1)가 신장암 환자에서 정상인 대조군보다 현저하게 증가함을 처음으로 확인하여, 새로운 신장암 진단 마커로서의 가치가 매우 높다는 것을 확인하였다.

본 발명의 다른 일실시예에서는 GRS(glycyl-tRNA synthetase), HRS(histidyl-tRNA synthetase) 및 AIMP1(aminoacyl-tRNA synthetase complex-interacting multifunctional Protein 1) 의 ROC curve 분석을 통하여 상기 각 마커들이 신장암을 진단함에 있어서 민감성(sensitivity)과 정확성(specificity)이 뛰어난 것을 확인하였다.

본 발명자들의 발견을 바탕으로 본 발명은 GRS(glycyl-tRNA synthetase), HRS(histidyl-tRNA synthetase) 및 AIMP1(aminoacyl-tRNA synthetase complex-interacting multifunctional Protein 1)의 발현 수준, 즉 GRS(glycyl-tRNA synthetase), HRS(histidyl-tRNA synthetase) 및 AIMP1(aminoacyl-tRNA synthetase complex-interacting multifunctional Protein 1) 단백질 또는 mRNA 수준을 측정하는 제제를 포함하는 신장암 진단용 조성물을 제공한다.

Aminoacyl-tRNA synthetase(ARS)는 특정 아미노산을 그 해당하는 tRNA에 붙여주는 역할을 하는 효소이며. 고등생물의 경우 아미노산 종류에 따른 20 개의 효소외에 AIMP1(p43), (AIMP2)p38, (AIMP3)p18 등 multisynthetase complex 형성에 관여하는 3종류를 포함하여 23종의 효소로 구성되어 있으며 multisynthetase complex에 참여하는 효소외에 몇몇은 free form 형태로도 존재한다. 그러나 최근에 들어 기본적인 기능외에 특정 환경에서 다양한 다른 활성기능을 가지고 있음이 보고 되었는데 GRS, HRS 및 AIMP1이 그 중의 하나이다.

GRS는 대식세포에서 분비되어 특정 암세포의 세포사멸을 촉진하는 것으로 최근 발표되었다 (.M. C. Park, et al. (2012) Secreted human glycyl-tRNA synthetase implicated in defense against ERK-activated tumorigenesis. PNAS109(11):E640-7) 자세한 메카니즘으로는 암세포 존재시 Fas ligand에 의해 분비된 GRS는 특정 암세포에 존재하는 CDH6 와 ERK 활성을 억제하여 세포 사멸을 유도하는 것으로 밝혀졌다. 또한 자가면역 질환, 유방암세포에서 GRS에 대한 자가 면역 항체가 존재함이 알려져 왔다(Mun J, et al. (2010) A proteomic approach based on multiple parallel separation for the unambiguous identification of an antibody cognate antigen. Electrophoresis 31:34283436). 그러나, GRS가 신장암 환자의 혈청에서 정상인 환자군과 비교해 단백질 수치가 현저히 높아 신장암 진단용 마커로서 사용될 수 있다는 점에 대해서는 알려진 바가 없으며, 본 발명에서 최초로 공개하는 것이다.

HRS는 근염을 비롯한 자가면역 질환에 있어 가장 흔한 자가항원으로 존재함이 보고 되었으며 림프구와 (CD4+ and CD8+ lymphocyte) 단구(IL-2 activated monocyte) 및 미성숙 수지상세포(immature dendritic cells)의 이동을 촉진하는 화학주성(chemotaxis)활성을 나타내는 것으로 보고된 바 있는 단백질이다(Howard, O.M., et al Histidyl-tRNA synthetase and asparaginyl-tRNA synthetase, autoantigens in myositis, activate chemokine receptors on T lymphocytes and immature dendritic cells. (2002) J. Exp. Med. 196, 781.791).

AIMP1(ARS-interacting multi-functional protein 1)은 종래에 p43 단백질로 알려진 것으로서 최근 AIMP1으로 재명명된 단백질이다(Sang Gyu Park, et al., Trends in Biochemical Sciences, 30:569-574, 2005). 상기 AIMP1은 312개의 아미노산으로 이루어진 단백질로서, 다중 tRNA 합성효소 복합체(multi-tRNA synthetase complex)에 결합하여(Deutscher, M. P., Method Enzymol, 29, 577-583, 1974; Dang C. V. et al., Int. J. Biochem. 14, 539-543, 1982; Mirande, M. et al., EMBO J. 1, 733-736, 1982; Yang D. C. et al., Curr. Top Cell. Regul. 26, 325-335, 1985) 상기 다중-tRNA 합성효소의 촉매적 활성(catalytic activity)을 증진시키는 단백질이다(Park S. G. et al., J. Biol. Chem. 274, 16673-16676, 1999). 분비된 AIMP1은 단핵구/마크로파지, 내피세포 및 섬유아세포와 같은 다양한 표적세포에 작용하는 것으로 알려져 있다. 그러나, AIMP1이 신장암 환자의 혈청에서 정상인 환자군과 비교해 단백질 수치가 현저히 높아 신장암 진단용 마커로서 사용될 수 있다는 점에 대해서는 알려진 바가 없으며, 본 발명에서 최초로 공개하는 것이다.

본 발명에서 용어, "진단용 마커, 진단하기 위한 마커 또는 진단 마커(diagnosis marker)"란 신장암 환자를 정상 대조군과 구분하여 진단할 수 있는 물질로, 정상 대조군에 비하여 신장암을 가진 환자에서 증가 또는 감소를 보이는 폴리펩타이드 또는 핵산(예: mRNA 등), 지질, 당지질, 당단백질 또는 당(단당류, 이당류, 올리고당류 등) 등과 같은 유기 생체 분자 등을 포함한다. 본 발명의 목적상, 본 발명의 신장암 진단 마커는 정상 위 조직의 세포에 비하여, 암 세포에서 특이적으로 높은 수준의 발현을 보이는 GRS(glycyl-tRNA synthetase), HRS(histidyl-tRNA synthetase) 및 AIMP1(aminoacyl-tRNA synthetase complex-interacting multifunctional Protein 1) 유전자 및 이에 의해 코딩되는 단백질이다.

본 발명에서 '발현(expression)'은 세포에서 단백질 또는 핵산이 생성되는 것을 의미한다. '단백질'은 '폴리펩타이드(polypeptide)' 또는 '펩타이드(peptide)'와 호환성 있게 사용되며, 예컨대, 자연 상태의 단백질에서 일반적으로 발견되는 바와 같이 아미노산 잔기의 중합체를 말한다. '폴리뉴클레오티드(polynucleotide)' 또는 '핵산'은 단일-또는 이중-가닥의 형태로 된 데옥시리보뉴클레오티드(DNA) 또는 리보뉴클레오티드(RNA)를 말한다. 다른 제한이 없는 한, 자연적으로 생성되는 뉴클레오티드와 비슷한 방법으로 핵산에 혼성화되는 자연적 뉴클레오티드의 공지된 아날로그도 포함된다. 'mRNA'는 단백질 합성 과정에서 특정 유전자로부터 아미노산 서열을 특정하게 되는 리보솜으로 유전 정보(유전자 특이적 염기 서열)를 전달하는 RNA이다.

'진단'은 병리 상태의 존재 또는 특징을 확인하는 것을 의미한다. 본 발명에서의 진단은 GRS, HRS 및 AIMP1로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 발현 수준, 즉 상기 마커들 중 하나 이상의 단백질 또는 mRNA의 수준을 측정하여 신장암의 병리 존재 또는 발병 여부를 확인하는 것이다.

한편 본 발명의 진단용 조성물이 mRNA의 발현 수준을 측정하기 위한 것일 때에는 mRNA 발현 수준을 측정하는 제제는 GRS, HRS 및 AIMP1로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 mRNA에 특이적으로 결합하는 프로브 또는 프라이머 세트일 수 있다.

상기 GRS, HRS 및 AIMP1 mRNA는 인간을 포함하는 포유류에서 유래한 것일 수 있으며, 바람직하게는 상기 GRS의 mRNA는 서열번호 1, HRS의 mRNA는 서열번호 2 및 AIMP1의 mRNA는 서열번호 3 으로 표시되는 염기 서열을 포함하는 것일 수 있다. 상기 GRS, HRS 및 AIMP1로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 mRNA 특이적인 프로브 또는 프라이머 세트를 GRS, HRS 및 AIMP1로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 발현 수준을 측정하는 제제로 포함하는 본 발명의 진단용 조성물은 공지된 RNA를 감지하는 방법에 필요한 제제를 추가로 포함할 수 있다. 본 조성물을 이용하여 공지된 RNA를 감지하는 방법을 제한없이 사용하여 피검체에서 상기 마커들의 mRNA의 수준을 측정할 수 있다.

'프라이머(primer)'는 DNA 합성의 개시점(starting point)으로 작용하는 짧은 단일가닥 올리고뉴클레오티드(single strand oligonucleotide)이다. 프라이머는 적합한 완충액(buffer)와 온도 조건에서 주형(template)인 폴리뉴클레오티드에 특이적으로 결합하고, DNA 중합효소가 프라이머에 주형 DNA에 상보적인 염기를 갖는 뉴클레오사이드 트리포스페이트를 추가하여 연결함으로써 DNA가 합성된다. 프라이머는 일반적으로 15 내지 30개의 염기서열로 이루어져 있으며, 염기 구성과 길이에 따라 주형 가닥에 결합하는 온도(melting temperature, Tm)가 달라진다.

프라이머의 서열은 주형의 일부 염기 서열과 완전하게 상보적인 서열을 가질 필요는 없으며, 주형과 혼성화되어 프라이머 고유의 작용을 할 수 있는 범위 내에서의 충분한 상보성을 가지면 충분하다. 따라서 본 발명에서 상기 각 마커들의 mRNA의 발현 수준을 측정하기 위한 프라이머는 각 유전자 서열에 완벽하게 상보적인 서열을 가질 필요는 없으며, DNA 합성을 통해 mRNA 또는 cDNA의 특정 구간을 증폭하여 mRNA의 양을 측정하려는 목적에 맞는 길이와 상보성을 갖는 것이면 충분하다. 상기 증폭 반응을 위한 프라이머는 증폭하고자 하는 mRNA의 특정 구간의 양쪽 끝부분의 주형(또는 센스, sense)과 반대편(안티센스, antisense)에 각각 상보적으로 결합하는 한 세트(쌍)으로 구성된다. 프라이머는 당업자라면 GRS, HRS 및 AIMP1의 mRNA 또는 cDNA 염기서열을 참조하여 용이하게 디자인할 수 있다.

본 발명의 프라이머는 바람직하게는 서열번호 1로 표시되는 GRS mRNA 염기서열, 서열번호 2로 표시되는 HRS mRNA 염기서열, 서열번호 3으로 표시되는 AIMP1 mRNA 염기서열에 특이적으로 결합하는 한 세트, 한 쌍 또는 이들의 조합일 수 있으며 ,가장 바람직하게는 서열번호 7, 8 및 9로 이루어진 군에서 선택되는 정방향 프라이머 및 서열번호 10, 11 및 12로 이루어진 군에서 선택되는 역방향 프라이머에서 각각 하나 이상씩 선택될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명에서 상기 서열번호 7 및 10은 GRS mRNA 염기서열에 특이적인 프라이머, 서열번호 8 및 11은 HRS mRNA 염기서열에 특이적인 프라이머, 상기 서열번호 9 및 12는 AIMP1 mRNA 염기서열에 특이적인 프라이머이다.

'프로브(probe)'는 특정 유전자의 mRNA나 cDNA(complementary DNA)에 특이적으로 결합할 수 있는 짧게는 수개 내지 길게는 수백 개의 염기(base pair) 길이의 RNA 또는 DNA 등 폴리뉴클레오티드의 단편을 의미하며, 표지(labeling)되어 있어서 결합하는 대상 mRNA나 cDNA의 존재 유무, 발현양 등을 확인할 수 있다. 본 발명의 목적을 위해서는 GRS, HRS 또는 AIMP1 mRNA에 상보적인 프로브를 피검체의 시료와 혼성화 반응(hybridization)을 수행하여 GRS, HRS 또는 AIMP1 mRNA의 발현양을 측정함으로써 신장암의 진단에 이용할 수 있다. 프로브의 선택 및 혼성화 조건은 당업계에 공지된 기술에 따라 적절하게 선택할 수 있다.

본 발명의 프라이머 또는 프로브는 포스포아미다이트(phosphoramidite) 고체지지체 합성법이나 기타 널리 공지 된 방법을 이용하여 화학적으로 합성할 수 있다. 또한 프라이머 또는 프로브는 GRS, HRS 또는 AIMP1 mRNA와의 혼성화를 방해하지 않는 범위에서 당해 기술분야에 공지된 방법에 따라 다양하게 변형시킬 수 있다. 이러한 변형의 예로는 메틸화, 캡화, 천연 뉴클레오티드 하나 이상의 동족체로의 치환 및 뉴클레오티드 간의 변형, 예를 들면 하전되지 않은 연결체(예: 메틸 포스포네이트, 포스포트리에스테르, 포스포로아미데이트, 카바메이트 등) 또는 하전된 연결체(예: 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트 등), 그리고 형광 또는 효소를 이용한 표지물질(labeling material)의 결합 등이 있다.

본 발명의 진단용 조성물이 단백질의 발현 수준을 측정하기 위한 것일 때에는 단백질 발현 수준을 측정하는 제제는 GRS, HRS 또는 AIMP1 단백질에 각각 특이적으로 결합하는 항체일 수 있다.

상기 GRS, HRS 및 AIMP1 단백질은 인간을 포함하는 포유류에서 유래한 것일 수 있으며, 바람직하게는 GRS 단백질은 서열번호 4, HRS 단백질은 서열번호 5 및 AIMP1 단백질은 서열번호 6으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것일 수 있다.

'항체(antibody)'는 항원성 부위에 특이적으로 결합하는 면역글로불린(immunoglobulin)을 의미한다. 본 발명에서의 항체는 GRS, HRS 또는 AIMP1 이외에는 다른 종류의 아미노아실 티알엔에이 합성효소를 포함하는 다른 단백질에는 반응하지 않고, GRS, HRS 또는 AIMP1 단백질에만 특이적으로 결합하는 항체이다. GRS, HRS 또는 AIMP1 항체는 각 유전자를 발현벡터에 클로닝하여 상기 유전자에 의해 암호화되는 단백질을 수득하고, 수득한 단백질로부터 당해 기술분야의 통상적인 방법에 따라 제조할 수 있다. GRS, HRS 또는 AIMP1 항원성 부위를 포함하는 GRS, HRS 또는 AIMP1 단백질의 단편을 이용하여 각각의 단백질 특이적인 항체를 제조할 수도 있다. 본 발명의 항체의 형태는 특별히 제한되지 않으며, 다클론항체(polyclonal antibody) 또는 단일클론항체(monoclonal antibody)를 포함한다. 또한 항원-항체 결합성을 갖는 것이면 전체 항체의 일부도 본 발명의 항체에 포함되며, GRS, HRS 또는 AIMP1에 특이적으로 결합하는 모든 종류의 면역글로불린 항체가 포함된다. 예를 들어 2개의 전체 길이의 경쇄 및 2개의 전체 길이의 중쇄를 갖는 완전한 형태의 항체 뿐 아니라 항체 분자의 기능적인 단편, 즉 항원 결합 기능을 갖는 Fab, F(ab'), F(ab')2 및 Fv 등을 포함한다. 나아가 본 발명의 항체에는 GRS, HRS 또는 AIMP1 단백질에 특이적으로 결합할 수 있는 것이라면 인간화 항체, 키메릭 항체 등의 특수 항체와 재조합 항체도 포함된다.

상기 각 마커 단백질 특이적인 항체를 GRS, HRS 또는 AIMP1의 발현 수준을 측정하는 제제로 포함하는 본 발명의 진단용 조성물은 공지된 단백질을 감지하는 방법에 필요한 제제를 추가적으로 포함할 수 있으며, 본 조성물을 이용하여 공지된 단백질을 감지하는 방법을 제한없이 사용하여 피검체에서 GRS, HRS 또는 AIMP1로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 단백질의 수준을 측정할 수 있다.

또한 본 발명은 GRS, HRS 및 AIMP1 으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 mRNA 또는 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는 신장암 진단용 키트를 제공한다.

본 발명의 진단용 키트에는 GRS, HRS 및 AIMP1 으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 단백질을 마커로 인식하는 항체 또는 GRS, HRS 및 AIMP1 으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 mRNA를 마커로 인식하는 프라이머, 프로브뿐만 아니라 분석 방법에 적합한 한 종류 또는 그 이상의 다른 구성 성분 조성물, 용액 또는 장치가 포함될 수 있다.

구체적인 양태로서 상기 진단 키트는 역전사 중합효소반응을 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함하는 것을 특징으로 하는 진단용 키트일 수 있다. 역전사 중합효소반응 키트는 마커 유전자에 대한 특이적인 각각의 프라이머 쌍을 포함한다. 프라이머는 각 마커 유전자의 핵산서열에 특이적인 서열을 가지는 뉴클레오타이드로서, 약 7bp 내지 50bp의 길이, 보다 바람직하게는 약 10bp 내지 30bp의 길이이다. 또한 대조군 유전자의 핵산 서열에 특이적인 프라이머를 포함할 수 있다. 그 외 역전사 중합효소반응 키트는 테스트 튜브 또는 다른 적절한 컨테이너, 반응 완충액(pH 및 마그네슘 농도는 다양), 데옥시뉴클레오타이드(dNTPs), Taq-폴리머라아제 및 역전사효소와 같은 효소, DNAse, RNAse 억제제 DEPC-수(DEPC-water), 멸균수 등을 포함할 수 있다.

또 다른 양태로는 DNA 칩을 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함하는 것을 특징으로 하는 진단 키트일 수 있다. DNA 칩 키트는 유전자 또는 그의 단편에 해당하는 cDNA 또는 올리고뉴클레오티드(oligonucleotide)가 부착되어 있는 기판, 및 형광표식 프로브를 제작하기 위한 시약, 제제, 효소 등을 포함할 수 있다. 또한 기판은 대조군 유전자 또는 그의 단편에 해당하는 cDNA 또는 올리고뉴클레오티드를 포함할 수 있다.

가장 바람직하게는, ELISA를 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함하는 것을 특징으로 하는 진단 키트일 수 있다. ELISA 키트는 마커 단백질에 대한 특이적인 항체를 포함한다. 항체는 각 마커 단백질에 대한 특이성 및 친화성이 높고 다른 단백질에 대한 교차 반응성이 거의 없는 항체로, 단클론 항체, 다클론 항체 또는 재조합 항체이다. 또한 ELISA 키트는 대조군 단백질에 특이적인 항체를 포함할 수 있다. 그 외 ELISA 키트는 결합된 항체를 검출할 수 있는 시약, 예를 들면, 표지된 2차 항체, 발색단(chromophores), 효소(항체와 컨주게이트된 형태로서) 및 그의 기질 또는 항체와 결합할 수 있는 다른 물질 등을 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 키트는 효소와 발색 반응할 기질 및 결합되지 않은 단백질 등은 제거하고 결합된 단백질 마커 만을 보유할 수 있는 세척액 또는 용리액을 포함할 수 있다.

분석을 위해 사용되는 시료는 혈액, 혈청, 소변, 누액, 타액 등 정상적인 상태와 구별될 수 있는 감염성 염증 질환 특이적 단백질을 확인할 수 있는 생체 시료를 포함한다. 바람직하게는 생물학적 액체 시료, 예를 들어 혈액, 혈청, 혈장으로부터 측정될 수 있다. 시료는 단백질 마커의 탐지 감도를 증가시키도록 준비될 수 있는데 예를 들어 환자로부터 수득한 혈청 시료는 음이온 교환 크로마토그래피, 친화도 크로마토그래피, 크기별 배제 크로마토그래피(size exclusion chromatography), 액체 크로마토그래피, 연속추출(sequential extraction) 또는 젤 전기영동 등의 방법을 이용하여 전처리될 수 있다.

신장암 진단에 필요한 정보를 제공하기 위하여,

(a) 피검체로부터 시료를 제공하는 단계;

(c) 상기 각 유전자 mRNA의 발현 수준 또는 단백질의 발현 수준을 정상 대조구 시료의 해당 유전자 mRNA의 발현 수준 또는 단백질 발현 수준과 비교하여 발현 수준이 증가한 피검체를 신장암에 걸린 것으로 판정하는 단계를 포함하는 신장암의 마커를 검출하는 방법을 제공한다.

본 발명자들은GRS, HRS 및 AIMP1가 신장암의 신규한 마커로서 기능할 수 있음을 처음 발견하여 상기 각 마커들의 발현 수준을 측정하여 신장암의 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법을 제공한다. 이하 본 발명의 방법을 단계에 따라 설명한다.

본 발명의 방법의 (a) 단계는 피검체의 시료를 제공하는 단계이다.

상기 시료는 신장암 여부를 진단하고자 하는 피검체에서 채취된 것이면 제한없이 사용할 수 있으며, 예를 들어 생검 등으로 얻어진 세포나 조직, 혈액, 전혈, 혈청, 혈장, 타액, 뇌척수액, 각종 분비물, 소변, 대변 등일 수 있다. 바람직하게는 혈액, 혈장, 혈청, 타액, 비액, 객담, 관절낭액, 양수, 복수, 자궁경부 또는 질 분비물, 소변 및 뇌척수액일 수 있다. 가장 바람직하게는 혈액, 혈장, 또는 혈청일 수 있다.

본 발명의 방법의 (b) 단계는 (a) 단계에서 제공한 시료에서 GRS, HRS 및 AIMP1로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 발현 수준을 측정하는 단계이다. 상기 발현 수준은 GRS, HRS 및 AIMP1로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 mRNA 또는 단백질의 발현 수준일 수 있다.

각 단백질의 발현 수준은 각 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 이용하여 검출하거나 측정할 수 있다. 단백질 특이적인 항체는 본 발명의 진단용 조성물에 서술한 바와 같다. 단백질의 발현 수준을 측정하는 방법은 당업계에서 공지되어 있는 방법은 제한 없이 사용할 수 있으며, 그 예로 웨스턴 블랏팅(western blotting), 닷 블랏팅(dot blotting), 효소면역분석법(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA), 방사능 면역분석법(RIA), 방사면역확산법, 오우크테로니 면역 확산법, 로케트 면역 전기영동, 면역조직화학염색, 면역침전법(immunoprecipitation), 보체 고정 분석법, 유세포 분석법(FACS) 또는 단백질 칩(chip) 방법 등이 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다. 바람직하게는 ELISA 방법을 이용할 수 있다.

각 마커들의 mRNA 수준은 mRNA에 특이적으로 결합하는 프라이머 세트나 프로브를 이용하여 피검체의 시료로부터 각 마커들의 mRNA나 cDNA를 증폭하거나, 프로브와 혼성화 반응(hybridization)을 이용하여 피검체 시료 내 각 마커들의 mRNA의 존재와 발현량을 측정할 수 있다. 프라이머와 프로브는 본 발명의 진단용 조성물에서 서술한 바와 같다. mRNA 발현 수준의 측정은 당업계에서 통상적인 발현 수준 확인 방법을 제한 없이 사용할 수 있으며, 분석 방법의 예로 역전사중합체연쇄반응(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR), 경쟁적 RT-PCR(competitive RT-PCR), 실시간 RT-PCR(real-time RT-PCR), RNase 보호 분석법(RPA:RNase protection assay), 노던 블랏팅(northern blotting), DNA 마이크로어레이 칩(microarray chip), RNA 염기서열분석(RNA sequencing), 나노스트링(nanostring)을 이용한 혼성화 방법, 조직 절편의 인시투 혼성화 방법(in situ hybridization) 등이 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 방법의 (c) 단계는 (b) 단계에서 측정한 피검체 시료의 GRS, HRS 및 AIMP1 으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 mRNA 또는 단백질의 수준을 정상인과 비교하고 정상인에 비해 그 발현 수준이 증가한 피검체를 신장암에 걸린 것으로 판정하는 단계이다.

상술한 (b) 단계의 방법으로 측정한 피검체의 각 마커들의 발현 수준을, 동일한 방법으로 측정한 정상인의 마커 수준과 비교한다. 각 마커들의 발현 수준이 건강한 정상인에 비하여 증가한 피검체를 신장암에 걸린 것으로 판정한다.

본 발명은 또한 신장암 치료 후보물질의 투여 후, GRS, HRS 및 AIMP1으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 유전자 mRNA의 발현 수준 또는 단백질의 발현 수준을 측정하는 것을 포함하는, 신장암 치료제의 스크리닝 방법을 제공한다.

구체적으로, 신장암 치료 후보 물질의 존재 및 부존재 하에서 GRS, KRS 및 AIMP1으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 mRNA 또는 단백질 발현의 증가 또는 감소를 비교하는 방법으로 신장암 치료제를 스크리닝하는데 유용하게 사용할 수 있다. GRS, HRS 및 AIMP1으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 mRNA 또는 단백질의 발현 수준을 간접적으로 또는 직접적으로 감소시키는 물질은 신장암의 치료제로서 선택할 수 있다. 즉, 신장암 치료 후보 물질의 부존재 하에 신장암 세포에서의 본 발명의 마커의 발현 수준을 측정하고, 또한 신장암 치료 후보 물질의 존재 하에서 본 발명의 마커의 발현 수준을 측정하여 양자를 비교한 후, 신장암 치료 후보 물질이 존재할 때의 본 발명의 마커의 발현 수준이 신장암 치료 후보 물질의 부재 하에서의 마커 발현 수준보다 감소시키는 물질을 신장암의 치료제로 선택할 수 있는 것이다.

GRS, HRS 및 AIMP1으로 이루어진 본 발명의 신장암 진단 마커는 신장암 환자의 혈청에서 정상 대조군과 비교해 그 발현수준이 증가해 있다. 따라서, GRS, HRS 및 AIMP1로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 마커의 발현 수준을 측정함으로써 신장암 유무를 정확하고 신속하게 판단할 수 있다.

도 1은 정상인군과 신장암 환자군의 혈청 단백질 수치를 dot blot으로 나타낸 결과이다(A: GRS, B: KRS, C: AIMP1, D: HRS, E: WRS, F: TNF-α, G: IL-10)
도 2는 성별에 따른 혈청 GRS 단백질 수치를 확인한 결과이다.
도 3은 혈청 단백질 수치의 ROC 커브를 나타낸 도면이다.

이하 본 발명을 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

<실험방법>

1. 실험시료의 입수

신장암 환자의 혈청을 삼성의료원(서울,대한민국)에서 임상시험심사위원회의 규정에 따라 입수하였다. 정상환자군은 32명, 신장암 환자군은 총 100명의 샘플을 입수하여 분석하였다.

실험에 사용된 환자의 임상학적 정보는 표 1에 기재한 바와 같다.

2. 효소면역분석법(ELISA assay)

정상인 또는 신장암 환자의 혈청으로 분비된 GRS(glycyl-tRNA synthetase ), KRS(lysyl-tRNA synthetase), HRS(histidyl-tRNA synthetase), WRS(tryptophanyl-tRNA synthetase), AIMP-1(aminoacyl-tRNA synthetase complex-interacting multifunctional Protein 1), TNF-α, IL-10 및 CA-19-9의 수치를 제조사의 지시에 따라 효소면역분석 키트를 이용하여 분석하였다. 단백질의 분비량은 마이크로플레이트 리더(TECAN)을 이용하여 측정하였다. 상기 각각의 단백질 수치를 측정하기 위한 키트는 하기 제조사에서 구입하여 사용하였다:

GRS, HRS, WRS ELISA kit(Cusabio, China)

AIMP1 ELISA kit(Elab science, China)

KRS ELISA kit(Mybiosource, USA)

TNF-a, IL-10 (BD science, USA)

CA 19-9 (Abnova, Taiwan)

3. 통계학적 분석

정상인과 신장암 환자의 혈정으로 분비된 단백질 사이의 P value는 Mann-Whitney test/ Two-tailed test로 XLASTAT 소프트웨어를 이용하여 분석하였다. Dotblot plot, ROC curve, AUC, 표준편차는 Graphpad Prism 6 소프트웨어를 이용하여 분서하였다.

<실험결과>

<실시예 1>

정상인과 신장암 환자 혈청 분석결과

신장암에 특이적인 마커를 검색하기 위하여, 정상인 32명 및 신장암 환자 100명의 혈청 단백질을 효소면역분석법(ELISA)으로 분석하였다.

이에 대한 결과를 하기 표 2 및 도 1에 나타내었다.

상기 표 2 및 도 1에서 볼 수 있는 바와 같이, 신장암 환자의 혈청에서 GRS(glycyl-tRNA synthetase), HRS(histidyl-tRNA synthetase) 및 AIMP1(aminoacyl-tRNA synthetase complex-interacting multifunctional Protein 1)의 단백질 수치가 정상인군과 비교해 현저하게 증가되어 있는 것을 확인할 수 있었다.

<실시예 2>

성별에 따른 혈청 GRS 단백질 수치 분석

상기 실시예 1에서 정상인군과 신장암 환자군의 혈청에서 분비량 차이가 가장 크게 나타났던 GRS 단백질 수치를 성별에 따라 구분하여 분석하였다.

이에 대한 결과를 하기 표 3 및 도 2에 나타내었다.

상기 표 3 및 도 2에 나타낸 바와 같이, 정상인과 신장암 환자의 혈청 내 GRS 단백질의 수치는 남성인 경우에 그 차이가 더욱 명확하다는 것을 알 수 있었다.

<실시예 3>

ROC 커브 분석

도 3에 나타낸 바와 같이, GRS, AIMP1, HRS의 ROC의 AUC가 0.6보다 크게 나오고 p value 값이 0.01 보다 작게 나와 통계학적으로 신장암 환자의 혈청 내의 수치가 정상인의 수치보다 유의미하게 크기 때문에 좋은 바이오 마커임을 알 수 있었다. 또한 GRS의 경우 남성 신장암 바이오 마커로 매우 좋음을 알 수 있었다.

GRS, HRS 및 AIMP1으로 이루어진 본 발명의 신장암 진단 마커는 신장암 환자의 혈청에서 정상 대조군과 비교해 그 발현수준이 증가해 있다. 따라서, GRS, HRS 및 AIMP1로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 마커의 발현 수준을 측정함으로써 신장암 유무를 정확하고 신속하게 판단할 수 있어 산업상 이용가능성이 매우 우수하다.

<110> Medicinal Bioconvergence Research Center <120> Composition and method for detecting a diagnostic marker for renal cell carcinoma <130> NP16-0018 <160> 12 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 2058 <212> RNA <213> Human glycyl-tRNA synthetase(GRS) mRNA <400> 1 auggacggcg cgggggcuga ggaggugcug gcaccucuga ggcuagcagu gcgccagcag 60 ggagaucuug ugcgaaaacu caaagaagau aaagcacccc aaguagacgu agacaaagca 120 guggcugagc ucaaagcccg caagaggguu cuggaagcaa aggagcuggc guuacagccc 180 aaagaugaua uuguagaccg agcaaaaaug gaagauaccc ugaagaggag guuuuucuau 240 gaucaagcuu uugcuauuua uggagguguu aguggucugu augacuuugg gccaguuggc 300 ugugcuuuga agaacaauau uauucagacc uggaggcagc acuuuaucca agaggaacag 360 auccuggaga ucgauugcac caugcucacc ccugagccag uuuuaaagac cucuggccau 420 guagacaaau uugcugacuu cauggugaaa gacguaaaaa auggagaaug uuuucgugcu 480 gaccaucuau uaaaagcuca uuuacagaaa uugaugucug auaagaagug uucugucgaa 540 aagaaaucag aaauggaaag uguuuuggcc cagcuugaua acuauggaca gcaagaacuu 600 gcggaucuuu uugugaacua uaauguaaaa 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Tyr Leu Arg Pro Glu Thr Ala Gln Gly Ile Phe Leu Asn Phe Lys Arg 245 250 255 Leu Leu Glu Phe Asn Gln Gly Lys Leu Pro Phe Ala Ala Ala Gln Ile 260 265 270 Gly Asn Ser Phe Arg Asn Glu Ile Ser Pro Arg Ser Gly Leu Ile Arg 275 280 285 Val Arg Glu Phe Thr Met Ala Glu Ile Glu His Phe Val Asp Pro Ser 290 295 300 Glu Lys Asp His Pro Lys Phe Gln Asn Val Ala Asp Leu His Leu Tyr 305 310 315 320 Leu Tyr Ser Ala Lys Ala Gln Val Ser Gly Gln Ser Ala Arg Lys Met 325 330 335 Arg Leu Gly Asp Ala Val Glu Gln Gly Val Ile Asn Asn Thr Val Leu 340 345 350 Gly Tyr Phe Ile Gly Arg Ile Tyr Leu Tyr Leu Thr Lys Val Gly Ile 355 360 365 Ser Pro Asp Lys Leu Arg Phe Arg Gln His Met Glu Asn Glu Met Ala 370 375 380 His Tyr Ala Cys Asp Cys Trp Asp Ala Glu Ser Lys Thr Ser Tyr Gly 385 390 395 400 Trp Ile Glu Ile Val Gly Cys Ala Asp Arg Ser Cys Tyr Asp Leu Ser 405 410 415 Cys His Ala Arg Ala Thr Lys Val Pro Leu Val Ala Glu Lys Pro Leu 420 425 430 Lys Glu Pro Lys Thr Val Asn Val Val Gln Phe Glu Pro Ser Lys Gly 435 440 445 Ala Ile Gly Lys Ala Tyr Lys Lys Asp Ala Lys Leu Val Met Glu Tyr 450 455 460 Leu Ala Ile Cys Asp Glu Cys Tyr Ile Thr Glu Met Glu Met Leu Leu 465 470 475 480 Asn Glu Lys Gly Glu Phe Thr Ile Glu Thr Glu Gly Lys Thr Phe Gln 485 490 495 Leu Thr Lys Asp Met Ile Asn Val Lys Arg Phe Gln Lys Thr Leu Tyr 500 505 510 Val Glu Glu Val Val Pro Asn Val Ile Glu Pro Ser Phe Gly Leu Gly 515 520 525 Arg Ile Met Tyr Thr Val Phe Glu His Thr Phe His Val Arg Glu Gly 530 535 540 Asp Glu Gln Arg Thr Phe Phe Ser Phe Pro Ala Val Val Ala Pro Phe 545 550 555 560 Lys Cys Ser Val Leu Pro Leu Ser Gln Asn Gln Glu Phe Met Pro Phe 565 570 575 Val Lys Glu Leu Ser Glu Ala Leu Thr Arg His Gly Val Ser His Lys 580 585 590 Val Asp Asp Ser Ser Gly Ser Ile Gly Arg Arg Tyr Ala Arg Thr Asp 595 600 605 Glu Ile Gly Val Ala Phe Gly Val Thr Ile Asp Phe Asp Thr Val Asn 610 615 620 Lys Thr Pro His Thr Ala Thr Leu Arg Asp Arg Asp Ser Met Arg Gln 625 630 635 640 Ile Arg Ala Glu Ile Ser Glu Leu Pro Ser Ile Val Gln Asp Leu Ala 645 650 655 Asn Gly Asn Ile Thr Trp Ala Asp Val Glu Ala Arg Tyr Pro Leu Phe 660 665 670 Glu Gly Gln Glu Thr Gly Lys Lys Glu Thr Ile Glu Glu 675 680 685 <210> 5 <211> 509 <212> PRT <213> Human HRS protein <400> 5 Met Ala Glu Arg Ala Pro Leu Glu Glu Leu Val Lys Leu Gln Gly Glu 1 5 10 15 Arg Val Arg Gly Leu Lys Gln Gln Lys Ala Ser Ala Glu Leu Ile Glu 20 25 30 Glu Glu Val Ala Lys Leu Leu Lys Leu Lys Ala Gln Leu Gly Pro Asp 35 40 45 Glu Ser Lys Gln Lys Phe Val Leu Lys Thr Pro Lys Gly Thr Arg Asp 50 55 60 Tyr Ser Pro Arg Gln Met Ala Val Arg Glu Lys Val Phe Asp Val Ile 65 70 75 80 Ile Arg Cys Phe Lys Arg His Gly Ala Glu Val Ile Asp Thr Pro Val 85 90 95 Phe Glu Leu Lys Glu Thr Leu Met Gly Lys Tyr Gly Glu Asp Ser Lys 100 105 110 Leu Ile Tyr Asp Leu Lys Asp Gln Gly Gly Glu Leu Leu Ser Leu Arg 115 120 125 Tyr Asp Leu Thr Val Pro Phe Ala Arg Tyr Leu Ala Met Asn Lys Leu 130 135 140 Thr Asn Ile Lys Arg Tyr His Ile Ala Lys Val Tyr Arg Arg Asp Asn 145 150 155 160 Pro Ala Met Thr Arg Gly Arg Tyr Arg Glu Phe Tyr Gln Cys Asp Phe 165 170 175 Asp Ile Ala Gly Asn Phe Asp Pro Met Ile Pro Asp Ala Glu Cys Leu 180 185 190 Lys Ile Met Cys Glu Ile Leu Ser Ser Leu Gln Ile Gly Asp Phe Leu 195 200 205 Val Lys Val Asn Asp Arg Arg Ile Leu Asp Gly Met Phe Ala Ile Cys 210 215 220 Gly Val Ser Asp Ser Lys Phe Arg Thr Ile Cys Ser Ser Val Asp Lys 225 230 235 240 Leu Asp Lys Val Ser Trp Glu Glu Val Lys Asn Glu Met Val Gly Glu 245 250 255 Lys Gly Leu Ala Pro Glu Val Ala Asp Arg Ile Gly Asp Tyr Val Gln 260 265 270 Gln His Gly Gly Val Ser Leu Ala Glu Gln Leu Leu Gln Asp Pro Lys 275 280 285 Leu Ser Gln Asn Lys Gln Ala Leu Glu Gly Leu Gly Asp Leu Lys Leu 290 295 300 Leu Phe Glu Tyr Leu Thr Leu Phe Gly Ile Asp Asp Lys Ile Ser Phe 305 310 315 320 Asp Leu Ser Leu Ala Arg Gly Leu Asp Tyr Tyr Thr Gly Val Ile Tyr 325 330 335 Glu Ala Val Leu Leu Gln Thr Pro Ala Gln Ala Gly Glu Glu Pro Leu 340 345 350 Gly Val Gly Ser Val Ala Ala Gly Gly Arg Tyr Asp Gly Leu Val Gly 355 360 365 Met Phe Asp Pro Lys Gly Arg Lys Val Pro Cys Val Gly Leu Ser Ile 370 375 380 Gly Val Glu Arg Ile Phe Ser Ile Val Glu Gln Arg Leu Glu Ala Leu 385 390 395 400 Glu Glu Lys Ile Arg Thr Thr Glu Thr Gln Val Leu Val Ala Ser Ala 405 410 415 Gln Lys Lys Leu Leu Glu Glu Arg Leu Lys Leu Val Ser Glu Leu Trp 420 425 430 Asp Ala Gly Ile Lys Ala Glu Leu Leu Tyr Lys Lys Asn Pro Lys Leu 435 440 445 Leu Asn Gln Leu Gln Tyr Cys Glu Glu Ala Gly Thr Pro Leu Val Ala 450 455 460 Ile Ile Gly Glu Gln Glu Leu Lys Asp Gly Val Ile Lys Leu Arg Ser 465 470 475 480 Val Thr Ser Arg Glu Glu Val Asp Val Arg Arg Glu Asp Leu Val Glu 485 490 495 Glu Ile Lys Arg Arg Thr Gly Gln Pro Leu Cys Ile Cys 500 505 <210> 6 <211> 312 <212> PRT <213> Human AIMP1 protein <400> 6 Met Ala Asn Asn Asp Ala Val Leu Lys Arg Leu Glu Gln Lys Gly Ala 1 5 10 15 Glu Ala Asp Gln Ile Ile Glu Tyr Leu Lys Gln Gln Val Ser Leu Leu 20 25 30 Lys Glu Lys Ala Ile Leu Gln Ala Thr Leu Arg Glu Glu Lys Lys Leu 35 40 45 Arg Val Glu Asn Ala Lys Leu Lys Lys Glu Ile Glu Glu Leu Lys Gln 50 55 60 Glu Leu Ile Gln Ala Glu Ile Gln Asn Gly Val Lys Gln Ile Pro Phe 65 70 75 80 Pro Ser Gly Thr Pro Leu His Ala Asn Ser Met Val Ser Glu Asn Val 85 90 95 Ile Gln Ser Thr Ala Val Thr Thr Val Ser Ser Gly Thr Lys Glu Gln 100 105 110 Ile Lys Gly Gly Thr Gly Asp Glu Lys Lys Ala Lys Glu Lys Ile Glu 115 120 125 Lys Lys Gly Glu Lys Lys Glu Lys Lys Gln Gln Ser Ile Ala Gly Ser 130 135 140 Ala Asp Ser Lys Pro Ile Asp Val Ser Arg Leu Asp Leu Arg Ile Gly 145 150 155 160 Cys Ile Ile Thr Ala Arg Lys His Pro Asp Ala Asp Ser Leu Tyr Val 165 170 175 Glu Glu Val Asp Val Gly Glu Ile Ala Pro Arg Thr Val Val Ser Gly 180 185 190 Leu Val Asn His Val Pro Leu Glu Gln Met Gln Asn Arg Met Val Ile 195 200 205 Leu Leu Cys Asn Leu Lys Pro Ala Lys Met Arg Gly Val Leu Ser Gln 210 215 220 Ala Met Val Met Cys Ala Ser Ser Pro Glu Lys Ile Glu Ile Leu Ala 225 230 235 240 Pro Pro Asn Gly Ser Val Pro Gly Asp Arg Ile Thr Phe Asp Ala Phe 245 250 255 Pro Gly Glu Pro Asp Lys Glu Leu Asn Pro Lys Lys Lys Ile Trp Glu 260 265 270 Gln Ile Gln Pro Asp Leu His Thr Asn Asp Glu Cys Val Ala Thr Tyr 275 280 285 Lys Gly Val Pro Phe Glu Val Lys Gly Lys Gly Val Cys Arg Ala Gln 290 295 300 Thr Met Ser Asn Ser Gly Ile Lys 305 310 <210> 7 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Human GRS primer forward <400> 7 gccuggagga aacaugccug 20 <210> 8 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Human HRS primer forward <400> 8 aagguauauc ggcgggauaa cc 22 <210> 9 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Human AIMP1 primer forward <400> 9 cuggugaauc auguuccucu ug 22 <210> 10 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Human GRS primer reverse <400> 10 gaaggucugc cacauucugg 20 <210> 11 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Human HRS primer reverse <400> 11 ucaggaucuc gcacaugauc uu 22 <210> 12 <211> 25 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Human AIMP1 primer reverse <400> 12 ggaaagcauc aaaaguaauu cuguc 25

Claims

혈액, 혈청 및 혈장으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 시료로 하되, GRS(glycyl-tRNA synthetase)의 mRNA 또는 이의 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제,
및 HRS(histidyl-tRNA synthetase) 또는 AIMP1(aminoacyl-tRNA synthetase complex-interacting multifunctional Protein 1)의 mRNA 또는 이의 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는 신장암 진단용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 GRS 유전자의 mRNA 발현 수준을 측정하는 제제는 GRS의 mRNA에 특이적으로 결합하는 프로브 또는 프라이머 세트인 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항에 있어서, 상기 GRS 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제는 GRS의 단백질에 특이적인 항체인 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항에 있어서, 상기 GRS의 mRNA는 서열번호 1로 표시되는 염기 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항에 있어서, 상기 GRS 단백질은 서열번호 4로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
혈액, 혈청 및 혈장으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 시료로 하되, GRS의 mRNA 또는 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제,
및 HRS 또는 AIMP1의 mRNA 또는 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는 신장암 진단용 키트.
제6항에 있어서, 상기 키트는 RT-PCR키트, DNA 칩 키트 또는 단백질 칩 키트인 것을 특징으로 하는 키트.
신장암 진단에 필요한 정보를 제공하기 위하여,
(a) 피검체로부터 분리된 혈액, 혈청 및 혈장으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 시료를 제공하는 단계;
(b) 상기 분리된 시료에서 GRS 및, HRS 또는 AIMP1의 mRNA 발현 수준 또는 단백질의 발현 수준을 측정하는 단계; 및
(c) 상기 유전자 mRNA의 발현 수준 또는 단백질의 발현 수준을 정상 대조구 시료의 해당 유전자 mRNA의 발현 수준 또는 단백질 발현 수준과 비교하는 단계를 포함하는 신장암의 마커를 검출하는 방법.
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제8항에 있어서, 상기 mRNA의 발현 수준을 측정하는 방법은 역전사효소 중합효소반응, 경쟁적 역전사효소 중합효소반응, 실시간 역전사효소 중합효소반응, RNase 보호 분석법, 노던 블랏팅 및 DNA 칩으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 이용하는 것인 방법.
제8항에 있어서, 상기 단백질 발현 수준을 측정하기 위한 방법은 웨스턴 블랏, ELISA, 방사선면역분석, 방사 면역 확산법, 오우크테로니 면역 확산법, 로케트 면역전기영동, 조직면역 염색, 면역침전 분석법, 보체 고정 분석법, FACS 및 단백질 칩 방법으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 이용하는 것인 방법.
인간을 제외한 포유동물에 신장암의 치료 후보물질의 투여 후, GRS 및, HRS 또는 AIMP1의 mRNA의 발현 수준 또는 단백질의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하며, 혈액, 혈청 및 혈장으로 이루어진 군에서 선택된 하나의 것을 시료로 하는 신장암 치료제의 스크리닝 방법.
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