KR101687775B1

KR101687775B1 - 자궁내막증 진단용 조성물 및 이를 포함하는 진단키트

Info

Publication number: KR101687775B1
Application number: KR1020150038440A
Authority: KR
Inventors: 김태희; 이해혁; 김준모; 이아름
Original assignee: 순천향대학교 산학협력단
Priority date: 2015-03-19
Filing date: 2015-03-19
Publication date: 2016-12-20
Also published as: KR20160113418A

Abstract

본 발명의 자궁내막증 진단용 조성물과 이를 포함하는 키트는, Jab1(Jun activation domain binding protein 1) 단백질 또는 이를 암호화하는 mRNA의 수준을 측정하는 제제를 포함하여 자궁내막증을 효율적인 진단이 가능하도록 한다.

Description

자궁내막증 진단용 조성물 및 이를 포함하는 진단키트{COMPOSITION FOR DIAGNOSING ENDOMETRIOSIS AND DIAGNOSTIC KIT FOR ENDOMETRIOSIS CONTAINING THE SAME}

본 발명은 자궁내막증 진단용 조성물 및 이를 포함하는 진단키트에 대한 것으로, Jab1(Jun activation domain binding protein 1) 단백질 또는 이를 암호화하는 mRNA의 수준을 측정하는 제제를 포함하여 자궁내막증을 효과적으로 진단할 수 있는 조성물 및 키트를 제공하는 것이다.

자궁내막증(endometriosis)은, 자궁 외부에 존재하는 이소성 자궁내막으로 정의되는 만성 염증성 질환으로, 월경불순, 이상성감증, 그리고 불임 등을 동반하고, 가임기 여성에게 흔하게 발생되는 질환이다. 복막, 흉부, 배꼽 등의 위치에서 이소성 자궁내막 세포가 발견되기도 하지만, 가장 공통적으로 이소성 자궁내막세포가 발견되는 장소는 난소 등을 들 수 있다.

자궁내막증의 병리생리학적인 원인으로, 체강상피 화생설(coelomic metaplasia), 역행성월경이론(retrograde menstruation) 그리고 내분비 교란물질에의 노출설 등이 제시되고 있으나, 많은 노력에도 불구하고 명확한 자궁내막증의 병리생리학적인 원인은 밝혀지지 않고 있다.

자궁내막증은 가임기 여성에게 빈번하게 발병하고 많은 불임 등 심각한 부작용을 야기함에도 불구하고, 난소암이나 경계성 종양보다 덜 연구되어왔다. 자궁내막증은 그 정확한 진단도 쉽지 않아서, 자궁내막증이 의심되는 경우 진행되는 조직검사 등에서 예측도(positive predictive value)가 45% 정도로 낮은 편이다. 따라서, 자궁내막증의 진단적 민감성을 향상시키고 조기에 진단하기 위한 추가적인 연구가 필요하다.

국내특허공개번호 제 10-2006-0112709호(2006년11월01일 공개)

Walter AJ, Hentz JG, Magtibay PM, Cornella JL, Magrina JF (2001) Endometriosis: correlation between histologic and visual findings at laparoscopy. Am J Obstet Gynecol 184:1407-1413.

본 발명의 목적은 Jab1(Jun activation domain binding protein 1) 단백질 수준 또는 이를 암호화하는 mRNA의 수준을 측정하는 제제를 포함하여 자궁내막증을 진단하는 조성물 또는 진단키트를 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 일 실시예에 따른 자궁내막증 진단용 조성물은, Jab1(Jun activation domain binding protein 1) 단백질 또는 이를 암호화하는 mRNA의 수준을 측정하는 제제를 포함한다.

상기 Jab1 단백질은 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 것일 수 있다.

상기 자궁내막증 진단용 조성물은, CD10 또는 이를 암호화하는 mRNA의 수준을 측정하는 제제를 더 포함하는 것일 수 있다.

본 발명의 다른 일 실시예에 따른 자궁내막증의 진단용 키트는, Jab1(Jun activation domain binding protein 1) 단백질의 수준 또는 이를 암호화하는 mRNA의 수준을 측정하는 제제를 포함한다.

상기 자궁내막증의 진단용 키트는 면역분석(immunoassay)키트일 수 있다.

본 발명의 또 다른 일 실시예에 따른 자궁내막증 치료제의 스크리닝 방법은, Jab1(Jun activation domain binding protein 1) 단백질을 암호화하는 유전자가 도입된 세포를 포함하는 스크리닝용 세포를 배양하는 제1단계; 상기 Jab1 단백질의 발현을 억제하는 물질을 세포에 처리하여 처리군을 제조하는 제2단계; 그리고 상기 제2단계의 처리군과 대조군에서 상기 Jab1 단백질의 발현 수준을 비교하는 제3단계;를 포함하여 자궁내막증 치료제를 스크리닝한다.

본 발명에서 용어, ‘진단’은 병리 상태의 존재 또는 특징을 확인하는 것을 의미한다. 본 발명의 목적상, 진단은 자궁내막증 발병 여부를 확인하는 것이다.

본 발명에서 용어, ‘자궁내막증(endometriosis)’은 자궁내막의 선(gland)조직과 기질(stroma) 조직이 자궁이 아닌 다른 부위의 조직에 부착하여 증식하는 것을 의미한다.

본 발명에서 용어, ‘진단용 마커, 진단하기 위한 마커 또는 진단 마커’는 자궁내막증 세포를 정상 세포와 구분하여 진단할 수 있는 물질로, 정상 세포에 비하여 자궁내막증을 가진 세포에서 증가양상을 보이는 폴리펩타이드 또는 핵산(예: mRNA 등), 지질, 당지질, 당단백질, 당(단당류, 이당류, 올리고당류 등) 등과 같은 유기 생체 분자 등의 수준을 정상 세포와 구분할 수 있거나 그 수준을 측정할 수 있는 제제를 포함한다.

본 발명에서 용어 ‘생물학적 시료’는 자궁내막증 발병에 의해 자궁내막증 마커의 유전자 발현 수준에 차이가 나타나는 조직, 세포, 전혈, 혈청, 혈장, 타액, 객담, 생리혈 또는 뇨와 같은 시료 등을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.

이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.

본 발명의 발명자들은, 이소성 자궁내막증 세포는 증식 및 부착을 경험하고 정상 자궁내막 세포보다 세포자연사에 덜 민감하다는 특성을 가진다는 점을 인식하고, 이소성 자궁내막증 세포가 조직학적으로 양성임에도 불구하고 암과 유사하게 진행, 재발 그리고 조직파괴적 병변을 유도한다는 점에 주목하였다. 이에, 본 발명자들은 양성 난소 종양의 조직과 자궁내막증의 조직을 비교하는 방법으로, 난소 자궁내막증의 CD 10, Jab1, 및 p27 단백질 발현 정도 차이를 조사하고, Jab1가 자궁내막증 진단의 새로운 바이오마커로 활용될 수 있음을 확인하여 본 발명을 완성했다.

본 발명의 일 실시예에 따른 자궁내막증 진단용 조성물은, Jab1(Jun activation domain binding protein 1) 단백질 또는 이를 암호화하는 mRNA의 수준을 측정하는 제제를 포함한다.

Jab1 단백질은 서열번호 1의 아미노산 서열을 가지는 Jun 활성 도메인 결합 단백질 1(Jun activation domain binding protein 1)로, 세포주기 조절에 관여하는 단백질이다.

상기 자궁내막증 진단용 조성물은 자궁내막증과 관련되는 생물학적 시료 내에 함유되는 Jab1 단백질의 발현 수준을 측정하여 자궁내막증 의심환자의 진단을 할 수 있다. 상기 생물학적 시료는, 예를 들어 난소조직, 골반 복막, 또는 질직장중격일 수 있다.

상기 생물학적 시료 중의 유전자 발현 수준은 mRNA 또는 단백질의 양을 확인함으로써 확인할 수 있다.

상기 단백질 (발현)수준의 측정은 자궁내막증을 진단하기 위하여 생물학적 시료에서 자궁내막증 마커 유전자로부터 발현된 단백질의 존재 여부와 발현 정도를 확인하는 과정으로, 바람직하게는, 상기 유전자의 단백질에 대하여 특이적으로 결합하는 항체를 이용하여 단백질의 양을 확인할 수 있다. 즉, 상기 단백질의 수준을 측정하는 제제는, 예를 들어 Jab1 단백질에 특이적으로 결합하는 항체일 수 있다.

이를 위한 분석 방법으로는 웨스턴 블랏, 엘라이자(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA), 방사선면역분석(RIA: Radioimmunoassay), 방사 면역 확산법(radioimmunodiffusion), 오우크테로니(Ouchterlony) 면역확산법, 로케트(rocket) 면역전기영동, 조직면역 염색, 면역분석(Immunoassay), 면역화학염색분석(Immunohistochemistry Assay), 면역침전 분석법(Immunoprecipitation Assay), 보체고정 분석법(Complement Fixation Assay), 유세포분석(Fluorescence Activated Cell Sorter, FACS), 단백질칩(protein chip) 등이 있으나 이로 제한되는 것은 아니다.

상기 항체란, 항원성 부위에 대해서 지시되는 특이적인 단백질 분자를 의미하고, 본 발명의 목적상, 항체는 마커 단백질에 대해 특이적으로 결합하는 항체를 의미하며, 다클론 항체, 단클론 항체 및 재조합 항체를 모두 포함한다. 상기한 바와 같이 자궁내막증 마커 단백질이 규명되었으므로, 이를 이용하여 항체를 생성하는 것은 당업계에 널리 공지된 기술을 이용하여 용이하게 제조할 수 있다. 다클론 항체는 상기한 자궁내막증 마커 단백질 항원을 동물에 주사하고 동물로부터 채혈하여 항체를 포함하는 혈청을 수득하는 당업계에 널리 공지된 방법에 의해 생산할 수 있다. 이러한 다클론 항체는 염소, 토끼, 양, 원숭이, 말, 돼지, 소 개 등의 임의의 동물 종 숙주로부터 제조 가능하다.

예를 들어, 상기 Jab1 단백질에 특이적으로 결합하는 항체는 시판되는 Jab1 항체(sc-13157, 1:200, Santa Cruz Biotechnology, Inc., CA, USA: 염기서열; MAASGSGMAQKTWELANNMQEAQSIDEIYKYDKKQQQEILAAKPWTKDHHYFKYCKISALALLKMVMHARSGGNLEVMGLMLGKVDGETMIIMDSFALPVEGTETRVNAQAAAYEYMAAYIENAKQVGHLENAIGWYHSHPGYGCWLSGIDVSTQMLNQQFQEPFVAVVIDPTRTISAGKVNLGAFRTYPKGYKPPDEGPSEYQTIPLNKIEDFGVHCKQYYALEVSYFKSSLDRKLLELLWNKYWVNTLSSSSLLTNADYTTGQVFDLSEKLEQSEAQLGRGSFMLGLETHDRKSEDKLAKATRDSCKTTIEAIHGLMSQVIKDKLFNQINI) 등이 적용될 수 있다.

상기 자궁내막증 진단용 조성물에 Jab1(Jun activation domain binding protein 1) 단백질 또는 이를 암호화하는 mRNA의 수준을 측정하는 제제를 포함하여 적용하는 경우, 자궁내막증의 양성예측도가 70% 이상으로 진단의 효율성을 향상시킬 수 있다.

상기 자궁내막증 진단용 조성물은 상기 Jab1(Jun activation domain binding protein 1) 단백질 또는 이를 암호화하는 mRNA의 수준을 측정하는 제제에 추가적으로 CD10 또는 이를 암호화하는 mRNA의 수준을 측정하는 제제를 더 포함하는 것일 수 있다.

상기 CD10는 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 것일 수 있다.

위의 CD10 및 이를 암호화하는 mRNA, 이들 각각의 수준을 측정하는 제제에 대한 설명 중에서 상기 Jab1 및 이를 암호화하는 mRNA, 이들 각각의 수준을 측정하는 제제에 대한 설명과 동일하거나 대응되는 내용은 기재를 생략한다.

상기 CD10에 특이적으로 결합하는 항체는 시판되는 CD10 항체(sc-46656, 1:100, Santa Cruz Biotechnology, Inc., CA, USA, 염기서열; MKEPDAIKLFVGQIPRHLEEKDLKPIFEQFGRIFELTVIKDKYTGLHKGCAFLTYCARDSALKAQSALHEQKTLPGMNRPIQVKPADSESRGEDRKLFVGMLGKQQTDEDVRKMFEPFGTIDECTVLRGPDGTSKGCAFVKFQTHAEAQAAINTLHSSRTLPGASSSLVVKFADTEKERGLRRMQQVATQLGMFSPIALQFGAYSAYTQALMQQQAALVAAHSAYLSPMATMAAVQMQHMAAINANGLIATPITPSSGTSTPPAIAATPVSAIPAALGVNGYSPVPTQPTGQPAPDALYPNGVHPYPAQSPAAPVDPLQQAYAGMQHYTAAYPAAYSLVAPAFPQPPALVAQQPPPPPQQQQQQQQQQQQQQQREGPDGCNIFIYHLPQEFTDSEILQMFVPFGHVISAKVFVDRATNQSKCFGFVSFDNPASAQAAIQAMNGFQIGMKRLKVQLKRPKDANRPY) 등이 적용될 수 있다.

세포주기 신호전달 단백질로 알려진 p27의 발현 정도는 자궁내막증의 진단에 유의미한 결과를 보여주지 않았으나, Jab1은 CD10와 유사한 정도로 자궁내막증의 생체조직 샘플에서 발현이 확인되어, 상기 자궁내막증 진단용 조성물에서 Jab1 단독으로 또는 Jab1과 CD10을 동시에 평가하여 그 결과를 자궁내막증의 진단에 활용할 경우, 자궁내막증 진단의 정확도가 향상될 수 있다.

본 발명의 다른 일 실시예에 따른 자궁내막증의 진단용 키트는 Jab1(Jun activation domain binding protein 1) 단백질의 수준 또는 이를 암호화하는 mRNA의 수준을 측정하는 제제를 포함한다.

상기 자궁내막증의 진단용 키트는 의심 환자의 생물학적 시료의 분석을 통해서 자궁내막증의 진단을 도와주는 키트로, 위에서 설명한 자궁내막증 진단용 조성물을 포함한다. 이러한 자궁내막증 진단용 조성물을 이용한 키트를 이용하여 자궁내막증 의심 환자의 생물학적 시료 분석에 활용할 경우, 간단한 방식으로 편리하게 자궁내막증 진단을 위한 자료를 제공할 수 있다. 상기 자궁내막증 진단용 조성물에 대한 설명은 위의 기재와 중복되므로 생략한다. 상기 자궁내막증의 진단용 키트는 면역분석(immunoassay)키트일 수 있다.

구체적으로, 상기 자궁내막증의 진단용 키트는 Jab1(Jun activation domain binding protein 1) 단백질과 특이적으로 반응하는 제제를 포함하여, 자궁내막증 의심환자의 생물학적 시료와 접촉시켜 항원-항체 복합체 형성으로 단백질의 발현 수준을 확인할 수 있고, 이를 비 자궁내막증인 경우의 생물학적 시료로 반응시킨 대조군과 비교하여 자궁내막증의 진단 자료를 효과적으로 제공할 수 있다.

본 발명의 다른 일 실시예에 따른 자궁내막증 치료제의 스크리닝 방법은, Jab1(Jun activation domain binding protein 1) 단백질을 암호화하는 유전자가 도입된 세포를 포함하는 스크리닝용 세포를 배양하는 제1단계; 상기 Jab1 단백질의 발현을 억제하는 물질을 세포에 처리하여 처리군을 제조하는 제2단계; 그리고 상기 제2단계의 처리군과 대조군에서 상기 Jab1 단백질의 발현 수준을 비교하는 제3단계;를 포함하여 자궁내막증 치료제를 스크리닝한다.

상기 스크리닝용 세포로는 상기 Jab1 단백질을 암호화하는 유전자와 별도로 또는 함께 CD10를 암호화하는 유전자가 도입된 세포가 적용될 수 있다.

상기 스크리닝 방법은, 자궁내막증 진단에 유용한 1가지 이상의 유전자를 활용하여 이의 발현을 억제하는 물질을 찾아내는 방식으로 자궁내막증 치료제의 후보물질을 효과적으로 스크리닝 할 수 있다.

본 발명의 자궁내막증 진단용 조성물은 자궁내막증 진단에 대한 양성예측도를 향상시킬 수 있고, 자궁내막증을 효율적으로 진단할 수 있다.

도 1은 본 발명의 실시예 2에서 진행한 자궁내막증 샘플들에서의 CD10, Jab1, 및 p27 발현에 대한 면역염색화학적 평가 결과를 나타낸 사진이다.
도 2은 본 발명의 실시예 2에서 진행한 양성 난소낭종 샘플들에서의 CD10, Jab1, 및 p27 발현에 대한 면역염색화학적 평가 결과를 나타낸 사진이다.

이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 첨부한 도면을 참고로 하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다.

통계 분석

이하의 데이터들은 마이크로소프트 2007 오피스 엑셀 프로그램을 이용하여 기록되고 SPSS(Statistical Package for the Social Sciences) 12.0 버전(SPSS Inc., Chicago, IL, USA)을 이용하여 통계 분석되었다. 매개변수 데이터는 평균(표준편차, [SD])로, 그리고 비매개변수는 중간값(사분위수, [IQR])로 나타냈다. 연속변수(continuous variables)는 Student’s t-test 또는 Mann-Whitney U-test를 이용하여 분석되었고, 불연속변수(discrete variables)은 2 test 또는 Fisher’s exact test를 이용해 분석했다. p <0.05를 통계적 유의성을 의미하는 것으로 취급했다.

실시예 1: 샘플의 준비 및 준비된 샘플들의 임상적 특징

2011년 8월뷰터 2013년 12월까지 국내 3차 대학 병원에서 난소적출술, 난소 낭선종 절제술 또는 난관난소절제술을 받은 54명의 환자(자궁내막증 26명, 비자궁내막증 28명)의 샘플을 이용하여 이하 분석을 진행하였다. 모든 샘플에 대한 분석은 IRB의 승인과 모든 환자로부터 처치 전 고지에 입각한 동의를 받고 수행되었다. 각 환자들의 정보, 나이, 몸무게, 신장, 다른 질병, 그리고 약물 투여여부와 같은 배경에 대한 정보들은 전자적 의학 기록으로 수집되었다.

자궁내막증의 임상적 단계는 AFS(the revised American Fertility Society) 분류법에 따라, 미니멀(minimal, Stage I), 마일드(mild, Stage II), 모더레이트(moderate, Stage III) 그리고 시비어(severe, Stage IV)로 분류되었다. 채취된 조직은 채취 즉시 실험실로 보내져 분석이 이루어졌다.

조직 샘플 제공자들의 임상적인 특징을 하기 표 1에 정리하였다.

	연령 (years)*		키(m)†	체중(kg)‡	체질량지수 (kg/m²)§
	평균	SD	중앙값 (IQR)	중앙값 (IQR)	중앙값 (IQR)
자궁내막증 Endometriosis (n=26)	35.39	6.29	1.63 (1.58-1.66)	56.00 (52.00-66.00)	22.04 (20.00-23.17)
비자궁내막증 Non-endometriosis (n=28)	35.82	16.1	1.60 (1.58-1.61)	54.00 (51.05-58.05)	21.96 (19.74-23.07)
* Student t-test에 의한 P-값: *0.896 †,‡,§ Mann-Whitney U-test 에 의한 P-값: †0.005, ‡0.166, §0.986 §체질량지수 =체중(kg)/(키(m))²

연령이나 체중에 대해서는 자궁내막증 그룹과 비 자궁내막증 그룹 사이에 차이점은 없었고, 키에 대해서는 비 자궁내막증 그룹이 자궁내막증 그룹보다 조금 크다는 차이점이 있었으나, 이로 인한 임상적인 의미는 없었다. 체질량지수(body mass index, BMI)는 자궁내막증 그룹이 21.8 kg/m², 비 자궁내막증 그룹이 21.9 kg/m²이었다.

대부분의 자궁내막증 증세에서 AFS는 심각(severe) 이었고, 19.2%가 stage III, 그리고 80.7%가 stage IV로 나타났다.

실시예 2: 난소조직의 면역조직화학분석(Immunohistochemical analyses)

1) 난소조직의 면역염색

모든 샘플들의 난소조직들은 10%의 포름알데하이드로 고정시켰고 파라핀 블록으로 제조된 후 5 ?m 두께 절편으로 절단되었다. 연속된 절편들은 폴리-L-라이신(poly-L-lysine)으로 코팅된 유리 슬라이드 상에 위치시켰다. 각각의 절편들의 파라핀을 자이렌을 이용해 제거하고, 알코올을 이용하여 절편을 재수화 하였다.

항원 회수를 위해서, 슬라이드는 10분 동안 0.1 M의 구연산나트륨 버퍼용액(pH 6.0)으로 처리하여 90 내지 100°C에서 전자레인지로 가열했고, 1시간 동안 실온에서 식혔다. 슬라이드들은 그 후 TBS(Tris-buffered saline, pH 7.4)에서 각각 5분 동안 3번 세척하였다. 30분 동안 0.3% 과산화수소로 처리하여 절편들의 내재성 퍼옥시다아제를 블록킹 하였고, TBS로 3번 세척하였다.

이렇게 처리된 슬라이드들은 실온에서 1시간 동안 블록킹 버퍼{TBS 내에 5% NGS(normal goat serum) + 0.5% Tween-20}와 함께 항온항습기 내에서 배양시켰고, 1차 항체가 추가된 후 4 ℃에서 습실(moist chamber) 내에 하룻밤 동안 배양되었다. 1차 항체로는 아래의 항체 패널들이 사용되었다.

(1) Jab1 (sc-13157, 1:200, Santa Cruz Biotechnology, Inc., CA, USA);

(2) Anti-p27 KIP 1 (ab7961, 1:250, Abcam Inc., Cambridge, MA, USA);

(3) CD10 (sc-46656, 1:100, Santa Cruz Biotechnology, Inc., CA, USA).

면역염색은 HRP(EXPOSE mouse- and rabbit-specific horseradish peroxidase), 3’,3-디아미노벤지다인(3’,3-diaminobenzidine, DAB) 검출 면역조직화학(immunohistochemistry, IHC) 키트 (Abcam Inc., Cambridge, MA, USA) 을 이용하 매뉴얼에 따라 수행되었다. 유사한 조직 절편은 음성대조군으로 비특이적 IgG을 이용하여 면역염색되었다. 갈색으로 염색된 조직만을 양성으로 판단했으며, 어떤 샘플에서도 백그라운드 염색은 관찰되지 않았다.

2) 난소조직의 면역염색 결과

위의 방법으로 면역염색을 한 결과를 도 1 및 도 2에 나타내었다.

상기 도 1은 자궁내막증 샘플들에서 CD10, Jab1, 및 p27 발현에 대한 면역염색화학적 평가 결과를, 상기 도 2는 양성 난소낭종 샘플들에서의 CD10, Jab1, 및 p27 발현에 대한 면역염색화학적 평가 결과를 나타낸 것이다. 도 1 및 도 2에서, 검은색 화살표는 CD10 (+), Jab1 (+), 그리고 p27 (+) 발현을 의미하고, 흰색 화살표는 CD10 (-), Jab1 (+), 및 p27 (+) 발현을 의미하며, 도 2의 오른쪽 사진에서 쌍촉화살은 p27 (+)을 의미한다.

상기 도 1을 참조하면, 약 50%의 자궁내막증 샘플들에서 자궁내막 기질의 마커인 CD10이 발현되었고, Jab1과 p27도 발현된다는 점을 확인할 수 있었다. 그러나, Jab1 발현은 CD10 양성 구역에 국한되지 않았다(흰색 화살표). 상기 도 2를 참조하면, 비자궁내막증 케이스에서 거의 모든 샘플들은 CD10과 Jab1에 대해서 음성으로 나타났으나 p27는 50% 발현되었다.

실시예 3: CD10, Jab1 및 p27의 발현 수준과 진단에의 유용성

위의 실시예 2의 결과를 이용하여 자궁내막증 진단을 위한 CD10, Jab1 및 p27의 유용성을 판단하였다.

1) CD10, Jab1 및 p27 발현 수준의 비교

	CD10*		Jab1†		p27‡
	Positive	Negative	Positive	Negative	Positive	Negative
	n (%)	n (%)	n (%)	n (%)	n (%)	n (%)
자궁내막증Endometriosis	13 (50)	13 (50)	13 (48.3)	13 (51.7)	15 (57.7)	11 (42.3)
비자궁내막증 Non-endometriosis	4 (14.3)	24 (85.7)	5 (17.9)	23 (82.1)	14 (50)	14 (50)
,†,‡ Chi-square test 에 의한 P-값: 0.005, †0.012, ‡0.571

상기 표 2를 참조하면, 자궁내막증 샘플 내에서 CD10와 Jab1의 양성 비율은 비자궁내막증 샘플과 비교하여 상당히 높았다(각각 p = 0.005, p = 0.012). 그러나, p27 발현에 대한 두 그룹 사이에 유의미한 차이는 없는 것으로 나타났다.

2) 임상병리적 진단에 따라 분류시 Jab1과 p27의 비교

임상병리적인 진단에 따라서, 자궁내막증이 ‘확실한(definite)’ 경우는 외과적 검사(surgical inspection)와 면역조직학적인 CD10 검사가 일치하는 경우로 정의하였고, 이에 따라 분류된 샘플들에서 Jab1과 p27의 발현을 정리하여 하기 표 3에 나타내었다.

	Jab1				p27
	Positive		Negative		Positive		Negative
	n	%	n	%	n	%	n	%
CD10 (+) & 자궁내막증(n=13)	9	69.23	4	30.77	11	84.62	2	15.38
CD10 (-) & 비자궁내막증(n=24)	3	12.5	21	87.5	10	41.67	14	58.33

상기 표 3을 참조하면, 확실한 자궁내막증에서는 Jab1 (69.2%)과 p27 (84.6%)가 양성으로 나타났고, 확실한 비자궁내막증에서는 Jab1 음성에 면역반응성(87.5%)이 나타났다.

3) Jab1의 자궁내막증 진단 마커로의 유용성

Jab1이 자궁내막증 진단에 유용한 마커라는 점을 보여주기 위하여, 기존에 바이오 마커로 활용되고 있는 자궁내막증 진단 바이오마커인 CD10과의 발현 정도를 비교하여 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다.

	자궁내막증(Endometriosis)		비자궁내막증(Non-endometriosis)
	n	%	n	%
Jab1(+), n=18	13	72.22	5	27.78
CD10 (+), n=17	13	76.47	4	23.53

상기 도 4를 참조하면, Jab1 발현은 CD10(양성예측도[positive predictive value]: CD10 = 76.4% vs. Jab l = 72.2%)의 유사한 정도로 자궁내막증의 발병을 예측 또는 진단할 수 있는 것으로 확인되었다.

자궁내막증이 의심되는 경우 그 진단은 수술검사 등으로 이루어질 수 있으나, 그 양성예측도(positive predictive value)는 45% 정도로 낮은 편이다. 이에, 자궁내막증의 진단적 민감성을 향상시키기 위하여 CD10에 의한 진단(세표표면 메탈로엔도펩티다아제 CD10, cell-surface metalloendopeptidase CD10)이 부가적인 진단 방법으로 사용되고 있다. 그러나, CD10은 이소성 기질 세포의 인식 증가를 이용해 자궁내막증 진단시 민감성을 향상시키는 방법으로 진단의 보조적인 수단으로 적용되나, CD10가 이소성 자궁내막 기질뿐만 아니라 정상 자궁내막 기질, 자궁내막 기질 신생물, 그리고 자궁선근종에서도 발현되기 때문에 확실한 진단의 방법으로 유용하지 못한 경우가 있으며, 진단방법으로 한계가 있었다.

위에서 확인한 바와 같이, Jab l의 발현은 자궁내막증 발명의 예측 및 진단의 바이오마커로서 활용도가 있으며, CD10과 유사하게 또는 CD10과 함께 자궁내막증의 진단 또는 예측 수단으로 활용할 수 있다.

이상에서 본 발명의 바람직한 실시예에 대하여 상세하게 설명하였지만 본 발명의 권리범위는 이에 한정되는 것은 아니고 다음의 청구범위에서 정의하고 있는 본 발명의 기본 개념을 이용한 당업자의 여러 변형 및 개량 형태 또한 본 발명의 권리범위에 속하는 것이다.

<110> Soonchunhyang University Industry Academy Cooperation Foundation <120> COMPOSITION FOR DIAGNOSING ENDOMETRIOSIS AND DIAGNOSTIC KIT FOR ENDOMETRIOSIS CONTAINING THE SAME <130> 1 <160> 2 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 333 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Ala Ala Ser Gly Ser Gly Met Ala Gln Lys Thr Trp Glu Leu Ala 1 5 10 15 Asn Asn Met Gln Glu Ala Gln Ser Ile Asp Glu Ile Tyr Lys Tyr Asp 20 25 30 Lys Lys Gln Gln Gln Glu Ile Leu Ala Ala Lys Pro Trp Thr Lys Asp 35 40 45 His His Tyr Phe Lys Tyr Cys Lys Ile Ser Ala Leu Ala Leu Leu Lys 50 55 60 Met Val Met His Ala Arg Ser Gly Gly Asn Leu Glu Val Met Gly Leu 65 70 75 80 Met Leu Gly Lys Val Asp Gly Glu Thr Met Ile Ile Met Asp Ser Phe 85 90 95 Ala Leu Pro Val Glu Gly Thr Glu Thr Arg Val Asn Ala Gln Ala Ala 100 105 110 Ala Tyr Glu Tyr Met Ala Ala Tyr Ile Glu Asn Ala Lys Gln Val Gly 115 120 125 His Leu Glu Asn Ala Ile Gly Trp Tyr His Ser His Pro Gly Tyr Gly 130 135 140 Cys Trp Leu Ser Gly Ile Asp Val Ser Thr Gln Met Leu Asn Gln Gln 145 150 155 160 Phe Gln Glu Pro Phe Val Ala Val Val Ile Asp Pro Thr Arg Thr Ile 165 170 175 Ser Ala Gly Lys Val Asn Leu Gly Ala Phe Arg Thr Tyr Pro Lys Gly 180 185 190 Tyr Lys Pro Pro Asp Glu Gly Pro Ser Glu Tyr Gln Thr Ile Pro Leu 195 200 205 Asn Lys Ile Glu Asp Phe Gly Val His Cys Lys Gln Tyr Tyr Ala Leu 210 215 220 Glu Val Ser Tyr Phe Lys Ser Ser Leu Asp Arg Lys Leu Leu Glu Leu 225 230 235 240 Leu Trp Asn Lys Tyr Trp Val Asn Thr Leu Ser Ser Ser Ser Leu Leu 245 250 255 Thr Asn Ala Asp Tyr Thr Thr Gly Gln Val Phe Asp Leu Ser Glu Lys 260 265 270 Leu Glu Gln Ser Glu Ala Gln Leu Gly Arg Gly Ser Phe Met Leu Gly 275 280 285 Leu Glu Thr His Asp Arg Lys Ser Glu Asp Lys Leu Ala Lys Ala Thr 290 295 300 Arg Asp Ser Cys Lys Thr Thr Ile Glu Ala Ile His Gly Leu Met Ser 305 310 315 320 Gln Val Ile Lys Asp Lys Leu Phe Asn Gln Ile Asn Ile 325 330 <210> 2 <211> 465 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Lys Glu Pro Asp Ala Ile Lys Leu Phe Val Gly Gln Ile Pro Arg 1 5 10 15 His Leu Glu Glu Lys Asp Leu Lys Pro Ile Phe Glu Gln Phe Gly Arg 20 25 30 Ile Phe Glu Leu Thr Val Ile Lys Asp Lys Tyr Thr Gly Leu His Lys 35 40 45 Gly Cys Ala Phe Leu Thr Tyr Cys Ala Arg Asp Ser Ala Leu Lys Ala 50 55 60 Gln Ser Ala Leu His Glu Gln Lys Thr Leu Pro Gly Met Asn Arg Pro 65 70 75 80 Ile Gln Val Lys Pro Ala Asp Ser Glu Ser Arg Gly Glu Asp Arg Lys 85 90 95 Leu Phe Val Gly Met Leu Gly Lys Gln Gln Thr Asp Glu Asp Val Arg 100 105 110 Lys Met Phe Glu Pro Phe Gly Thr Ile Asp Glu Cys Thr Val Leu Arg 115 120 125 Gly Pro Asp Gly Thr Ser Lys Gly Cys Ala Phe Val Lys Phe Gln Thr 130 135 140 His Ala Glu Ala Gln Ala Ala Ile Asn Thr Leu His Ser Ser Arg Thr 145 150 155 160 Leu Pro Gly Ala Ser Ser Ser Leu Val Val Lys Phe Ala Asp Thr Glu 165 170 175 Lys Glu Arg Gly Leu Arg Arg Met Gln Gln Val Ala Thr Gln Leu Gly 180 185 190 Met Phe Ser Pro Ile Ala Leu Gln Phe Gly Ala Tyr Ser Ala Tyr Thr 195 200 205 Gln Ala Leu Met Gln Gln Gln Ala Ala Leu Val Ala Ala His Ser Ala 210 215 220 Tyr Leu Ser Pro Met Ala Thr Met Ala Ala Val Gln Met Gln His Met 225 230 235 240 Ala Ala Ile Asn Ala Asn Gly Leu Ile Ala Thr Pro Ile Thr Pro Ser 245 250 255 Ser Gly Thr Ser Thr Pro Pro Ala Ile Ala Ala Thr Pro Val Ser Ala 260 265 270 Ile Pro Ala Ala Leu Gly Val Asn Gly Tyr Ser Pro Val Pro Thr Gln 275 280 285 Pro Thr Gly Gln Pro Ala Pro Asp Ala Leu Tyr Pro Asn Gly Val His 290 295 300 Pro Tyr Pro Ala Gln Ser Pro Ala Ala Pro Val Asp Pro Leu Gln Gln 305 310 315 320 Ala Tyr Ala Gly Met Gln His Tyr Thr Ala Ala Tyr Pro Ala Ala Tyr 325 330 335 Ser Leu Val Ala Pro Ala Phe Pro Gln Pro Pro Ala Leu Val Ala Gln 340 345 350 Gln Pro Pro Pro Pro Pro Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln 355 360 365 Gln Gln Gln Gln Gln Arg Glu Gly Pro Asp Gly Cys Asn Ile Phe Ile 370 375 380 Tyr His Leu Pro Gln Glu Phe Thr Asp Ser Glu Ile Leu Gln Met Phe 385 390 395 400 Val Pro Phe Gly His Val Ile Ser Ala Lys Val Phe Val Asp Arg Ala 405 410 415 Thr Asn Gln Ser Lys Cys Phe Gly Phe Val Ser Phe Asp Asn Pro Ala 420 425 430 Ser Ala Gln Ala Ala Ile Gln Ala Met Asn Gly Phe Gln Ile Gly Met 435 440 445 Lys Arg Leu Lys Val Gln Leu Lys Arg Pro Lys Asp Ala Asn Arg Pro 450 455 460 Tyr 465

Claims

서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어지는 Jab1(Jun activation domain binding protein 1) 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는, 자궁내막증 진단용 조성물.
삭제
제1항에 있어서,
상기 자궁내막증 진단용 조성물은, 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어지는 CD10 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 더 포함하는 것인, 자궁내막증 진단용 조성물.
제1항의 조성물을 포함하는, 자궁내막증의 진단용 키트.
제4항에 있어서,
상기 자궁내막증의 진단용 키트는 면역분석(immunoassay)키트인 것을 포함하는, 자궁내막증의 진단용 키트.
Jab1(Jun activation domain binding protein 1) 단백질을 암호화하는 유전자가 도입된 세포를 포함하는 스크리닝용 세포를 배양하는 제1단계; 상기 Jab1 단백질의 발현을 억제하는 물질을 세포에 처리하여 처리군을 제조하는 제2단계; 그리고 상기 제2단계의 처리군과 대조군에서 상기 Jab1 단백질의 발현 수준을 비교하여, 상기 대조군에 비해 처리군에서 상기 Jab1의 발현이 감소하면, 상기 Jab1 단백질의 발현을 억제하는 물질을 자궁내막증 치료제 후보물질로 판단하는 제3단계;를 포함하여 자궁내막증 치료제를 스크리닝하는, 자궁내막증 치료제의 스크리닝 방법.