KR20170068169A - 자궁샘근증 진단용 마커 조성물 및 이를 포함하는 진단키트 - Google Patents

자궁샘근증 진단용 마커 조성물 및 이를 포함하는 진단키트 Download PDF

Info

Publication number
KR20170068169A
KR20170068169A KR1020150175061A KR20150175061A KR20170068169A KR 20170068169 A KR20170068169 A KR 20170068169A KR 1020150175061 A KR1020150175061 A KR 1020150175061A KR 20150175061 A KR20150175061 A KR 20150175061A KR 20170068169 A KR20170068169 A KR 20170068169A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
ezrin
uterine
protein
expression
present
Prior art date
Application number
KR1020150175061A
Other languages
English (en)
Inventor
김태희
황선용
이해혁
김준모
이아름
황지영
Original Assignee
순천향대학교 산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 순천향대학교 산학협력단 filed Critical 순천향대학교 산학협력단
Priority to KR1020150175061A priority Critical patent/KR20170068169A/ko
Publication of KR20170068169A publication Critical patent/KR20170068169A/ko

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
    • G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
    • G01N2333/4701—Details
    • G01N2333/4734—Villin
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/36—Gynecology or obstetrics
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/50—Determining the risk of developing a disease

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

본 발명은 자궁샘근증 진단용 마커 조성물에 대한 것으로, 에즈린(EZRIN), 인산화된 에즈린(phospho-EZRIN) 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 단백질을 검출하는 제제를 포함하여 자궁샘근증의 발생을 예측 또는 진단을 위한 정보를 제공하는 마커 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 자궁근종과 자궁샘근종의 구별 진단에 특히 유용하다.

Description

자궁샘근증 진단용 마커 조성물 및 이를 포함하는 진단키트{MARKER COMPOSITION FOR DIAGNOSISING ADENOMYOSIS AND DIAGNOSISING KIT CONTAINING OF THE SAME}
본 발명은 자궁샘근증 진단용 마커 조성물 및 이를 포함하는 진단키트에 대한 것이다.
자궁근종(Myoma of Uterus)은 자궁을 대부분 이루고 있는 평활근에 생기는 양성종양이며 자궁근종이 전혀 없는 여성은 오히려 드물다고 할 정도로 매우 흔한 질환이다. 자궁근종은 부인과영역에서 매우 흔한 질환으로서 증상이 없는 경우도 많이 있으며 그 발생 크기와 위치에 따라서 불임, 질 출혈, 월경과다, 복부 종괴, 골반통, 유산 및 조기 진통, 빈뇨, 절박뇨 등 다양한 임상 증상을 동반할 수 있다. 자궁근종은 30~40세에 자주 발병하고(35세 이상의 여성의 40~50%) 종양이 지속되면 폐경기 이후에도 발견된다.
자궁근종은 그 위치에 따라 점막하 근종(5%), 장막하 근종(15%), 근층내 근종(80%)으로 나눌 수 있다. 점막하 근종은 자궁내막 하층에 발생하는 것으로 작은 크기로도 출혈의 원인이 되기 쉽고 육종 변성의 위험이 크며 감염, 화농, 괴사되기 쉽다. 근층내 근종은 자궁근층 내 깊숙이 위치하는 것으로 자궁의 크기 자체가 커짐으로써 자궁내막의 면적이 증가하고 따라서 월경량을 증가시키게 된다. 자각증상은 없는 것이 특징이다. 장막하 근종은 자궁을 덮고 있는 복막 바로 아래서 발생하며 자각증상이 없기도 하지만 꼬이는 경우 통증을 유발하기도 한다.
자궁근종의 원인은 명확히 아직 밝혀진 것은 없으나, 여러 연구에서 자궁의 평활근을 이루는 세포 중 하나가 비정상적으로 증식해 하나의 자궁근종을 이루는 것으로 보고되고 있다. 또한, 근종의 성장이 난소의 기능이 왕성할 때 잘 자라고 초경 이전이나 폐경기 이후 발생이 드물거나 근종의 크기가 감소하는 점을 미루어 호르몬인 에스트로젠에 의존하는 것으로 생각되고 있다. 이와 함께 자궁근종을 가지고 있는 가족 구성원이 있는 경우 자궁근종의 발생 위험도가 경도로 증가하는 것으로 알려졌다.
자궁근종이 임상적으로 매우 중요함에도 불구하고 그 동안 호르몬, 유전, 성장 인자 등에 대한 연구가 많이 이루어졌으나 아직도 그 정확한 발병 기전은 알려져 있지 않다.
자궁선근증(Adenomyosis, 자궁샘근증)은 자궁내막의 샘과 간질조직이 자궁의 근층 내로 침윤하는 질환으로 자궁내막증과 연계선상에 있는 것으로 간주되는 질환이며, 자궁근층 내에 자궁내막선과 간질이 함께 존재하여 자궁근의 과대비후가 동반되는 질환이다. 발생빈도는 보고자에 따라 5.7-69.6%로 다양하며, 이는 자궁적출술시 조직검사에서 최종 진단이 되므로 보고의 차이가 있는 것으로 생각된다. 불임, 월경량의 증가와 골반통을 유발하기도 한다.
자궁선근종이 단독으로 존재하는 경우는 드물며, 약 80%에서 자궁근종, 자궁내막증식증, 자궁내막증, 자궁내막암 등과 동반될 수 있다. 자궁선근증의 진단은 초음파상의 영상과 임상적 증상으로 추정할 수는 있으나, 확진은 조직학적 소견에 의하며 가장 많이 동반되는 질환은 자궁근종으로 증상이 유사하여 수술 전 감별 진단이 어려운 실정이다. 자궁근종과 마찬가지로 아직도 그 정확한 발병 기전에 대해서는 알려져 있지 않다.
국내특허출원 제10-2001-0029625호, 2001년04월06일 공개
Kong et al. BMC Cancer 2013, 13:520, High expression of ezrin predicts poor prognosis in uterine cervical cancer
본 발명의 목적은 자궁샘근증 진단용 마커 조성물 및 이를 포함하는 진단키트, 이를 이용한 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법, 그리고 자궁샘근증 예방 또는 치료 활성 물질의 스크리닝 방법에 대한 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 일 실시예에 따른 자궁샘근증 진단용 마커 조성물은 에즈린(EZRIN), 인산화된 에즈린(phospho-EZRIN) 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 단백질을 검출하는 제제를 포함하여 자궁샘근증의 발생을 예측 또는 진단하기 위한 정보를 제공한다.
상기 단백질을 검출하는 제제는, 생물학적 시료의 에즈린 단백질 발현 증가를 검출하는 것일 수 있다.
상기 마커 조성물을 적용하는 생물학적 시료는 자궁조직일 수 있고, 구체적으로 자궁근층조직, 또는 자궁샘조직을 포함하는 조직일 수 있다.
본 발명의 다른 일 실시예에 따른 자궁샘근증 진단용 키트는 위에서 설명한 자궁샘근증 진단용 마커 조성물을 포함한다.
본 발명의 또 다른 일 실시예에 따른 자궁샘근증 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법은 위에서 설명한 자궁샘근증 진단용 키트를 이용하여 생물학적 시료로부터 에즈린(EZRIN)의 발현 정도, 또는 에즈린과 인산화된 에즈린(phospho-EZRIN)의 발현 정도를 확인하여 자궁샘근증 진단을 위한 정보를 제공할 수 있다.
상기 자궁샘근증 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법은 자궁근종과 자궁샘근증의 구별 진단에 필요한 정보를 제공하는 것일 수 있다.
본 발명의 또 다른 일 실시예에 따른 자궁샘근종 예방 또는 치료용 활성 물질을 스크리닝하는 방법은 에즈린(EZRIN), 인산화된 에즈린(phospho-EZRIN) 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 단백질을 과발현하는 스크리닝용 세포에서 상기 단백질의 과발현을 억제하는지 여부를 확인하는 과정으로 포함한다.
상기 스크리닝용 세포는 자궁 세포 유래 세포 또는 세포주일 수 있다.
상기 스크리닝용 세포는 자궁 세포 유래 자궁샘근증 세포주일 수 있다.
상기 스크리닝 방법은 자궁근종과 구별하여 자궁샘근증에 활성을 가지는 물질인지 여부를 확인할 수 있다.
이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.
본 발명에서 용어, ‘진단’은 병리 상태의 존재 또는 특징을 확인하는 것을 의미한다. 본 발명의 목적상, 진단은 자궁샘근증 발병 여부를 확인하는 것이다.
본 발명에서 용어, "진단용 (바이오)마커, 진단하기 위한 (바이오)마커 또는 진단 마커"는 자궁샘근증 조직을 비 자궁샘근증 조직 특히, 자궁근종 조직과 구분하여 진단할 수 있는 물질로, 비 자궁샘근증을 가진 조직에 비하여 자궁샘근증 조직에서 증가양상을 보이는 폴리펩타이드 또는 핵산(예: mRNA 등), 지질, 당지질, 당단백질, 당(단당류, 이당류, 올리고당류 등) 등과 같은 유기 생체 분자 등의 수준을 정상 세포와 구분할 수 있거나 그 수준을 측정할 수 있는 제제를 포함한다.
본 발명에서 용어 ‘생물학적 시료’는 자궁샘근증 발병에 의해 자궁샘근증의 유전자 또는 단백질 발현 수준에 차이가 나타나는 조직, 세포, 타액, 생리혈와 같은 시료 등을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 발명자들은, ERM(ezrin, radixin, moesin) family의 구성원으로 원형질막(plasma membrane)과 세포골격(cytoskeleton)의 연결 기능을 하며, 세포의 이동성, 부착, 생존 및 세포사멸과 밀접한 관련이 있는 단백질인 에즈린(EZRIN)과 이의 활성화 상태인 인산화된 에즈린(phospho-EZRIN, p-EZRIN)이 자궁샘근증 조직에서 과발현되고, 임상학적으로 그 구별이 쉽지 않은 자궁근종 조직과 비교하여도 유의미하게 발현 정도에 차이가 있다는 점을 확인하고, 이를 자궁샘근증 발병의 정확한 예측과 진단을 위한 정보로 활용할 수 있다는 점을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 일 실시예에 따른 자궁샘근증 진단용 마커 조성물은 에즈린(EZRIN), 인산화된 에즈린(phospho-EZRIN) 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 단백질을 검출하는 제제를 포함하여 자궁샘근증의 발생을 예측 또는 진단한다.
상기 단백질을 검출하는 제제는, 생물학적 시료 중의 상기 단백질의 양을 확인하는 방법 중 하나로, 바람직하게 상기 단백질에 대하여 특이적으로 결합하는 항체를 포함하여 상기 단백질의 발현양을 확인할 수 있다. 즉, 상기 단백질을 검출하는 제제는, 예를 들어 에즈린(EZRIN), 인산화된 에즈린(phospho-EZRIN), 또는 이들 모두와 특이적으로 결합하는 항체일 수 있다.
상기 항체란, 항원성 부위에 대해서 지시되는 특이적인 단백질 분자를 의미하고, 본 발명의 목적상, 항체는 마커 단백질에 대해 특이적으로 결합하는 항체를 의미하며, 다클론 항체, 단클론 항체 및 재조합 항체를 모두 포함한다. 상기한 바와 같이 에즈린(EZRIN)과 인산화된 에즈린(phospho-EZRIN) 단백질 자체와 이의 자궁샘근증에서 발현에 대해 규명되었으므로, 이를 이용하여 항체를 생성하는 것은 당업계에 널리 공지된 기술을 이용하여 용이하게 제조할 수 있다. 다클론 항체는 상기한 단백질 항원을 동물에 주사하고 동물로부터 채혈하여 항체를 포함하는 혈청을 수득하는 당업계에 널리 공지된 방법에 의해 생산할 수 있다. 이러한 다클론 항체는 염소, 토끼, 양, 원숭이, 말, 돼지, 소 개 등의 임의의 동물 종 숙주로부터 제조 가능하다.
상기 단백질을 검출하는 제제는, 자궁 조직에 포함된 에즈린 단백질, 인산화된 에즈린(phospho-EZRIN) 단백질, 또는 이들 모두를 검출하는 제제일 수 있다.
상기 단백질을 검출하기 위한 분석 방법으로는 웨스턴 블랏, 엘라이자(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA), 방사선면역분석(RIA: Radioimmunoassay), 방사 면역 확산법(radioimmunodiffusion), 오우크테로니(Ouchterlony) 면역확산법, 로케트(rocket) 면역전기영동, 조직면역 염색, 면역분석(Immunoassay), 면역화학염색분석(Immunohistochemistry Assay), 면역침전 분석법(Immunoprecipitation Assay), 보체고정 분석법(Complement Fixation Assay), 유세포분석(Fluorescence Activated Cell Sorter, FACS), 단백질칩(protein chip) 등이 있으나 이로 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에 따른 자궁샘근증 진단용 마커 조성물은 에즈린(EZRIN), 인산화된 에즈린(phospho-EZRIN) 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 단백을 발현하는 핵산을 검출하는 제제를 포함하여 자궁샘근증의 발생을 예측 또는 진단할 수 있다.
상기 핵산을 검출하는 제제는 에즈린의 과발현 또는 활성화된 에즈린의 과발현에 관여하는 DNA 또는 mRNA를 정량적으로 검출할 수 있는 제제일 수 있고, 예를 들어 mRNA에 대한 프라이머 또는 프로브를 이용하여 측정할 수 있다. 이를 위한 분석방법으로는 역전사 중합효소반응(RT-PCR), 경쟁적 역전사 중합효소반응(Competitive RT-PCR), 실시간 역전사 중합효소반응(Realtime RT-PCR), RNase 보호 분석법(RPA; RNase protection assay), 노던 블랏팅(Northern blotting) 및 DNA 칩으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 이용한 방식이 사용될 수 있다.
좋게는 상기 단백질을 검출하는 제제는, 생물학적 시료의 에즈린 단백질 발현 증가를 검출하는 것이 적용될 수 있고, 상기 생물학적 시료는 자궁샘근증이 발생이 예상되거나 의심되는 자궁조직을 포함하는 검체일 수 있다.
예를 들어, 상기 마커조성물을 활용하여 자궁샘근증 조직의 Gland 부분의 에즈린 발현이 증가되고 Stroma 부위의 발현이 감소한다는 점을 자궁샘근증 진단을 위한 자료로 활용할 수 있다.
본 발명의 다른 일 실시예에 따른 키트는, 위에서 설명한 자궁샘근증 진단용 마커 조성물을 포함하여 자궁샘근증이 발생이 예상되거나 의심되는 자궁조직을 포함하는 검체로부터 생물학적 시료로부터 에즈린(EZRIN)의 발현 정도, 또는 에즈린과 인산화된 에즈린(phospho-EZRIN)의 발현 정도를 확인하여 자궁샘근증 진단을 위한 정보를 제공를 제공할 수 있고, 특히 자궁근종과 구별 진단을 위한 정보를 제공에 효과적이다.
상기 키트는 면역분석키트(Immunoassay)일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 또 다른 일 실시예에 따른 자궁샘근종 예방 또는 치료용 활성 물질을 스크리닝하는 방법은 에즈린(EZRIN), 인산화된 에즈린(phospho-EZRIN) 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 단백질을 과발현하는 스크리닝용 세포에서 상기 단백질의 과발현을 억제하는지 여부를 확인하는 과정으로 포함한다.
구체적으로, 상기 스크리닝하는 방법은, 에즈린(EZRIN), 인산화된 에즈린(phospho-EZRIN) 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 단백질을 과발현하는 스크리닝용 세포 또는 상기 단백질을 과발현하는 유전자를 준비하는 제1단계; 에즈린(EZRIN), 인산화된 에즈린(phospho-EZRIN) 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 단백질의 과발현을 억제하는 물질로 상기 스크리닝용 세포 또는 상기 유전자를 처리하여 처리군을 제조하는 제2단계; 그리고 상기 처리군의 상기 단백질 발현 정도를 상기 제2단계의 처리를 하지 않은 미처리 대조군을 포함하는 세포 또는 유전자에 의한 상기 단백질 발현 정도와 비교하는 제3단계;를 포함하여 자궁샘근종 예방 또는 치료용 활성 물질을 탐색할 수 있다.
이때 스크리닝용 세포는 상기 에라진 단백질의 발현을 암호화하는 유전자가 도입된 자궁세포가 적용될 수 있으며, 구체적으로 자궁근세포, 자궁샘세포 등이 적용될 수 있다.
본 발명의 자궁샘근증 진단용 마커 조성물 및 이를 포함하는 진단키트는, 서로 그 증상이 유사하여 수술 전 감별 진단이 어려운 자궁근종과 자궁샘근증을 정확하고 신속하게 구별할 수 있는 정보를 제공하는 진단용 마커 조성물을 제공할 수 있다. 또한, 자궁근종과 구별되어 자궁샘근증의 특징적으로 과발현하는 단백질인 에즈린 발현을 확인하여 이의 과발현을 억제하여 자궁샘근증의 예방 또는 치료 활성을 갖는 물질을 스크리닝하는 방법을 제공할 수 있다.
도 1은 본 발명의 실시예 1에서 면역 조직 화학분석을 통한, 자궁샘근증 조직의 Ezrin발현을 보여주는 결과(x 200)이다.
도 2는 본 발명의 실시예 1에서 면역 조직 화학분석을 통한, 자궁샘근증 조직의 Ezrin 발현을 보여주는 결과(x 400)이다.
도 3은 본 발명의 실시예 1에서 면역 조직 화학분석을 통한, 자궁근종 조직의 Ezrin발현을 보여주는 결과(x 200)이다.
도 4는 본 발명의 실시예 1에서 면역 조직 화학분석을 통한, 자궁근종 조직의 Ezrin발현을 보여주는 결과(x 400)이다.
도 5는 본 발명의 실시예 1에서 면역 조직 화학분석을 통한, 자궁샘근증 조직의 p-Ezrin발현을 보여주는 결과(x 200)이다.
도 6은 본 발명의 실시예 1에서 면역 조직 화학분석을 통한, 자궁샘근증 조직의 p-Ezrin발현을 보여주는 결과(x 400)이다.
도 7은 본 발명의 실시예 1에서 면역 조직 화학분석을 통한, 자궁근종 조직의 p-Ezrin발현을 보여주는 결과(x 200)이다.
도 8은 본 발명의 실시예 1에서 면역 조직 화학분석을 통한, 자궁근종 조직의 p-Ezrin발현을 보여주는 결과(x 400)이다.
도 9는 본 발명의 실시예 2에서, 면역조직 화학분석을 통한 자궁샘근증 조직 과 자궁근종 조직의 Ezrin의 발현차이를 H-SCORE로 보여주는 결과(*P<0.05)이다.
이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다.
<실험방법 및 샘플의 임상학적 특징>
자궁샘근종 조직(n=14)과 자궁근종 조직(n=14)을 이용하여 Ezrin과 p-Ezrin의 발현 정도 면역조직화학 분석을 통해 관찰하였다.
샘플들은 국내 3차 대학 병원에서 자궁적출술을 받은 환자의 샘플들을 이용하였고, 모든 샘플에 대한 분석은 IRB의 승인과 모든 환자로부터 처치 전 고지에 입각한 동의를 받고 수행되었다. 각 환자들의 정보, 나이, 몸무게, 신장, 다른 질병, 그리고 약물 투여여부와 같은 배경에 대한 정보들은 전자적 의학 기록으로 수집되었다. 채취된 조직은 채취 즉시 실험실로 보내져 분석이 이루어졌다. 또한, 조직 샘플 제공자들의 임상적인 특징을 하기 표 1에 정리하였다.
Variable 자궁샘근종
(Adenomyosis)		 자궁근종
(Myosis)		 Total Comparison
　샘플수 (N=14) (N=14) (N=28) (p-value)
Demographic factor 　 　 　 　
연령 (year) 44.5
(42.25-47.5)		 44
(42.5-45.75)		 44
(42-46.25)		 0.819
키 (cm) 159.1
(155.4-161.7)		 157.2
(153.5-159.7)		 158
(155.3-160.7)		 0.344
체중 (kg) 57.65
(52.52-61.6)		 60.5
(55.5-75)		 58.7
(54.1-66.75)		 0.472
체질량지수 (BMI, kg/㎡) 22.34
(21.24-25.88)		 25.88
(21.53-30.88)		 23.46
(21.16-27.03)		 0.393
Data was presented as median (Interquartile range, IQR).
P-values were computed by Mann-Whitney U test.
실시예 1: 면역조직화학염색( Immunohistochemistry ) 분석
자궁 선근증 조직과 자궁근종 조직 각각에서 인산화되거나 인산화되지 않은 에즈린(EZRIN)에 대한 발현의 차이를 나타내기 위하여 면역세포화학분석법으로 확인하고 그 발현 위치도 확인하고자 하였다.
EXPOSE Mouse & Rabbit Specific HRP/DAB Detection IHC 키트(ab80436, Abcam Inc., Cambridge, MA, USA)를 이용하여 Ezrin과 pEzrin의 면역염색을 수행하였다. 사용된 1차 항체는 마우스 Ezrin 단일클론 항체(1:100 희석), 래빗 P Ezrin 다클론 항체를 적용하였다.
자궁샘근증 조직에 Ezrin발현을 확인한 결과를 도 1(x200)과 도 2(x400)에 나타내었고, 자궁근종 조직에서 Ezrin발현을 확인한 결과를 도 3(x200)과 도 4(x400)에 나타내었다.
상기 도 1 내지 4를 참조하면, 자궁샘근증에서의 Ezrin이 분비샘(gland) 부분에서의 강한 발현이 나타난다는 점을 확인하였다. 반면에, 자궁근종 조직의 경우에는 전차적으로 Ezrin발현이 약하게 나타나는 것을 확인할 수 있었다.
자궁샘근증 조직에 p-Ezrin발현을 확인한 결과를 도 5(x200)와 도 6(x400)에 나타내었고, 자궁근종 조직에서 p-Ezrin발현을 확인한 결과를 도 7(x200)과 도 8(x400)에 나타내었다.
상기 도 5 내지 8을 참조하면, 자궁샘근증에서의 p-Ezrin이 분비샘(gland)의 끝부분인 atypical surface쪽에서의 강하게 발현한다는 점을 확인하였다. 자궁근종에서의 p-Ezrin발현은 gland 부분으로 약한 발현을 나타낸다는 점을 확인하였다.
실시예 2. 면역조직화학 분석 결과의 면역반응의 점수화
면역반응성의 반정량적 분석을 위해, 실시예 1의 결과를 활용하여, 자궁 선근증 과 자궁 근종에서의 Ezrin발현 정도의 H-score를 계산하였다.
음성 대조군은 1차 항체 배양을 생략한 후에 염색해 사용하였고, 전체 면적에서 발현한 부위를 나누어서 전체면적에서 발현부위를 계산하여 0-100의 가능한 범위로 H-점수가 연속적으로 생성되었다. 이들 점수는 관찰자에 의하여 독립적으로 얻어졌다. 또한, 염색된 조직 샘플들을 각각의 경우에 무작위로 선택된 장에서 계수하였고, 대조군과 비교해 점수화한 수치를 나타내었다.
점수화는 5회의 독립적 측정에 의한 결과를 평균± 표준편차로 나타내었다. P <0.05에서 유의한 차이를 나타내는 것으로 평가했으며, 그 결과를 9에 나타내었다.
도 9를 참조하면, 자궁샘근증과 Ezrin의 발현 정도는 자궁근종의 조직에서의 경우와 비교하여 월등하게 높은 것으로 확인되었고, 이는 자궁조직을 이용한 자궁샘근증과 자궁근종의 구별진단을 위한 정보 제공에 유용한 자료로 활용될 수 있을 것이다.
이상에서 본 발명의 바람직한 실시예에 대하여 상세하게 설명하였지만 본 발명의 권리범위는 이에 한정되는 것은 아니고 다음의 청구범위에서 정의하고 있는 본 발명의 기본 개념을 이용한 당업자의 여러 변형 및 개량 형태 또한 본 발명의 권리범위에 속하는 것이다.
* 위의 실험은 한국 팜비오- pharmbio Korea Co. Ltd. 의 부분 지원을 받아 진행되었습니다.

Claims (4)

  1. 에즈린(EZRIN), 인산화된 에즈린(phospho-EZRIN) 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 단백질을 검출하는 제제를 포함하여 자궁샘근증의 발생을 예측 또는 진단하는, 자궁샘근증 진단용 마커 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 단백질을 검출하는 제제는, 생물학적 시료의 에즈린 단백질 발현 증가를 검출하는 것인, 자궁샘근증 진단용 마커 조성물.
  3. 제1항에 따른 바이오 마커 조성물을 포함하는 자궁샘근증 진단용 키트를 이용하여, 자궁샘근증 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법.
  4. 에즈린(EZRIN), 인산화된 에즈린(phospho-EZRIN) 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 단백질을 과발현하는 스크리닝용 자궁세포에서 상기 단백질의 과발현을 억제하는지 여부를 확인하는 과정으로 포함하여, 자궁샘근종 예방 또는 치료용 활성 물질을 스크리닝하는 방법.
KR1020150175061A 2015-12-09 2015-12-09 자궁샘근증 진단용 마커 조성물 및 이를 포함하는 진단키트 KR20170068169A (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020150175061A KR20170068169A (ko) 2015-12-09 2015-12-09 자궁샘근증 진단용 마커 조성물 및 이를 포함하는 진단키트

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020150175061A KR20170068169A (ko) 2015-12-09 2015-12-09 자궁샘근증 진단용 마커 조성물 및 이를 포함하는 진단키트

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20170068169A true KR20170068169A (ko) 2017-06-19

Family

ID=59279058

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020150175061A KR20170068169A (ko) 2015-12-09 2015-12-09 자궁샘근증 진단용 마커 조성물 및 이를 포함하는 진단키트

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR20170068169A (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20190013306A (ko) * 2017-08-01 2019-02-11 순천향대학교 산학협력단 자궁경부무력증 진단용 마커 및 이의 용도

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20190013306A (ko) * 2017-08-01 2019-02-11 순천향대학교 산학협력단 자궁경부무력증 진단용 마커 및 이의 용도

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5656406B2 (ja) 治療効力を予測するためのマーカーとしての活性化ｈｅｒ３
CN107003318B (zh) 用于黑素瘤疾病进展的生物标记
Florio et al. Plasma urocortin levels in the diagnosis of ovarian endometriosis
AU2016270686A1 (en) Quantifying Her2 protein for optimal cancer therapy
US20230258641A1 (en) Methods and compositions for sirt1 expression as a marker for endometriosis and subfertility
US20150147326A1 (en) Protein biomarker and uses thereof
KR101873486B1 (ko) 자궁근종 진단용 마커 조성물
KR20170068169A (ko) 자궁샘근증 진단용 마커 조성물 및 이를 포함하는 진단키트
KR101687775B1 (ko) 자궁내막증 진단용 조성물 및 이를 포함하는 진단키트
Bogusiewicz et al. Lack of correlation between leptin receptor expression and PI3-K/Akt signaling pathway proteins immunostaining in endometrioid-type endometrial carcinomas
KR101978401B1 (ko) 자궁경부무력증 진단용 마커 및 이의 용도
US11474105B2 (en) Methods and compositions for SIRT1 expression as a marker for endometriosis and subfertility
KR101754478B1 (ko) 위축성 질염 진단용 바이오 마커 조성물 및 이를 포함하는 진단키트
JP2019158613A (ja) ｌａｅｖｅｒｉｎを用いたＰＳＴＴ（胎盤部トロホブラスト腫瘍）の検出
WO2019077080A1 (en) ASSESSING THE RISK OF METASTATIC RECHUTE IN PATIENTS WITH BREAST CANCER
US20210003574A1 (en) Wbp2 as a co-prognostic factor with her2 for stratification of patients for treatment
KR101898907B1 (ko) 자궁샘근증 진단용 마커 조성물 및 이를 포함하는 진단키트
WO2017201748A1 (zh) 一种检测子宫内膜异位症之方法与其应用
TWI638162B (zh) 一種檢測子宮內膜異位症之方法與其應用
TWI582423B (zh) 一種檢測子宮內膜異位症之方法與其應用
US20190352415A1 (en) Use of the cd71 receptor in the prognosis and treatment of endometriosis
Perera Mechanisms of leptin in mammary tumorigenesis
WO2008061370A1 (en) Diagnostic method to detect endometriosis
JP2017201920A (ja) 肺癌治療のための抗癌剤の効果の検査法
KR20170009316A (ko) Nedd4-1 단백질의 발현 수준을 측정하는 물질을 포함하는 자궁경부암 진단용 조성물 및 이를 이용한 자궁경부암 진단을 위한 정보제공방법

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E601 Decision to refuse application