KR101647569B1 - 난소암에 대한 조합 요법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 겜시타빈, 시스플라틴 또는 카르보플라틴, 및 5-[2-tert-부틸-5-(4-플루오로-페닐)-1H-이미다졸-4-일]-3-(2,2-디메틸-프로필)-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일아민의 조합물의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 난소암의 치료를 필요로 하는 포유동물에서 난소암을 치료하는 방법을 제공한다.

Description

난소암에 대한 조합 요법 {COMBINATION THERAPY FOR OVARIAN CANCER}

난소암은 두 번째로 가장 흔한 부인과 암이며, 절대 수 면에서 가장 치명적이다. 치료는 보통 화학요법과 수술, 및 때로는 방사선요법을 포함한다.

불행하게도, 난소암을 위한 치유법은 아직도 여전히 찾아보기 어려워서, 난소암을 치료하는 데에 효과적인 것으로 입증될 수 있는 더 많은 다양한 요법들에 대한 요구가 존재한다.

백금 함유 약물 및 피리미딘 유사체들을 포함하여, 난소암을 포함한 다양한 유형의 암을 치료하는 데에 사용되는 몇 가지 종류의 항암 약물들이 확인되어 있다. 시스플라틴 (시스플라티눔 또는 시스-디암민디클로로플라티눔(II)으로도 알려져 있음)이 백금-함유 항암 약물류의 첫 번째 구성원이며, 거기에는 현재 카르보플라틴도 포함되어 있다. 이러한 백금 복합체들은 생체 내에서 반응하여 DNA에 결합하고 그의 가교를 야기하는데, 그것은 궁극적으로 아폽토시스 (프로그램화된 세포 사멸)를 촉발한다.

겜시타빈 히드로클로라이드 (이하 겜시타빈으로 지칭)는 피리미딘 유사체이다. 그것은 현재 난소암의 치료를 위한 카르보플라틴과의 조합물을 포함하여 다양한 유형의 암을 치료하는 데에 사용되고 있다.

문헌에는 겜시타빈 + 시스플라틴이 재발성 난소암에 걸린 환자에서의 허용성이 크며 활성인 요법인 것으로 보고되어 있지만, 본 발명자들은 이 작용제들이 다양한 암 징후에 대한 가능성 있는 치료제로서 현재 임상 조사를 받고 있는 US 7,582,652호 개시 화합물인 하기 5-[2-tert-부틸-5-(4-플루오로-페닐)-1H-이미다졸-4-일]-3-(2,2-디메틸-프로필)-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일아민과의 조합되어 사용될 경우, 삼중 조합물이 겜시타빈 + 시스플라틴의 조합물에 비해 효능의 향상을 제공한다는 것을 발견하였다:

또한, 카르보플라틴과 겜시타빈의 조합물도 현재 난소암의 치료에 사용되고 있으며, 시스플라틴과 비교할 때 카르보플라틴과의 사이에 난소암의 치료에 있어서 유사한 효능이 관찰된다는 것이 (그러나 카르보플라틴에서 더 적은 독성이 관찰됨) 역시 문헌에 보고되어 있으므로, 본 발명자들은 겜시타빈, 카르보플라틴, 및 5-[2-tert-부틸-5-(4-플루오로-페닐)-1H-이미다졸-4-일]-3-(2,2-디메틸-프로필)-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일아민의 삼중 조합물이 시스플라틴 대신 카르보플라틴을 투여하는 것에 의한 감소된 독성이라는 잠재적인 이익과 함께, 겜시타빈과 카르보플라틴의 조합물에 비해 더욱 효과적일 수 있다는 결론을 내렸다.

본 발명은 겜시타빈, 시스플라틴과 카르보플라틴으로 이루어진 군에서 선택되는 백금 작용제, 및 5-[2-tert-부틸-5-(4-플루오로-페닐)-1H-이미다졸-4-일]-3-(2,2-디메틸-프로필)-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일아민 또는 제약상 허용되는 염의 조합물을 투여하는 것은 포함하는, 포유동물에서 난소암을 치료하는 방법에 관한 것이다. 추가 실시양태에서, 투여는 동일자에 수행된다. 또 다른 추가 실시양태에서, 투여는 21일 치료 주기 동안에 수행된다. 또 다른 추가 실시양태에서, 겜시타빈 및 백금 작용제는 5-[2-tert-부틸-5-(4-플루오로-페닐)-1H-이미다졸-4-일]-3-(2,2-디메틸-프로필)-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일아민 또는 제약상 허용되는 염이 투여되고 2일 후까지 투여되며, 겜시타빈은 다시 7일 후까지 투여된다. 또 다른 추가 실시양태에서, 상기 제약상 허용되는 염은 디메탄술포네이트 염이다.

본 발명은 또한 겜시타빈, 및 시스플라틴과 카르보플라틴으로 이루어진 군에서 선택되는 백금 작용제의 조합물을 투여하는 것을 포함하는, 5-[2-tert-부틸-5-(4-플루오로-페닐)-1H-이미다졸-4-일]-3-(2,2-디메틸-프로필)-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일아민 또는 그의 제약상 허용되는 염을 사용한 공동 요법(concurrent therapy)을 받고 있는 포유동물에서 난소암을 치료하는 방법에 관한 것이다. 추가 실시양태에서, 상기 제약상 허용되는 염은 디메탄술포네이트 염이다.

본 발명은 또한 겜시타빈을 투여하는 것을 포함하는, 5-[2-tert-부틸-5-(4-플루오로-페닐)-1H-이미다졸-4-일]-3-(2,2-디메틸-프로필)-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일아민 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 시스플라틴과 카르보플라틴으로 이루어진 군에서 선택되는 백금 작용제를 사용한 공동 요법을 받고 있는 포유동물에서 난소암을 치료하는 방법에 관한 것이다. 추가 실시양태에서, 상기 제약상 허용되는 염은 디메탄술포네이트 염이다.

본 발명은 또한 시스플라틴과 카르보플라틴으로 이루어진 군에서 선택되는 백금 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 5-[2-tert-부틸-5-(4-플루오로-페닐)-1H-이미다졸-4-일]-3-(2,2-디메틸-프로필)-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일아민 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 겜시타빈을 사용한 공동 요법을 받고 있는 포유동물에서 난소암을 치료하는 방법에 관한 것이다. 추가 실시양태에서, 상기 제약상 허용되는 염은 디메탄술포네이트 염이다.

본 발명은 또한 5-[2-tert-부틸-5-(4-플루오로-페닐)-1H-이미다졸-4-일]-3-(2,2-디메틸-프로필)-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일아민 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 겜시타빈, 및 시스플라틴과 카르보플라틴으로 이루어진 군에서 선택되는 백금 작용제를 사용한 공동 요법을 받고 있는 포유동물에서 난소암을 치료하는 방법에 관한 것이다. 추가 실시양태에서, 상기 제약상 허용되는 염은 디메탄술포네이트 염이다.

본 발명은 또한 난소암의 치료에 있어서 겜시타빈 및 시스플라틴과 카르보플라틴에서 선택되는 백금 작용제와의 조합 요법에 사용하기 위한, 5-[2-tert-부틸-5-(4-플루오로-페닐)-1H-이미다졸-4-일]-3-(2,2-디메틸-프로필)-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일아민 또는 그의 제약상 허용되는 염에 관한 것이다. 추가 실시양태에서, 5-[2-tert-부틸-5-(4-플루오로-페닐)-1H-이미다졸-4-일]-3-(2,2-디메틸-프로필)-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일아민 또는 그의 제약상 허용되는 염의 투여는 겜시타빈 및 백금 작용제의 투여에 선행한다. 또 다른 추가 실시양태에서, 5-[2-tert-부틸-5-(4-플루오로-페닐)-1H-이미다졸-4-일]-3-(2,2-디메틸-프로필)-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일아민 또는 그의 제약상 허용되는 염, 겜시타빈 및 백금 작용제의 투여는 24시간 이내에 수행된다. 또 다른 추가 실시양태에서, 겜시타빈 및 백금 작용제는 5-[2-tert-부틸-5-(4-플루오로-페닐)-1H-이미다졸-4-일]-3-(2,2-디메틸-프로필)-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일아민 또는 그의 제약상 허용되는 염의 투여 후 2일까지 투여되며, 겜시타빈은 다시 7일 후까지 투여된다. 또 다른 추가 실시양태에서, 겜시타빈 및 백금 작용제의 투여가 5-[2-tert-부틸-5-(4-플루오로-페닐)-1H-이미다졸-4-일]-3-(2,2-디메틸-프로필)-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일아민 또는 그의 제약상 허용되는 염의 투여에 선행한다. 또 다른 추가 실시양태에서, 겜시타빈 및 백금 작용제는 동시에 투여된다. 또 다른 추가 실시양태에서, 상기 백금 작용제는 시스플라틴이다. 또 다른 추가 실시양태에서, 상기 백금 작용제는 카르보플라틴이다. 또 다른 추가 실시양태에서, 투여는 21일 치료 주기 동안에 수행된다. 또 다른 추가 실시양태에서, 상기 제약상 허용되는 염은 디메탄술포네이트 염이다.

본 발명은 또한 백금 작용제 및 겜시타빈과의 조합되어 투여될 난소암 치료용 약제의 제조에 있어서 5-[2-tert-부틸-5-(4-플루오로-페닐)-1H-이미다졸-4-일]-3-(2,2-디메틸-프로필)-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일아민 또는 제약상 허용되는 염의 용도에 관한 것이다. 추가 실시양태에서, 5-[2-tert-부틸-5-(4-플루오로-페닐)-1H-이미다졸-4-일]-3-(2,2-디메틸-프로필)-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일아민 또는 제약상 허용되는 염의 투여는 겜시타빈 및 백금 작용제의 투여에 선행한다. 또 다른 추가 실시양태에서, 5-[2-tert-부틸-5-(4-플루오로-페닐)-1H-이미다졸-4-일]-3-(2,2-디메틸-프로필)-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일아민 또는 제약상 허용되는 염, 겜시타빈 및 백금 작용제의 투여는 24시간 이내에 수행된다. 또 다른 추가 실시양태에서, 겜시타빈 및 백금 작용제는 5-[2-tert-부틸-5-(4-플루오로-페닐)-1H-이미다졸-4-일]-3-(2,2-디메틸-프로필)-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일아민 또는 제약상 허용되는 염이 투여되고 2일 후까지 투여되며, 겜시타빈은 다시 7일 후까지 투여된다. 또 다른 추가 실시양태에서, 겜시타빈 및 백금 작용제의 투여가 5-[2-tert-부틸-5-(4-플루오로-페닐)-1H-이미다졸-4-일]-3-(2,2-디메틸-프로필)-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일아민 또는 그의 제약상 허용되는 염의 투여에 선행한다. 또 다른 추가 실시양태에서, 겜시타빈 및 백금 작용제는 동시에 투여된다. 또 다른 추가 실시양태에서, 상기 백금 작용제는 시스플라틴이다. 또 다른 추가 실시양태에서, 상기 백금 작용제는 카르보플라틴이다. 그의 또 다른 추가 실시양태에서, 투여는 21일 치료 주기 동안에 수행된다. 또 다른 추가 실시양태에서, 상기 제약상 허용되는 염은 디메탄술포네이트 염이다.

5-[2-tert-부틸-5-(4-플루오로-페닐)-1H-이미다졸-4-일]-3-(2,2-디메틸-프로필)-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일아민은 US 7,582,652호에 기술되어 있는 바와 같은 절차에 따라 제조될 수 있다. 다르게는, 상기 분자는 본원에서 제공되는 절차에 따라 제조될 수 있다. 시약 및 개시 물질들은 업계 일반의 숙련자라면 용이하게 구입가능하거나, 또는 유기 및 헤테로시클릭 화학의 표준 기술, 또는 알려져 있는 구조적으로 유사한 화합물의 합성과 유사한 기술에서 선택되는 절차에 의해 제조될 수 있다. 하기 제조예 및 참조 실시예 1의 명명법은 대체로 시믹스 이센트리스(Symyx Isentris)^® 버전 3.2에서 IUPAC 명명법 특징을 사용하여 수행되었다.

제조예 1

6-클로로-N-(2,2-디메틸프로필)-3-니트로-피리딘-2-아민

2,6-디클로로-3-니트로피리딘 (30 g, 152.34 mmol)을 메틸 tert-부틸 에테르 (300 mL)에 용해시켜 황색의 용액을 수득한 다음, 그것을 0-5℃로 냉각한다. 이 용액에, 트리에틸아민 (20 mL, 143.49 mmol)을 첨가한 후, 이어서 네오펜틸아민 (16 mL, 136.40 mmol)을 천천히 첨가한다. 첨가가 완료된 후, 반응 혼합물을 5℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 주위 온도에서 밤새 교반한다. 다음날 (약 18시간 후), 반응은 박층 크로마토그래피 (헥산 중 20% 에틸 아세테이트)에 의해 완료된 것으로 나타난다. 반응 혼합물을 물 (100 mL) 및 염수 (100 mL)로 세척한다. 유기 부분을 MgSO₄ 상에서 건조하고, 여과한 다음, 잔류물로 농축한다. 이소프로필 알콜 (20 mL)을 첨가한다. 결정이 출현하는데, 저온 이소프로필 알콜 (15 mL)을 사용하여 세척하면서 여과함으로써 수집하여 표제 화합물을 수득한다 (32 g, 86%).

제조예 2

5-클로로-3-(2,2-디메틸프로필)이미다조[4,5-b]피리딘-2-아민 히드로브로마이드

6-클로로-N-(2,2-디메틸프로필)-3-니트로-피리딘-2-아민 (24.4 g, 0.10 mol)을 톨루엔 (300 mL)과 함께 1 L 오토클레이브에 충전한다.

비커에서, 5% Pt/C (1.5 g)를 교반하면서 10분 동안 물 (12 mL) 및 50% 차아인산 (0.25 mL)과 혼합한다. Pt/C 촉매 제제를 오토클레이브에 충전한다. 반응 혼합물을 50 psi의 수소에서 75℃로 가열한다. 3시간 후, GC 분석은 개시 물질이 1% 미만으로 존재함을 나타낸다. 반응을 중지하고, 주위 온도로 냉각한다. 셀라이트(CELITE)^®의 패드를 통하여 반응 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 메탄올로 세정한다. 생성물인 6-클로로-N2-(2,2-디메틸프로필)피리딘-2,3-디아민을 함유하는 여과물을 진공하에서 약 100 mL의 부피까지 농축하여, 추가 정제 없이 바로 고리화에 사용한다.

상기 용액을 메탄올 (150 mL)로 희석한 후, 빙조에서 냉각한다. 시아노겐 브로마이드 (11 g, 0.105 mol)를 한 번에 첨가한다. 빙조를 가온하면서 교반하는 것에 의해 반응물을 주위 온도로 가온시킨다. 약 5 내지 10시간 후, 반응이 완료된다.

반응 혼합물을 진공하에서 약 4 부피로 농축한다 (약 6 부피의 증류물 수집). 메틸 tert-부틸 에테르 (6 부피, 180 mL)를 첨가한다. 혼합물을 빙조에서 냉각하고, 1시간 동안 교반한다. 상기 물질을 여과하여, 회백색의 고체로서 표제 화합물을 제공한다 (22.0 g, 76%).

제조예 3

3-(2,2-디메틸프로필)-5-[(E)-2-(4-플루오로페닐)비닐]이미다조[4,5-b]피리딘-2-아민

비스(디-tert-부틸(4-디메틸아미노페닐)포스핀)디클로로팔라듐(II) (CAS No: 887919-35-9) (100.4 mg, 141.8 μmol)을 배 형상의 플라스크에 충전하고, 5회의 진공/질소 주기에 의해 고체를 탈산소화한다. 1-부탄올 (55 mL)을 첨가한 다음, 교반을 동반한 3회의 진공 (각각 30초)/질소 주기후 이어지는 추가 2회의 진공 (각각 60초)/질소 주기에 의해 플라스크 내용물을 탈산소화한다. 완전 용액이 아니라, 다소 흐린 혼합물이 달성된다.

클라이센(Claisen) 어댑터, 기계식 교반기, 열전쌍, 환류 응축기 및 고무 격벽이 장착된 3-목 원형저 플라스크에, 5-클로로-3-(2,2-디메틸프로필)이미다조[4,5-b]피리딘-2-아민 히드로브로마이드 (22.65 g, 70.9 mmol)를 첨가한 다음, 약간의 질소 스위프(sweep)를 사용하여 15분 동안 헤드공간을 탈산소화한다. 솜털같은 백색 고체에, 각각 주사기를 통하여 1-부탄올 (46 mL), 디이소프로필에틸아민 (34.48 g, 46.5 mL, 266.8 mmol), 및 4-플루오로스티렌 (11.66 g; 11.4 mL, 95.5 mmol)을 첨가한다. 질소를 사용하여 40분 동안 스파징(sparging)하는 것에 의해 이와 같은 혼합물을 탈산소화한 후, 주사기를 통하여 촉매/부탄올 혼합물을 첨가한다. 슬러리를 질소로 10분 동안 스파징한 다음, 질소를 사용하여 5분 동안 헤드공간을 스위프한다. 반응물을 118-120℃에서 밤새 교반시킨다. 18시간 후, 교반하면서 혼합물을 냉각한다. 45℃ 내지 70℃ 사이에서 침전 또는 결정화가 이루어진다. 41℃의 온도에서 시작하여 10분에 걸쳐 탈이온수 (100 mL)를 적가함으로써 슬러리를 산출한다. 교반 및 26℃로의 냉각 후, 플라스크 내용물을 냉각하기 위하여 빙조를 적용한다. 1시간 후, 에탄올 및 추가 얼음을 조에 첨가함으로써, 온도를 -2℃로 낮춘다. 혼합물을 -2 내지 5℃에서 1시간 동안 유지한 다음, 폴리프로필렌 패드를 통하여 여과하고 (우수한 여과), 탈이온수 (4 부피)로 세정한 후, 이어서 헵탄 (3 부피)으로 세정한다. 진공에 의해 10분 동안 물질을 배기 건조하고, 진공 오븐에서 40℃로 추가 건조함으로써, 표제 화합물을 회백색의 고체로서 제공한다 (20.25 g, 88%).

제조예 4

1-[2-아미노-3-(2,2-디메틸프로필)이미다조[4,5-b]피리딘-5-일]-2-(4-플루오로페닐)에탄-1,2-디온

환류 응축기, 열전쌍 및 기계식 교반기가 장착된 2 L 3-목 원형저 플라스크에서, 3-(2,2-디메틸프로필)-5-[(E)-2-(4-플루오로페닐)비닐]이미다조[4,5-b]피리딘-2-아민 (100.0 g, 308.26 mmol)을 디메틸 술폭시드 (200 mL)와 혼합한다. 10분 동안 교반한 후, 회색 슬러리에 48% 수소 브로마이드 (28.69 g, 170.20 mmol)를 4분에 걸쳐 첨가한다. 22℃로부터 33℃까지의 발열이 관찰된다. 반응 혼합물에, 아세트산 (9.28 g, 154.53 mmol)을 첨가한다. 1.8시간 교반 후, 추가적인 48% 수소 브로마이드 (31.75 g, 188.35 mmol)를 첨가한다. 반응 혼합물을 가열하자, 진해진다. 아세트산 (400 mL, 6.98 mol)을 첨가한다. 91℃에 도달한 후, 디메틸 술폭시드 (50 mL) 및 40% H₂SO₄ (100 mL)를 첨가한다. 온도를 100℃로 증가시킨다. 3시간 후, 추가적인 40% H₂SO₄ (300 mL)를 첨가하고, 딘-스타크 트랩(Dean-Stark trap)을 설치하여 디메틸 술피드와 같은 저비점 용매를 제거한다. 100℃에서 또 다시 17시간 교반한 후, 또 다른 일부의 40% H₂SO₄ (80 mL)를 반응물에 충전한다. 반응물을 1시간 교반한 다음, 탈이온수 (300 mL)를 첨가한다. 반응물을 3시간 동안 교반한 다음, 온도를 103℃로 증가시킨 후, 이어서 추가 탈이온수 (200 mL)를 첨가한다. 2.5시간 추가 교반 후, 또 다른 일부의 탈이온수 (200 mL)를 첨가한다. 교반 및 가열을 또 다시 1.5시간 계속하고, 그 시점에 열을 차단한다 (첫 번째 40% H₂SO₄ 첨가 시점으로부터 총 28시간). 주위 온도로 밤새 냉각하면서, 반응 혼합물을 결정화시킨다. 생성물을 여과하고, 탈이온수 (2×200 mL)로 세정한 다음, 진공 오븐에서 50℃로 건조한다.

고체 물질 (염으로서)을 교반하면서 18시간 동안 1 M 나트륨 히드록시드 (550 mL)로 처리한다. 슬러리를 여과하고, 탈이온수 (500 mL)로 세정한 후, 진공 오븐에서 50℃로 건조함으로써, 표제 화합물을 산출한다 (83.7 g, 77%).

제조예 4A (대안 절차)

1-[2-아미노-3-(2,2-디메틸프로필)이미다조[4,5-b]피리딘-5-일]-2-(4-플루오로페닐)에탄-1,2-디온

열전쌍 및 환류 응축기가 장착된 3-목 원형저 플라스크에서, 3-(2,2-디메틸프로필)-5-[(E)-2-(4-플루오로페닐)비닐]이미다조[4,5-b]피리딘-2-아민 (1.00 g, 2.93 mmol)을 1,4-디옥산 (4 mL) 및 50% 황산 (1 mL)에 현탁시킨다. 혼합물이 투명 용액이 되면, 환류 가열한다 (내부 90-93℃, 및 오일 조 온도 115℃). 수소 브로마이드 (400 μL, 3.56 mmol) 및 디메틸 술폭시드 (2.50 mL, 35.20 mmol)를 각각 첨가한다. 오일 조를 사용하여 반응 혼합물을 환류 가열하고, 약 1 기포/초의 속도로 질소를 도입하였다. 1시간 후, 두 번째 부분의 50% 황산 (3 mL, 21.4 mmol)을 첨가한다. 5시간 후, 세 번째 부분의 50% 황산 (4 mL, 31 mmol)을 첨가하고, 환류하에서 밤새 반응을 계속한다. HPLC 분석은 생성물이 > 93%임을 나타낸다. 오일 조를 제거한 후, 반응물을 약 70℃로 냉각시키고, 그 시점에 물 (5 mL)을 첨가한다. 주위 온도로 냉각한 후 (약 30분), 혼합물을 여과하고, 케이크를 물 (10 mL)로 세척함으로써, 생성물의 수소 술페이트염을 수득한다 (1.33 g).

상기 염을 1 N 나트륨 히드록시드 (50 mL)에 첨가하고, 주위 온도에서 30분 동안 교반함으로써, 밝은 황색의 현탁액을 수득한다. 혼합물을 여과하고, 밝은 황색의 고체를 물 (3×10 mL)로 세척한 다음, 진공하에서 55℃로 건조함으로써, 표제 화합물을 제공한다 (0.91 g, 88%).

참조 실시예 1

5-[2-tert-부틸-5-(4-플루오로페닐)-1H-이미다졸-4-일]-3-(2,2-디메틸프로필)이미다조[4,5-b]피리딘-2-아민 디메탄술포네이트 또는 5-[2-tert-부틸-5-(4-플루오로-페닐)-1H-이미다졸-4-일]-3-(2,2-디메틸-프로필)-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일아민 디메탄술포네이트

1-[2-아미노-3-(2,2-디메틸프로필)이미다조[4,5-b]피리딘-5-일]-2-(4-플루오로페닐)에탄-1,2-디온 (354 g, 1 mol)을 에탄올 (2.8 L), 암모늄 아세테이트 (550.0 g, 7.1 mol) 및 트리메틸 아세트알데히드 (110 g, 1.3 mol)와 혼합한다. 반응물을 HPLC 또는 LC-MS로 모니터링하였을 때 디온이 사라질 때까지 약 70℃ (NH₄OAc의 승화를 억제하는 것을 돕기 위하여, 반응 온도는 환류 미만으로 유지됨)로 가열한다. 반응 완료 후 (보통 밤샘), 진공하에서 혼합물을 농축한다. 에틸 아세테이트 (5.3 L) 및 물 (3.5 L)을 첨가한 후, 이어서 1 N NaOH (1.4 L)를 첨가한다. 혼합물을 주위 온도에서 20-30분 동안 교반한다. 상을 분리하고, 에틸 아세테이트 (2.8 L)로 수성 상을 추출한다. 합쳐진 에틸 아세테이트 부분은 10 부피의 염수로 2회 세척한다. 에틸 아세테이트 용액을 약 1.2 L (약 3 부피)로 증발시킨다. 에탄올 (2.8 L)을 첨가하고, 혼합물을 약 65℃로 가열한다. 에틸 아세테이트 (600 mL) 중 메탄술폰산 (240.0 g, 2.5 mol)을 빠른 적가 양식으로 첨가한다. 혼합물을 약 65℃에서 3시간 동안 유지한다. 열원을 제거하고, 2시간 이상 동안 교반하면서 반응물을 주위 온도로 냉각한다. 여과에 의해 고체 생성물을 수집하고, 에틸 아세테이트 (500 mL)로 세정한 후, 진공 오븐에서 약 45℃로 건조함으로써, 표제 화합물을 수득한다 (490 g, 80%).

하기의 실시예는 인간 난소암의 마우스 이종이식편 연구에서의 겜시타빈과 백금 작용제의 이중 조합물에 대비한 화합물 5-[2-tert-부틸-5-(4-플루오로-페닐)-1H-이미다졸-4-일]-3-(2,2-디메틸-프로필)-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일아민 (디메탄술포네이트 염 (화합물 A)), 겜시타빈 및 백금 작용제 삼중 조합물 투여의 향상된 효능을 예시한다. 실시예는 제한이 아니라 예시로써 제시된다는 것, 그리고 업계 일반의 숙련자에 의해 다양한 변형들이 이루어질 수 있다는 것이 이해되어야 한다.

실시예 1

화합물 A, 겜시타빈 및 시스플라틴을 포함하는 생체내 삼중 조합물

본 연구의 목적은 어느 것이 더 효과적인지를 확인하기 위하여, 인간 난소암의 이종이식편 마우스 모델에서 겜시타빈 및 시스플라틴의 이중 조합 치료와 삼중 조합 치료 (화합물 A 포함)를 비교하는 것이다.

하기 난소암 세포주의 초기 계대로부터 인간 종양 마우스 이종이식편을 생성시킨다: A-2780 (국립 암 연구소(National Cancer Institute)), SK-OV-3x.luc (루시페라제를 발현하도록 변형된 SK-OV-3 세포주 (#1, 중간 발현), 인디애나 대학교). A-2780 난소암 세포는 L-글루타민, 1 mM의 피루베이트가 보충된 25 mM의 HEPES (인비트로젠 22400-089) 및 10% 공인 소 태아 혈청 (기브코(Gibco) 16000, FBS)을 포함하는 RPMI 1640에서 성장시킨다. SK-OV-3x.luc 세포 (난소암 세포)는 비-필수 아미노산이 보충된 L-글루타민 (인비트로젠 16600-082), 1 mM의 피루베이트 및 10% FBS를 포함하는 맥코이(McCoy's) 5A 배지에서 성장시킨다.

할란(Harlan) 무흉선 누드 마우스 (6-7주령)를 먹이 및 물을 자유롭게 하면서 수용하고, 정해진 수의 세포를 사용한 우측 후방 옆구리에서의 피하 이종이식편 이식 전에 1주 동안 순응시킨다. A-2780 또는 SK-OV-3x.luc 이식체는 최종 부피 0.2 mL인 0.1 mL의 마트리겔(MATRIGEL)^® (BD 바이오사이언시스(BD Biosciences))을 포함하는 무혈청 배지 중 0.1 mL의 세포 (각각 2 또는 5 × 10⁶ 세포)로 구성된다. 120-150 mm³의 부피까지 종양을 발생시킨 다음, 치료군들로 무작위화함으로써, 모든 군에 걸쳐 일관된 평균 종양 크기를 달성한다. SK-OV-3x.luc 연구의 각 치료군은 12마리의 동물이며; A-2780 연구의 각 군은 20마리의 동물이다.

히드록시에틸셀룰로스 (HEC) 1%/트윈(TWEEN)^® 80 0.25%/안티폼(Antifoam) 0.05% (HEC/트윈^®) 중에서 매주 화합물 A를 제조하여, 4℃로 저장한다. SK-OV-3x.luc 치료군의 경우 투여량 30 mg/kg의 화합물 A (또는 A-2780 치료군의 경우 10 mg/kg), 또는 그의 비히클을 0.2 mL의 부피로 3주 동안 매일 3회 (TID) 위관영양에 의해 경구 투여한다. 치료 프로토콜은 겜시타빈 및 시스플라틴 치료 도입 전의 화합물 A를 사용한 2일의 개시 치료를 포함한다.

시스플라틴 및 겜시타빈을 PBS 중에 희석하여 제조한 후, 0.2 mL의 복강내 주사로 매주 투여한다. 부피는 하기 표 1에 예시되어 있는 대로 일정하게 투여한다.

3일차에 시작하여, 매주 화합물 A 또는 비히클의 7차 투여 (화합물 A 투여의 전체 2일을 약간 넘는 것에 해당) 각각 0.5 및 1시간 후에, 겜시타빈 및 시스플라틴의 매주 1회 (QW) 치료가 제공된다. 겜시타빈 및 시스플라틴의 최고 투여량은 단일 작용제로서의 효능을 기반으로 선택되며, 이들의 고정 비 희석물이 조합으로 (별도 화합물로서의 순차적 투여) 투여된다: 100 mg/kg 겜시타빈 + 4 mg/kg 시스플라틴 (100+4); 50 mg/kg 겜시타빈 + 2 mg/kg 시스플라틴 (50+2); 또는 25 mg/kg 겜시타빈 + 1 mg/kg 시스플라틴 (25+1). SK-OV-3x.luc 및 A-2780 치료군은 하기의 투여 처방계획에 따라 삼중 조합 요법으로 투여된다. 치료가 표시되지 않은 경우, 해당 비히클이 사용된다.

1. HEC/트윈^®, 0.2 mL, 경구, TID×21 / PBS, 0.2 mL+0.2 mL, IP, QW×3

2. 화합물 A, 10 (또는 30) mg/kg, 경구, TID×21 / PBS, 0.2+0.2 mL, IP, QW×3

3. HEC/트윈^®, 0.2 mL, 경구, TID×21 / 겜시타빈 + 시스플라틴 (25+1) mg/kg, IP, QW×3

4. HEC/트윈^®, 0.2 mL, 경구, TID×21 / 겜시타빈 + 시스플라틴 (50+2) mg/kg, IP, QW×3

5. HEC/트윈^®, 0.2 mL, 경구, TID×21 / 겜시타빈 + 시스플라틴 (100+4) mg/kg, IP, QW×3

6. 화합물 A, 10 (또는 30) mg/kg, 경구, TID×21 / 겜시타빈 + 시스플라틴, 25+1 mg/kg, IP, QW×3

7. 화합물 A, 10 (또는 30) mg/kg, 경구, TID×21 / 겜시타빈 + 시스플라틴, 50+2 mg/kg, IP, QW×3

8. 화합물 A, 30 mg/kg, 경구, TID×21 / 겜시타빈 + 시스플라틴, 100+4 mg/kg, IP, QW×3*

*SK-OV-3x.luc 연구 단독

종양 부피 및 체중을 기록하고, 데이터 포착 및 분석 도구를 사용하여 매주 2회 분석한다. 종양 부피 (mm³)는 하기의 수학식을 사용하여 추정된다: v = l × w ² × 0.536 (식 중, l=측정된 직경 중 더 큰 것이며, w=더 작은 수직 직경임). 항종양 활성은 미치료 대조군 (C) 종양 부피에 대비한 치료된 (T) 종양 부피의 % 감소 ([1-(T/C)]×100)로 계산된다. 종양 부피 데이터는 시간 및 치료군들에 걸친 분산을 균등화하기 위하여 log 규모로 변환된다. log 부피 데이터는 SAS 소프트웨어 (버전 8.2)에서 혼합(MIXED) 절차를 사용하여 시간 및 치료에 의한 분산의 2-원 반복 측정 분석에 의해 분석된다. 반복 측정에 대한 상관 모델은 스페이셜 파워(spatial power)이다. 치료된 군은 각 시점에 대조군과 비교된다. 혼합 절차는 또한 각 시점에서의 조정 평균 및 표준 오차를 계산하기 위하여 각 치료군에 대하여 별도로도 사용된다. 양 분석은 각 동물 내에서의 자동상관, 및 대형 종양을 가지는 동물들이 초기에 연구에서 배제될 때 발생하는 데이터의 손실을 고려한다. 조정 평균 및 표준 오차는 각 치료군 대 시간에 대하여 플로팅된다. 통상적으로, ≤ 0.05의 p-값이 종양 성장의 유의성 있는 차이를 표시한다. 중량 손실 및 최종 종양 부피 측정치의 최대 백분율은 개별 치료와 조합 치료 사이의 종양 성장 억제의 최종 통계적 비교에 의해 제공된다.

매주 1회 일정으로 투여된 화합물 A 단독, 또는 겜시타빈과 시스플라틴의 저투여량 조합물 (25+1, 50+2)을 사용하여 3주 동안 치료된 SK-OV-3x.luc 이종이식편의 최종 평균 종양 부피는 비히클 대조군과 유의성 있게 다르지 않다 (표 2). 최고 겜시타빈 + 시스플라틴 조합물 (100+4)은 비히클 대조군 대비 종양 성장 억제를 산출한다. 화합물 A와 겜시타빈 + 시스플라틴으로 치료되는 동물 각각의 공동-치료는 종양 성장 억제의 향상을 초래한다. 화합물 A와 25+1, 50+2 및 100+4의 조합물은 100+4 조합물에 대한 항-종양 반응을 달성하거나 그것을 능가한다.

하기 표 2에 나타낸 바와 같이, 화합물 A와 25+1 및 50+2 겜시타빈 + 시스플라틴으로 치료되는 동물 각각의 삼중 조합 치료는 겜시타빈 + 시스플라틴의 이중 조합에 비해 종양 성장 억제의 향상을 초래한다. 구체적으로, 화합물 A와 25+1, 50+2 및 100+4의 조합물은 그의 각 25+1, 50+2 및 100+4 이중 조합물에 대한 항-종양 반응을 유의성 있게 능가한다.

하기 표 3에 나타낸 바와 같이, 두 번째 모델인 A2780 난소 종양 모델에서, 화합물 A와 겜시타빈 + 시스플라틴으로 치료되는 동물 각각의 삼중 조합 치료는 겜시타빈 + 시스플라틴의 이중 조합에 비해 종양 성장 억제의 향상을 초래한다. 구체적으로, 화합물 A와 25+1 및 50+2의 조합물은 25+1 및 50+2 이중 조합물에 대한 항-종양 반응을 유의성 있게 능가한다.

실시예 2

화합물 A, 겜시타빈 및 카르보플라틴을 사용한 생체내 삼중 조합 요법

본질적으로는 실시예 1에 기술되어 있는 바와 같이, 시스플라틴 대신 카르보플라틴 (25 mg/kg - 100 mg/kg)으로 대체될 수 있다.

본 발명에서 기술되는 화합물들은 바람직하게는 다양한 경로에 의해 투여되는 제약 조성물로 제제화된다. 가장 바람직하게는, 그와 같은 조성물은 경구, 정맥내 또는 복강내 투여용이다. 그와 같은 제약 조성물 및 그의 제조 방법에 대해서는 업계에 잘 알려져 있다. 예를 들어, 문헌 [REMINGTON: THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY (D. Troy, et al ., eds., 21^st ed., Lippincott Williams & Wilkins, 2005)]을 참조한다.

본 발명의 화합물은 일반적으로 넓은 투여량 범위에 걸쳐 효과적이다. 투여되는 5-[2-tert-부틸-5-(4-플루오로-페닐)-1H-이미다졸-4-일]-3-(2,2-디메틸-프로필)-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일아민의 양은 보통 10일 동안 12시간마다 약 100-420 mg, 더욱 바람직하게는 10일 동안 12시간마다 100-300 mg, 가장 바람직하게는 10일 동안 12시간마다 200 mg, 또는 다르게는 10일 동안 12시간마다 300 mg의 범위에 속한다. 5-[2-tert-부틸-5-(4-플루오로-페닐)-1H-이미다졸-4-일]-3-(2,2-디메틸-프로필)-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일아민은 겜시타빈 및 시스플라틴, 또는 겜시타빈 및 카르보플라틴 처방계획의 개시 전에 2일 이상 동안 투여될 것으로 예상된다.

FDA 승인 투여 처방계획에 따르면, 겜시타빈과 카르보플라틴의 조합 투여는 각 21일 치료 주기의 1 및 8일차에 30분에 걸쳐 1000 mg/m²의 투여량으로 정맥내 투여되어야 한다. 카르보플라틴 AUC 4는 겜시타빈 투여 후 1일차에 정맥내로 투여되어야 한다. 환자는 각 투여 전에 시차 계수를 포함한 온혈구 계수(complete blood count)를 사용하여 모니터링되어야 한다. 환자는 각 주기 전에 ≥1500×10⁶/L의 절대 과립구 계수 및 ≥100,000×10⁶/L의 혈소판 계수를 가져야 한다.

투여량 변경

치료 주기 내에서의 혈액학적 독성으로 인한 겜시타빈 투여량 조정은 요법 8일차에 이루어지는 과립구 및 혈소판 계수를 기반으로 한다. 골수 억제가 검출되는 경우, 겜시타빈 투여량은 하기 표 4의 지침에 따라 변경되어야 한다.

일반적으로, 오심/구토를 제외한 중증 (등급 3 또는 4) 비-혈액학적 독성의 경우, 겜시타빈을 사용한 요법은 치료 의사의 판단에 따라 유지되거나 50%까지 감소되어야 한다. 카르보플라틴 투여량 조정에 대해서는, 제조자의 처방 정보를 참조한다.

차후의 주기를 위한 카르보플라틴과의 조합된 겜시타빈의 투여량 조정은 관찰되는 독성을 기반으로 한다. 하기 혈액학적 독성들 중 어느 것인 경우, 차후 주기에서의 겜시타빈의 투여량은 1 및 8일차에 800 mg/m²까지 감소되어야 한다:

* 5일 초과 동안, 절대 과립구 계수 < 500×10⁶/L

* 3일 초과의 발열성 호중구감소증 동안, 절대 과립구 계수 < 100×10⁶/L

* 혈소판 < 25,000×10⁶/L

* 독성으로 인한 1주를 초과하는 주기 지연

최초 투여 감소 후 상기 독성들 중 어느 것이 재발하는 경우, 차후 주기에서 겜시타빈은 1일차에만 800 mg/m²로 제공되어야 한다.

시스플라틴은 카르보플라틴과 유사한 방식으로 투여될 수 있을 것으로 여겨진다.

일부 경우에서는 상기언급된 범위의 하위 한계 미만인 투여량 수준이 더욱 적정할 수 있는 반면, 다른 경우에는 어떠한 유해한 부작용도 야기하지 않으면서 더욱 더 많은 투여량이 사용될 수 있으므로, 어떠한 방식으로도 상기 투여량 범위로써 본 발명의 영역을 제한하고자 하는 것은 아니다. 실제로 투여되는 화합물의 양은 치료되는 병태, 선택된 투여 경로, 투여되는 실제 화합물 또는 화합물들, 개별 환자의 연령, 체중 및 반응, 그리고 환자 증상의 중증도를 포함한 관련 상황에 비추어 의사에 의해 결정될 것으로 이해될 수 있다.

Claims (19)

1. 5-[2-tert-부틸-5-(4-플루오로-페닐)-1H-이미다졸-4-일]-3-(2,2-디메틸-프로필)-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일아민 또는 그의 제약상 허용되는 염을 겜시타빈, 및 시스플라틴과 카르보플라틴에서 선택되는 백금 작용제와 조합하여 포함하는, 난소암의 치료를 위한 약학 조성물.
2. 제1항에 있어서, 5-[2-tert-부틸-5-(4-플루오로-페닐)-1H-이미다졸-4-일]-3-(2,2-디메틸-프로필)-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일아민 또는 그의 제약상 허용되는 염의 투여가 겜시타빈 및 백금 작용제의 투여에 선행하는 것인 약학 조성물.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 겜시타빈 및 백금 작용제가 5-[2-tert-부틸-5-(4-플루오로-페닐)-1H-이미다졸-4-일]-3-(2,2-디메틸-프로필)-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일아민 또는 그의 제약상 허용되는 염의 투여 후 2일까지 투여되며, 겜시타빈이 다시 7일 후까지 투여되는 것인 약학 조성물.
4. 제1항에 있어서, 겜시타빈 및 백금 작용제의 투여가 5-[2-tert-부틸-5-(4-플루오로-페닐)-1H-이미다졸-4-일]-3-(2,2-디메틸-프로필)-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일아민 또는 그의 제약상 허용되는 염의 투여에 선행하는 것인 약학 조성물.
5. 제1항 또는 제2항에 있어서, 겜시타빈 및 백금 작용제가 동시 투여되는 것인 약학 조성물.
6. 제1항, 제2항 및 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 백금 작용제가 시스플라틴인 약학 조성물.
7. 제1항, 제2항 및 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 백금 작용제가 카르보플라틴인 약학 조성물.
8. 제1항, 제2항 및 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 21일 치료 주기 동안 사용하기 위한 약학 조성물.
9. 제1항, 제2항 및 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 제약상 허용되는 염이 디메탄술포네이트 염인 약학 조성물.
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