KR101602286B1 - 리스테리아를 배양하기 위한 배양 배지, 방법, 및 리스테리아를 검출하기 위한 방법 - Google Patents
리스테리아를 배양하기 위한 배양 배지, 방법, 및 리스테리아를 검출하기 위한 방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR101602286B1 KR101602286B1 KR1020147002736A KR20147002736A KR101602286B1 KR 101602286 B1 KR101602286 B1 KR 101602286B1 KR 1020147002736 A KR1020147002736 A KR 1020147002736A KR 20147002736 A KR20147002736 A KR 20147002736A KR 101602286 B1 KR101602286 B1 KR 101602286B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- listeria
- medium
- salt
- strain
- concentration
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 96
- 241000186781 Listeria Species 0.000 title claims abstract description 88
- 238000012258 culturing Methods 0.000 title claims abstract description 31
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 title claims abstract description 29
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 113
- 241000186779 Listeria monocytogenes Species 0.000 claims description 48
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 26
- YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N cycloheximide Chemical compound C1[C@@H](C)C[C@H](C)C(=O)[C@@H]1[C@H](O)CC1CC(=O)NC(=O)C1 YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N 0.000 claims description 24
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 20
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 19
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 18
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 18
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 17
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 13
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 claims description 12
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 11
- MHWLWQUZZRMNGJ-UHFFFAOYSA-N nalidixic acid Chemical compound C1=C(C)N=C2N(CC)C=C(C(O)=O)C(=O)C2=C1 MHWLWQUZZRMNGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 229960000210 nalidixic acid Drugs 0.000 claims description 11
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 claims description 10
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 10
- 241000186805 Listeria innocua Species 0.000 claims description 9
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 9
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 claims description 9
- QEUYATCJHJUQML-UHFFFAOYSA-N acridine-3,6-diamine;10-methylacridin-10-ium-3,6-diamine;chloride;hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].C1=CC(N)=CC2=NC3=CC(N)=CC=C3C=C21.C1=C(N)C=C2[N+](C)=C(C=C(N)C=C3)C3=CC2=C1 QEUYATCJHJUQML-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 229940002707 acriflavine hydrochloride Drugs 0.000 claims description 8
- NPFOYSMITVOQOS-UHFFFAOYSA-K iron(III) citrate Chemical compound [Fe+3].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NPFOYSMITVOQOS-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 8
- MWEMXEWFLIDTSJ-UHFFFAOYSA-M sodium;3-morpholin-4-ylpropane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].[O-]S(=O)(=O)CCCN1CCOCC1 MWEMXEWFLIDTSJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 7
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 6
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 claims description 5
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 claims description 5
- 241000186806 Listeria grayi Species 0.000 claims description 5
- 241000186814 Listeria welshimeri Species 0.000 claims description 5
- 239000002523 lectin Substances 0.000 claims description 5
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 claims description 5
- 241000186780 Listeria ivanovii Species 0.000 claims description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 3
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 claims 3
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 claims 3
- XUESTGHCVFYOLL-UHFFFAOYSA-N acridin-10-ium;chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3[NH+]=C21 XUESTGHCVFYOLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims 1
- 241000186807 Listeria seeligeri Species 0.000 claims 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 48
- 239000013589 supplement Substances 0.000 abstract description 16
- 241001084338 Listeria sp. Species 0.000 abstract description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 47
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 46
- 229910003002 lithium salt Inorganic materials 0.000 description 38
- 159000000002 lithium salts Chemical class 0.000 description 38
- VTLYFUHAOXGGBS-UHFFFAOYSA-N Fe3+ Chemical class [Fe+3] VTLYFUHAOXGGBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 35
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 29
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 27
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 27
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 27
- 229940123973 Oxygen scavenger Drugs 0.000 description 26
- 150000004728 pyruvic acid derivatives Chemical class 0.000 description 25
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 24
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 24
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 24
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 22
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 19
- 230000036541 health Effects 0.000 description 18
- 238000007430 reference method Methods 0.000 description 14
- 241000894007 species Species 0.000 description 14
- DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 3-(N-morpholino)propanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCCN1CCOCC1 DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N Magnesium ion Chemical compound [Mg+2] JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 12
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 description 12
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N Pyruvic acid Chemical group CC(=O)C(O)=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 10
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 10
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 9
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 9
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 9
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 9
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 8
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 8
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 8
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical group C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 8
- 108010052444 Oxyrase Proteins 0.000 description 8
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 8
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 8
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 8
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 8
- 239000006161 blood agar Substances 0.000 description 8
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 8
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 8
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 8
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 8
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 8
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-M thioglycolate(1-) Chemical class [O-]C(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- WHWDWIHXSPCOKZ-UHFFFAOYSA-N hexahydrofarnesyl acetone Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)=O WHWDWIHXSPCOKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 7
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 7
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 6
- -1 iron (III) salt Chemical class 0.000 description 6
- 229940076788 pyruvate Drugs 0.000 description 6
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 6
- 241000164287 Enterococcus faecalis ATCC 19433 Species 0.000 description 5
- 206010024641 Listeriosis Diseases 0.000 description 5
- 208000002352 blister Diseases 0.000 description 5
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 5
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 5
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 5
- 239000010871 livestock manure Substances 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- PEJLNXHANOHNSU-UHFFFAOYSA-N acridine-3,6-diamine;10-methylacridin-10-ium-3,6-diamine;chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(N)=CC2=NC3=CC(N)=CC=C3C=C21.C1=C(N)C=C2[N+](C)=C(C=C(N)C=C3)C3=CC2=C1 PEJLNXHANOHNSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 4
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 4
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 4
- VDQVEACBQKUUSU-UHFFFAOYSA-M disodium;sulfanide Chemical compound [Na+].[Na+].[SH-] VDQVEACBQKUUSU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 4
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 4
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 4
- 229910052979 sodium sulfide Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 4
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 4
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 3
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 240000008415 Lactuca sativa Species 0.000 description 3
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 3
- 229960002413 ferric citrate Drugs 0.000 description 3
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 235000014102 seafood Nutrition 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- 239000001974 tryptic soy broth Substances 0.000 description 3
- 239000006150 trypticase soy agar Substances 0.000 description 3
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 3
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical class [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 2
- 208000019331 Foodborne disease Diseases 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000003228 Lactuca sativa Nutrition 0.000 description 2
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001625930 Luria Species 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 240000007643 Phytolacca americana Species 0.000 description 2
- 235000009074 Phytolacca americana Nutrition 0.000 description 2
- 206010000269 abscess Diseases 0.000 description 2
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 238000010876 biochemical test Methods 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Chemical class 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 2
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 2
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 2
- 239000013630 prepared media Substances 0.000 description 2
- 235000013324 preserved food Nutrition 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- CXYNQYMJBXSWIU-UHFFFAOYSA-N prop-2-enal hydrochloride Chemical compound Cl.C=CC=O CXYNQYMJBXSWIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 2
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000588813 Alcaligenes faecalis Species 0.000 description 1
- 241000301512 Bacillus cereus ATCC 14579 Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 229920002749 Bacterial cellulose Polymers 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000589875 Campylobacter jejuni Species 0.000 description 1
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 1
- 241000206593 Carnobacterium divergens Species 0.000 description 1
- 241000206601 Carnobacterium mobile Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000588697 Enterobacter cloacae Species 0.000 description 1
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 description 1
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 description 1
- 241001476057 Enterococcus faecium ATCC 8459 Species 0.000 description 1
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241001360526 Escherichia coli ATCC 25922 Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 241001152323 Hafnia alvei ATCC 13337 Species 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- 241000588915 Klebsiella aerogenes Species 0.000 description 1
- 241000196833 Kocuria rhizophila DC2201 Species 0.000 description 1
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 1
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 description 1
- 235000013956 Lactobacillus acidophilus Nutrition 0.000 description 1
- 244000199866 Lactobacillus casei Species 0.000 description 1
- 235000013958 Lactobacillus casei Nutrition 0.000 description 1
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 description 1
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 description 1
- 240000000263 Lemna trisulca Species 0.000 description 1
- 241000192130 Leuconostoc mesenteroides Species 0.000 description 1
- 241000452253 Listeria fleischmannii Species 0.000 description 1
- 241001545398 Listeria weihenstephanensis Species 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010061304 Nail infection Diseases 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- 241001069992 Proteus mirabilis ATCC 29906 Species 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 241000589540 Pseudomonas fluorescens Species 0.000 description 1
- 241000589776 Pseudomonas putida Species 0.000 description 1
- 241000158504 Rhodococcus hoagii Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 241000191963 Staphylococcus epidermidis Species 0.000 description 1
- 241001147691 Staphylococcus saprophyticus Species 0.000 description 1
- 241000191973 Staphylococcus xylosus Species 0.000 description 1
- 241000193985 Streptococcus agalactiae Species 0.000 description 1
- 244000057717 Streptococcus lactis Species 0.000 description 1
- 235000014897 Streptococcus lactis Nutrition 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 208000035472 Zoonoses Diseases 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 229940023020 acriflavine Drugs 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 229940005347 alcaligenes faecalis Drugs 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- KIDOOSXWJRGDSS-UHFFFAOYSA-N amino(oxo)sulfanium Chemical class N[S+]=O KIDOOSXWJRGDSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000000923 atherogenic effect Effects 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005016 bacterial cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000021168 barbecue Nutrition 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 1
- 229910052792 caesium Inorganic materials 0.000 description 1
- TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N caesium atom Chemical compound [Cs] TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 1
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000010411 cooking Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000005489 dwarf bean Nutrition 0.000 description 1
- 229940092559 enterobacter aerogenes Drugs 0.000 description 1
- 229940032049 enterococcus faecalis Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 244000078673 foodborn pathogen Species 0.000 description 1
- 229910052730 francium Inorganic materials 0.000 description 1
- KLMCZVJOEAUDNE-UHFFFAOYSA-N francium atom Chemical compound [Fr] KLMCZVJOEAUDNE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013505 freshwater Substances 0.000 description 1
- 230000002070 germicidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 244000052637 human pathogen Species 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- LIKBJVNGSGBSGK-UHFFFAOYSA-N iron(3+);oxygen(2-) Chemical class [O-2].[O-2].[O-2].[Fe+3].[Fe+3] LIKBJVNGSGBSGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 229940039695 lactobacillus acidophilus Drugs 0.000 description 1
- 229940017800 lactobacillus casei Drugs 0.000 description 1
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000004973 liquid crystal related substance Substances 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- IDSXLJLXYMLSJM-UHFFFAOYSA-N morpholine;propane-1-sulfonic acid Chemical compound C1COCCN1.CCCS(O)(=O)=O IDSXLJLXYMLSJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 239000005022 packaging material Substances 0.000 description 1
- 235000021485 packed food Nutrition 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 238000011056 performance test Methods 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 235000021574 pickled cabbage Nutrition 0.000 description 1
- 230000019612 pigmentation Effects 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-N propane-1-sulfonic acid Chemical compound CCCS(O)(=O)=O KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940107700 pyruvic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000020185 raw untreated milk Nutrition 0.000 description 1
- 235000020989 red meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 229910052701 rubidium Inorganic materials 0.000 description 1
- IGLNJRXAVVLDKE-UHFFFAOYSA-N rubidium atom Chemical compound [Rb] IGLNJRXAVVLDKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012045 salad Nutrition 0.000 description 1
- 235000015067 sauces Nutrition 0.000 description 1
- 238000007493 shaping process Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 108010050327 trypticase-soy broth Proteins 0.000 description 1
- 235000021419 vinegar Nutrition 0.000 description 1
- 239000000052 vinegar Substances 0.000 description 1
- 206010048282 zoonosis Diseases 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
- C12Q1/045—Culture media therefor
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
리스테리아 속 균주(Listeria spp)를 포함하는, 미생물을 배양하기 위한 배양 배지 및 배양 보충물 및 리스테리아 속 균주를 포함하는, 미생물을 배양하기 위한 방법이 밝혀진다. 샘플에 있는 리스테리아 속 균주를 포함하는 미생물의 존재를 검출하기 위한 방법이 또한 밝혀진다.
Description
밝혀진 주제는 일반적으로 미생물을 배양하기 위한 배지 및 방법 및 미생물을 검출하기 위한 방법과 관련이 있다.
2005년 2월 12일 출원된, 미국 특허 출원 번호 10＼597909, SELECTIVE GROWTH MEDIUM FOR LISTERIA SPP는, 리튬 클로라이드(Lithium Chloride) 및 선택적 제제를 포함하는 조성물을 밝힌다.
Mendonca, A., F. and Knabel, S., J. 1994. A novel strictly anaerobic recovery and enrichment system incorporating lithium for detection of heat-injured Listeria mon℃ytogenes in pasteurized milk containing background microflora. Appl. Environ. Microbiol. 60: 4001-4008.
Beumer R. R., te Giffel M. C., Anthonie S. V. R., Cox L. J. 1996. The effect of acriflavine and nalidixic acid on the growth of Listeria spp. in enrichment media. F. Microbiol. 13 (2): 137-148.
Teo, A., Y-L., Knabel, S., J. 2000. Development of a Simple Recovery-Enrichment System for Enhanced Detection of Heat-Injured Listeria mon℃ytogenes in Pasteurized Milk. J. Food Prot. 63 (4): 462-472.
Busch SV, Donnelly CW. Development of a repair-enrichment broth for resuscitation of heat-injured Listeria mon℃ytogenes and Listeria inn℃ua. 1992. Appl. Environ. Microbiol. 58(1):14-20.
Buchrieser C, Rocourt J. 2007. The genus Listeria and Listeria monocytogenes: phylogenetic position, taxonomy, and identification. In: Listeria, listeriosis, and food safety, 3rd edition. / Ed. by Ryser ET, Marth EH. CRC Press. 896 p.
Lang Halter E, Neuhaus K, Scherer S. 2012. Listeria weihenstephanensis sp. nov., isolated from the water plant Lemna trisulca of a German fresh water pond. Int J Syst Evol Microbiol. Apr 27. [Epub ahead of print].
Bertsch D, Rau J, Eugter MR, Haug MC, Lawson PA, Lacroix C, Meile L. 2012. Listeria fleischmannii sp. nov., isolated from cheese. Int J Syst Evol Microbiol. Apr 20. [Epub ahead of print].
Painter J, Slutsker L. Listeriosis in humans. 2007. The genus Listeria and Listeria monocytogenes: phylogenetic position, taxonomy, and identification. In: Listeria, listeriosis, and food safety, 3rd edition. / Ed. by Ryser ET, Marth EH. CRC Press. 896 p.
Wesley IV. Listeriosis in animals. 2007. The genus Listeria and Listeria monocytogenes: phylogenetic position, taxonomy, and identification. In: Listeria, listeriosis, and food safety, 3rd edition. / Ed. by Ryser ET, Marth EH. CRC Press. 896 p.
Ramaswamy V, Cresence VM, Rejitha JS, Lekshmi MU, Dharsana KS, Prasad SP, Vijila HM. 2007. Listeria - review of epidemiology and pathogenesis. J Microbiol Immunol Infect. 40 (1): 4-13.
K℃h J, Stark K. Significant increase of listeriosis in Germany--epidemiological patterns 2001-2005. (2006). Euro Surveill. 11 (6): 85-8.
Anonymous. Incidence of Foodborne Illness, 2010. (http://www.cdc.gov/Features/dsFoodborneIllness/).
EU summary report on trends and sources of zoonoses and zoonotic agents and food-borne outbreaks 2009. (http://www.efsa.europa.eu/en/efsajournal/doc/2090.pdf).
Scallan E, Hoekstra RM, Angulo FJ, Tauxe RV, Widdowson M-A, Roy SL, Jones JL, Griffin PM. Foodborne illness acquired in the United States-major pathogens. 2011. Emerg Infect Dis. 17 (1): 126-8.
Gandhi M, Chikindas ML. 2007. Listeria: A foodborne pathogen that knows how to survive. Int J Food Microbiol. 113 (1): 1-15.
USDA-FSIS. 2011. Isolation and Identification of Listeria monocytogenes from red meat, poultry, egg, and environmental samples. In: Microbiology Laboratory Guidebook, Chapter 8.07. (http://www.fsis.usda.gov/PDF/MLG_8_07.pdf).
요약
실시양태에서 생물학적으로 유효한 농도의: 비킬레이트(unchelated) 마그네슘 이온; 및 산소 제거제(oxygen scavenger)를 포함하는 배양 배지가 밝혀진다.
대체 가능한 실시양태에서 산소 제거제는 피루베이트 염(pyruvate salt), 카탈라아제(catalase), 싸이오글리콜레이트 염(thioglycolate salt), 시스테인(cysteine), oxyraseTM, Na2S, 및 FeS로 구성된 군으로부터 선택된다.
대체 가능한 실시양태에서 배지는 생물학적으로 유효한 농도의: 리튬 염(lithium salt); 또는 철(III) 염(iron (III) salt); 또는 리튬 염 및 철(III) 염
을 더 포함한다.
대체 가능한 실시양태에서 배지는 선택적인 제제(agent)를 더 포함한다.
대체 가능한 실시양태에서 배지는 상당히 비-마그네슘 킬레이팅 완충용액(non-magnesium chelating buffer)을 더 포함한다.
대체 가능한 실시양태에서 배지는 리스테리아 속(Listeria spp) 균주를 배양하기 위함이다.
대체 가능한 실시양태에서
상기 철(III) 염은 약 0.05 g/L보다 많은 농도로 존재하고;
상기 리튬 염은 약 0.1 g/L보다 많은 농도로 존재하며;
상기 마그네슘 염은 약 0.1 g/L보다 많은 농도로 존재하고; 및
상기 산소 제거제는 약 0.1 g/L보다 많은 농도로 존재한다.
대체 가능한 실시양태에서 배지는 선택적인 제제를 더 포함한다.
실시양태에서 생물학적으로 유효한 농도의 비킬레이트 마그네슘 이온 및 산소 제거제를 포함하는 배지에서 샘플을 배양하는 것을 포함하는: 생물학적 샘플을 배양하기 위한 방법이 밝혀진다.
방법의 대체 가능한 실시양태에서 배지는 리튬 염; 또는 철(III) 염; 또는 리튬 염 및 철(III) 염을 포함한다.
방법의 대체 가능한 실시양태에서 배지는 선택적인 제제를 더 포함한다.
방법의 대체 가능한 실시양태에서
상기 철(III) 염은 약 0.05 g/L보다 많은 농도로 존재하고;
상기 리튬 염은 약 0.1 g/L보다 많은 농도로 존재하며;
상기 마그네슘 염은 약 0.1 g/L보다 많은 농도로 존재하고; 및
상기 산소 제거제는 약 0.1 g/L보다 많은 농도로 존재한다.
대체 가능한 실시양태에서 방법은 리스테리아 속 균주를 배양하기 위함이다.
실시양태에서 생물학적으로 유효한 농도의: a) 비킬레이트 마그네슘, 및 b) 산소 제거제 존재 하에 샘플을 배양하는 단계를 포함하는, 샘플에 있는 박테리아를 검출하기 위한 방법이 밝혀진다.
방법의 실시양태에서 산소 제거제는 피루베이트 염, 카탈라아제, 싸이오글리콜레이트 염, 시스테인, oxyraseTM, Na2S, 및 FeS로 구성된 군으로부터 선택된다.
방법의 실시양태에서
a) 리튬 염; 또는
b) 철(III) 염; 또는
c) 리튬 염 및 철(III) 염
의 존재 하에: 배양이 발생한다.
방법의 실시양태에서 선택적인 제제의 존재하에 배양이 발생한다.
방법의 실시양태에서 박테리아는 리스테리아 속 균주이다.
실시양태에서 비-마그네슘 킬레이팅 완충용액 및 산소 제저제를 포함하는, 배양 배지를 보충하기 위한 조성물이 밝혀진다.
대체 가능한 실시양태에서 조성물은 생물학적으로 유효한 농도의:
a) 리튬 염; 또는
b) 철(III) 염; 또는
c) 리튬 염 및 철(III) 염
을 더 포함한다.
대체 가능한 실시양태에서 리스테리아 속 균주를 배양하기 위한 조성물의 용도가 밝혀진다.
실시양태에서 생물학적으로 유효한 양의 비킬레이트 마그네슘 이온 및 산소 제거제를 포함하는 액체 배양 배지를 산출하기 위한 희석제로 적합한 분말 배양 배지가 밝혀진다.
분말 배양 배지의 대체 가능한 실시양태에서, 희석된 배지는 생물학적으로 유효한 양의:
a) 리튬 염; 또는
b) 철(III) 염; 또는
c) 리튬 염 및 철(III) 염
을 더 포함한다.
실시양태에서 산소 제거제 및 비-마그네슘 킬레이팅 완충용액을 포함하는, 리스테리아 속 균주를 배양하기 위한 키트가 밝혀진다.
동반하는 도면에 나타냄으로써, 여기의 주제의 특징들 및 장점들은 선택된 실시양태의 다음의 상세한 설명에 비추어 더욱 명확해질 수 있다. 아는 바와 같이, 밝혀지고 청구된 주제는 모두 청구 범위에 벗어나는 것 없이, 다양한 관점에서 변형될 수 있다. 따라서, 도면 및 설명은 자연에서 명확하게 여겨지고, 및 제한적으로 여겨지지 않으며 주제의 전체 범위는 청구에서 제시된다.
용어
본 발명에서, 단어 "포함하는(comprising)"은 단어 다음의 항목이 포함되지만, 상세하게 언급되지 않은 항목은 제외되지 않는 것을 의미하는 비-제한적인 뜻에서 사용된다. 특이적 특성 또는 변수(variable) 또는 매개변수(parameter)를 포함하거나 또는 포함할 수도 있는 실시양태에서, 대체 가능한 실시양태가 이런 특성, 또는 변수 또는 매개변수를 구성할 수도 있거나, 또는 필수적으로 구성한다고 이해될 것이다. 부정관사 "하나(a)"에 의해 요소를 언급하는 것은 문맥이 확실하게 하나 및 오직 하나의 요소가 있다는 것을 요구하지 않는 한, 하나 이상의 요소가 존재할 가능성을 배제하지 않는다.
본 발명에서 단점(endpoints)에 의한 수 범위의 설명은 모든 전체 수, 모든 정수 및 모든 분수 중간(fractional intermediates)을 포함하는 범위 내에 포함된 모든 수를 포함한다(즉, 1 내지 5는 1, 1.5, 2, 2.75, 3, 3.80, 4, 및 5 등을 포함한다.).
본 발명에서 단수 "하나(an)" 및 "그(the)"는 내용이 확실하게 가리키지 않는 한 복수 대상을 포함한다. 그러므로, 예를 들어, "하나의 화합물"을 포함하는 조성물은 둘 또는 그 이상의 화합물의 혼합물을 포함한다.
본 발명에서 용어 "또는(or)"은 내용이 확실하게 가리키지 않는 한 "및/또는(and/or)"을 포함하는 의미에서 일반적으로 사용된다.
본 발명에서, 지시되지 않는 한, 명세서 및 청구항에서 사용된 양 또는 성분, 속성의 측정 등을 표현하는 모든 수는 용어 "약(about)"에 의해 모든 경우에서 변형됨으로써 이해될 수 있다. 따라서, 문맥에 비추어 대조되거나 필수적인 것을 가리키지 않는 한, 본 발명에서 제시된 수 변수(parameters)는 본 발명의 가르침을 이용하는 당해 숙련된 업자에 의해 및 측정 및 정량의 부정확성에 비추어 획득되어 찾아진 원하는 속성에 의존하여 달라 질 수 있는 근사치이다. 청구의 범위에 상등한는 것의 원칙의 적용에 제한 없이, 각 수 변수는 적어도 보고된 중요한 숫자(digits)의 수에 비추어 및 보통의 라운딩(rounding) 기술을 적용함에 의해 이해되어야 한다. 발명의 넓은 범위를 제시하는 수 범위 및 변수가 근사치인 것을 어긋나지 않으면, 특정 실시예에서 제시된 그들의 수 값은 넓게 오직 이것이 발명의 유효값 및 이전 기술로부터 밝혀진 그리고 청구된 주제의 차이에 일치하는 것이라는 범위에서 이해된다.
본 발명에서 용어 "POD"는 차이의 확률(probability)를 의미하고 및 용어 "dPOD"차이의 확률에 있어서 차이를 의미한다.
본 발명에서 용어 "감도(Sensitivity)" 또는 "감도율(Rate of sensitivity)"은: 감도율=(Actero 리스테리아(Listeria) 방법 양성 환경적 샘플의 수/두 번째 증균(enrichment)에 의해 확인된 양성 환경적 샘플의 수) × 100%로서 정의된다.
본 발명에서 용어 "특이성(Specificity)" 또는 "특이성의 비율(Rate of specificity)"은: 특이성의 비율=(Actero 리스테리아 방법 음성 환경적 샘플의 수/두 번째 증균에 의해 확인된 음성 환경적 샘플의 수) × 100%로서 정의된다.
본 발명에서 용어 "일치법(Method Agreement)"은: 일치법:[1-|Actero 리스테리아 방법 진양성(true positive) 및 진음성(true negative) 시험 샘플의 수-참조 방법 진양성 및 진음성 시험 샘플의 수)/총 방법 샘플위 수|] × 100%로서 정의된다.
본 발명에서 용어 "정확도(Accuracy)"는: 정확도=[확인된 Actero 리스테리아 방법 양성 시험 샘플의 수/참조 방법 양성 시험 샘플의 수] × 100%으로 정의된다.
본 발명에서 용어 "배지(media)", "배지(medium)", "배지(broth)", "배양 배지(culture broth)" 등 모두는 박테리아 또는 미생물 균주(microbe strain) 또는 종(species)일 수도 있는 원하는 미생물을 배양하기 적합한 영양 혼합물을 말한다. 특정 실시양태에서 배지는 하나 또는 그 이상의 물, 아가(agar), 단백질, 아미노산, 카제인 가수분해물(casein hydrolysate), 염, 지질, 탄수화물, 염, 미네랄, 및 pH 완충용액을 포함할 수도 있고 고기 추출물(meat extract), 효모 추출물(yeast extract), 트립톤(tryptone), 피톤(phytone), 펩톤(peptone), 및 맥아 추출물(malt extract)과 같은 추출물을 포함할 수도 있고, 루리아베르타니(luria bertani, LB) 배지를 포함할 수도 있다. 실시양태에서 배지는 간단한, 복잡한 또는 정의된 배지일 수도 있고 증균된 배지(enriched media)일 수도 있고 당 업계에 숙련된 업자에 의해 이미 이해될 것인 모든, 넓은 다양한 방법으로 보충될 수도 있다. 실시양태에서 배지는 MOPS 완충용액, 구연산철(ferric citrate)과 같은 철(III) 염(Iron (III) salt), 황산 마그네슘(Magnesium sulphate)과 같은 마그네슘 염, 염화 리튬(lithium chloride)과 같은 리튬 염을 포함할 수도 있고, 및 피루베이트(pyruvate)를 포함할 수 도 있다. 실시양태에서 배지는 여기에서 정의된 바와 같이 어느 코어(core) 배지를 포함하거나 또는 구성할 수도 있다. 실시양태에서 배지는 간단한, 복잡한 또는 정의된 배지일 수도 있고 증균된 배지일 수도 있고 당 업계에 숙련된 업자에 의해 이미 이해될 것인 모든, 넓은 다양한 방법으로 보충될 수도 있다. 용어 "Actero/리스테리아(Actero/Listeria)" 및 "ALEM" 배지(broth), 배지(medium), 증균된 배지 등은 여기의 실시양태에 따라 배지를 위한 일반적인 기술어로서 사용된다.
실시양태에서 배지는 비-마그네슘 킬레이팅(chelating) 완충용액일 수도 있는 pH 완충용액을 포함한다. 하나의 이련의 실시양태에서 pH 완충용액은 MOPS 나트륨 염 및 MOPS 자유 산(MOPS free acid)의 혼합물이나, 탄산염(Carbonate) 및 인산염(Phosphate) 완충용액과 같은 다양한 다른 완충용액이 대체 가능한 실시양태에서 사용될 수도 있고 및 배지를 위한 원하는 pH를 맞추기 위하여, 당 업계에서 숙련된 업자들 사이에서 이미 선택되고 및 업자들에 의해 수행될 것이다.
실시양태에서 배지는 다수의 구성성분을 포함한, "분말 배지(powdered medium)", "배지 분말(medium powder)", "배지 농축물(medium concentrate)", "농축 배지(concentrated medium)" 등으로서 또한 일반적으로 언급된, 분말 또는 농축물의 형태로 제공될 수도 있고 액체 배지에 원하는 농도의 특정 요소를 제공하기 위한 사전결정된 부피의 물과 결합되기 적합할 수 있다. 이런 분말 배지 또는 농축 배지는 사용 전에, 이것이 오직 적합한 물, 보통 멸균수에 용해되는 것이 필요함을 의미함으로, 완성될 수도 있다. 대체 가능하게 실시양태에서 분말 또는 농축 배지는 부분적, 추가적인 요소가 사용을 위해 적합한 완성된 배지를 제공하기 위해 추가되는 것이 필요함을 의미하는 것일 수도 있다. 실시양태에서 분말 또는 농축 배지는 박테리아를 배양하는 실질적 용도를 위한 배지를 생산하기 위하여 희석에 적합한 농축 형태로 적어도 부분적으로 수화되는 배지를 또한 포함한다. 이것은 여기에서 사용된 바와 같이 용어 "배지(medium)" 또는 "배지(media)"는, 문맥에 의해 요구되지 않는 한, 박테리아 및 미생물을 배양하기 위해 적합한 농도에서 구성요소를 가지는 최종 배지 및 희석을 위해 적합한 분말 또는 농축 배지 모두를 포함한다.
본 발명에서 용어 "산소 제거제(oxygen scavenger)"는 비활성 자유 산소 또는 산소 라디칼(redicals)를 제거할 것인 화학 물질을 의미한다. 특정 실시양태에서 산소 제거제는 피루베이트 염, 카탈라아제, 싸이오글리콜레이트 염 또는 화합물, 시스테인, L-(+)-시스테인 염산염(L-(+)-cysteine hydr℃hloride), L-시스테인(L-cysteine), oxyraseTM (Patel, 1995) Na2S 및 FeS로 구성된 군으로부터 선택된다. 실시양태에서 특정 산소 제저제는 좌선성(laevorotatory) 또는 우선성(dextrotatory) (L 또는 D) 형태이고 및 라세미형(racemic forms) 또는 혼합물일 수도 있다. 당 업계에 숙련된 업자들은 이런 대안으로부터 이미 선택할 것이고 및 이런 산소 제거제는 논의되고 있는 실시양태에 대한 그들의 생물학적 호환성에 기반하여 사이에서 선택될 것이라고 인식할 것이다. 실시양태에서 본 발명에서 언급된 산소 제거제 또는 어느 다른 제제가 염인 곳에서 그러면 어느 생물학적으로 효과적인 및 호환 가능한 염은 사용 가능하고 및 부적합한 염은 당 업계에 숙련된 업자들에 의해 이미 확인되고 및 방지될 것이다. 실시양태에서 염은 나트륨 또는 칼륨 염이다.
본 발명에서 용어 "피루베이트 염(pyruvate salt)"은 피루브산(pyruvic acid)(또한 2-옥소-프로판산(2-oxo-propanoic acid)으로서 알려진)의 모든 염 및 피루베이트 음이온을 포함하는, 어느 화합물, 및 어느 생화학적으로 유효한 이성질체(isomers) 또는 이들의 치환된 형태를 의미하고 및 포함한다. 당 업계에 숙련된 업자들은 예를 들어 독성 때문에, 생물학적으로 유효하지 않은 또는 원하지 않는 염을 이미 확인하고 및 방지될 것이다.
당 업계에 숙련된 업자들은 관심의 박테리아에 치명적이거나 또는 유해한 염 또는 다른 화합물이 방지될 것이고 이런 염 및 화합물이 당 업계에 숙련된 업자들에 의해 이미 확인될 것이라고 이미 인식할 것이다.
본 발명에서 알칼리 금속(alkali metal)은 리튬, 나트륨, 칼륨, 루비듐(Rubidium), 세슘(Caesium), 및 프랑슘(Francium) 중 어느 하나를 의미하고 및 알칼리 금속 염은 어느 진술한 것의 어느 생물학적으로 수용 가능한 염을 의미한다. 실시양태에서 염은 용해성이 있고 및 유기물 또는 무기물일 수도 있으며, 및 실시예에 걸쳐 염화물(chloride), 인산염(phosphate), 질산염(nitrate), 탄삼수소염(hydrogen carbonate), 피루베이트(pyruvate), 에타노에이트(ethanoate)일 수도 있다.
본 발명에서 동사 "완충하다(buffer)"는 당 업계에서 숙련된 업자에게 이미 명확할 수 있는 방법에 있어서, 사전결정된 범위에서, 배양 배지일 수도 있는, 용액의 pH를 안정화하는 것을 의미한다. 명사 "완충 용(buffer)"은 용액의 pH를 안정화하기에 적합한 화학 물질을 의미한다.
본 발명에서 용어 "염(salt)"은 용해성이 있거나 또는 적절한 상태 하에 상당히 또는 부분적으로 용해성이 있는 염을 말한다.
본 발명에서 샘플 또는 미생물을 "키우는 것(growing)" 또는 "배양하는 것(culturing)"으로 언급하는 것은 샘플 또는 미생물이 하나 또는 그 이상의 관심의 미생물로 성장 또는 분열을 지지하거나 또는 촉진하는데 적합한 또는 상당히 적합한 상태 하에 놓여짐에 의한 과정을 의미한다. 이것은 이들 용어가 샘플이 관심의 미생물이 실직적으로 존재하거나 또는 존재하지 않거나 적합한 상태에 노출되거나, 또는 검출 가능한 양으로 존재하는 상태를 포함한다고 이해될 것이다.
본 발명에서 용어 "염(salt)"은 용해성이 있는 또는 상당히 용해성이 있는 또는 해당되는 배양 상태 하에 원하는 생물학적 유효성을 가지는 데 필요한 정도로 용해성이 있는 어느 생물학적으로 호환 가능한 염을 말한다.
본 발명에서 "비-마그네슘 킬레이팅 완충용액(non-magnesium chelating buffer)" 또는 "대체로 비-마그네슘 킬레이팅 완충용액(substantially non-magnesium chelating buffer)"은 용액으로부터 용해된 마그네슘 이온이 상당히 킬레이트 화합물이 되지 않거나 격리되지 않은 완충용액이 생물학적으로 중요한 범위에서 그렇게 되지 않은 것을 의미한다. 특정 실시양태에서 비-마그네슘 킬레이팅 완충용액은 3-모르폴리노프로판-1-술폰산(3-morpholinopropane-1-sulfonic acid); 3-(N-모르폴리노)프로판술폰산(3-(N-morpholino)propanesulfonic acid); 3-N-모르폴리노 프로판술폰산(3-N-morpholino propansulfonic acid); 4-모르폴린프로판술폰산(4-Morpholinepropanesulfonic acid) 및 "MOPS"로서 또한 언급된, 3-(n-모르폴리노)프로판술폰산(3-(n-Morpholino)Propanesulfonic Acid)이거나 또는 포함하고 또는 MOPS 나트륨 염(MOPS Sodium salt) 및 MOPS 자유 산(MOPS free acid)의 혼합물이거나 또는 포함한다. 대체 가능한 실시양태에서 다양한 생물학적으로 수용 가능한 비-마그네슘 킬레이팅 완충용액은 당 업계에 숙련된 업자들에 의해 사용될 수도 있고 및 이미 확인되고 및 사이에서 선택될 것이다. 일부 실시양태에서 이런 완충용액은 치환되거나 또는 그렇지 않으면 MOPS의 형태로 화학적으로 변형된다. 유사하게 "비킬레이트된(unchelated)" 또는 "비-킬레이트된(non-chelated)"은 용액에서 대체로 자유로운 이온 또는 화학 물질을 말한다.
본 발명에서 용어 "기본(base)" 또는 "코어(core)" 배지(medium) 또는 배지(broth)는 당 업계에서 숙련된 업자에 의해 이미 인식된 특정 기본 요구된 구성성분을 포함하는 부분적 배지를 말하고, 관심의 어느 미생물의 성장을 지지하는데 적합하게 남아있는 동안 이들의 구체적인 조성물은 대체로 변할 수도 있다. 그러므로 실시양태에서 코어 배지는 염, 완충용액, 및 단백질 추출물을 포함할 수도 있고, 및 실시양태에서 탄산염 또는 인산염 또는 MOPS 완충용액을 포함할 수도 있으며 또는 나트륨 염, 마그네슘 염 및 칼슘(calcium) 염을 포함할 수도 있다. 실시양태에서 1 리터의 코어 배지는 표 1에 나타낸 제조법(recipe)을 가진다. 그러나 대체 가능한 실시양태에서 코어 배지는 하나 또는 그 이상의 물, 아가, 단백질, 아미노산, 카제인 가수분해물(casein hydrolysate), 염, 지질, 탄수화물, 염, 미네랄, 및 pH 완충용액을 포함하고 및 실시양태에서 고기 추출물(meat extract), 효모 추출물(yeast extract), 트립톤(tryptone), 피톤(phytone), 펩톤(peptone), 및 맥아 추출물(malt extract)과 같은 추출물을 포함하며, 및 실시양태에서 배지는 루리아-베르타니(luria bertani, LB) 배지; 저염 LB 배지(1% 펩톤, 0.5% 효모 추출물, 및 0.5% NaCl), SOB 배지(2% 펩톤, 0.5% 효모 추출물, 10 mM NaCl, 2.5 mM KCl, 10 mM MgCl2, 10 mM MgSO4), S℃ 배지(2% 펩톤, 0.5% 효모 추출물, 10 mM NaCl, 2.5 mM KCl, 10 mM MgCl2, 10 mM MgSO4, 20 mM 글루코오스(Glucose)), 슈퍼배지(Superbroth)(3.2% 펩톤, 2% 효모 추출물, 및 0.5% NaCl), 2xTY 배지(1.6% 펩톤, 1% 효모 추출물, 및 0.5% NaCl), TerrificBroth(TB) (1.2% 펩톤, 2.4% 효모 추출물, 72 mM K2HPO4, 17 mM KH2PO4, 및 0.4% 글리세롤(glycerol)), LB 밀러(LB Miller) 배지 또는 LB 렌녹스(LB Lennox) 배지(1% 펩톤, 0.5% 효모 추출물, 및 1% NaCl)이거나 또는 포함한다.
| 성분 | 제조사 | 양 (g/L) |
| 피톤(Phytone) | BD BBL (211906) | X 내지 Y |
| 트립톤(Tryptone) | Oxoid (LP0042) | X 내지 Y |
| 비프 추출물(Beef extract) | BD BBL (212303) | X 내지 Y |
| 효모 추출물(Yeast extract) | BD Bacto (212750) | X 내지 Y |
표 1에서, X 및 Y는 그램에 있어서 표현되는 수 값이다. 각각의 X 및 Y는 독립적으로 0.0, 0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.1, 0.11, 0.12, 0.13, 0.14, 0.15, 0.16, 0.17, 0.18, 0.19. 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 8.0, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9, 10.0, 10.1, 10.2, 10.3, 10.4, 10.5, 10.6, 10.7, 10.8, 10.9, 11.0, 11.1, 11.2, 11.3, 11.4, 11.5, 11.6, 11.7, 11.8, 11.9, 12.0, 12.1, 12.2, 12.3, 12.4, 12.5, 12.6, 12.7, 12.8, 12.9, 13.0, 13.1, 13.2, 13.3, 13.4, 13.5, 13.6, 13.7, 13.8, 13.9, 14.0, 14.1, 14.2, 14.3, 14.4, 14.5, 14.6, 14.7, 14.8, 14.9, 15.0, 15.1, 15.2, 15.3, 15.4, 15.5, 15.6, 15.7, 15.8, 15.9, 16.0, 16.1, 16.2, 16.3, 16.4, 16.5, 16.6, 16.7, 16.8, 16.9, 17.0, 17.1, 17.2, 17.3, 17.4, 17.5, 17.6, 17.7, 17.8, 17.9, 18.0, 18.1, 18.2, 18.3, 18.4, 18.5, 18.6, 18.7, 18.8, 18.9, 19.0, 19.1, 19.2, 19.3, 19.4, 19.5, 19.6, 19.7, 19.8, 19.9, 20 또는 그 이상의 그램일 수도 있고 및 일부 실시양태에서 X 내지 Y의 범위는 X 및 Y 중 어느 값에 의해 범위가 정해질 수도 있다. 이것은 특정 실시양태에서 전술된 것에 적합하게 대체하는 것과 같이, 피톤, 트립톤, 비프 추출물 및 효모 추출물의 변형된 형태가 당 업계에 숙련된 업자들에 의해 이미 선택될 것이라고 이해될 것이다. 일부 실시양태에서 마그네슘, 칼슘 및 나트륨의 대체 가능한 염이 사용될 수도 있고 및 특정 실시양태에서 마그네슘, 칼슘 및 나트륨에 대한 대안이 선택될 수도 있다. 일부 실시양태에서 완충용액은 코어 배지에 포함될 것이고 및 실시양태에서 배지는 MOPS 완충용액이다. 당 업계에 숙련된 업자들은 이미 특정 목적을 맞추기 위하여 조성에서의 수정을 기본 배지 조성에 적합하게 만들 것이다. 이것은 여기에서 밝혀진 증균의 효과와 호환 가능한 기본 배지에 있어서 어느 및 모든 변형이, 청구된 주제의 범위 내에 포함되도록 의도된 것으로 이해될 것이다.
| 성분 | 양 (g/L) |
| 피톤 | 5 |
| 트립톤 | 5 |
| 비프 추출물 | 5 |
| 효모 추출물 | 5 |
당 업계에 숙련된 업자들은 원하는 미생물의 성장이 문제의 미생물에 적합한 선택된 온도에서 가장 촉진될 것이라고 이미 이해할 것이다. 특정 실시양태에서 원하는 미생물은 리스테리아 속 균주(Listeria spp)이고 및 배양은 약 29℃, 30℃, 31℃, 32℃, 33℃, 34℃, 35℃, 36℃, 37℃, 38℃, 39℃, 40℃, 41℃, 42℃, 43℃ 또는 그 이상에서 수행될 수도 있고 및 사용되는 배지는 시험을 위한 샘플과 함께 접종에 준비를 위한 이 온도에서 사전-데움(pre-warmed) 될 수도 있다. 특정 실시양태에서 배양은 약 35℃에서 수행될 수도 있고 및 사용되는 배지는 시험을 위한 샘플과 함께 접종에 준비를 위한 이 온도에서 사전-데움 될 수도 있다. 여기에서 밝혀진 실시양태에서, 배양은 29℃ 및 43℃ 사이 어느 온도에서 수행될 수도 있고 및 약 29℃, 30℃, 31℃, 32℃, 33℃, 34℃, 35℃, 36℃, 37℃, 38℃, 또는 39℃, 또는 40℃, 또는 41℃ 또는 42℃ 또는 43℃ 또는 29℃ 및 30℃, 30℃ 및 31℃, 31℃ 및 32℃, 32℃ 및 33℃, 33℃ 및 34℃, 34℃ 및 35℃, 35℃ 및 36℃, 36℃ 및 37℃, 37℃ 및 38℃, 38℃ 및 39℃, 39℃ 및 40℃, 40℃ 및 41℃, 41℃ 및 42℃, 또는 42℃ 및 43℃ 사이 또는 34℃ 및 43℃ 사이, 또는 35℃ 및 42℃ 사이, 또는 36℃ 및 42℃, 38℃ 및 42℃의 온도에서 또는 39℃ 및 41℃ 사이 또는 39℃ 및 40℃ 사이 또는 38℃ 및 39℃ 사이 ,또는 39℃ 및 40℃ 사이, 또는 40℃ 및 41℃ 사이, 또는 41℃ 및 42℃ 또는 42℃ 및 43℃ 사이에서 수행될 수도 있다. 실시양태에서 온도는 32℃ 및 38℃ 사이, 또는 33℃. 및 37℃ 사이이다. 본 발명에서 배지의 "증균(enrichment)"은 하나 또는 그 이상의 원하는 미생물의 성장 또는 다른 특징을 촉진하기 위한 선택된 구성성분의 첨가를 말한다. "증균 용액(enrichment solution)"은 이들 추가적인 구성성분을 포함하는 용액을 말한다. 실시양태에서 증균 용액에 포함된 구성성분은 하나 또는 그 이상의 MOPS, 철(III) 염, 리튬 염, 피루베이트를 포함하고, 및 실시양태에서 선택적인 증균 보충물은 날리딕스산(nalidixic acid), 시클로헥사미드(cycloheximide), 및 염산 아크리플라빈(acriflavine hydrochloride)과 같은 하나 또는 그 이상의 선택적인 제제를 포함한다. 특정 실시양태에서 증균된 배지는 하나 또는 그 이상의 황산 마그네슘, 염화 리튬, 구연산철, 피루브산나트륨(Sodium pyruvate) 및 증균 보충물을 포함한다.
| 성분 | 제조사 | 양 (g/L) |
| Mops-나트륨 염(Mops-sodium salt) | Sigma (M9381) | X-Y |
| Mops-자유 산(Mops-free acid) | Sigma (M1254) | X-Y |
| 구연산철 III(Ferric citrate III) | Sigma (F6129) | X-Y |
| 염화 리튬(Lithium chloride) | Sigma (L4408) | X-Y |
| MgSO4 | BDH (BDH0246) | X-Y |
| 피루부산나트륨(Sodium pyruvate) | Sigma (15990) | X-Y |
| 선택넉인 증균 보출물 선택적인 증균 보충물의 조성물(이의 구성성분은 또한 여기에서 집합적으로 또는 개인적으로 "선택적 제제(selective agent)" 또는 "선택 제제(selecting agnet)"로서 언급된다) 시클로헥사미드(Cycloheximide) 날리딕스산(Nalidixic acid) 염산 아크리플라빈(Acriflavine hydrochloride) |
Oxoid (SR0141E) CAS number 66-81-9 3374-05-8 8048-52-0 |
2.7 mL 최종 증균된 배지에서 양 g/L A-B A-B A-B |
각각의 X 및 Y는 독립적으로 0.0, 0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.1, 0.11, 0.12, 0.13, 0.14, 0.15, 0.16, 0.17, 0.18, 0.19. 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7,1.8, 1.9, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 8.0, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9, 10.0, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30 그램(grams) 또는 여기 사이의 어느 값일 수도 있고 및 특정 다양한 실시양태에서 범위 X 내지 Y는 X 및 Y의 어느 값에 의해 범위가 정해질 수도 있다. 이것은 MOPS 염 및 MOPS 자유 산의 관련 있는 양이 원하는 pH를 달성하기 위해 필요한 바로 조절될 것이다.
각각의 A 및 B는 독립적으로 0.0, 0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.1, 0.11, 0.12, 0.13, 0.14, 0.15, 0.16, 0.17, 0.18, 0.19. 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 8.0, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9, 10.0, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000, 7000, 8000, 9000, 10,000, 11,000, 12,000, 13,000, 14,000, 15,000, 16,000, 17,000, 18,000, 19,000, 20,000, 30,000, 40,000, 50,000, 60,000, 70,000, 80,000, 90,000 또는 100,000 mg/리터(litre)일 수도 있다.
| 성분 | 제조사 | 양 (g/L) |
| Mops-나트륨 염 | Sigma (M9381) | 13.7 |
| Mops-자유 산 | Sigma (M1254) | 8.5 |
| 구연산철 III | Sigma (F6129) | 0.50 |
| 염화 리튬 | Sigma (L4408) | 8 |
| MgS04 | BDH (BDH0246) | 2 |
| 피루부산나트륨 | Sigma (15990) | 1 |
| 다음 구성성분을 포함한 선택적 증균 보충물(여기에서 또한 "선택적 제제"로서 언급된): | Oxoid (SR0141E) | 2.7 mL |
| 시클로헥사미드 날리딕스산 염산 아크리플라빈 |
66-81-9 3374-05-8 8048-52-0 |
33.75 mg 27 mg 10.125 mg |
* 지시된 바와 같이 한 바이알(vial)을 재구성하고, 및 1L의 배지에 2.7 mL의 구성성분을 첨가한다.
그러나, 이것은 이들 양이 특정 자격 요건을 맞추기 위해 변화될 수도 있다는 것이 당 업계에 숙련된 업자들에 의해 이미 이해될 것이고, 및 대체 가능한 실시양태에서 최종 증균된 배지는 약 1x10-6, 2x10-6, 3x10-6, 4x10-6, 5x10-6, 6x10-6, 7x10-6, 8x10-6, 9x10-6, 1x10-5, 2x10-5, 3x10-5, 4x10-5, 5x10-5, 6x10-5, 7x10-5, 8x10-5, 9x10-5, 1x10-4, 2x10-4, 3x10-4, 4x10-4, 5x10-4, 6x10-4, 7x10-4, 8x10-4, 9x10-4, 1x10-3, 2x10-3, 3x10-3, 4x10-3, 5x10-3, 6x10-3, 7x10-3, 8x10-3, 9x10-3, 1x10-2, 2x10-2, 3x10-2, 4x10-2, 5x10-2, 6x10-2, 7x10-2, 8x10-2, 9x10-2, 1x10-1, 2x10-1, 3x10-1, 4x10-1, 5x10-1, 6x10-1, 7x10-1, 8x10-1, 9x10-1, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 1x102, 2x102 , 3x102, 4x102, 5x102, 6x102, 7x102, 8x102, 9x102, 1x103, 2x103, 3x103, 4x103, 5x103, 6x103, 7x103, 8x103, 9x103, 또는 그 이상 또는 이하의 g/리터 또는 배지에서 개별의 구성성분의 mg/리터를 포함한다.
본 발명에서 배양 배지에 대한 "보충물(supplement)"은 용액, 액체, 고체 또는 배양 배지에 첨가를 위한 다른 재료를 의미한다. 보충물은 하나 또는 그 이상의 미생물의 성장을 촉진하는 것을 효과 또는 목적을 가지고 및 특정 실시양태에서 다른, 원하지 않는 미생물과 관련된 하나 또는 그 이상의 미생물의 성장을 선택적으로 촉진한다. 특정 실시양태에서 보충물은 하나 또는 그 이상의 마그네슘 염, 리튬 염, 철(III) 염, 피루베이트 및 선택적인 제제를 포함하거나, 또는 전구체 또는 전술된 것의 어느 하나를 형성하기 위하여 이미 바뀌거나 또는 대사된 변형된 형태를 포함한다. 실시양태에서 보충물은 리스테리아 속 균주의 성장을 촉진하기 위한 보충물이다.
본 발명에서 용어 "선택적 제제(selective agent)"는 원하는 미생물의 성장을 지지하거나 또는 원하지 않는 미생물의 성장을 억제하는 것을 제공하는 화학 물질 또는 배양 상태를 의미한다. 특정 실시양태에서 선택적 제제는 항생제, 설판아마이드(sulphanamides) 또는 소독제를 포함한다. 특정 실시양태에서 선택적 제제는 하나, 둘 또는 세 모두의 날리딕스산, 시클로헥사마이드 및 염산 아크리플라빈이거나 또는 포함하고 또는 적합한 상응물 또는 여기에 대한 대안을 포함한다. 용어 "선택적 증균 보충물(selective enrichment supplement)"은 용어 "선택적 제제(selective agent)"에 상응한다. 특정 실시양태에서 시클로헥사마이드의 작용 농도는 배양 배지 리터당 약 33.75 mg이고, 및 대체 가능한 실시양태에서 배양 15 및 50 mg/배양 배지의 리터 사이이며, 또는 5, 10, 15,20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100 또는 그 이상의 mg/배양 배지 리터보다 많을 수도 있다. 특정 실시양태에서 날리딕스산의 작용 농도는 배양 배지 리터당 약 27 mg이거나, 또는 10 및 50 mg/배양 배지 리터이거나 또는 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100 또는 그 이상의 mg/배양 배지 리터보다 많다. 실시양태에서 염산 아크리플라빈의 작용 농도는 약 10.125 mg/리터이거나, 6.000 및 15.000 mg/리터 사이이거나, 또는 1.000, 2.000, 3.000, 4.000, 5.000, 6.000, 7.000, 8.000, 9.000, 10.000, 11.000, 12.000, 13.000, 14.000, 15.000, 16.000, 17.000, 18.000, 19.000, 20.000 또는 그 이상의 mg/배양 배지 리터보다 많다. 당 업계에 숙련된 업자들은, 그러나, 선택적 제제의 넓은 다양한 농도는 사용될 수도 있고 및 특정 목적을 위해 적합한 조절을 할 것이라고 인식한다.
본 발명에서 용어 "Actero/리스테리아(Actero/Listeria)" "Actero 리스테리아(Actero Listeria)" "ALEM" 배지(broth), 배지(medium), 증균 배지 등은, 모두 여기의 실시양태에 따라 배지(broth) 또는 배지(media)를 말한다.
본 발명에서 "배양 상태(culture conditions)"는 미생물의 배양을 위한 변수(parameters)를 의미하고, 및 화학적 조성물 및 온도, 교반(agitation), 오염, 및 배양 기간뿐만 아니라 배양 배지의 물리적 성질을 포함한다. 그러므로 특정 실시양태에서, 배지는 29℃ 및 43℃ 사이 어느 온도에서 유지되고 및 특정 실시양태에서 약 39℃의 온도에서 유지된다. 이것은 특정 실시양태에서 온도는 30℃ 이상 및 25℃ 이하로 이해될 것이고 및 실시양태에서 29℃ 및 43℃ 사이 온도에서 유지되고 및 약 29℃, 30℃, 31℃, 32℃, 33℃, 34℃, 35℃, 36℃, 37℃, 38℃, 또는 39℃, 또는 40℃, 또는 41℃ 또는 42℃ 또는 43℃ 또는 29℃ 및 30℃, 30℃ 및 31℃, 31℃ 및 32℃, 32℃ 및 33℃, 33℃ 및 34℃, 34℃ 및 35℃, 35℃ 및 36℃, 36℃ 및 37℃, 37℃ 및 38℃, 38℃ 및 39℃, 39℃ 및 40℃, 40℃ 및 41℃, 41℃ 및 42℃, 또는 42℃ 및 43℃ 사이 또는 34℃ 및 43℃ 사이, 또는 35℃ 및 42℃ 사이, 또는 36℃ 및 42℃ 사이, 38℃ 및 42℃ 또는 39℃ 및 41℃ 사이 또는 39℃ 및 40℃ 사이 또는 38℃ 및 39℃ 사이, 또는 39℃ 및 40℃ 사이, 또는 40℃ 및 41℃ 사이, 또는 41℃ 및 42℃ 또는 42℃ 및 43℃ 사이 온도에서 수행될 수도 있다. 실시양태에서 온도는 32℃ 및 38℃ 사이이고, 또는 33℃. 및 36℃ 사이는 여기에서 밝혀진 배지를 사용하여 미생물을 배양하기 위해 또한 사용될 수도 있으나, 그러나 약 25℃ 및 약 30℃ 사이 범위 밖의 온도는 다른 원하지 않는 미생물의 성장을 빨라지게 할 수도 있고 및 리스테리아의 성장을 억제할 수도 있다. 배양 배지의 pH는 일반적으로 7 및 8 사이에서 설정되고 및 예를 들어 특정 실시양태에서 약 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9 또는 8.0 일 수도 있으며 또는 전술된 값의 어느 둘에 의해 범위가 정해진 범위에 있다. 이것은 범위 pH7-8의 밖 pH가 실시양태에서 여전히 사용될 수도 있으나, 배양의 효율성 및 선택성이 반대로 영향을 미치게 될 수도 있다고 이해될 것이다. 배양은 샘플과 함께 접종이 따르는 어느 원하는 기간 동안 키워질 수도 있으나 비-제한적인 실시양태에서 24 시간 배양 기간은 정상적인 방법에 의해 시험하는 것을 허용하기 위해 충분히 리스테리아 속 균주의 성분을 증균하기 위해 충분하다는 것을 발견했다. 그러나, 대체 가능한 실시양태에서 특정 목적을 위해 배양 기간은 길거나 또는 짧을 수도 있고 및 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16,17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48 또는 그 이상의 시간보다 높거나 낮을 수도 있다. 당 업계에 숙련된 업자들은 특정 자격요건을 만족하기 위해 적합한 배양 기간을 선택한다.
본 발명에서 "미생물(microorganism)"은 박테리아를 의미하고, 이는 병원균일 수도 있고 및 실시양태에서 리스테리아 속 균주이다.
본 발명에서 미생물을 "검출하는 것(detecting)"은, 미생물의 존재를 관찰하는 것의 어느 과정, 또는 미생물 또는 미생물에서 변화가 실제로 검출되는지 아닌지, 생물학적 샘플에서, 미생물의 존재 하에 변화를 의미한다. 다시 말해서, 미생물에 대한 샘플 또는 미생물의 수준에서 변화를 시험하는 것의 행동은, 심지어 미생물이 존재하지 않는 것으로 밝혀지거나 민감도의 수준 이하라면 "검출(detection)"이다. 검출은 정량적, 반정략적 또는 비정량적 관찰일 수도 있고 하나 또는 그 이상의 대조 샘플과의 비교에 기반될 수도 있다. 검출은 어느 샘플에 적용될 수도 있고 여기서 미생물의 존재 또는 부재는 평가되고, 및 특정 실시양태에서 그러나 전술한 것의 일반성에 제한 없이, 샘플은 생물학적 물질의 어느 형태이거나 형태를 포함하고 그라운드(ground), 또는 비그라운드(unground), 고기, 가금류, 생선, 해산물, 야채, 과일, 유제품, 우유, 계란, 포장 식품, 통조림, 병조림, 또는 싸여진 식품을 포함할 수도 있다.
실시양태에서 및 제한 없이, 미생물을 검출하는 단계는 배양에서 미생물의 존재를 검출하기 위하여 PCR, 실시간 PCR, 렉틴(lectins), 단순확산(simple diffusion), 측면확산(lateral diffusion), 면역학적 검출, 측방유동(lateral flow), 또는 유체유동(flow through) 방법을 사용하는 것을 포함한다. 설명에 걸쳐 및 제한 없이, 특정 실시양태에서 가능한 검출 방법은 US6483303; US 6597176; US6607922; US6927570; 및 US7323139 중 어느 하나에서 밝혀진 주제를 포함하거나 사용한다.
본 발명에서 용어 "샘플(sample)" 및 "생물학적 샘플(biological sample)"은 그들 문맥에 상응하는 동일한 및 가장 광범위한 가능한 의미를 가지고 및 일반적으로 및 제한 없이 하나 또는 그 이상의 관심의 미생물의 존재에 대해 시험되기 원하는 어느 것을 말하며, 및 이것이 실질적으로 어느 미생물에 포함되어 있는지 아닌지, 또는 관심의 어느 미생물 및 살모넬라 속 균주 또는 대장균 속 균주가 포함되어 있는지 아닌지 모든 이런 주제를 포함한다. 실시양태에서 샘플은 조각 또는 부분을 취함에 의해, 또는 면봉, 와이프, 필터, 스미어(smear), 또는 어느 다른 적합한 방법의 사용에 의해 얻어질 수도 있고, 이들의 모두는 당 업계에서 숙련된 업자들에 의해 이미 이해되고 및 수행되고 및 사이에서 선택될 것이다. 특정 실시양태에서 샘플은 식품 물질이거나 포함하거나 또는 식물 또는 동물 물질이거나 포함하거나 또는 고기, 해산물, 생선, 야채, 과일, 샐러드, 사전조리된 곡물(premade meals), 계란, 유제품, 결합된 및 비결합된 식품 물질, 통조림, 또는 어느 다른 형태의 신선한, 가공되지 않은, 요리된, 비요리된, 냉동된, 냉장된, 그라운드, 잘게 썬, 통조림으로 된, 열처리된, 건조된, 보존된, 정제된, 또는 보존된 식품 무엇이든이거나 포함한다. 더욱 실시양태에서 샘플은 환경, 표면, 용기 또는 위치로부터 받아들여질 수도 있고 여기서 관심의 미생물이, 예를 들어 및 제한 없이 부엌 표면, 요리 표면, 음식 저장 용기, 식기구(eating utensils), 냉장고, 냉동고, 전시 용기, 포장 물질, 살아있는 식물 및 동물 및 어느 다른 환경, 위치, 표면, 또는 사용자에게 흥미 있을 수도 있는 물질 무엇이든 존재하는지 결정하기 위해 바래진다. 당 업계에 숙련된 업자들은 실시양태에서 사용을 위한 어느 샘플을 선택하고, 얻고 및 다루기 위한 적합한 방법을 이해하고 수행할 것이다. 선택된 실시양태에서 샘플들은 고기, 생선, 해산물, 채소, 계란 또는 유제품이다.
실시양태에 있어서 배양 배지
실시양태에서 생물학적으로 유효한 농도의: 비킬레이트(unchelated) 마그네슘 이온; 및 산소 제거제(oxygen scavenger)를 포함하는 배양 배지가 밝혀진다. 이것은 용어 "생물학적으로 유효한 농도(biologically effective concentration)"가 비킬레이트 마그네슘 이온 및 산소 제거제 모두의 농도를 설명하고, 및 모두 이런 농도는 당 업계에 숙련된 업자들에 의해 이미 인식된 방법으로 마음대로 조절될 수도 있으나, 이런 조절이 특정 실시양태의 목적에 대한 조합의 유효성을 보존하는 방법에서 만들어질 것으로 이해될 것이다. 실시양태에서 산소 제거제는 피루베이트 염(pyruvate salt), 카탈라아제(catalase), 싸이오글리콜레이트 염(thioglycolate salt), 시스테인(cysteine), oxyraseTM, Na2S, 및 FeS로 구성된 군으로부터 선택된다.
일실시양태에서 배양 배지는 생물학적으로 유효한 농도의 비킬레이트 마그네슘 이온 및 생물학적으로 유효한 농도의: 리튬 염(lithium salt), 철(III) 염(iron(III) salt), 및 피루베이트 염으로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 구성성분을 포함한다. 다양한 실시양태에서 배지는 생물학적으로 유효한 조합의 리튬 염, 마그네슘 염(magnesium salt), 철(III) 염, 및 피루베이트 염으로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 두 개, 세 개 또는 네 개의 구성성분을 포함한다. 다양한 실시양태에서 배지는 하나 또는 그 이상의 선택적 제제(agents)를 더 포함한다. 다양한 실시양태에서 배지는 완충된 배지이고 및 다양한 실시양태에서 완충용액은 대체로 비-마그네슘 킬레이팅(non-magnesium chelating)이다. 실시양태에서 철(III) 염은 약 0.05 g/L보다 많은 농도로 존재하고; 리튬 염은 약 0.1 g/L보다 많은 농도로 존재하며; 마그네슘 염은 약 0.1 g/L보다 많은 농도로 존재하고; 및 피루베이트 염은 약 0.1 g/L보다 많은 농도로 존재한다. 실시양태에서 배지는 리스테리아 속 균주(Listeria spp)를 배양하기 위함이다.
더욱 대체 가능한 실시양태에서 배지는 비-마그네슘 킬레이팅 완충용액, 리튬 염, 마그네슘 염, 철(III) 염, 및 피르베이트 염으로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 세 개, 네 개, 다섯 개 또는 여섯 개 모두 구성성분을 포함한다. 대체 가능한 실시양태에서 선택된 구성성분의 하나는 리튬 염이다. 더욱 대체 가능한 실시양태에서 선택된 구성성분의 하나는 비-마그네슘 킬레이팅 완충용액이다. 더욱 대체 가능한 실시양태에서 선택된 구성성분의 하나는 마그네슘 염이다. 더욱 대체 가능한 실시양태에서 선택된 구성성분의 하나는 철(III) 염이다. 더욱 대체 가능한 실시양태에서 선택된 구성성분의 하나는 피루베이트 염이다.
더욱 일련의 대체 가능한 실시양태에서 선택된 구성성분은 비-마그네슘 킬레이팅 완충용액, 리튬 염 및 마그네슘 염, 철(III) 염, 및 피루베이트 염으로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 구성성분을 포함한다. 더욱 일련의 대체 가능한 실시양태에서 선택된 구성성분은 비-마그네슘 킬레이팅 완충용액, 마그네슘 염 및 리튬 염, 철(III) 염, 및 피루베이트 염으로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 구성성분을 포함한다.
더욱 일련의 대체 가능한 실시양태에서 선택된 구성성분은 비-마그네슘 킬레이팅 완충용액, 산화철(III) 염(iron (III) oxide salt) 및 마그네슘 염, 리튬 염, 및 피루베이트 염으로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 구성성분을 포함한다.
더욱 일련의 대체 가능한 실시양태에서 선택된 구성성분은 비-마그네슘 킬레이팅 완충용액, 피루베이트 염 및 마그네슘 염, 리튬 염, 및 산화철(III) 염으로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 구성성분을 포함한다.
더욱 일련의 대체 가능한 실시양태에서 선택된 구성성분은 리튬 염 및 비-마그네슘 킬레이팅 완충용액, 또는 리튬 염 및 마그네슘 염, 또는 리튬 염 및 철(III) 염, 또는 리튬 염 및 피루베이트 염을 포함한다. 더욱 일련의 선택된 실시양태에서 선택된 구성성분은 피루베이트 염 및 비-마그네슘 킬레이팅 완충용액, 또는 피루베이트 염 및 마그네슘 염, 또는 피루베이트 염 및 리튬 염 또는 피루베이트 염 및 산화철(III) 염을 포함한다. 더욱 일련의 선택된 실시양태에서 선택된 구성성분은 철(III) 염 및 리튬 염, 또는 철(III) 염 및 피루베이트 염, 또는 산화철(III) 염 및 비-마그네슘 킬레이팅 완충용액, 또는 산화철(III) 염 및 마그네슘 염을 포함한다.
더욱 일련의 실시양태에서 배지는 선택적 제제를 더 포함한다. 실시양태에서 선택적 제제는 적어도 하나의 날리딕스산(nalidixic acid), 염산 아크리플라빈(acriflavine hydrochloride) 및 시클로헥사마이드(cycloheximide)를 포함한다. 실시양태에서 철(III) 염은 약 0.05 g/L보다 많은 농도로 존재하고; 리튬 염은 약 0.1 g/L보다 많은 농도로 존재하며; 마그네슘 염은 약 0.1 g/L보다 많은 농도로 존재하고; 및 피루베이트 염은 약 0.1 g/L보다 많은 농도로 존재한다. 실시양태에서 철(III) 염은 0.05 g/L 및 50 g/L 사이의 농도로 존재하고; 상기 리튬 염은 0.1 g/L 및 100 g/L 사이의 농도로 존재하며; 상기 마그네슘 염은 0.1 g/L 및 100 g/L 사이의 농도로 존재하고; 및 피루베이트 염은 0.1g/L 및 100 g/L 사이의 농도로 존재한다.
실시양태에 있어서 배양 배지의 일 실시예에 있어서 배지의 조성물은 표 5에 나타낸다.
| 성분 | 제조사 | 양 (g/L) |
| 피톤 | BD BBL (211906) | 5 |
| 트립톤 | Oxoid (LP0042) | 5 |
| 비프 추출물 | BD BBL (212303) | 5 |
| 효모 추출물 | BD Bacto (212750) | 5 |
| Mops-나트륨 염 | Sigma (M9381) | 13.7 |
| Mops-자유 산 | Sigma (M1254) | 8.5 |
| 구연산철 III | Sigma (F6129) | 0.5 |
| 염화 리튬 | Sigma (L4408) | 8 |
| MgSO4 | BDH (BDH0246) | 2 |
| 피루부산나트륨 | Sigma (15990) | 1 |
| 선택적 보충물(이것의 하나 또는 그 이상의 구성성분은 여기에서 또한 “선택적 제제”로 언급된다). 선택적 보충물은 각각의 시클로헥사마이드, 날리딕스산 및 염산 아크리플라빈을 포함한다. | Oxoid (SR0141E) | 2.7 mL |
*지시된 바와 같이 한 바이알(vial)을 재구성하고, 및 1 L의 배지에 2.7 mL의 구성성분을 첨가한다. 2.7 ml의 선택적 보충물은 33.75 mg의 시클로헥사마이드, 27 mg의 날리딕스산 및 10,125 mg의 염산 아크리플라빈을 포함한다.
15분 동안 110℃에서 멸균함으로써 첨가된 보충물과 함께 배지를 살균한다.
실시양태에 있어서 배양의 방법:
실시양태에서 생물학적으로 유효한 농도의: 비킬레이트 마그네슘 이온; 및 산소 제거제 존재 하에 샘플을 배양하는 것을 포함하는, 생물학적 샘플을 배양하기 위한 방법이 밝혀진다. 실시양태에서 산소 제거제는 피루베이트 염 , 카탈라아제, 싸이오글리콜레이트 염, 시스테인, oxyraseTM, Na2S, 및 FeS로 구성된 군으로부터 선택된다.
다양한 실시양태에서 생물학적으로 유효한 농도의 비킬레이트 마그네슘 이온 및 생물학적으로 유효한 농도의: 리튬 염, 철(III) 염, 및 피루베이트 산으로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 구성성분을 포함하는 배지에서 샘플을 배양하는 것을 포함하는: 생물학적 샘플을 배양하기 위한 방법이 밝혀진다. 대체 가능한 실시양태에서 대체로 비-마그네슘 킬레이팅 완충용액, 마그네슘 염, 리튬 염, 철(III) 염, 피루베이트 염, 및 선택적 제제로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 둘, 셋, 넷, 다섯 또는 여섯 구성성분의 존재 하에 배양이 발생한다. 실시양태에서 방법은 첫 실시양태에 따라 배지에서 박테리아를 배양하는 것을 포함한다. 실시양태에서 검출은 PCR, 렉틴 결합, 단순확산, 측면확산, 면역학적 검출, 측방유동, 또는 유체유동 단계를 더 포함한다. 실시양태에서 선택적 제제의 존재 하에 배양이 발생한다. 실시양태에서 박테리아는 리스테리아 속 균주이거나 포함하고 및 실시양태에서 검출은 실시양태에서 리스테리아 속 균주이거나 포함하는 박테리아 종을 우선적으로 배양하는 것을 포함한다. 다양한 실시양태에서 방법은 실시양태에 있어서 배지를 사용하여 생물학적 샘플을 배양하는 것을 포함한다. 대체 가능한 실시양태에서 생물학적 샘플은 박테리아를 포함하고, 실시양태에서 박테리아는 리스테리아 속 균주이고 및 실시양태에서 방법은 리스테리아 속 균주 또는 박테리아의 다른 종을 우선적으로 배양하는 것을 포함한다.
실시양태에 따라 박테리아를 검출하기 위한 방법:
실시양태에서 생물학적으로 유효한 농도의: 비킬레이트 마그네슘 이온; 및 산소 제거제 존재 하에 샘플을 배양하는 것을 포함하는, 샘플에서 박테리아를 검출하기 위한 방법이 밝혀진다. 실시양태에서 산소 제거제는 피루베이트 염, 카탈라아제, 싸이오글리콜레이트 염, 시스테인, oxyraseTM, Na2S, 및 FeS로 구성된 군으로부터 선택된다.
더욱 일련의 실시양태에서 생물학적으로 유효한 조합의: 비킬레이트 마그네슘 이온, 및 리튬 염, 철(III) 염, 피루베이트 염, 및 선택적 제제로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 구성성분의 존재 하에 샘플을 배양하는 단계를 포함하는, 샘플에서 박테리아를 검출하기 위한 방법이 밝혀진다. 대체 가능한 실시양태에서 대체로 비-마그네슘 킬레이팅 완충용액, 마그네슘 염, 리튬 염, 철(III) 염, 피루베이트 염, 및 선택적 제제로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 둘, 셋, 넷, 다섯 또는 여섯 구성성분의 존재 하에 배양이 발생한다. 실시양태에서 방법은 실시양태에 따라 배지에서 박테리아를 배양하는 것을 포함한다. 대체 가능한 실시양태에서 검출은 PCR, 렉틴 결합, 단순확산, 측면확산, 면역학적 검출, 측방유동, 또는 유체유동 단계를 더 포함한다. 대체 가능한 실시양태에서 선택적 제제의 존재 하에 배양이 발생한다. 대체 가능한 실시양태에서 박테리아는 리스테리아 속 균주이고 및 실시양태에서 검출은 리스테리아 속 균주일 수도 있는 박테리아 종을 우선적으로 배양하는 것을 포함한다.
실시양태에서, 적합한 배양 상태 하에 적합한 시간 기간 동안 실시양태에 따라 배지에서 미생물을 배양한 후, 관심의 미생물의 존재는 당 업계에 숙련된 업자들에게 이미 명확한 어느 하나의 다양한 방법에 의해 검출된다. 이런 방법은 PCR 검출, 실시간 PCR 검출, 렉틴 결합, 단순확산, 측면확산, 면역학적 검출, 측방유동, 또는 유체유동 방법을 포함하나 제한되지 않는다. 면역학적 방법은 면역침강, 블랏팅(blotting), 면역방사측정법 또는 마그네틱 리간드와 관련된 면역 면역침강을 포함할 수도 있고, 또는 어느 다른 적합한 방법을 사용할 수도 있다.
특정 실시양태에서 분주한 배양은 가열되거나 또는 그렇지 않으면 시험 전에 미생물을 죽이기 위해 처리된다. 가열된 샘플은 항원의 존재 또는 관심의 미생물의 핵산 서열 진단을 확인하기 위하여 원하는 방법론을 통해 진행된다.
실시양태에서 배지는 이후로 MICT로서 언급된 등록 상표가 붙은 FoodChek's 기술을 존재함과 함께 결합에서 사용될 수도 있다. 광범위하게 MICT 방법론의 사용의 하나의 실시양태에서, 분주한 증균된 배지는 표적 분석물을 죽이기 위하여 가열된다. 가열된 샘플은 병원균의 항원에 결합할 것인 항체에 접합된 나노 사이즈 마그네틱 입자를 포함하는 샘플/접합 패드로 구성된, 측방유동 카세트에 채워진다. 시험은 또한 포획 구간(capture zone)이라 불리는 좁은 스트립(strip)에 이차 항체를 포함한다. 모세관 유동은 샘플 패드에서 접합 패드를 통해 채워진 액체를 가지고 가고, 여기서 표적 박테리아는 항체-코팅된 입자에 결합한다. 이 면역 복합체는 포획 구간에서 시험 스트림으로 흘러간다. 결과는 포획 구간에서 마그네틱 입자의 축적이다. 만약 표적 병원체가 없다면, 면역 복합체는 형성하지 않고, 입자는 포획 라인에 축적되지 않으며, 및 시험 결과는 음성이다. 더욱 다운스트림, 유사한 방식으로 그러나 다른 시약을 가진 스트립된 대조 라인은 시험이 올바르게 수행되었고 및 시약이 아직 활성화되어 있다는 것을 입증한다. 카세트는 저농도의 마그네틱 입자를 검출할 수 있는 기구에서 읽혀진다. 검출기는 이것이 한 그룹의 감지 코일(sensing coil) 아래를 지남으로써 시험 스트랩을 따라 마그네틱장에 있어서 작은 변화를 감지한다. 코일은 방향의 교대에서 손상되고 그 결과 특유의 신호 프로파일이 시험 또는 대조 라인에 결합된 마그네틱 입자의 존재에 의해 발생된다. 기구는 검출 신호와 각각의 개별 카세트에 잡힌 바코드에 암호화된 양성 임계값을 비교하고, 그 후 양성 또는 음성 결과를 보고한다. 결과는 기구의 액체 크리스탈 디스플레이 화면에 나타내어지고 인쇄되며, 또는 관련된 컴퓨터로 옮겨진다. 모든 분석 변수뿐만 아니라, 바코드 또한 시험 이름, 로트 번호(lot number), 및 유효기간을 암호화하고, 이는 시험 결과에 따라 인쇄된다. 이런 검출 방법론의 구체적인 응용 및 사용은 당 업계에 숙련된 업자들에 의해 이미 이해될 것이다. 미생물의 존재 또는 부재를 시험하거나 또는 검출하기 위한 MICT 기술의 실시양태는 하나 또는 그 이상의 US7323139, US6927570, US6607922, US6597176, US6518747, US6483303, US 6046585, US6275031, US6437563에 서술되고, 이들의 전체 발명은 법에 의해 허용될 수 있는 곳에서 여기에서 참조로서 여기에 의해 통합된다.
실시양태에서, 배지는 미생물의 분리 및 확인을 위한 표준 프로토콜(protocols)에 있어서 적어도 첫 증균 단계를 대신할 수 있고 및 실시양태에서 이들은 리스테리아 속 균주이다.
실시양태에 있어서 보충물:
더욱 일련의 실시양태에서 생물학적으로 유효한 농도의: 비킬레이트 마그네슘 이온; 및 산소 제거제를 포함하는 보충물, 배양 배지를 보충하기 위한 조성물이 밝혀진다. 실시양태에서 산소 제거제는 피루베이트 염, 카탈라아제, 싸이오글리콜레이트 염, 시스테인, oxyraseTM , Na2S, 및 FeS으로 구성된 군으로부터 선택된다.
다양한 실시양태에서 조성물은 비-마그네슘 킬레이팅 완충용액 및 생물학적으로 유효한 농도의 하나 또는 그 이상의 마그네슘 염, 리튬 염, 철(III) 염, 및 피루베이트 염의 농축된 혼합물을 포함한다.
대체 가능한 실시양태에서 조성물은 생물학적으로 유효한 조합의 마그네슘 염, 리튬 염, 철(III) 염, 및 피루베이트 염으로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 둘, 셋, 또는 넷, 다섯 구성성분을 포함한다.
실시양태에서 조성물은 선택적 제제를 포함한다. 실시양태에서 조성물은 리스테리아 속 균주를 배양하기 위함이다. 실시양태에서 조성물은 리스테리아 속 균주일 수도 있는 박테리아를 배양하기 위하여 이용된다.
실시양태에 있어서 키트:
더욱 일련의 실시양태에서 박테리아를 배양하기 위한 키트가 밝혀지고 및 실시양태에서 이런 박테리아는 리스테리아 속 균주이다. 실시양태에서 키트는 대체로 비-마그네슘 킬레이팅 완충용액 및 및 산소 제거제를 포함한다. 실시양태에서 산소 제거제는 피루베이트 염, 카탈라아제, 싸이오글리콜레이트 염, 시스테인, oxyraseTM , Na2S, 및 FeS으로 구성된 군으로부터 선택된다.
실시양태에서 키트는 리튬 염, 철(III) 염, 피루베이트 염, 마그네슘 염 및 비-마그네슘 킬레이팅 완충용액으로 구성된 군으로부터 선택된 하나, 둘, 셋 또는 넷 구성성분을 포함한다. 대체 가능한 실시양태에서 키트는 선택적 제제를 또한 포함하고 및 더욱 실시양태에서 박테리아를 배양하기 위한 키트의 사용 방법 또는 박테리아를 우선적으로 배양하는 방법과 같은 지시를 포함한다.
실시양태에서, 실시양태 따라 배지 및 방법은 단일 단계 증균을 가진, 리스테리아 속 균주일 수도 있는, 박테리아의 분리 및 확인을 위한 일반적인 프로토콜에서 사용된 이중 증균 단계를 대신하기에 적합한 것이거나 또는 것일 수도 있다. 실시양태에서 배지는 박테리아의 검증을 위한 필요한 증균 시간이 약 24 시간 또는 그 이하로 감소되도록 하거나 또는 할 수도 있고 및 실시양태에서 증균 시간이 약 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15 시간보다 적게 되게 할 수도 있다. 실시양태에서 단일 라운드(round)의 배양은 가장 최근 기술에 요구되는 민감도를 도달하기에 충분하고, 이는 배양의 약 21 시간, 22 시간, 23 시간 또는 24 시간에 약 103 내지 104 cfu/ml 사이의 수준에서 박테리아를 검출할 수도 있다. 실시양태에서 심지어 한 주 초기 접종제를 가지고 이들 결과를 달성하는 것이 가능하다.
실시예
하기 실시예의 예시는 설명의 방법으로 기술되었으며, 이에 한정되지 않는다.
일예시에 있어서, 기술된 배지와 이것의 리스테리아를 배양하기 위한 용도가 있다.
| 성분명 | 제조사 | 양(g/L) |
| 파이톤(Phytone) | BD BBL (211906) | 5 |
| 트립톤(Tryptone) | Oxoid (LP0042) | 5 |
| 비프 추출물(Beef extract) | BD BBL (212303) | 5 |
| 효모 추출물(Yeast extract) | BD Bacto (212750) | 5 |
| Mops-나트륨염(Mops-sodium salt) | Sigma (M9381) | 13.7 |
| Mops-자유 산(Mops-free acid) | Sigma (M1254) | 8.5 |
| 구연산철 III(Ferric citrate III) | Sigma (F6129) | 0.5 |
| 염화리튬(Lithium chloride) | Sigma (L4408) | 8 |
| MgS04 | BDH (BDH0246) | 2 |
| 피루브산나트륨(Sodium pyruvate) | Sigma (15990) | 1 |
| 선택적 증균 첨가제* 다음을 포함: |
Oxoid (SR0141E) | 2.7 mL |
| 사이클로헥사마이드(Cycloheximide) 날리딕스산(Nalidixic acid) 아크리플라빈 하이드로클로라이드(Acriflavine hydrochloride) |
66-81-9 3374-05-8 8048-52-0 |
33.75 mg 27 mg 10.125 mg |
*하나의 바이알(vial)이 지시에 따라 재구성되고, 1 L의 리스테리아 배지에 내용물 2.7 ml를 첨가한다.
첨가제와 함께 증균 배지를 110℃에서 15분 동안 멸균한다.
추가적인 실시예의 연속에서 배지, 이의 제조방법 및 용도가 개시되어 있다.
시약: 아테로 리스테리아 증균 배지(Actero Listeria Enrichment Media) 단일 단계 증균(in a single-step enrichment)에서 리스테리아 종의 성장과 회복에 특이적으로 최적화된 배지. 예시에 따라서 배지는 두 가지 형식으로 제공된다: 500 g의 병(bottle) 및 각각에 4.9 g의 파우더가 포함된 20개의 개별적 파우치.
부가적인 첨가제 및 시약: 증류된/탈이온화된, 멸균 증류수. 모든 소스.; 데이-엔클레이(Dey-Engley, D/E) 중화 배지(Lab M Limited, Lancashire, UK)는 멸균과 위생의 효율을 평가하기 위해 사용되었다. 변형된 옥스포드 아가(Modified Oxford agar, MOX; Difco Becton Dickinson, New Jersey, 미국).; 래피드 '엘, 모노 아가(Rapid'L.mono agar, RLM; Bio-Rad, Missisauga, Ontario, 캐나다)는 리스테리아 종 특히, 음식과 환경 샘플에서 유래한 리스테리아 모노사이토제네스(L. monocytogenes)의 탐지, 숫자 세기, 감별을 위한 색소 배지이다; 생화학 시험 패널 리스테리아 API 시스템(Biochemical test panel Listeria API® system, Biomerieux, Marcy-L?toile, 프랑스); D/E로 미리 적신(pre-mistened) 비-살균성 8×4×0.3 cm 멸균 셀룰로오스 샘플링 스폰지; 필터된 멸균 스토마처 백(Filtered sterile stomacher bags); 다양한 소스에서 가용한 캡을 가진 폴리프로필렌 튜브(Polypropylene tubes); 일회용 트랜스퍼 파이펫(Disposable transfer pipettes). 모든 소스; 플라스틱 접종 니들(inouculating needles) 및 10 μL 보정된 루프(calibrated loops). 모든 소스.
장치 : 스토마처 시워드 400 서큘레이터(Stomacher Seward 400 Circulator, Seward, London, 영국).- 증균 배지에서 스폰지 환경 샘플의 완전한 혼합을 위해 사용됨: 마이크로파이펫 및 멸균 일회용 팁(tips); 정지 배양 심포니(Stationary incubator Symphony™, VWR, 미국) 또는 이와 동등 29℃±0.5℃를 제공하기 위함; 정지 배양기, 모델 1555(Stationary incubator, model 1555, VWR, USA) 또는 이와 동등. 35℃±2℃를 제공하기 위함.
배지의 일반적인 제조방법 : 아테로 리스테리아를 제조하기 위하여, 1리터의 증류수에 파우더 53.8 g을 서스펜드 한다. 혼합물을 100℃로 열을 가하고, 파우더가 완전히 용해될 때까지 일관되게 교반한다(약 35분). 최종 용기로 옮겨서 110℃에서 15분 동안 고압살균 한다. 만약 배지가 제조된 후 바로 이용된다면, 배지를 고 압살균하는 것은 불필요하다. 이 경우 멸균 증류수의 이용이 추천된다.
샘플 제조 : 환경 스폰지 샘플을 제조하기 위해, 중화된 D/E 배지로 5번 수직, 5번 수평(위아래 또는 측면에서 측면이 한번으로 간주된다.)으로 적신 비-살균성 셀룰로오스 샘플링 스폰지를 이용하여 100 cm2의 환경 표면을 닦았다. 멸균된 샘플 백에 각각의 스폰지를 두었고, 시험 될 때까지 4℃±2℃를 유지하였다.
분석 : 29±0.5℃에서 미리 가온하고, 90 ml의 아테로 리스테리아를 단일 스폰지 샘플에 첨가하여, 30초 동안 스토마치(stomach)하고, 29±0.5℃에서 24시간 동안 증균 하였다. 스토마칭 대신에 손으로 혼합하는 것도 가용하다. 손으로 혼합하기 위해서는, 약 1분 동안 각각의 스폰지를 마사지한다. 증균 마지막 시기에는 MOX 및/또는 RLM 아가 플레이트에서 직접적으로 샘플을 스트래킹(streak)한다. 추정되는 리스테리아 콜로니를 MLG 8.07 (12)에 의해 추천되어 확인하거나, 이것들을 확인하기 위해 독립적인 실험실에 송부한다.
이해 및 결과 보고서 : 총 배양 48±2시간 후에, MOX 및/또는 RPM 아가 플레이트에서 확인되는 리스테리아의 형태학적 형태의 추정 콜로니가 없다면, 샘플을 리스테리아의 음성으로 간주한다. 총 배양 48±2시간 후에, MOX 및/또는 RPM 아가 플레이트에서 확인되는 리스테리아의 형태학적 형태의 추정 콜로니가 있다면, 샘플을 리스테리아의 잠재적인 양성으로 간주한다. 추정되는 콜리니는 반드시 USDA FSIS 미생물 실험 가이드북 챕터 8.07(USDA FSIS Microbiology Laboratory Guidebook Chapter 8.07)에 따라서 확인되어야 하고, 이것의 내용 법률적으로 허용되는 전체가 본 명세서에 포함되어 있다.
그 외 본 연구에서 사용된 첨가제, 시약 및 장치: 홀스 블러드 오버레이 아가 플레이트(Horse blood overlay agar plates, HBO 또는 HL agar; Quelab Inc., Quebec, 캐나다); 락토바실리 M.R.S 배지(Lactobacilli M.R.S. Broth, MRS; Quelab Inc., Quebec, 캐나다); 변형된 버몬트 대학 배지(Modified University of Vermont broth, UVM; Quelab Inc, Quebec, 캐나다)-은 리스네리아 모노사이토제네스(L. monocytogenes)의 선택적 분리 및 증균에 이용된다; 모폴리네프로판설포닉산-완충된 리스테리아 증균 배지(Morpholinepropanesulfonic acid-buffered Listeria enrichment broth, MOPS-BLEB; Oxoid LTD, Ontario, 캐나다); 0.6% 효모 추출물(TSA-YE; Bacto™ Yeast Extract; BD Diagnostics, New Jersey, 미국) 함유 트립티케이스 소이 아가(Trypticase Soy agar, TSA; Quelab Inc., Quebec, 캐나다); 5% 양 피(sheep blood, blood agar; BBL™Stacker™, BD Diagnostics 제공, New Jersey, 미국)함유 트립티케이스 소이 아가 플레이트; 0.6% 효모 추출물(TSB-YE; Bacto™ Yeast Extract, BD Diagnostics, New Jersey, USA)함유 트립티캐이스 소이 브로스(Trypticase Soy Broth, TSB; Quelab Inc., Quebec, Canada); 스토마처 시워드 서큘레이터(stomacher Seward Circulator 3500, Seward, London, 영국).- 증균 배지에서 스폰지 환경 샘플의 완전한 혼합을 위해 사용됨; 보텍스 믹서(Vortex mixer, VWR, 미국).
내부 검증 연구: 다음의 검증 연구가 FoodChek Systems Inc의 자회사인 막시베트(Maxivet Inc.)의 실험실에서 수행되었다.
견고성 시험( Robustness Testing ): 견고성(ruggedeness) 시험은 두 가지 방법 파라미터(배양 온도 및 시간)에서의 변화 효과를 평가하기 위해 수행되었고, 이것은 아테로 리스테리아의 행동에 영향을 미칠 수 있다. 견고성 변수 및 이들 각각의 범위는 표 1에 나타내었다.
방법론: 각각의 범위 조건은 순수 배양을 이용하여 평가되었다. 하나의 타겟 종인 리스테리아 모노사이토제네스(L. monocytogenes) HPB 5949 및 비-타겟 종인, 엔테로코쿠스 패칼리스(E. faecalis) ATCC 19433을, 시험하였다.
리스테리아 모노사이토제네스 HPB 5949를 블러드 아가 플레이트에서 스트리킹하였고, 하루밤 동안 35℃±1℃에서 배양하였다. 몇몇 타겟 종의 콜로니를 9 mL 의 TSB-YE에 옮겨 6-7시간 동안 35℃에 두었다. 배양액은 신선한 TSB-YE에서 1:10으로 희석되었고, 동일한 온도에서 하루밤 동안 배양되었다. 그 다음에 분획된 접종 수준(샘플당 < 1 CFU)을 얻기 위하여 배양액을 ALEM 배지에서 희석하였다.
비-타겟 종에서는 타겟 종 생물에 비해 약 10배 정도 더 농축된 접종 수준인 것을 제외하고는 동일한 방법이 이용되었다.
열(10) 복제(replicates)의 복제 및 5 복제의 비-타겟 박테리움에 대해 각각의 파라미터를 측정하였다
증균 시기의 마지막에는, 리스테리아 성장을 확인하기 위해 MOX 및 RLM 아가 플레이트에 샘플을 스트리킹하였다.
결과 : 극단적인 조건의 dPOD 값 사이의 신뢰구간이 0을 포함하고 있기 때문에(표 7), POD 분석에 따라서 각각 분석된 파라미터 사이의 유의적인 차이가 관찰되지 않았다. 그러므로 리스테리아 모노사이토제네스 HPB 5949 를 회복하는 Actero 배지의 능력은 시험된 범위의 온도 및 시간 전체에 영향을 받지 않았다.
ALEM 샘플에서의 비-타겟 종인 엔테로코쿠스 패칼리스 ATCC 19433의 존재는 모든 케이스에서 탐지되지 않았다(데이터는 나타내지 않음).
aN- 테스트 부분의 수;
bx- 양성 테스트 부분의 수;
cPOD(A)- 전체 시도 수로 나눈 조건 A 양성 결과;
dPOD(B)- 전체 시도 수로 나눈 조건 B 양성 결과;
edPOD(AB)- 조건 A 및 B POD 값 사이의 차이;
f95% CI- 95% 신뢰구간 (만약 95% CI dPOD 값이 0을 포함하지 않는다며, 차이는 5% 수준에서 통계적 유의성을 갖는다.).
포용성( Inclusivity ): 54종(표 8)의 다양한 리스테리아를 증균하기 위한 아테로 리스테리아의 능력을 시험하기 위해, 인간 병원균인 리스테리아 모노사이토제네스(8개의 가장 일반적인 혈정형에 속하는 33 분리주)에 강조를 둔 리스테리아 속의 6개의 종을 분석하였다.
방법론: 모든 리스테리아 균주는 블러드 아가 플레이트에 스트리킹 되었고, 35℃에서 하룻밤 동안 배양되었다. 몇몇 콜로니를 10 mL 의 TSB-YE에 옮겨 6-7시간 동안 35℃에 두었다. 각 배양액은 신선한 TSB-YE에서 1:10으로 희석되었고, 동일한 온도에서 하룻밤 동안 배양되었다. 그 다음에 10 ml의 ALEM 배지에 약 5-20 CFU의 각각의 균주를 배양하기 위해 희석되었다. 각 균주는 29℃ 에서 24시간 동안 트리플리케이트(triplicate)되면서 배양되었다. 증균의 마지막 시기에, 샘플은 리스테리아 성장을 확인하기 위해 MOX 및 RLM 아가 플레이트에서 스트리킹 되었다.
결과 : 포용성 연구는 표 7에 요약되었다. 모든 시험된 54 리스테리아 균주는 ALEM을 이용하여 29℃에서 24시간 동안 성장할 수 있었다.
| # |
속 및 종
( Genus and species ) |
균주 번호
( Strain number ) |
혈청형 | 원천 a | 기원 | 결과 |
| 1 | Listeria grayi | HPB 1114 | - | Health Canada | 데이터 없음 | + |
| 2 | Listeria grayi | B-33023 (ATCC19120) | - | ARS | 친칠라 대변 | + |
| 3 | Listeria grayi | B-33018 (ATCC25401) | - | ARS | 스탠딩 옥수수(standing corn) | + |
| 4 | Listeria grayi | ATCC 700545 | - | ATCC | 데이터 없음 | + |
| 5 | Listeria innocua | HPB 118 | Health Canada | 식품 | + | |
| 6 | Listeria innocua | HPB 34 | - | Health Canada | 데이터 없음 | + |
| 7 | Listeria innocua | B-33314 (OB10387) | ARS | 칠면조/닭/치즈 델리 스틱(deli sticks) | + | |
| 8 | Listeria innocua | MAX-L-3 | IRDA | 필드 분리체(필드 분리체) | + | |
| 9 | Listeria innocua | 512 | - | CRDA | 데이터 없음 | + |
| 10 | Listeria ivanovii | MAX-L-6 | - | IRDA | 필드 분리체 | + |
| 11 | Listeria ivanovii | ATCC 19119 | - | ATCC | did | + |
| 12 | Listeria ivanovii | ATCC BAA-139 | - | ATCC | 씻는 물 | + |
| 13 | Listeria monocytogenes | ATCC 43256 | 1/2b | ATCC | 멕시칸-스타일 치즈 | + |
| 14 | Listeria monocytogenes | MAX-PT-O-2 | 1/2a | IRDA | 거름(흙) | + |
| 15 | Listeria monocytogenes | 513 | 4b | CRDA | 데이터 없음 | + |
| 16 | Listeria monocytogenes | 514 | 4b | CRDA | 데이터 없음 | + |
| 17 | Listeria monocytogenes | 515 | 4b | CRDA | 데이터 없음 | + |
| 18 | Listeria monocytogenes | 516 | 1/2a | CRDA | 데이터 없음 | + |
| 19 | Listeria monocytogenes | 517 | 4b | CRDA | 데이터 없음 | + |
| 20 | Listeria monocytogenes | HPB 5255 | 1/2a | Health Canada | 비프-거름 구덩이 | + |
| 21 | Listeria monocytogenes | HPB 5916 | 1/2b | Health Canada | 식품-상추 | + |
| 22 | Listeria monocytogenes | HPB 5904 | 1/2a | Health Canada | 식품-상추 | + |
| 23 | Listeria monocytogenes | HPB 5254 | 1/2b | Health Canada | 비프-신선한 우리 거름 | + |
| 24 | Listeria monocytogenes | HPB 5089 | 1/2c | Health Canada | 식품- 고기 | + |
| 25 | Listeria monocytogenes | HPB 5949 | 1/2c | Health Canada | 식품 기성식품 고기 | + |
| 26 | Listeria monocytogenes | HPB 5668 | 3a | Health Canada | 식품 | + |
| 27 | Listeria monocytogenes | HPB 4141 | 3b | Health Canada | 식품- 가공되지 않은 칠면조 | + |
| 28 | Listeria monocytogenes | HPB 3 | 4b | Health Canada | 식품-우유 | + |
| 29 | Listeria monocytogenes | HPB 5246 | 4c | Health Canada | 비프- 거름 구덩이 | + |
| 30 | Listeria monocytogenes | SHT-2010-00482 | 1/2a | LEPAQ | 염소 | + |
| 31 | Listeria monocytogenes | STF-2010-02440 | 4b | LEPAQ | 양의 머리 | + |
| 32 | Listeria monocytogenes | SHT-2010-00483 | 1/2a | LEPAQ | 염소 | + |
| 33 | Listeria monocytogenes | SHT-2010-00159 | 1/2a | LEPAQ | 염소 | + |
| 34 | Listeria monocytogenes | STF-2010-03562 | 1/2a | LEPAQ | 우유 | + |
| 35 | Listeria monocytogenes | STF-2010-03540 | 1/2b | LEPAQ | 우유 | + |
| 36 | Listeria monocytogenes | SHT-2009-01007 | 1/2a | LEPAQ | 염소 | + |
| 37 | Listeria monocytogenes | SHY-2010-03610 | 1/2a | LEPAQ | 신선한 조직: 간 및 신장 | + |
| 38 | Listeria monocytogenes | SHY-2010-00373 | 1/2a | LEPAQ | 우유 | + |
| 39 | Listeria monocytogenes | SHT-2010-00055 | 1/2a | LEPAQ | 염소 | + |
| 40 | Listeria monocytogenes | STF-2010-00989 | 1/2a | LEPAQ | 우유 | + |
| 41 | Listeria monocytogenes | SHT-2010-00122 | 1/2a | LEPAQ | 염소 | + |
| 42 | Listeria monocytogenes | SHT-2010-00150 | 1/2a | LEPAQ | 염소 | + |
| 43 | Listeria monocytogenes | STF-2011-00729 | 1/2a | LEPAQ | 우유 | + |
| 44 | Listeria monocytogenes | SHT-2011-00011 | 1/2a | MAPAQ-FMV | 살아있는 양 | + |
| 45 | Listeria monocytogenes | STF-2010-06277-1 | 1/2a | LEPAQ | 죽은 염소 | + |
| 46 | Listeria seeligeri | MAX-L-4 | - | IRDA | 필드 분리체 | + |
| 47 | Listeria seeligeri | MAX-PT-LAI-3 | - | IRDA | 필드 분리체 | + |
| 48 | Listeria seeligeri | HPB 3522 | - | Health Canada | 환경적-필드 물 | + |
| 49 | Listeria seeligeri | HPB 272 | - | Health Canada | 동물-가공되지 않은 우유 | + |
| 50 | Listeria seeligeri | ATCC 35967 | - | ATCC | 흙 | +/- |
| 51 | Listeria welshimeri | HPB 5864 | - | Health Canada | 식품-치킨 방울 | + |
| 52 | Listeria welshimeri | HPB 1137 | - | Health Canada | 식품-치킨 방울 | + |
| 53 | Listeria welshimeri | B-33020 (ATCC35897) | - | ARS | 부패하는 초목 | + |
| 54 | Listeria welshimeri | B-33328 (OB20088) | - | ARS | 소스와 함께 돼지 바베큐 | + |
a ATCC : American Type Culture Collection , Manassas ( VA ), 미국. IRDA : Research and Development Institute for the Agri-Environment, Quebec (QC), 캐나다. CRDA : Food Research and Development Center , St - Hyacinthe ( QC ), 캐나다. LEPAQ: Laboratory of Expertise in Animal Pathology of Quebec, Quebec (QC), 캐나다. ARS : Agricultural Research Service, Washington (DC), 미국. MAPAQ : Ministry of Agriculture, Fisheries and Food of Quebec, Quebec (QC), 캐나다. FMV : Laboratory of Bacteriology, Diagnostic Service, Faculty of Veterinary Medicine, St-Hyacinthe (QC), 캐나다.
+ 리스테리아 속 균주의 전형적 콜로니의 존재.
+/- MOX 및/또는 RLM에서 리스테리아 속 균주의 전형적 콜로니의 존재는 접종제가 배지의 50 CFU/10 mL보다 많을 때 관찰되었다.
독점성( Exclusivity ): 표 9에서 나열된 서른(30) 비-리스테리아 균주는 비-표적 미생물로부터 표적 미생물을 구분하기 위하여 Actero 리스테리아의 능력을 결정하기 위하여 분석되었다. 박테리아 및 효모의 19 다른 속에 속한, 균주가 그들이 리스테리아 속 균주에 가깝게 관련되기 때문에 또는 그들이 동일한 환경에서 발견되기 때문에 선택되었다.
방법론: 각각의 비-리스테리아 균주는 혈액 아가 플레이트에서 스트래킹 되었고 및 35℃에서 하루 동안 배양되었으며, 그 다음 그들은 표 9에 지시된 바와 같와 같이 그들의 최적의 상태에서 배양되었다. 각각의 현탁은 표적 미생물을 위해 사용되는 것보다 10 배 높은 농도로 접종된 10 mL의 ALEM에서 희석되었다. 이 단계는 세 번 수행되었다. 배양은 24시간 동안 29℃에서 길러졌다. 증균 기간의 마지막에, 샘플은 ALEM에서 성장하는 그들의 능력을 입증하기 위하여 MOX 및 RLM 아가 플레이트에서 스트래킹 되었다.
결과: 독점성 연구로부터 획득된 결과는 표 9에 요약된다. 시험된 균주의 어느 하나도 시험된 상태에서 ALEM에서 증균 후 양성 결과를 보고하지 않았다.
| # | 미생물 | 균주번호 | 원천 a | 기원 | 결과 |
| 1 | Alcaligenes faecalis | ATCC 8750 | FMV | 데이터 없음 | 성장 안함 |
| 2 | Bacillus cereus | ATCC 14579 | FMV | 데이터 없음 | 성장 안함 |
| 3 | Bacillus subtilis | MAX-B-1 | Maxivet Inc. | 거름 | 성장 안함 |
| 4 | Campylobacter jejuni ? | - | 데이터 없음 | 필드 분리체 | 성장 안함 |
| 5 | Candida albicans | ATCC 24433 | FMV | 손톱 감염 | 성장 안함 |
| 6 | Carnobacterium divergens | ATCC 35677 | ARS | 진공-포장된 저민 비프 | 성장 안함 |
| 7 | Carnobacterium mobile | ATCC 49516 | ARS | 조사된 치킨 고기 | 성장 안함 |
| 8 | Enterobacter aerogenes | ATCC 13048 | FMV | 가래(sputum) | 성장 안함 |
| 9 | Enterobacter cloacae | ATCC 23355 | FMV | 데이터 없음 | 성장 안함 |
| 10 | Enterococcus faecalis | ATCC 19433 | FMV | 데이터 없음 | 성장 안함 |
| 11 | Enterococcus faecium | ATCC 8459 | ARS | 유제품(치즈) | 성장 안함 |
| 12 | Escherichia coli | ATCC 25922 | FMV | 임상적 분리체 | 성장 안함 |
| 13 | Hafnia alvei | ATCC 13337 | FMV | 스튜어트의 타입(Stuart's type) 32011 | 성장 안함 |
| 14 | Kocuria rhizophila | ATCC 9341 | FMV | 흙 | 성장 안함 |
| 15 | Lactobacillus acidophilus * | ATCC 314 | FMV | 데이터 없음 | 성장 안함 |
| 16 | Lactobacillus casei * | ATCC 393 | ARS | 유제품(치즈) | 성장 안함 |
| 17 | Lactobacillus plantarum * | ATCC 14917 | ARS | 식초에 절인 양배추 | 성장 안함 |
| 18 | Lactococcus lactis * ? | ATCC 7963 | ARS | 데이터 없음 | 성장 안함 |
| 19 | Leuconostoc mesenteroides | ATCC 8086 | ARS | 발효한 스트링빈 | 성장 안함 |
| 20 | Proteus mirabilis | ATCC 29906 | 데이터 없음 | 데이터 없음 | 성장 안함 |
| 21 | Pseudomonas aeroginosa | MSR-0132 | FMV | 흙 | 성장 안함 |
| 22 | Pseudomonas fluorescens | - | FMV | 데이터 없음 | 성장 안함 |
| 23 | Pseudomonas putida | - | Maxivet Inc. | 데이터 없음 | 성장 안함 |
| 24 | Rhodococcus equi * | ATCC 6939 | FMV | 당나귀의 폐 농양 | 성장 안함 |
| 25 | Salmonella typhimurium | ATCC 14028 | 데이터 없음 | 조직, 동물 | 성장 안함 |
| 26 | Staphylococcus aureus | ATCC 25923 | FMV | 임상 분리체 | 성장 안함 |
| 27 | Staphylococcus epidermidis | - | MAPAQ | 데이터 없음 | 성장 안함 |
| 28 | Staphylococcus saprophyticus | - | FMV | 유방염 | 성장 안함 |
| 29 | Staphylococcus xylosus | - | FMV | 유방염 | 성장 안함 |
| 30 | Streptococcus agalactiae | ATCC 13812 | FMV | 데이터 없음 | 성장 안함 |
a ARS : Agricultural Research Service, Washington (DC), 미국. FMV : Laboratory of Bacteriology, Diagnostic Service, Faculty of Veterinary Medicine, St-Hyacinthe (QC), 캐나다. MAPAQ : Ministry of Agriculture, Fisheries and Food of Quebec, Quebec (QC), 캐나다.
*MRS 배지에서 48시간의 배양.
** TSB에서 48시간의 배양.
?5% CO2.
로트 -투- 로트 ( Lot - to - Lot ) 시험: 이 연구의 목적은 제조가 많은 배지 사이에서 일관되는지 확실하게 하는 것이다.
방법론: 세 개의 독립적인 로트는 ALEM의 제조 재현성(reproducibility)를 확인하기 위해 사용되었다. 각각의 로트는 하나의 표적 균주 리스테리아 모노사이토제네스 HPB 5949, 및 하나의 비-표적 균주, 엔테로코쿠스 패칼리스 ATCC 19433를 이용하여 평가되었다.
표적 균주는 혈액 아가 플레이트에서 스트래킹 되었고 및 35℃에서 하루 동안 배양되었다. 어느 정도의 콜로니는 35℃에서 6-7시간 동안 9 mL의 TSB-YE로 옮겨졌다. 박테리아 배양은 신선한 TSB-YE 에서 1:10으로 희석되었고 동일한 온도에서 하루 동안 배양되었다. 배양은 그 다음 10 mL의 ALEM 배지에서 부분 접종제(샘플당 대략 0.5 CFU)를 획득하기 위하여 희석되었다.
비-표적 균주에 대하여, 접종의 수준이 대략 5 CFU(표적 생물체보다 10배 더 농축된)였다는 것을 제외하고 동일한 방법론이 배양하기 위하여 사용되었다. 표적의 십(10) 복제물 및 비-표적 박테리아의 5 복제물이 시험되었다. 배양은 24시간 동안 29℃에서 길러졌다. 증균 기간의 마지막에, 샘플은 MOX 및 RLM 아가 플레이트에서 확인을 위하여 스트래킹 되었다.
결과: 성공적 수행 시험이 Actero 리스테리아의 세 개 다른 집단을 가지고 수행되었다. 제조 과정에 있어서 안정성은 95%의 신뢰구간(confidence interval)을 가지고 POD 분석에 의해 증명되었다(표 10 참조).
aN- 시험 부분의 수;
bx- 양성 시험 부분의 수;
cPOD(A)- 시험의 총 수에 의해 나눠진 lot 1 양성 결과;
dPOD(B)- 시험의 총 수에 의해 나눠진 lot 2 양성 결과;
ePOD(C)- 시험의 총 수에 의해 나눠진 lot 3 양성 결과;
fdPOD(CB)- 극도의 POD 값 사이의 차이(lot 3 POD 값 및 lot 2 POD 값);
g95% CI- 95% 신뢰구간(만약 dPOD 값의 95% CI가 0을 포함하지 않으면, 그러면 차이는 통계학적으로 5% 수준에서 중요하다).
안정성( stability ) 시험: 제조된 ALEM의 안정성은 어두운 곳에서 4℃로 6주의 저장 기간 동안 시험되었다. ALEM의 수행은 표적 및 비-표적 박테리아를 사용하여 0(신선하게 제조된), 2, 4, 및 6주의 저장에서 시험되었다.
방법론: Actero 리스테리아는 하나의 표적 균주 리스테리아 모노사이토제네스 HPB 5949, 및 하나의 비-표적 균주, 엔테로코구스 패칼리스 ATCC 19433를 사용하여 각각의 저장 시간 포인트에서 평가되었다. 표적 균주는 혈액 아가 플레이트에서 스트래킹 되었고 및 35℃에서 하루 동안 배양되었다. 어느 정도의 콜로니는 35℃에서 6-7시간 동안 9 mL의 TSB-YE로 옮겨졌다. 배양은 신선한 TSB-YE 에서 1:10으로 희석되었고 동일한 온도에서 하루 동안 배양되었다. 그 다음 표적 박테리아의 배양은 10 mL의 ALEM 배지에서 부분 접종제(샘플당 0.5 CFU)를 획득하기 위하여 희석되었다. 비-표적 균주에 대하여, 접종의 수준이 대략 5 CFU(표적 생물체보다 10배 더 농축된)였다는 것을 제외하고 동일한 방법론이 배양하기 위하여 사용되었다. 표적의 십(10) 복제물 및 비-표적 박테리아의 5 복제물이 시험되었다. 배양은 24시간 동안 29℃에서 길러졌다. 증균 기간의 마지막에, 샘플은 MOX 및 RLM 아가 플레이트에서 확인을 위하여 스트래킹 되었다.
결과: 안정성 연구의 결과는 표 11에 보고된다. 제조된 ALEM의 두 극단적 저장 시간 포인트의 dPOD 값 사이의 신뢰구간이 신선하게 제조된 배지와 비교하여 45일의 저장 후 배지 수행에 있어서 중요한 변화의 부재를 확인하는 0을 포함한다. 제조된 ALEM의 다른 차이가 나는 저장 시간 포인트 간 또한 중요한 차이가 결정되지 않았다(데이터로 나타내지 않음). 이들 데이터는 제조된 ALEM이 제조 후 45일 동안 수행값에 있어서 어느 중요한 변화 없이 4℃에서 저장될 것임을 가리킨다.
매트릭스( Matrix ) 연구: 매트릭스 연구는 일 증균 단계에서 스테인레스 스틸(stainless steel)로부터 리스테리아 속 균주를 회복하기 위한 ALEM 배지의 능력을 평가하기 위하여 수행되었다.
이 연구를 위해 사용된 분리체(isolates)는 식품으로부터 기원하는 필드 분리체(field isolate)이고 및 Health Canada의 연구 실험실에 의해 잘 특징지어 진다. 리스테리아 모토사이토제테스 균주 HPB 5949 및 리스테리아 이노쿠아(L. innocua) 균주 HPB 118은 스테인레스 스틸 및 플라스틱 표면에서 각각 시험을 입증하기 위해 사용될 것이다.
스테인레스 스틸 플레이트를 사용한 연구는 Maxivet Inc.에서 수행되었고 플라스틱 표면을 사용한 다른 연구는 외부 실험실과 함께 공동으로 수행되었다(섹션(section) “독립적 유효성 연구(Independent Validation Study)” 참조).
aN- 시험 부분의 수;
bI- 접종제의 수준, CFU/부분;
cx- 양성 시험 부분의 수;
dPOD(A)- 시험의 총 수에 의해 나눠진 신선한 제조된 ALEM 양성 결과;
ePOD(B)- 시험의 총 수에 의해 나눠진 14일 저장된 ALEM 양성 결과;
fPOD(C)- 시험의 총 수에 의해 나눠진 30일 저장된 ALEM 양성 결과;
gPOD(D)- 시험의 총 수에 의해 나눠진 45일 저장된 ALEM 양성 결과;
j95% CI- 95% 신뢰구간(만약 dPOD 값의 95% CI가 0을 포함하지 않으면, 그러면 차이는 통계학적으로 5% 수준에서 중요하다).
나타낸 결과에 대한 dPOD(AD)는 극단적 접종제 수준(0.2 및 0.7 CFU/부분)의 POD 값 사이뿐만 아니라 제조된 배지(0 및 45일)의 극단적 저장 시간 포인트의 POD 값 사이의 차이를 나타내는, -0.1이다;
방법론: 접종제 제조: 표적 균주로서 사용된 리스테리아 모노사이토제네스 HPB 5949 및 경쟁제로서 사용된 엔테로코구스 패칼리스 ATCC 19433은 혈액 아가 플레이트에서 스트래킹 되었고 35℃에서 하루 동안 배양되었다. 어느 정도의 콜로니는 35℃에서 6-7시간 동안 10 mL의 TSB-YE로 옮겨졌다. 배양은 신선한 TSB-YE 에서 1:10으로 희석되었고 동일한 온도에서 하루 동안 배양되었다. 배양 후, 배양은 사용까지 4±2℃에서 저장되었다.
표적 균주 및 비-표적 균주의 혼합(비율 1:10)은 스테인레스 스틸 플레이트에서 접종제로서 사용되었다. 혼합물은 다음과 같이 제조되었다. 리스테리아 모노사이토제네스 HPB 5949는 부분적 양성 결과를 획득하기 위하여 10% 탈지분유(no fat dry milk, NFDM)로 희석되었다. 뿐만 아니라, 엔테로코구스 패칼리스 배양은 표적 균주보다 10배 높은 농도를 획득하기 위하여 10% NFDM으로 또한 희석되었다. 각 균주의 박테리아 세포 농도는 그들을 혼합하기 전에 플레이팅함으로써 입증되었다.
환경적 샘플 제조: 100 cm2의 스테인레스 스틸 플레이트는 식품산업에서 전문화된 공급체로부터 획득되었다. 사용 전, 모든 플레이트는 깨끗하게 되고 멸균함으로써 살균되었다.
사십(40) 스테인레스 스틸 플레이트는 전체 표면을 통해 많은 방울을 퍼트림으로써 250 μL 의 혼합 배양(섹션 6.1.1.에 설명된 바와 같이 제조된)으로 접종되었다. 그 다음 다른 10 스테인레스 스틸 플레이트는 음성 대조군으로서 250 μL 의 10% NFDM으로 접종되었다.
표면은 실온에서(22±2℃) 닫혀진 Laminar Flow Biological Safety Cabinet에서 18-20시간 동안 건조되었다. 각각의 플레이트는 대략 5 번 수직 및 5 수평(위 및 아래 또는 양쪽이 1 번으로 고려된다) D/E 배지로 중화하여 사전-촉촉하게 된 비-박테리아 셀룰로오스(cellulose) 샘플링 스폰지(sampling sponge)(Nasco Whirl-Pak Speci-Sponge, Nasco, 미국)를 이용하여 닦아졌다. 각각의 스폰지는 살균 샘플 백(bag)에 놓여졌고 적어도 2시간 동안 상온에서 유지되었다.
닦인 접종된 및 비-접종된 스테인레스 스틸 플레이트로부터 스폰지 샘플의 절반은 하기에 설명된 방법 개발자 프로토콜(ALEM 프로토콜)을 사용하여 분석되었다. 나머지 스폰지 샘플은 참조 방법 MLG 8.07을 사용하여 분석되었다.
ALEM 증균 절차: 한 세트의 스폰지 샘플(20 접종된 및 5 비-접종된)은 다음과 같이 처리되었다: 29±0.5℃에서 미리-데워진 90 mL의 ALEM은 각각의 백에 담긴 단일 스폰지 샘플에 첨가되었다. 샘플은 30초 간 스토마치 되었고 및 24시간 동안 29±0.5℃에서 증균되었다. 증균 기간의 마지막에, 샘플은 10 μL의 보정된 루프(calibrated loop)를 사용하여 MOX 및 RLM 아가 플레이트에서 스트래킹 되었다. 추정상의 리스테리아 모노사이토제네스 콜로니는 MLG 8.07에 의해 추천된 바와 같이 API 리스테리아를 사용하여 빠른 생물학적 시험에 의해 확인되었다.
ALEM 증균 확인: ALEM 프로토콜에 따라 획득된 결과는 USDA-FSIS 참조 프로토콜에 따른 이중 증균에 의해 확인되었다.
때문에 0.1±0.02 mL의 ALEM 증균된 샘플은 10±0.5 mL의 MOPS-BLEB로 옮겨졌고 및 24시간 동안 35±2.0℃에서 배양되었다. MOX 아가 플레이트는 그 다음 바로 스트래킹 되었고 및 24-28시간 동안 35±2.0℃에서 배양되었다.
의심되는 콜로니는 MOX 아가 플레이트에서 HL 아가로 옮겨졌고 및 18-26시간 동안 35±2.0℃에서 배양되었다. API 리스테리아를 이용한 빠른 생물학적 절차는 MLG 8.07에 의해 추천된 바와 같이 추정상의 양성 분리된 콜로니를 확인하기 위하여 수행되었다.
참조 방법 증균 및 확인: 2±0.2분 동안 225±5 mL의 UVM 배지에서 스토마치된 두 번째 세트의 스폰지 샘플(20 접종된 및 5 비-접종된)은 22±2시간 동안 30±2.0℃에서 증균되었다. 그 후 0.1±0.02 mL의 UVM 증균된 샘플은 10±0.5 ml의 MOPS-BLEB로 옮겨졌고 및 18-24±2시간 동안 35±2.0℃에서 배양되었다.
각각의 증균된 기간의 마지막에, 샘플은 MOX 아가 플레이트로 바로 스트래킹 되었다. 모든 추정상의 양성 샘플은 MLG 8.07에 따라 수행된 API 리스테리아를 이용한 빠른 생물학적 절차에 의해 확인되었다.
결과: ALEM 매트릭스 연구로부터의 결과는 표 12에 나타내어 진다. 개발자 방법 프로토콜에 따라 접종되고 처리된 20 샘플 중 십오(15)가 양성으로 확인되었다. 반대로, 오직 5 양성 결과가 참조 방법 프로토콜을 사용하여 진행된 20 접종된 샘플 사이에서 관찰되었다. 거짓 음성은 모든 시험된 샘플에서 발견되지 않았다.
aI- 접종제의 수준, CFU/샘플;
bN- 시험 샘플의 수;
cx- 양성 시험 샘플의 수;
dPOD(CP)- 시험의 총 수에 의해 나눠진 추정상 후보 방법 양성 결과;
ePOD(CC)- 시험의 총 수에 의해 나눠진 확인된 후보 방법 양성 결과;
fPOD(R)- 시험의 총 수에 의해 나눠진 확인된 참조 방법 양성 결과;
gdPOD(C, R)- 후보 방법 결과 및 참조 방법 결과 POD 값 사이의 차이;
hdPOD(CP, CC)- 추정상 후보 방법 결과 및 확인된 후보 방법 결과 POD 값 사이의 차이.
독립적 유효성 연구( Independent Validation Study ): 유효성 연구는 AOAC 감독 하에 외부 공인된 시험 실험실 Agat Laboratories (Sant-Laurent, Quebec, 캐나다)과 공동으로 수행되었다.
방법 비교: 방법 비교 연구는 29℃에서 24시간의 증균 후 플라스틱 플레이트 환경적 샘플로부터 리스테리아 속 균주를 회복하는 ALEM 배지의 능력을 평가하기 위해 수행되었다.
방법론: 접종제 제조: 표적 균주로서 사용된 리스테리아 이노쿠아(L. innocua) MAX-L-3은 혈액 아가 플레이트에서 스트래킹 되었고 및 35℃에서 하루 동안 배양되었다. 어느 정도의 콜로니는 35℃에서 6-7시간 동안 10 mL의 TSB-YE로 옮겨졌다. 배양은 신선한 TSB-YE에서 1:10으로 희석되었고 동일한 온도에서 하루 동안 배양되었다. 배양 후, 배양은 사용까지 4±2℃에서 저장되었다. 배양은 부분 양성 결과를 획득하기 위한 목적에서 저 접종 수준으로 플라스틱 환경적 표면을 접종하기 위하여 10% 탈지분유(NFDM)로 희석되었다. 박테리아 세포 농도는 플레이팅함으로써 접종 후 입증되었다.
샘플 제조: 100 cm2의 플라스틱 플레이트는 식품산업에서 전문화된 공급체로부터 획득되었다. 사용 전, 모든 플레이트는 깨끗하게 되고 멸균함으로써 살균되었다.
사십(40) 플라스틱 플레이트는 전체 표면을 통해 많은 방울을 퍼트림으로써 250 μL 의 리스테리아 이노쿠아 MAX-L-3 배양(섹션 1.1.1.에 설명된 바와 같이 제조된)으로 접종되었다. 그 다음 다른 10 플라스틱 플레이트는 음성 대조군으로서 250 μL 의 10% NFDM으로 접종되었다. 표면은 실온에서(22±2℃) 닫혀진 Laminar Flow Biological Safety Cabinet 안에서 18-20시간 동안 건조되었다.
환경적 스폰지 샘플은 다음과 같이 획득되었다: 각각의 플레이트는 대략 5 번 수직 및 5 수평(위 및 아래 또는 양쪽이 1 번으로 고려된다) D/E 배지로 중화하여 사전-촉촉하게 된 비-박테리아 셀룰로오스 샘플링 스폰지(Nasco Whirl-Pak Speci-Sponge, Nasco, 미국)를 이용하여 닦아졌다. 각각의 스폰지는 살균 샘플 백에 놓여졌고 적어도 2시간 동안 상온에서 유지되었다.
닦인 접종된 및 비-접종된 플라스틱 플레이트로부터 스폰지 샘플의 절반은 하기에 설명된 방법 개발자 프로토콜(ALEM 프로토콜)을 사용하여 분석되었다. 나머지 스폰지 샘플은 참조 방법 MLG 8.07을 사용하여 분석되었다.
ALEM 증균 프로토콜: 한 세트의 스폰지 샘플(20 접종된 및 5 비-접종된)은 다음과 같이 처리되었다: 29±0.5℃에서 미리-데워진 90 mL의 ALEM은 각각의 백에 담긴 단일 스폰지 샘플에 첨가되었다. 샘플은 30초간 스토마치 되었고 및 24시간 동안 29±0.5℃에서 증균되었다. 증균 기간의 마지막에, 샘플은 MOX 및 RLM 아가 플레이트에서 바로 스트래킹 되었다. 추정상의 리스테리아 이노쿠아 콜로니는 MLG 8.07 참조 방법에서 설명된 API 리스테리아를 사용한 빠른 생물학적 시험에 의해 확인되었다.
ALEM 증균 확인: ALEM에 따라 획득된 결과는 USDA-FSIS 참조 프로토콜에 의해 추천된 바와 같이, 이중 증균에 의해 확인되었다.
때문에 0.1±0.02 mL의 ALEM 증균된 샘플은 10±0.5 mL의 MOPS-BLEB로 옮겨졌고 및 24시간 동안 35±2.0℃에서 배양되었다. MOX 아가 플레이트는 그 다음 바로 스트래킹 되었고 및 24-28시간 동안 35±2.0℃에서 배양되었다.
의심되는 콜로니는 MOX 아가 플레이트에서 HL 아가로 옮겨졌고 및 18-26시간 동안 35±2.0℃에서 배양되었다. API 리스테리아를 이용한 빠른 생물학적 절차는 MLG 8.07 참조 방법에 의해 추천된 바와 같이 추정상의 양성 분리된 콜로니를 확인하기 위하여 수행되었다.
참조 방법 증균 및 확인: 두 번째 세트의 스폰지 샘플(20 접종된 및 5 비-접종된)은 2±0.2분 동안 225±5 mL의 UVM 배지에서 스토마치 되었고 및 22±2시간 동안 30±2.0℃에서 증균되었다. 그 후 0.1±0.02 mL의 각각의 UVM 증균된 샘플은 10±0.5 ml의 MOPS-BLEB로 옮겨졌고 및 18-24±2시간 동안 35±2.0℃에서 배양되었다.
각각의 증균된 기간의 마지막에, 샘플은 MOX 아가 플레이트로 바로 스트래킹 되었다. 모든 추정상의 양성 샘플은 MLG 8.07 참조 방법에 따라 API 리스테리아를 이용한 빠른 생물학적 절차에 의해 확인되었다.
결과: 방법 비교 연구로부터의 결과는 표 13에 나타내어진다. POD 및 카이-스퀘어(Chi-square) 비짝지음된 분석에 기반하여, 플라스틱 식품 접촉 표면으로부터 리스테리아 이노쿠아의 회복에 대한 개발자 방법 프로토콜 및 참조 방법 프로토콜 사이에 중요한 차이가 기록되지 않았다. 하나의 거짓 음성 결과 또는 거짓 양성 결과도 보고되지 않았다. 표 14는 Actero 리스테리아 방법에 대한 수행 매개변수를 요약한다.
aI- 접종제의 수준, CFU/샘플;
bN- 시험 샘플의 수;
cx- 양성 시험 샘플의 수;
dPOD(CP)- 시험의 총 수에 의해 나눠진 추정상 후보 방법 양성 결과;
ePOD(CC)- 시험의 총 수에 의해 나눠진 확인된 후보 방법 양성 결과;
fPOD(R)- 시험의 총 수에 의해 나눠진 확인된 참조 방법 양성 결과;
gdPOD(CP)- 후보 방법 결과 및 참조 방법 결과 POD 값 사이의 차이;
hdPOD(CP)- 추정상 후보 방법 결과 및 확인된 후보 방법 결과 POD 값 사이의 차이.
aI- 접종제의 수준, CFU/샘플;
bN- 시험 샘플의 수;
c χ 2는 코크란- 맨틀- 헨첼(Cochran-Mantel-Haenszel) 비짝지음된 분석에 의해 정의된다(3.84보다 많은 χ 2 결과는 95% 신뢰 수준에서 두 방법 사이에 중요한 차이를 가리킨다);
n/a- 받아들여지지 않음.
여기에서 나타낸 실시양태 및 실시예는 청구된 주제의 일반적 자연법칙의 설명이고 및 제한적이지 않다. 이것은 이들 실시양태가 청구된 주제의 범위로부터 벗어남 없이 다양한 응용을 위해 및 다양한 방법으로 이미 변형되고 및/또는 적용될 수 있는 방법이 당 업계에 숙련된 업자들에 의해 이해될 것이다. 여기의 청구항은 모든 대체 가능한 실시예 및 여기의 주제의 상응하는 것을 제한 없이 포함한다고 이해된다. 여기에서 인용된 구, 단어 및 용어는 실례가 되고 및 제한적이지 않다. 법에 의해 허용될 수 있는 곳에서, 여기에서 인용된 모든 참조는 전부 참조로서 여기에서 통합된다. 이것은 여기에서 밝혀진 다른 실시양태의 어느 측면이 가능한 대체할 수 있는 실시양태, 및 특징의 대체 가능한 조합의 범위에 결합될 수도 있고, 이들 변화된 특징의 조합의 모두는 청구된 주제의 일부를 이루는 것으로 이해된다. 특정 실시양태는 어느 하나 또는 그 이상의 밝혀진 요소를 대체 가능하게 포함하거나 또는 구성하거나 또는 제외할 수도 있다.
Claims (24)
- 하기를 포함하는, 리스테리아 속(Listeria spp.) 균주의 선택적 성장을 위한 배양 배지:
효소적으로 분해된 대두박(enzymatically digested soybean meal)의 1 g/L과 10 g/L 사이;
트립톤(tryptone) 1 g/L과10 g/L 사이;
소고기 추출물(beef extract) 1 g/L과 10 g/L 사이;
효모 추출물(yeast extract) 1 g/L과 10 g/L 사이;
MOPS 완충용액(MOPS buffer) 10 g/L과 45 g/L 사이;
구연산철(iron (III) citrate)의 0.1 g/L과 0.5 g/L 사이;
리튬 클로라이드(Lithium Chloride)의 7 g/과 9 g/L 사이;
MgSO4의 0.6 g/L과 5 g/L 사이;
피루브산나트륨(sodium pyruvate)의 1 g/L과 5 g/L 사이;
날리딕스산(nalidixic acid) 10 mg/L과 50 mg/L 사이;
시클로헥사미드(cycloheximide) 15 mg/L과 50 mg/L 사이; 및
염산 아크리플라빈(acriflavine hydrochloride) 6 mg/L과 15 mg/L 사이.
- 제1항에 있어서, 하기를 포함하는 배지:
효소적으로 분해된 대두박의 5 g/L;
트립톤의 5 g/L;
소고기 추출물의 5 g/L;
효모 추출물의 5 g/L;
Mops-나트륨염(Mops-sodium salt)의 7.2 g/L과 26 g/L 사이;
Mops-자유 산(Mops-free acid)의 4.5 g/L과 16.2 g/L 사이;
구연산철(iron (III) citrate)의 0.5 g/L;
리튬 클로라이드의 8 g/L;
MgSO4의 2 g/L;
피루브산나트륨(sodium pyruvate)의 1 g/L;
날리딕스산(nalidixic acid) 25 mg/L과 30 mg/L 사이;
시클로헥사미드(cycloheximide) 30 mg/L과 35 mg/L 사이; 및
염산 아크리플라빈(acriflavine hydrochloride) 10 mg/L과 11 mg/L 사이.
- 제2항에 있어서, 상기 날리딕스산은 27 mg/L의 농도로 존재하고, 상기 시클로헥사미드는 34 mg/L의 농도로 존재하고, 및 상기 염산 아크리플라빈은 10 mg/L의 농도로 존재하는 것을 특징으로 하는 배지.
- 제2항에 있어서, 상기 시클로헥사미드는 33.75 mg/L의 농도로 존재하고, 상기 염산 아크리플라빈은 10.125 mg/L의 농도로 존재하는 것을 특징으로 하는 배지.
- 제1항의 배지에 있는 생물학적 샘플을 배양하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 생물학적 샘플은 식품 물질, 식물 물질 또는 동물 물질인 것을 특징으로 하는, 생물학적 샘플에 존재하는 리스테리아 균주를 선택적으로 배양하는 방법.
- 삭제
- 제5항에 있어서, 상기 배양은 29℃와 37℃사이에서 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제7항에 있어서, 상기 배양은 28.5℃와 39.5℃사이의 온도에서 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제5항에 있어서, 상기 배양은 28시간 또는 그 미만동안 지속되는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제5항에 있어서, 상기 생물학적 샘플은 냉동(frozen), 냉장(refrigerated), 그라운드(ground), 잘게 썬(chopped), 통조림으로 된(canned), 열처리(heat treated), 건조(dried), 보존(preserved) 또는 정제(refined)되는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제5항에 있어서, 상기 리스테리아(Listeria)는 Listeria monocytogenes, Listeria ivanovii, Listeria welshimeri, Listeria seeligeri, Listeria innocua, 및 Listeria grayi로 구성되는 군으로부터 선택되는 균주(strain)를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제5항에 있어서, 상기 배양 단계 후에, 배지에서 리스테리아의 존재를 검출(detecting )하는 것을 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제12항에 있어서, 상기 검출은 PCR, 렉틴 결합(lectin binding), 단순확산(simple diffusion), 측면확산(lateral diffusion), 면역학적 검출(immunological detection), 측방유동(lateral flow), ELISA, 또는 유체유동 단계(flow through step)를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제1항의 배지를 제조하기 위한 성분(1) 및 상기 배지를 사용하여 상기 리스테리아 속(Listeria spp.) 균주를 배양하는 지시(instructions)(2)를 포함하는, 리스테리아 속을 검출하기 위한 키트.
- 제14항에 있어서, 리스테리아 속 균주를 검출하기 위한 장치를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201161507193P | 2011-07-13 | 2011-07-13 | |
| US61/507,193 | 2011-07-13 | ||
| PCT/CA2012/000669 WO2013006960A1 (en) | 2011-07-13 | 2012-07-11 | Culture medium, method for culturing listeria, and method for detecting listeria |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20140146039A KR20140146039A (ko) | 2014-12-24 |
| KR101602286B1 true KR101602286B1 (ko) | 2016-03-10 |
Family
ID=47505459
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020147002736A KR101602286B1 (ko) | 2011-07-13 | 2012-07-11 | 리스테리아를 배양하기 위한 배양 배지, 방법, 및 리스테리아를 검출하기 위한 방법 |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US8883442B2 (ko) |
| EP (1) | EP2732024B1 (ko) |
| JP (2) | JP2014520536A (ko) |
| KR (1) | KR101602286B1 (ko) |
| CN (1) | CN103748211B (ko) |
| AU (1) | AU2012283715B2 (ko) |
| BR (1) | BR112014000414B1 (ko) |
| CA (1) | CA2841820C (ko) |
| DK (1) | DK2732024T3 (ko) |
| ES (1) | ES2627344T3 (ko) |
| GB (1) | GB2497059B8 (ko) |
| HK (1) | HK1191374A1 (ko) |
| HU (1) | HUE034397T2 (ko) |
| WO (1) | WO2013006960A1 (ko) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR102051423B1 (ko) * | 2018-09-21 | 2020-01-08 | 강원대학교산학협력단 | 식중독 병원균 동시성장용 선택농축배지 및 이를 이용한 식중독 병원균의 동시성장 방법 |
| KR102474956B1 (ko) | 2022-06-03 | 2022-12-06 | 주식회사 세니젠 | 리스테리아 속 균주와 리스테리아 모노사이토제니스를 동시 구분 검출할 수 있는 리얼-타임 pcr 키트 |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10604783B2 (en) | 2013-09-30 | 2020-03-31 | Mississippi State University | Vibrio assay methods and kits |
| US20160201107A1 (en) * | 2014-09-30 | 2016-07-14 | Mississippi State University | Salmonella and Listeria Assay Methods and Kits |
| WO2016164407A2 (en) | 2015-04-07 | 2016-10-13 | Polyskope Labs | Detection of one or more pathogens |
| JP6949721B2 (ja) * | 2015-04-29 | 2021-10-13 | スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー | 内蔵型嫌気性環境生成培養装置 |
| CN108138123A (zh) * | 2015-09-02 | 2018-06-08 | 加利福尼亚大学董事会 | 用于调节李斯特菌属某些种中prfa介导的毒力基因活化的方法和组合物 |
| CN105506054A (zh) * | 2016-02-05 | 2016-04-20 | 夏淑平 | 一种产单核李斯特菌选择培养基 |
| KR101996906B1 (ko) * | 2017-02-01 | 2019-07-05 | 한국식품연구원 | 리스테리아 모노사이토제네스 선택 증균 배지 |
| US20200209235A1 (en) * | 2017-06-20 | 2020-07-02 | Salus Discovery, LLC | Lateral flow devices and methods |
| CN107142300B (zh) * | 2017-06-27 | 2020-05-22 | 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所 | 一种李斯特菌增菌培养基及制备方法 |
| NO345440B1 (en) * | 2018-12-21 | 2021-02-01 | Veterinærinstituttet | Method for detecting and enumerating listeria |
| CN114207154A (zh) * | 2019-03-15 | 2022-03-18 | 波利斯科普实验室 | 用于检测一种或多种病原体的选择性富集肉汤 |
| JP7322550B2 (ja) * | 2019-06-28 | 2023-08-08 | 東洋製罐グループホールディングス株式会社 | リステリア属菌用増菌培地、及びリステリア属菌の培養方法 |
Family Cites Families (50)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5658790A (en) | 1986-09-04 | 1997-08-19 | Bio 101, Inc. | Cell culture media formulated in unit dose |
| GB8621911D0 (en) | 1986-09-11 | 1986-10-15 | Lepetit Spa | Increasing ratio of components of anti-biotic complex |
| US5145786A (en) * | 1990-09-21 | 1992-09-08 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Preenriched broth medium for the simultaneous sampling of foods for salmonella and listeria |
| US5296370A (en) | 1990-10-04 | 1994-03-22 | Rutgers, The State University | Repair medium for the resuscitation of injured cells |
| GB9022545D0 (en) | 1990-10-17 | 1990-11-28 | Wellcome Found | Culture medium |
| CA2103932A1 (en) | 1992-11-05 | 1994-05-06 | Ramesh N. Patel | Stereoselective reduction of ketones |
| FR2700778B1 (fr) | 1993-01-27 | 1995-04-14 | Agronomique Inst Nat Rech | Milieu sélectif et procédé pour le dénombrement des bactéries propioniques. |
| US6165776A (en) | 1994-03-30 | 2000-12-26 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Commerce | Selective and differential medium for isolation of Listeria Monocytogenes |
| WO1996014431A1 (en) | 1994-11-07 | 1996-05-17 | Studie-En Samenwerkingverband Vlaams Water | Enzymatic method for detecting coliform bacteria or e. coli |
| CA2170839A1 (en) | 1995-03-01 | 1996-09-02 | Janet Macinnes | Bacterial preparations, method for producing same, and their use as vaccines |
| US5854013A (en) | 1995-09-14 | 1998-12-29 | Infectech, Inc. | Method of determining the presence or absence of a nonparaffinophilic microorganism in a specimen |
| KR19980025375A (ko) * | 1996-10-01 | 1998-07-15 | 백운화 | 리스테리아속 균주의 신속한 동정을 위한 증진배양액 및 배양방법 |
| TW491892B (en) | 1996-11-07 | 2002-06-21 | Srl Inc | Apparatus for detecting microorganism |
| DE19749259A1 (de) | 1997-11-07 | 1999-05-12 | Dade Behring Marburg Gmbh | Verfahren zur Herstellung von funktionalem rekombinantem Gewebsfaktor |
| US6558917B2 (en) | 1998-03-23 | 2003-05-06 | Biosynth Ag | Potentially fluorogenic compounds and plating media containing same |
| US6448060B1 (en) | 2000-03-31 | 2002-09-10 | Council Of Scientific And Industrial Research | Alkalothermophilic bacillus that produces a protease inhibitor |
| KR100390565B1 (ko) | 2000-06-20 | 2003-07-07 | 주식회사 씨티씨바이오 | 만난아제를 생산하는 신규한 바실러스 속 ｗｌ-1 균주 |
| FR2816955B1 (fr) | 2000-11-17 | 2004-11-26 | Biomerieux Sa | Substrat, substrat combines, milieu de culture et procede d'identification de l'espece listeria monocytogenes |
| FR2819266B1 (fr) | 2001-01-05 | 2004-01-16 | Alain Rambach | Milieu de culture pour la detection et/ou la discrimination des bacteries du genre listeria et procede de mise en oeuvre |
| EP1253203A1 (en) * | 2001-04-25 | 2002-10-30 | Becton Dickinson and Company | Rapid resuscitation, growth, capture and detection of microorganisms |
| US7449311B2 (en) | 2001-11-29 | 2008-11-11 | Vrije Universiteit Brussel | Method of producing macedocin by culturing Streptococcus macedonicus |
| DE10233346B4 (de) | 2002-07-23 | 2006-01-12 | Biotest Ag | Gammasterilisierbares Kulturmedium auf der Basis von Caseinsojapeptonagar zum Nachweis von Mikroorganismen in wasserstoffperoxidhaltiger Luft oder wasserstoffperoxidhaltigen Oberflächen |
| US20040121445A1 (en) | 2002-07-31 | 2004-06-24 | Fabien Marino | Cell cultures |
| WO2005005773A2 (en) | 2003-07-14 | 2005-01-20 | The Energy Research Institute | A process for enhanced recovery of crude oil from oil wells using novel microbial consortium |
| WO2005079276A2 (en) | 2004-02-12 | 2005-09-01 | Paradigm Diagnostics, Inc. | Selective growth medium for listeria spp |
| KR100656529B1 (ko) | 2004-04-08 | 2006-12-13 | 한국원자력연구소 | 재조합 대장균 및 상기 대장균을 이용한 폴리하이드록시부티레이트의 대량 생산방법 |
| US8313938B1 (en) | 2004-04-26 | 2012-11-20 | Hardy Diagnostics | Culture medium for cultivation of microorganisms |
| BRPI0419235A (pt) | 2004-12-21 | 2007-12-18 | Usv Ltd | processo de fermentação de densidade de célula baixa para a produção de proteìnas recombinantes heterólogas em microorganismos |
| US7655454B1 (en) | 2005-03-09 | 2010-02-02 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Bacteriological culture medium for Campylobacteriaceae species |
| KR101221239B1 (ko) * | 2005-07-07 | 2013-01-11 | (주)바이오벤 | 녹두 유산균 배양물 및 이의 제조방법, 그리고 이를함유하는 화장료 조성물 |
| BRPI0621077A2 (pt) | 2005-12-19 | 2011-11-29 | Ct Nac Biopreparados | meio nutritivo para cultivo de leveduras |
| EP2035544A2 (en) * | 2006-05-18 | 2009-03-18 | Biobalance Llc | Bacterial strains, compositions including same and probiotic use thereof |
| US8716002B2 (en) | 2006-08-09 | 2014-05-06 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Re-engineering bacteria for ethanol production |
| CA2718477C (en) * | 2008-04-04 | 2014-05-13 | Basf Se | Detection and enumeration of legionella pneumophila |
| FR2935002B1 (fr) * | 2008-08-13 | 2014-09-05 | Biomerieux Sa | Milieu de culture permettant de differencier staphylococcus aureus des staphylococcus a coagulase negative |
| GB0816559D0 (en) * | 2008-09-10 | 2008-10-15 | Solus Biolog Ltd | Composition and Assay Method for the detection of pathogenic bacteria |
| EP2226380B1 (en) | 2009-03-05 | 2014-12-17 | BioSilta Oy | Enzyme-based fed-batch technique in liquid cultures |
| US8859235B2 (en) | 2009-08-14 | 2014-10-14 | Basf Se | Methods in cell cultures, and related inventions, employing certain additives |
| MY161862A (en) | 2009-10-26 | 2017-05-15 | Univ Putra Malaysia (U P M) | Thermostable organic solvent tolerant protease from gram-possitive bacteria |
| RS56572B1 (sr) | 2010-06-03 | 2018-02-28 | Basf Se | Detekcija i brojanje mikroorganizama |
| US20120052493A1 (en) | 2010-08-30 | 2012-03-01 | Samsung Techwin Co., Ltd. | Oligonucleotides for detecting listeria spp. and use thereof |
| US20120052492A1 (en) | 2010-08-30 | 2012-03-01 | Samsung Techwin Co., Ltd. | Oligonucleotides for detecting listeria spp. and use thereof |
| US20120052495A1 (en) | 2010-08-30 | 2012-03-01 | Samsung Techwin Co., Ltd. | Oligonucleotides for detecting listeria monocytogenes and use thereof |
| US8501457B2 (en) | 2010-08-30 | 2013-08-06 | Samsung Techwin Co., Ltd. | Enrichment of Listeria spp |
| JP5704913B2 (ja) * | 2010-12-21 | 2015-04-22 | 日水製薬株式会社 | リステリア属菌検出用簡易培地 |
| WO2012110435A1 (en) | 2011-02-14 | 2012-08-23 | Basf Se | Bio process additives |
| WO2012110960A2 (en) | 2011-02-15 | 2012-08-23 | Council Of Scientific & Industrial Research | A novel isolated bacterial strain of gluconacetobacter oboediens and an optimized economic process for microbial cellulose production therefrom |
| WO2012125948A1 (en) | 2011-03-16 | 2012-09-20 | Biospecifics Technologies Corp. | Compositions and methods for producing clostridial collagenases |
| MX348547B (es) | 2011-12-15 | 2017-06-19 | Serum Inst India Ltd | Nuevo proceso para cultivar bacterias para el mejoramiento del rendimiento de las poliosas capsulares. |
| DK2825633T3 (da) | 2012-03-12 | 2019-05-20 | Hanmi Science Co Ltd | Fremgangsmåde til dyrkning af E. coli-celler til høj densitet |
-
2012
- 2012-07-11 CA CA2841820A patent/CA2841820C/en active Active
- 2012-07-11 ES ES12812126.6T patent/ES2627344T3/es active Active
- 2012-07-11 KR KR1020147002736A patent/KR101602286B1/ko active IP Right Grant
- 2012-07-11 HU HUE12812126A patent/HUE034397T2/en unknown
- 2012-07-11 EP EP12812126.6A patent/EP2732024B1/en active Active
- 2012-07-11 US US13/546,665 patent/US8883442B2/en active Active
- 2012-07-11 JP JP2014519359A patent/JP2014520536A/ja active Pending
- 2012-07-11 CN CN201280034383.3A patent/CN103748211B/zh active Active
- 2012-07-11 WO PCT/CA2012/000669 patent/WO2013006960A1/en active Application Filing
- 2012-07-11 DK DK12812126.6T patent/DK2732024T3/en active
- 2012-07-11 BR BR112014000414-5A patent/BR112014000414B1/pt active IP Right Grant
- 2012-07-11 GB GB1305471.3A patent/GB2497059B8/en not_active Expired - Fee Related
- 2012-07-11 AU AU2012283715A patent/AU2012283715B2/en active Active
-
2014
- 2014-05-15 HK HK14104568.8A patent/HK1191374A1/zh unknown
- 2014-11-10 US US14/537,495 patent/US20150111283A1/en not_active Abandoned
-
2017
- 2017-10-03 JP JP2017193426A patent/JP6640810B2/ja active Active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Acumedia, Catalog No.PI7675, Rev 04(2010.11.)* |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR102051423B1 (ko) * | 2018-09-21 | 2020-01-08 | 강원대학교산학협력단 | 식중독 병원균 동시성장용 선택농축배지 및 이를 이용한 식중독 병원균의 동시성장 방법 |
| KR102474956B1 (ko) | 2022-06-03 | 2022-12-06 | 주식회사 세니젠 | 리스테리아 속 균주와 리스테리아 모노사이토제니스를 동시 구분 검출할 수 있는 리얼-타임 pcr 키트 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20130017569A1 (en) | 2013-01-17 |
| GB2497059B8 (en) | 2016-06-29 |
| EP2732024B1 (en) | 2017-03-01 |
| GB201305471D0 (en) | 2013-05-08 |
| NZ619675A (en) | 2015-10-30 |
| EP2732024A4 (en) | 2015-03-18 |
| DK2732024T3 (en) | 2017-05-22 |
| GB2497059A (en) | 2013-05-29 |
| HUE034397T2 (en) | 2018-02-28 |
| KR20140146039A (ko) | 2014-12-24 |
| EP2732024A1 (en) | 2014-05-21 |
| JP2014520536A (ja) | 2014-08-25 |
| JP6640810B2 (ja) | 2020-02-05 |
| CN103748211A (zh) | 2014-04-23 |
| CN103748211B (zh) | 2016-05-18 |
| BR112014000414B1 (pt) | 2021-06-22 |
| HK1191374A1 (zh) | 2014-07-25 |
| JP2018033462A (ja) | 2018-03-08 |
| US20150111283A1 (en) | 2015-04-23 |
| AU2012283715A1 (en) | 2013-04-11 |
| CA2841820A1 (en) | 2013-01-17 |
| ES2627344T3 (es) | 2017-07-27 |
| BR112014000414A2 (pt) | 2017-02-14 |
| GB2497059B (en) | 2016-06-22 |
| US8883442B2 (en) | 2014-11-11 |
| WO2013006960A1 (en) | 2013-01-17 |
| CA2841820C (en) | 2017-01-03 |
| AU2012283715B2 (en) | 2015-09-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101602286B1 (ko) | 리스테리아를 배양하기 위한 배양 배지, 방법, 및 리스테리아를 검출하기 위한 방법 | |
| Zadernowska et al. | Yersinia enterocolitica: a dangerous, but often ignored, foodborne pathogen | |
| DK2732027T3 (en) | CULTIVATION MEDIUM, METHOD OF CULTIVATING SALMONELLA AND E. COLI AND METHOD OF DETERMINING SALMONELLA AND E. COLI | |
| Ríos-Castillo et al. | Detection by real-time PCR and conventional culture of Salmonella Typhimurium and Listeria monocytogenes adhered to stainless steel surfaces under dry conditions | |
| Lake et al. | Growth performance of Listeria monocytogenes and background microbiota from mushroom processing environments | |
| Soria et al. | Culture based methods to detect Salmonella from different poultry products | |
| Gorski | Phenotypic identification | |
| NZ619675B2 (en) | Culture medium, method for culturing listeria, and method for detecting listeria | |
| EL-GENDI et al. | MOLECULAR CHARACTERIZATION OF SOME PATHOGENIC BACTERIA ISOLATED FROM MAYONNAISE | |
| Claveau et al. | Detection of Listeria spp. using ACTERO listeria enrichment media | |
| Nagpal | Studies on food safety aspect of meat and meat products with respect to FSSAI regulations | |
| CHEV et al. | Assessment of Antibacterial Activity of Lactic Acid Bacteria Isolated from Fermented Foods against Escherichia coli O157: H7 and Proteus penneri and Their Potential as Starter Cultures | |
| Stephens | Culture methods | |
| Ryser et al. | Conventional methods to detect and isolate Listeria monocytogenes | |
| Doughari et al. | Effect of oxidative stress on viability and virulence of environmental Acinetobacter hemolyticus isolates | |
| Zangerl et al. | Culture media used in the detection and enumeration of coagulase-positive staphylococci | |
| Khan | ENUMERATION, DETECTION AND CHARACTERIZATION OF FOOD BORNE BACTERIAL PATHOGENS 6''CONVENTIONAL AI D-MOLECULAR TECHNIQUES | |
| Anprasertporn | Microbiological analyses of eggs and egg products using the MicroFoss system | |
| Han | Quantitative ecology of Salmonella in poultry production and processing | |
| 천호령 | Development of a new selective medium for the detection of Staphylococcus aureus from food |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| A302 | Request for accelerated examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant |