KR101553358B1 - 항알레르기제 - Google Patents

Abstract

항알레르기제를 제공하는 것이다.
프로피온산균 발효물을 유효성분으로 하는 항알레르기제에 관한 것이다.

Description

항알레르기제{ANTI-ALLERGIC AGENT}

본 발명은 항알레르기 제에 관한 것이다.

근년, 음식물, 삼나무 등의 특정 화분, 집 먼지, 화학물질 등에 의한 비염, 결막염, 기관지 천식, 아토피성 피부염 등의 알레르기 증상이 사회 문제로 되어 있다. 특히, 주택의 높은 기밀화와 함께, 시공시의 포름알데히드, 톨루엔 등의 휘발성 유기 화합물의 사용, 애완동물의 실내 사육이나 냉난방의 연속 사용 등에 의해, 진드기, 그 사체나 분말, 곰팡이, 화분, 애완동물의 털 등의 집 먼지나 휘발성 유기 화합물 등의 화학물질 등이 실내에 장기간 존재하여, 알레르기 증상을 일으키는 것이 문제로 되고 있다.

통상, 알레르기 증상의 경감에는 항히스타민이나 스테로이드 등의 약제에 의존하는 면이 크고, 비용이나 부작용 등의 점에서 환자에게 강요되는 부담은 크기 때문에, 비교적 간편하게 안전성이 높은 식품 유래의 것을 섭취함으로써 알레르기 증상을 경감할 수 있는 것이 요망되고 있다.

예를 들면, 감잎 엑기스에서는 피동적 피부 아나필락시스(passive cutaneous anaphylaxis; PCA) 반응과 아토피성 피부염 모델에서의 유효성이 확인되고 있다(특허 문헌 1). 또 미생물로도 이러한 유효성이 확인된 예는 있지만, 이 미생물은 유전자 재조합 대장균이며, 충분히 안전성을 검증할 필요가 있다(특허 문헌 2). 더욱이 알레르기 증상을 경감할 수 있는 식품이나 안전성이 높은 천연 미생물 등의 검색이 요망된다.

그런데, 프로피온산균(Propionibacterium), 락토코카스속(Lactococcus) 유산균이나 류코노스톡속(Leuconostoc) 유산균은 종래부터 음식물 제조에 이용되고 있고, 또 이들 배양액 중에 1,4－디히드록시-2－나프토산(DHNA)이 포함되어 있는 것이 보고되고 있다(특허 문헌 3, 비특허 문헌 1).

특허 문헌 1: 일본국 특허공개 2000－139406호 공보

특허 문헌 2: 일본국 특허공개 2002－154976호 공보

특허 문헌 3: 국제 공개 2003/016544호 팸플릿

비특허 문헌 1: K. Fruichi et al., Applied and Environmental Microbiology, May 2007, p.3137-3143.

본 발명의 목적은 안전성이 높은 항알레르기 제를 제공하는 것이다.

본 발명자들은 알레르기 증상을 저감할 수 있는 물질을 검토한 결과, 프로피온산균 발효물이 진드기 유래 항원에 의한 아토피 같은 피부염 및 피동적 피부 아나필락시스(PCA) 반응을 경감하는 작용을 가지며, 당해 발효물이 항알레르기 제로서 유용함을 발견하였다.

따라서, 본 발명은 프로피온산균 발효물을 유효성분으로 하는 항알레르기 제를 제공하는 것이다.

또, 본 발명은 프로피온산균 발효물의, 항알레르기제의 제조를 위한 사용을 제공하는 것이다.

또, 본 발명은 프로피온산균 발효물을 유효량 투여 또는 섭취하는 알레르기 증상의 예방·개선방법을 제공하는 것이다.

본 발명은 종래부터 식품제조에 이용되고 있는 천연 미생물에 의한 발효물이므로, 안전성이 높은 항알레르기 제로서 유용하다. 또, 미생물을 이용하기 위해 당해 발효물을, 대량으로 생산하는 것도 가능하다.

도 1은 증류수 투여군[증류수], 프로피온산균 발효물 투여군[프로피온산균 발효물], 배지(미발효물) 투여군[배지] 및 피부염을 일으키지 않는 군[비야기]에 있어서의 시험기간 중의 피부염 증상 스코어의 추이를 나타낸다(평균±표준오차로 표기. **P<0.01, *P<0.05, Dunnett의 다중 비교, 증류수 투여군과의 비교).
도 2는 증류수 투여군[증류수], 프로피온산균 발효물 투여군[프로피온산균 발효물], 배지(미발효물) 투여군[배지] 및 피부염을 일으키지 않는 군[비야기]에 있어서의 day14, day21 및 day28의 혈청 중 총IgE 농도를 나타낸다(평균±표준오차로 표기. *P<0.05, Dunnett의 다중 비교, 증류수 투여군과의 비교).
도 3은 증류수 투여군[증류수], 프로피온산균 발효물 투여군[프로피온산균 발효물], 배지(미발효물) 투여군[배지] 및 피부염을 일으키지 않는 군[비야기]에 있어서의 day14, day21 및 day28의 SAA 농도를 나타낸다(평균±표준오차로 표기. *P<0.05, Dunnett의 다중 비교, 증류수 투여군과의 비교).
도 4는 증류수 투여군의 PCA반응을 일으키는 부위[증류수], 프로피온산균 발효물 투여군의 PCA반응을 일으키는 부위[프로피온산균 발효물], 배지 투여군의 PCA반응을 일으키는 부위[배지], 케토티펜푸말산염 투여군의 PCA반응을 일으키는 부위[케토티펜푸말산염] 및 각 군의 PCA반응 비야기 부위[PCA(-)]에 있어서의 누출 에반스 블루량을 나타낸다. (평균±표준오차로 표기.**P<0.01, Dunnett의 다중 비교, 증류수 투여군의 PCA반응을 일으키는 부위[증류수]라고 비교.)
도 5는 시험식 A：산성 음료(플러시보), 시험식 B：프로피온산균 유청 발효물 함유 산성 음료(액티브 1), C：프로피온산균 유청 발효물 함유 요구르트 음료(액티브 2)에 있어서의 각층(角層) 수분량(AU)을 나타낸다(평균±표준 편차로 표기. *P<0.05(paired t-test), #P<0.05(Tukey-Kramer법에 의한 3군간의 다중 비교 검정)).
도 6은 시험식 A：산성 음료(플러시보), 시험식 B：프로피온산균 유청 발효물 함유 산성 음료(액티브 1), C：프로피온산균 유청 발효물 함유 요구르트 음료(액티브 2)에 있어서의 피부 결 스코어(texture score)를 나타낸다(평균±표준 편차로 표기. *P<0.05(paired t-test), #P<0.05(Tukey-Kramer법에 의한 3군간의 다중 비교 검정)).

본 발명에서 이용하는 프로피온산균은 프로피오니박테리움 (Propionibacterium)속, 프로피오니시모나스(Propionicimonas)속, 프로피오니페락스(Propioniferax)속, 프로피오니미크로비움(Propionimicrobium)속, 프로피오니비브리오(Propionivibrio)속 등이 있으며, 특히 제한되지 않지만, 프로피오니박테리움속에 속하는 균이 바람직하다. 프로피오니박테리움속의 균으로서는 예를 들면, 프로피오니박테리움·프로이덴라이히(P.freudenreichii 또는 Propionibacterium freudenreichii), 프로피오니박테리움·토에니(P. thoenii 또는 Propionibacterium thoenii), 프로피오니박테리움·애시디프로피오니치(P. acidipropionici 또는 Propionibacterium acidipropionici), 프로피오니박테리움·젠세니(P. jensenii 또는 Propionibacterium jensenii) 등의 치즈용 프로피온산균；프로피오니박테리움·아비둠(P. avidum), 프로피오니박테리움·아크네스(P. acnes), 프로피오니박테리움·림포필럼(P. lymphophilum), 프로피오니박테리움·그라뉼로삼(P. granulosam), 프로피오니박테리움·아라비노섬(P. arabinosum), 프로피오니박테리움·시클로헥사니컴(P. cyclohexanicum), 프로피오니박테리움 이노컴(Propionibacterium innocuum), 프로피오니박테리움 인터메디움(Propionibacterium intermedium), 프로피오니박테리움 펜토사세움(Propionibacterium pentosaceum), 프로피오니박테리움 페테르소니(Propionibacterium peterssonii), 프로피오니박테리움 프로피오니컴(Propionibacterium propionicum), 프로피오니박테리움 제아에(Propionibacterium zeae), 등을 들 수 있고, 바람직하기로는 치즈용 프로피온산균이다. 이 그 중에서도 프로피오니박테리움·프로이덴라이히가 보다 바람직하고, 특히 프로피오니박테리움·프로이덴라이히(Propionibacterium freudenreichii) ET-3주(2001년 8월 9일자로, 독립행정법인 산업기술 종합연구소 특허 생물 기탁 센터(일본 이바라키현 츠쿠바시 히가시1쵸메 1번지 1 중앙 제 6(우편번호 305－8566))에 수탁 번호 FERM BP-8115로서 기탁되어 있다. 식별을 위한 표시는 ET-3, 부다페스트 조약에 근거하는 기탁에의 이관일은 2002년 7월 11일이다.)가 바람직하다.

본 발명의 프로피온산균 발효물의 제조과정에 있는 배양 공정으로 이용하는 배지의 영양원은 프로피온산균의 배양에 이용되는 것이면 좋고(예를 들면, 특허 문헌 3 및 비특허 문헌 1), 유제품, 효모 엑기스, 대두 엑기스, 트립티케이스(trypticase) 등의 펩톤이나, 이들을 많이 함유하는 식품을 이용할 수 있다. 또는 이들 효소 처리물을 이용해도 좋다. 이 중에서도 유제품의 단백질 분해 효소 처리물을 함유하는 배지가 바람직하다. 당해 배지는 당해 단백질 분해 효소 처리물을 주성분으로 하는 것이 보다 바람직하고, 당해 단백질 분해 효소 분해물의 함유량은 액체 배지 중, 0.1~40질량%가 보다 바람직하고, 1~20질량%가 더욱 바람직하다.

상기 단백질 분해 효소 분해물에 이용되는 유제품으로서는 생유, 농축유, 전분유, 탈지유, 탈지분유, 밀크 단백질(MPC(milk protein concentrate)), 카세인, 훼이, 농축 훼이, 훼이 단백질 농축물(WPC), 훼이 단백 분리물(WPI) 및 훼이분 등을 들 수 있고, 이들을 단독으로 또는 2종 이상 이용해도 좋다. 이 중, 탈지유, 탈지분유, 훼이 농축물, 훼이분, 밀크 단백질이 바람직하다. 이들은 시판품의 것을 사용해도 좋다. 이 유제품의 사용량은 액체 배지 중, 0.1~40질량%가 바람직하고, 1~20질량%가 보다 바람직하다.

또, 상기 단백질 분해 효소는 시판품의 것을 이용하면 좋지만, 프로테아제가 바람직하고, 이 중 중성 프로테아제가 바람직하고, 당해 단백질 분해 효소에는 프로테아제 이외, 펩티다제를 포함하고 있어도 좋다. 사용하는 프로테아제 또는 펩티다제는 특히 한정되지 않지만, 예를 들면, 식품 그레이드 프로테아제는 엔도형 프로테아제, 엑소형 프로테아제, 엑소형 펩티다제/엔도형 프로테아제 복합 효소, 프로테아제/펩티다제 복합 효소를 포함한다. 엔도형 프로테아제는 예를 들면, 키모신(chymosin, EC 3.4.23.4, Maxiren, modified yeast Kluyveromyces lactis 유래, GIST-BROCADES N.V.), AlcalaseR(Bacillus licheniformis 유래, Novo Nordisk사), 에스페라제(B. lentus 유래, Novo Nordisk사), NeutraseR(B. subtilis 유래, Novo Nordisk사), 프로타멕스(박테리아 유래, Novo Nordisk사), PTN6.0S(돼지 췌장 트립신, Novo Nordisk사) 등, 엑소형 펩티다제/엔도형 프로테아제 복합 효소로서는 예를 들면, 플래이버자임(Aspergillus oryzae 유래, Novo Nordisk사) 등을 들 수 있다. 그 밖에, 엔도형 프로테아제로서 예를 들면, 트립신(CAS No.9002-07-7, EC 3.4.21.4, 소 췌장 유래, Product No.T8802, SIGMA), 펩신(CAS No.9001-75-6, EC 3.4.4.1, 돼지 위점막 유래, SIGMA), 키모트립신(Novo Nordisk사/ 베링거사), 프로테아제 N「아마노」G(Bacillus subtilis 유래；아마노 엔자임), 비오프라제(Bacillus subtilis 유래；나가세 산업), 파파인W－40(아마노 엔자임), 엑소형 프로테아제로서 췌장 카르복시펩티다제, 소장점막의 아미노펩티다제 등을 들 수 있다. 또, 프로테아제/펩티다제 복합 효소로서는 예를 들면 프로테아제 A 「아마노」G(Aspergillus oryzae 유래；아마노 엔자임), 우마미자임 G(펩티다제 및 프로테아제, Aspergillus oryzae 유래；아마노 엔자임)를 이용할 수가 있다. 효소의 유래는 상기 기재에 한정되지 않고, 동물, 식물, 미생물의 어느 것에 유래하는 것이어도 좋지만, Aspergillus oryzae 유래의 것이 매우 적합하다. 이들의 효소는 상품명·유래·제조원 등 한정적인 것을 의미하지 않는다. 본 발명의 실시에서 효소는 1종 또는 2종 이상을 조합해도 좋다. 매우 적합한 예로서 프로테아제 A「아마노」G(Aspergillus oryzae 유래；아마노 엔자임)를 들 수가 있지만, 이 예에 한정되지 않는다. 또, 상술의 효소를 조합하여 이용하는 경우에는 각각의 효소 반응은 동시라도 좋고, 따로 따로 행해도 좋다. 이 효소의 사용량은 유제품 중 단백질을 분해할 수 있는 양을 이용하면 좋지만, 유제품 100질량부에 대해서, 0.01~10질량부가 바람직하고, 0.1~10질량부가 보다 바람직하다.

상기 유제품의 단백질 분해 효소 처리물의 제조방법은 유제품에 단백질 분해 효소를 첨가하고, 가온 처리하여 유제품 중의 단백질의 분해를 행한다. 효소 분해 개시시의 pH, 효소 분해 시간, 효소반응온도는 본 발명품을 얻을 수 있다면 특히 한정되지 않는다.

가온 온도는 단백질 분해 효소가 활성화하는 온도이면 좋고, 20~60℃가 바람직하고, 40~60℃가 보다 바람직하고, 40~50℃가 한층 더 바람직하다.

가온 시간은 특히 한정되지 않지만, 1~10시간이 바람직하고, 3~8시간이 보다 바람직하다.

이때, pH (25℃)는 특히 한정되지 않지만, 2~8이 바람직하고, 5~8이 보다 바람직하다. pH를 조정하는 완충제로서는 탄산, 아세테이트, 시트르산, 푸마르산, 말레인산, 젖산, 글루콘산, 타르타르산 등의 유기산염, 인산, 염산, 황산 등의 무기염, 수산화 나트륨 등의 수산화물, 암모니아 또는 암모니아수 등을 들 수 있고, 이들을 단독 또는 2종 이상 조합하여 이용해도 좋다.

상기 유제품의 단백질 분해 효소 분해물의 제조방법에 대해서 아래에 그의 일례를 나타낸다.

탈지분유를 3~6%(w/w) 및 밀크 단백질 3~6%(w/w)의 농도가 되도록 물로 용해 또는 현탁한 용액을 만들고, 당해 용액에 프로테아제를 유제품 100질량부에 대하여 0.25~5질량부 첨가하고, 혼합액을 조제한다. 당해 혼합 용액을 40~50℃, 5~7시간, pH 6~8에서 유제품 중 단백질의 분해를 행하고, 유제품의 프로테아제 처리물(단백질 분해 효소 분해물)을 얻을 수 있다.

또, 훼이분(10w/w%) 및 프로테아제아마노 A「아마노」G(0.07w/w%, 아마노 엔자임사제)를 물에 용해하고, 47℃(pH 6.6)에서 2시간 효소 분해를 행하고, 그 후, 85℃, 10분간 가열함으로써 효소를 실활시켜 유제품의 단백질 분해 효소 분해물을 얻을 수도 있지만, 이 예에 한정되는 것은 아니다.

본 발명에 이용하는 배지에는 상기 유제품의 단백질 분해 효소 처리물 외, 트립티케이스, 피톤, 효모 엑기스, 당질 등의 임의 성분을 적당히 첨가해도 좋고, 이 중 적어도 효모 엑기스를 첨가하는 것이 바람직하고, 이 효모의 사용량은 유제품 100질량부에 대하여, 0.1~10질량부가 바람직하고, 0.5~10질량부가 보다 바람직하다.

당질로서는 젖당 또는 그의 락타아제 처리물, 글루코오스, 과당, 자당 또는 당폐액도 사용할 수가 있고, 이 중 젖당이 바람직하다. 유청 미네랄 등의 미네랄류 등을 함유해도 좋다.

이들 임의 성분은 시판품의 것을 사용하면 좋고, 또는 이들을 많이 함유하는 식품을 이용해도 좋다.

본 발명에 이용하는 배지의 예로서 배지량의 3%(w/w)의 탈지분유(메이지 유업), 3.4%(w/w)의 Milk Protein Concentrate(MPC：Murray Goulburn), 0.25%(w/w)의 프로테아제(프로테아제 A 「아마노」G, 아마노 엔자임 사제)를 적당량의 이온 교환수로 용해하고, 47℃에서 6시간, 탈지분유 및 MPC중 단백질을 효소 분해하고, 분해 후에 0.5%(w/w)의 맥주 효모 엑기스(P2G, 아사히 푸드 앤드 헬스케어 사제)를 첨가하고, pH를 6.8~6.9로 조정한 후, 121℃에서 15분 멸균을 한 것을 들 수가 있다. 또한, 효소 분해시의 pH는 탄산칼륨 용액을 이용하여 6.6~7.0로 조정한다.

또, 훼이분(10w/w%) 및 프로테아제아마노 A 「아마노」G(0.07w/w%, 아마노 엔자임 사제)를 물에 용해하고, 47℃(pH 6.6)에서 2시간 효소 분해를 행하고, 그 후, 85℃, 10분간 가열함으로써 효소를 실활시키고, 다음으로, 맥주 효모 엑기스(0.10w/w%, 아사히 푸드 앤드 헬스케어 사제) 및 황산암모늄(0.27w/w%)을 첨가하여 pH를 6.7로 조정 후, 121℃에서 7분간 멸균한 것도 들 수가 있지만, 이 예에 한정되는 것은 아니다.

본 발명에 있어서 생유, 농축유, 전분유, 탈지유, 탈지분유, 밀크 단백질(MPC(milk protein concentrate)), 카세인, 농축 훼이 및 훼이분 등, 유단백에 유래하는 것을 영양원으로 이용한 프로피온산균 발효물을, 이후 프로피온산균 유단백질 발효물이라고 한다. 또한, 훼이, WPC 또는 WPI 등, 훼이에 유래하는 것을 영양원에 이용한 프로피온산균 발효물을, 이후, 프로피온산균 유청 발효물이라고 한다.

본 발명의 배양 방법은 공지의 각종 호기적 또는 혐기적 배양 방법을 이용할 수가 있지만, 액체 배지에 의한 호기적 또는 혐기적 배양법이 대량 생산의 점에서 바람직하다.

또, 프로피온산균 발효물의 생산 효율을 높이는 점에서, 혐기적 조건하에 있어서의 전배양(前培養)에서 미리 프로피온산균의 균체수를 증가시킨 후에, 혐기적 또는 호기적 조건하에 있어서의 본 배양을 행하는 것이 바람직하다.

프로피온산균은 혐기성인 점에서 혐기적 배양법을 이용하는 것이 보다 바람직하고, 혐기적 배양법을 이용한 후 계속 호기적 배양법을 이용하는 것이 더욱 바람직하다.

혐기적 배양법에 있어서의 배양중의 배양 온도는 20~40℃가 바람직하고, 30~40℃가 보다 바람직하다. 또, 이때의 배지 pH는 중성~약산성, 구체적으로는 5.0~8.0으로 조정하는 것이 바람직하고, 6.0~7.0이 보다 바람직하고, 한층 더 바람직하기로는 6.2~6.8이다. 당해 배양기간은 1~12일간이 바람직하고, 5~12일간이 보다 바람직하다.

또, 호기적 배양법에 있어서의 배양중의 배양 온도는 20~40℃가 바람직하고, 30~40℃가 보다 바람직하다. 또, 이때의 배지 pH는 중성~약산성, 구체적으로는 5.0~8.0로 조정하는 것이 바람직하고, 6.0~7.0이 보다 바람직하고, 한층 더 바람직하기로는 6.2~6.8이다. 당해 배양기간은 1~10일간이 바람직하고, 3~7일간이 보다 바람직하다.

본 발명의 유효성분인 프로피온산균 발효물은 상기 배지를 이용하여 상기 배양 방법에 의해 프로피온산균을 배양하여, 얻어진 것이며, 프로피온산균 및 배양물의 양쪽을 포함한다.

얻어진 프로피온산균 발효물을 그대로 사용해도 좋지만, 적당히 농축이나 희석, 건조 등을 행해도 좋다.

이때, 항산화제를 첨가함으로써, 생성된 DHNA가 2-아미노-3-카르복시-1,4-나프토퀴논(2-amino-3-carboxy-1,4-naphthoquinone(ACNQ))으로 변화하는 것을 막을 수가 있다.

여기서, 항산화제로서는 아스코르브산 또는 그 염, 아스코르브산에스테르, 에리소르빈산 등이 이용되지만, 아스코르브산 또는 그 염이 특히 바람직하다. 당해 염으로서는 나트륨, 칼륨 등의 알칼리 금속염；칼슘, 마그네슘 등의 알칼리토류 금속염；암모니아염 등을 들 수 있다.

항산화제의 함유량은 프로피온산균 발효물 중에 0.001~10질량%, 더욱이 0.01~5질량%, 특히 0.04~3질량%가 바람직하다.

또한, 당해 발효물 중의 프로피온산균은 생균, 사멸균 또는 그 분쇄물의 어느 쪽이라도 좋다.

이때, 당해 발효물 1mL중에 프로피온산균이 1~9×10¹⁰cfu 포함되어 있는 것이 바람직하고, 2~6×10¹⁰ cfu 포함되어 있는 것이 보다 바람직하다. 또는 당해 발효물 1mL 중에 건조질량 환산으로 프로피온산균이 50~500mg 포함되어 있는 것이 바람직하고, 100~300mg 포함되어 있는 것이 보다 바람직하다.

본 발명의 프로피온산균 발효물의 제조법에 대하여 이하에 일례를 나타낸다.

전(前) 배양한 프로피온산균 함유 배양액을 배양액(1~3L)에 접종 후, 본 배양을 행한다.

30~40℃ 배양중, 배양액을 질소 가스 0.1~1 L/min로 스파징하고, 교반속도 50~200rpm로 140~160시간 혐기적 배양을 행한다. 이때, 프로피온산균 접종 후 1~2일 배양한 후, 임의의 배지 조성 성분인 당질을 0.5~20mL/h로 연속적으로 첨가해도 좋다.

더욱이, 상기 혐기적 배양에 계속하여 호기적 배양을 행하는 것이 바람직하고, 이때, 질소 가스를 산소 가스로 대신하여 동일하게 통기하고, 110~130시간 호기적 배양을 행한다.

이와 같이 하여 프로피온산균을 배양하여 프로피온산균의 배양액을 얻고, 더욱이 당해 배양액 중에 항산화제를 첨가하고, 프로피온산균 발효물로서 사용할 수가 있다.

또, 본 발명의 유효성분인 프로피온산균 발효물은 국제 공개 제03/016544호 팸플릿 등에 기재의 공지의 제조법에 준하여 제조할 수도 있다. 본 명세서에 있어서, 「프로피온산균 발효물」에는 프로피온산균에 의한 발효에 의해 얻어진 배양 물자체, 배양물에 항산화제를 첨가한 것 및 그들의 처리물, 예를 들면, 배양물을 여과 또는 제균하여 얻어진 배양 여액이나 배양 상청액, 그 배양 여액 등을 이베퍼레이터 등에 의해 농축한 농축물, 페이스트화물, 희석물 또는 (동결)건조물이 포함된다.

더욱이, 상기와 같이 얻어진 프로피온산균 발효물은 프로피온산균 발효물의 불순물을 제거하거나 또는 유효성분을 농축하기 위해, 활성탄이나 이온교환 수지 등의 흡착 크로마토그래피 등을 이용하여 정제해도 좋다. 또, 프로피온산균 발효물을, 용매로 희석한 가용화분 또는 불용화분으로 할 수도 있다. 용매로서는 물이나 통상 이용되는 용매, 예를 들면, 알코올류, 탄화수소류, 유기산, 유기 염기, 무기산, 무기 염기, 초임계 유체 등을 단독 또는 복수를 조합하여 이용할 수가 있다.

본 발명의 프로피온산균 발효물은 후기 시험예 1에 나타내는 바와 같이, 진드기나 화학물질에 기인하는 알레르기 증상 등을 경감할 수가 있으므로, 비염, 결막염, 기관지 천식 또는 아토피성 피부염을 억제하는 항알레르기제로서 사용할 수가 있다. 아토피성 피부염은 면역이 개재하는 피부의 염증이며, 만성의 가려움을 수반하는 피부의 표층성의 염증의 것을 말한다. 아토피성 피부염에는 IgE가 개재하는 형태(외인형(外因型))도 IgE가 개재하지 않는 형태(내인형(內因型))도 존재한다. 아토피성 피부염의 환경요인으로서는 음식(우유, 계란, 소맥, 피넛, 생선 등), 공기 중의 알레르겐(진드기, 곰팡이, 비듬 등) 등이 있다. 또, 아토피성 피부염의 발증에는 유전적 요인도 시사된다(후쿠시마 마사노리　총감수, 머크 메뉴얼　제18판　일본어판, 일경 BP사 발행, pp.999(2006)).

또, 후기 시험예 3에서 나타내는 바와 같이, 본 발명의 프로피온산균 발효물은 각층 수분량이나 피부 결 스코어가 상승하므로 건조한 피부 상태의 개선제, 즉 피부가 거칠어 지는 것을 예방·개선제로서도 유용하다. 그리고, 아토피성 피부염의 치료 방법의 하나로서 건조한 피부에 대한 보습 등을 행하고, 피부 상태를 개선하는 방법이 있기 때문에도, 당해 피부가 거칠어 지는 것을 예방·개선제는 아토피성 피부염의 치료에 유용하므로, 항알레르기제로서도 사용할 수 있다. 여기서, 「피부가 거칠어 지는 것」이란, 각층 수분량이 감소하여 피부 표면이 건조해지거나 피부 결이 거칠어 지는 것을 말한다.

또, 본 발명의 프로피온산균 발효물은 각종 제제로서도 사용할 수가 있지만, 항알레르기제나 피부가 거칠어 지는 것을 예방·개선제 등을 제조하기 위해 사용하는 것도 가능하다.

당해 항알레르기제 등은 음식물 또는 의약품 중 어느 쪽의 형태에서도 이용할 수가 있다. 예를 들면, 의약으로서 직접 투여함으로써, 또는 특정 보건용 식품 등의 특별용 식품, 영양기능식품이나 서플먼트로서 직접 경구 섭취함으로써, 또는 각종 식품(우유, 발효유, 요구르트, 치즈, 빵, 비스킷, 크래커, 피자 크러스트, 조제분유, 유동식, 환자용 식품, 영양식품, 냉동식품, 가공식품 그 외의 시판 식품 기타)에 첨가하여 이것을 섭취함으로써 이용할 수가 있다. 또, 경관영양(經管榮養), 경장영양(經腸榮養) 등 다른 형태로 섭취해도 좋다.

본 발명의 프로피온산균 발효물을 함유하는 식품에는 물, 단백질, 당질, 지방질, 비타민류, 미네랄류, 유기산, 유기염기, 과즙, 플래이버류 등을 주성분으로서 사용할 수가 있다.

단백질로서는 예를 들면 전지분유, 탈지분유, 부분 탈지분유, 카세인, 훼이분, 훼이 단백질, 훼이 단백질 농축물, 훼이 단백질 분리물, α―카세인, β―카세인, κ－카세인, β―락토글로불린,α―락토알부민, 락토페린, 대두 단백질, 계란 단백질, 고기 단백질 등의 동식물성 단백질, 이들의 분해물; 버터, 유청 미네랄, 크림, 훼이, 비단백형 질소, 시알산, 인지질, 젖당 등의 각종 젖 유래 성분 등을 들 수 있다. 카세인포스포펩티드, 아르기닌, 리신 등의 펩티드나 아미노산을 포함하고 있어도 좋다.

당질로서는 예를 들면, 당류, 가공전분(덱스트린 외, 가용성 전분, 브리티시 스타치, 산화 전분, 전분 에스테르, 전분 에테르 등), 식물섬유 등을 들 수 있다. 지방질로서는 예를 들면, 라드, 어유 등, 이들의 분별유, 수소 첨가유, 에스테르 교환유 등의 동물성 유지；팜유, 홍화유, 옥수수유, 유채유, 야자유, 이들의 분별유, 수소 첨가유, 에스테르 교환유 등의 식물성 유지 등을 들 수 있다.

비타민류로서는 예를 들면, 비타민 A, 캐로틴류, 비타민 B군, 비타민 C, 비타민 D군, 비타민 E, 비타민 K군, 비타민 P, 비타민 Q, 나이아신, 니코틴산, 판토텐산, 비오틴, 이노시톨, 콜린, 엽산 등을 들 수 있고, 미네랄류로서는 예를 들면, 칼슘, 칼륨, 마그네슘, 나트륨, 동, 철, 망간, 아연, 셀렌 등을 들 수 있다. 유기산으로서는 예를 들면, 말레인산, 시트르산, 젖산, 타르타르산, 에리소르빈산 등을 들 수 있다. 이들의 성분은 2종 이상을 조합하여 사용할 수가 있고, 합성품 및/또는 이들을 많이 포함한 식품을 이용해도 좋다. 식품의 형태로서는 고체든 액체든 상관없다. 또 겔상 등이어도 좋다.

또, 본 발명의 프로피온산균 발효물을 의약품으로서 사용하는 경우에는 각종 형태로 투여할 수가 있다. 예를 들면, 정제, 캅셀제, 과립제, 산제, 시럽제 등에 의한 경구투여를 들 수가 있지만, 주사제나 물약 등의 제제로 가공하고, 경관, 경장 등 다른 투여 형태로 투여해도 좋다. 이들의 각종 제제는 통상법에 따라, 주제에 부형제, 결합제, 붕괴제, 활택제, 교미·교취제, 용해 보조제, 현탁제, 코팅제 등의 통상 사용할 수 있는 기존의 보조제를 이용하여 제제화할 수 있다. 또한, 적당량의 비타민, 미네랄, 유기산, 당류, 아미노산, 펩티드류 등을 첨가해도 좋다.

당해 프로피온산균 발효물을 사용하는 경우, 프로피온산균 발효물을 건조질량 환산에 있어서, 사람 체중 1kg당 1일량 10~500mg 섭취하는 것이 바람직하고, 보다 바람직하기로는 50~200mg이다. 또, 균체수 환산에 있어서, 사람 체중 1kg당 1일량 10⁸~10¹²cfu 섭취하는 것이 바람직하고, 보다 바람직하기로는 10⁹~10¹¹ cfu이다. 또, 종래 알려진 항알레르기 작용이나 피부가 거칠어 지는 것을 예방·개선 작용을 가지는 의약품이나 식품과 병용하여 이용해도 좋다.

[실시예]

제조예 1：프로피온산균 발효물의 제조방법

1.재료

＜균주＞

Propionibacterium freudenreichii ET-3주(FERM BP-8115주)

＜전배양 배지＞

배지량의 10%(w/w)의 훼이분(메이지 유업) 및 0.07%(w/w)의 프로테아제(프로테아제 A 「아마노」G：Aspergillus oryzae 유래：아마노 엔자임)를 적당량의 이온 교환수에 용해하여, 47℃에서 3시간, 훼이분 중 단백질을 효소 분해하고, 분해 후에 0.1%(w/w)의 효모 엑기스(P2G：아사히 푸드 앤드 헬스케어)를 첨가하여, pH를 6.8~6.9로 조정한 후, 121℃에서 15분 멸균을 했다. 또한, 효소 분해시의 pH는 탄산칼륨 용액을 이용하여 6.6~7.0로 조정했다.

＜본배양 배지＞

배지량의 3%(w/w)의 탈지분유(메이지유업), 3.4%(w/w)의 Milk Protein Concentrate(MPC：Murray Goulburn), 0.25%의 프로테아제(프로테아제 A 「아마노」G)를 적당량의 이온 교환수에 용해하고, 47℃에서 6시간, 탈지분유 및 MPC 중의 단백질을 효소 분해하여, 분해 후에 0.5%의 효모 엑기스(P2G)를 첨가하고, pH를 6.8~6.9로 조정한 후, 121℃에서 15분 멸균을 했다. 또한 효소 분해시의 pH는 탄산칼륨 용액을 이용하여 6.6~7.0로 조정했다.

2. 제조법

＜전배양＞

전배양 배지 100mL에 ET-3주의 동결균(-80℃ 보존)을 1mL 접종하고, 37℃에서 48시간, 혐기 하에서의 정치 배양을 실시하고, 이 배양액을 본 배양의 스타터로 했다.

＜본 배양＞

본 배양 배지 2000mL에 전배양액을 20mL 접종하여 본 배양을 개시했다. 배양온도를 33℃, pH는 탄산칼륨 수용액으로 6.5로 조정했다. 환기는 질소를 0.4L/min로 스파징하고, 교반속도는 150rpm로 했다. 배양개시 72시간 후부터 1.5M의 젖당용액(121℃, 15분에 멸균이 끝난 상태)을 0.90mL/h로 192시간 걸쳐 흘려 첨가하고, 첨가 종료 후에 통기를 질소로부터 산소로 전환 호기 배양으로 하고, 호기 배양을 120시간 계속하여 배양을 종료하고, 프로피온산균을 포함하는 배양액을 얻었다.

배양 종료후, 프로피온산균에 의해 생성된 DHNA가 ACNQ로 변화하는 것을 막기 위해 발효물 중에 아스코르브산을 공존시키도록, 배양액 1,000mL당, 아스코르브산나트륨 5g을 첨가하고, 프로피온산균 발효물을 얻었다.

상기 발효물의 제조법은 후루이치(古市) 등의 방법(Furuichi et al, Enhancement of 1,4-dihydroxy-2-naphthoic acid production by Propionibacterium freudenreichii ET-3 fed-batch culture. Appl Environ Microbiol. 2007;73(10):3137-43.)에 준하여 행하였다.

상기 조작 후의 프로피온산균 발효물 0.5mL 중에, 프로피온산균은 2.43×10¹⁰ cfu 포함되어 있었다.

상기 조작 후, 하기와 같이 HPLC분석에 의해, 배양액에 포함되는 물질로서 1,4－디히드록시-2－나프토산(1,4-dihydroxy-2-naphthoic acid(DHNA))이 인정되며, 배양액 1L당 0.34mM(68mg/L)였지만, 2-아미노-3-카르복시-1,4-나프토퀴논(2-amino-3-carboxy-1,4-naphthoquinone(ACNQ))은 거의 보이지 않았다.

＜HPLC 분석＞

컬럼： Capcell pak C18 SG120, 충전제 입경 5μm, 내경 4.6mm, 길이 250mm(시세이도사(社))

용리액： 아세트니트릴: 메탄올: 물: 아세테이트= 250: 100: 900: 0.6(5%암모니아수에서 pH 5.6으로 조정)

유속：1mL/min

주입량：10μL

검출기：UV270nm

＜HPLC 샘플 조제법＞

배양액 1mL에 아세톤과 에틸아세테이트를 각각 2.5mL 첨가하여 혼합 후, 2000xg으로 5분간 원심분리하고, 그의 상청액을 멤브레인 필터로 여과했다.

시험예 1：아토피성 피부염의 억제 시험(아토피성 피부염의 동물 실험 모델)

(1) 개략

NC/Nga 마우스암컷, 4주령(일본SLC사)을 구입하고, 다음의 4군으로 나누었다. 즉, 피부염 야기군(증류수 투여군(n=7)[증류수], 비교예로서 액체 배지(이하, 배지라 칭한다) 투여군(n=7)[배지] 및 프로피온산균 발효물(액체) 투여군(n=7)[프로피온산균 발효물]) 및 피부염을 일으키지 않는 군(n=7)[비야기]으로 군 나눈 후, 각종 시료를 시험기간 중(day-7에서 day27)에 걸쳐서 연일 경구투여(1일에 대해 0.5mL/mouse)했다.

각종 시료에 있어서, 프로피온산균 발효물은 상기 제조예 1에서 얻어진 것 (DHNA　68mg/L 및 프로피온산균　4.86×10¹⁰cfu/mL를 함유한다)을 이용하고, 액체 배지는 상기 제조예 1에서 제조한 프로피온산균을 접종하지 않은 살균이 끝난 본 배양 배지를 이용했다.

경구투여 개시 후 7일째(day0)부터 피부염 야기군에 대하여 후술의 방법으로 피부염을 야기하고, 증상의 추이를 스코어화 했다. 또, 피부염 야기 개시 후 14, 21, 28일(day14, 21, 28)에 혈청을 채취하고, 혈청 아밀로이드A(serum amyloid A: SAA) 및 IgE 농도를 ELISA법에 의해 측정했다. SAA 농도에 대해서는 Bio Source사의 ELISA kit를 이용하여 측정했다. 측정은 부속의 취급 설명서에 따랐다. IgE 농도의 측정에 대해서는 Pharmingen사제의 항체를 이용하여 Pharmingen사 추천의 프로토콜을 일부 개변하여 측정했다.

(2) 진드기 파쇄물액의 조제

집먼지 진드기의 전충체(Mite-Dp, L·S·L사제)를 무수 에테르로 탈지 후, 증류수를 첨가하여 초음파 파쇄했다. 그 다음에 수용성 화분을 원심분리하여, 동결건조 후, 증류수를 이용하여 단백질 농도로 4.5mg/mL(BSA환산, BioRAD사의 DC protein assay로 측정)에 조제하여 사용했다.

(3) 피부염의 야기

운노 등의 방법을 개변했다(운노 테츠시 외, 알레르기 50：1152-1162, 2001). 피부염 야기 부위(머리 부분, 귓바퀴부분 및 목부분)를 바리캉으로 제모 후, 4% SDS 수용액을 마우스 전신의 피부염 야기 부위에 브러시로 20회 도포했다(도포량은 약 60μL에 상당). SDS 수용액의 건조 후, 피부염 야기군에는 진드기 파쇄물액을, 피부염을 일으키지 않는 군에는 증류수를 각각 20회 동일하게 도포했다. 상기 조작을 1일 1세트 매일 반복함으로써 피부염을 야기했다.

(4) IgE의 측정

96 웰 플레이트에 1차 항체용의 항IgE항체(Pharmingen사제)를 2μg/mL로 첨가하고, 37℃에서 1시간 정치했다. 0.05% Tween20/PBS(PBS-Tween)로 세정 후, 1%BSA/PBS를 첨가하고, 실온에서 30분간 정치했다. PBS-Tween로 세정 후, 혈청 샘플 및 표준 곡선 작성용 IgE(Pharmingen 사제)를 첨가하고, 실온에서 30분간 정치했다. PBS-Tween로 세정 후, 2차 항체용의 비오틴-항IgE항체(Pharmingen 사제)를 0.5μg/mL로 첨가하고, 실온에서 1시간 정치했다. PBS-Tween로 세정 후, 스트렙토아비딘-HRP(Pharmingen 사제)를 첨가하고, 실온에서 30분간 정치했다. PBS-Tween로 세정 후, TMB＋Substrate Chromogen(DAKO 사제)를 첨가하여 발색 반응을 개시했다. 발색 반응 후, 1N 황산을 첨가하고, 450nm에 있어서의 흡광도를 마이크로플레이트 리더로 측정하여, 혈청 중의 IgE농도를 산출했다.

(5) 결과

도 1에, 피부염 증상 스코어의 추이를 나타낸다. 스코어화는 1) 건피·부스럼딱지가 형성, 2) 발적·출혈, 3) 조직 탈락·찰과상, 4) 부종, 5) 소양 행동의 5항목에 대하여, 0(무증상), 1(경도), 2(중간 정도), 3(중증)의 4단계로 평가하고, 각 마우스에 있어서의 각 스코어의 합계를 산출했다. 그 결과, 증상 스코어에 대해서, 프로피온산균 발효물 투여군에서는 증류수 투여군과 비교하여 유의하게 낮은 값으로 추이하는 것을 알았다(도 1). 한편, 배지 투여군에서도 낮은 값으로 추이했지만, 프로피온산균 발효물 투여군과 비교하면 높은 값이었다.

혈청 중 총 IgE에 대하여, Day14에 있어서, 프로피온산균 발효물 투여군에서는 증류수 투여군과 비교하여 IgE 농도가 유의하게 낮은 것을 알았다(도 2). 한편, 배지 투여군에서는 증류수 투여군과 비교하여 낮았지만, 유의차는 인정되지 않았다.

SAA에 대하여, Day14에 있어서, 프로피온산균 발효물(상기 제조예 1의 것) 투여군에서는 증류수 투여군과 비교하여 유의하게 낮은 것을 알았다(도 3). 한편, 배지 투여군에서는 증류수 투여군보다 낮았지만, 유의차는 인정되지 않았다. 반대로, Day21에 있어서는 프로피온산균 발효물 투여군에서는 증류수 투여군보다 낮았지만 유의차가 인정되지 않았던 한편, 배지 투여군에서는 증류수 투여군보다 유의하게 낮았다. Day28에 있어서는 프로피온산균 발효물 투여군과 배지 투여군의 양자 모두, 증류수 투여군보다 유의하게 낮았다.

이상으로부터, 본 발명과 관계되는 프로피온산균 발효물은 아토피성 피부염의 발증 억제에 효과가 높은 것을 알았다.

시험예 2: 피동적 피부 아나필락시스 반응(passive cutaneous anaphylaxis: PCA반응)의 억제 시험(급성 알레르기 반응의 동물 실험 모델)

(1) 개요

SD래트, 수컷, 7주령을 예비사육 후, 체중에 차이가 없도록 다음의 4군으로 나누었다. 예의 수는 7 또는 8이다. 1군：증류수 투여군, 2군：프로피온산균 발효물 투여군, 3군：배지 투여군, 4군：케토티펜푸말산염(PCA반응의 억제시약, 和光純藥社製)투여군. 각 래트의 등 부분의 뒤쪽을 바리캉으로 제모 후, 여기에 PCA반응을 일으키는 부위 및 PCA반응 비야기 부위를 준비했다. 상기 PCA반응을 일으키는 부위에 항DNP－IgE 항체액(25ng/site, ICN 사제), 상기 PCA반응 비야기 부위에 생리 식염수를 각각 가죽 내에 투여했다.

각 군에 이용되는 각종 시료는 시험예 1과 동일한 것을 이용했다.

IgE 항체 또는 생리 식염수의 투여 24시간 후에, 각 군에 항원으로서 DNP의 결합한 BSA(DNP-BSA:2, 4-dinitrophenylated Bovine Serum Albumin)(1mg/rat, L·S·L 사제)를 에반스 블루(5mg/rat, 和光純藥社製)와 함께 정맥 투여하고, PCA반응을 야기했다. 프로피온산균 발효물, 배지 또는 증류수는 PCA반응 야기의 1, 3, 5시간 전에 각각 10mL/kg(고형분 환산으로 1.7g/kg)로 경구투여하고, 또, 케토티펜푸말산염은 PCA반응 야기 1시간 전에 10mg/kg로 경구투여했다(3,5시간 전은 증류수를 투여했다). PCA반응 야기 30분 후에 래트의 등부분의 피부를 적출하여 1N 수산화 칼륨으로 처리한 후, 아세톤과 0.6N 인산 혼액으로 에반스 블루를 추출하고, 620nm에 있어서의 흡광도로부터 피부에 누출한 에반스 블루량을 산출했다.

(2) 결과

도 4에, 에반스 블루 누출량을 나타낸다. 프로피온산균 발효물 투여군의 PCA반응을 일으키는 부위[프로피온산균 발효물]에서는 증류수 투여군의 PCA반응을 일으키는 부위[증류수]와 비교하여 유의하게 저하하는 것을 알았다(도 4). 한편, 배지 투여군의 PCA반응을 일으키는 부위[배지]에서도 저하했지만, 유의차는 보이지 않았다.

이상으로부터, 본 발명과 관계되는 프로피온산균 발효물은 PCA반응의 억제에 효과가 높은 것을 알았다.

제조예 2：프로피온산균 유청 발효물의 제조방법

1. 재료

＜균주＞

Propionibacterium freudenreichii ET-3주(FERM BP-8115주)

＜전배양 배지 및 본배양 배지＞

제조예 1의 ＜전배양 배지＞의 조제방법과 동일하게 하고, 전배양 배지 및 본배양 배지를 조제했다.

2. 제조방법

＜전배양＞

전배양 배지 100mL에 ET-3주의 동결균(-80℃ 보존)을 1mL 접종하고, 37℃에서 48시간, 혐기 하에서의 정치배양을 실시하고, 이 배양액을 본 배양을 시작으로 했다.

＜본배양＞

본 배양 배지에 전배양액을 2% 접종하여 본 배양을 개시했다. 질소 분위기하에서 배양온도 33~37℃, 66~96시간 계속하여 배양하고, 프로피온산균을 포함하는 배양액(프로피온산균 유청 발효물)을 얻었다. 시험예 3의 시험식 조제에 있어서는 이 배양액 자체를 프로피온산균 유청 발효물로서 이용했다.

시험예 3: 건조 피부의 사람을 대상으로 하는 임상시험

(1) 시험의 개요

＜시험 대상＞

건조 피부를 가지는 20~39세의 여성을 피험자로, 이중맹검 플러시보 컨트롤 시험을 실시했다. 시험 개시 전에, 의사가 관찰한 피부 소견(건조, 인비, 구진, 면포, 농포)에 근거하여, 편향 없이, 피험자를 3군으로 군을 나누었다. 또한, 본시험은 헬싱키 선언(2000년 에든버러 총회에서 수정)을 준수하고, 윤리적 배려의 기초로 실시했다.

＜시험식＞

이하의 3 종류(시험식 A~C)를 준비했다. 상기 제조예 2에서 얻어진 프로피온산균 유청 발효물을 사용했다.

시험식 A：산성 음료(플러시보)[n=30]

물에 각종 성분(펙틴, 젖산, 요구르트 플래이버, 비타민 C, 아스파르테임)을 첨가한 것.

젖 성분 및 유산균을 함유하지 않는다.

시험식 B：프로피온산균 유청 발효물 함유 산성 음료(액티브 1)[n=28]

상기 산성 음료에 상기 프로피온산균 유청 발효물을 1v/v% 첨가한 것.

프로피온산균 유청 발효물에 유래하지 않는 젖 성분 및 유산균을 함유하지 않는다.

시험식 C：프로피온산균 유청 발효물 함유 요구르트 음료(액티브 2)[n=28]

시판의 요구르트를 60v/v%로 하고, 물, 상기 산성 음료(플러시보)에 첨가한 것과 같은 농도의 각종 성분, 슈크로오즈 및 상기 프로피온산균 유청 발효물을 1v/v% 첨가한 것.

또한, 시험식 B 및 시험식 C의 120mL에 포함되는 DHNA 함량은 13.2μg이다.

＜시험식의 섭취기간 및 섭취방법＞

시험식의 섭취 개시일~4주간 후까지의 시험식 섭취 기간, 시험식을 1일 120mL 경구 섭취한다. 시험식 섭취 기간은 시험식 이외의 유산균을 포함하는 식품(요구르트, 발효유 등) 및 올리고당을 포함하는 식품의 섭취, 새로운 서플먼트 섭취의 개시, 새로운 미용 목적의 치료약 섭취나 외용약 사용의 개시, 미용 목적의 시술(화학 필링 등)을 금지했다.

(3) 검사항목

시험식의 섭취 개시일에 있어서의 시험식 섭취 전 및 시험식 섭취 개시부터 4주간 후에, 이하의 검사를 실시했다.

각층(角層) 수분량: 수분계　콜네오미터 CM825(Courage+Khazaka electronic GmbH(Germany)사제)를 이용하여 피험자의 안면 피부의 각층 수분량을 정전 용량값으로서 2회씩 측정하고, 평균치를 산출했다.

피부 결：피부 화상 해석 장치 로보스킨 애널라이저 RSA-100(인포워드 사제)를 이용하여, 피험자의 안면 피부 결을 스코어화 했다.

본 발명에 있어서 이 스코어 값을 피부 결 스코어라 하고, 피부 결 스코어가 높을수록, 피부 결이 잘 정돈된 상태인 것을 나타낸다.

게다가 시험식의 섭취 전후의 측정값에 대해서는 군내의 비교 검정(paired t-test) 및 시험식의 섭취 전후의 측정값의 변화량에 대해서는 3군간의 다중 비교 검정(Tukey-Kramer법)으로 유의차 검정을 행했다.

(4) 결과

결과를 도 5 및 도 6에 나타낸다. 각층 수분량, 피부 결 스코어의 측정값은 모두, 시험식 A：산성 음료(플러시보)의 섭취 전후로 유의한 차이는 보이지 않았다. 그것에 대해, 시험식 B：프로피온산균 유청 발효물 함유 산성 음료(액티브 1), C：프로피온산균 유청 발효물 함유 요구르트 음료(액티브 2)의 섭취 후에는 각층 수분량, 피부 결 스코어의 측정치 상승이 유의하게 관찰되었다. 또, 시험식의 섭취 전후의 측정값의 변화량에 관해서도, 각층 수분량, 피부 결 스코어의 어느 것에 있어서도, 시험식 A 섭취군에 대하여, 시험식 B, 시험식 C의 섭취군은 유의하게 컸다.

이상의 결과로부터, 본 발명의 프로피온산균 발효물은 건조한 피부 상태를 개선하는 효과를 가지는 것을 알았다. 또, 본 발명의 프로피온산균 발효물에 요구르트를 병용해도 동일한 효과를 얻을 수 있는 것도 알았다.

독립행정법인 산업기술 종합연구소 특허생물 기탁센터 FERMBP-8115 20010809

Claims (26)

1. 유제품의 단백질 분해효소 처리물을 함유하는 배지를 이용하여 프로피오니박테리움·프로이덴라이히 ET-3주를 배양한 배양액을 유효성분으로 하는 피부거침 예방·개선제.
2. 삭제
3. 제1항에 있어서, 유제품이 탈지분유, 훼이분 및 밀크 단백질로부터 선택되는 1종 이상의 것인 피부거침 예방·개선제
4. 삭제
5. 삭제
6. 삭제
7. 제1항 또는 제3항에 있어서, 피부거침 예방 개선제가 경구 투여용 또는 경구 섭취용인 것을 특징으로 하는 피부거침 예방·개선제.
   
   
8. 삭제
9. 삭제
10. 삭제
11. 삭제
12. 삭제
13. 삭제
14. 삭제
15. 삭제
16. 삭제
17. 삭제
18. 삭제
19. 삭제
20. 삭제
21. 삭제
22. 삭제
23. 삭제
24. 삭제
25. 삭제
26. 삭제

Images