KR101547996B1 - 상처 치료, 상처 회복 또는 흉터 생성 억제용 피부 외용제 조성물 - Google Patents

상처 치료, 상처 회복 또는 흉터 생성 억제용 피부 외용제 조성물 Download PDF

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서주원
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Abstract

본 발명은 4',6,7-트리메톡시이소플라본(TMF)와 글리시틴을 포함하는 상처치료, 상처 회복 또는 흉터 생성 억제용 조성물에 관한 것으로, 본 조성물은 효과적인 상처 치료, 상처 회복 또는 흉터 생성 억제용 피부 외용 약제 조성물 및 화장료 조성물로 이용될 수 있다.

Description

상처 치료, 상처 회복 또는 흉터 생성 억제용 피부 외용제 조성물{SKIN TOPICAL COMPOSITION FOR TREATING WOUND, RECOVERING WOUND OR PREVENTING FORMING SCAR}
본 발명은 상처 치료, 상처 회복 또는 흉터 생성 억제용 피부 외용제 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는, 글리시틴과 4′,6,7-트리메톡시이소플라본을 유효성분으로 포함하는 상처 치료, 상처 회복 또는 흉터 생성 억제용 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.
인간의 피부는 표피와 진피로 나뉘어져 있다. 표피의 가장 아래에 있는 기저 층에서 새로이 형성된 각질 형성세포는 표피 아래층에서 위층으로 서서히 이동하면서, 약 14일 후에 각질로 변하게 되고, 다시 14일 정도 뒤에는 완전히 노화되어 허물이나 때가 되어 벗겨져 나간다. 이 각질형성세포는 진피층에서 가장 지배적인 세포 유형이며, 유기체와 그 주위환경 사이의 가장 바깥쪽의 세포적 기초를 제공한다. 각질형성세포의 이주능(migration)과 증식능(proliferation)은 피부 손상에 따른 상처 치유에 있어서 중요한 역할을 한다.
플라보노이드는 4,000개가 넘는 페닐벤조피론(phenylbenzopyrones)의 군(class)으로, 이는 식용 가능한 식물에 다양하게 분포되어 있다. 플라보노이드는 항산화, 항염, 항암 작용을 포함하는 다양한 약물학적 활성을 보인다.특히 대두 플라보노이드는 다양한 생물학적 활성을 가지고 있으며 구조의 변이가 쉬워서 좋은 약물 후보이다. 그 중 글리시틴은 골아 세포의 분화를 촉진하고, 콜레스테롤을 낮추는 효과를 보인다고 보고되고 있다.
관련 선행특허로 대한민국 특허등록번호 10-1023400은 천연물인 희렴으로부터 추출된 카우란 골격을 갖는 카디테르펜 화합물을 유효성분으로 포함하는, 상처 치료 또는 상처 치료 촉진용 약학 조성물에 관한 것으로 현저하게 높은 피부줄기세포의 증식능 및 이주능을 나타냄으로써 상처 치료 및 상처 치료 촉진을 위한 활성성분이 기재되어 있다.
본 발명은 상기의 문제점을 해결하고 상기의 필요성에 의하여 안출된 것으로서 본 발명의 목적은 4',6,7-트리메톡시이소플라본(이하 TMF라 한다.)과 4'-하이드록시-6-메톡시이소플라본-7-D-글루코사이드(이하 글리시틴이라 한다.)을 유효성분으로 포함하는 효과적인 상처 치료, 상처 회복, 또는 흉터 생성 억제용 피부 외용제 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명은 상기의 문제점을 해결하고 상기의 필요성에 의해 안출된 것으로서 4',6,7-트리메톡시이소플라본(TMF)와 4'-하이드록시-6-메톡시이소플라본-7- D-글루코사이드(글리시틴)을 포함하는 상처치료 또는 상처회복용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 4',6,7-트리메톡시이소플라본(TMF)와 4'-하이드록시-6-메톡시이소플라본-7- D-글루코사이드(글리시틴)의 혼합비는 1:1인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 다른 일 구현예에 있어서, 상기 약학 조성물은 진피 섬유아세포에서 세포 확산과 이주 및 콜라겐 합성을 촉진하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 또 다른 일 구현예에 있어서, 상기 약학 조성물은 (니코틴 아마이드 아데닌 디뉴클레오티드 인산의 환원형 산화효소 2(이하 NADPH 산화효소 2 또는 NOX 2라 한다.) 및 일산화질소합성효소(이하 NOS라 한다.) 유도를 촉진하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명은 또 4',6,7-트리메톡시이소플라본(TMF)와 4'-하이드록시-6-메톡시이소플라본-7- D-글루코사이드(글리시틴)을 포함하는 흉터 생성 억제용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 4',6,7-트리메톡시이소플라본(TMF)와 4'-하이드록시-6-메톡시이소플라본-7- D-글루코사이드(글리시틴)의 혼합비는 1:1인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 다른 일 구현예에 있어서, 상기 약학 조성물은 진피 섬유아세포에서 세포 확산과 이주 및 콜라겐 합성을 촉진하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 또 다른 일 구현예에 있어서, 상기 약학 조성물은 NADPH 산화효소 2(NOX 2) 및 NOS 유도를 촉진하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 4′,6,7-트리메톡시이소플라본(TMF)와 글리시틴을 포함하는 피부 외용 약제 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 4′,6,7-트리메톡시이소플라본(TMF)와 글리시틴을 포함하는 약제조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 크림, 겔, 패치, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용 약제 조성물을 제공한다. 본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 올리고당, 소르비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘, 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 중량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.
비경구적 사용을 위한 조성물들은 단위량 투약 형태(예를 들어 일회 분량의 앰플)나 몇 회분을 포함하는 작은 병 그리고 적절한 부형제가 첨가된 형태(아래에서 보듯이)로 제공되기도 한다. 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 주입 장치 또는 삽입을 위한 운반 장치의 형태로 있을 수도 있고, 사용 전에 물이나 또 다른 적합한 용액에 타서 원래대로 되게 하도록 건조분말 형태로 존재하기도 한다. 활성 있는 본 발명의 단백질과는 별도로, 조성물은 비경구적으로 적합한 운반체들 그리고/또는 첨가제들을 포함하기도 한다. 본 발명의 조성물은 미세구, 미세캡슐, 나노입자, 리포솜 또는 조절된 방출을 위해 그와 비슷한 것들 속으로 편입되기도 한다. 더 나아가 조성물은 현탁시키거나 용해하거나 안정화하거나 pH를 맞추는 물질, 긴장성을 맞추는 물질, 그리고/또는 분산시키는 물질을 포함할 수도 있다.
본 발명의 4′,6,7-트리메톡시이소플라본(TMF)와 글리시틴을 포함하는 상처치료 또는 상처치료 촉진용 조성물은 피부에 적용할 수 있는 피부 외용제 제형으로서 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용제 형태의 약제조성물로 제조하여 사용할 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물 형태, 투여 경로 및 기간에 따라 다르지만 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 추출물은 1일 0.0001 내지 100mg/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 10mg/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한 번 투여할 수도 있고, 수 회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
또한 본 발명은 4',6,7-트리메톡시이소플라본(TMF)와 4'-하이드록시-6-메톡시이소플라본-7- D-글루코사이드(글리시틴)을 포함하는 흉터 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 4',6,7-트리메톡시이소플라본(TMF)와 4'-하이드록시-6-메톡시이소플라본-7- D-글루코사이드(글리시틴)의 혼합비는 1:1인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 다른 일 구현예에 있어서, 상기 화장료 조성물은 진피 섬유아세포에서 세포 확산과 이주 및 콜라겐 합성을 촉진하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 또 다른 일 구현예에 있어서, 상기 화장료 조성물은 NADPH 산화효소 2(NOX 2) 및 NOS 유도를 촉진하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
상기 화장료 조성물은 화장료 조성물에 통상적으로 포함될 수 있는 성분들을 추가로 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료, 향료 및 담체로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 계면활성제-비함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 또는 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는 상기 화장료 조성물은 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더 등의 제형인 것이 바람직하지만, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에서 알 수 있는 바와 같이 본 발명은 4′,6,7-트리메톡시이소플라본 (TMF)와 글리시틴을 포함하는 상처치료 또는 상처치료 촉진용 피부 외용 조성물에 관한 것으로, 본 조성물은 효과적인 상처치료 또는 상처치료 촉진용 피부 외용 약제 조성물 및 화장료 조성물로 이용될 수 있다.
도 1은 각 실험군에 대한 H&E(헤마톡실린과 에오신) 염색 결과에 대한 그림이다. 도 1a는 바셀린 처리군의 염색 결과이다. 도 1b는 DMSO 처리군의 염색 결과이다. 도 1c는 4′,6,7-트리메톡시이소플라본(TMF) 처리군의 염색 결과이다. 도 1d는 후시딘 처리군의 염색 결과이다. 도 1e는 글리시틴 처리군의 염색 결과이다. 도 1f는 글리시틴과 4′,6,7-트리메톡시이소플라본(TMF) 병용 처리군의 염색 결과이다.
도 2는 각 실험군, 즉 바셀린 처리군, DMSO 처리군, 4′,6,7-트리메톡시이소플라본(TMF) 처리군, 후시딘 처리군, 글리시틴 처리군, 글리시틴과 4′,6,7-트리메톡시이소플라본(TMF) 병용 처리군에 대해 콜라겐을 특징적으로 염색하는 마손 삼색(masson trichrome) 염색 결과이다.
도 3은 활발히 증식하는 세포에서만 발현하는 Ki67 항원을 염색하는 항체를 이용하여 면역화학염색을 수행한 결과이다. 도 3a는 바셀린 처리군, 도 3b는 글리시틴 처리군, 도 3c는 후시딘 처리군, 도 3d는 4′,6,7-트리메톡시이소플라본(TMF) 처리군, 도 3e는 글리시틴과 4′,6,7-트리메톡시이소플라본(TMF) 병용 처리군의 염색 결과이다.
이하 비한정적인 실시예를 이용하여 본 발명을 상세하게 설명한다. 단 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 의도로 기재된 것으로서 본 발명의 범위는 하기 실시예에 의하여 제한되는 것으로 해석되지 아니한다.
실시예 1. 실험동물의 선택 및 사육
4주령에서 6주령의 BALB/C 마우스를 실험 수행 전에 본 발명자의 실험실에서 2주간 병원균이 없는 조건에 두었다. 실험 동물은 환경 조건(빛/암실 주기, 온도와 습도) 이 제어된 상태에서 사육되었고, 실험 도중에는 마우스가 음식과 물에 자유롭게 접근할 수 있게 하였다. 모든 동물 실험과정은 제주대학교의 동물보호사용위원회(IACUC)의 가이드에 따라 수행하였다.
실시예 2. 상처 회복 실험 및 분석
마우스는 케타민(100mg/kg)의 복강 내 주사법을 사용해 마취시켰다. 등 표면은 레이저에 의해 면도했고, 8mm 지름의 생체검사 펀치를 사용하여 마우스의 등 표면에 8mm 지름의 원형 전층 절개 상처를 만들었다. 마우스는 상처 부위에 적용된 시약에 따라 6개의 그룹으로 나누었다(n=6)
상처 부위에 사용한 시약은 다음과 같다. 1) 바셀린(유니레버코리아), 2) DMSO(Amresco, Ohio, USA), 3) 후시딘(동화약품), 4) 글리시틴(Glycitin)(Sigma, St.Louis, MO, USA), 5) 4'6,7-트리메톡시이소플라본(TMF)(Extrasynthese, Cedex, France), 6) 글리시틴+4′,6,7-트리메톡시이소플라본(TMF)
다음 비율에 따라 바셀린과 섞어서 동량으로 한 혼합물을 각 실험군에 매일 처리하였다.
a) 글리시틴 2mM, b) 4′,6,7-트리메톡시이소플라본(TMF) 400μM, c) 글리시틴(200μM)+4′,6,7-트리메톡시이소플라본(TMF)(200μM)을 각각 처리하였으며, d) 같은 부피의 DMSO를 음성 대조군으로, e) 시판 중인 후시딘 동량을 양성 대조군으로, f) 바셀린 동량을 직접 도포하였다. 혼합물은 상처에 직접 플라스틱 스틱으로 도포하였다.(약 50μg/mouse/일)
매일 디지털카메라(Sony, Japan)로 상처 부위의 디지털 사진을 얻었다. 상처 사진은 이미지 분석 프로그램(Image J, National Institutes of Health, Bethesda, MD, USA)에 의해 그 사이즈를 분석했다.
실시예 3. 면역조직화학분석
상처 부위의 조직학적 분석을 위해 마우스는 9, 12, 15, 18일에 안락사시켰다. 그 후, 상처 부위는 잘라내고, 2등분 한 후, 10% 포르말린으로 고정시켰다. 이렇게 처리한 시료들은 H&E(헤마톡실린과 에오신) 염색, 마손 삼색(Masson Trichrome) 염색과 Ki 67의 통상의 조직학적 과정을 거쳤다.
H&E 염색한 결과 음성대조군인 바셀린 처리군의 경우 9일까지는 상처 부위에 괴사와 염증 반응 및 과립화가 계속 진행중이며 진피 폐쇄(청색 화살표)가 완전히 일어나지 않았고, 표피 폐쇄(황색 화살표)도 진행 중이다. DMSO 처리군의 경우 표피 폐쇄는 일어났으나 진피 폐쇄는 일어나지 않았다. 바셀린 처리군과 DMSO 처리군 외의 다른 모든 군에서는 진피 폐쇄와 표피 폐쇄가 모두 일어났다. 12일 째에는 모든 군에서 표피와 진피의 구분이 확실해졌으나 4′,6,7-트리메톡시이소플라본(TMF) 처리군과 4′,6,7-트리메톡시이소플라본(TMF)와 글리시틴 병용 처리군에서는 표피의 분화가 시작되었다.(적색 화살표) 15일 째에는 DMSO 처리군, 4′,6,7-트리메톡시이소플라본(TMF) 처리군, 4′,6,7-트리메톡시이소플라본(TMF)와 글리시틴 병용 처리군에서 모낭의 분화가 두드러진다. 특히 4′,6,7-트리메톡시이소플라본(TMF)와 글리시틴 병용 처리군에서는 그 진행이 매우 빨라서 다른 처리군에 비하여 3일 정도 빠른 분화를 보였다. 4′,6,7-트리메톡시이소플라본(TMF) 처리군은 DMSO 와 비슷하거나 약 0.5일 정도 빠른 치유를 보였다. 글리시틴 처리군은 표피의 분화가 지연되어 12일 이후 별다른 변화가 관찰되지 않았다.
마손 삼색 염색의 결과 15일 째 청색으로 염색되는 콜라겐의 분포가 상처부위와 상처 이전 부위 간의 차이를 보이지 않는 균일한 분포를 보였다. 각 처리군 간에 섬유아세포의 증식과 과립 조직의 형성에 차이가 많지 않음을 알 수 있다.
활발히 증식하는 세포에서만 발현하는 Ki67 항원을 염색하는 항체를 이용하는 면역화학 염색의 결과 각 처리군 모두 9일 째 되는 날 가장 활발한 증식을 보였다. 이는 진피 폐쇄를 위해 신속한 섬유아세포의 증식이 일어나고 있는 것으로 보인다. 이후 12일부터는 증식세포의 분포가 정상적인 패턴을 보이고, 진피와 표피 사이의 일렬로 케라티노사이트의 분열이 관찰되는 정상 조직의 형태를 띤다. 특이하게 4′,6,7-트리메톡시이소플라본(TMF) 처리군과 4′,6,7-트리메톡시이소플라본(TMF)와 글리시틴 병용 처리군에서 15일 째부터 모낭으로 추정되는 부위에 강한 염색이 관찰된다. 이는 상처부위가 정상적인 조직으로 리모델링하는 과정으로 땀샘이나 모낭의 구조를 생성하기 위하여 줄기 세포의 증식이 활발히 일어나는 것으로 보인다. 이는 상처부위가 과도한 콜라겐의 집적에 의한 흉터의 생성이 저지되고 있음을 의미한다.

Claims (12)

  1. 4',6,7-트리메톡시이소플라본(TMF)와 4'-하이드록시-6-메톡시이소플라본-7- D-글루코사이드(글리시틴)을 유효성분으로 포함하고,
    상기 4',6,7-트리메톡시이소플라본(TMF)와 4'-하이드록시-6-메톡시이소플라본-7- D-글루코사이드(글리시틴)의 조합비는 몰비로 1:1인 것을 특징으로 하는 상처치료 또는 상처회복용 약학 조성물.
  2. 삭제
  3. 제 1항에 있어서, 상기 약학 조성물은 진피 섬유아세포에서 세포 확산과 이주 및 콜라겐 합성을 촉진하는 것을 특징으로 하는 상처치료 또는 상처 회복용 약학 조성물.
  4. 제 1항에 있어서 상기 약학 조성물은 NADPH 산화효소 2(NOX 2) 및 NOS 유도를 촉진하는 것을 특징으로 하는 상처치료 또는 상처 회복용 약학 조성물.
  5. 4',6,7-트리메톡시이소플라본(TMF)와 4'-하이드록시-6-메톡시이소플라본-7- D-글루코사이드(글리시틴)을 유효성분으로 포함하고,
    상기 4',6,7-트리메톡시이소플라본(TMF)와 4'-하이드록시-6-메톡시이소플라본-7- D-글루코사이드(글리시틴)의 조합비는 몰비로 1:1인 것을 특징으로 하는 흉터 생성 억제용 약학 조성물.
  6. 삭제
  7. 제 5항에 있어서, 상기 약학 조성물은 진피 섬유아세포에서 세포 확산과 이주 및 콜라겐 합성을 촉진하는 것을 특징으로 하는 흉터 생성 억제용 약학 조성물.
  8. 제 5항에 있어서 상기 약학 조성물은 NADPH 산화효소 2(NOX 2) 및 NOS 유도를 촉진하는 것을 특징으로 하는 흉터 생성 억제용 약학 조성물.
  9. 4',6,7-트리메톡시이소플라본(TMF)와 4'-하이드록시-6-메톡시이소플라본-7- D-글루코사이드(글리시틴)을 유효성분으로 포함하고,
    상기 4',6,7-트리메톡시이소플라본(TMF)와 4'-하이드록시-6-메톡시이소플라본-7- D-글루코사이드(글리시틴)의 조합비는 몰비로 1:1인 것을 특징으로 하는 흉터 개선용 화장료 조성물.
  10. 삭제
  11. 제 9항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 진피 섬유아세포에서 세포 확산과 이주 및 콜라겐 합성을 촉진하는 것을 특징으로 하는 흉터 개선용 화장료 조성물.
  12. 제 9항에 있어서 상기 화장료 조성물은 NADPH 산화효소 2(NOX 2) 및 NOS 유도를 촉진하는 것을 특징으로 하는 흉터 개선용 화장료 조성물.
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