KR101542446B1 - 효모 사카로마이세스 세레비지애 88-4와, 이를 이용하여 제조한 향미 우수 증류주 - Google Patents

Abstract

본 발명은 증류주의 제조에 이용되는 신규한 사카로마이세스 세레비지애 균주, 이를 이용하여 제조된 증류주, 및 이를 이용하여 증류주를 제조하는 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따라 제조된 증류주는 알코올 발효시 신규 사카로마이세스 세레비지애 88-4 균주를 이용함으로써 향미 기여 성분들의 적절한 조화로 관능적인 특성이 매우 우수하다.

Description

효모 사카로마이세스 세레비지애 88-4와, 이를 이용하여 제조한 향미 우수 증류주{FLAVOUR PROMOTED DISTILLED SPIRIT USING YEAST SACCHAROMYCES CEREVISIAE 88-4}

본 발명은 증류주의 제조에 이용되는 신규한 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 균주, 이를 이용하여 제조된 증류주, 및 이를 이용하여 증류주를 제조하는 방법에 관한 것이다.

일반적으로 술은 알코올을 1 % 이상 함유하고 있는 음료를 말한다. 술은 자연적으로 발생되어 지역, 민족, 기후, 풍토 및 문화적 차이에 따라 여러 형태의 개성 있는 형태로 발전되어 왔다. 세균, 효모 등의 존재가 발견되기 이전에는 현대적인 발효 기술이 없었으므로, 누룩 등에 존재하는 자생 효모에 의하여 발효주를 제조하였다. 그러나 자생 효모들을 이용하면 우수하고 일정한 발효능을 유지하기가 어려운 문제점이 있었다. 이 문제점을 해결하기 위해, 근대에 들어서는 자생 효모들 중에서 우수한 특성을 갖는 효모를 선별, 분리하여 발효를 수행함으로써, 우수하고 일정한 발효능을 유지하여 우수한 발효주를 생산하기 시작했다.

술의 제조를 위해서는 당(전분)의 알코올 발효가 필수적이며, 이를 위해 주류별 특성에 맞는 효모를 이용한다. 맥주는 저온발효와 재사용을 위한 응집력을, 위스키는 고온발효와 알코올 생성력을, 주정과 보드카는 알코올 외의 성분들을 최소화하며 동시에 높은 알코올 생성력을 발효 특성으로 한다. 위스키, 브랜디, 럼, 진, 보드카, 데킬라와 일본 을류소주는 모두 엄선된 효모에 의해 제조된 주류이며, 각각의 주류 특성에 맞는 최적 효모를 발굴하여 산업화하는 연구가 계속적으로 이루어지고 있다.

증류주는 발효주보다 더 높은 도수의 알코올을 얻기 위해 증류시켜 만든 것으로, 위스키, 브랜디, 럼, 진, 보드카, 데킬라 및 증류소주 등이 이에 속하며 대개 40 도 이상의 알코올분을 함유한다. 상기 증류주 중 증류소주는 입국, 전분 함유 원료 및 물을 혼합, 발효 및 증류하여 얻어진다. 증류소주의 원료로는 전분이 많이 들어있는 쌀, 보리 및 옥수수 등의 곡류나 감자 및 고구마 등의 서류를 사용한다.

이와 관련하여, 한국 등록특허공보 제10-0561563호에는 정제 효소를 단계적으로 사용하여 증류식 소주를 제조하는 방법에 관한 것으로서, 소주의 액화, 당화 및 발효 과정에서 국균을 사용하지 않음으로써 제조 시간을 단축하는 방법이 개시되어 있다. 또한, 한국 등록특허공보 제10-0415307호에는 곡류에 완두를 혼합한 원료에 백국균을 접종, 번식시켜 만든 발효제를 이용하는 것을 특징으로 하는 증류주가 제안된바 있다.

그러나 우리나라의 증류주 제조를 위한 특성화된 효모 연구는 미진한 실정이고, 현재 산업계에서 사용하는 증류주 제조용 효모는 제빵용 혹은 와인, 주정, 위스키, 일본주 제조를 위해 개발된 효모들이 주류를 이루고 있으며, 균주를 수입하여 사용하므로 제조비용이 상승하게 된다.

본 발명에서는 관능 특성이 우수한 증류주 개발과 증류주 특화 효모를 개발하는 것을 목적으로 한다. 즉, 본 발명의 목적은 증류주 제조에 적합한 효모를 발굴하고, 이러한 효모 균주를 이용하여 우수한 향미를 나타내고, 관능 특성이 뛰어난 증류주 제조를 위한 것이다. 나아가 증류주 제조를 위해 기존에 사용되는 산업화된 수입 효모를 대체함을 목적으로 한다.

이에 본 발명자들은 상기와 같은 목적을 달성하기 위하여 예의 연구를 거듭한 결과, 신규 사카로마이세스 세레비지애 88-4 균주가 증류주 제조를 위한 발효 특성이 우수하고, 이를 이용하여 제조된 증류주의 관능 특성이 매우 뛰어남을 확인하여 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

본 발명에 따라 제조된 증류주는 알코올 발효시 신규 사카로마이세스 세레비지애 88-4 균주를 이용함으로써 향미 기여 성분들의 적절한 조화로 관능적인 특성이 매우 우수하다.

도 1은 본 발명의 일 구현예에 따른 증류주의 제조 방법의 흐름도를 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 사카로마이세스 세레비지애 88-4와 동일한 종의 기준주 CBS405와 18S rRNA 염기 서열을 비교한 것이다.

이하, 본 발명을 상세히 설명하기로 한다. 다만, 본 발명은 다양한 형태로 변경되어 구현될 수 있으며, 여기에서 설명하는 구현예에 한정되는 것은 아니다.

일 측면에서, 본 발명은 누룩에서 분리한 신규 사카로마이세스 세레비지애 88-4(Saccharomyces cerevisiae 88-4) 균주에 관한 것이다.

본 발명자들은 다양한 누룩으로부터 분리된 수많은 효모 균주에서 알코올 발효능, 산막 거품 생성 여부, 향기 성분, 관능 검사 결과 등을 종합적으로 평가하여 최적의 효모를 선별하였으며, 선별된 효모를 동정하여 사카로마이세스 세레비지애임을 확인하였다. 본 발명에 따른 발효 균주 88-4는 전통 누룩에서 분리된 야생 양조 효모로서 증류주 제조를 위한 발효 특성이 우수하고, 이를 이용하여 제조된 증류주의 관능 기호성이 매우 뛰어나다. 이화학적, 유전학적 특성에 대한 분석을 통해 동정한 결과 동일한 종의 공지 균주 및 산업화되어 이미 사용되고 있는 균주와는 다른 새로운 균주임을 확인하였다. 이를 88-4 균주라고 명명하고, 2013년 10월 2일자로 한국미생물보존센터에 기탁번호 KCCM11456P로 기탁하였다.

다른 측면에서, 본 발명은 상기 사카로마이세스 세레비지애 88-4를 이용하여 제조된 증류주에 관한 것이다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 상기 사카로마이세스 세레비지애 88-4를 이용한 증류주의 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명의 증류주 제조 방법은 a) 입국 제조 단계, b) 1차 발효 단계, c) 2차 발효 단계, d) 증류 단계 및 e) 여과 단계를 포함한다.

일 구현예에서, a) 단계에서는 증자된 곡류에 백국균을 혼합 및 배양하여 입국을 제조한다. b) 단계에서는 a) 단계에서 제조된 입국에 효모 배양액 및 물을 혼합하여 발효시켜 1차 발효액을 제조한다. c) 단계에서는 b) 단계에서 제조된 1차 발효액에 증자된 전분 함유 주원료 및 물을 혼합하여 발효시켜 2차 발효액을 제조한다. d) 단계에서는 c) 단계에서 제조된 2차 발효액을 증류한다.

일 구현예에서, 사카로마이세스 세레비지애 88-4는 b) 단계, c) 단계 또는 b) 단계 및 c) 단계의 발효에 이용된다. 바람직하게는, 사카로마이세스 세레비지애 88-4는 b) 단계 및 c) 단계의 발효 모두에 이용된다.

본 발명의 일 구현예에 따른 증류주의 제조 방법의 흐름도를 도 1에 나타내었다. 도 1을 참고하여 본 발명의 증류주 제조 방법의 일 구현예를 단계별로 설명하면 다음과 같다.

본 발명에 따른 사카로마이세스 세레비지애 88-4 균주를 적용한 증류주를 제조하기 위하여 먼저 입국을 제조한다. 입국은 증자된 쌀 또는 보리 등의 곡류에 백국균을 접종하여 통상적인 방법에 따라 제조할 수 있다. 예를 들어, 증자한 쌀에 백국균을 접종하고 항온항습기 내에서 33℃ 및 습도 95 %로 유지하면서 48 시간 동안 백국균을 번식시켜 입국을 제조할 수 있다.

상기 백국균으로서 아스퍼질러스속 미생물, 바람직하게는 아스퍼질러스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis)를 사용하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에 따른 신규 효모 균주는 통상적인 사카로마이세스속 효모의 배양 방법에 의해 대량으로 배양할 수 있다. 배양 배지로는 탄소원, 질소원, 비타민 및 미네랄로 구성된 배지를 사용할 수 있다. 예를 들어, YM 아가(Yeast Malt Extract Agar) 배지, PDA(Potato Dextrose Agar) 배지, 혹은 입국 당화액을 배지로 사용할 수 있다. 입국 당화액은 상기 단계에서 제조한 입국을 이용하여 입국 100 중량부에 대하여 물 300 중량부로 첨가하여 60℃ 내지 65℃로 3 시간 내지 5 시간 동안 교반 당화 후, 4,500 rpm 내지 6,000 rpm에서 20 분 내지 30 분간 원심분리한 후 여과하고 멸균하여 10˚Brix 내지 14˚Brix 당도로 희석하여 제조할 수 있다. 상기 배지를 사용하여 25℃ 내지 30℃ 온도에서, 36 시간 내지 72 시간, 호기적인 조건 하에서 배양하여 4℃에서 보관하면서 계대하여 사용할 수 있다.

상기 단계에서 제조한 입국에 물을 첨가하여 혼합하고, 온도를 25℃로 맞춘다. 상기 혼합은 입국 100 중량부에 대하여 120 내지 140 중량부의 물을 첨가하는 것이 바람직하다. 입국 100 중량부에 대하여 배양 효모수가 10⁸/㎖ 이상 일 때 1.5 % 내지 2.5 % 부피부의 효모 배양액을 접종한 다음, 25℃에서 4 일 내지 6 일간 1차 발효를 수행할 수 있다.

상기 단계에서 제조된 1차 발효액 및 증자된 전분 함유 주원료를 혼합하고 발효시켜 술덧을 제조한다.

상기 전분 함유 주원료는 쌀, 보리, 옥수수, 수수, 밀, 감자 및 고구마로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 단계에서 제조된 1차 발효액에 상기 증자된 전분 함유 주원료 및 물을 혼합한 후 온도를 25℃ 내지 30℃에서 8 일 내지 12 일간 2차 발효를 진행시키는 것이 바람직하다.

상기 단계에서 수득한 2차 발효액을 가열하여 술 증기를 생성하고, 상기 생성된 술 증기를 냉각시켜 증류액을 제조한다. 상기 증류는 일반적으로 사용되는 단식 증류기를 이용하여 상압 또는 감압 증류할 수 있다. 상압 증류는 80 내지 120℃에서 760 mmHg(대기압)로 증류할 수 있고, 중압 증류는 80 내지 100℃에서 360 내지 400 mmHg로 증류할 수 있고, 감압 증류는 40 내지 60℃에서 70 내지 150 mmHg로 증류할 수 있다.

따라서 또 다른 측면에서, 본 발명은 상기 제조 방법에 따라 제조된 증류주를 제공한다.

본 발명에 따라 제조된 증류주는 알코올 발효시 신규 사카로마이세스 세레비지애 88-4 균주를 이용함으로써 향미 기여 성분들의 적절한 조화로 관능적인 특성이 매우 우수하다.

하기의 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다. 그러나 하기 실시예는 본 발명의 내용을 구체화하기 위한 것일 뿐 실시예에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.

[실시예]

1차 선발

1차 선발의 기준은 알코올 발효능과 산막 거품 미생성 여부였다. 전국에서 수집한 누룩에서 분리한 한국식품원구원 보유 효모 중, 증자한 쌀에 백국균(아스퍼질러스 루추엔시스)을 접종하고 항온항습기 내에서 33℃ 및 습도 95 %로 유지하면서 48시간 동안 백국균을 번식시켜 제조한 입국 당화액 100 ㎖에 효모수 2×10⁷/㎖의 농도로 접종하였을 때, 알코올 발효능이 있고, 발효시 지질 산막 유래 거품을 생성하지 않는 효모 108 균주를 우선 선발하였다.

2차 선발

2차 선발은 하기 표 1에 제시된 우수 효모 선발 기준에 따라 발효가 우수한 균주를 선발하였다. 1차 선발된 108 균주를 대상으로 300 ㎖ 용량으로 입국과 물을 1 : 3 (w/v)으로 혼합하여 25℃에서 5 일 동안 발효시켜 알코올 함량은 12 %(v/v) 이상, pH 3.5±0.2, 산도 15.0±3.5 ㎖ (0.1N NaOH 적정), 당도 10±3 Brix(%), 1차 발효말 효모의 생균수가 2×10⁷/㎖ 이상의 조건으로 40 균주를 선발하였다.

3차 선발

3차 선발은 하기 표 2에 제시된 우수 효모 선발 기준에 따라 발효가 우수한 균주를 선발하였다.

2차 선발된 40 균주를 대상으로 2,000 ㎖ 용량으로 담금을 실시하여 증류주 제조를 위한 발효 특성을 확인하였다. 1차 발효말 효모의 생균수와 알코올 생성, 2차 발효의 일차별 알코올 생성과 발효말 최종 알코올분을 분석하였다. 증류주 제조를 위한 신속한 우점 형성 효모의 선정을 위해 알코올 발효 패턴을 분석하였다. 증류주를 위한 발효 단계에서 효모의 빠른 우점은 기질의 효율적인 사용 및 향미 기여 성분의 컨트롤에 매우 중요한 인자이다. 알코올 발효 패턴은 일차별 알코올의 증가 경향을 분석하여 전반기 발효 왕성 그룹과 후반기 발효 왕성 그룹으로 나누었다. 일차별 알코올 생성의 다항 함수 그래프를 그려 전반부가 급하게 증가하고 후반부가 완만해지는 형태의 발효 패턴을 보이는 효모 가운데, 2차 발효 3 일차 시점 알코올 8 %(v/v) 이상, 발효말 알코올 15 %(v/v) 이상의 조건으로 선발하였다. 이상과 같이 발효 일차별로 알코올 함량, pH, 산도, 아미노산도, 알코올 발효 패턴 분석과, 2차 발효말 최종 알코올 함량, 상등액 Brix 당도, 미발효 잔당량(g/ℓ)을 비교하여 6 균주를 선발하였다(하기 표 3).

최종 선발

3차 선발된 6 균주와 산업화 균주 3 종을 대상으로 증류액의 향기 성분 분석과 증류액의 기호도 평가를 통해 최종 선발을 하였다. 사용된 산업화 균주 3 종은 기존 산업화 효모 가운데 주정 및 보드카(Fermentis Ethanol Red Yeast), 위스키(Fermentis M1 Yeast) 및 일본주 제조용 효모(양조협회 소주 2호)를 이용하였다.

증류주의 제조

이상의 9 균주에 대해 증류주를 제조하였다. 입국의 제조를 위해, 쌀을 3 시간 동안 침지하여 물빼기를 한 후 증자하였다. 증자된 쌀 10 kg에 백국균(아스퍼질러스 루추엔시스) 포자 형성물 2 g을 접종하고, 이를 33℃, 습도 95 %에서 48 시간 배양하여 입국을 제조하였다.

1차 발효를 위해 상기에서 제조한 입국 513 g 및 물 718 g을 섞은 후 입국 당화액에서 배양하여 10⁸/㎖ 이상의 수가 됨을 확인한 효모를 10 ㎖ 접종하였다. 상기에서 효모 배양액인 입국 당화액은 상기 방법으로 제조된 입국 200 g과 물 600 g을 섞은 후 65℃에서 3 시간 30 분 동안 교반하여 당화시켰다. 당화 후, 4,700 rpm에서 30 분간 원심분리한 후 여과포로 여과한 뒤 물로 10˚brix로 희석하여 제조하였다. 상기 혼합액을 25℃에서 5 일간 발효시켜 1차 발효액을 제조하였다.

2차 발효를 위해 쌀을 준비하였다. 쌀의 이물질이나 오염원을 제거하기 위하여 물로 깨끗이 세척하고 수분의 충분한 흡수를 위해 3 시간 동안 상온의 물에 침지한 후 상압에서 60 분간 스팀으로 증자하였다. 증자 후에는 20 분간 상온에서 냉각시켰다. 상기에서 제조된 1차 발효액에 물 1,743 g 및 쌀 1,026 g을 증자하여 첨가 혼합하고, 25℃에서 10 일간 발효시켜 쌀 술덧 4,000 g을 제조하였다.

상기 쌀 술덧을 초자로 디자인한 단식 증류기를 사용하여 내부온도 40℃에서 110 mmHg로 감압 증류하였다. 감압 펌프는 수봉식 펌프를 이용하였다. 증류 실험을 위한 증류기는 유리재 5 ℓ 용량의 라운드형 플라스크와 포말 방지 증류 컬럼, 횡형 냉각사관, 감압 형성밸브가 달린 눈금 있는 사이트 글래스, 유출액을 포집하는 리시버로 구성하였다. 증류를 위한 초기 발효액량은 2 ℓ, 초기 발효액 온도는 20 내지 25℃, 유출 증기의 냉각을 위한 냉각기의 설정 온도는 5℃가 되게 하여 15 ℓ/분의 속도로 순환하게 하였다. 증류가 진행되는 중에 냉각기를 통과한 유출액의 온도는 20 내지 25℃를 정상적으로 하고, 최대 유출액 온도가 30℃가 넘지 않도록 조절하였다. 증류기(still)에 투입되는 열로써 증류 속도 및 유출액 온도를 조절하였다. 증류주는 초류를 끊지 않고 본류에 포함시켜 알코올분이 45 % 내외가 되도록 하였다. 이에 따라 알코올분 45 %의 증류원액을 얻었다.

향기 성분 분석

향기 성분 분석은 GC-MS를 이용하였다. 향기 성분이 피크 면적 비율로 표시되기 때문에 향기 성분 함량의 비교를 위해 증류액 알코올을 20 %v/v로 일괄 희석 후 동일한 알코올 농도로 하여 분석을 진행하였다. 시료 20 ㎖를 60℃에서 평형 후 SPME(solid phase microextraction) 방법으로 향을 포집하여 Stabilwax^®-DA column(30 m × 0.25 mm I.d × 0.25 ㎛ 필름 두께; 미국 Restek Corp.제조)이 장착된 Hewlett-Packard 7890A GC / HP-5973N mass selective detector(MSD) (미국 Hewlett-Packard Co.제조)를 이용하여 분석하였다. GC의 오븐 온도는 50℃에서 200℃까지 상승시켰고, 인젝터 온도는 250℃였으며, 캐리어 가스로 헬륨을 사용하였다. MSD 조건은 모세관 직접 계면 온도(capillary direct interface temperature)가 250℃, 이온 공급원 온도(ion source temperature)가 230℃, 이온화 전압(ionization voltage)이 70 eV, 질량 범위(mass range)가 33-350 a.m.u. 그리고 스캔 속도(scan rate)가 2.2 scan/sec였다. 휘발성 향기 성분의 동정은 체류 지수(retention indices, RI), 질량 스펙트럼(mass spectra)과 향기 특성(aroma properties)을 비교하여 확인하였다. 분석된 결과(단위 피크 면적 %)를 하기 표 4에 나타내었다.

관능 평가

상기 제조한 증류액의 기호도를 평가하였다. 기호도 관능 평가를 위한 증류액은 알코올 함량을 20 %(v/v)로 하여 실시하였다. 향 관능 기호도를 9 점 척도(9 점 : 매우 좋음; 7 점 : 좋음; 5 점 : 보통; 3 점 : 안 좋음; 1 점 : 매우 안 좋음)로 평가하였다. 평가 인원은 술 전문가 9 명에 의해 2 회 반복 평가하였으며, 평가시 향에 대한 간단한 묘사를 하게 하였다. 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다.

평가 결과 88-4로 제조한 증류주의 기호도가 가장 높았으며, 95 % 신뢰 수준에서 산업화 효모보다도 기호도가 높았다. 증류주 제조를 위한 효모 특성 비교와 관능 평가 결과로서 88-4 균주를 최종 선정하였다.

균주의 동정

최종 선발된 88-4 균주를 18S rRNA 염기서열(ITS1, ITS4 프라이머를 이용)을 분석한 결과 사카로마이세스 세레비지애(Gen bank accession number EF620858.1)와 99 %의 상동성을 나타내어 사카로마이세스 세레비지애로 동정되었다. 사카로마이세스 세레비지애의 기준주(Type strain)인 CBS405와 88-4 균주 간의 18S rRNA 염기 서열을 비교한 결과를 도 2에 나타내었다. 또한, 88-4 균주의 18S rRNA 서열을 서열 번호 1에 나타내었다.

한국미생물보존센터 KCCM11456P 20131002

<110> KOREA FOOD RESEARCH INSTITUTE <120> FLAVOUR PROMOTED DISTILLED SPIRIT USING YEAST SACCHAROMYCES CEREVISIAE 88-4 <130> IPDB-50915 <160> 1 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 1167 <212> DNA <213> 18S rRNA of Saccharomyces cerevisiae 88-4 (KCCM11456P) <400> 1 taagtgcgac agatcggtca ggttaactaa tgcagtacgg atcggtggca atatgatagt 60 aatgtggtgt gaacctgccg atgtcgaagc aaggaaaggt caagaatgaa ctccaggtgt 120 gtgtgtaccg tttaatgtgc cataacaaaa gacacaatct ctcgccgctg ggtagcacga 180 aagagaacta cagactagca agacgcgcac ctaagcgcag gcgcggctcg tactctctca 240 tctcttgtct tctcgcgcag tgtaagcgtc tctatgctct cgccaaaaaa aaaaaaaaaa 300 aatccacttt caaaaaaaat taaaaatctc ttaaaaggcc cctccggggg gggggggctc 360 cggaggatca ttaaagaaat tttataattt tggaaaaggg tttttttttt tttgttttgg 420 caagagcatg agagctttta ctgggcaaga agacaagaga tggagagtcc agccgggcct 480 gcgcttaagt gcgcggtctt gctaggcttg taagtttctt tcttgctatt ccaaacggtg 540 agagatttct gtgcttttgt tataggacaa ttaaaaccgt ttcaatacaa cacactgtgg 600 agttttcata tctttgcaac tttttctttg ggcattcgag caatcggggc ccagaggtta 660 acaaacacaa acaattttat ctattcatta aatttttgtc aaaaacaaga attttcgtaa 720 ctggaaattt taaaatatta aaaactttca acaacggatc tcttggttct cgcatcgatg 780 aagaacgcag cgaaatgcga tacgtaatgt gaattgcaga attccgtgaa tcatcgaatc 840 tttgaacgca cattgcgccc cttggtattc cagggggcat gcctgtttga gcgtcatttc 900 cttttcaaac attctgtttg gtagtgagtg atactctttg gagttaactt gaaattgctg 960 gccttttcat tggatgtttt ttttttccaa agagaggttt ctctgcgtgc ttgaggtata 1020 atgcaagtac ggtcgtttta ggttttacca actgcggcta atctttttta tactgagcgt 1080 attggaacgt tatcgataag aagagagcgt ctaggcgaac aatgttctta aagtttgacc 1140 tcaaatcatg tagaggccca gtccttg 1167

Claims (6)

1. 하기 단계를 포함하는 증류주의 제조 방법:
   a) 증자된 곡류에 백국균을 혼합 및 배양하여 입국을 제조하는 단계;
   b) 입국에 사카로마이세스 세레비지애 88-4(Saccharomyces cerevisiae 88-4, 수탁번호 KCCM11456P) 배양액 및 물을 혼합하여 발효시켜 1차 발효액을 제조하는 단계;
   c) 1차 발효액에 증자된 전분 함유 주원료 및 물을 혼합하여 발효시켜 2차 발효액을 제조하는 단계;
   d) 증류 단계; 및
   e) 여과 단계.
2. 제 1 항에 있어서,
   전분 함유 주원료가 쌀, 보리, 옥수수, 수수, 밀, 감자 및 고구마로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 증류주의 제조 방법.
3. 삭제
4. 제 1 항 또는 제 2 항의 제조 방법에 따라 제조된 증류주.
5. 삭제
6. 삭제

Images