KR101508053B1 - 우슬, 마가목 및 콩 추출물을 포함하는 관절 통증 완화용 식품 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 우슬 추출물 30 중량% 내지 70 중량% 및 마가목 추출물 30 중량% 내지 70 중량% 포함하는 관절 통증 완화용 식품 조성물을 제공한다. 본 발명의 조성물을 복용할 경우 무릎 통증이 완화되는 것은 물론, 관절염 개선효과를 가져올 수 있는 장점을 제공한다.

Description

우슬, 마가목 및 콩 추출물을 포함하는 관절 통증 완화용 식품 조성물{Food Composition for Reducing Joint Pain Comprising Achyranthes japonica Nakai, Sorbus commixta and Soybean Extract}

본 발명은 우슬, 마가목 및 콩 추출물을 포함하는 관절 통증 완화용 식품 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 우슬 에탄올 추출물 30 중량% 내지 70 중량% 및 마가목 에탄올 추출물 30 중량% 내지 70 중량%을 포함하는 혼합물에 콩 에탄올 추출물을 상기 혼합물 및 상기 콩 에탄올 추출물을 중량기준 1 : 0.5-3 포함하는 관절 통증 완화용 식품 조성물에 관한 것이다.

골관절염이란, 뼈와 뼈가 직접 부딪히는 충격과 마찰을 완화하기 위해 우리 몸의 관절 안에 발달한 연골층이 손상되어 뼈와 뼈가 직접 마찰하면서 통증이 발생하고 이에 따라 움직이기 어려워지는 질환을 말한다. 이러한 골관절염은 주로 무릎, 고관절, 손, 발, 척추 등 하나의 관절에서부터 발생할 수 있고, 여러 관절에서 동시에 발생할 수도 있는 질환이다.

류마티스 관절염이란, 면역체계의 이상에 의해 자신의 관절이나 몸의 일부를 공격하여 염증을 일으키는 자가 면역 질환으로써, 손가락, 손, 발, 손목, 발목, 무릎 등 여러 관절이 아프고 붓는 증세를 나타내며, 근육, 피부, 폐, 눈 등 여러 다른 장기에도 이상을 초래할 수 있는 전신적인 만성 염증성 질환을 말한다.

이러한 관절염이 발생하게 되는 직접적인 원인은 아직까지 명확하지 않기 때문에 이에 대한 연구가 계속적으로 진행되고 있으며, 현재까지도 류마티스 관절염 등의 관절염에 대한 효과적인 치료 방법이나 예방 방법 등이 제대로 알려진 바가 없어, 이에 대해 해결해야 할 점들이 많이 남아 있는 실정이다.

관절염 치료를 위한 여러 치료제 및 치료 방법들이 제안되어 왔으나, 이러한 치료제 및 치료 방법들은 근원적인 치료법이라고 보기 어려우며, 관절염 치료제로써 스테로이드 호르몬제와 같은 호르몬제가 많이 알려지고 사용되어 왔으나, 그에 따른 부작용들이 보고가 됨에 따라 그 사용이 어렵게 되었다.

KR 공개특허 10-2010-0081478(발명의 명칭 : 마가목 및 현지초 추출물을 포함하는 파골세포 분화 억제용 또는 연골세포 분화 촉진용 조성물)에서는 마가목 및 현지초 물 추출물을 포함하는 파골세포 분화 억제용 또는 연골세포 분화 촉진용 조성물에 대해 개시하고 있고,

KR 공개특허 10-2011-0073400(발명의 명칭 : 골관절염 또는 류마티스 관절염의 예방 및 치료용 우슬 추출물 및 이의 제조 방법)은 발효 우슬 물 추출물을 포함하는 골관절염 또는 류마티스 관절염의 예방 및 치료용 우슬 추출물을 개시하고 있다.

그러나 상술한 문헌에 포함된 기술은 관절 통증 완화 효과가 충분하지 않은 실정이다. 본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.

본 발명자들은 관절염에 의해 유발되는 관절 통증 또는 일반적인 노동 또는 운동 후에 생길 수 있는 관절 통증을 완화할 수 있는 조성물을 개발하고자 예의 연구 노력하였다. 그 결과, 우슬, 마가목 및 콩 에탄올 추출물을 혼합하여 복용할 경우 상술한 관절 통증을 현저히 감소시킬 수 있다는 사실을 발견하여 본 발명을 완성하였다.

따라서 본 발명의 목적은 관절 통증 완화용 식품 조성물을 제공하는데 있다.

본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.

본 발명은 관절 통증 완화용 식품 조성물을 제공한다.

본 발명자들은 관절염에 의해 유발되는 관절 통증 또는 일반적인 노동 또는 운동 후에 생길 수 있는 관절 통증을 완화할 수 있는 조성물을 개발하고자 예의 연구 노력하였다. 그 결과, 우슬, 마가목 및 콩 에탄올 추출물을 혼합하여 복용할 경우 상술한 관절 통증을 현저히 감소시킬 수 있다는 사실을 확인하였다.

본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 우슬 추출물 30 중량% 내지 70 중량% 및 마가목 추출물 30 중량% 내지 70 중량% 포함하는 관절 통증 완화용 식품 조성물을 제공한다.

본 명세서에서 사용하는 용어‘우슬(Achyranthes)’은 비름과에 속하는 여러해살이 초본 식물, 또는 그의 뿌리를 의미하는 것으로서, 쇠무릎(우슬)풀은 마디가 소의 무릎과 같이 퉁퉁하게 부풀어 올라 있다고 하여 붙여진 이름이다. 우슬의 일반적인 효능은 혈액 순환을 원활하게 하고 어혈을 제거하는 작용을 하여 생리불순, 산후복통의 치료에 쓰이며, 간과 신장 등의 장기에도 좋은 작용을 하는 것으로 알려져 있다.

본 명세서에서 사용하는 용어‘마가목(Sorbus commixta, SN)’은 장미과의 낙엽활엽 소교목으로, 주로 우리나라와 중국, 일본 등지의 해발 500-1200 m의 심산 산복에 천연 분포한다. 마가목의 수피는 마아피라고 하여 한방에서 신장을 보호하는 약재, 기관지염, 중풍 위염 및 골통에 사용되었으며, 열매는 신경통 억제효과를 갖는 것으로 알려져 예로부터 생식하였다. 마가목의 생리활성으로는 당뇨 및 비만 억제 효과, 항산화 및 광노화 억제 효과, 혈관 염증 억제 효과 및 항동맥경화 등이 알려져 있고, 구성성분으로는 네오사쿠라닌(neosakuranin), 루페올(lupeol) 및 루페논(lupenone)이 알려져 있으나, 골 질환에 있어서의 생리 활성에 대한 연구는 미흡한 실정이다.

상기 우슬 및 마가목은 KFDA 식품원재료 검색(http://fse.foodnara.go.kr) 결과 법적으로 약제학적 조성물 또는 식품 조성물로 사용하는데 문제가 없고, 또한 예로부터 혈액순환 등에 탁월한 효과가 있는 식물로 알려진 점에 비추어 관절 통증 완화 효과 및 염증 완화 효과를 나타내는 식품 또는 약제학적 조성물에 이용될 수 있다.

본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 상기 마가목은 바람직하게는 마가목의 꽃, 잎, 줄기, 열매, 종자, 뿌리 및 전초를 포함하는 군으로부터 선택될 수 있고, 보다 바람직하게는 줄기일 수 있으며, 가장 바람직하게는 상기 줄기의 가지 또는 껍질일 수 있다.

본 명세서에서 우슬 추출물, 마가목 추출물 또는 콩 추출물을 언급하면서 사용되는 용어 “추출물”은 상기 언급한 식물에 추출용매를 처리하여 얻은 추출 결과물뿐만 아니라 상기 식물 자체를 섭취할 수 있도록 제형화(예컨대, 분말화)된 가공물도 포함하는 의미를 갖는다.

만일, 본 발명의 조성물에서 이용되는 추출물을 상기 식물에 추출용매를 처리하여 얻는 경우에는, 다양한 추출용매가 이용될 수 있다. 바람직하게는, (a) 물, (b) 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올 (예: 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 노말-프로판올, 이소-프로판올 및 노말-부탄올 등), (c) 상기 저급 알코올과 물과의 혼합용매, (d) 아세톤, (e) 에틸 아세테이트, (f) 클로로포름, (g) 1,3-부틸렌글리콜, (h) 헥산, (i) 디에틸에테르, 또는 (j) 부틸아세테이트를 식물에 처리하여 추출물을 얻을 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 용어 “추출물”은 상술한 바와 같이 당업계에서 조추출물(crude extract)로 통용되는 의미를 갖지만, 광의적으로는 추출물을 추가적으로 분획(fractionation)한 분획물도 포함한다. 즉, 식물 추출물은 상술한 추출용매를 이용하여 얻은 것뿐만 아니라, 여기에 정제과정을 추가적으로 적용하여 얻은 것도 포함한다. 예컨대, 상기 추출물을 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 통과시켜 얻은 분획, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 본 발명의 식물 추출물에 포함되는 것이다.

본 발명에서 이용되는 우슬, 마가목 또는 콩 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.

본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 상기 우슬 출출물 및 마가목 추출물의 혼합물은 콩 추출물을 조성물 총 중량기준 1 : 0.5-3 추가적으로 포함할 수 있다.

콩 추출물을 상술한 비율로 포함할 경우 관절 통증 완화 효과를 비약적으로 향상시킬 수 있기 때문에 본 발명에서 콩 추출물을 추가적으로 포함하는 것은 매우 중요하다. 하기 실험예에서 보는 바와 같이 우슬 출출물 및 마가목 추출물의 혼합물을 복용한 실험군과 비교하여 우슬 출출물, 마가목 추출물 및 콩 추출물의 혼합물을 복용한 실시예에세 무릎 통증 완화 효과가 비약적으로 증가하였기 때문이다.

본 발명의 조성물은 관절 통증 완화용 식품 조성물에 주로 사용될 수 있지만, 관절 통증 완화 효과 및 염증 완화 효과가 뛰어나 약제학적 조성물에 사용될 수 있고, 또한, 관절 부위에 도포하여 관절 통증 완화 효과를 나타내는 화장료 조성물에의 사용을 배제할 수 없다.

본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 본 발명의 조성물은 관절 통증 완화 효과 및 항염증 효과가 탁월한 약제학적 조성물일 수 있다.

본 발명의 조성물이 약제학적 조성물로 제조되는 경우, 본 발명의 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 본 발명의 약제학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제 시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 경구 또는 비경구 등의 다양한 경로로 투여할 수 있으며, 예컨대 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 주사에 의해 투여할 수 있다. 바람직하게는 비경구 투여 중 경피투여, 보다 바람직하게는 도포에 의한 국부 투여(topical application) 방식으로 적용된다.

본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물의 투여량은, 경구형 제형인 경우 성인 기준으로 0.1-100 ㎎/kg 의 양을 1일 1회 내지 수회 투여할 수 있으며, 외용제인 경우에는 성인 기준으로 1일당 1.0 내지 3.0 ml의 양으로 1일 1 내지 5회 도포하여 1개월 이상 계속 하는 것이 좋다. 다만, 상기 투여량은 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 산제, 과립제, 정제, 캅셀제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 연고, 크림 등의 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액 등을 비롯하여 약제학적 제제에 적합한 어떠한 형태로든 사용할 수 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.

본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 본 발명의 조성물은 관절 통증 완화 효과 및 항염증 효과가 탁월한 식품 조성물일 수 있다.

본 발명의 조성물이 식품 조성물로 제조되는 경우, 유효성분뿐만 아니라, 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 향미제를 포함한다. 상술한 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스, 올리고당 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 사이클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 향미제로서 천연 향미제 [타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등]) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다.

예컨대, 본 발명의 식품 조성물이 드링크제로 제조되는 경우에는 본 발명의 유효성분 이외에 구연산, 액상과당, 설탕, 포도당, 초산, 사과산, 과즙, 두충 추출액, 대추 추출액, 감초 추출액 등을 추가로 포함시킬 수 있다.

본 발명의 실시예에 따르면, 본 발명의 화장료 조성물은 글리세린, 부틸렌 글라이콜, 폴리옥시에칠렌 경화피마자유, 토코페릴 아세테이트, 시트릭산, 판테놀, 스쿠알란, 소듐 시트레이트 및 알란토인으로 포함된 군으로부터 선택되는 최소 하나의 보조성분을 추가적으로 포함하며, 보다 바람직하게는 글리세린, 폴리옥시에칠렌 경화피마자유, 토코페릴 아세테이트, 스쿠알란 및 소듐 시트레이트을 추가적으로 포함하고, 부틸렌 글라이콜, 시트릭산, 판테놀 및 알란토인으로 구성된 군으로부터 선택되는 최소 하나의 성분을 포함하며, 가장 바람직하게는 글리세린, 부틸렌 글라이콜, 폴리옥시에칠렌 경화피마자유, 토코페릴 아세테이트, 시트릭산, 판테놀, 스쿠알란, 소듐 시트레이트 및 알란토인 모두를 추가적으로 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물은 기본적으로 피부에 도포되는 것이므로, 당업계의 화장료 조성물을 참조하여 제공될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올, 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가, 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

한편, 본 발명의 구체적 실시예에서 본 발명 조성물의 유효성분에 대한 세포 생존율 분석 결과 본 발명 조성물의 유효성분은 천연물질로서 인체에 무해한 물질임이 밝혀졌다. 따라서, 본 발명의 유효성분은 독성 및 부작용이 거의 없으므로 장기간 사용 시에도 안심하고 사용할 수 있으며, 특히 상기한 바와 같은 화장료, 약제학적 및 식품 조성물에 안전하게 적용할 수 있다.

본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:

(a) 본 발명은 우슬 추출물 30 중량% 내지 70 중량% 및 마가목 추출물 30 중량% 내지 70 중량% 포함하는 관절 통증 완화용 식품 조성물을 제공한다.

(b) 본 발명의 조성물을 복용할 경우 무릎 통증이 완화되는 것은 물론, 관절염 개선효과를 가져올 수 있는 장점을 제공한다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명 하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

실시예

본 명세서 전체에 걸쳐, 특정 물질의 농도를 나타내기 위하여 사용되는 “%“는 별도의 언급이 없는 경우, 고체/고체는 (중량/중량) %, 고체/액체는 (중량/부피) %, 그리고 액체/액체는 (부피/부피) %이다.

제조예 1 : 우슬 추출물의 제조

우슬 1 kg을 정제수를 이용하여 이물질이 없도록 세척기로 수회 세척하고, 건조기를 이용하여 건조하였다. 이후 우슬을 추출기에 넣고 추출용매로 상기 우슬 중량의 6배(v/w)의 주정(97%)을 사용하여 70~75℃에서 24시간씩 연속하여 4회 반복 추출하였다. 상기 우슬 추출액을 모아 여과필터(5 ㎛)를 이용하여 여과한 후 여액을 농축기로 이송하고 45℃, 700-750 mmHg 조건하에서 약 3-4시간동안 감압 농축하여 고형분 60%이상의 우슬 농축액을 제조하였다(고형분 60%이상).

제조예 2 : 마가목 추출물의 제조

마가목의 가지 500 g 및 줄기 500 g을 정제수를 이용하여 이물질이 없도록 세척기로 수회 세척하고, 건조기를 이용하여 건조하였다. 이후 상기 마가목 가지 및 줄기를 추출기에 넣고 추출용매로 상기 마가목 가지 및 줄기 중량의 6배(v/w)의 주정(97%)을 사용하여 70~75℃에서 24시간씩 연속하여 4회 반복 추출하였다. 상기 마가목 가지 및 줄기 추출액을 모아 여과필터(5 ㎛)를 이용하여 여과한 후 여액을 농축기로 이송하고 45℃, 700-750 mmHg 조건하에서 약 3-4시간동안 감압 농축하여 고형분 60%이상의 우슬 농축액을 제조하였다(고형분 60%이상).

제조예 3 : 서리태 추출물 및 혼합 추출물의 제조

상기 제조예 1 또는 제조예 2의 방법과 동일한 방법을 이용하여 콩 1 kg에 대한 농축액을 제조하였다. 이후 상기 제조예 1의 우슬 농축액, 상기 제조예 2의 마가목 농축액 및 콩 농축액을 1 : 1 : 2의 비율로 혼합하여 본 발명의 조성물을 제조하였다.

실험예 : 관절 통증 완화 효과 및 항염효과의 확인

실험예 1 : 관절 통증 완화 효과 확인

본 발명의 식품 조성물에 대한 관절 통증 완화 효과를 검증하였다. 충북 제천시에 거주하는 50세 이상의 성인 남성 및 여성 중 중증 무릎 통증을 호소하는 20명의 실험대상을 선발하여 2005년 5월부터 2013년 4월까지 약 9년에 걸쳐 실험대상이 무릎 통증을 호소할 때마다 본 발명의 조성물 10 mL를 섭취시켜 무릎 통증 완화 효과를 실험하였다.

실시예 1은 본 발명의 조성물을 1회 10 mL씩 총 3회 제공하였고, 실시예 2는 우슬 농축액 및 마가목 농축액을 1 : 1의 비율로 혼합한 혼합물을 1일 1회 10 mL씩 총 3회 제공하였다. 실험군 1은 우슬 농축액만 1일 1회 10 mL씩 총 3회 제공하였으며, 실험군 2는 마가목 농축액만을 1일 1회 10 mL씩 총 3회 제공하였다. 실험군 3은 우슬 농축액 및 서리태 농축액을 1 : 1의 비율로 혼합한 혼합물을 1일 1회 10 mL씩 총 3회 제공하였고, 실험군 4는 마가목 농축액 및 서리태 농축액을 1 : 1의 비율로 혼합한 혼합물을 1일 1회 10 mL씩 총 3회 제공하였다. 대조군은 설탕물을 사용하였다.

무릎 통증 완화 효과는 통증이 완전히 사라진 경우 +++, 통증이 상당히 경감하였으나, 미세한 통증이 느껴지는 경우 ++, 통증이 상당부분 남아 있는 경우 +로 표시하여 평가하였으며, 그 결과는 하기 표 1과 같다.

무릎 통증 완화 효과 실험 결과

실험대상	실시예 1	실시예 2	실험군 1	실험군 2	실험군 3	실험군 4	대조군
대상 1	+++	++	++	+	++	+	-
대상 2	+++	++	+	+	+	+	-
대상 3	+++	++	+	+	+	+	-
대상 4	+++	+++	++	+	+	+	-
대상 5	+++	+++	+	++	+	+	-
대상 6	+++	+++	+++	++	+++	++	-
대상 7	+++	+++	++	+	++	++	-
대상 8	++	++	++	+	++	++	-
대상 9	+++	+++	++	+	++	+	-
대상 10	+++	+++	+	+	+	+	-
대상 11	+++	+++	++	+	++	+	-
대상 12	++	++	+	+	++	+	-
대상 13	+++	++	++	+	+	+	-
대상 14	+++	+++	+	+	++	+	-
대상 15	+++	+++	++	++	++	+	-
대상 16	++	+	+	+	++	+	-
대상 17	+++	+++	++	+	++	++	-
대상 18	+++	+++	+	+	+	+	-
대상 19	+++	+++	+	+	+	++	-
대상 20	+++	+++	++	++	++	+++	-

실험 결과 실시예 1 이 가장 우수한 무릎 통증 완화 효과를 나타냈다. 상기 표 1을 보면 실시예 2도 비슷한 결과를 나타낸다고 해석할 수 있지만, 실시예 1의 경우 1회 내지 2회만 제공해도 대부분의 실험대상에서 무릎 통증 완화 효과가 완전히 사라진 반면, 실시예 2는 1회 내지 2회만 제공할 경우 무릎 통증이 완전히 사라진 경우는 거의 없고, 3회 이상을 제공할 경우에만 무릎 통증이 완전히 사라졌다.

실험예 2 : 5-LO 및 COX-2 저해 활성 측정

5-리폭시게나제(5-Lipoxygenase, 이하 5-LO)는 아라키돈산을, 염증 매개인자로 잘 알려진 류코트리엔으로 전환시키는 물질로써, 염증을 악화시키는 매개체의 하나이다. 상기 실시예 1에 의하여 제조된 조성물의 5-LO 저해 효능 측정은 분석키트(lipoxygenase inhibitor screening assay kit)를 이용하여 실험하였다. 상기 실시예 1에 의하여 제조된 조성물 10 μL에 5-LO(220 units/mL) 90 μL 및 1 mM의 아라키돈산 10 μL를 첨가하여 5분간 상온에서 반응시킨 후, 색원체(chromogen) 100 μL를 가하여 상온에서 5분 동안 반응시키고 ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay) 오토리더기를 사용하여 490 nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성 대조군으로 노르디히드로구아이아레틱산(nordihydroguaiaretic acid, NDGA)을 사용하여 저해율을 산출하였다.

사이클로옥시게나제-2(Cyclooxygenase-2, 이하 COX-2)는 염증 유발인자로 알려져 있다. 실시예 1 조성물의 COX-2 저해 효능은 COX 저해 스크리닝 분석 키트(COX inhibitor screening assay kit)를 이용하여 실험하였다. 상기 실시예 1의 조성물 20 μL에 hemo 10 μL, 효소 5 μL, 버퍼 950 uL를 넣고 37℃에서 반응시킨 후, 10 μL의 아라키돈산을 첨가하여 37℃에서 2분간 반응시켜 COX-1과 COX-2를 활성화시켰다. 그 다음, 이 중 50 μL를 취하여 200 μL의 색원체를 넣은 후 25℃에서 90분간 반응시킨 다음, ELISA 오토리더기 420 nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성 대조군으로 비스테로이드성 소염 진통제(Nonsteroidal anti-inflammatory drugs, NSAIDs) 중의 하나인 인도메타신(indomethacin)을 사용하여 저해율을 산출하였다.

실험 결과 5-LO 및 COX-2 저해 효능 모두, 우슬 추출물 또는 마가목 추출물을 각각 처리하는 것 보다 상기 실시예 1의 조성물에서 현저히 높은 효능을 보이는 것을 확인할 수 있었다.

실험예 3 : PGE ₂ 생성량 측정

프로스타글란딘 E2(Prostaglandin E2, 이하 PGE2)는 COX-2의 작용에 의하여 분비되어 연조직의 염증을 악화시키는 인자로 알려져 있다. 상기 실시예 1 조성물의 PGE₂ 생성 억제 효능을 측정하기 위하여 Korean Cell Line Bank(KLCB)로부터 Murine macrophage cell line RAW 264.7 세포를 분양받아, 10% FBS(Fetal Bovine Serum)와 1% 항생제가 첨가된 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium) low glucose 배지를 이용하여 5% CO₂가 존재하는 37℃ 인큐베이터에서 2~3일에 한번 씩 계대 배양을 시행하였다. 이후 상기 RAW 264.7 세포 배양액 내의 PGE₂ 함량을 효소 면역 분석법 키트를 이용하여 측정하였다. RAW 264.7 세포를 DMEM low glucose 배지를 이용하여 1 X 10⁵ cells/mL 농도로 96 웰 플레이트에 분주하여 5개의 샘플을 준비한 후, 그 중 4개의 샘플에 각각 세균성 염증유발물질인 지질다당류(Lipopolysaccharide, 이하 LPS) 100 ng/mL를 처리하여 염증을 유발시키고, 이 4개의 샘플에 실시예 1 조성물을 각각 농도를 달리하여(각각 0, 62.5, 125, 250μg/mL) 처리한 후 24시간 동안 배양하였다. 24시간 후, 세포 배양 상등액을 취하여 PGE₂의 생성량을 측정하였다.

실험 결과 PGE₂의 생성량은 우슬 추출물 또는 마가목 추출물을 각각 처리하는 것 보다 상기 실시예 1의 조성물에서 현저히 감소하는 것을 확인할 수 있었다.

실험예 4 : MMPs의 발현 감소 여부 측정

기질성 금속단백분해효소(Matrix metalloproteinases, 이하 MMPs)는 연골 및 관절의 세포외 기질(Extracellular matrix, ECM)의 파괴를 유도하고, 관절염 등의 질환을 진행시켜 서서히 악화시키는 인자로 알려져 있다. 상기 실시예 1 조성물이 MMPs 발현을 감소시키는지 여부를 측정하였다.

실험 결과 MMP-1, MMP-3 및 MMP-13 단백질 발현 및 mRNA 발현은 우슬 추출물 또는 마가목 추출물을 각각 처리하는 것 보다 상기 실시예 1의 조성물에서 현저히 감소하는 것을 확인할 수 있었다.

Claims (4)

1. 우슬 에탄올 추출물, 마가목 가지 또는 껍질의 에탄올 추출물 및 서리태 에탄올 추출물을 중량기준 1 : 1 : 2의 비율로 포함하는 관절 통증 완화용 식품 조성물.
   
2. 삭제
3. 삭제
4. 삭제