KR101484386B1

KR101484386B1 - 들쭉 추출물로부터 분리된 페놀류 화합물을 유효성분으로 함유하는 황반 변성증의 치료, 예방 또는 개선용 조성물

Info

Publication number: KR101484386B1
Application number: KR20130007402A
Authority: KR
Inventors: 정수영
Original assignee: 정수영
Priority date: 2013-01-23
Filing date: 2013-01-23
Publication date: 2015-01-19
Also published as: WO2014116013A1; KR20140094847A

Abstract

본 발명은 들쭉 추출물로부터 분리된 페놀류 화합물 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 황반 변성증 치료, 예방 또는 개선용 약제학적 조성물을 제공한다. 본 발명의 페놀류 화합물은 청색광에 대하여 ARPE-19 세포를 유의성 있게 보호시키는 효과가 있으며, 이에 의하여 황반 변성증의 치료, 예방 또는 개선 효과를 나타낸다.

Description

들쭉 추출물로부터 분리된 페놀류 화합물을 유효성분으로 함유하는 황반 변성증의 치료, 예방 또는 개선용 조성물{A composition for treating macular degeneration, comprising a phenolic compound isolated from extract of Vaccinium Uliginosum as an active ingredient}

본 발명은 천연물로부터 분리된 화합물을 함유하는 황반 변성증 치료, 예방 또는 개선을 위한 조성물에 관한 것이다.

일반적으로 눈의 안쪽 망막의 중심부에 위치한 신경조직을 황반이라고 하는데, 시세포의 대부분이 이곳에 모여 있고 물체의 상이 맺히는 곳도 황반의 중심이므로 시력에 대단히 중요한 역할을 담당하고 있다. 여러 가지 원인에 의해 이 황반부에 변성이 일어나 시력 장애를 일으키는 안과 질환을 황반 변성(증)이라 하며, 황반 변성증은 녹내장, 당뇨병성 망막 질환과 더불어 3대 실명 질환의 하나로 알려져 있다.

이러한 황반 변성증은 중심 시력에 영향을 주어 시야 가운데가 흐릿하게 보이고, 중심 암점, 변시증(사물이 찌그러져 보이는 증상) 또는 국소 부분의 시력 상실로 인해 독서, 운전 등의 정교한 활동 수행을 곤란하게 할 수 있으며, 심할 경우 실명으로까지 이어지는 매우 심각한 질병이다.

노인성 황반 변성증 (AMD: Age-related Macular Degeneration)은 선진국의 55세 이상 사람들에게서 흔히 나타나는 시력상실의 가장 일반적인 원인 증상이다. 미국에서는 천만 명의 사람들이 다양한 형태의 노인성 황반 변성증으로 고통 받고 있다고 추정된다. 수명연장과 현재의 인구통계학적 증가추세로 볼 때, 이러한 수치는 2020년까지 3배에 달할 것이라고 기대된다. 하지만 모든 노인성 황반 변성증이 급격하게 심각한 시력상실을 야기하지는 않는다.

또한, 노인성 황반 변성증에는 건성(dry)과 습성(wet) 노인성 황반 변성증의 두 종류가 존재한다. 습성 노인성 황반 변성증이 중심 망막에서의 맥락막 신생혈관을 야기하는 것에 기인하여 급격한 시력상실의 결과를 초래한다. 그렇지만 노인성 황반 변성증의 약 10%만이 습성 노인성 황반 변성증이다. 드루젠(망막과 맥락막 사이의 노란색의 침전물)의 존재로 특징 지어지는 건성 노인성 황반 변성증은 혈액이나 혈장의 어떠한 누출도 야기하지 않는다. 따라서 건성은 급격한 시력상실의 결과를 초래하지는 않는다.

이 질환의 근원적인 메커니즘은 여전히 알려져 있지 않지만, 노인성 황반 변성증은 광수용체 세포의 사멸에 따른 중심시력의 상실로 특징 지어지며, 다인성의 병인기전을 가지고 있을 것으로 여겨진다. 최근에 다양한 요소들(예를 들면, 흡연, 비만, 식습관, 혈중 내 콜레스테롤 증가, 청색광 조사 등)이 노인성 황반 변성증의 촉진을 야기한다고 보고 되고 있다. 광수용체 세포의 손상과 그에 따른 세포사멸이 망막색소상피의 퇴화 (변성)를 야기한다.

또한 눈 망막 중심부에 지방갈색소(리포푸신)의 축적이 망막 중심부 아래에 있는 망막색소상피세포에서 가장 크다고 알려져 있다. 이는 이 부분이 간상세포 광수용체가 많이 밀집되어 있다는 사실을 반영한다.

N-retinyl-N-retinylidene ethanolamine (A2E) (바깥쪽 부분의 디스크 내에 있는 all-trans-retinal 의 부산물로서 생성)가 리포푸신의 주요 발색단이며, 청색광에 노출되었을 때 활성산소종의 생성을 야기한다.

청색광은 상대적으로 고에너지량을 가진 빛에 속한다. 이러한 440nm정도의 청색광으로부터 단시간 노출되었을 때, 세포의 손상은 증가하며 이는 단파장의 빛일수록 더 증가한다. 이는 리포푸신의 발색단인 A2E에 따른 청색광의 민감도가 왜 노인성 황반 변성증이 망막색소상피세포의 리포푸신과 관련되어 있는지 설명해주며, 계속적인 빛의 노출이 노인성 황반 변성증의 망막색소상피세포의 사멸을 더욱 촉진시키며, 이는 결국 광수용체 세포의 변성을 야기하는 주된 원인 중 하나가 된다.

노인성 황반 변성증은 주로 노인들에게 많이 나타나며, 시력상실과 실명의 원인인 질환이다. 그러나 이 질환의 정확한 발생기전은 아직 규명되지 않았으며, 몇몇의 연구자들은 A2E의 과도한 축적으로 인해서 RPE세포의 사멸이 AMD의 요인이라고 보고하고 있다. 대한민국 공개특허 제10-2011-0102246호에는 들쭉 추출물은 여러 종류의 세포에 있어서 황산화 효과가 있음을 보고하고 있다. ARPE-19 세포에 있어서, 들쭉 추출물 처리가 청색광이 유도한 세포사멸을 농도의존적으로 감소시켰고, 들쭉 추출물 분획물 중, 폴리페놀 분획물이 세포생존에 있어서 가장 뛰어난 효과가 있음을 보고하였다. 그러나, 들쭉 추출물 성분들 중 그 보호 효과를 나타내는 화합물은 구체적으로 밝혀져 있지 않았다.

한편, 건강기능식품 분야에서, 개별 인정형으로서 승인된 루테인(lutein)이 있다. 루테인은 망막의 황반을 보호하는 성분으로 황반색소밀도를 유지시켜 황반의 변성을 예방할 수 있지만 루테인과 같은 카로티노이드를 함유한 보충제를 장시간 사용하면 폐암발병 위험이 높아진다는 연구결과가 있고 특히 흡연자는 더위험한 것으로 나타났다. 따라서 흡연환자들이 루테인관련 제품을 복용하는 것은 위험할 수 있다.

본 발명은 들쭉 추출물로부터 분리된 페놀류 화합물을 포함하는 황반 변성증의 치료, 예방 또는 개선용 조성물을 제공하고자 한다.

들쭉 추출물 성분들 중에서 폴리페놀과 안토시아닌이 가장 풍부하며 또한 가장 활성이 뛰어난 성분이다. 이전의 연구들에서 폴리페놀과 안토시아닌이 산화스트레스 하에서 다양한 세포들을 보호한다는 것을 밝혀져 있었으나, 청색광 유도에 따른 세포손상에 있어서 폴리페놀과 안토시아닌의 효과는 여전히 불확실하였던 바, 본 발명자는 들쭉 추출물로부터 분리 정제한 페놀류 화합물이 A2E의 세포내 축적을 저해함으로써 청색광-유도 망막색소상피세포의 사멸을 억제할 수 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명은 들쭉 추출물로부터 분리된 페놀류 화합물 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 황반 변성증의 치료, 예방 또는 개선용 약제학적 조성물을 제공한다.

보다 바람직한 본 발명의 모습으로, 본 발명은 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올을 이용하여 분획화한 후, 에틸아세테이트 분획을 역상 HPLC를 이용하여 분리된 페놀류 화합물 및 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 황반 변성증의 치료, 예방 또는 개선용 약제학적 조성물을 제공한다.

보다 바람직한 본 발명의 모습으로, 본 발명은 들쭉 추출물로부터 분리된 페놀류 화합물로써, 미리세틴-3-O-갈락토시드 및/또는 퀘르세틴-3-O-아라비노푸라노시드, 및 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 황반 변성증의 치료, 예방 또는 개선용 약제학적 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한 들쭉 추출물로부터 분리된 페놀류 화합물 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 황반 변성증 예방 또는 개선용 건강기능 식품을 제공한다.

본 발명에서, 들쭉 추출물로부터 분리된 페놀류 화합물은 들쭉 추출물을 클로로포름, 에틸 아세테이트, 부탄올 등을 이용하여 분획화한 후, 에틸 아세테이트 분획을 역상 HPLC를 이용하여 분리하고, 정제하여 얻어진다. 이렇게 얻어진 페놀류 화합물들은 미리세틴, 미리세틴-3-O-갈락토시드, 퀘르세틴, 퀘르세틴-3-O-갈락토시드, 퀘르세틴-3-O-아라비노푸라노시드 등을 포함하며, 이들의 화학구조는 아래와 같다.

<미리세틴>

<미리세틴-3-O-갈락토시드>

<퀘르세틴>

<퀘르세틴-3-O-갈락토시드>

<퀘르세틴-3-O-아라비노푸라노시드>

특히, 본 발명에서 바람직한 들쭉 추출물로부터 분리된 페놀류 화합물은 미리세틴-3-O-갈락토시드, 퀘르세틴-3-O-아라비노푸라노시드이며, 가장 바람직한 페놀류 화합물은 퀘르세틴-3-O-아라비노푸라노시드이다.

본 발명에서 유효성분으로 함유되는, 들쭉 추출물로부터 분리된 페놀류 화합물은 자연계에 존재하거나, 당업자에 통상적으로 제조될 수 있는, 약학적으로 허용 가능한 염 형태를 포함할 수 있다.

상기 들쭉 추출물은 들쭉나무(Vaccinium uliginosum)의 꽃, 열매, 잎 또는 수피 등으로부터 추출될 수 있으며, 바람직하게는 들쭉나무의 열매로부터 추출될 수 있다. 상기 들쭉 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 용매, 바람직하게는 물 또는 에탄올로 추출한 것을 포함하고, 5℃ 내지 100℃의 추출온도에서 1시간 내지 96시간 동안 1회 내지 5회 반복하여 추출하는 단계를 포함하는 추출방법으로 얻어진다.

이렇게 얻어진 들쭉 추출물로부터 당 분야에서 통상적으로 사용되는 화합물 분리 방법에 따라 페놀류 화합물들을 분리할 수 있으며, 본 실시예에 기재된 바와 같이, 들쭉 추출물을 클로로포름, 에틸 아세테이트, 부탄올 등의 용매를 이용하여 분획화하고, 구체적으로 들쭉 추출물을 증류수에 녹이고 연속적으로 클로로포름, 에틸 아세테이트, 부탄올을 이용하여 분획화한 후, 상기 용매 분획 중 에틸아세테이트 분획을 역상 HPLC 를 이용하여 분리 정제함으로써 페놀류 화합물들을 분리할 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 상기한 들쭉 추출물로부터 분리된 페놀 화합물에 추가로 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함할 수 있다. 상기 약제학적으로 허용가능한 담체는 당업계에서 통상적으로 사용되는 것들, 예컨대 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 포함하나 이에 국한되지 않는다. 또한, 본 발명의 약학 조성물은 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제, 기타 약제학적으로 허용 가능한 첨가제를 포함할 수 있다. 제제화에 관한 내용은 Remington's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA 등의 문헌을 참조할 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성별, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 예를 들면, 1일 0.001 내지 1000 mg/kg의 용량으로 투여할 수 있으며, 상기 투여는 하루에 한번 또는 수회 나누어 투여할 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 경구로도, 비경구로도 투여할 수 있다. 투여 제형으로서는 점안제, 안연고제, 주사제, 정제, 캡슐제, 과립제, 산제 등을 들 수 있으며, 특히 점안제 또는 안연고제가 바람직하다. 이들은 범용되고 있는 기술을 이용하여 제제화할 수 있다.

예컨대, 점안제는 염화나트륨, 농 글리세린 등의 등장화제, 인산나트륨, 초산나트륨 등의 완충화제, 폴리옥시에틸렌소르비탄 모노올레이트, 스테아르산 폴리옥실 40, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 등의 계면활성제, 시트르산나트륨, 에데트산나트륨 등의 안정화제, 염화벤잘코늄, 파라벤 등의 방부제 등을 필요에 따라 사용하여 조제할 수 있다. pH는 안과 제제에 허용되는 범위 내에 있으면 되지만, 4 ∼ 8의 범위가 바람직하다.

본 발명의 또 다른 구현 형태로서, 본 발명의 조성물은 식품 조성물, 특히 기능성 식품 조성물의 형태, 즉, 건강기능 식품으로 제공될 수 있다. 본 발명의 기능성 식품 조성물은 식품 제조시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소 및 조미제를 포함한다. 천연 탄수화물은 글루코오스, 프럭토오스 등을 포함하는 모노사카라이드; 말토스, 수크로오스 등을 포함하는 디사카라이드; 올리고당; 덱스트린, 시클로덱스트린 등을 포함하는 폴리사카라이드; 및 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등을 포함하는 당알코올을 포함한다. 또한, 향미제로서 타우마틴, 스테비아 추출물 등을 포함하는 천연 향미제 및 사카린, 아스파탐 등을 포함하는 합성 향미제를 이용할 수 있다.

본 발명의 다른 구현 형태로서, 본 발명은 상술한 약제학적 조성물 또는 식품 조성물을 황반 변성증 환자 또는 황반 변성증의 위험을 갖는 대상에 투여하거나, 조성물의 제형에 따라서는 적용하는 것을 포함하는 황반 변성증의 치료, 예방 또는 개선 방법을 제공한다. 상기 대상은 인간을 포함한 포유동물이다. 바람직하게는, 황반 변성증은 노인성 황반 변성증이며, 특히는 청색광-유도 망막색소상피세포 사멸에 의한 황반 변성증이다.

본 발명의 용도, 조성물, 방법에서 언급된 사항은 서로 모순되지 않는 한 동일하게 적용된다.

본 발명의 들쭉 추출물로부터 분리된 페놀류 화합물은 A2E의 세포내 축적을 저해하여 청색광-유도 망막색소상피세포의 사멸을 억제하고, 황반 변성증의 치료, 예방 또는 개선 효과를 나타낸다.

도 1은 컬럼을 통해 들쭉 추출물을 분획화하는 과정을 나타낸 그림이다.
도 2는 들쭉 추출물로부터 페놀류 화합물을 분리하는 과정을 나타낸 모식도이다.
도 3은 들쭉 추출물의 에틸 아세테이트 분획으로부터 역상 HPLC에 의해 분리된 화합물들의 UV 흡광도를 나타낸 도이다.
도 4는 페놀류 화합물 중 EA-1의 화합물이 미리세틴-3-O-갈락토시드임을 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 5는 페놀류 화합물 중 EA-3의 화합물이 퀘르세틴-3-O-갈락토시드임을 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 6은 페놀류 화합물 중 EA-5의 화합물이 퀘르세틴-3-O-아라비노푸라노시드임을 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 7은 페놀류 화합물 중 EA-6의 화합물이 미리세틴임을 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 8은 페놀류 화합물 중 EA-10의 화합물이 퀘르세틴임을 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 9는 청색광에 의한 ARPE-19 세포 사멸에 대한 페놀류 화합물의 예방 효과를 나타낸 것이다.

이하, 본 발명을 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예 및 시험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.

[ 실시예 ]

실시예 1. 들쭉 추출물의 제조

건조된 들쭉 (들쭉열매 100g)을 분쇄기로 분쇄하고 열수(90℃, 물2000mL)로 16시간 동안 두 번에 걸쳐 추출하여 10%의 들쭉 추출물을 얻었다. 수득된 추출물은 동결건조 시킨 후 사용하기까지 -80℃에 보관하였다.

실시예 2. 들쭉 추출물로부터 페놀류 화합물의 분리 및 정제

상기 실시예 1에서 얻어진 들쭉 추출물(동결 건조물) 25g을 도2에 나타난 바와 같이 증류수에 녹이고 연속적으로 클로로포름, 에틸 아세테이트, 그리고 n-부탄올을 이용하여 분획화하였다. 구체적으로, 에틸 아세테이트 분획의 페놀류 화합물들은 다음의 방법으로 분리되었다. 상기 들쭉 추출물 동결 건조 분말을 증류수에 녹였다. 그와 별도로 두 개의 C18 Sep-Pak 카트리지를 연결하고 10 ㎖ 에틸 아세테이트, 무수 메탄올로 전조건화(precondition) 시킨 후 0.01 N 수성 HCl를 카트리지에 흘려 주었다. 증류수에 녹인 들쭉 추출물을 카트리지 안으로 로딩하고 0.01 N 수성 HCl 6 ㎖로 탄수화물/산류 및 기타 수용성 화합물들을 제거하였다. 제거된 층이 탄수화물/산 분획이었다. 카트리지의 건조를 위해 질소 가스를 연결된 C18 Sep-Pak 카트리지에 10분 동안 통과시켰다. 건조된 카트리지에 20 ㎖ 에틸 아세테이트를 흘려 test tube 안에 페놀성 화합물들을 수집하였다. 색소 분획은 0.1 %(v/v) HCl가 포함된 무수 메탄올 10 ㎖을 이용하여 다른 test tube 안에 수집하였다. 분획 내 용매는 40℃에서 농축기를 이용하여 제거하였다. 참고로, 색소분획과 탄수화물/산 분획은 증류수에 녹이고, 폴리페놀 분획은 50 % 수성 에탄올에 녹여 -70℃ Deer Freezer에서 보관하여 실험에 사용하였다.

상기 페놀류 화합물들의 분획을 메탄올에 녹이고 역상 HPLC를 이용하여 분리, 정제하였다. 단일 물질의 구조는 NMR과 Mass spectrometry로 분석하였다.

모든 단일 활성 성분들이 플라보노이드가 발견되는 255과 365 nm에서 흡수 파장을 나타내었고 비슷한 UV 스펙트럼을 보여주었다(도3). 분리된 flavonoid와 flavonoid glycoside는 aglycones에 의해 4 group으로 나뉘었다 MeOH-water 35:65를 사용한 HPLC를 이용하여 추출물에서 VU-EA-H1(16.6㎎), VU-EA-H3(19.8 ㎎), VU-EA-H5(6.5 ㎎) 그리고 VU-EA-H6(23.5 ㎎) MeOH-water 50:50을 사용한 HPLC를 이용하여 VU-EA-10(12.4 ㎎)을 분리하였다. 본 화합물들이 각각 미리세틴-3-O-갈락토시드(myricetin-3-O-galactoside: VU-EA-H1), 퀘르세틴-3-O-갈락토시드(quercetin-3-O-galactoside: VU-EA-H3), 퀘르세틴-3-O-아라비노푸라노시드(quercetin-3-O-arabinofuranoside: VU-EA-H5) 및 미리세틴(myricetin: EA-H6)임을 확인하였다. 한편, 메탄올-물, (50: 50 부피/부피)를 사용하여 얻어진 분획물을 위와 같은 방법으로 역상 HPLC를 이용하여 농축하고 정제하여 EA-10 (12.4 mg)을 분리하여, 본 화합물이 퀘르세틴(quercein: VU-EA-H10)임을 확인하였다. (도 4 내지 8 참조)

실시예 3. A2E (N- retinyl -N- retinylidene ethanolamine ) 합성

All-trans retinal (30 mg, 105.6μmol)과 ethanolamine (2.85 mg, 46.5μmol)을 ethanol(3.0mL)에 넣고 아세트산(2.79μL, 46.5μmol)을 첨가한 후, 빛차단 덮개로 가리고 암 조건에서 3일간 합성시켰다. 진공에서 농축시킨 후, 그 혼합물을 양이온 교환 수지(Ambelite^®IRC-50 ion exchange)를 사용해서 정제하였다. 수지에 붙은 혼합물을 80% 메탄올 (pH 12)로 씻어준 후, A2E와 iso-A2E를 0.1% TFA(trifluoroacetic acid)가 첨가된 100% 메탄올 (pH 2) 용매를 사용하여 용출시켰다. 정제된 A2E와 iso-A2E는 회전식 증류기를 사용하여 농축시킨 후, 메틸렌 클로라이드(CH₂Cl₂))에 녹였다. TFA를 제거하기 위해 분별 깔때기에 증류수를 첨가하고 흔들어 주었다. 메틸렌 클로라이드 분획물은 회전식 증류기에서 농축하였다. 그 혼합물은 다음에 사용할 때까지 -20℃도에 보관하였다.

[ 실험예 ]

실험예 1. 블루라이트에 의한 ARPE -19 세포 사멸에 대한 페놀류 화합물의 억제 효과 확인

상기 실시예 2에서 분리 정제된 페놀류 화합물들(myricetin-3-O-galactoside, quercetin-3-O-galatoside, quercetin-3-O-arabinofuranosie, myricetin, quercetin)의A2E에 대한 ARPE-19 세포 사멸에서 대한 예방효과에 관하여 하기와 같은 실험을 진행하였다.

세포 안의 A2E가 전혀 없는 세포인 성인사람 RPE 세포 (ARPE-19, ATCC)를 사용하였으며, 이 세포를 10% FBS, 100 u/ml penicillin, 100 mg/mL streptomycin이 포함된 DMEM의 배지를 만들어 5% CO₂ 의 습한 조건에서 37℃에서 배양하였다.

실험군으로, 배양된 APRE-19 세포 내 A2E 축적에 앞서 상기 페놀류 화합물 (EA-1, 3, 5, 6, 10) 20 μM을 각각 처리하고, 이어서 PBS에 20μM로 용해시킨 A2E를 3일 동안 처리하여 APRE-19 세포 내 A2E를 축적시켰다. 양성 대조군으로 상기 페놀류 화합물 대신 루테인 30μM을 A2E 축적 전에 처리하였으며, 음성 대조군은 사전 약물 처리 없이 A2E 만을 축적시켰다. 이렇게 3일간 A2E를 축적시킨 후, 블루라이트(430 nm, 4.02 J/cm²)를 7분 동안 조사하였다. 이어서, 세포를 완전한 배지로 24시간 동안 배양시키고, 아이스 위에서 스크래핑하여 세포를 얻었다. 세포 생존은 단백질 정량법을 이용하여 측정하였으며, 단백질 정량은 Lowry 방법으로 사용하였고, 스탠다드로는 bovine serum albumin을 사용하였다. 세포 생존률은 블루라이트 미조사 A2E 처리군과 대비하여 계산하였다. 그 결과를 도 9에 나타내었다.

도 9에 나타난 바와 같이, A2E를 처리한 ARPE-19 세포의 전체 단백질의 양이 블루라이트를 조사하였을 때, 약 55% 정도 감소한 것으로 확인되었다. 즉, A2E 축적 APRE 세포에 블루라이트 조사시 생존률은 약 45% 이하로 감소하여, 블루라이트 유도-A2E 축적에 의한 세포 독성을 확인할 수 있었다(A2E 축적/블루라이트조사 군: A2E/BL군).

한편, 퀘르세틴-3-O-갈락토시드(EA-3) 처리군의 경우 A2E/BL군과 대비하여 세포 생존율이 약 7.7% 밖에 증가하지 않아 미미한 망막세포 보호 효과를 나타낸 반면, 미리세틴-3-O-갈락토시드(EA-1), 미리세틴(EA-6), 퀘르세틴(EA-10), 퀘르세틴-3-O-아라비노푸라노시드(EA-5)를 처리한 결과 각각25%, 26.1%, 27.7%, 39.7%의 생존능의 망막세포 보호효과를 보였다.

상기 시험 결과는 블루라이트와 A2E의 작용에 의한 망막세포의 사멸에 대하여 미리세틴과 퀘르세틴이 유효한 억제 효과를 나타냄을 확인한 것이다. 특히, 퀘르세틴 배당체라 하더라도, 퀘르세틴-3-O-아라비노푸라노시드는 퀘르세틴에 비하여 약 12%나 더 높은 망막세포 보호효과를 나타내는 것으로 확인된 반면, 퀘르세틴-3-O-갈락토시드는 퀘르세틴에 비하여 현저히 열등한 효과를 나타내는 것으로 확인되었다. 한편, 같은 3-O-갈락토시드 유도체임에도, 미리세틴-3-O-갈락토시드는 미리세틴 보다 열악한 효과를 나타내지 않고, 미리세틴과 동등한 수준의 우수한 망막세포 보호효과를 나타내는 것으로 확인되었다.

Claims

들쭉 추출물로부터 분리된 페놀류 화합물인 미리세틴-3-O-갈락토시드 또는 퀘르세틴-3-O- 아라비노푸라노시드; 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 황반 변성증의 치료, 예방 또는 개선용 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 페놀류 화합물은 들쭉 추출물을 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올을 이용하여 분획화한 후, 역상 HPLC를 이용하여 분리된 것인 약제학적 조성물.
삭제
제1항에 있어서, 페놀류 화합물은 퀘르세틴-3-O-아라비노푸라노시드인 약제학적 조성물.
제1항, 제2항 또는 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 황반 변성증은 노인성 황반 변성증인 약제학적 조성물.
들쭉 추출물로부터 분리된 페놀류 화합물인 미리세틴-3-O-갈락토시드 또는 퀘르세틴-3-O- 아라비노푸라노시드; 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 황반 변성증 예방 또는 개선용 건강기능 식품.