KR101474235B1 - 대장암 예방 건강밥과 그 제조방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 대장암 예방 건강밥과 그 제조방법에 관한 것이다. 본 발명은 쌀을 수세하여 오염물질을 제거한 후 30분정도 물에 침지하여 물이 쌀 전분 알맹이 속에 고루고루 스며들게 하는 제1단계와, 상기 제1단계를 통해 세수되고 침지된 쌀을 용기에 수용하고, 상기 용기에 취반수를 물은 쌀 무게의 1.3∼1.5 배의 양을 투입하는 제2단계와, 상기 제2단계를 통해 쌀과 취반수가 수용된 용기를 98∼100℃의 온도로 15∼18분 정도 가열하여 밥을 조리하여 취반하는 제3단계와, 상기 제3단계를 통해 조리되어 취반된 밥의 가열을 중단시키고 10∼15분 정도 뜸들이는 제4단계로 이루어지는 밥의 제조방법에 있어서, 상기 단계에서, 상기 쌀은 전체 100중량부 중에서 발효현미 35~45 중량부, 찰현미 18~22 중량부, 찰수수쌀 8~12 중량부, 찰기장쌀 8~12 중량부, 서리태 7~9 중량부, 상황쌀 4~6 중량부, 강황쌀 4~6 중량부, 율무쌀 1~3 중량부의 혼합 잡곡으로 구성되는 것을 특징으로 하는 것이다.
본 발명은 항암 기능성 물질인 상황버섯과 카레분말을 쌀에 코팅 첨가하여 암 세포의 침윤 능력을 억제하여 대장암의 예방 및 억제 효과를 가져올 수 있는 것이다.

Description

대장암 예방 건강밥과 그 제조방법 {Large intestine Colon Cancer preventive Health food and the manufacture Method}

본 발명은 대장암 예방 건강밥과 그 제조방법에 관한 것이다. 더욱 자세하게는, 상황버섯 추출물을 비롯한 혼합 잡곡물을 첨가한 기능성 물질을 함유하여 대장암 예방 효과를 높일 수 있는 대장암 예방 건강밥과 그 제조 방법에 관한 것이다.

암은 아직도 가장 다루기 힘든 질병들 중의 하나이며, 환자들의 완치를 위하여 끊임없이 연구되고 있다. 또한, 병원에서는 암을 치료하기 위하여 약물치료, 방사선 치료, 유전자 치료 등의 기술을 이용하고 있다. 이러한 치료들은 환자에게 치료 가능성의 희망을 주는 것과 동시에 많은 부작용과 고통을 수반하게 된다. 특히, 약물치료에 의한 부작용으로 인하여 탈모, 면역력 약화, 피로감 등을 들 수가 있으며, 환자들에게 커다란 불편을 주고 있다.

이러한 부작용을 극복하기 위한 노력으로 최근 개발된 표적형 나노입자 기술과 같은 새로운 약물전달 시스템이 있다. 이 기술은 암세포 주변의 신생혈관들을 통하여 항암제가 전달되어 정상 세포는 살아있는 상태로 유지되면서 암세포만 치료하는 것이다.

현재의 가장 확실한 암치료는 조기에 진단하는 것으로 많은 완치가 가능하다. 조기 진단을 통하여 암세포를 초기에 발견하면 전이가 일어날 가능성이 작을 뿐만 아니라, 재발가능성이 작으며 암세포의 크기가 상대적으로 작아 쉽게 제거가 가능하다.

암 중에서도 최근 대장암 발병률은 크게 증가하여 건강을 위협하고 있으며, 2030년이 되면 대장암의 발병율은 더 많이 증가하여 2배로 증가할 전망이다. 조사결과를 보면 한국 남성에서의 대장암 발병의 주된 원인은 육류를 많이 섭취하는 서구화된 식습관, 과도한 직장 스트레스, 음주와 흡연, 운동부족 등으로 알려져 있다. 실제 농림수산부 통계를 보면 우리나라 국민 1인당 연간 쌀 섭취량은 10년 전에 비하여 20kg이 감소(2000년 93.6kg, 2009년 74.4kg)한데 비하여 돼지고기와 소고기 등 붉은 육류의 1인당 연간 섭취량은 같은 기간 약 2kg 이상 증가(2000년 25kg, 2009년 27.2)하였다.

따라서, 대장암에 대한 발병 위험은 갈수록 높아지고 있으므로 적절한 치료제와 예방제를 비롯한 건강식품 용도로의 보조제나 영양밥의 개발이 시급한 실정이다.

본 발명자들은 대장암에서 나타나는 손상과 암 발생 과정에서 관련된 마커들을 측정하여 발효 현미 및 혼합 잡곡의 대장암 예방 효과를 마우스를 이용한 실험을 통하여 확인하고 본 발명을 완성하였다.

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따라서, 본 발명은 마우스를 모델로 하여 대장암을 유발하는 AOM/DSS와 기능성 물질을 동시에 투여하여, 대장의 상태 등을 분석하고 대장암에서 나타나는 손상과 암 발생 과정에서 관련 마커들을 측정함으로서, 대장암을 예방하고 억제하는 효과가 있는 대장암 예방 건강밥과 그 제조방법을 제공하고자 하는데 있는 것이다.

이러한 목적을 달성하기 위하여,쌀을 수세하여 오염물질을 제거한 후 30분정도 물에 침지하여 물이 쌀 전분 알맹이 속에 고루고루 스며들게 하는 단계와, 상기 단계에서, 상기 쌀은 전체 100중량부 중에서 발효현미 35~45 중량부, 찰현미 18~22 중량부, 찰수수쌀 8~12 중량부, 찰기장쌀 8~12 중량부, 서리태 7~9 중량부, 상황쌀 4~6 중량부, 강황쌀 4~6 중량부, 율무쌀 1~3 중량부의 혼합 잡곡으로 구성되며, 상기 단계를 통해 세수되고 침지된 쌀을 용기에 수용하고, 상기 용기에 취반수를 물은 쌀 무게의 1.3∼1.5 배의 양을 투입하는 단계와, 상기 단계를 통해 쌀과 취반수가 수용된 용기를 98∼100℃의 온도로 15∼18분 정도 가열하여 밥을 조리하여 취반하는 단계와, 상기 단계를 통해 조리되어 취반된 밥의 가열을 중단시키고 10∼15분 정도 뜸들이는 단계로 이루어지는 것을 특징으로 하는 것이다.

또한, 상기 상황쌀은 상황버섯을 물로 추출하여 냉동 건조시킨 추출물을 쌀의 표면에 코팅한 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 강황쌀은 강황 분말을 물로 추출하여 냉동 건조시킨 추출물을 쌀의 표면에 코팅한 것을 특징으로 한다.

그리고, 상기 방법으로 제조된 대장암 예방 건강밥을 특징으로 한다. .

따라서, 본 발명의 실험방법에 의하여 효험이 입증된 대장암 예방 건강밥은 항암 기능성 물질인 상황 버섯과 카레가 함유됨으로서, 암 세포의 침윤 능력을 억제하여 대장암의 예방 및 억제 효과를 가져올 수 있는 건강식품으로 유용하게 이용될 수 있는 것이다.

도 1은 대장암 예방 건강 밥을 쥐를 이용한 실험 방법의 흐름도.
도 2는 대장암 유발 모델인 AOM/DSS를 투여한 쥐의 체중 변화도.
도 3은 발효현미 및 혼합잡곡이 AOM/DSS를 투여한 대장암 쥐에 미치는 영향(대장 길이)을 나타낸 그래프.
도 4는 발효현미 및 혼합잡곡이 AOM/DSS를 투여하여 유발한 대장암 쥐에 미치는 영향(대장길이/무게 비율 변화))을 나타낸 그래프.
도 5는 발효현미 및 혼합잡곡이 AOM/DSS를 투여하여 유발한 대장암에 미치는 영향(대장 조직의 종양 갯수)을 나타낸 그래프.
도 6은 대장암이 발생한 쥐의 대장 조직 손상의 관찰사진.
도 7와 도 7b는 대장암 유발 모델인 AOM/DSS를 투여한 쥐의 혈청 TNF-α,IL-6, IL-12, IL-17A and IFN-τ 발현을 나타내는 그래프.
도 8a 내지 도 8c는 RT-PCR 실험결과 대장조직 내 pro-inflammatory cytokines(TNF-α,IL-6, IL-12, IL-17A and IFN-β)의 mRNA 발현수준을 나타낸 그래프.
도 9a와 도 9b는 RT-PCR 실험결과 대장조직 내 iNOX와 COX-2의 mRNA 발현수준을 나타낸 그래프.
도 10a 내지 도 10c는 대장 조직내 유전자 p53, p21, cyclin-D1 및 cell apoptosis와 관련된 caspase-3의 발현수준을 나타낸 그래프.

이하에서는 본 발명의 이해를 돕기 위하여 도면을 첨부하여 바람직한 실시예 및 실험예를 제시한다. 그러나, 하기의 실험예 및 실시예는 본 발명을 보다 이해를 쉽게 하기 위하여 제공될 뿐, 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아님을 유의하여야 한다.

도 1은 대장암 예방 건강 밥을 쥐를 이용한 실험 방법의 흐름도이고, 도 2는 대장암 유발 모델인 AOM/DSS를 투여한 쥐의 체중 변화도이고, 도 3은 발효현미 및 혼합잡곡이 AOM/DSS를 투여한 대장암 쥐에 미치는 영향(대장 길이)을 나타낸 그래프이고, 도 4는 발효현미 및 혼합잡곡이 AOM/DSS를 투여하여 유발한 대장암 쥐에 미치는 영향(대장길이/무게 비율 변화))을 나타낸 그래프이고, 도 5는 발효현미 및 혼합잡곡이 AOM/DSS를 투여하여 유발한 대장암에 미치는 영향(대장 조직의 종양 갯수)을 나타낸 그래프이고, 도 6은 대장암이 발생한 쥐의 대장 조직 손상의 관찰 사진이고, 도 7a와 7b는 대장암 유발 모델인 AOM/DSS를 투여한 쥐의 혈청 TNF-α,IL-6, IL-12, IL-17A and IFN-τ 발현을 나타내는 그래프이고, 도 8a 내지 도 8c는 RT-PCR 실험결과 대장조직 내 pro-inflammatory cytokines(TNF-α,IL-6, IL-12, IL-17A and IFN-τ)의 mRNA 발현수준을 나타낸 그래프이고, 도 9a와 도 9b는 RT-PCR 실험결과 대장조직 내 iNOS와 COX-2의 mRNA 발현수준을 나타낸 그래프이고, 도 10a 내지 도 10c는 대장 조직내 유전자 p53, p21, cyclin-D1 및 cell apoptosis와 관련된 caspase-3의 발현 수준을 나타낸 그래프이다.

본 발명을 설명하기에 앞서, 본 실험에서 사용한 혼합잡곡은 발효현미, 수수, 율무 등의 기능성 잡곡이 섞여있다. 이하에서는 상기 곡물들에 관한 설명을 하기로 한다.

발효현미

발효현미는 혈당과 혈압을 강하시키며 콜레스테롤 감소효과까지 있어 당뇨병 치료는 물론이며 각종 암과 5대 성인병 예방에도 아주 큰 도움이 된다.

또한, 발효현미는 장을 정화시켜 쌓여있던 노폐물이 배출되고 변을 부드럽게 해서 변비가 개선되며 치질예방에도 큰 도움이 되며, 임산부의 산후증을 없애준다.

찰현미

프로테아제방지제를 다량 함유하고있는 찰현미는 지속적으로 복용하면 체내의 포도당 산화를 무려 50% 감소시켜 대장암을 예방하고 흉부 & 전립선암..등 발병률을 줄여주는 암예방 및 치료에 아주 효과적이다.

또한, 찰현미의 쌀겨에 함유된 과탄산 성분은 체내에 과잉 섭취되어진 Ca(칼슘)의 흡수를 억제하여 결석이 생성되는것을 예방한다.

찰수수쌀

찰수수는 고지혈증의 원인인 콜레스테롤의 흡수를 최고 50% 정도 억제하는 효과가 있으며, 몸에 나쁜 LDL-콜레스테롤 함량을 낮추면서도 몸에 좋은 HDL-콜레스테롤에는 별 영향을 미치지 않은 것으로 확인되었다.

이와 함께 혈당과 관련 있는 글루코스과 인슐린 함량을 각각 28.9%, 50.6% 떨어뜨려 고혈당증 예방은 물론 혈전생성도 억제하는데 도움을 준다.

찰기장쌀

찰기장쌀은 항암, 항산화, 혈당조절에 좋은 것으로 알려져 있다. 대장을 순조롭게 하고 옻이 올라 헌 것[漆瘡]을 치료하며 옴독과 열을 없앤다.

서리태(검은 콩)

서리태는 풍부한 단백질은 물론이고 각종 비타민과 토코페롤, 식이섬유, 아연이나 엽산,철분등의 미네랄, 이일반적으로 짜게 먹는 우리의 식생활을 결정적으로 보완할 수 있는 영양소인 칼륨이 매우 풍부하고 칼슘 또한 가득 함유하고 있어 성인병에 좋은 효능을 가진다.

상황쌀

상황쌀은 인체 내의 면역 증강 및 항암과 성인병 치료에 효과가 있다.

강황쌀

강황은 카레의 원료로 사용되며, 관절통증을 완화시키며, 담즙분비촉진, 콜레스테롤 수치의 저하와 대장암, 폐암, 피부암에 효과가 있으며, 스트레스, 음주로 인한 활성산소의 발생을 방지하고 치매, 당뇨 등의 예방에도 효과가 있다. 강황쌀은 강황분말을 미세가공하여 쌀에 코팅하는 방법을 취하는 기능성 쌀이다.

율무쌀

율무쌀은 장복하면 정신이 맑아지고 속이 편안해지는 효능을 지닌 약재이다. 또한 피부가 윤택해진다.

율무쌀이 피부 미용에 효과가 있는데 그 이유는 강력한 이뇨작용과 대사 기능 항진 작용을 지니고 있기 때문이다. 따라서, 피가 탁해짐으로써 생기는 기미나 주근깨, 노인들에게 많이 나타나는 물사마귀 같은 종류의 피부병이 사라지는 효과가 나타난다. 또한 알칼리성이므로 거친 피부가 부드러워지는 효과도 나타난다.

상기와 같은 구성요소를 갖는 본 발명에 의한 대장암 예방 건강밥은 이하의 제조방법에 의하여 제조가 된다.

쌀을 수세하여 오염물질을 제거한 후 30분정도 물에 침지하여 물이 쌀 전분 알맹이 속에 고루고루 스며들게 하는 제1단계와,

상기 쌀의 구성비는 전체 100중량부 중에서 발효현미 35~45 중량부, 찰현미 18~22 중량부, 찰수수쌀 8~12 중량부, 찰기장쌀 8~12 중량부, 서리태 7~9 중량부, 상황쌀 4~6 중량부, 강황쌀 4~6 중량부, 율무쌀 1~3 중량부의 혼합 잡곡으로 구성되AU,

상기 제1단계를 통해 세수되고 침지된 쌀을 용기에 수용하고, 상기 용기에 취반수를 물은 쌀 무게의 1.3∼1.5 배의 양을 투입하는 제2단계와,

상기 제2단계를 통해 쌀과 취반수가 수용된 용기를 98∼100℃의 온도로 15∼18분 정도 가열하여 밥을 조리하여 취반하는 제3단계와,

상기 제3단계를 통해 조리되어 취반된 밥의 가열을 중단시키고 10∼15분 정도 뜸들이는 제4단계로 대장암 예방 건강밥이 이루어지는 형태를 취한다.

상기 제1단계에서, 상기 쌀은 발효현미, 찰현미, 찰수수쌀, 찰기장쌀, 서리태, 상황쌀, 강황쌀, 율무쌀로 구성된다.

이하에서는 쌀을 구성하는 각 구성비에 관하여 설명하기로 한다.

상기 발효 현미는 35~45 중량부로 이루어지는데, 35 중량부 이하면 건강밥을 제대로 구성하기가 어려워 지고 45 중량부 이상이 되면 너무 많은 비중으로 건강밥의 영양을 충분히 전달하기 어렵기 때문이다.

찰현미는 18~22 중량부로 구성되는 데, 18 중량부 미만이 되면 찰현미 고유의 맛을 느끼기 어렵게 되고, 22중량부 이상이 되면 맛과 색상의 강도가 너무 높아지기 때문이다.

그리고, 찰기장쌀과 찰수수쌀은 8~12중량부인데, 역시 8중량부 이하가 되면 양이 미비하여, 12중량부 이상이 되면 너무 진득한 맛이 나기 때문이다.

서리태는 7중량부 이하가 되면 구성 효과가 미미하며, 9중량부가 넘게되면 전체적인 콩의 비중이 너무 높아지게 되어 밥맛이 전체적으로 느끼하게 되기 때문이다.

상황쌀과 강황쌀은 각각 4~6 중량부이다. 상기 구성된 중량부는 각각 4 중량부 미만이 되면 기능성이 미흡하게 되고, 6 중량부를 넘게 되면 해당되는 재료의 맛과 색택이 지나치게 강하게 되어 취식하는데 적절하지 못하기 때문이다. 상기 상황쌀은 상황버섯을 물로 추출하여 냉동 건조시킨 추출물을 상기 쌀의 표면에 코팅한 것이다.

상기 강황쌀은 강황 분말을 물로 추출하여 냉동 건조시킨 추출물을 상기 쌀의 표면에 코팅한 것이다.

이하에서는 본 발명에 의한 대장암 예방 건강밥을 쥐에 섭취하도록 하여 그 결과를 살피는 실제 실험예에 관하여 설명하기로 한다.

[실험예]

<시험동물 및 사육조건>

대장암의 억제 효력을 실험하기 위하여 쥐(Mouse)를 이용하여 실험을 하기 위하여 쥐 56마리를 온도 20±2℃, 습도 40~60%, 명암(明暗) 12시간 주기로 사육하였다.

<시험재료 및 방법>

발효 현미, 혼합곡, 일반 백미, 전통오곡을 순도 100%, 10kg을 준비하여 냉장보관하였다. (단, 유효기간은 1년)

<조 제>

식이는 정상대조군, 일반 백미(WR), 발효현미(FBR), 혼합잡곡(MC), 상황버섯 추출물 첨가 혼합잡곡(MC-S), 카레 첨가 혼합잡곡(MC-K)과 전통오곡밥(MC-T)을 각각 40% 첨가하여 조제하였다(이하 표 1). 정상대조군의 식이는 AIN-93G diet 제조법에 준하여 조제하였으며, 조성물 속에 포함된 당질, 조지방, 조단백 등의 에너지 성분을 고려하여 에너지 수준이 동일하게 하였다. 조제한 식이는 고형으로 만들어 건조시켜 4℃ 냉장 보관하면서 공급하였다. 상황버섯 추출물을 첨가한 혼합잡곡밥은 혼합잡곡(MC)에 0.5%의 상황버섯 열수 추출물을 첨가해서 조제하였다. 카레를 첨가한 혼합잡곡밥은 혼합잡곡(MC)에 약 0.1%의 카레분말(발효강황분말)을 첨가해서 조제하였다.

[표 1]

<시험 방법 : 도 1 참조>

In vivo에서 AOM(10 mg/kg)/DSS(2%))는 마우스에서 대장암을 유발하는 모델이다. 이를 이용하여 대장암 예방효과를 평가하였다. 6주령 C57BL/6J male mouse에 AOM을 복강투여한 후 2주 후에 2% DSS를 음수로 1주간 투여 하며, 2주간 회복기를 가진 다음 다시 1주간 DSS를 투여하였다. 시험물질(발효현미 및 혼합잡곡물)은 AOM유발 2주 후부터 12주간 식이로 공급하였다. 총 14주간의 실험이 끝난 후에 부검을 실시하였다. 상기 부검 후 채혈하여 혈액에서 pro-inflammatory cytokine (TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-12, IL-17A등)의 활성도 측정 및 대장 길이, 대장에서 종양 개수, 대장 조직 병리학 검사, 그리고 RT-PCR를 이용하여 분자 생물학적 방법으로 시험 물질의 대장암 예방효력을 평가하기 위하여 실시하였다.

<군(群)구성 및 투여용량 >

DSS 및 잡곡의 투여경로 - 복강 투여, 식이 공급

투여방법 및 투여횟수 - AOM : 복강투여/1회 (실험 시작일)

발효현미 및 혼합잡곡물 : 식이공급/14주 동안

투여시 주령 - 7주령

상기와 같은 방법으로 건강 보조제를 추출하였다.

이하에서는, 마우스를 이용한 본 발명 실험방법의 관찰 및 실험 순서를 설명하도록 한다.

<1> 사망 및 일반증상 관찰

모든 동물(마우스)에 대하여 투여 및 채혈 종료시간까지 사망 또는 빈사 발생여부 및 일반 증상을 관찰하였다.

<2> 체중 측정

입수 시, 순화기간 중 주 1회, 군분리 시 및 시험기간 중 1주일에 한 번씩 개체 별 체중을 측정하였다. 특히 시험기간 중 체중측정은 매 측정시 오차를 최소화 하기 위하여 동일한 요일과 동일한 시간대(오후 4시 전후)에 동일한 저울을 사용하여 측정하였다.

<3> 마우스의 대장(大腸) 길이 측정

적출한 장기를 자로 재어 길이를 측정하였다. 대장 길이가 짧을수록 대장암이 유발된 것으로 보았다.

<4> 대장 조직의 병리학적 검사

대장 내 잔여 분뇨를 0.9% NaCl로 사용하여 깨끗이 제거하고 10% formalin 용액 안에 넣어 4℃ 냉장 상태에서 24시간 고정 후 파라핀 조직표본을 제작하여 5 ㎛로 각 조직 표본을 절편하였다. 조직학적 검사하기 위해서 hematoxylin & eosin으로 염색하여 저배율 (X40)에서 관찰하고 확대하면서 사진을 찍어 제시하였다.

<5> Serum pro-inflammatory cytokines 측정

Mouse에서 혈액을 채취하여 실험군별로 혈액 sample을 취합한 후, 각각의 혈액을 3000 rpm으로 15분 원심분리하여 혈청을 분리하여 실험하였다. TNF-α, IL-1β, IFN-τ등의 cytokines의 분비는 효소 면역측정법 (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA MAX Deluxe Sets, Biolegend)으로 측정하였다. 미리 96wells microplate에 mouse IFN-α, IL-1β, IFN-τ 등에 대한 capture 항체를 coating buffer 에 희석하여 100 μl 씩을 분주하고 4℃에서 하룻밤 방치하였다. 다음날 plate를 세척용 완충액으로 4번 세척한 후 assay diluent 200 μl을 분주하고 실온에서 1시간 동안 다시 방치하였다. 세척용 완충액으로 4번 세척한 후 detection 항체 100 μl을 분주한 후 실온에서 1시간 동안 다시 방치하였다. 세척용 완충액으로 4번 세척한 후 avidin-horse-radish peroxidase 100 μl을 접종하여 다시 실온에서 30분 방치하고, 세척용 완충액으로 5번 세척하였다. TMB substrate solution이 포함된 기질액 100 μl을 접종하여 실온에서 15분 동안 방치한 후 stop solution 100 μl와 반응을 정지시켰다. Optical density는 ELISA reader로 450 nm에서 측정하였다.

<6> RT-PCR 분석

각각의 실험군에서 실험 동물의 대장 조직을 임의로 선정하고, 이를 PBS로 세척하여 trizol을 이용하여 total RNA를 분리하였다. Oligo dT primer를 사용하면 분리한 RNA 중 mRNA가 모두 cDNA로 만들어지기 때문에 분리된 RNA를 정량한 후, oligo dT primer와 AMV reverse transcriptase를 이용하여 2 μg의 RNA에서 mRNA에 상보적인 ss cDNA로 역전사시켰다. 이 cDNA를 template로 사용하여 TNF-α, IFN-γ, IL-1β, IL-6, IL-12, IL-17A, COX-2, iNOS, p53, p21, cyclin D1 및 caspase-3등 유전자를 polymerase chain reaction (PCR) 방법으로 특정 유전자 부위를 증폭하였다. 이때 때 internal control로 housekeeping 유전자인 β-actin를 사용하였다. 각 PCR 산물들을 1% agarose gel을 이용하여 전기영동하고 ethidium bromide (EtBr, Sigma, USA)를 이용하여 염색한 후 UV 하에서 확인하였다.

<7> 부검 및 시험동물의 처리

시험 당일에 투여 및 기타요인으로 발생한 사망개체는 없었으며, 모든 동물은 시험종료일에 복대정맥에서 혈액시료 채취를 완료함과 동시에 안락사 하였다.

상기와 같은 모든 실험결과는 평균치와 표준편차 또는 표준오차를 사용하여 나타내고, 각 군 간의 비교는 Duncan`s multiple range test를 사용하였으며, 대조군과 비교하여 p값이 5% 미만 일 때 통계학적으로 유의성이 있다고 판정하였다.

이하에서는 상기 실험을 통하여 나타난 결과를 설명하기로 한다.

이하의 결과를 설명하기에 앞서 시험 당일에 모든 마우스에서는 특별한 특이증상이 관찰되지 않았고 본 시험의 과정 중 사망한 마우스는 없었다는 것을 밝혀두고자 한다.

결과예 1 : 체중 (표 2, 도 2 참조)

동물의 체중 변화를 관찰하여 살펴본 결과, AOM/DSS 만을 투여한 군(群)의 체중이 다른 군들에 비하여 크게 줄었으나, 그 외의 군들에서는 이를 다소 회복하는 효과가 있어 차이가 없었다.

[표 2]

(AOM/DSS : Azoxymethane/dextran sulfate sodium)

결과예 2 : 대장 길이 및 대장무게와 길이 비율 변화(표 3 및 도 3, 4 참조) 시험물질(발효현미 및 혼합잡곡물)이 AOM/DSS 유발 마우스 대장암에 미치는 영향을 표 3에 나타내었다. AOM/DSS를 이용하여 대장암을 유발한 마우스의 대장을 적출하여 길이와 무게를 측정함으로써 염증과 관련된 대장암으로 인한 장기의 변화를 관찰하였다. 14주동안 AOM/DSS군은 6.93 cm로 normal군 9.01 cm인 것에 비해 길이가 유의적으로 감소함을 확인하여 AOM/DSS로 인한 궤양성 대장암이 유발되었음을 알 수 있었다. 발효현미 및 혼합잡곡물을 제공한 군의 대장 길이는 일반백미군(WR)에서 7.00 cm, 발효현미군(FBR)에서 7.49 cm, 혼합잡곡군(MC)에서 7.94 cm, 상황버섯 첨가한 혼합잡곡군(MC-S)에서 8.17 cm, 카레 첨가한 혼합잡곡군(MC-K)에서 8.14 cm, 전통오곡군(MC-T)에서 7.21 cm 로 나타났으며, 특히 항암 기능성물질(상황버섯, 카레)을 첨가한 혼합잡곡군에서 효과가 가장 좋게 나타났다.

대장의 무게/길이 비율은 AOM/DSS군에서는 37.7 mg/cm로 나타났다. 일반백미군, 발효현미군, 혼합잡곡군, 상황버섯 첨가한 혼합잡곡군, 카레 첨가한 혼합잡곡군 및 전통오곡군의 대장의 무게/길이 비율은 37.3, 27.3, 24.9, 23.9, 23.5 및 25.2 mg/cm로 나타났고, 특히 항암 기능성물질(상황버섯, 카레) 첨가한 혼합잡곡물에서 효과가 가장 좋게 나타났다. 발효현미 및 혼합잡곡물의 대장암 예방 효과를 확인하였으며, 특히 항암 기능성물질(상황버섯, 카레) 첨가한 혼합잡곡물의 대장암 예방 효과가 가장 좋았다.

[표 3]

결과예 3 : 대장 조직 내 종양 개수 및 병리학적 관찰 (표 4 및 도 5, 6 참조)

AOM/DSS에 의해 유발된 대장암이 유발된 대장 조직 내의 종양 개수는 표 4에 나타내었다. AOM/DSS군은 평균 16.4개로 가장 많았다. 일반백미군, 발효현미군, 혼합잡곡군, 상황버섯 첨가한 혼합잡곡군, 카레 첨가한 혼합잡곡군 및 전통오곡군의 대장내 종양 개수는 15.3, 12.3, 10.4, 9.7, 9.4 및 12.7개로 나타났다.

조직학적 소견으로는 대장암이 발생한 대장 조직들에서 정상적인 장 조직의 장샘(intestinal glands) 세포들이 사라지고 점막의 종양을 나타내며 조직 내 암세포들이 침윤하였다. AOM/DSS군은 normal군에 비해 종양의 발생과 암세포들의 침윤 정도가 높게 나타났다. 곡류 샘플 처리군들 중에서 일반백미군의 마우스 대장 조직 내 정상 장세포의 암세포화 및 암세포의 침윤 능력이 발효현미 및 모든 혼합작곡물군 보다 더 높았다. 또한 발효현미를 함유한 혼합 잡곡물 군은 이런 AOM/DSS 유발된 장세포의 암세포화와 암세포의 침윤능력을 억제시키는 것으로 나타났는데, 특히 항암 기능성물질(상황버섯, 카레)를 첨가한 혼합 잡곡물의 장 상피세포 변형이 가장 약하게 나타나 암세포 침윤 억제능력이 가장 좋았음을 확인할 수 있었다.

[표 4]

결과예 4 : Serum pro-inflammatory cytokines 수준 (도 7 참조)

염증성 cytokines(TNF-α, IL-6, IL-1β 등)수준은 대장염, 대장암 발생 및 진행 과정과 가장 관련성이 높다. 본 실험의 TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-12, IL-17A 및 IFN-γ의 측정 결과를 도 7a와 도 7b에 각각 나타내었다. Normal군에서 TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-12, IL-17A 및 IFN-γ의 농도는 각각 50.3 ± 15.3, 60.9 ± 9.8, 65.0 ± 21.7, 49.7 ± 8.8, 255.3 ± 21.8, 102.1 ± 12.6 pg/mL이었고, AOM/DSS군에서는 각각 178.0 ± 21.9, 161.3 ± 8.9, 229.0 ± 15.2, 208.2 ± 11.5, 725.1 ± 19.0, 468.4 ± 20.2 pg/mL로 나타나 모든 cytokine의 농도가 normal군에 비해 상승하였다. 일반백미 제공군의 염증성 cytokines(TNF-α, IL-6, IL-1β 등) 수준은 AOM/DSS군과 비슷한 값을 나타내었지만, 발효현미 제공군에 비하여 높은 값을 나타내었다. 대장암과 관련된 가장 중요한 cytokines로 알려진 TNF-α, IL-1β, IL-6의 수준 측정 결과 혼합잡곡물을 제공한 모든 군에서 AOM/DSS군에 비하여 낮은 수치를 나타내었으며, 특히 항암 기능성물질(상황버섯, 카레) 첨가한 혼합잡곡군(각각 TNF-α: 112.6 ± 16.3, 123.5 ± 26.5; IL-1β: 109.7 ± 4.3, 122.5 ± 14.6; IL-6: 112.1 ± 18.0, 117.3 ± 29.6 pg/mL)에서 유의적으로 가장 낮은 수치를 나타냄에 따라 혼합잡곡물 특히 항암 기능물질을 첨가한 군이 대장암 발생 및 진행을 현저히 억제시킴을 확인할 수 있었다.

또한, IL-12, IL-17A, IFN-γ에서도 비슷한 경향을 나타내어 항암 기능성물질(상황버섯, 카레) 첨가한 혼합잡곡군에서 가장 높은 억제효과를 나타내었다.

결과예 5 : 대장 조직 내 pro-inflammatory cytokines(TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-12, IL-17A and IFN-γ : 도 8b 및 도 8c) 및 염증 관련 효소(iNOS, COX-2)의 mRNA 발현 수준 (도 9 참조)

RT-PCR 실험 결과 대장 조직 내 pro-inflammatory cytokines의 mRNA 발현 수준은 도 8a, 8b, 8c 및 도 9a, 9b에 나타내었다. AOM/DSS군은 normal군보다 모든 cytokine의 mRNA 발현 수준이 증가하였다. 발효현미와 전통오곡을 제공한 군에서 AOM/DSS군에 비하여 염증성 cytokines의 mRNA 발현 수준이 낮게 나타내었으며, 혼합 잡곡군들에서 특히 항암 기능성물질(상황버섯, 카레)을 첨가한 혼합잡곡군이 가장 낮은 발현 수준를 나타냄에 따라 혼합잡곡이 대장암 발생 및 진행을 억제시킴을 확인할 수 있었다. 한편, 도 9b에서와 같이, inflammation 관련 효소(iNOS, COX-2)의 발현 수준 또한 비슷한 결과를 나타냈다. 특히 항암 기능성물질(상황버섯, 카레)을 첨가한 혼합잡곡군에서 대장염 발생 및 진행을 억제시킴을 확인할 수 있었다.

결과예 6 : 대장 조직 내 p53, p21, cyclin-D1 및 caspase-3의 발현 수준 (도 10 참조)

대장 조직 내 cell cycle 관련한 유전자 p53, p21, cyclin-D1 및 cell apoptosis와 관련한 caspase-3의 발현의 결과는 도 10a,10b,10c에 각 나타내었다. 도 10b에서와 같이, p53 및 p21의 발현 경우, AOM/DSS군은 normal군에 비하여 낮은 발현 수준을 나타내었으며 도 10c의 cyclin-D1의 발현 수준은 높게 나타났다. 발효현미, 혼합잡곡과 전통오곡의 제공군 중에서 혼합잡곡군, 특히 항암 기능성물질(상황버섯, 카레)을 첨가한 혼합 잡곡군은 AOM/DSS군에 비해 p53 및 p21의 발현 수준이 증가하였고, cyclin-D1의 발현은 감소하였다. 암세포 apoptosis와 관련한 caspase-3의 발현 경우는 항암 기능성물질(상황버섯, 카레)을 첨가한 혼합 잡곡군들에서 대장 조직 상의 caspase-3 발현이 AOM/DSS군에 비하여 크게 증가하였다.

따라서, cell cycle과 관련한 p53, p21의 발현이 증가하고, cyclin-D1의 발현수준이 감소했기 때문에 대장암을 억제하는 효과가 있음을 본 실험 결과 예를 통하여 분명하게 알게 되었다.

Claims (4)

1. 쌀을 수세하여 오염물질을 제거한 후 30분정도 물에 침지하여 물이 쌀 전분 알맹이 속에 고루고루 스며들게 하는 제1단계와;
   상기 제1단계에서, 상기 쌀은 전체 100중량부 중에서 발효현미 35~45 중량부, 찰현미 18~22 중량부, 찰수수쌀 8~12 중량부, 찰기장쌀 8~12 중량부, 서리태 7~9 중량부, 상황쌀 4~6 중량부, 강황쌀 4~6 중량부, 율무쌀 1~3 중량부의 혼합 잡곡으로 구성되며,
   상기 제1단계를 통해 세수되고 침지된 쌀을 용기에 수용하고, 상기 용기에 취반수를 물은 쌀 무게의 1.3∼1.5 배의 양을 투입하는 제2단계와;
   상기 제2단계를 통해 쌀과 취반수가 수용된 용기를 98∼100℃의 온도로 15∼18분 정도 가열하여 밥을 조리하여 취반하는 제3단계와;
   상기 제3단계를 통해 조리되어 취반된 밥의 가열을 중단시키고 10∼15분 정도 뜸들이는 제4단계로 이루어지는 것을 특징으로 하는 대장암 예방 건강밥의 제조방법.
   
2. 제1항에 있어서, 상기 상황쌀은 상황버섯을 물로 추출하여 냉동 건조시킨 추출물을 쌀의 표면에 코팅한 것을 특징으로 하는 대장암 예방 건강밥의 제조방법.
   
3. 제1항에 있어서, 상기 강황쌀은 강황 분말을 물로 추출하여 냉동 건조시킨 추출물을 쌀의 표면에 코팅한 것을 특징으로 하는 대장암 예방 건강밥의 제조방법.
   
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 의하여 제조된 대장암 예방 건강밥.
   
   
   
   
   

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