KR101432747B1 - 알파-치커린, 이를 포함하는 항암제 및 건강기능식품 - Google Patents
알파-치커린, 이를 포함하는 항암제 및 건강기능식품 Download PDFInfo
- Publication number
- KR101432747B1 KR101432747B1 KR1020120054781A KR20120054781A KR101432747B1 KR 101432747 B1 KR101432747 B1 KR 101432747B1 KR 1020120054781 A KR1020120054781 A KR 1020120054781A KR 20120054781 A KR20120054781 A KR 20120054781A KR 101432747 B1 KR101432747 B1 KR 101432747B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- esculetin
- functional food
- health functional
- alpha
- present
- Prior art date
Links
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 title claims abstract description 25
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 title claims abstract description 12
- 230000036541 health Effects 0.000 title claims abstract description 12
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 11
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 6
- ILEDWLMCKZNDJK-UHFFFAOYSA-N esculetin Chemical class C1=CC(=O)OC2=C1C=C(O)C(O)=C2 ILEDWLMCKZNDJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 46
- QNHQEUFMIKRNTB-UHFFFAOYSA-N aesculetin Natural products C1CC(=O)OC2=C1C=C(O)C(O)=C2 QNHQEUFMIKRNTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 34
- GUAFOGOEJLSQBT-UHFFFAOYSA-N aesculetin dimethyl ether Natural products C1=CC(=O)OC2=C1C=C(OC)C(OC)=C2 GUAFOGOEJLSQBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 33
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 16
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 8
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 abstract description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 21
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 18
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 18
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 18
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 15
- 239000000047 product Substances 0.000 description 15
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 14
- 229920000856 Amylose Polymers 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 8
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 6
- 241000672609 Escherichia coli BL21 Species 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 6
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 5
- 101710184309 Probable sucrose-6-phosphate hydrolase Proteins 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 102400000472 Sucrase Human genes 0.000 description 5
- 101710112652 Sucrose-6-phosphate hydrolase Proteins 0.000 description 5
- 235000011073 invertase Nutrition 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 5
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N coumarin Chemical compound C1=CC=C2OC(=O)C=CC2=C1 ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 4
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 4
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 4
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 4
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 4
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 4
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 4
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 3
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 2
- OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N Deuterated methanol Chemical compound [2H]OC([2H])([2H])[2H] OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010068319 Oropharyngeal pain Diseases 0.000 description 2
- 201000007100 Pharyngitis Diseases 0.000 description 2
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- 230000003266 anti-allergic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 2
- 235000008429 bread Nutrition 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 229960000956 coumarin Drugs 0.000 description 2
- 235000001671 coumarin Nutrition 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- -1 esculetin Natural products 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 235000017807 phytochemicals Nutrition 0.000 description 2
- 229930000223 plant secondary metabolite Natural products 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 2
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005084 2D-nuclear magnetic resonance Methods 0.000 description 1
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- XUCMOPZFOKSXAA-UHFFFAOYSA-N 6,7-dihydrochromen-2-one Chemical compound C1CC=C2OC(=O)C=CC2=C1 XUCMOPZFOKSXAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CFNMUZCFSDMZPQ-GHXNOFRVSA-N 7-[(z)-3-methyl-4-(4-methyl-5-oxo-2h-furan-2-yl)but-2-enoxy]chromen-2-one Chemical compound C=1C=C2C=CC(=O)OC2=CC=1OC/C=C(/C)CC1OC(=O)C(C)=C1 CFNMUZCFSDMZPQ-GHXNOFRVSA-N 0.000 description 1
- PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N Aesculin Natural products OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1Oc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 108010033764 Amylosucrase Proteins 0.000 description 1
- 241000208173 Apiaceae Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-DCSYEGIMSA-N Beta-Lactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-DCSYEGIMSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N Cichoriin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1)c1c(O)cc2c(OC(=O)C=C2)c1 WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N 0.000 description 1
- 239000004278 EU approved seasoning Substances 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 240000007472 Leucaena leucocephala Species 0.000 description 1
- 235000010643 Leucaena leucocephala Nutrition 0.000 description 1
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 description 1
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 1
- 208000000112 Myalgia Diseases 0.000 description 1
- NULAJYZBOLVQPQ-UHFFFAOYSA-N N-(1-naphthyl)ethylenediamine Chemical compound C1=CC=C2C(NCCN)=CC=CC2=C1 NULAJYZBOLVQPQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 241001093501 Rutaceae Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- BCKXLBQYZLBQEK-KVVVOXFISA-M Sodium oleate Chemical compound [Na+].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC([O-])=O BCKXLBQYZLBQEK-KVVVOXFISA-M 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000003540 anti-differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002790 anti-mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 239000000022 bacteriostatic agent Substances 0.000 description 1
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 description 1
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 description 1
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 235000015496 breakfast cereal Nutrition 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 235000019219 chocolate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000014510 cooky Nutrition 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 150000004775 coumarins Chemical class 0.000 description 1
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 235000019543 dairy drink Nutrition 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 235000011850 desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N esculin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC(C(=C1)O)=CC2=C1OC(=O)C=C2 XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N 0.000 description 1
- 229940093496 esculin Drugs 0.000 description 1
- AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N esculin Natural products OC1OC(COc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O)C(O)C(O)C1O AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011194 food seasoning agent Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 235000013611 frozen food Nutrition 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 229940030980 inova Drugs 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 description 1
- 235000013622 meat product Nutrition 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 235000020124 milk-based beverage Nutrition 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 102000016914 ras Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010014186 ras Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000007670 refining Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000009561 snack bars Nutrition 0.000 description 1
- 235000011888 snacks Nutrition 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M sodium benzoate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004299 sodium benzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010234 sodium benzoate Nutrition 0.000 description 1
- RYYKJJJTJZKILX-UHFFFAOYSA-M sodium octadecanoate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O RYYKJJJTJZKILX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 208000010110 spontaneous platelet aggregation Diseases 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000012916 structural analysis Methods 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 150000003536 tetrazoles Chemical class 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 1
- 210000004509 vascular smooth muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 229920001285 xanthan gum Polymers 0.000 description 1
- 239000000230 xanthan gum Substances 0.000 description 1
- 235000010493 xanthan gum Nutrition 0.000 description 1
- 229940082509 xanthan gum Drugs 0.000 description 1
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 1
- 229930195724 β-lactose Natural products 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H17/04—Heterocyclic radicals containing only oxygen as ring hetero atoms
- C07H17/06—Benzopyran radicals
- C07H17/065—Benzo[b]pyrans
- C07H17/075—Benzo[b]pyran-2-ones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
- A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2200/00—Function of food ingredients
- A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
- A23V2200/308—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on cancer prevention
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Mycology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
본 발명은 에스큐레틴 유도체를 포함하는 항암제 및 건강기능식품에 관한 것으로, 보다 상세하게는 에스큐레틴과 유사한 항암활성을 가지면서 수용성이 현저히 향상되어 약물로서 높은 이용성을 갖는 에스큐레틴 유도체를 포함하는 항암제 및 건강기능식품에 관한 것이다.
Description
본 발명은 개선된 수용성을 갖는 항암제 및 암 억제능이 있는 건강기능식품에 관한 것이다.
에스큐레틴(aesculetin)은 쿠마린 유도체의 한 종류로 쿠마린은 식물과 특히 Umbelliferae 와 Rutaceae 식물의 뿌리와 잎 그리고 껍질에 풍부하게 존재하고 있다. 쿠마린은 현재 약리학적 생화학적 다양한 특성을 가지는 것으로 보고되고 있으며 알려진 특성으로는 항산화, 항염증, 항알레르기, 혈소판 응집 반응, 프로테인 카이네이즈 억제, 세포자멸사, 항바이러스, 항분화 및 항돌연변이성 유도가 있다. 에스큐레틴은 6,7-디하이드로 쿠마린으로 민간요법에서 항염증제와 알레르기 치료를 위해 이용되며 식물의 2차 대사산물로 알려져 있다. 이 성분은 다양한 플라이오트로픽 기작을 가지며 라스 단백질에 의해 매개되는 미토겐 신호 전달 과정과 카이네이즈 억제를 통해 혈관 평활근 세포의 성장을 억제하는 특성이 밝혀져 있다. 에스큐레틴은 암세포에서 특이적으로 항증식성 특성이 확인되었으며 잠재적인 항암제로서의 다양한 기능을 가지는 것으로 밝혀졌다.
한편, 항암제를 통해 치유되지 못하는 암의 종류는 전체 암의 80%를 차지하고 있으며, 아직 암세포만을 선택적으로 죽이는 항암제는 없기 때문에 항암제 사용 시 인체에 꼭 필요한 정상세포도 어쩔 수 없이 파괴되어 심각한 부작용을 동반하여 환자에게 더 치명상을 입히는 것으로 알려져 있다.
이런 문제점으로 인해 암환자의 대부분은 항암제의 부작용으로 사망하고 있다. 초기에 개발된 항암제는 항암제로서의 기능은 탁월했지만 강한 독성이 문제가 되었으며, 반면 최근 개발되고 있는 항암제는 독성은 줄었지만 약물의 효능은 좋지 못한 것으로 알려져 있다. 항암제를 환자에게 혈관주사시 통증을 느끼거나 오한 및 떨림을 느낄 수도 있고, 주사를 맞는 동안이나 맞은 후 주사 맞은 부위가 아프거나, 가슴이 답답한 느낌, 그 외에 다른 불편함이 보고되고 있으며 약물 투여 후 전신 쇠약, 오심(속이 울렁거림), 구토, 근육통 등의 전신 증상이 유발될 수 있다. 이러한 증상으로 인해 치료 도중에 중단하는 경우도 많고 이를 억제시킬 수 있는 약품이 많이 개발되고 있지만 환자에게 별 도움은 되지 못하고 있다.
암세포의 경우 성장과 분열이 빠르다는 점을 이용하여 항암제를 통해 빨리 자라는 세포들을 사멸시키기 위해 만들어졌는데 이런 약물의 특성으로 인해 일부 정상적인 세포들 중에도 빨리 증식하는 세포들이 항암제의 영향을 받아 부작용이 발생하게 된다. 항암제의 영향을 받는 정상 세포로는 골수에서 만들어지는 적혈구, 백혈구, 혈소판과 소화관 세포, 생식세포 등이 있으며, 심장, 신장, 방광, 폐, 신경계의 세포들에도 영향을 미칠 수 있다.
따라서 체내에 항암제의 부작용을 막으며 효과적인 항암제 개발을 위한 노력의 일환으로 천연자원에서 항염증 및 항증식 특성을 갖는 물질인 에스큐레틴 등의 파이토케미칼에 대한 연구가 진행되고 있으나, 낮은 수용성과 세포 독성으로 인해 아직까지는 파이토케미칼을 이용한 효과적인 항암제는 개발되지 못하고 있는 실정이다.
미국공개특허 제 2010-0267653호에는 USE OF COUMARIN DERIVATIVES IN ANTIFUNGAL THERAPY에 대하여 기재되어 있다.
본 발명은 개선된 수용성에 의한 높은 체내 이용성을 갖는 항암제 및 암 억제능이 있는 건강기능식품을 제공하는 것을 목적으로 한다.
1. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물:
[화학식 1]
(식 중, R1내지 R4는 각각 독립적으로 메틸기, 히드록시기, 아미노기 및 카바모일기로 이루어진 군에서 선택된 것임).
2. 위 1의 화합물을 포함하는 항암제.
3. 위 1의 화합물을 포함하는 암 억제능이 있는 건강기능식품.
4. 수크로스에 아밀로수크라제를 반응시켜, 수크로스에서 분리된 포도당을 에스큐레틴에 결합시키는 단계를 포함하는 화학식 1의 화합물의 제조방법.
5. 위 4에 있어서, 상기 포도당은 상기 에스큐레틴에 알파-글루코시딕 결합(1→4)되는 화학식 1의 화합물의 제조방법.
6. 위 4에 있어서, 상기 아밀로수크라제는
재조합된 pGEX-DGAS를 가지는 형질전환체를 배양하는 단계(S1);
DGAS의 발현을 유도하는 단계(S2); 및
형질전환체를 파쇄하는 단계(S3)
를 포함하여 얻어지는 것인 화학식 1의 화합물의 제조방법.
본 발명의 에스큐레틴 유도체는 세포독성이 없으며 항암활성이 알려진 에스큐레틴과 유사한 항암활성을 갖는다.
본 발명의 에스큐레틴 유도체는 에스큐레틴보다 현저하게 높은 수용성을 가짐으로서 약물로서 보다 높은 이용 가능성을 갖는다.
도 1은 Recycling preparative LC를 통해 에스큐레틴 당전이 산물을 확인한 것이다.
도 2는 박층크로마토그래피를 통해 에스큐레틴 당전이 산물을 확인한 것이다.
도 3은 알파-치커린(α-cichoriin)의 1H NMR과 13C NMR 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 알파-치커린의 2D-NMR인 gHMBC 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 알파-치커린의 RAW 264.7에 대한 세포독성을 평가한 것이다.
도 6은 알파-치커린의 항암활성 측정결과를 나타낸 것이다.
도 7은 알파-치커린의 B16F10에 대한 세포독성을 평가한 것이다.
도 2는 박층크로마토그래피를 통해 에스큐레틴 당전이 산물을 확인한 것이다.
도 3은 알파-치커린(α-cichoriin)의 1H NMR과 13C NMR 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 알파-치커린의 2D-NMR인 gHMBC 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 알파-치커린의 RAW 264.7에 대한 세포독성을 평가한 것이다.
도 6은 알파-치커린의 항암활성 측정결과를 나타낸 것이다.
도 7은 알파-치커린의 B16F10에 대한 세포독성을 평가한 것이다.
본 발명은 에스큐레틴 유도체를 포함하는 항암제 및 건강기능식품에 관한 것으로, 보다 상세하게는 에스큐레틴과 유사한 항암활성을 가지면서 수용성이 현저히 향상되어 약물로서 높은 이용성을 갖는 에스큐레틴 유도체를 포함하는 항암제 및 건강기능식품에 관한 것이다.
이하 본 발명을 보다 상세히 설명한다.
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물에 대한 것이다.
[화학식 1]
상기 화학식 1에서 R1, R2, R3 및 R4는 각각 독립적으로 메틸기, 히드록시기, 아미노기 및 카바모일기로 이루어진 군에서 선택될 수 있으며, 바람직하게는 R1, R2, R3 및 R4는 모두 히드록시기일 수 있다.
종래에 알려진 에스큐레틴은 하기 화학식 2의 구조를 갖는다:
[화학식 2]
상기 화학식 2의 화합물인 에스큐레틴은 수용성이 낮아 체내 이용가능성이 낮았으나, 본 발명의 화학식 1의 화합물은 종래 물질보다 수용성이 현저히 증가한다. 이러한 수용성 증가는 에스큐레틴 유도체의 약학적 이용에 매우 효과적이다.
이하에서는 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법의 일 구현예를 보다 상세하게 설명하도록 한다.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 효소, 바람직하게는 아밀로수크라제를 수크로스와 반응시켜, 수크로스에서 분리된 포도당을 에스큐레틴에 결합시킨 다음 분리 및 정제하여 얻을 수 있다.
상기 아밀로수크라제는 당전이 반응시 수크로스를 기질로 이용하여 수크로스로부터 분해된 포도당을 알파 글루코시딕 결합(1→4)으로 특이적으로 당전이시키는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 아밀로수크라제는 하기와 같은 방법으로 얻을 수 있다.
먼저, 재조합된 pGEX-DGAS를 가지는 형질전환체를 배양하는 단계를 거친다(S1).
형질전환체로 사용될 수 있는 균주는 특별히 한정되지 않으며, 예를 들면 E.coli를 사용할 수 있고, 바람직하게는 E.coli BL21일 수 있다.
pGEX-DGAS를 갖는 형질전환체로서, pGEX-DGAS를 갖는 E.coli는, 발현벡터인 pGEX에 디오노코커스 지오써말리스의 DGAS를 결합(ligation)시켜서 얻어진 벡터를 E.coli에 형질전환시켜서 얻어질 수 있는데, 본 발명의 일 실시예에 따르면 DGAS 유전자로 프라이머를 제작하여 PCR을 수행하고, 증폭된 유전자 및 발현벡터를 제한효소로 처리하고 결합하여 얻어진 벡터를 E.coli에 열충격을 가해 형질전환시켜 얻어질 수 있다.
재조합된 pGEX-DGAS를 가지는 E.coli BL21의 배양은 당업계에서 미생물 배양에 통상적으로 사용되는 배지 및 조건에서 수행될 수 있으며, 본 발명의 일 실시예에 따르면 앰피실린을 포함하는 배지 0.5~2L에서 15~45℃에 배양할 수 있으나 이에 한정하는 것은 아니다.
그 다음으로 DGAS의 발현을 유도하는 단계를 거친다(S2).
상기 E.coli를 배양하여 대장균의 효소 발현에 통상적으로 사용되는 유도물질을 첨가하여 DGAS의 과발현을 유도할 수 있으며, 본 발명의 일 실시예에 따르면 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노시드(IPTG)를 배양액에 접종하여 dgas 유전자 발현을 유도할 수 있으나 이에 한정하는 것은 아니다.
마지막으로 형질전환체를 파쇄하는 단계를 거친다(S3).
배양된 대장균 BL21은 원심분리, 크로마토그래피 등의 통상의 분리 방법을 통해 균만 수거한 뒤, 인산완충식염수(PBS)에 현탁한다. 세포를 파쇄한 뒤 원심분리, 크로마토그래피 등의 통상의 분리 방법을 통해 다시 분리한다.
상등액으로부터 재조합된 아밀로수크라제의 분리는 당업계에 알려진 통상의 반응 혼합물의 분리 방법을 통해 분리할 수 있으며, 이에 한정되지는 않으나 본 발명의 일 실시예에 따르면 칼럼 크로마토그래피를 통해 분리할 수 있다.
이러한 과정을 통해 얻어진 아밀로수크라제는 수크로스로부터 분해된 포도당을 알파 글루코시딕 결합(1→4)으로 특이적으로 당전이시킴으로서 본 발명에 따른 화학식 1의 화합물의 제조에 용이하게 사용될 수 있다.
상기 에스큐레틴과 수크로스는 반응 평형, 조건 및 수율 등을 고려하여 0.5~1:1의 몰비로 첨가할 수 있으며, 아밀로수크라제는 에스큐레틴 1몰 대비 0.001~50g 첨가할 수 있으나 이에 한정하는 것은 아니다.
생성된 에스큐레틴 유도체는 당업계에 알려진 통상의 반응 혼합물의 분리 방법을 통해 분리할 수 있으며, 본 발명의 일 실시예에 따르면 역상 크로마토그래피에 의해 분리할 수 있다.
본 발명의 화학식 1로 표시되는 화합물은 에스큐레틴과 유사한 항암활성을 가지며 개선된 수용성을 가지므로, 본 발명의 바람직한 구현예에 따라서, 본 발명은 화학식 1로 표시되는 화합물을 포함하는 항암제일 수 있다.
본 발명의 항암제는 약제학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 보조제를 사용하여 제조될 수 있으며, 상기 보조제로는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제 또는 향미제 등을 사용할 수 있다.
본 발명의 항암제는 투여를 위해서 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 약제학적 조성물로 바람직하게 제제화 할 수 있다. 약제 제제 형태는 과립제, 산제, 정제, 피복정, 캡슐제, 좌제, 액제, 시럽, 즙, 현탁제 또는 유제 등이 될 수 있으나 이에 한정되지는 않는다.
예를 들어, 정제 또는 캡슐제의 형태로의 제제화를 위해, 유효 성분은 에탄올, 글리세롤, 물 등과 같은 경구, 무독성의 약제학적으로 허용 가능한 불활성 담체와 결합될 수 있다. 또한, 원하거나 필요한 경우, 적합한 결합제, 윤활제, 붕해제 및 발색제 또한 혼합물로 포함될 수 있다. 적합한 결합제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 젤라틴, 글루코스 또는 베타-락토오스와 같은 천연 당, 옥수수 감미제, 아카시아, 트래커캔스 또는 소듐올레이트와 같은 천연 및 합성 검, 소듐 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 아세테이트, 소듐 클로라이드 등을 포함한다. 붕해제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 메틸 셀룰로스, 아가로스, 벤토나이트, 잔탄 검 등을 포함한다.
액상 용액으로 제제화되는 항암제에 있어서 허용 가능한 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 환약, 캡슐, 과립 또는 정제 등으로 제제화 할 수 있다. 더 나아가 해당분야의 적절한 방법으로 Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화 할 수 있다.
본 발명의 다른 일 구현예로서, 본 발명은 화학식 1로 표시되는 화합물을 포함하는 암 억제능이 있는 건강기능식품일 수 있다.
본 발명의 건강기능식품은 유제품, 제과물, 조미료, 음료 및 드링크제, 스낵, 캔디류, 아이스크림 및 냉동용 디저트, 아침 곡물류, 영양바, 스낵 바 초콜렛 제품, 가공 식품, 곡물 제품 및 파스타, 스프, 소스 및 드레싱, 과자 제품, 오일 및 지방제품, 유제품 음료(dairy drink) 및 우유 음료, 두유 및 콩 유제품(soy dairy-like product), 냉동식품, 조리 음식 및 대체음식, 육류 제품, 치즈, 요구르트, 빵 및 롤빵, 효모 제품, 케이크 및 쿠키 및 크래커로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나일 수 있으나 이에 한정되지는 않는다.
이하, 본 발명을 구체적으로 설명하기 위해 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다.
실시예
(1) 재조합된
pGEX
-
DGAS
을 갖는 형질전환체의 제조
디오노코커스 지오써말리스의 아밀로수크라제 유전자를 확보하기 위하여 디오노코커스 지오써말리스의 DGAS 유전자를 바탕으로 프라이머를 제작하여 PCR을 수행하였다. PCR 반응은 polymerase에 100ng의 유전체 DNA와 10pmol의 프라이머 0.5㎕ (정방향 프라이머: 5'-GGATCCGATGCTGAAAGACGTGCTCACTTC-3', 역방향 프라이머: 5'-AAGCTTATGCTGGAGCCTCCCCGGC-3' ) 씩을 각각 첨가하여 실시하였다. PCR 조건은 변성은 98℃에서 10초, 결합은 55℃에서 5초, 합성은 72℃에서 2분 20초로 하여 30 cycle을 수행하였다. PCR purification kit를 통해 얻어진 약 1.9kbp 산물을 제한효소 BamHI과 EcoRI로 제한처리 후, 동일한 제한효소로 제한처리된 발현 벡터인 pGEM-T Easy와 함께 접합(ligation)하여 pGEM-T-DGAS를 제조하였다.
상기 pGEM-T-DGAS를 제한효소 BamHI과 EcoRI로 처리하고, 약 1.9 kbp 길이의 조각을 아가로스 전기영동을 통해 분리하여, 이를 동일한 제한 효소로 처리한 pGEX-4T-1 발현벡터와 함께 라이게이션하여 pGEX-DGAS를 제조하였다. 재조합된 pGEX-DGAS 플라스미드는 E. coli BL21 균주에 열충격을 통해 형질전환하여 발현 균주를 구축하였다.
(2)
아밀로수크라제의
제조 및 정제
재조합된 아밀로수크라제 정제는 유전자에 재조합된 pGEX-DGAS를 가지는 E.coli BL21을 0.1mg/ml 앰피실린을 포함하는 LB 배지 1L에서 37℃에 배양하였다. 배양 후 흡광도가 약 0.6일 때 1mM 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노시드(IPTG)를 배양액에 접종하여 dgas 유전자 발현을 유도하였다. 3시간 배양 후, 배양된 E.coli BL21은 원심분리하여 균체만 수거한 뒤, 인산완충식염수(PBS, 5 ml/g (wet weight) of cells)[조성: 140mM NaCl, 2.7mM KCl, 10mM Na2HPO4 및 1.8mM KH2PO4 (pH 7.3)]에 현탁하였다. 이후 초음파 분해을 통해 균체를 파쇄한 뒤 4℃에서 10분 동안 12,000rpm에서 원심분리하였다. 상등액으로부터 Glutathione SepharoseTM High performance affinity column을 수행하고 트롬빈을 처리하여 아밀로수크라제를 정제하였다.
(3)
에스큐레틴
당전이
산물의 제조 및 정제
총 반응액 부피 10ml에 수용체인 에스큐레틴 5mM, 공여체인 수크로스를 10mM 및 제조된 아밀로수크라제를 1mg을 50 mM Tris-HCl 완충용액(pH 8.0)에 혼합한 후, 35℃에서 3시간 동안 반응시켜 에스큐레틴 당전이 산물을 제조하였다.
에스큐레틴 당전이 산물은 역상 크로마토그래피의 한 종류인 C18-T column과 Recycling preparative HPLC를 통해 정제하였다. C18-T column(100mg/ml; Phenomenex Korea), Recycling preparative HPLC는 JAIGEL W-252 컬럼과 결합된 W-251(JAI, Tokyo, Japan) 그리고 RI-50 detector(JAI)를 이용하여 정제하였다. Recycling preparative HPLC 용출을 위하여 HPLC급 메탄올을 유속 3.0ml/min 로 흘려 에스큐레틴 당전이 산물을 확인하였다(도 1 참조).
(4)
에스큐레틴
당전이
산물의
박층크로마토그래피
분석
에스큐레틴 당전이 산물 확인을 위해 박층크로마토그래피를 수행하였다. Whatman K6F silica gel plates(Whatman, Maidstone, UK)를 사용하였으며, 전개용매로 부탄올/에탄올/물을 5:3:2(v/v/v)로 혼합하여 사용하였다. TLC plate에 시료를 1μl을 점적 후에 건조시키고, 전개용액에 넣어 일정 시간 동안 전개한 후, 공기 중에서 다시 건조시켰다. 건조된 plate는 366nm 파장에서 폴리페놀이 갖는 고리 구조의 발광을 통해 분석하였다. 또한 건조된 plate를 0.3% (w/v) N-(1-나프틸)-에틸렌디아민과 5% (v/v) H2SO4를 포함하는 메탄올 용액에 빠르게 담근 후 완전히 건조한 다음, 110℃ 에서 10분간 구워 C18-T column을 통해 당이 제거된 전이 반응액과 recycling preparative HPLC를 통해 정제된 에스큐레틴 당전이 산물을 확인하였다(도 2 참조).
(5)
에스큐레틴
당전이
산물의 구조 분석
정제된 에스큐레틴 당전이 산물 약 7mg의 시료를 CD3OD에 녹인 후, Varian Inova AS 400 MHz NMR spectrometer(Varian, Palo Alto, CA, USA)로 1H, 13C spectra를 측정하였고 2D NMR인 gHMBC 분석을 수행하였다.
분석 결과, 1H NMR 분석을 통해 확인한 결과 anomer proton은 5.5ppm 부근에서 관측되었으며 3.2Hz로 split하는 것으로 보아 알파 결합을 하는 것으로 나타났다(도 3 A 참조).
13C NMR 분석을 통해 도면의 푸른색으로 표시된 signal을 통해 포도당이 결합된 화합물임을 확인하였고 carbon data와 여러 문헌과 비교한 결과 에스큐레틴의 배당체 화합물로 나타났다(도 3 B 참조).
gHMBC 분석을 통해서 당의 anomer proton은 C-7번과 cross peak를 확인함으로서 새롭게 합성된 에스큐레틴 유도체는 수크로스의 포도당 한 분자가 에스큐레틴의 7번 위치에서 알파 결합을 이루는 알파-치커린(α-cichoriin)을 형성하여 전이되었음을 알 수 있었다(도 4 참조).
실험예
1. 대식세포에 대한 세포독성 실험
에스큐레틴, 에스큘린 및 알파-치커린의 세포독성 실험은 MTT(3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드, 테트라졸) 분석을 통해 수행되었다. 쥐의 대식세포인 RAW 264.7(5 x 104 cells/well)을 24 well culture plate에 37℃에서 18시간 배양하였다. 배양 후 에스큐레틴(10μM), 에스큘린(10μM) 및 알파-치커린을 각각 10-3, 10-1 및 10μM의 농도로 각 well에 약물처리 후 72시간 배양하였다. 약물처리 후 MTT 용액(0.5mg/ml) 200μl을 각 well에 분주하였다. 4시간 동안 37℃, CO2 5%에서 배양한 뒤 상등액을 제거하고 생존한 세포에서 생성된 포르마잔 결정을 DMSO 300μl에 녹였다. 각 well의 샘플들을 microplate reader를 이용하여 595 nm에서 흡광도를 측정하였다.
측정결과, 에스큐레틴과 알파-치커린은 RAW 264.7의 증식에 특별한 영향을 미치지 않아 세포독성이 없음을 확인하였다(도 5 참조).
실험예
2.
에스큐레틴
유도체의 항암활성 측정
쥐의 악성흑색종(melanoma) 세포인 B16F10(4 x 103 cells/well)을 24 well culture plate에 37℃에서 18시간 배양하였다. 배양 후 에스큐레틴(10μM), 에스큘린(10μM) 및 알파-치커린을 각각 10-3, 10-1, 10μM의 농도로 각 well에 약물처리하여 72시간 배양 후, 현미경 배율 100 배로 세포 형태를 관찰하였다.
관찰결과, 에스큐레틴 처리군과 알파-치커린 처리군에서 B16F10 증식이 억제됨을 확인하였다(도 6 참조).
약물처리 후 MTT 용액(0.5mg/ml) 200μl을 각 well에 분주하였다. 4시간 동안 37℃, CO2 5%에서 배양한 뒤 상등액을 제거하고 생존한 세포에서 생성된 포르마잔 결정을 DMSO 300μl에 녹였다. 각 well의 샘플들을 microplate reader를 이용하여 595nm에서 흡광도를 측정하였다.
측정결과, 알파-치커린을 처리했을 때 에스큐레틴과 유사하게 멜라노마 세포의 증식이 감소한 것을 확인하였다(도 7 참조).
실험예
3. 수용성 분석
과량의 에스큐레틴과 알파-치커린을 각각 에펜돌프 튜브에 0.5 ml의 증류수로 현탁한다. 실온에서 1시간 동안 초음파 분해를 통해 과량의 기질을 녹인 후, 샘플을 10분 동안 13,000rpm으로 원심분리하였다. 원심분리 후 샘플의 상등액을 UV 분광광도계(Gene Quan pro UV/Vis spectrophotometer, UK)를 통해 340nm에서 흡광도를 측정하는 것으로 수용성을 분석하였다.
| 화합물 | Water Solubility |
| 에스큐레틴 | 0.10 mg/ml |
| 에스큐레틴 7-α-D-글루코시드(알파-치커린) | 1.12 mg/ml |
에스큐레틴 유도체인 알파-치커린은 에스큐레틴보다 11배 더 수용성이 증가한 것을 확인할 수 있다(표 1 참조).
Claims (6)
- 삭제
- 하기 화학식 1로 표시되는 알파-치커린을 포함하는 항암제:
[화학식 1]
.
- 하기 화학식 1로 표시되는 알파-치커린을 포함하는 암 억제능이 있는 건강기능식품:
[화학식 1]
.
- 삭제
- 삭제
- 삭제
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020120054781A KR101432747B1 (ko) | 2012-05-23 | 2012-05-23 | 알파-치커린, 이를 포함하는 항암제 및 건강기능식품 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020120054781A KR101432747B1 (ko) | 2012-05-23 | 2012-05-23 | 알파-치커린, 이를 포함하는 항암제 및 건강기능식품 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20130140962A KR20130140962A (ko) | 2013-12-26 |
| KR101432747B1 true KR101432747B1 (ko) | 2014-08-22 |
Family
ID=49985177
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020120054781A KR101432747B1 (ko) | 2012-05-23 | 2012-05-23 | 알파-치커린, 이를 포함하는 항암제 및 건강기능식품 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR101432747B1 (ko) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008122038A1 (en) * | 2007-04-02 | 2008-10-09 | President And Fellows Of Harvard College | Regulating autophagy |
| US20090170930A1 (en) * | 2006-09-07 | 2009-07-02 | The Second Military Medical University | Methods for directing differentiation of clonogenic neural stem cells with coumarins |
| US20110183930A1 (en) * | 2006-06-14 | 2011-07-28 | Libragen | Water soluble and activable phenolics derivatives with dermocosmetic and therapeutic applications and process for preparing said derivatives |
-
2012
- 2012-05-23 KR KR1020120054781A patent/KR101432747B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20110183930A1 (en) * | 2006-06-14 | 2011-07-28 | Libragen | Water soluble and activable phenolics derivatives with dermocosmetic and therapeutic applications and process for preparing said derivatives |
| US20090170930A1 (en) * | 2006-09-07 | 2009-07-02 | The Second Military Medical University | Methods for directing differentiation of clonogenic neural stem cells with coumarins |
| WO2008122038A1 (en) * | 2007-04-02 | 2008-10-09 | President And Fellows Of Harvard College | Regulating autophagy |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20130140962A (ko) | 2013-12-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR20190066637A (ko) | 왕불류행 추출물을 포함하는 암의 예방 및 치료용 조성물 | |
| KR20150031780A (ko) | 리그난 화합물을 유효 성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 조성물 | |
| KR100465113B1 (ko) | 대나무 추출물 또는 이로부터 분리된 트리신을 포함하는조성물 | |
| KR101424360B1 (ko) | 하이드록시 챨콘 화합물을 유효성분으로 함유하는 항암용 조성물 | |
| KR101787008B1 (ko) | 플라보노이드 유도체 및 이리도이드 유도체로 구성된 화합물 조합을 유효성분으로 함유하는 남성 불임증 예방 및 치료용 조성물 | |
| KR101432747B1 (ko) | 알파-치커린, 이를 포함하는 항암제 및 건강기능식품 | |
| KR101787007B1 (ko) | 플라보노이드 유도체 화합물을 유효성분으로 함유하는 남성 불임증 예방 및 치료용 조성물 | |
| KR20060130830A (ko) | 가죽나무 추출물을 포함하는 천식 및 알러지 질환의 예방또는 치료용 조성물 | |
| KR101152479B1 (ko) | 탈지된 녹차씨 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염 또는 항암 조성물 | |
| KR102269242B1 (ko) | 엄벨리페론 유도체를 포함하는 우울증의 예방 또는 치료용 조성물 | |
| KR101402849B1 (ko) | 피세이드 유도체를 포함하는 심혈관계 질환의 예방 또는 치료용 의약조성물 및 건강기능식품 | |
| KR102250681B1 (ko) | 결명자에서 분리된 화합물을 포함하는 우울증의 예방 또는 치료용 조성물 | |
| KR20150049695A (ko) | Ｈｓｐ９０ 억제 활성을 갖는 플라보카와인 유도체 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 및 이의 의학적 용도 | |
| WO2021247776A1 (en) | Biologically active compositions and methods of using | |
| KR102114271B1 (ko) | 금어초 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 약학적 조성물 | |
| KR100490799B1 (ko) | 대나무 추출물 또는 이로부터 분리된 트리신을 포함하는 식품 | |
| KR101396387B1 (ko) | 재조합 아밀로수크라제를 이용한 바이칼레인-6-알파-d-글루코사이드의 제조방법, 및 이에 의해 제조된 바이칼레인-6-알파-d-글루코사이드를 유효성분으로 포함하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 조성물 | |
| KR102113140B1 (ko) | 단삼 및 도인 추출물을 유효성분으로 함유하는 암 예방 또는 치료용 조성물 | |
| KR101787006B1 (ko) | 이리도이드 유도체 화합물을 유효성분으로 함유하는 남성 불임증 예방 및 치료용 조성물 | |
| KR20110134552A (ko) | 향부자 메탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 패혈증 예방 또는 치료용 조성물 | |
| KR20160056415A (ko) | 식용피 추출물 또는 분획물을 유효성분으로 포함하는 염증 질환 예방, 개선 또는 치료용 조성물 | |
| KR101678646B1 (ko) | 빵 나무의 추출물, 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 암 예방 또는 치료용 조성물 | |
| KR100694569B1 (ko) | 항염증 활성을 갖는 우묵사스레피 추출물 및 이로 부터분리된 화합물을 함유하는 조성물 | |
| KR20120110264A (ko) | 아미노쿠마린계 화합물을 유효성분으로 함유하는 골대사 질환 예방 또는 치료용 조성물 | |
| KR102275125B1 (ko) | 난백 오보트랜스페린 효소 가수분해물을 포함하는 면역증강용 조성물 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| AMND | Amendment | ||
| E601 | Decision to refuse application | ||
| AMND | Amendment | ||
| X701 | Decision to grant (after re-examination) | ||
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20170804 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20190724 Year of fee payment: 6 |