KR101406529B1 - 우묵사스레피 추출물을 포함하는 불안증의 예방 및 치료용 조성물 - Google Patents

우묵사스레피 추출물을 포함하는 불안증의 예방 및 치료용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 우묵사스레피 추출물을 포함한 불안증 예방 및 치료용 약학 조성물 및 식품 조성물에 관한 것이다.

Description

우묵사스레피 추출물을 포함하는 불안증의 예방 및 치료용 조성물 {Composition including an extract from Eurya emarginata for use in treating and preventing an anxiety}
본 발명은 우묵사스레피 추출물을 유효성분으로 포함하는 불안증의 예방 및 치료용 약학 조성물 및 식품 조성물에 관한 것이다.
최근 경제성장률이 둔화되면서 불안을 느끼는 사람들이 늘어나고 이혼과 자녀문제 등 급격히 변하는 가족 관계와 관련하여 불안증 환자가 급증하고 있는 추세이다. 불안증(anxiety)이란, 광범위하게 매우 불쾌한, 그리고 막연히 불안한 느낌으로, 관련된 신체 증상 (가슴 두근거림, 진땀 등)과 행동 증상 (과민성, 서성댐 등)을 동반하는 것이다(Robert. F. Schmidt. Human physiology, pp366, 1993; 민성길. 최신 정신 의학, pp238-240, 1992; S. V. Argyropoulos, J. J. Sandford, et al., Pharmacol. Ther . 88, pp213-227, 2000). 불안증으로 병원에서 전문적인 정신과 상담치료를 받는 환자도 늘어나고 있으며, 2002년에는 항불안제의 매출도 약 200% 정도 늘어났다고 한다. 이처럼 불안증은 현대인의 정신질환 중 대부분을 차지한다고 해도 과언이 아니며, 많은 사람들이 이로 인해 고통을 받고 있다.
불안이 있을 때 뇌 전체는 각성(arousal) 상태에 들어가며, 따라서 말초의 행동, 자율신경계, 감각, 지각 등에 지장이 나타난다. 주로 관계된 기관은 대뇌 변연계(특히 해마와 대상회), 대뇌 피질(전두엽, 측두엽), 시상하부, 상행망상체, 뇌하수체 등이고 말초에서는 갑상선과 부신 피질이다. 최근 뇌 영상 연구에 의하면 불안은 오른쪽 반구의 장애와 관련되며 기타 전두엽, 측두엽, 후두엽 장애와 관련되어 있다고 알려져 있다(Robert. F. Schmidt. Human physiology, pp366, 1993; 민성길. 최신 정신 의학, pp238-240, 1992).
불안에 대한 치료약물의 연구는 오래된 약물의 재평가 및 적응증의 확대뿐만 아니라 새로운 약물의 개발, 특히 세로토닌 재흡수 억제제 등의 개발에 관심이 모아지고 있다. 그러나 임상적으로 유효한 항불안 약물들은 항불안의 효과뿐만 아니라 진정, 금단 현상의 유발 등의 부작용 때문에 사용에 신중을 기해야 하는 단점이 있다.
이상적인 항불안 약물은 낮 시간에 지나친 졸음을 초래하지 않고 육체적 정신적 의존성을 일으키지 않으며 환자를 침착하게 만드는 것이다. 현재 상용되는 대표적 항불안제는 벤조디아제핀(benzodiazepine), 디아제팜(diazepam), 옥사제팜(oxazepam), 프라제팜(prazepam), 로라제팜(lorazepam), 알프라조람(alprazolam), 헤라제팜(helazepam), 크로나제팜(clonazepam) 등이 있으며, 이들 약물들은 주로 진정 및 수면유도의 목적으로도 사용된다(윤도준, 정신과약물의 부작용, 대한의사협회지, 38(10), pp1196-1202, 1995년 10월호). 벤조디아제핀(Benzodiazepine)은 가장 흔히 사용하는 항불안제로, 이 약물이 중추신경계에서 대표적 억제성 신경전달물질인 GABA 수용체의 친화력을 증가시켜 인접한 Cl- 통로를 더 자주 열어 Cl- 이온의 투과성을 상승시킨다고 밝혀져 있다. 이 벤조디아제핀은 효과가 즉각 나타나지만 습관성과 중독성이 단점으로 전문의의 치료에 따라 약을 사용하지 않으면 증상이 재발하거나 금단 증상이 나타나며, 다른 부작용으로 졸음, 운동실조, 기립성 저혈압, 호흡억제, 두통, 만성수면장애, 간질환 등이 나타난다고 보고되고 있다(Mary J. Mycek, Richard A, et al., Pharmacology, 2, pp89-93, 2000).
우묵사스레피(Eurya emarginata )는 차나무과의 상록 관목수로 제주도와 같은 따듯한 도서 지방의 바닷가 산지에서 주로 자생한다. 특히 건조, 해풍, 먼지 대기오염 등 각종 공해에 강한 특징을 지니며, 지역적으로 중국, 대만, 일본, 인도 등에 분포하고, 열매가 쥐똥 같고 해변에서 자생한다 하여 "섬쥐똥나무"라 불리기도 한다. 사스레피나무와 생김새가 비슷하나 사스레피나무의 근연종으로 생장은 다소 느린 편이고 싹트는 힘이 왕성하며, 잎 끝이 뒤로 말리어 우묵하게 들어가는 특징을 지녀 "우묵사스레피"라 한다.
우묵사스레피의 과실은 풍사(風邪)와 습사(濕邪)를 없애고 부기를 가라앉히며 지혈(止血)하는 효능이 있어, 민간에서는 이뇨 및 담 제거 등의 약재로 쓰이고 있다(김태정, 한국의 자원식물, pp114-115, 1996). 그러나 우묵사스레피의 잎의 유효 성분이나 생리 활성에 대한 보고는 거의 없는 실정이다. 또한 우묵사스레피 추출물을 이용한 불안증, 우울증 또는 신경과민 등의 치료 및 예방 효과와 관련된 용도에 관해서는 상기 문헌 어디에도 교시되거나 기재된 바가 없다.
이에 본 발명자들은 불안증과 같은 정신질환의 치료 및 예방에 있어서 종래 기술상의 문제점을 인식하고 중독성, 졸음, 만성수면 장애 및 두통 등과 같은 부작용 없이 항불안 효과를 나타내는 약물을 개발하기 위하여 노력한 결과 본 발명을 완성하였다
한국등록특허 제10-0806035호
본 발명의 목적은 우묵사스레피 추출물을 유효성분으로 포함하는 불안증 예방 및 치료용 약학조성물을 제공하기 위한 것이다.
본 발명의 다른 목적은 우묵사스레피 추출물을 유효성분으로 포함하는 불안증 예방용 식품 조성물을 제공하기 위한 것이다.
본 발명은 우묵사스레피 추출물을 유효성분으로 포함하는 불안증 예방 및 치료용 약학 조성물을 제공한다.
상기 우묵사스레피 추출물은 전체 약학 조성물에 대하여 0.02 내지 80 중량%로 포함될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 범위를 벗어나는 경우 불안증 예방 및 치료 효능이 나타나지 않거나 불안증 예방 및 치료 효능 이외의 부작용이 나타날 수 있다.
상기 우묵사스레스피 추출물의 제조방법은 이 기술분야에 널리 알려진 방법이면 어느 것이나 사용 가능하다. 예를 들면, 우묵사스레스피를 적절히 세절하고 세척하여 건조한 우묵사스페스피 건조중량의 약 1 내지 15배, 바람직하게는 약 10 내지 15배 부피의 물, 메탄올, 에탄올과 같은 저급 알콜 또는 이들의 약 1:0.1 내지 1:10의 혼합비를 갖는 혼합 용매, 바람직하게는 물, 70%, 95%의 에탄올에서 20 내지 100℃, 바람직하게는 90 내지 100℃의 추출 온도에서 약 0.5시간 내지 2일, 바람직하게는 1 시간 내지 1일 동안 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출등의 추출방법으로 1회 내지 5회, 바람직하게는 2회 내지 3회 반복하여 수득한 후, 감압여과하고 여과한 추출물을 감압농축한 다음, 추출된 잔사를 진공동결건조기로 건조하여 물, 에탄올, 메탄올과 같은 저급알콜 또는 이들의 혼합용매에 가용한 우묵사스레스피 추출물을 얻을 수 있다.
상기 약학 조성물은 적절한 담체, 부형제, 희석제, 붕해제, 감미제, 피복제, 팽창제, 활택제, 향미제, 항산화제, 완충액, 정균제, 분산제, 계면 활성제, 결합제 및 윤활제로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 첨가제를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
본 발명의 추출물의 약학적 투여 형태는 이들의 약학적 허용 가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 조합으로 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 추출물을 포함하는 약학조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸, 피복정, 환제, 겔, 즙, 유제 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 점적제, 액제 등의 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함될 수 있다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 추출물의 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 달라질 수 있으며, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 우묵사스레피 추출물을 유효성분으로 하는 불안증 예방 및 치료 약학조성물의 투여량은 이에 제한되는 것은 아니지만, 본 발명의 추출물은 1일 0.0001 내지 100 mg/kg으로, 0.001 내지 100 mg/kg으로, 0.01 내지 70 mg/kg으로, 0.1내지 50 mg/kg으로 투여할 수 있다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 추출물은 대상체에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 본 발명의 상기 약학조성물은 정맥내, 동맥내, 복강내, 근육내, 동맥내, 복강내, 흉골내, 경피, 비측내, 흡입, 국소, 직장, 경구, 안구내 또는 피내 경로를 통해 통상적인 방식으로 대상체로 투여할 수 있다. 예를 들면, 경구, 직장, 정맥, 동맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(Intracerebroventricular)주사에 의해 투여될 수 있다. 본 발명에 있어서 상기 ‘대상체’는 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등을 포함하는 포유동물 일 수 있으나, 이들 예에 한정되는 것은 아니다.
또한, 본 발명은 우묵사스레피 추출물을 유효성분으로 포함하는 불안증 예방용 식품 조성물을 제공한다.
상기 우묵사스레피 추출물은 전체 식품 조성물에 대하여 0.02 내지 80 중량%로 포함될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 범위를 벗어나는 경우 불안증 예방 효능이 나타나지 않거나 식품의 맛이 훼손될 수 있다.
상기 식품 조성물은 유기산, 인산염, 항산화제, 유당 카제인, 천연 탄수화물, 향미제, 영양제, 비타민, 광물, 풍미제, 착색제, 중진제, 펙트산, 펙트산염, 알긴산, 알긴산염, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산화제, 탈크, 비오틴, 엽산, 천연 과일주스, 과육으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 첨가제를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강 기능성 식품류 등이 있다.
또한, 본 발명의 우묵사스레피 추출물은 불안증 예방 및/또는 개선을 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 추출물의 양은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 5g, 바람직하게는 0.3 내지 1g의 비율로 가할 수 있다.
본 발명의 다른 구체예에서, 상기 불안증 예방 및/또는 개선 효과를 나타내는 식품 조성물은 유기산, 인산염, 항산화제, 유당 카제인, 덱스트린, 포도당, 설탕 및 솔비톨로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 첨가제를 추가로 포함할 수 있다. 유기산은 이에 제한되는 것은 아니지만 구연산, 후말산, 아디픽산, 젖산 또는 사과산일 수 있으며, 인산염은 이에 제한되는 것은 아니지만 인산나트륨, 인산칼륨, 산성피 로인산염 또는 폴리인산염(중합인산염)일 수 있으며, 항산화제는 이에 제한되는 것 은 아니지만 폴리페놀, 카테킨, 알파-토코페롤, 로즈마리 추출물, 감초 추출물, 키토산, 탄닌산 또는 피틴산 등의 천연 항산화제일 수 있다.
본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 상기 추출물을 포함하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 1 내지 20g, 5 내지 12g, 6 내지 10g이다.
본 발명의 상기 불안증 예방 및/또는 개선 효과를 나타내는 식품 조성물은 우묵사스레피 추출물 이외에도 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 추출물은 천연 과일 주스 및 과일 주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 본 발명의 추출물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것 일 수 있다. 발명의 일실시예에 따르면, 상기 항불안 및 기억력 개선 효과를 나타내는 식품조성물의 제형은 이에 제한되는 것은 아니지만 고형, 분말, 과립, 정제, 환제, 캡슐, 액제 또는 음료 형태일 수 있다. 또한 항불안 및 기억력 개선 효과를 나타내는 식품조성물은 이에 제한되는 것은 아니지만 과자류, 당류, 아이스크림 제품류, 유가공품, 식육제품, 어육제품, 두부류 또는 묵류, 식용유지류, 면류, 다류, 음료류, 특수영양식품, 건강기능식품, 조미식품, 얼음, 인삼 제품류, 김치절임식품, 건포류, 과일, 야채, 과일 또는 야채의 건조제품, 절단제품, 과일쥬스, 야채쥬스, 이들의 혼합쥬스, 칩류, 면류, 축산가공 식품, 수산가공식품, 유가공식품, 발효유식품, 두류식품, 곡류식품, 미생물 발효식품, 제과제빵, 양념류, 육가공류, 산성음료수, 감초류, 허브류 등의 식품의 제조에 사용될 수 있다.
상기 식품 조성물은 분말, 과립, 정제, 캡슐, 환제, 액제 또는 음료 형태일수 있으나 이로 제한되는 것은 아니다.
또한 상기 식품 조성물은 이에 제한되는 것은 아니지만 과자류, 당류, 아이스크림 제품류, 유가공품, 식육제품, 어육제품, 두부류 또는 묵류, 식용유지류, 면류, 다류, 음료류, 특수영양식품, 건강보조식품, 조미식품, 얼음, 인삼제품류, 김치절임식품, 건포류, 과일, 야채, 과일 또는 야채의 건조제품, 절단제품, 과일쥬스, 야채쥬스, 이들의 혼합쥬스, 칩류, 면류, 축산가공식품, 수산가공식품, 유가공식품, 발효유식품, 두류식품, 곡류식품, 미생물발효식품, 제과제빵, 양념류, 육가공류, 산성음료수, 감초류, 허브류 등의 식품의 제조에 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 우묵사스레피 추출물을 유효성분으로 포함한 조성물은 불안증 예방 효과가 우수하여 불안증 예방 및/또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 우묵사스레피 추출물을 마우스에 투여 후, 마우스가 5분 동안 상승된 십자미로 (elevated plus-maze)의 열려 있는 공간에 머무는 시간 또는 출입한 횟수의 백분율을 나타낸다. Busp2는 버스피론 투여군(양성대조군)을, EE-70E는 우묵사스레스피 추출물을 투여한 실험군을 나타낸다.
도 2는 우묵사스레피 추출물을 마우스에 투여 후, 마우스가 5분 동안 공동판 (hole-board test) 구멍에 머리를 넣은 횟수를 나타낸 것이다. EE-70E는 우묵사스레스피 추출물을 투여한 실험군을 나타낸다.
도 3은 우묵사스레피 추출물을 마우스에 투여 후, 근육 이완효과를 와이어 실험에서 확인한 것을 나타낸다. EE-70E는 우묵사스레스피 추출물을 투여한 실험군을 나타낸다.
이하, 본 발명을 하기 실시예에 의해 상세히 설명한다. 다만, 하기 참고예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 이 기술분야에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
<실시예 1> 실험 동물 및 시약
1-1. 실험 동물
6주령의 ICR 마우스 (28-32 g)를 ㈜오리엔트(Seoul, Korea)사에서 공급받아 제주대학교의 크린 케이지에 약 7일간 적응시켜 사용하였다. 물과 사료는 자유롭게 섭취하도록 하였고, 온도 (23 ㅁ 2 ℃), 습도 (55 ㅁ 10 %) 및 명암 주기 (12 시간)는 자동으로 조절되도록 하였다.
1-2. 통계 처리
모든 실험 결과는 일원변량분석(ANOVA; one way analysis of variance)를 이용하여 통계 처리하였고, 유의성이 인정될 경우 집단간 평균비교시험(Student-Newman-Keuls Test)을 사용하여 p < 0.05 수준 이하에서 유의성 검정을 실시하였다.
1-3. 실험 시약
버스피론(buspirone)은 시그마 사(Sigma Chemical Co.; ST, Louis, MO, USA)사에서, 디아제팜(diazepam)은 대원제약(Seoul, Korea)에서 구입하여 사용하였다. 기타 시약들은 시중에서 구입하여 사용하였다.
<실시예 2> 우묵사스레피 추출물 제조
2-1. 우묵사스레스피 열수추출물의 제조
제주에서 자생하는 우묵사스레스피 500 g을 깨끗한 물로 세척한 후 10일간 그늘에서 자연 건조하여 분말화한 후, 2차 증류수 5 ℓ를 가하고 약 2 시간 동안 90-100℃에서 환류냉각하면서 추출하여 여과한 다음, 동결건조기(Freeze dryer)에서 동결 건조하여 우묵사스레스피 열수 추출물 105.2 g을 수득하였다(수득률 21.4 %)
2-2. 우묵사스레스피 에탄올 추출물의 제조
제주에서 자생하는 우묵사스레스피 500 g을 깨끗한 물로 수세한 후 10일간 그늘에서 자연 건조하여 분말화한 후, 70% 에탄올 2.5 ℓ를 가하고 60℃에서 약 2 시간씩 2회 반복하여 중탕 가열 추출한 다음, 여과하고 감압건조하여 25 g을 수득하였다(수득률 5%).
<실험예 1> 불안증 개선 측정
1-1. 상승된 십자미로 (elevated plus-maze) 실험
항불안 약물의 개발은 유용한 동물 모델의 개발이 선행되어야 가능하다. 본 발명에서 이용한 상승된 십자미로 시험은 불안과 연관된 행동을 확인하는 방법으로서 널리 이용되고 있는 시험 방법으로 랫트 및 마우스에서 검정된 모델이다(R G. Lister Psychopharmacology. 92, pp180-185, 1987; S. R. Handley, M. D. Tricklebank, Arch Pharmacol. 327, pp1-5, 1995).
본 발명의 우묵사스레피 추출물의 항불안 효과를 확인하기 위해, ICR 마우스를 이용하여 상승된 십자미로(elevated plus-maze) 실험을 실시하였다(S. R. Handley, M. D. Tricklebank, Arch Pharmacol., 327, pp1-5, 1995).
양성대조군으로는 버스피론(buspirone; 2 mg/kg)을 실험 0.5 시간 전에 마우스에 복강투여하였고, 실험군인 우묵사스레피 추출물(실시예 2-2의 추출물)은 각각 100, 200, 400 mg/kg 용량으로 0.9% 생리식염수(w/v%)에 녹여 5 ml/kg으로 마우스에 경구 투여하였다. 약물 투여는 실험 시작 1 시간 전에 투여가 종료되도록 하였으며, 0.9% 생리식염수(w/v%)를 5 ml/kg으로 마우스에 경구 투여하여 대조군으로 사용하였다. 각 군은 10 마리로 하였다.
약물 투여가 종료된 후 각 실험군의 행동 변화 측정은 검정색의 아크릴로 제작된 상승된 십자미로(elevated plus-maze)를 이용하였다. 이 장치는 바닥에서 50 cm 높이에 설치된 십자형 (+) 미로로서, 4개의 통로 가운데 마주보는 2개(길이 30 cm, 폭 7 cm)는 개방되어 있고, 크기가 동일한 다른 2개의 통로는 높이 20 cm의 벽으로 둘러싸여 있다. 중심 플랫폼은 가로 7 cm 및 세로 7 cm로 하였고, 미로의 중앙부 천장에 비디오카메라를 설치하여 동물의 행동을 기록하였으며 광도는 30 럭스(lux)로 조정하였다. 실험을 시작할 때 마우스는 미로의 중앙에서 열린 공간 쪽으로 머리를 향하게 하여 살며시 내려놓은 다음 미로를 자유롭게 탐색하도록 하였다. 행동은 5분간 관찰하였으며, 마우스가 열려 있는 공간과 닫혀 있는 공간에 머문 시간, 각 공간의 출입 횟수 및 총 이동거리 등을 EthoVision 프로그램(Noldus Information Technology, Wageningen, Netherlands)으로 각각 측정하여 항불안 효과를 확인하였다(S. Pellow, P. Chopin, S. J. Neurosci Methods, 14, pp. 149-167, 1985). 상승된 십자미로 (elevated plus-maze) 실험의 결과를 나타내었다(도 1 참조).
우묵사스레피 추출물의 실험 동물에서 200 및 400 mg/kg 용량의 우묵사스레피 추출물 투여군에서 open arm에 머무는 시간의 백분율이 대조군의 비율과 비교하여 용량 의존적으로 유의성 있게 증가됨이 관찰되었다(각각 29.1 ± 4.5%, 27.6 ± 4.2% versus 13.2 ± 2.3%, P > 0.05). 양성대조군인 버스피론(buspirone) 투여군에서는 33.1 ± 7.5%로 대조군보다 유의성 있게 증가함을 알 수 있었음(P < 0.05). 또한 open arm에 출입한 횟수의 백분율에서 200 및 400 mg/kg 용량의 우묵사스레피 추출물 투여군의 비율이 대조군의 비율과 비교하여 용량 의존적으로 유의성 있게 증가하였음을 관찰할 수 있었음(각각 37.8 ± 2.5%, 36.4 ± 2.8% versus 31.4 ± 3.8%, P > 0.05). 양성대조군인 buspirone 투여군에서는 39.2 ± 5.8%로 대조군의 비율보다 유의성 있게 증가하여 불안증 개선 효과를 나타내었다. 또한, 도 1 에서 알 수 있는 바와 같이 우묵사스레피 추출물은 200 및 400 mg/kg 투여군에서 열린 공간에 머무른 시간에 대한 백분율이 대조군에 비해 유의성 있게 증가하였고(P < 0.05), 열린 공간에 들어간 횟수에 대한 백분율도 대조군에 비해 유의성있게 증가하여(P < 0.05), 본 발명의 추출물이 불안증 개선에 탁월한 효과를 가짐을 확인할 수 있었다.
1-2. 공동판 실험
본 발명의 우묵사스레피 추출물의 항불안 효과를 확인하기 위해 ICR 마우스를 이용하여 공동판 실험을 실시하였다. 실험군인 우묵사스레피 추출물은 각각 100, 200, 400 mg/kg 용량으로 경구 투여하였다. 약물 투여는 실험 시작 1시간 전에 투여가 종료되도록 하였으며, 0.9% 생리식염수(w/v%)를 5 ml/kg으로 경구 투여하여 대조군으로 사용하였다. 각 군은 10 마리로 하였다. 약물 투여가 종료된 후 각 실험군의 행동 변화 측정은 공동판을 이용하였다. 이 장치는 40 × 40 cm × 2.2 cm 크기의 회색 퍼스펙스 판으로서, 지름 3 cm의 16개 구멍으로 구성되어 있고, 바닥에서 15 cm 높이에 위치해 있다. 행동은 자유롭게 탐색하도록 하여 5분간 관찰하였으며, 마우스가 구멍에 머리를 넣는 횟수를 측정함으로써 약물의 항불안 효과를 평가하였다(J.W. Jung, N.Y. Ahn, J. Ethnopharmacol. 108, pp193-197, 2006). 공동판 (hole-board test) 실험의 결과를 도 2에 나타내었다.
우묵사스레피 추출물을 투여한 실험 동물이 열려 있는 공간에 머무는 시간의 백분율은, 도 2에서 알 수 있는 바와 같이 구멍에 머리를 넣은 횟수는 대조군에서 59.0 ± 4.4 회였으며, 우묵사스레피 추출물은 200 및 400 mg/kg 투여군에서 구멍에 머를 넣은 횟수는 각각 91.5 ± 3.0, 80.3 ± 3.4회로 대조군에 비해 유의성 있게 증가하여(P < 0.05), 본 발명의 추출물이 불안증 개선에 탁월한 효과를 가짐을 확인할 수 있었다.
1-3. 이동 활성(locomotor activity) 측정
약물의 효과가 단순한 운동성 변화에 의한 것인지 확인하기 위해, 오픈 필드 테스트(open field test)에서 마우스의 이동 활성(locomotor activity)을 측정하였다. 이동 활성은 자가 제조된 오픈 필드 테스트용 상자에서 측정하였다. 상자는 가로 41.5 cm, 세로 41.5 cm, 높이 43 cm가 되도록 만들었으며, 하나의 상자에서 한 마리씩 측정하였다. 우묵사스레피 추출물은 100, 200, 400 mg/kg 용량으로 실험 1시간 전에 경구 투여하였으며, 0.9% 생리식염수(w/v%)를 5 ml/kg으로 경구 투여하여 대조군으로 사용하였다. 각 군은 10 마리로 하였으며 Ethovision 프로그램(Noldus Information Technology, Wageningen, Netherlands)을 이용하여 5분간 총 이동 거리를 측정하였다. 그 결과 하기 표 1에서 알 수 있는 바와 같이 대조군, 양성대조군, 실험군 모두 유의성 있는 차이를 보이지 않아 실험 동물간의 운동성에는 변화는 없는 것을 알 수 있다.
Figure 112013016161788-pat00001
1-4. 와이어 실험
양성대조군으로는 다이제팜(diazepam; 5 mg/kg을 실험 0.5 시간 전에 마우스에 투여하였고, 실험군인 우묵사스레피 추출물은 각각 100, 200, 400 mg/kg 용량으로 경구 투여하였다. 약물 투여는 실험 시작 1 시간 전에 투여가 종료되도록 하였으며, 0.9% 생리식염수(w/v%)를 5 ml/kg으로 경구 투여하여 대조군으로 사용하였다. 각 군은 10 마리로 하였다.
신경 안정 또는 항불안 효과를 갖는 약물들의 일반적인 부작용으로 알려져 있는 근육이완 작용이 관찰되는지 확인하기 위해, 하기의 방법으로 와이어 실험을 실시하였다. 와이어 실험은, 양쪽에 기둥을 설치하고 바닥으로부터 20 cm의 높이로 하여 직경 1 mm의 와이어를 길이 15 cm로 하여 수평으로 설치하여 측정하였다. 먼저 마우스의 꼬리를 들어 와이어 위에서 마우스가 앞발로 와이어를 잡을 수 있도록 한 다음, 꼬리를 아래쪽으로 향하여 놓는다. 실험 측정은 마우스의 앞발을 와이어에 쥐게 한 후 적어도 한쪽 뒷발이 와이어를 쥐거나, 앞발로 10초 이상 와이어에 매달려 있으면 통과로 인정하였다. 대조군, 양성대조군 및 우묵사스레피 추출물 투여 실험군을 상승된 십자미로 (elevated plus-maze) 실험 완료 후, 5분 간격으로 두 번의 와이어 테스트를 실시하여 2회의 평균값을 이용하였다(E. P. Bonetti, L. Pieri, Psychopharmacology(Berl), 78, pp8-18, 1982). 실험 결과, 도 3에서 알 수 있는 바와 같이 양성대조군인 디아제팜 5 mg/kg 투여 군에서 현저한 근육이완작용이 나타나는 것을 관찰할 수 있었다. 그러나 본 발명의 우묵사스레피 추출물의 모든 투여 군에서는 대조군에 비해 어떠한 유의성 있는 변화가 관찰되지 않아 부작용이 없는 보다 안전한 약물임을 확인할 수 있다.
<실험예 2> 급성 독성 실험
본 발명의 우묵사스레피 추출물의 단회 경구투여에 의한 급성 독성을 조사하기 위하여 0 내지 2000 mg/kg 용량으로 10마리씩의 ICR 계통 마우스에 단회 경구투여한 후 14일간의 사망률, 일반 증상, 체중 변화를 관찰하였다. 시험 결과, 투여 가능 용량인 2000 mg /kg에서 사망예를 전혀 관찰할 수 없었으며, 체중 증가, 사료 섭취량 등에서 전혀 유의한 이상을 발견할 수 없었다. 따라서 본 발명의 우묵사스레피 추출물은 안전한 약물임을 알 수 있었다.
우묵사스레피 추출물을 유효성분으로 포함하는 본 발명의 추출물이 불안증 및 기억력 개선 효과에 미치는 영향을 조사한 결과, 우묵사스레피 추출물의 실험동물이 상승된 십자미로에서 열린 공간에 머무는 시간 및 횟수가 증가하고, 공동판 실험에서 구멍에 머리를 넣은 횟수가 증가하여 불안증 개선효과를 확인할 수 있었다. 또한 오픈필드 테스트에서 운동성에는 변화가 없었고 와이어 실험에서 근육이완작용은 보이지 않았으며, 급성독성 실험에서 유의한 이상을 발견할 수 없었다. 따라서 본 발명의 우묵사스레스피 추출물은 부작용 없이 안전하고 효과적인 조성물임을 확인할 수 있었다. 또한 본 발명의 우묵사스레피 추출물이 동물 모델에서 탁월한 항불안 효과를 갖는다는 사실을 확인할 수 있었다.
하기에 본 발명의 추출물(실시예 2-1의 우묵사스레피 추출물)을 포함하는 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
<제제예 1> 산제의 제조
우묵사스레피 추출물 20 mg
유당 100 mg
탈크 10 mg
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하엿다.
<제제예 2> 정제의 제조
우묵사스레피 추출물 10 mg
옥수수 전분 100 mg
유당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
<제제예 3> 캡슐제의 제조
우묵사스레피 추출물 10 mg
결정성 셀룰로오스 3 mg
락토오스 14.8 mg
마그네슘 스테아레이트 0.2 mg
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
<제제예 4> 주사제의 제조
우묵사스레피 추출물 10 mg
만니톨 180 mg
주사용 멸균 증류수 2974 mg
Na2HPO4,12H2O 26 mg
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2 ㎖) 상기의 성분 함량으로 제조하였다.
<제제예 5> 액제의 제조
우묵사스레피 추출물 20 mg
이성화당 10 g
만니톨 5 g
정제수 적량
통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬 향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100 ㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조하였다.
<제제예 6> 건강 식품의 제조
우묵사스레피 추출물 1000 ㎎
비타민 A 아세테이트 70 ㎍
비타민 E 1.0 ㎎
비타민 B1 0.13 ㎎
비타민 B2 0.15 ㎎
비타민 B6 0.5 ㎎
비타민 B12 0.2 ㎍
비타민 C 10 ㎎
비오틴 10 ㎍
니코틴산아미드 1.7 ㎎
엽산 50 ㎍
판토텐산 칼슘 0.5 ㎎
황산제1철 1.75 ㎎
산화아연 0.82 ㎎
탄산마그네슘 25.3 ㎎
제1인산칼륨 15 ㎎
제2인산칼슘 55 ㎎
구연산칼륨 90 ㎎
탄산칼슘 100 ㎎
염화마그네슘 24.8 ㎎
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
<제제예 6> 건강 음료의 제조
우묵사스레피 추출물 1000 ㎎
구연산 1000 ㎎
올리고당 100 g
매실농축액 2 g
타우린 1 g
정제수를 가하여 전체 900 ㎖
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1 시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용하였다. 상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요 계층, 수요 국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

Claims (8)

  1. 우묵사스레피 추출물을 유효성분으로 포함하는 불안증 예방 및 치료용 약학 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 우묵사스레피 추출물은 전체 약학 조성물에 대하여 0.02 내지 80 중량%로 포함되는 것인 불안증 예방 및 치료용 약학 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 약학 조성물은 담체, 부형제, 희석제, 붕해제, 감미제, 피복제, 팽창제, 활택제, 향미제, 항산화제, 완충액, 정균제, 분산제, 계면 활성제, 결합제 및 윤활제로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 첨가제를 추가로 포함하는 것인 불안증 예방 및 치료용 약학조성물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 약학 조성물의 제형은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 시럽, 에어로졸, 피복정, 환제, 겔, 즙, 유제, 좌제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 동결건조제제, 점적제 또는 액제로 이루어진 군에서 선택되는 것인 불안증 예방 및 치료용 약학조성물.
  5. 우묵사스레피 추출물을 유효성분으로 포함하는 불안증 예방용 식품 조성물.
  6. 제5항에 있어서,
    상기 우묵사스레피 추출물은 전체 식품 조성물에 대하여 0.02 내지 80 중량%로 포함되는 것인 불안증 예방용 식품 조성물.
  7. 제5항에 있어서,
    상기 식품 조성물은 유기산, 인산염, 항산화제, 유당 카제인, 천연 탄수화물, 향미제, 영양제, 비타민, 광물, 풍미제, 착색제, 중진제, 펙트산, 펙트산염, 알긴산, 알긴산염, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산화제, 탈크, 비오틴, 엽산, 천연 과일주스, 과육으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 첨가제를 추가로 포함하는 불안증 예방용 식품조성물.
  8. 제5항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 식품 조성물은 분말, 과립, 정제, 캡슐, 환제, 액제 또는 음료 형태인 불안증 예방용 식품조성물.
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