KR20190110390A

KR20190110390A - 건조 상추，복령 및 로즈마리의 혼합 추출물을 포함하는 숙면 유도 조성물 및 이의 제조방법

Info

Publication number: KR20190110390A
Application number: KR1020180032302A
Authority: KR
Inventors: 손호용; 조병태; 박종이
Original assignee: 재단법인 경북바이오산업연구원; (주)마이팜농업회사법인; 안동대학교 산학협력단
Priority date: 2018-03-20
Filing date: 2018-03-20
Publication date: 2019-09-30
Also published as: KR102109980B1

Abstract

본 발명은 건조된 상추(Lactica sativa L.), 복령(Poria cocos) 및 로즈마리(Rosemarinus officinalis)의 혼합 추출물을 포함하는 숙면 유도(sound sleep) 조성물 및 이의 제조 방법에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는, 상추 지상부의 건조 분말, 소나무에 기생하는 외생균체인 복령 및 로즈마리 잎 분말의 혼합물을 열수로 추출하여 숙면 유도 효과가 우수하면서도 관능성이 우수한 숙면 유도 조성물 및 이의 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명의 숙면 유도 조성물은 우수한 숙면 유도 효과는 물론, 관능성, 혈액순환 개선활성, 항산화 활성이 우수하여, 수면장애의 개선효과가 탁월하며, 동시에, 인간 적혈구에 대한 용혈 활성을 전혀 나타내지 않고, 열 안정성이 우수하여 숙면 유도용 약학 조성물과 건강 기능 식품으로 사용할 수 있을 것으로 기대되며, 상기 조성물은 추출액, 분말, 환, 정 등의 다양한 형태로 가공되어 상시 복용이 가능한 형태로 조제할 수 있는 뛰어난 효과가 있으므로 제약 산업 및 식품 산업상 매우 유용한 발명인 것이다.

Description

건조 상추，복령 및 로즈마리의 혼합 추출물을 포함하는 숙면 유도 조성물 및 이의 제조방법{COMPOSITIONS FOR SOUND SLEEP COMPRISING THE EXTRACTION OF LETTUCE, TUCKAHOE AND ROSEMARY AND ITS MANUFACTURING METHODS}

본 발명은 건조된 상추(Lactica sativa L.), 복령(Poria cocos) 및 로즈마리(Rosemarinus officinalis)의 혼합 추출물을 포함하는 숙면 유도(sound sleep) 조성물 및 이의 제조 방법에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는, 상추 지상부의 건조 분말, 소나무에 기생하는 외생균체인 복령 및 로즈마리 잎 분말의 혼합물을 열수로 추출하여 숙면 유도 효과가 우수하면서도 관능성이 우수한 숙면 유도 조성물 및 이의 제조 방법에 관한 것이다.

수면은 피로가 누적된 뇌의 활동을 주기적으로 회복하는 생리적인 의식상실 상태를 의미하며, 포유동물에 있어서 수면은 심신피로 회복, 일상의 정보처리, 기억 및 인지 기능 강화의 중요한 생존 필수 행위이다. 실제 인간은 일생의 1/3의 기간을 수면하는 데 사용하고 있다. 수면은 크게 일반 수면인 오르토 수면(ortho sleep)과 REM 수면으로 알려진 수면으로서 신체는 자고 있으나, 대뇌는 활발하게 활동하는 상태인 파라 수면(para sleep)으로 구분하게 되는데, 특히 파라 수면 시간의 감소는 수면의 질과 관련되어 불안, 불온, 집중곤란, 환각 증세를 나타내게 된다.

수면장애는 수면이 불충분한 경우를 말하며, 스트레스, 긴장, 공포, 불안 등 다양한 요인에 의해 나타나며, 전체 인구의 30~35%에서 일시적 수면장애가 있다고 보고되어 있다(Ohayon 등 2002, J. Sleep Res. 11: 339-346; Kruger 등, 1999. J. Sleep Res. 1: 53-59). 특히, 국내에서도 수면장애를 어려움을 겪는 사람들이 급증하고 있으며, 2017년에는 46만명의 환자가 보고되어 있다(헬스조선, 2017. 12. 27).

수면장애는 수면장애의 양상이나 증상이 나타나는 기간에 따라 다양하게 분류된다. 최근 사회적인 문제가 되고 있는 만성 불면증은 정서장애, 낮의 피로, 집중력 감소 등의 문제 뿐만 아니라, 불면으로 인한 의료비 지출의 상승, 생산성 저하, 결근율 증가, 사고율 증가 등의 부가적인 문제를 야기하게 된다. 이에 대한 수면장애의 치료제로는 벤조디아핀제 계열의 약물, 비벤조디아핀제 계열의 약물 및 항우울제가 사용되고 있으며, 이중에서 비벤조디아핀제 계열로 zolpidem, zaleplon, eszopiclone 등이 가장 많이 이용되고 있다(우남식 외, 2013. Kor. J. Fish Aquat Sci 46: 702-707). 그러나, 기존의 수면 유도체 의약품은 빠른 수면 유도의 장점은 있으나, 다음날에도 노곤하며, 몽롱함을 느끼며, 특히 장기간 사용시에는 내성이 생겨 효과가 없어지며, 부작용이 나타나는 문제점이 알려져 있다. 또한, 과다 사용시 무기력, 혼수상태, 심경근 차단 등의 심각한 문제가 발생할 수 있다. 따라서, 부작용이 없는 천연물 및 약용식물을 이용한 수면유도제 또는 숙면음료 개발이 필요하며, 최근에는 마시면 편안하게 잠들 수 있는 음료, 이른 바 숙면음료가 인기를 끌고 있으며, 캐나다의 "슬로우카우", 유럽의 "굿나이트" 등의 제품이 알려져 있다(한국경제, 2018, 1, 26).

수면장애 개선과 관련된 연구논문으로는 수면장애에 대한 비약물적 중재효과(정복례, 2017, 한국산학기술학회논문지 18: 95-106), 유산균 발효천마의 수면유도 효과(이경호 외, 2013, 생약학회지, 44: 281-285), 라벤더, 캐모마일, 레몬버베나, 타임, 바질의 복합 열수 추출물의 수면장애 개선 효과(정안나, 2016, 한국식품영양과학회지 45: 313-320), 구속 스트레스 및 수면장애를 유도한 흰쥐에서 허브 복합추출물에 의한 개선 효과, 서양 쥐오줌풀(valerian, Valeriana officinalis L.)의 수면장애 개선 효과(이상준 외, 2005, 식품저널 93: 60-63), 천연소재 MS-10의 에스트로겐 수용체 조절을 통한 수면장애 개선 효과(노유헌 외, 2016, 한국식품영양과학회지 45: 903-910), GABA(r-aminobutyric acid)의 항불면 및 수면유도 기능성 식품소재 가능성 검토(김승섭 외, 2010, 한국식품과학회지 42: 142-146), Mono sodium glutatamae 발효로 얻은 GABA 코팅쌀에 의한 수면유도효과(김옥주 외, Appl. Chem. Eng. 24: 605-610), 굴, 다시마 발효분말의 스트레스 완화 및 수면유도 효과(우남식 외, 2013. Kor. J. Fish Aquat Sci 46: 702-707) 및 복신(복령) 에탄올 추출물이 Pentobarbital 유도 수면에 미치는 영향(라삼식, 2013. 원광대학교 박사학위 논문)등이 알려져 있다.

또한, 수면장애 개선과 관련된 특허로는 대한민국 등록특허 제10-0758462호에 양파와 상추 추출물을 이용한 [불면증을 위한 스프레이용 액상 및 그 제조방법], 대한민국 공개특허 제10-2014-0064280호에 상추 추출물 및 상추 분획물을 이용한 [수면유도 조성물의 제조방법] 및 대한민국 공개특허 제10-2009-0045721호에 팔라티노스를 포함하는 [수면장애 개선용 조성물]이 공개되어 있다.

한편, 상추(Lactuca sativa L.)는 쌍떡잎식물 초롱꽃목 국화과의 한해살이풀로, 한국·중국·일본·미국·영국 등 넓은 지역에서 재배되고 있다. 상추의 다른 이름은 와거(식료본초), 와거채(부후비급방), 천금채(청이록), 와순(전남본초), 와채(본초강목), 등채(하북약재), 부루, 상치, 엽채 등으로 부르며, 잎은 주로 식용하며, 잎의 가장자리는 밋밋하거나 주름지고 또는 불규칙한 톱니 모양의 결각이 있고 자루가 없다. 상추는 여러 가지 계통·품종군으로 분화되어 있으며, 결구상추(Lactuca sativa var. capitata), 잎상추(Lactuca sativa var. crispa), 배추상추(Lactuca sativa var. longifolia), 줄기상추(Lactuca sativa var. asparagina)의 4가지 변종으로 나뉜다. 한국에서는 주로 잎상추를 심으나 최근에는 결구상추도 많이 심고 있으며, 국내에서는 경기도와 경상도에서 많이 재배한다.

생식채소인 상추는 주로 샐러드나 쌈이나 겉절이로 주로 이용되며, 비타민(특히, 비타민 A)과 미네랄을 다량 함유하여 영양적으로 우수하며, 상추 줄기에 나는 우유빛 즙액에 함유된 락투세린(lactucerin), 락투신(lactucin) 등의 알카로이드 성분에는 진통 또는 최면 효과가 있으며, 이러한 성분으로 인해 상추를 많이 먹으면 잠이 온다고 알려져 있다. 또한, 예민한 신경을 진정시키는 효과도 있어 오랫동안 상추를 먹으면 두통이나 불면증을 해소하는 데 도움이 된다고 알려져 있다. 또한, 상추는 한방에서 약용으로도 이용되고 있으며, 주요 효능으로는 음종, 하혈 등에 대한 치료효과가 알려져 있으며, quercetin, luteolin 등의 flavonoid와 phytol 등의 diterpene 화합물이 보고된 바 있다(안광희 등, 2002, 식물생명공학회지 29: 63-68).

현재까지 국내 상추에 대한 연구는 상추의 재배 및 신선편이의 품질특성 변화에 대한 연구가 대부분이며(배정미 외, 2016. 한국식품저장유통학회 23: 27-33), 가시상추로부터 항산화 및 항균 활성과 관련된 coumaric acid, caffeic acid 존재가 보고되어 있다(문성일 외, 2009. J. Life Sci. 19: 206-212). 상추의 유용 활성으로는 항산화 활성 및 티로시나제 저해활성(장진희, 순천대학교 석사학위 논문, 2013. 34종 국화과 약용식물의 추출물과 분획물의 라티컬 소거효능 및 티로시나제 저해활성)이 보고되어 있으며, 고지혈증 예방 및 개선효과가 알려져 있다(송시훈, 전북대학교 석사학위 논문, 2014. 상추첨가 고지방 식이가 흰쥐의 혈청지질 성분 변화 및 효소활성에 미치는 영향). 또한, 건조 상추 지상부의 70% 메탄올 추출물은 점박이응애에 대한 살충 효과가 알려져 있으며(이상길 외, 2001. The Korean J. Pesticide Science 5: 18-25), 상추 추출물의 구취 억제효과(서정은, 2005, 부경대학교 석사논문) 및 상추 조직배양으로부터 항암활성을 나타내는 phytol의 생산(안광희 외, 2002, 식물생명공학회지 29: 63-68)도 보고되어 있다.

또한, 상추와 관련된 특허로는, 대한민국 등록특허 제10-0564800호에 혈중 콜레스테롤 흡수를 저해하는 [상추 추출물로부터 분리한 화합물을 함유하는 심혈관계 질환의 예방 및 치료용 조성물], 등록특허 제10-0527877호에는 [피톨을 유효성분으로 함유하는 경련성 질환의 예방 및 치료용 조성물], 등록특허 제10-1574678호에는 [가시상추 추출물을 유효성분으로 함유하는 치주질환 예방 또는 치료용 조성물]이 개시되어 있으며, 대한민국 공개특허 제10-2014-0064280호에 상추 추출물 및 상추 분획물을 이용한 [수면유도 조성물의 제조방법], 제10-2017-0000113호에는 [상추꽃 추출물 또는 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항노화용 조성물]이 공개되어 있다.

그 밖에, 복령과 로즈마리는 우수한 항산화력, 인지기능 개선 및 기분전환 효과가 잘 알려져 있으며, 특히 로즈마리는 특유의 허브향으로 인해 기호도가 높다.

그러나, 상술한 종래 기술에서 나타난 바와 같이, 현재까지 건조 상추와 복령, 로즈마리의 혼합 추출물을 이용한 관능성, 혈액순환 개선 활성, 항산화 활성이 우수하면서 숙면 유도 효과가 우수한 천연물 추출물에 대한 기술은 알려진 바 없다.

KR

10-2014-0064280

A

정안나, 2016, 한국식품영양과학회지 45: 313-320: 라벤더, 캐모마일, 레몬버베나, 타임, 바질의 복합 열수 추출물의 수면장애 개선 효과 라삼식, 2013. 원광대학교 박사학위 논문: 복신 에탄올 추출물이 Pentobarbital 유도 수면에 미치는 영향

본 발명은 상기와 같은 종래 기술의 문제점을 해결하기 위하여 안출된 것으로서, 본 발명에서 해결하고자 하는 과제는 건조 상추(Lactica sativa L.), 복령(Poria cocos), 로즈마리(Rosemarinus officinalis)의 혼합 추출물을 포함하는 숙면 유도 조성물 및 이의 제조 방법을 제공하고자 하는 것이다.

상기와 같은 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 건조 상추(Lactica sativa L.), 복령(Poria cocos) 및 로즈마리(Rosemarinus officinalis)의 혼합 추출물을 포함하는 숙면 유도 조성물을 제공한다.

상기 건조 상추는 60~80℃의 열풍으로 건조되는 것이 바람직하다.

또한, 본 발명은 건조 상추(Lactica sativa L.) 1~2중량%, 복령(Poria cocos) 0.2~0.5중량%, 로즈마리(Rosemarinus officinalis) 0.1~0.3중량% 및 잔여의 물을 혼합하여 가열 추출하는 것을 포함하는 숙면 유도 조성물의 제조 방법을 제공한다.

본 발명의 숙면 유도 조성물은 우수한 숙면 유도 효과는 물론, 관능성, 혈액순환 개선 활성, 항산화 활성이 우수하여, 수면장애의 개선효과가 탁월하며, 동시에, 인간 적혈구에 대한 용혈 활성을 전혀 나타내지 않고, 열 안정성이 우수하여 숙면 유도용 약학 조성물과 건강 기능 식품으로 사용할 수 있을 것으로 기대되며, 상기 조성물은 추출액, 분말, 환, 정 등의 다양한 형태로 가공되어 상시 복용이 가능한 형태로 조제할 수 있는 뛰어난 효과가 있으므로 제약 산업 및 식품 산업상 매우 유용한 발명인 것이다.

도 1은 생 상추와 건조 상추의 30℃ 및 100℃ 물 추출물의 사진도이다. 1: 생 상추 30℃ 추출, 2: 생 상추 100℃ 추출, 3: 건조 상추 30℃ 추출, 4: 건조 상추 100℃ 추출.
도 2는 건조 온도에 따른 건조 상추의 사진도이다(단위: ℃).
도 3은 건조 온도 80℃에서 건조하여 분쇄한 건조 상추 분말의 사진도이다.
도 4는 건조 상추 분말, 복령 분말, 로즈마리 잎 분말을 다양한 조성비로 물과 혼합한 후, 100℃에서 1시간 추출한 후, 여과한 여과액의 사진도이다. 1: 로즈마리 분말 0.5중량%, 2: 건조 상추 분말 1중량%, 3: 건조 상추 분말 1중량%, 로즈마리 분말 0.2중량%, 4: 건조 상추 분말 1중량%, 로즈마리 분말 0.2중량%, 복령 분말 0.5중량%, 5: 건조 상추 분말 1중량%, 로즈마리 분말 0.2중량%, 복령 분말 0.2중량%, 6: 건조 상추 분말 1중량%, 로즈마리 분말 0.5중량%, 복령 분말 0.5중량% 혼합물의 열수 추출물.

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.

본 발명의 발명자들은 천연물 기원의 숙면 유도용 추출물을 개발하기 위하여, 다양한 천연물들을 대상으로 열수 추출물을 조제하고, 상기 추출물을 불면 성인을 대상으로 하여 숙면 유도 효과를 검증하던 중, 건조 상추 추출물이 관능성이 우수하면서도 숙면 유도 효과가 우수하며, 숙면 유도에 도움을 줄 수 있는 혈액순환 개선 활성과 항산화 활성이 생 상추보다 우수함을 확인하였으며, 이에 복령 및 로즈마리 추출물을 추가하는 경우, 더욱 강한 숙면 유도 효과가 나타남을 확인하였다. 따라서, 건조 상추 분말, 복령 분말 및 로즈마리 잎 분말을 다양한 조성으로 혼합 후, 열수 추출물을 조제하여 관능성 및 숙면 유도 효과를 검증한 결과, 건조상추 분말, 복령 분말 및 로즈마리 잎 분말을 각각 1~2중량%, 0.2~0.5중량%, 0.1~0.3중량% 혼합하고, 잔여의 물을 가하여 100℃로 추출하는 경우 그 효과가 가장 우수함을 확인하였다. 본 발명의 조성물은 인간 적혈구에 대해 용혈 활성을 전혀 나타내지 않으면서도, 열 안정성이 우수하여 숙면 유도용 약학 조성물 및 건강 기능 식품으로 활용하고자 하였다.

구체적으로, 본 발명자들은 생 상추와 건조 상추의 추출물을 조제하여 관능성을 평가한 결과, 생 상추 추출물은 특유의 풀냄새로 기호성이 낮으며, 상온 추출물은 비릿한 향이 나타나, 건조 상추를 열수로 추출하는 것이 우수하며, 이때 상추 건조는 60~80℃, 열수 추출은 100℃가 바람직함을 확인하였다. 또한, 건조 상추 추출물은 생 상추 추출물보다 총 폴리페놀 함량이 2.2배 정도 높게 나타났으며, nitrite 소거능 및 환원력이 생 상추 추출물보다 강력한 것으로 나타났을 뿐만 아니라, 강력한 항혈전 활성을 나타내었다. 이러한 증가된 관능성, 항산화 활성 및 혈액순환 개선 활성은 부가적으로 숙면 유도에 기여하리라 판단된다. 건조 상추 분말 추출물은 수면장애 성인에게 수면잠복 단축효과(2명/7명), 수면방해 감소효과(2명/7명), 낮 시간 기능장해 감소효과(3명/7명), 전체적 수면의 질 향상 효과(3명/7명)를 나타내었다. 또한, 건조 상추 분말 추출물의 숙면효과는 복령과 로즈마리 추출물을 추가하는 경우 더욱 강력하였으며, 관능성 증가로 기호도가 높아졌다.

따라서, 본 발명은 건조 상추(Lactica sativa L.), 복령(Poria cocos) 및 로즈마리(Rosemarinus officinalis)의 혼합 추출물을 포함하는 숙면 유도 조성물을 제공한다.

이하에서는, 본 발명의 건조 상추, 복령, 로즈마리의 혼합 추출물의 제조 방법 및 효능 실험 등을 보다 구체적으로 설명한다.

바람직한 구체예로서, 본 발명은 상추 지상부를 60~80℃에서 열풍 건조하는 단계, 건조 상추를 분말화하는 단계; 분말화된 건조 상추 추출물의 성분 및 효능 평가 단계; 건조 상추, 복령, 로즈마리 분말들을 혼합하는 단계; 상기 혼합물을 100℃에서 열수 추출하는 단계; 상기 추출물의 숙면 유도 효과 검증 단계; 상기 추출물의 안정성 조사 단계를 포함한다.

바람직한 구체예로서, 본 발명의 조성물에 포함되는 "건조 상추"는 상추의 지상부를 구입하여 세척한 후, 60~80℃에서 열풍 건조하는 단계, 이를 5~30 메쉬로 분쇄하는 단계에 의해 수득할 수 있다.

본 발명의 조성물에 포함되는 "건조 상추, 복령, 로즈마리의 혼합 추출물"은 상기 건조 상추 분말 1~2중량%, 복령 분말 0.2~0.5중량%, 로즈마리 잎 분말 0.1~0.3중량% 및 잔여의 물을 혼합하고, 80~100℃로 추출하는 단계 및 상기 추출액을 0.06mm 이하의 여과망을 사용하여 여과하는 단계에 의해 수득할 수 있다.

본 발명의 건조 상추, 복령, 로즈마리의 혼합 추출물은 감압건조 및 동결건조, 또는 분무건조 등과 같은 통상적인 분말화 과정을 거쳐 분말로 제조될 수 있다. 상기 추출물은 인간 적혈구 용혈활성을 전혀 나타내지 않는다.

본 발명의 수면 유효 조성물은 스트레스, 긴장, 공포, 불안 등의 요인에 의해 나타나는 수면 장애와 불면증 등과 같은 질환을 예방, 치료 및 개선시키기 위한 숙면 유도용 약학적 조성물과 식품 조성물, 바람직하게는 기능성 식품 조성물의 용도로 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물을 포함하는 약학적 조성물은 각각의 사용 목적에 맞게 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구 제형, 멸균 주사용액의 주사제 등 다양한 형태로 제형화하여 사용할 수 있으며, 경구 투여하거나 정맥 내, 복강 내, 피하, 직장, 국소 투여 등을 포함한 다양한 경로를 통해 투여될 수 있다.

이러한 약학적 조성물에는 추가적으로 담체, 부형제 또는 희석제 등이 더 포함될 수 있으며, 포함될 수 있는 적합한 담체, 부형제 또는 희석제의 예로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리쓰리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 비정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 들 수 있다. 또한, 본 발명의 약학적 조성물은 충전제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제, 방부제 등을 추가로 더 포함할 수도 있다.

바람직한 구체예로서, 경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 상기 약학적 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 혼합하여 제형화한다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 등과 같은 윤활제가 사용될 수도 있다.

바람직한 구체예로서, 경구용 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 예시될 수 있으며, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 액체 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

바람직한 구체예로서, 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액제, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제, 좌제 등을 예시할 수 있다. 비수성용제, 현탁제에는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 포함될 수 있다. 주사제에는 용해제, 등장화제, 현탁화제, 유화제, 안정화제, 방부제 등과 같은 종래의 첨가제가 포함될 수 있다.

본 발명의 유효 성분은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에서, "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

바람직한 구체예로서, 본 발명의 약학적 조성물에서 유효성분의 유효량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로는 체중 ㎏ 당 1 내지 5,000mg, 바람직하게는 100 내지 3,000mg을 매일 또는 격일 투여하거나 1일 1 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 투여 경로, 질병의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 약학적 조성물은 다양한 경로를 통하여 대상에 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관 내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

본 발명에서 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 환자에게 소정의 물질을 제공하는 것을 의미하며, 본 발명의 약학적 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 일반적인 모든 경로를 통하여 경구 또는 비경구 투여될 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 유효성분을 표적 세포로 전달할 수 있는 임의의 장치를 이용해 투여될 수도 있다.

본 발명에서 "대상"은, 특별히 한정되는 것은 아니지만, 예를 들어, 인간, 원숭이, 소, 말, 양, 돼지, 닭, 칠면조, 메추라기, 고양이, 개, 마우스, 쥐, 토끼 또는 기니아 피그를 포함하고, 바람직하게는 포유류, 보다 바람직하게는 인간을 의미한다.

또한, 본 발명의 식품 조성물은 수면 장애와 불면증 개선을 위한 수면 유도에 효과적인 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 발명의 조성물을 포함하는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.

본 발명의 유효성분은 일반적으로 전체 식품 중량의 0.01 내지 15중량%로 가할 수 있으며, 건강음료 조성물은 100ml를 기준으로 0.02 내지 10g, 바람직하게는 0.3 내지 1g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 것 외에 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제, 예컨대, 천연 탄수화물 및 다양한 향미제 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.

상기 천연 탄수화물의 예로는 포도당, 과당 등의 단당류, 말토오스, 수크로오스 등의 이당류 및 덱스트린, 시클로덱스트린 등의 다당류와 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등의 당알코올이 있다.

상기 향미제로는 타우마틴, 레바우디오시드 A 또는 글리시르히진과 같은 스테비아 등의 천연 향미제 및 사카린, 아스파르탐 등의 합성 향미제를 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 건강 기능 식품 100ml당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g을 사용한다. 상기 외에 본 발명의 건강 기능 식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물, 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 식품 조성물은 천연 과일 주스 및 과일 주스 음료 및 야채 음료 등의 제조를 위한 과육을 함유할 수도 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 본 발명의 유효성분 100중량부 당 0.01 내지 약 20중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하에서는 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다. 하기 실시예는 본 발명의 바람직한 일 구체예일 뿐이며, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예의 범위로 한정되는 것은 아니다.

[실시예]

실시예 1: 생 상추 및 건조 상추 추출물 제조

2017년 국내에서 재배된 상추(수분함량 92.0±0.7%)를 구입하여, 흐르는 물에 수세하여 이물질을 제거한 후, 생 상추 30g에 상온수(30℃)를 300ml를 가하여 4시간 추출하였다. 열수 추출의 경우, 생 상추 30g에 열수(100℃) 300ml를 가하여 1시간 추출하였다. 한편, 건조 상추는 생 생추를 80℃에서 건조 한 후, 이를 분쇄하여 분말화하였으며, 분말 3g에 상온수(30℃) 300ml, 분말 3g에 열수(100℃) 300ml를 가하여 상기와 동일하게 추출하였다. 각각의 추출물의 pH, brix 및 색차 분석 결과는 표 1에 나타내었다. 이때, 색차 분석은 Hunter Color Difference meter(Super color SP-80 Colormeter, Tokyo Denshoku Co., Japan)를 이용하여 측정하였으며, 명도(백색 100 ~ 0 검정색), 적색도(적색 100 ~ -80 녹색), 황색도(황색 70 ~ -80 검정색)를 측정하였다. 이때, 표준백판의 색도는 L 값이 92.44, a 값이 -0.06, b 값이 1.35로 기준을 정하였으며, 시료당 3회 측정하여 평균값을 구하여 나타내었고 색차(△E)는 다음의 식을 이용하여 계산하였다.

표 1에 나타낸 바와 같이, 생 상추의 실온 추출물, 열수 추출물 및 건조 상추의 열수 추출물은 pH 5.6을 나타내었으나, 건조 상추의 실온 추출물은 pH 5.4를 나타내었다. 반면, 건조 상추 추출물은 0.6 brix를 나타내어 생 상추보다 높은 값을 나타내었다. 색 분석 결과, 건조 상추의 실온 추출을 제외하고는 모두 유사한 색차를 나타내었다(도 1).

실시예 2: 생 상추 및 건조 상추 추출물의 관능성 평가

실시예 1에서 제조된 추출물을 대상으로 전문가 관능성을 맛, 향 및 전체적 선호도로 구분하여 7점 척도법으로 평가하였다. 그 결과, 생 상추 추출물은 풀냄새가 나면서 기호도가 낮았으며, 건조 상추 추출물의 경우 실온 추출물이 열수 추출물보다 낮은 관능성을 나타내었다. 그 결과, 맛, 향 및 전체적 선호도 모두에서 건조 상추 분말의 열수 추출물이 가장 우수한 관능성을 나타냄을 확인하였다(표 2).

실시예 3: 건조 상추 추출물 제조를 위한 최적 건조 온도 평가

생 상추의 낮은 저장성 및 추출물의 풋내 등 낮은 관능성의 문제를 해결하기 위하여, 건조 상추 분말을 조제하였으며, 40~120℃의 다양한 온도에서 건조한 후, 100℃에서 열수 추출하여 추출물의 추출수율, 관능성 및 이화학적 특성을 평가하여 최적 건조 조건을 결정하였다.

표 3에 나타낸 바와 같이, 건조 온도가 40℃에서 60℃로 증가함에 따라, 건조물의 추출효율은 6.2%에서 9.85%로 증가되었으며, 이후 온도가 증가되면서 오히려 건조물의 추출효율이 감소하였으며, 120℃에서 건조한 경우, 6.9%로 감소하였다. 이러한 결과는 상추 분말 제조에 있어서 건조 온도가 매우 중요함을 의미하며, 60℃ 건조가 수율 측면에서 가장 우수함을 알 수 있었다. 이는 고온 건조시, 상추의 휘발성 성분, 이열성 물질의 분해 등으로 추출 수율이 감소한 것으로 판단되며, 40℃ 보다 60℃ 건조에서는 상추의 구조적 변화, 효소 활성의 증대 및 화학적 변화가 나타나, 건조물의 추출 효율이 증가된 것으로 판단된다.

다양한 온도에서 건조시킨 상추 추출물의 관능성을 평가한 결과, 40~60℃ 건조보다 80~100℃ 건조가 높은 관능성을 나타내었으며, 120℃ 건조시에는 탄 냄새가 포함되었다. 한편, 다양한 온도에서 건조시킨 상추 지상부는 건조 온도가 증가할수록, 명도와 적색도는 감소하고 황색도는 증가하였으며, 최종 색차는 건조 온도가 증가할수록 감소하는 것으로 나타났다. 실제 다양한 온도에서 건조한 상추의 사진도는 도 2에 나타내었으며, 80℃에서 건조시킨 상추의 분말도는 도 3에 나타내었다.

이상의 저장성, 관능성, 추출 수율, 색차. 에너지 경제성 등을 고려할 때, 상추분말 제조시에는 60~80℃ 열풍 건조가 효율적이며, 80℃ 열풍 건조가 가장 적합함을 확인하였다.

실시예 4: 건조 상추 분말의 유용 성분 및 효능 평가

상기 실시예 3의 80℃ 열풍 건조 상추를 대량 조제하고, 이의 에탄올 추출물을 조제하여 이들의 유용 성분 및 효능을 평가하였다. 대조군으로 생 상추 에탄올 추출물을 조제하여 건조 상추 추출물과 비교하였다. 구체적으로는, 상추 시료에 대해 10배의 에탄올을 가하고, 상온에서 2회 반복 추출한 후 추출액을 모아 필터링한 후, 감압 농축하여 분말로 제조하여 에탄올 추출물을 제조하였으며, 상기 상추 추출물들의 성분 분석으로 총 폴리페놀, 총 플라보노이드, 총 당 및 환원당 함량을 측정하였다. 총 폴리페놀 함량은 추출 검액 400μl에 50μl의 Folin-ciocalteau, 100μl의 Na₂CO₃ 포화용액을 넣고 실온에서 1시간 방치한 후 725nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준시약으로는 tannic acid를 사용하였다. 총 플라보노이드 함량은 각각의 시료를 18시간 메탄올 교반 추출하고, 여과한 추출 검액 400μl에 90% diethylene glycol 4ml를 첨가하고 다시 1 N NaOH 40μl를 넣고 37℃에서 1시간 반응 후 420nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준시약으로는 rutin을 사용하였다. 환원당은 DNS법으로, 총 당은 phenol-sulfuric acid법을 이용하여 정량하였다.

표 4에 나타낸 바와 같이, 생 상추의 추출효율은 3.53%, 건조상추 분말의 추출효율은 18.6%로 나타났으며, 건조 상추 추출물은 생 상추에 비해 총 폴리페놀 함량과 총 당 함량이 각각 2.2배, 1.3배 증가한 반면, 총 플라보노이드 및 환원당 함량은 각각 0.68배, 0.57배 감소하였다. 이러한 결과는 고온 열풍 건조 중에 상추의 이화학적 변화 및 성분의 변화가 나타남을 의미하고 있다.

증가된 총 폴리페놀 함량으로 인한 다양한 유용 생리 활성의 증가가 예상되며, 유용 생리 활성 중 숙면에 도움을 줄 수 있을 것으로 예상되는 항산화 활성과 혈행 개선 효과의 지표로서 항혈전 활성을 평가하였다. 먼저, 항산화 활성은 DPPH(1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl) 음이온 라디칼 소거능, ABTS[2,2-azobis (3-ethylbenzo thiazoline-6-sulfonate)] 양이온 라디칼 소거능, nitrite 소거능 및 환원력을 측정하여 평가하였다. DPPH 소거능의 경우, 다양한 농도로 희석한 시료 20μl에, 99.5% 에탄올에 용해시킨 2x10^-4M DPPH 용액 380μl를 넣고 혼합하여 37℃에서 30분 동안 반응시킨 후, 516nm에서 microplate reader(Asys Hitech, Expert96, Asys Co., Austria)를 사용하여 흡광도를 측정하였다. DPPH radical 소거능은 시료첨가구와 비첨가구의 백분율로 표시하였다. ABTS 소거능의 경우, 7mM ABTS(Sigma Co., USA) 5ml와 140mM potassium persulfate 88ml를 섞은 후 상온에서 16시간 빛을 차단하여 ABTS 양이온을 형성시켰으며, 이후 이 용액을 414nm에서 흡광도 값이 1.5가 되도록 에탄올로 희석하였다. 조제된 희석용액 190ml와 다양한 농도로 조제된 시료 10ml를 혼합한 후 상온에서 6분간 반응시킨 후 734nm에서 흡광도를 측정하고, 다음의 식에 의해 ABTS radical 소거능을 계산하였다.

ABTS radical 소거능 (%) = [(C-S)/C] x 100,

C: 용매 대조구 DMSO 첨가시의 흡광도,

S: 시료 첨가시의 흡광도.

한편, nitrite 소거능 측정의 경우, 아질산염 용액(1mM)에 시료용액을 가하고, 여기에 0.1N HCl을 가해 pH 1.2로 조정한 후, 37℃에서 1시간 반응시킨 후 Griess reagent(Sigma Co., USA)를 가하고 혼합하였다. 이후, 15분간 실온에서 방치 후 520nm에서 흡광도를 측정하여 잔존 nitrite 양을 측정하였다. nitrite 소거능(%)는 다음의 식에 의해 계산하였다.

NSA (%) = [1-(A-C)/B] x100,

A: 1mM nitrite 용액에 시료를 첨가하여 1시간 반응시킨 후의 흡광도,

B: 1mM nitrite 용액의 흡광도,

C: 상추 추출물 시료의 흡광도.

상기의 항산화 실험에서 대조구로는 vitamin C(Sigma Co., USA)를 사용하였으며, 용매 대조구로는 DMSO를 사용하였다. 각각의 활성 평가는 각각 3회 반복한 실험의 평균과 편차로 표시하였다. 또한, 환원력 평가의 경우, Oyaizu 등의 방법을 변형(안선미 등, 2011. J. Life Sci. 21: 576-583)하여 측정하였다. 에탄올에 용해한 시료 2.5ml에 0.2M sodium phosphate buffer(pH 6.6) 2.5ml와 10% potassium ferricyanide 2.5ml를 첨가하고, 50℃에서 20분간 반응시킨 후, 10% trichloroacetic acid 2.5ml를 첨가하여 반응을 종료하고, 4,000rpm에서 10분간 원심분리하여 상등액을 회수하였다. 회수한 상등액은 증류수로 2배 희석한 후, 신선하게 조제된 0.1% ferric chloride 용액과 5:1(v/v) 비율로 혼합하고 700nm에서 흡광도를 측정하여 평가하였다.

그 결과, 표 5에 나타낸 바와 같이, 건조 상추는 DPPH 음이온 소거능은 유의적으로 감소하였으나, ABTS 양이온 소거능은 유사하였으며, nitrite 소거능 및 환원력은 유의적으로 증가하였다.

한편, 건조 상추 추출물을 대상으로 항혈전 활성을 평가한 결과는 표 6에 나타내었다. 혈액 순환 개선 활성은 건강 유지는 물론 숙면에서 매우 중요한 인자로 알려져 있다(강지윤, 2005, 조선대학교 석사논문; 이향숙 2005, 건국대학교 석사논문; 대한민국 공개특허 20-1995-0008167호). 이때 상추 추출물들의 혈액 응고 저해활성 평가방법은 기존에 보고된 방법에 준해 평가하였으며(Sohn et al., 2004. Kor. J. Pharmacogn 35. 52-61; Kwon et al., 2004. J. Life Science, 14. 509-513; 류 등 2010. J. Life Science, 20. 922-928), 트롬빈 타임, 프로트롬빈 타임과 에이피티 타임을 측정하였다. 혈장은 시판 control plasma(MD Pacific Technology Co., Ltd, Huayuan Industrial Area, China)를 사용하였으며 트롬빈 타임, 프로트롬빈 타임과 에이피티 타임 측정법은 다음과 같은 과정으로 수행되었다.

트롬빈 타임(Thrombin Time)

37℃에서 0.5U 트롬빈(Sigma Co., USA) 50μl와 20 mM CaCl₂ 50μl, 다양한 농도의 시료 추출액 10μl를 Amelung coagulometer KC-1A(Japan)의 튜브에 혼합하여 2분간 반응시킨 후, 혈장 100μl를 첨가한 후 혈장이 응고될 때까지의 시간을 측정하였다. 대조로는 아스피린(Sigma Co., USA)을 사용하였으며, 용매 대조구로는 시료 대신 DMSO를 사용하였다. DMSO의 경우 32.1초의 응고시간을 나타내었다. 트롬빈 저해 효과는 3회 이상 반복한 실험의 평균치로 나타내었으며, 트롬빈 저해활성은 시료 첨가시의 응고시간을 용매 대조구의 응고시간으로 나눈 값으로 나타내었다.

프로트롬빈 타임( prothrombin time)

표준혈장(MD Pacific Co., China) 70μl와 다양한 농도의 시료액 10μl를 Amelung coagulometer KC-1A(Japan)의 튜브에 첨가하여 37℃에서 3분간 가온 후, 130μl의 PT reagent를 첨가하고 혈장이 응고될 때까지의 시간을 3회 반복한 실험의 평균치로 나타내었다. 대조로는 아스피린(Sigma Co., USA)을 사용하였으며, 용매 대조구로는 시료 대신 DMSO를 사용하였다. DMSO의 경우 18.1초의 응고시간을 나타내었다. 프로트롬빈 저해활성은 시료 첨가시의 응고시간을 용매 대조구의 응고시간으로 나눈 값으로 나타내었다.

aPTT (activated Partial Thromboplastin Time)

혈장 100μl와 다양한 농도의 시료 추출액 10μl를 Amelung coagulometer KC-1A(Japan)의 튜브에 첨가하여 37℃에서 3분간 가온한 후, 50μl의 aPTT reagent(Sigma, ALEXIN^TM)를 첨가하고 다시 37℃에서 3분간 배양하였다. 이후, 50μl CaCl₂(35mM)을 첨가한 후 혈장이 응고될 때까지의 시간을 측정하였다. 용매 대조구로는 시료 대신 DMSO를 사용하였으며, 이 경우 55.1초의 응고시간을 나타내었다. aPTT의 결과는 3회 반복한 실험의 평균치로 나타내었으며, 혈액응고인자 저해활성은 시료 첨가시의 aPTT 시간을 용매 대조구의 aPTT 시간으로 나눈 값으로 나타내었다.

그 결과 표 6에 나타낸 바와 같이, 임상에서 항혈전제로 사용되는 아스피린은 우수한 항혈전 활성을 나타내었다. 건조 상추 추출물은 5mg/ml 농도에서도 우수한 항혈전 활성을 나타내었으며, 특히 6mg/ml 및 7mg/ml에서는 내인성 혈전 생성과 관련된 에이피티 타임을 무첨가구에 비해 15배 이상 연장시켜 혈전 생성을 억제하고 혈액순환 개선에 효율적임을 확인하였다. 따라서, 건조 상추 추출물은 증가된 총 폴리페놀 함량, 항산화, 항혈전 활성으로 숙면 유지에 도움이 될 것으로 판단되었다.

실시예 5: 건조 상추 분말 추출물의 숙면 효과 검증

상기 실시예 3의 80℃ 열풍 건조 상추를 대량 조제한 후 분쇄한 상추 분말 100g에 10L의 정제수를 가하고, 이를 100℃에서 1시간 추출 후 추출액을 여과하여, 방냉 후 80ml 파우치를 제조하였다. 대조구로는 0.01% 구연산과 0.5% 설탕을 포함하는 파우치(80ml)를 동일하게 제조하였다. 또한, 기존 수면 개선 효과가 알려진 복령과 심신 안정 효과가 알려진 로즈마리 분말의 추출물을 상기 건조 상추 추출물과 동일하게 각각 제조하여 제공하였다. 제조된 파우치는 수면 장애가 있는 7명에 대해 1일 1포씩 오후 7시에 음용하도록 하여 숙면 효과 및 수면 유도 효과를 검증하였다. 파우치 포장은 동일 포장을 사용하여 평가자가 내용물을 알 수 없게 하였으며, 숙면 효과에 대한 문답은 각각의 파우치 음료을 음용한 그 다음날 오후 3시에 실시하였다. 그 결과는 표 7에 나타내었다.

그 결과, 표 7에 나타낸 바와 같이, 대조구에서 쉽게 잠든 경우는 없었으며, 중간에 잠을 깬 경우는 71%, 그 다음날 낮 시간 노곤하고 피로한 경우는 100%, 수면의 질이 향상된 경우는 나타나지 않았다. 그러나, 상추 추출물(1중량%)을 음용한 경우, 쉽게 잠든 경우가 28%로 증가되었으며, 중간에 잠을 깬 경우는 43%로 감소하였고, 그 다음날 낮 시간 노곤하고 피로한 경우는 57%로 감소하였다. 따라서, 수면 장애가 있는 7명 중 43%에서 수면의 질이 향상되었다고 응답하였다. 또한, 복령 추출물(1중량%)을 음용시에는 쉽게 잠든 경우가 14%로 증가된 반면, 중간에 잠을 깬 경우는 71%로 대조구와 동일하였다. 그러나, 그 다음날 낮 시간 노곤하고 피로한 경우는 57%로 감소하였으며, 수면장애가 있는 7명 중 14%에서 수면의 질이 향상되었다고 응답하였다. 또한, 로즈마리 추출물(1중량%)을 음용시에는 쉽게 잠든 경우는 대조구에 비해 증가되지 않았으며, 중간에 잠을 깬 경우는 57%, 그 다음날 낮 시간 노곤하고 피로한 경우는 85%로 미미하게 감소하였으며, 수면 장애가 있는 7명 중 14%에서 수면의 질이 향상되었다고 응답하였다. 따라서, 건조 상추 추출물이 기존 알려진 복령 및 로즈마리 추출물보다 숙면 유도 효과가 우수하다고 판단되었다.

실시예 6: 최종 숙면음료 레시피 결정 및 효능 평가

실시예 5에서 수면 개선 효과가 확인된 건조 상추 분말, 복령 분말, 로즈마리 잎 분말을 다양한 비율로 혼합하여, 관능성의 증대 및 숙면 효과의 증대를 검토하였으며, 최종적으로 건조 상추 분말 1중량%, 복령 분말 0.2중량%, 로즈마리 잎 분말 0.2중량% 및 잔여의 물을 포함하는 혼합 추출물을 선정하였다(도 4의 5번 시료). 상기 조성의 추출물은 pH 5.2, brix 0.5, 명도 14.62, 적색도 0.32, 황색도 0.61을 나타내었으며, 맛과 향이 우수하여 가장 선호도가 높았다(표 8).

이후, 상기 조성의 추출물의 숙면 효과를 검토하였으며, 그 결과는 표 9에 나타내었다.

상기 표 9와 같이, 본 발명의 건조 상추 분말(1중량%), 복령 분말(0.2중량%), 로즈마리 잎 분말(0.2중량%)의 혼합물을 열수 추출하여 조제한 숙면 음료의 수면 개선 효과를 평가한 결과, 쉽게 잠든 경우는 대조구의 0%에 비해 57%가 쉽게 잠들었으며, 중간에 잠을 깬 경우는 대조구의 71%에 비해 57%로 감소하였으며, 그 다음날 낮 시간 노곤하고 피로한 경우 역시 대조구의 100%에서 57%로 감소하였다. 따라서, 수면 장애가 있는 7명 중 57%에서 수면의 질이 향상되었다고 응답하였다.

실시예 7: 추출물 및 농축액의 인간 적혈구 용혈 활성

상기 실시예 6에서 제조된 건조 상추, 복령, 로즈마리의 혼합 추출물의 안전성을 평가하였다. 상추, 복령, 로즈마리는 이미 식품 원료로 등록되어 안전성이 확보된 식용 식물이므로, 별도의 독성은 나타나지 않으리라 판단되었으며, 조성물의 급성 독성 가능성을 평가하기 위해 인간 적혈구 용혈 활성을 평가하였다. 이때, 용혈 활성은 기존의 보고(손호용, 2014년 ㆍKorean J. Microbiol. Biotechnol. 42: 285-292)에 준해 평가하였으며, 간단하게는 PBS로 3회 수세한 인간 적혈구 100μl를 96-well microplate에 가하고 다양한 농도의 시료용액 100μl를 가한 다음 37℃에서 30분간 반응시켰으며, 이후, 반응액을 10분간 원심분리(1,500rpm)하여 상등액 100μl를 새로운 microtiter plate로 옮긴 후 용혈에 따른 헤모글로빈 유출 정도를 414nm에서 측정하였다. 시료의 용매 대조구로는 DMSO(2%)를 사용하였으며, 적혈구 용혈을 위한 실험 대조구로는 Triton X-100(1mg/ml)를 사용하였다. 용혈 활성은 다음의 수식을 이용하여 계산하였다.

그 결과, 표 10에 나타낸 바와 같이, 대조구로 사용된 DMSO와 물은 용혈 활성이 없었으며, triton X-100은 1mg/ml 농도에서 적혈구를 100% 용혈시킴을 확인하였다. 본 발명의 조성물은 추출 원액 및 10배 농축액에서도 전혀 적혈구 용혈현상이 나타나지 않아 급성독성 및 적혈구 용혈 활성은 없음을 확인하였다.

Claims

건조 상추(Lactica sativa L.), 복령(Poria cocos) 및 로즈마리(Rosemarinus officinalis)의 혼합 추출물을 포함하는 숙면 유도 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 건조 상추는 60~80℃의 열풍으로 건조되는 것을 특징으로 하는 숙면 유도 조성물.
건조 상추(Lactica sativa L.) 1~2중량%, 복령(Poria cocos) 0.2~0.5중량%, 로즈마리(Rosemarinus officinalis) 0.1~0.3중량% 및 잔여의 물을 혼합하여 가열 추출하는 것을 포함하는 숙면 유도 조성물의 제조 방법.
제 3항에 있어서, 상기 건조 상추는 60~80℃의 열풍으로 건조되는 것을 특징으로 하는 숙면 유도 조성물의 제조 방법.