KR101359838B1

KR101359838B1 - 페메트렉세드 이산의 결정형 및 이의 제조 방법

Info

Publication number: KR101359838B1
Application number: KR1020117002035A
Authority: KR
Inventors: 조나단 부솔리; 니콜라 듈게로프; 라크츠 실라 네메슨; 모란 퍼케스; 알레싼드로 폰티롤리; 마르코 빌라; 주디쓰 아론힘
Original assignee: 시코르, 인크.
Priority date: 2006-08-14
Filing date: 2007-08-14
Publication date: 2014-02-07
Also published as: EP1945645A1; KR20080050594A; US20110196155A1; EP2270012A1; US20080045711A1; US8088919B2; JP2008543974A; EP2305681A1; TW200831103A; ES2354843T3; KR101045616B1; TWI377063B; WO2008021405A1; ATE490257T1; EP1945645B1; US9156841B2; EP2311838A1; KR20110028520A; DE602007010894D1; EP2270013A1

Abstract

N-[4-[2-(2-아미노-4,7-디히드로-4-옥소-1H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-일)에틸]벤조일]-L-글루탐산, 페메트렉세드 이산의 결정형 및 이의 제조 방법이 제공된다.

Description

페메트렉세드 이산의 결정형 및 이의 제조 방법{CRYSTALLINE FORMS OF PEMETREXED DIACID AND PROCESSES FOR THE PREPARATION THEREOF}

관련 출원에 대한 상호 참조

본 출원은 2006년 8월 14일 출원된 미국 특허 가출원 제60/837,303호; 2006년 11월 21일 출원된 동 제60/860,557호; 2006년 8월 15일 출원된 동 제60/837,637호; 2006년 11월 21일 출원된 동 제60/860,554호; 2007년 1월 11일 출원된 동 제60/880,178호; 2007년 7월 3일 출원된 동 제60/958,213호; 2006년 8월 22일 출원된 동 제60/839,551호; 2006년 9월 14일 출원된 동 제60/845,031호; 2007년 2월 6일 출원된 동 제60/899,928호; 2007년 6월 20일 출원된 동 제60/936,553호; 2007년 7월 5일 출원된 동 제60/958,413호; 2006년 9월 25일 출원된 동 제60/847,291호; 2006년 10월 30일 출원된 동 제60/855,139호; 2007년 1월 11일 출원된 동 제60/880,179호; 및 2007년 7월 2일 출원된 동 제60/958,326호(이들은 본 명세서에서 참고로 인용함)의 우선권 주장을 청구한다.

발명의 분야

본 발명은 N-[4-[2-(2-아미노-4,7-디히드로-4-옥소-1H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-일)에틸]벤조일]-L-글루탐산, 페메트렉세드 이산의 결정형 및 이의 제조 방법을 포함한다.

항엽산 활성을 갖는 것으로 공지된 화합물은 암 치료를 위한 화학 요법제로서 잘 인식되어 있다. 특히, 엽산 패밀리 내 화합물은 탈수 엽산 환원 효소(dehydrofolate reductase), 엽산 폴리글루타메이트 합성 효소, 글리신아미드 리보뉴클레오타이드 포르밀 전이 효소 및 티미딜레이트 합성 효소와 같은 효소를 억제하면서 효소 수준에서 다양한 활성을 갖는다.

유럽 특허 공개 제0434426호("EP '426")는 4-히드록시피롤로[2,3-d]피리미딘-L-글루탐산 유도체의 부류를 개시하며, 이 화합물이 항엽산 활성 및 항종양 효과를 갖는다고 기재한다. EP '426, p.2, ll. 33-56 참조. 이들 중에 이나트륨 페메트렉세드의 수화물 결정형이 있다.

페메트렉세드 이나트륨 염 칠수화물은 엘리 릴리 앤드 컴퍼니가 정맥 투여용 무균 동결 건조 분말로서 ALIMTA®라는 상표명으로 시판 중이다. 엽산 패밀리의 이 멤버는 악성의 가슴 중피종의 치료 및 비소세포(non small cell) 폐암의 2차 치료에 대해 승인받았다. 문헌[Physicians' Desk Reference, 60th ed., pp. 1722-1728(2006)] 참조.

국제 PCT 공개 WO 01/14379는 결정질 이나트륨 페메트렉세드 수화물을 개시한다.

상업적인 동결 건조 페메트렉세드 이나트륨 또는 제제화된 동결 건조 페메트렉세드 이나트륨의 제조가 미국 특허 제7,138,521호에 개시되어 있다. 이 페메트렉세드 이나트륨은 2.5 내지 3.5의 pH에서 비누화되어 하기 화학식 II의 N-[4-[2(2-아미노-4,7-디히드로-4-옥소-1H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-일)에틸]벤조일]-L-글루탐산("페메트렉세드 이산")을 제공하는 N-[4-[2-(2-아미노-4,7-디히드로-4-옥소-3H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-일)에틸]벤조일]L-글루탐산 디에틸에스테르 p-톨루엔설폰산 염으로부터 제조한다:

화학식 II

페메트렉세드 이산을 습윤 케이크로서 단리한 후 7 내지 9의 pH에서 2 내지 3 당량의 수산화나트륨과 배합한다. 그 다음 생성된 페메트렉세드 이나트륨 칠수화물을 아세톤을 사용하는 침전화에 의해 반응 혼합물로부터 단리한다. 그 다음 단리된 페메트렉세드 이나트륨 칠수화물을 약학적 조성물의 제조에 사용한다.

페메트렉세드 이산 및 이의 제조가 미국 특허 제5,344,932호에 처음으로 개시된 것으로 생각된다.

pH가 2.5 내지 3.5인 에탄올과 물의 혼합물로부터 N-[4-[2-(2-아미노-4,7-디히드로-4-옥소-3H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-일)에틸]벤조일]-L-글루탐산을 형성 및 단리하는 것이 미국 특허 제7,138,521호에 개시되어 있다. 유사한 단리가 문헌[C.J. Barnett, et al., "A Practical Synthesis of Multitargeted Antifolate LY231514," Organic Process Research & Development, 3(3): 184-188(1999)]에 개시되어 있다.

pH가 5인 수용액으로부터 N-[4-[2-(2-아미노-4,7-디히드로-4-옥소-3H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-일)에틸]벤조일]-L-글루탐산을 형성 및 단리하는 것이 미국 특허 제5,416,211호에 개시되어 있다.

수산화나트륨을 첨가하고 pH를 2.8 내지 3.1로 조정함으로써 상당하는 디알킬 에스테르 화합물의 p-톨루엔설폰산염의 수용액으로부터 페메트렉세드 이산을 형성 및 단리하는 것이 미국 특허 제6,262,262호에 개시되어 있다.

상이한 결정형(다형체)의 생성은 몇몇 분자 및 분자 착체의 특성이다. 단일 분자는 융점, X선 회절 패턴, 자외선 흡수 지문 및 NMR 스펙트럼과 같은 독특한 물리적 특성을 갖는 다양한 고체를 생성시킬 수 있다. 다형체의 물리적 특성의 차이는 부피가 큰 고체에서 인접한 분자(착체)의 분자간 상호 작용 및 배향으로 인해 생긴다.

따라서, 다형체는 동일한 분자식을 공유하는 상이한 고체이지만, 다형체 패밀리 내 다른 형태와 비교하여 상이한 이점 및/또는 불리한 물리적 특성을 갖는다. 약학적 다형체의 가장 중요한 물리적 특성 중 하나가 약물의 생체 이용율에 영향을 미칠 수 있는 수용액에서의 용해도이다.

이러한 실질적인 물리적 특성은 X선 분광법에 의해 명백하게 확인할 수 있는 물질의 특정 다형체 형태를 정의하는 단위 세포 내 분자의 배좌 및 배향에 의해 영향을 받는다. 다형체 형태는 무정질 물질 또는 다른 다형체 형태와는 상이한 열 거동을 일으킬 수 있다. 열 거동은 모세관 융점, 열 무게 분석(TGA) 및 차 주사 열량 측정(DSC)과 같은 기술에 의해 실험실에서 측정할 수 있으며, 일부 다형체 형태를 다른 다형체 형태로부터 구별하는 데에 이용할 수 있다. 특정 다형체 형태는 또한 고상 ¹³C NMR 분광법 및 자외선 분광법에 의해 검출 가능한 독특한 분광 특성을 일으킬 수 있다.

유동성 및 용해도와 같은 개선된 특성을 갖는 페메트렉세드 이산의 결정형을 제조하여 페메트렉세드 이산의 새로운 결정질 다형체 형태를 발견하면, 활성 약학 성분(API)인 페메트렉세드 이나트륨의 합성 기능을 개선시킬 새로운 기회가 제공된다. 따라서, 페메트렉세드 이산의 다형체 형태에 대한 수요가 당업계가 존재한다.

발명의 개요

일구체예에서, 본 발명은 약 10.0, 10.3, 22.0 및 25.7 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절("PXRD") 패턴, 및 도 1에 도시된 바와 같은 PXRD 패턴으로 구성된 군에서 선택되는 데이터를 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산을 포함한다.

다른 구체예에서, 본 발명은 약 5.7, 12.2, 17.2 및 18.4 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 PXRD 패턴; 및 도 2에 도시된 바와 같은 PXRD 패턴으로 구성된 군에서 선택되는 데이터를 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산을 포함한다.

다른 구체예에서, 본 발명은 상기 결정질 페메트렉세드 이산의 제조 방법을 포함한다. 상기 방법은 pH가 약 3인 수성 용매에 페메트렉세드 이산의 현탁액을 제공하는 단계, 및 현탁액의 pH를 약 4.5로 조정하는 단계를 포함한다.

또 다른 구체예에서, 본 발명은 약 5.8, 12.4, 18.6 및 24.6 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 PXRD 패턴; 및 도 3에 도시된 바와 같은 PXRD 패턴으로 구성된 군에서 선택되는 데이터를 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산을 포함한다.

다른 구체예에서, 본 발명은 약 6.2, 10.7, 12.0 및 18.9 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 PXRD 패턴; 및 도 4에 도시된 바와 같은 PXRD 패턴으로 구성된 군에서 선택되는 데이터를 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산을 포함한다.

또 다른 구체예에서, 본 발명은 상기 결정질 페메트렉세드 이산의 제조 방법을 포함한다. 상기 방법은 용매로서 DMF 및 반용매로서 물과 메탄올의 혼합물을 포함하는 혼합물로부터 페메트렉세드 이산을 결정화하는 단계를 포함한다.

일구체예에서, 본 발명은 약 9.0, 16.2, 18.1 및 26.9 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 PXRD 패턴; 및 도 5에 도시된 바와 같은 PXRD 패턴으로 구성된 군에서 선택되는 데이터를 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산을 포함한다.

또 다른 구체예에서, 본 발명은 약 7.7, 9.2, 16.7 및 27.4 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 PXRD 패턴; 및 도 6에 도시된 바와 같은 PXRD 패턴으로 구성된 군에서 선택되는 데이터를 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산을 포함한다.

일구체예에서, 본 발명은 상기 결정질 페메트렉세드 이산의 제조 방법을 포함한다. 상기 방법은 화학식

의 N-(4-[2-(2-아미노-4,7-디히드로-4-옥소-1H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-일)에틸]벤조일)-L-글루탐산 디에틸 에스테르 p-톨루엔설폰산 염과 1 이상의 염기를 혼합하여 용액을 얻는 단계, 및 산에 용액을 첨가하여 상기 결정질 페메트렉세드 이산을 포함하는 현탁액을 얻는 단계를 포함한다.

다른 구체예에서, 본 발명은 약 6.8, 11.9, 15.5 및 17.9 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 PXRD 패턴; 및 도 7에 도시된 바와 같은 PXRD 패턴으로 구성된 군에서 선택되는 데이터를 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산을 포함한다.

또 다른 구체예에서, 본 발명은 본 발명의 방법에 의해 상기 결정질 페메트렉세드 이산 중 임의의 것을 제조하는 단계, 및 이를 페메트렉세드 이산의 약학적 허용염으로 전환시키는 단계를 포함하는, 페메트렉세드 이산의 약학적 허용염의 제조 방법을 포함한다.

일구체예에서, 본 발명은 본 발명의 방법에 의해 상기 결정질 페메트렉세드 이산 중 임의의 것을 제조하는 단계, 및 이를 페메트렉세드의 동결 건조된 약학적 허용염으로 변형시키는 단계를 포함하는, 페메트렉세드의 약학적 허용염의 동결 건조된 형태의 제조 방법을 포함한다. 바람직하게는, 약학적 허용염은 페메트렉세드 이나트륨이다.

발명의 상세한 설명

본 발명은 페메트렉세드 이산의 결정형 뿐 아니라 이의 제조 방법을 제공함으로써 당업계의 수요를 해결한다.

본 명세서에 기재된 시간은 실험실 규모의 제조에 적절한 시간이다. 당업자는 존재하는 시약의 양에 따라 적절한 시간이 달라질 수 있으며, 이에 따라 시간을 조정할 수 있음을 이해한다.

본 발명은 약 10.0, 10.3, 22.0 및 25.7 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절("PXRD") 패턴; 및 도 1에 도시된 바와 같은 PXRD 패턴으로 구성된 군에서 선택되는 데이터를 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산을 포함한다. 이 결정질 페메트렉세드 이산을 A형으로 지칭할 수 있다.

당업자는 분말 X선 회절("PXRD") 기술에 고유한 소정량의 실험 에러가 존재함을 알고 있다. 예컨대 본 명세서에서 참고로 인용하는 문헌[U.S. PHARMACOPEIA, 387-89(30th ed. 2007)] 참조. 각각의 피크에 대해서는, 이 실험 에러를 고려하여 ± 0.2° 2θ 범위에 걸쳐 피크 위치를 보고하였다. PXRD 패턴 전체에 대하여 특정 도면에 "도시된 바와 같은"이라는 용어는 이 실험 에러 뿐 아니라, 예컨대 샘플 제조, 기구 및 기구의 조작 기술의 변경과 같은 요인으로 인한 피크 위치 및 세기의 변경을 고려하였음을 의미한다. 특정 도면에 "도시된 바와 같은" PXRD 패턴은, 분말 X선 회절 기술에 수반되는 실험 에러를 이해하고 있는 당업자가 PXRD 패턴이 도면에 도시된 PXRD 패턴과 동일한 결정 구조에 해당하는 것으로 결정할 수 있음을 의미한다.

결정질 페메트렉세드 이산 A형은 열 무게 분석("TGA")에 의해 측정시 160℃ 이하의 온도에서 약 7.8 내지 약 8.8%의 중량 손실, 및 약 5.6, 13.4, 16.8 및 25.1 ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴으로 구성된 군에서 선택되는 데이터를 추가의 특징으로 할 수 있다.

결정질 페메트렉세드 이산 A형은 수화된 형태, 바람직하게는 이수화된 형태이다. 결정질 페메트렉세드 이산의 함수량은 칼 피셔 기법("KF")에 의해 측정시 약 7.7 중량%이다.

또한, 결정질 페메트렉세드 이산 A형은 약 5.7, 12.2, 17.2 및 18.4 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는, 약 10 중량% 미만, 더욱 바람직하게는 약 5 중량% 미만, 가장 바람직하게는 약 1 중량% 미만의 결정질 페메트렉세드 이산을 함유한다. 통상적으로, 약 5.7, 12.2, 17.2 및 18.4 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산의 함량은 PXRD에 의해 측정한다. PXRD에 의한 측정은 12.2 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서의 피크를 이용하여 수행한다.

본 발명은 또한 결정질 페메트렉세드 이산 A형의 제조 방법을 제공한다. 상기 방법은 약 4.5의 pH에서 수성 용매로부터 페메트렉세드 이산을 결정화하는 단계를 포함한다.

바람직하게는, 결정화는 수성 용매에 페메트렉세드 이나트륨을 용해시켜 용액을 얻는 단계, 및 용액의 pH를 약 4.5로 조정하여 결정질 페메트렉세드 이산 A형의 침전을 포함하는 현탁액을 얻는 단계를 포함한다.

통상적으로, 수성 용매는 물 또는 물과 수혼화성 유기 용매의 혼합물이다. 적절한 수혼화성 유기 용매는 에탄올, 메탄올 및 아세토니트릴을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 바람직하게는, 수성 용매는 물이다.

통상적으로, 용액의 pH는 산을 첨가하여 조정한다. 바람직하게는, 산은 희석된 수용액의 형태로 제공한다. 바람직하게는, 산은 HCl, HBr, H₂SO₄, 트리플루오로아세트산, 아세트산 또는 p-톨루엔설폰산, 더욱 바람직하게는 HCl이다. 통상적으로, 산의 첨가로 결정질 페메트렉세드 이산의 침전화가 유도된다.

결정화는 현탁액을 가열한 후 현탁액을 냉각시키는 단계를 더 포함할 수 있다. 이 추가 공정 단계는 결정 성장을 돕는 것으로 생각된다. 바람직하게는, 현탁액을 약 60 내지 약 70℃, 더욱 바람직하게는 약 65℃의 온도로 가열한다. 바람직하게는, 현탁액을 약 30 내지 약 20℃, 더욱 바람직하게는 약 24℃의 온도로 냉각시킨다. 바람직하게는, 현탁액을 약 3 내지 약 7 시간, 더욱 바람직하게는 약 5 시간 동안 냉각시킨다.

통상적으로, 현탁액을 유지시켜 침전된 결정질 페메트렉세드 이산의 수율을 증가시킨다. 바람직하게는, 현탁액을 약 8 내지 약 16 시간, 더욱 바람직하게는 약 10 시간 동안, 바람직하게는 교반하면서 유지시킨다.

얻어진 결정질 페메트렉세드 이산을 당업자에게 공지된 임의의 방법에 의해 현탁액으로부터 회수할 수 있다. 바람직하게는, 결정질 페메트렉세드 이산은 여과에 의해 현탁액으로부터 회수한다. 회수된 결정질 페메트렉세드 이산을 약 4.4 내지 약 4.6, 더욱 바람직하게는 약 4.5의 pH로 조정된 물로 세정하고 건조시킨다. 바람직하게는, 건조는 진공 하에서, 더욱 바람직하게는 약 18 mbar의 압력에서, 약 35 내지 약 50℃, 더욱 바람직하게는 약 40℃의 온도에서 수행한다. 바람직하게는, 결정질 페메트렉세드 이산을 약 10 내지 약 24 시간, 더욱 바람직하게는 약 17 시간 동안 건조시킨다.

본 발명은 또한 약 5.7, 12.2, 17.2 및 18.4 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 PXRD 패턴; 및 도 2에 도시된 바와 같은 PXRD 패턴으로 구성된 군에서 선택되는 데이터를 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산을 포함한다. 이 결정질 페메트렉세드 이산을 B형으로 지칭할 수 있다.

결정질 페메트렉세드 이산 B형은 약 11.5, 17.8, 22.8 및 26.7 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 PXRD 패턴, 및 TGA에 의해 측정시 약 220℃ 이하의 온도에서 약 2.6 내지 약 3.8%의 중량 손실로 구성된 군에서 선택되는 데이터를 추가의 특징으로 할 수 있다.

결정질 페메트렉세드 이산 B형은 페메트렉세드 이산의 수화된 형태이다. 결정질 페메트렉세드 이산의 함수량은 KF로 측정시 약 2.5 내지 약 3.9 중량%이다.

또한, 결정질 페메트렉세드 이산 B형은 약 10.0, 10.3, 22.0 및 25.7 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는, 약 15 중량% 미만, 바람직하게는 약 10 중량% 미만, 더욱 바람직하게는 약 5 중량% 미만의 결정질 페메트렉세드 이산을 함유한다. 통상적으로, 상기한 형태 중 약 10.0, 10.3, 22.0 및 25.7 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산의 함량은 PXRD에 의해 측정한다. PXRD에 의한 측정은 10.0 및 10.3 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서의 피크 중 임의의 하나를 이용하여 수행할 수 있다.

본 발명은 결정질 페메트렉세드 이산 B형의 제조 방법을 더 포함한다. 상기 방법은 pH 가 약 3인 수성 용매 중 페메트렉세드 이산의 현탁액을 제공하는 단계, 및 현탁액의 pH를 약 4.5로 조정하는 단계를 포함한다.

바람직하게는, 상기 방법은 수성 용매에 페메트렉세드 이나트륨을 용해하여 용액을 형성시키는 단계, 용액의 pH를 약 3으로 조정하여 현탁액을 얻는 단계, 및 현탁액의 pH를 약 4.5로 조정하여 결정질 페메트렉세드 이산 B형의 침전을 얻는 단계를 포함한다.

통상적으로, 용액에 산을 첨가하여 약 3의 pH를 얻는다. 바람직하게는, 산은 희석된 수용액의 형태로 제공한다. 바람직하게는, 산은 HCl, HBr, H₂SO₄, 트리플루오로아세트산, 아세트산 또는 p-톨루엔설폰산, 더욱 바람직하게는 HCl이다. 통상적으로, 산의 첨가로 결정질 페메트렉세드 이산의 침전화가 유도된다.

상기 방법은 pH를 약 4.5로 조정하기 전에, 현탁액을 가열한 후 현탁액을 냉각시키는 단계를 더 포함할 수 있다. 이 추가 공정 단계는 결정 성장을 돕는 것으로 생각된다. 바람직하게는, 현탁액을 약 60 내지 약 70℃, 더욱 바람직하게는 약 65℃의 온도로 가열한다. 바람직하게는, 현탁액을 약 30 내지 약 20℃, 더욱 바람직하게는 약 24℃의 온도로 냉각시킨다. 바람직하게는, 현탁액을 약 3 내지 약 8 시간, 더욱 바람직하게는 약 5 시간 동안 냉각시킨다.

통상적으로, 현탁액을 유지시켜 침전화된 결정질 페메트렉세드 이산의 수율을 증가시킨다. 바람직하게는, 현탁액을 약 8 내지 약 16 시간, 더욱 바람직하게는 약 11.5 시간 동안, 바람직하게는 교반하면서 유지시킨다.

현탁액에 염기를 첨가하여 pH를 통상적으로 약 4.5로 조정한다. 바람직하게는, 염기는 수산화나트륨, 수산화리튬 또는 수산화칼륨, 더욱 바람직하게는 수산화나트륨과 같은 알칼리 금속 수산화물이다. 바람직하게는, 수산화나트륨은 수용액의 형태로 제공한다. 바람직하게는, 수용액은 희석된 수용액이다.

당업자에게 공지된 임의의 방법에 의해 상기 결정질 페메트렉세드 이산을 현탁액으로부터 회수할 수 있다. 바람직하게는, 결정질 페메트렉세드 이산은 여과에 의해 현탁액으로부터 회수한다. 회수된 결정질 페메트렉세드 이산은 약 4.4 내지 약 4.6, 더욱 바람직하게는 4.5의 pH로 조정된 물로 세정하고 건조시킬 수 있다. 바람직하게는, 건조는 진공 하에서, 더욱 바람직하게는 약 18 mbar의 압력에서, 약 30 내지 약 80℃, 더욱 바람직하게는 약 40℃의 온도에서 수행한다. 바람직하게는, 결정질 페메트렉세드 이산은 약 10 내지 약 25 시간, 더욱 바람직하게는 약 17 시간 동안 건조시킨다.

본 발명은 또한 결정질 페메트렉세드 이산 B형의 다른 제조 방법을 포함한다. 상기 방법은 약 6.2, 10.7, 12.0 및 18.9 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 PXRD 패턴, 및 도 4에 도시된 바와 같은 PXRD 패턴으로 구성된 군에서 선택되는 데이터를 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산을 물에 슬러리화하는 단계를 포함한다.

바람직하게는, 출발 결정질 페메트렉세드 이산을 약 6 내지 9 부피의 물, 즉 결정질 페메트렉세드 이산 1 g당 6 내지 9 ㎖의 물에 슬러리화한다. 더욱 바람직하게는, 출발 결정질 페메트렉세드 이산을 약 7 내지 8 부피의 물에 슬러리화한다. 바람직하게는, 출발 결정질 페메트렉세드 이산을 약 50℃의 온도에서 슬러리화한다. 바람직하게는, 슬러리화는 약 1 내지 약 3 시간 동안 수행한다.

통상적으로, 그 다음 가열된 슬러리를 냉각시킨다. 바람직하게는, 가열된 슬러리를 약 0 내지 약 24℃의 온도로 냉각시킨다. 바람직하게는, 약 1 내지 2 시간의 기간에 걸쳐 냉각을 수행한다. 냉각 후, 슬러리는 약 1 내지 약 3 시간 동안 추가로 유지시킬 수 있다.

얻어진 결정질 페메트렉세드 이산을 그 다음 당업자에게 공지된 임의의 방법에 의해 슬러리로부터 회수할 수 있다. 이러한 방법은 슬러리로부터 결정질 페메트렉세드 이산을 여과한 후 건조하는 것을 포함한다. 바람직하게는, 건조는 가열하면서 진공 하에서 수행한다. 바람직하게는, 건조는 약 18 시간 동안 약 18 mbar의 압력에서 약 70℃의 온도에서 수행한다. 이에 따라 제조된 결정질 페메트렉세드 이산 B형은 도 8에 도시된 PXRD 패턴으로 도시된다. 도 8의 PXRD 패턴은 상기 설명한 바의 페메트렉세드 이산 B형의 특징적인 피크 뿐 아니라, 6.0 및 12.6 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서의 추가 피크를 포함한다.

본 발명은 또한 약 5.8, 12.4, 18.6 및 24.6 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 PXRD 패턴; 및 도 3에 도시된 바와 같은 PXRD 패턴으로 구성된 군에서 선택되는 데이터를 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산을 포함한다. 이 결정질 페메트렉세드 이산을 C형으로 지칭할 수 있다.

결정질 페메트렉세드 이산 C형은 약 9.2, 11.7, 12.8 및 19.6 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 PXRD 패턴; 및 TGA에 의해 측정시, 물의 손실로 인한 약 140℃ 이하의 온도에서의 약 2.3%의 제1 중량 손실, 및 디메틸설폭시드("DMSO")의 손실로 인한 200℃ 이하의 온도에서의 약 2.9%의 제2 중량 손실의 2 단계 중량 손실로 구성된 군에서 선택되는 데이터를 추가의 특징으로 할 수 있다.

결정질 페메트렉세드 이산 C형은 페메트렉세드 이산의 용매화된 형태, 바람직하게는 DMSO 용매화물이다.

또한, 결정질 페메트렉세드 이산 C형은 약 5.7, 12.2, 17.2 및 18.4 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는, 15 중량% 미만, 더욱 바람직하게는 10 중량% 미만, 가장 바람직하게는 5 중량% 미만의 결정질 페메트렉세드 이산을 함유한다. 통상적으로, 상기 형태 중 약 5.7, 12.2, 17.2 및 18.4 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산의 함량은 PXRD에 의해 측정한다. PXRD에 의한 측정은 17.2 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서의 피크를 이용하여 수행한다.

본 발명은 또한 결정질 페메트렉세드 이산 C형의 제조 방법을 포함한다. 상기 방법은 용매로서 DMSO 및 반용매로서 물과 1 이상의 C₁ _-4 알콜의 혼합물을 포함하는 혼합물로부터 페메트렉세드 이산을 결정화하는 단계를 포함한다.

통상적으로, 페메트렉세드 이산과 DMSO를 배합하여 용액을 얻고, 반용매와 혼합하여 결정질 페메트렉세드 이산 C형을 침전화시킴으로써 결정화를 수행한다.

출발 페메트렉세드 이산은 당업자에게 공지된 임의의 방법에 따라 제조할 수 있다. 예컨대, 페메트렉세드 이산은 본 명세서에서 참고로 인용하는 문헌(Org . Proc. Res . Dev. 2005, pp. 738-742)에 개시된 방법에 의해 제조할 수 있다.

통상적으로, DMSO 중 페메트렉세드 이산의 용액은 페메트렉세드 이산과 DMSO의 배합물을 가열하여 제공한다. 바람직하게는, 배합물을 약 25 내지 약 75℃, 더욱 바람직하게는 약 65℃로 가열한다.

바람직하게는, 페메트렉세드 이산을 각각 약 1:1 내지 약 1:3 g/㎖의 비로 DMSO와 배합한다.

통상적으로, 반용매를 용액과 혼합한다. 바람직하게는, 반용매 및 용액은 약 30 내지 약 65℃, 더욱 바람직하게는 약 40 내지 약 50℃의 온도에서 혼합한다. 바람직하게는, 반용매를 용액에 첨가한다. 바람직하게는, 반용매를 용액에 적가한다. 바람직하게는, 반용매를 약 1 내지 약 5 시간, 더욱 바람직하게는 약 1 내지 약 2.5 시간에 걸쳐 용액에 적가한다.

적절한 C₁ _-4 알콜은 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, 프로판올, 이소부탄올 및 부탄올을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 바람직하게는, 물과 C₁ _-4 알콜의 혼합물은 메탄올과 물의 혼합물이다. 바람직하게는, 반용매 혼합물 중 C₁ _-4 알콜과 물의 비는 각각 약 1:3 내지 약 3:1 부피/부피이다. 통상적으로, 반용매와 용액의 혼합으로 상기 결정질 페메트렉세드 이산의 침전을 포함하는 현탁액이 형성된다.

일반적으로, 현탁액을 유지시켜 침전된 결정질 페메트렉세드 이산의 수율을 증가시킨다. 바람직하게는, 현탁액을 약 30 내지 약 65℃의 온도에서 유지시킨다. 바람직하게는, 현탁액을 약 20 분 내지 약 3 시간, 더욱 바람직하게는 약 30 분 내지 약 1.5 시간 동안 유지시킨다. 바람직하게는, 현탁액을 교반하면서 유지시킨다.

결정질 페메트렉세드 이산의 추가의 침전을 유도하기 위해 현탁액을 냉각시킴으로써 결정질 페메트렉세드 이산 C형의 수율을 또한 증가시킬 수 있다. 바람직하게는, 현탁액을 약 30 내지 약 0℃, 더욱 바람직하게는 약 25 내지 약 10℃의 온도로 냉각시킨다. 바람직하게는, 냉각은 약 1 내지 약 6 시간, 더욱 바람직하게는 약 2 내지 약 4 시간에 걸쳐 수행한다. 바람직하게는, 결정질 페메트렉세드 이산을 회수하기 전에, 냉각된 현탁액을 약 0.5 내지 약 6 시간, 더욱 바람직하게는 약 2 내지 약 4 시간 동안 유지시킨다.

얻어진 결정질 페메트렉세드 이산을 당업자에게 공지된 방법에 의해 회수할 수 있다. 바람직하게는, 결정질 페메트렉세드 이산은 여과에 의해 현탁액으로부터 회수한다. 회수된 결정질 페메트렉세드 이산은 세정 및 건조시킬 수 있다. 회수된 페메트렉세드 이산은 물 또는 물과 메탄올의 혼합물로 세정할 수 있다. 회수된 페메트렉세드 이산은 가열하면서 진공 하에서 건조시킬 수 있다. 바람직하게는, 회수된 페메트렉세드 이산은 약 24 내지 약 72 시간 동안 약 18 mbar의 압력에서 약 35 내지 약 50℃의 온도에서 건조시킨다.

회수된 결정질 페메트렉세드 이산은 임의로 반용매에 슬러리화하여 추가로 정제할 수 있다. 바람직하게는, 회수된 결정질 페메트렉세드 이산을 슬러리화 전에 반용매로 세정한다. 세정에 바람직한 반용매는 물 또는 물과 메탄올의 혼합물이다. 임의로, 세정된 결정질 페메트렉세드 이산을 슬러리화 전에 건조시킬 수 있다. 건조는 진공 하에서, 바람직하게는 약 18 mbar의 압력에서 약 35 내지 약 45℃, 더욱 바람직하게는 약 40℃의 온도에서 수행할 수 있다.

바람직하게는, 슬러리화는 약 5 내지 약 65℃, 더욱 바람직하게는 약 35 내지 약 50℃의 온도에서 수행한다. 바람직하게는, 슬러리화는 약 0.5 내지 약 4 시간, 더욱 바람직하게는 약 1 내지 약 2 시간 동안 수행한다. 바람직하게는, 슬러리화에 사용되는 반용매는 물, 에탄올, 메탄올 및 이의 혼합물로 구성된 군에서 선택한다.

통상적으로, 정제된 결정질 페메트렉세드 이산 C형을 회수하기 전에 슬러리를 냉각시킨다. 바람직하게는, 슬러리를 약 30 내지 약 5℃, 더욱 바람직하게는 약 25 내지 약 10℃의 온도로 냉각시킨다.

정제된 결정질 페메트렉세드 이산을 당업자에게 공지된 임의의 방법에 의해 회수할 수 있다. 바람직하게는, 정제된 결정질 페메트렉세드 이산은 여과에 의해 슬러리로부터 회수한다. 그 다음 회수된 결정질 페메트렉세드 이산을 건조시킨다.

본 발명은 또한 약 6.2, 10.7, 12.0 및 18.9 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 PXRD 패턴; 및 도 4에 도시된 바와 같은 PXRD 패턴으로 구성된 군에서 선택되는 데이터를 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산을 포함한다. 이 결정질 페메트렉세드 이산을 D형으로 지칭할 수 있다.

결정질 페메트렉세드 이산 D형은 약 13.9 및 17.4 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 PXRD 패턴; 및 TGA에 의해 측정시, 물의 손실로 인한 약 140℃ 이하의 온도에서의 약 1.5 내지 약 3.6%의 제1 중량 손실, 및 디메틸포름아미드("DMF")의 손실로 인한 190℃ 이하의 온도에서의 약 8.6 내지 약 12.3%의 제2 중량 손실의 2 단계 중량 손실로 구성된 군에서 선택되는 데이터를 추가의 특징으로 할 수 있다.

결정질 페메트렉세드 이산 D형은 페메트렉세드 이산의 용매화된 형태, 바람직하게는 DMF 용매화물일 수 있다.

결정질 페메트렉세드 이산 D형은 약 5.7, 12.2, 17.2 및 18.4 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는, 약 10 중량% 미만, 더욱 바람직하게는 약 5 중량% 미만, 가장 바람직하게는 약 1 중량% 미만의 결정질 페메트렉세드 이산을 함유한다. 통상적으로, 상기 형태 중 약 5.7, 12.2, 17.2 및 18.4 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산의 함량은 PXRD에 의해 측정한다. PXRD에 의한 측정은 5.7, 17.2 및 18.4 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서의 피크 중 임의의 하나를 이용하여 수행할 수 있다.

본 발명은 또한 상기 결정질 페메트렉세드 이산의 제조 방법을 포함한다. 상기 방법은 용매로서 DMF 및 반용매로서 물과 메탄올의 혼합물을 포함하는 혼합물로부터 페메트렉세드 이산을 결정화하는 단계를 포함한다.

통상적으로, 페메트렉세드 이산과 DMF를 배합하여 용액을 얻고 반용매와 혼합하여 결정질 페메트렉세드 이산 D형을 침전화시킴으로써 결정화를 수행한다.

통상적으로, DMF 중 페메트렉세드 이산의 용액은 페메트렉세드 이산과 DMF의 배합물을 가열함으로써 제공한다. 바람직하게는, 배합물을 약 30 내지 약 65℃, 더욱 바람직하게는 약 50℃로 가열한다.

통상적으로, 반용매를 약 30 내지 약 65℃, 더욱 바람직하게는 약 50℃의 온도에서 용액과 혼합한다. 바람직하게는, 반용매를 용액에 첨가한다. 바람직하게는, 반용매를 용액에 적가한다. 바람직하게는, 반용매를 약 80 분에 걸쳐 용액에 적가한다.

바람직하게는, 반용매 혼합물 중 메탄올 및 물의 비는 각각 약 1:3 내지 약 3:1 부피/부피이다. 통상적으로, 반용매를 용액과 혼합하면 상기 결정질 페메트렉세드 이산의 침전을 포함하는 현탁액이 형성된다.

일반적으로, 현탁액을 유지시켜 침전된 결정질 페메트렉세드 이산의 수율을 증가시킨다. 바람직하게는, 현탁액을 약 30 내지 약 55℃의 온도에서 유지시킨다. 바람직하게는, 현탁액을 약 2 내지 약 6 시간, 더욱 바람직하게는 약 3 시간 동안 유지시킨다. 바람직하게는, 현탁액을 교반하면서 유지시킨다.

결정질 페메트렉세드 이산의 추가의 침전을 유도하기 위해 현탁액을 냉각시킴으로써 결정질 페메트렉세드 이산의 수율을 또한 증가시킬 수 있다. 바람직하게는, 현탁액을 약 20 내지 약 30℃, 더욱 바람직하게는 약 28℃의 온도로 냉각시킨다. 바람직하게는, 냉각은 약 1 내지 약 3 시간, 더욱 바람직하게는 약 2 시간에 걸쳐 수행한다. 바람직하게는, 결정질 페메트렉세드 이산을 회수하기 전에, 냉각된 현탁액을 약 0.5 내지 약 6 시간, 더욱 바람직하게는 약 2 내지 약 4 시간 동안 유지시킨다.

얻어진 결정질 페메트렉세드 이산을 당업자에게 공지된 임의의 방법에 의해 회수할 수 있다. 바람직하게는, 결정질 페메트렉세드 이산은 여과에 의해 현탁액으로부터 회수한다. 회수된 결정질 페메트렉세드 이산은 세정 및 건조시킬 수 있다. 회수된 결정질 페메트렉세드 이산은 물 또는 물과 메탄올의 혼합물로 세정할 수 있다. 회수된 결정질 페메트렉세드 이산은 가열하면서 진공 하에서 건조시킬 수 있다. 바람직하게는, 회수된 페메트렉세드 이산은 진공 하에서, 바람직하게는 약 18 mbar의 압력에서 약 30 내지 약 50℃, 바람직하게는 약 40℃의 온도에서 건조시킨다.

본 발명은 또한 약 9.0, 16.2, 18.1 및 26.9 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 PXRD 패턴; 및 도 5에 도시된 바와 같은 PXRD 패턴으로 구성된 군에서 선택되는 데이터를 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산을 포함한다. 이 결정질 페메트렉세드 이산을 E형으로 지칭할 수 있다.

결정질 페메트렉세드 이산 E형은 약 5.8, 6.9, 12.0, 18.8 및 19.6 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 PXRD 패턴; 및 TGA에 의해 측정시, 물의 손실로 인한 약 100℃ 이하의 온도에서의 약 2.5%의 제1 중량 손실, 및 DMF의 손실로 인한 200℃ 이하의 온도에서의 약 11.7%의 제2 중량 손실의 2 단계 중량 손실로 구성된 군에서 선택되는 데이터를 추가의 특징으로 할 수 있다.

결정질 페메트렉세드 이산 E형은 페메트렉세드 이산의 용매화된 형태, 바람직하게는 DMF 용매화물일 수 있다.

또한, 결정질 페메트렉세드 이산 E형은 약 5.7, 12.2, 17.2 및 18.4 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는, 약 15 중량% 미만, 더욱 바람직하게는 약 10 중량% 미만, 가장 바람직하게는 약 5 중량% 미만의 결정질 페메트렉세드 이산을 함유한다. 통상적으로, 상기 형태 중 약 5.7, 12.2, 17.2 및 18.4 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산의 함량은 PXRD에 의해 측정한다. PXRD의 측정은 17.2 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서의 피크를 이용하여 수행할 수 있다.

본 발명은 결정질 페메트렉세드 이산 E형의 제조 방법을 추가로 포함한다. 상기 방법은 용매로서 DMF 및 반용매로서 에탄올을 포함하는 혼합물로부터 페메트렉세드 이산을 결정화하는 단계를 포함한다.

통상적으로, 페메트렉세드 이산과 DMF를 배합하여 용액을 얻고, 에탄올과 혼합하여 결정질 페메트렉세드 이산 E형을 침전화시킴으로써 결정화를 수행한다.

통상적으로, DMF 중 페메트렉세드 이산의 용액은 페메트렉세드 이산과 DMF의 배합물을 가열하여 제공한다. 바람직하게는, 배합물을 약 40 내지 약 60℃, 더욱 바람직하게는 약 50℃로 가열한다.

통상적으로, 약 40 내지 약 60℃, 더욱 바람직하게는 약 50℃의 온도에서 반용매를 용액과 혼합한다. 바람직하게는, 반용매를 용액에 첨가한다. 바람직하게는, 반용매를 용액에 적가한다. 바람직하게는, 반용매를 약 0.5 내지 1.5 시간, 더욱 바람직하게는 약 45 분에 걸쳐 용액에 적가한다.

바람직하게는, 에탄올은 무수 에탄올이다. 통상적으로, 반용매를 용액과 혼합하면 결정질 페메트렉세드 이산 E형을 포함하는 현탁액이 형성된다.

결정질 페메트렉세드 이산의 침전화를 추가로 유도하기 위해 현탁액을 냉각시킴으로써 결정질 페메트렉세드 이산 E형의 수율을 증가시킬 수 있다. 바람직하게는, 현탁액을 약 30 내지 약 0℃의 온도, 더욱 바람직하게는 실온으로 냉각시킨다.

결정질 페메트렉세드 이산의 추가의 침전화를 유도하기 위해 냉각된 현탁액을 추가량의 에탄올과 배합함으로써 결정질 페메트렉세드 이산의 수율을 또한 증가시킬 수 있다. 에탄올의 총량은 임의로 일부분으로 첨가할 수 있다. 제2 양의 에탄올을 첨가한 후, DMF 용매와 에탄올의 비는 각각 바람직하게는 약 1:1 내지 약 1:10 부피/부피, 더욱 바람직하게는 각각 약 1:5.5 부피/부피이다. 그 다음 제2 양의 에탄올의 첨가 후 얻어진 새로운 현탁액을 생성물의 회수 전에 바람직하게는 재차 유지시킨다. 바람직하게는, 새로운 현탁액을 약 2 내지 약 24 시간, 더욱 바람직하게는 약 18 시간 동안 유지시킨다.

얻어진 결정질 페메트렉세드 이산을 당업자에게 공지된 임의의 방법에 의해 회수할 수 있다. 바람직하게는, 결정질 페메트렉세드 이산은 여과에 의해 현탁액으로부터 회수한다. 회수된 결정질 페메트렉세드 이산을 세정 및 건조시킬 수 있다. 회수된 페메트렉세드 이산은 에탄올로 세정할 수 있다. 회수된 페메트렉세드 이산은 가열하면서 진공 하에서 건조시킬 수 있다. 바람직하게는, 회수된 페메트렉세드 이산은 약 24 내지 약 72 시간 동안 약 18 mbar의 압력에서 약 35 내지 약 50℃의 온도에서 건조시킨다.

본 발명은 또한 약 7.7, 9.2, 16.7 및 27.4 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 PXRD 패턴; 및 도 6에 도시된 바와 같은 PXRD 패턴으로 구성된 군에서 선택되는 데이터를 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산을 포함한다. 이 결정질 페메트렉세드 이산을 F형으로 지칭할 수 있다.

결정질 페메트렉세드 이산 F형은 약 14.2, 15.4, 18.5 및 20.5 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 PXRD 패턴; 및 TGA에 의해 측정시 190℃ 이하의 온도에서 약 0.2 내지 약 0.3%의 중량 손실로 구성된 군에서 선택되는 데이터를 추가의 특징으로 할 수 있다.

결정질 페메트렉세드 이산 F형은 페메트렉세드 이산의 무수 형태이다. 달리 정의하지 않는 한 본 명세서에서 페메트렉세드 이산을 지칭시 사용되는 바의 용어 "무수"는 TGA에 의한 중량 손실이 1% 이하인 물질을 의미한다.

결정질 페메트렉세드 이산 F형은 약 5.7, 12.2, 17.2 및 18.4 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는, 약 10 중량% 미만, 더욱 바람직하게는 약 5 중량% 미만, 가장 바람직하게는 약 1 중량% 미만의 결정질 페메트렉세드 이산을 함유한다. 통상적으로, 상기한 형태 중 약 5.7, 12.2, 17.2 및 18.4 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산의 함량은 PXRD에 의해 측정한다. PXRD에 의한 측정은 12.2 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서의 피크를 이용하여 수행할 수 있다.

본 발명은 또한 결정질 페메트렉세드 이산 F형의 제조 방법을 포함한다. 상기 방법은 화학식

의 N-(4-[2-(2-아미노-4,7-디히드로-4-옥소-1H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-일)에틸]벤조일)-L-글루탐산 디에틸 에스테르 p-톨루엔설폰산 염과 1 이상의 염기를 혼합하여 용액을 얻는 단계, 및 용액을 산에 첨가하여 상기 결정질 페메트렉세드 이산을 포함하는 현탁액을 얻는 단계를 포함한다.

출발 N-(4-[2-(2-아미노-4,7-디히드로-4-옥소-1H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-일)에틸]벤조일)-L-글루탐산 디에틸 에스테르 p-톨루엔설폰산 염은 예컨대 본 명세서에서 참고로 인용하는 미국 특허 제6,262,262호에 개시된 방법에 따라 얻을 수 있다.

통상적으로, N-(4-[2-(2-아미노-4,7-디히드로-4-옥소-1H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-일)에틸]벤조일)-L-글루탐산 디에틸 에스테르 p-톨루엔설폰산 염을 우선 물과 배합한 후 염기와 배합하여 용액을 얻는다. 염기는 유기 또는 무기 염기일 수 있다. 바람직하게는, 유기 염기는 트리에틸아민 또는 디이소프로필아민이다. 바람직하게는, 무기 염기는 수산화나트륨, 수산화칼륨, 탄산나트륨 또는 수산화리튬, 더욱 바람직하게는 수산화나트륨이다. 무기 염기는 고상 형태로 또는 수용액 형태로 사용할 수 있다.

통상적으로, 염기와 N-(4-[2-(2-아미노-4,7-디히드로-4-옥소-1H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-일)에틸]벤조일)-L-글루탐산 디에틸 에스테르 p-톨루엔설폰산 염을 배합하면 수용성인 페메트렉세드 이산의 염이 제공된다.

상기 염의 용액은 pH가 염기성이며, 바람직하게는 pH가 약 11 내지 약 14이다. 염기와 N-(4-[2-(2-아미노-4,7-디히드로-4-옥소-1H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-일)에틸]벤조일)-L-글루탐산 디에틸 에스테르 p-톨루엔설폰산 염의 배합은 통상적으로 발열성이므로, 냉각시키면서 수행한다. 바람직하게는, 약 20 내지 약 0℃, 더욱 바람직하게는 약 2℃의 온도로 냉각시킨다.

산은 광산 또는 유기 산일 수 있다. 바람직하게는, 광산은 H₂SO₄, HCl 또는 HBr이다. 바람직하게는, 유기 산은 메탄설폰산 또는 톨루엔설폰산이다. 더욱 바람직하게는, 산은 HCl이다. 통상적으로, 산은 수용액의 형태로 제공한다. 수용액은 농축된 산과 물을 배합하여 생성시킬 수 있다.

산의 용액에의 첨가는 통상적으로 발열성이다. 발열을 감소시키기 위해, 용액 및/또는 산을 첨가 중에 냉각시킬 수 있다. 발열을 감소시키기 위해 용액을 또한 산에 적가할 수 있다. 바람직하게는 약 20 내지 약 0℃, 더욱 바람직하게는 약 2℃로 냉각시킨다. 바람직하게는, 적가는 약 15 내지 약 45 분, 더욱 바람직하게는 약 20 분에 걸쳐서 수행한다.

통상적으로, 반응의 발생을 보장하기 위해 용액을 교반하면서 산에 첨가한다. 통상적으로, 산은 염을 중화시켜 유리 페메트렉세드 이산을 포함하는 현탁액을 제공한다.

그 다음 현탁액을 통상적으로 가열한다. 바람직하게는, 현탁액을 약 60 내지 약 80℃, 더욱 바람직하게는 약 70℃의 온도로 가열한다. 바람직하게는, 가열은 약 1 내지 약 4 시간, 더욱 바람직하게는 약 2 시간 동안 수행한다.

통상적으로, 결정질 페메트렉세드 이산 F형을 회수하기 전에 현탁액을 냉각시킨다. 현탁액을 바람직하게는 약 30 내지 약 10℃, 더욱 바람직하게는 약 20℃의 온도로 냉각시킨다. 바람직하게는, 냉각은 약 1.5 내지 약 3 시간, 더욱 바람직하게는 약 2 시간 동안 수행한다. 통상적으로, 냉각된 슬러리는 약 3 내지 약 6 시간, 더욱 바람직하게는 약 4 시간 동안 교반하면서 냉각시킨다.

얻어진 결정질 페메트렉세드 이산을 당업자에게 공지된 임의의 방법에 의해 회수할 수 있다. 바람직하게는, 결정질 페메트렉세드 이산은 여과에 의해 현탁액으로부터 회수한다. 회수된 결정질 페메트렉세드 이산은 세정 및 건조시킬 수 있다. 회수된 페메트렉세드 이산은 물로 세정할 수 있다. 회수된 페메트렉세드 이산은 가열하면서 진공 하에서 건조시킬 수 있다. 바람직하게는, 회수된 페메트렉세드 이산은 약 10 내지 약 15 시간 동안 약 18 mbar의 압력에서 약 70℃의 온도에서 건조시킨다.

본 발명은 또한 약 6.8, 11.9, 15.5 및 17.9 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 PXRD 패턴; 및 도 7에 도시된 바와 같은 PXRD 패턴으로 구성된 군에서 선택되는 데이터를 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산을 포함한다. 이 결정질 페메트렉세드 이산을 G형으로 지칭할 수 있다.

결정질 페메트렉세드 이산 G형은 약 8.9, 20.5 및 24.1 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 PXRD 패턴; 및 TGA에 의해 측정시 120℃ 이하의 온도에서 약 0.6 내지 약 0.9%의 중량 손실로 구성된 군에서 선택되는 데이터를 추가의 특징으로 할 수 있다.

결정질 페메트렉세드 이산 G형은 페메트렉세드 이산의 무수 형태이다.

또한, 결정질 페메트렉세드 이산 G형은 약 5.7, 12.2, 17.2 및 18.4 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는, 약 15 중량% 미만, 더욱 바람직하게는 약 10 중량% 미만, 가장 바람직하게는 약 5 중량% 미만의 결정질 페메트렉세드 이산을 함유한다. 통상적으로, 상기 형태 중 약 5.7, 12.2, 17.2 및 18.4 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산의 함량은 PXRD에 의해 측정한다. PXRD에 의한 측정은 12.2 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서의 피크를 이용하여 수행할 수 있다.

본 발명은 또한 결정질 페메트렉세드 이산 G형의 제조 방법을 포함한다. 상기 방법은 약 5.7, 12.2, 17.2 및 18.4 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산; 약 5.8, 12.4, 18.6 및 24.6 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산; 약 9.0, 16.2, 18.1 및 26.9 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산; 및 이의 혼합물로 구성된 군에서 선택되는 페메트렉세드 이산의 결정형을 가열하는 단계를 포함한다.

통상적으로, 페메트렉세드 이산의 결정형을 약 160 내지 약 200℃, 바람직하게는 약 180 내지 약 200 ℃의 온도로 가열하여 상기 결정질 페메트렉세드 이산의 전환을 실시한다.

페메트렉세드 이산의 결정형은 1 단계로 또는 점진적으로 가열할 수 있다. 점진적인 가열은 바람직하게는 2 단계 가열을 포함한다. 바람직하게는, 약 100 내지 약 160℃의 온도로 1 단계 가열한다. 바람직하게는, 약 30 분 내지 약 1 시간 동안 제1 단계 가열한다. 바람직하게는, 약 180 내지 약 200℃의 온도로 2 단계 가열한다. 바람직하게는, 약 20 내지 약 40 분, 더욱 바람직하게는 약 0.5 시간 동안 2 단계 가열한다.

본 발명은 또한 결정질 페메트렉세드 이산 G형의 추가의 제조 방법을 포함한다. 상기 방법은 약 30 분 동안 약 200℃의 온도에서, 약 10.0, 10.3, 22.0 및 25.7 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산을 건조시키는 단계를 포함한다.

본 발명은 또한 결정질 페메트렉세드 이산 G형의 다른 제조 방법을 포함한다. 상기 방법은 약 30 분 동안 약 200℃의 온도에서, 약 6.2, 10.7, 12.0 및 18.9 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산을 건조시키는 단계를 포함한다.

본 발명은 또한 본 발명의 방법에 의해 상기 결정질 페메트렉세드 이산 중 임의의 것을 제조하는 단계, 및 이를 페메트렉세드 이산의 약학적 허용염으로 전환시키는 단계를 포함하는, 페메트렉세드 이산의 약학적 허용염의 제조 방법을 포함한다. 바람직하게는, 약학적 허용염은 페메트렉세드 이나트륨이다. 전환은 예컨대 본 명세서에서 참고로 인용하는 미국 특허 공개 제2003/0216416호에 개시된 방법에 따라 수행할 수 있다.

본 발명은 또한 본 발명의 방법에 의해 페메트렉세드 이산의 상기 결정형 중 임의의 것을 제조하는 단계, 및 이를 페메트렉세드의 동결 건조된 약학적 허용염으로 전환시키는 단계를 포함하는, 페메트렉세드의 약학적 허용염의 동결 건조된 형태의 제조 방법을 포함한다. 바람직하게는, 약학적 허용염은 페메트렉세드 이나트륨이다. 이 전환은 예컨대 발명의 명칭이 "페메트렉세드 이산의 동결 건조된 약학적 허용염의 제조 방법"인 2007년 8월 14일 출원된 공계류 중인 미국 출원 제11/---,---호(변리사 사건 번호 13150/48305) 뿐 아니라, 2006년 9월 25일 출원된 미국 특허 출원 제60/847,291호; 2006년 10월 30일 출원된 동 제60/855,139호; 2007년 1월 11일 출원된 동 제60/880,179호; 및 2007년 7월 2일 출원된 동 제60/958,326호(이들 모두는 본 명세서에서 참고로 인용함)에 개시된 방법에 따라 수행할 수 있다.

페메트렉세드 이산의 결정형, 페메트렉세드의 약학적 허용염을 형성시킬 수 있는 제제, 및 물 또는 동결 건조에 적절한 용매와 물의 혼합물을 포함하는 용매를 배합하여 페메트렉세드의 약학적 허용염을 포함하는 혼합물을 얻는 단계; 및 동결 건조에 의해 용매를 제거하여 페메트렉세드의 동결 건조된 약학적 허용염을 얻는 단계를 포함하는 방법으로서, 상기 페메트렉세드의 약학적 허용염은 동결 건조 공정 전에 단리하지 않으며, 페메트렉세드의 약학적 허용염은 페메트렉세드의 이염기 부가 염인 방법에 의해, 페메트렉세드 이산의 상기 결정형 중 임의의 것을 페메트렉세드 이산의 동결 건조된 약학적 허용염으로 전환시킬 수 있다.

달리 정의하지 않는 한 본 명세서에서 사용된 바의 용어 "페메트렉세드의 약학적 허용염을 형성할 수 있는 제제"는 페메트렉세드의 염기 부가 염을 형성할 수있는 제제를 지칭한다. 염기 부가염은 나트륨, 칼륨, 리튬 및 칼슘 염과 같은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.

바람직하게는, 페메트렉세드의 약학적 허용염을 형성할 수 있는 제제는 알칼리 금속(바람직하게는 나트륨) 또는 알칼리 토금속 수산화물, 탄산염, 인산염 또는 황산염이다. 더욱 바람직하게는, 페메트렉세드의 약학적 허용염을 형성할 수 있는 제제는 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 수산화물, 가장 바람직하게는 수산화나트륨이다.

바람직한 구체예에서, 우선 페메트렉세드 이산의 결정형을 용매와 배합하여 제1 혼합물을 얻는다. 바람직하게는, 용매는 물이다. 동결 건조에 적절한 용매와 물의 혼합물을 사용하는 경우, 동결 건조에 적절한 용매는 tert-부탄올, 디메틸설폭시드 또는 1,4-디옥산을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 바람직하게는, 동결 건조에 적절한 용매는 tert-부탄올이다.

그 다음 제1 혼합물을 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 수산화물과 혼합하여 페메트렉세드의 약학적 허용염을 포함하는 혼합물을 얻는다.

바람직하게는, 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 수산화물은 NaOH, KOH, LiOH 또는 Ca(OH)₂, 더욱 바람직하게는 NaOH이다.

바람직하게는, 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 수산화물을 제1 혼합물에 첨가한다. 바람직하게는, 혼합물은 용액이다.

통상적으로, 페메트렉세드 이산의 결정형로부터 페메트렉세드의 약학적 허용염을 얻기 위해, 페메트렉세드 이산의 출발 결정형 1 몰 당량당 약 1 몰 당량 이상의 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 수산화물을 사용한다. 바람직하게는, 알칼리 수산화물은 페메트렉세드 이산 또는 이의 염의 출발 결정형 1 몰 당량당 약 1 내지 약 3 몰 당량의 양으로 사용한다.

알칼리 수산화물은 용액 또는 고체 형태일 수 있다. 바람직하게는, 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 수산화물은 수용액의 형태이다. 바람직하게는, 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 수산화물의 수용액은 표준 용액이다. 달리 정의하지 않는 한 본 명세서에서 사용되는 바의 용어 "표준 용액"은 산으로의 적정과 같이 당업자에게 공지된 다양한 방법에 의해 측정되는 공지된 농도를 갖는 용액을 지칭한다. 바람직하게는, 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 수산화물의 표준 용액은 농도가 약 0.5 내지 약 4 M, 더욱 바람직하게는 약 2M이다.

바람직하게는, 제1 혼합물과 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액의 혼합은 약 1 내지 약 100℃, 더욱 바람직하게는 약 10 내지 약 60℃, 가장 바람직하게는 약 15 내지 약 40℃의 온도에서 수행한다.

당업자가 이해하는 바와 같이, 완전한 용해, 또는 약 7.0 내지 7.5 또는 더욱 바람직하게는 7.1 내지 7.2의 안정된 pH 값은 반응이 완료되었다는 시사이다.

페메트렉세드의 동결 건조된 약학적 허용염의 제조 방법은 페메트렉세드의 약학적 허용염을 포함하는 용액을 동결 건조시키기 전에, pH를 조정하여 약 7.0 내지 약 10.0, 바람직하게는 약 7.0 내지 약 9.0, 더욱 바람직하게는 약 7.0 내지 약 8.0, 가장 바람직하게는 약 7.0 내지 약 7.5의 pH를 얻는 공정을 추가로 포함할 수 있다. 용액의 pH에 따라 페메트렉세드의 약학적 허용염을 포함하는 용액을 알칼리 수산화물 또는 출발 물질 중 임의의 하나와 혼합함으로써 pH를 조정할 수 있다. 통상적으로, pH 측정은 pH 미터를 이용하여 수행한다.

임의로, 용매를 제거하기 전에 분산제를 혼합물에 첨가할 수 있다. 바람직하게는, 분산제는 락토오스, 프룩토오스 또는 만니톨과 같은 당이다. 바람직하게는, 당은 만니톨이다. 바람직하게는, 분산제는 페메트렉세드의 약학적 허용염의 양에 대해 중량으로 동몰량으로 존재한다.

본 발명을 특정의 바람직한 구체예를 참고로 하여 설명했지만, 본 명세서를 고려하여 다른 구체예가 있을 수 있음이 당업자에게는 명백할 것이다. 하기 실시예를 참고로 하여 본 발명을 추가로 정의한다. 본 발명의 범위를 벗어나지 않는 한, 물질 및 방법 모두에 대해 다수의 변경이 실시될 수 있음이 당업자에게는 명백할 것이다.

도 1은 약 10.0, 10.3, 22.0 및 25.7 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산의 X선 분말 회절 패턴을 도시한다.
도 2는 약 5.7, 12.2, 17.2 및 18.4 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산의 X선 분말 회절 패턴을 도시한다.
도 3은 약 5.8, 12.4, 18.6 및 24.6 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산의 X선 분말 회절 패턴을 도시한다.
도 4는 약 6.2, 10.7, 12.0 및 18.9 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산의 X선 분말 회절 패턴을 도시한다.
도 5는 약 9.0, 16.2, 18.1 및 26.9 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산의 X선 분말 회절 패턴을 도시한다.
도 6은 약 7.7, 9.2, 16.7 및 27.4 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산의 X선 분말 회절 패턴을 도시한다.
도 7은 약 6.8, 11.9, 15.5 및 17.9 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산의 X선 분말 회절 패턴을 도시한다.
도 8은 실시예 12에서 얻은, 약 5.7, 12.2, 17.2 및 18.4 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산의 X선 분말 회절 패턴을 도시한다.

(물리적) 실험 방법론:

분말 X선 회절 :

Peltier 검출기를 구비한 ARL X선 분말 회절 분석계 모델 X'TRA-030 상에서 분말 X선 회절을 수행하였다. 원형 제로 백그라운드 석영 판을 구비하는 원형 표준 알루미늄 샘플 홀더를 이용하였다. 주사 변수는 하기와 같다: 범위: 2-40° 2θ, 연속 주사, 속도: 3 °/분. 기구 및 샘플 제조와 같은 실험 차이로 인해 피크 위치의 정확도는 +/- 0.2 °로서 정의된다.

열 무게 분석:

TGA/SDTA 851^e, Mettler Toledo, 샘플 중량 7-15 ㎎.

가열 속도: 10 ℃/분, N₂ 스트림 중: 유속 = 50 ㎖/분

주사 범위: 30-250℃ 또는 30-280℃

실시예 1: 약 10.0, 10.3, 22.0 및 25.7 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ 에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산의 제조

플라스크에 N-[4-[2-(2-아미노-4,7-디히드로-4-옥소-1H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-일)에틸]벤조일]-L-글루탐산 이나트륨 염(23.89 g) 및 물(478 ㎖)을 채우고, 20 분 동안 24℃에서 교반하여 완전한 용해를 달성하였다. 묽은 염산을 첨가하여 생성된 용액의 pH를 약 4.5로 조정한 후, 풍부한 고체 형성을 관찰하였다. 그 다음 생성된 현탁액을 25 분 동안 65℃로 가열하고, 5 시간 동안 24℃로 천천히 냉각시킨 후, 10 시간 동안 24℃에서 교반하였다. 현탁액으로부터 고체를 여과하고, 염산으로 pH 4.5로 조정한 물로 2회(2 x 50 ㎖) 세정하였다. 습윤 고체를 16.5 시간 동안 진공(18 mbar) 하에서 40℃에서 건조시켜 표제 화합물을 백색 미세 고체로서 얻었다(7.20 g). 건조 물질의 X선 분말 회절 패턴을 측정하고, 도 1에 도시하였다.

실시예 2: 약 5.7, 12.2, 17.2 및 18.4 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ 에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산의 제조

플라스크에 N-[4-[2-(2-아미노-4,7-디히드로-4-옥소-1H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-일)에틸]벤조일]-L-글루탐산 이나트륨 염(12.77 g) 및 물(240 ㎖)을 채우고 24℃에서 교반하여 완전한 용해를 달성하였다. 염산을 첨가하여 생성된 용액의 pH를 약 3.0으로 조정한 후, 풍부한 고체 형성이 관찰되었다. 그 다음 생성된 현탁액을 35 분 동안 65℃로 가열하고, 5 시간 동안 24℃로 천천히 냉각시킨 후, 11.5 시간 동안 24℃에서 교반하였다. 그 다음 2.0M 수산화나트륨을 첨가하여 현탁액의 pH를 약 4.5로 조정하고, 현탁액을 50 분 동안 24℃에서 교반하였다. 고체를 현탁액으로부터 여과하고, 염산으로 pH 4.5로 조정된 물로 2회(2 x 50 ㎖) 세정하였다. 습윤 고체를 15.5 시간 동안 진공(18 mbar) 하에서 40℃에서 건조시켜 표제 화합물을 회백색 고체로서 얻었다(8.32 g). 건조 물질의 X선 분말 회절 패턴을 측정하고, 도 2에 도시하였다.

실시예 3: 약 5.8, 12.4, 18.6 및 24.6 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ 에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산의 제조

플라스크에 N-[4-[2-(2-아미노-4,7-디히드로-4-옥소-1H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-일)에틸]벤조일]-L-글루탐산(98.22% HPLC 순도)(10.0 g) 및 디메틸설폭시드(25 ㎖)를 채우고, 65℃로 가열한 후, 완전히 용해될 때까지 교반하였다. 그 다음 메탄올(37.5 ㎖) 및 물(37.5 ㎖)을 약 2.5 시간에 걸쳐 용액에 적가하였다. 생성된 현탁액을 1 시간 동안 65℃에서 교반한 후, 약 2.5 시간에 걸쳐 22℃로 냉각시켰다. 현탁액을 여과하고, 단리된 고체를 물(50 ㎖)과 메탄올(50 ㎖)의 혼합물로 세정하였다. 그 다음 고체를 약 16 시간 동안 진공(18 mbar) 하에서 40℃에서 건조시켜 99.16% 수율(HPLC)로 페메트렉세드 이산(7.62 g)을 얻었다.

2 g의 건조 페메트렉세드 산의 샘플을 15 ㎖의 물에 슬러리화하여 현탁액을 형성시켰다. 그 다음 현탁액을 1 시간 동안 50℃에서 가열한 후, 주위 온도로 천천히 냉각시키고 여과하였다. 생성된 고체를 약 16 시간 동안 진공(18 mbar) 하에서 80℃에서 오븐에서 건조시켜 표제 화합물을 99.46% 순도(HPLC)로 얻었다. 건조 물질의 X선 분말 회절 패턴을 측정하고, 도 3에 도시하였다.

실시예 4: 약 6.2, 10.7, 12.0 및 18.9 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ 에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 페메트렉세드 이산의 제조

플라스크에 N-[4-[2-(2-아미노-4,7-디히드로-4-옥소-1H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-일)에틸]벤조일]-L-글루탐산(99.00% HPLC 순도)(3.64 g) 및 디메틸포름아미드(7.3 ㎖)를 채우고, 50℃로 가열한 후, 완전히 용해될 때까지 교반하였다. 그 다음 물(10.9 ㎖)과 메탄올(18.2 ㎖)의 혼합물을 약 80 분에 걸쳐 용액에 적가하였다. 얻어진 현탁액을 50℃에서 30 분 동안 교반한 후, 약 2 시간에 걸쳐 30℃로 냉각시켰다. 현탁액을 여과하고, 고체를 물(20 ㎖)로 세정하였다.

습윤 고체를 약 72 시간 동안 진공(18 mbar) 하에서 40℃에서 건조시켜 표제 화합물을 99.32% 순도(HPLC)로 밝은 청색 고체로서 얻었다(3.02 g). 건조 물질의 X선 분말 회절 패턴을 측정하고, 도 4에 도시하였다.

실시예 5: 약 9.0, 16.2, 18.1 및 26.9 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ 에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 페메트렉세드 이산의 제조

페메트렉세드 이산(3.0 g)을 DMF(6.0 ㎖)에 용해시키고, 용액을 45 분 동안 50℃에서 가열하고, 무수 EtOH(18.0 ㎖)를 15 분에 걸쳐 적가하고, 슬러리를 30 분 동안 더 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 다른 무수 EtOH(15.0 ㎖)를 현탁액에 첨가하였다. 현탁액을 18 시간 동안 교반 하에 유지시키고, 여과하고, 무수 EtOH(3 x 3.0 ㎖)로 세정하였다. 습윤 케이크를 72 시간 동안 진공 하에서 40℃에서 가열하여 2.88 g(96.0%)의 페메트렉세드 이산을 얻었다. 건조된 페메트렉세드 이산의 PXRD 패턴을 측정하고, 도 5에 도시하였다.

실시예 6: 약 7.7, 9.2, 16.7 및 27.4 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ 에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 페메트렉세드 이산의 제조

5 g의 N-(4-[2-(2-아미노-4,7-디히드로-4-옥소-1H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-일)에틸]벤조일)-L-글루탐산 디에틸 에스테르 p-톨루엔설폰산 염을 2℃에서 50 ㎖의 물에 현탁시켰다. 2℃로 미리 냉각시킨 50 ㎖의 수성 수산화나트륨(2M)을 첨가하고, 혼합물을 1.5 시간 동안 2℃에서 교반하였다. 완전한 용해가 관찰되었다. 그 다음 용액을 20 분에 걸쳐 2℃에서 30 ㎖의 수 중 3.0 ㎖의 수성 염산(37%)의 용액에 적가하고, 수성 수산화나트륨 0.1N로 pH를 3.9 내지 4.1로 보정하였다. 생성된 현탁액을 30 분 동안 2℃에서 교반하고, 2 시간 동안 70℃에서 가열하였다. 24℃로 냉각 후, 현탁액을 여과하고, 고체를 진공(18 mbar) 하에서 70℃에서 오븐에서 건조시켜 표제 화합물을 얻었다(75.17%). 건조된 페메트렉세드 이산의 PXRD 패턴을 측정하고, 도 6에 도시하였다.

실시예 7: 약 6.8, 11.9, 15.5 및 17.9 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ 에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 페메트렉세드 이산의 제조

약 5.7, 12.2, 17.2 및 18.4 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 PXRD 패턴을 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산의 샘플 250 ㎎을 1 시간 동안 160℃에서 오븐에 유지시킨 후, 30 분 동안 200℃에서 유지시켰다. 건조된 페메트렉세드 이산의 PXRD 패턴을 측정하고, 도 7에 도시하였다.

실시예 8: 약 6.8, 11.9, 15.5 및 17.9 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ 에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 페메트렉세드 이산의 제조

실시예 3의 생성물의 샘플 200 ㎎을 30 분 동안 100℃에서 오븐에서 유지시킨 후, 30 분 동안 180℃에서 유지시켰다. 열 처리한 물질의 X선 분말 회절 패턴을 측정하였다.

실시예 9: 약 6.8, 11.9, 15.5 및 17.9 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ 에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 페메트렉세드 이산의 제조

실시예 5의 생성물 샘플 200 ㎎을 30 분 동안 100℃에서 오븐에서 유지시킨 후, 30 분 동안 180℃에서 유지시켰다. 열 처리한 물질의 X선 분말 회절 패턴을 측정하였다.

실시예 10: 약 6.8, 11.9, 15.5 및 17.9 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ 에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 페메트렉세드 이산의 제조

약 10.0, 10.3, 22.0 및 25.7 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 PXRD 패턴을 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산의 샘플(약 150 ㎎)을 30 분 동안 200℃에서 오븐에서 유지시켰다. 건조된 결정질 페메트렉세드 이산의 X선 분말 회절 패턴을 측정하였다.

실시예 11: 약 6.8, 11.9, 15.5 및 17.9 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ 에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 페메트렉세드 이산의 제조

약 6.2, 10.7, 12.0 및 18.9 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 PXRD 패턴을 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산의 샘플(약 150 ㎎)을 30 분 동안 200℃에서 오븐에서 유지시켰다. 건조된 결정질 페메트렉세드 이산의 X선 분말 회절 패턴을 측정하였다.

실시예 12: 약 5.7, 12.2, 17.2 및 18.4 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ 에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산의 제조

약 6.2, 10.7, 12.0 및 18.9 ° 2θ ± 0.2 ° 2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 결정질 페메트렉세드 이산을 1 시간 동안 50℃에서 물(20 ㎖)에 슬러리화한 후, 약 2 시간에 걸쳐 26℃로 냉각시켰다. 그 다음 현탁액을 여과하였다. 습윤 고체를 물로 세정하고, 약 16 시간 동안 진공(18 mbar) 하에서 40℃에서 건조시켜 표제 화합물을 99.32% 화학 순도(HPLC)로 밝은 청색 고체로서 얻었다(3.02 g). 건조 물질의 X선 분말 회절 패턴을 측정하고, 도 8에 도시하였다.

실시예 13: 동결 건조된 N-[4-[2-(2-아미노-4,7- 디히드로 -4-옥소-1H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -5-일)에틸] 벤조일 ]-L-글루탐산 이나트륨 염

5 g의 N-[4-[2-(2-아미노-4,7-디히드로-4-옥소-1H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-일)에틸]벤조일]-L-글루탐산을 1 ℓ의 증류수에 용해시키고, 11.698 ㎖의 수산화나트륨 2.0M 용액을 용액에 첨가하였다. 그 다음 만니톨(10 g)을 용액에 첨가하여 용해시켰다. 그 다음 용액을 박테리아 필터를 통해 여과하고, 동결 건조기에서 건조시켜 15.5 g의 표제 화합물을 백색 고체로서 얻었다.　　　

실시예 14: N-[4-[2-(2-아미노-4,7- 디히드로 -4-옥소-1H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -5-일)에틸] 벤조일 ]-L-글루탐산 이나트륨 염의 제조

25℃에서 플라스크에 미정제 N-[4-[2-(2-아미노-4,7-디히드로-4-옥소-1H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-일)에틸]벤조일]-L-글루탐산(4 g), 물(28 ㎖) 및 NaOH(3 당량)를 채웠다. 완전한 용해가 달성되었다. HCl 1M로 pH를 10.0으로 보정하고, 아세톤(120 ㎖)을 50 분에 걸쳐 적가하였다. 얻어진 현탁액을 1 시간 내에 2℃로 냉각시키고, 10 시간 동안 2℃에서 교반하고 여과하였다. 고체를 아세톤(30 ㎖)으로 세정하고, 약 16 시간 동안 진공(18 mbar) 하에서 40℃에서 건조시켜 표제 화합물을 얻었다.

실시예 15: (미국 특허 제6,262,262호의 실시예 6을 기초로 한) N-(4-[2-(2-아미노-4,7- 디히드로 -4-옥소-1H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -5-일)에틸] 벤조일 )-L-글루탐산 디에틸 에스테르 p- 톨루엔설폰산 염의 제조

플라스크에 1.93 g의 4-[2-(2-아미노-4,7-디히드로-4-옥소-1H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-일)에틸]벤조산 및 13.5 ㎖의 디메틸포름아미드를 채웠다. 슬러리를 20 분 동안 교반하고, 1.94 g의 N-메틸모르폴린을 첨가하였다. 혼합물을 5℃로 냉각시키고, 1.46 g의 클로로디메톡시트리아진을 한꺼번에 첨가하였다. 혼합물을 1 시간 동안 교반한 후, 1.99 g의 L-글루탐산 디에틸 에스테르 염산염을 첨가하였다. 그 다음 생성된 반응 혼합물을 주위 온도로 승온시켰다. 약 1 시간 후 HPLC에 의해 반응의 완결을 검출하였다. 이 시점에서 36 ㎖의 물 및 36 ㎖의 디클로로메탄을 반응 혼합물에 첨가하고, 15 분 동안 교반하였다. 그 다음 층이 분리되게 두었다. 유기상을 수집하고, 13 g으로 농축시킨 후, 60 ㎖의 무수 에탄올로 대체하였다. 용액을 75℃에서 가열하고, 55 ㎖의 무수 에탄올에 용해된 3.16 g의 p-톨루엔설폰산을 용액에 적가하였다. 생성된 슬러리를 1 시간 동안 환류시킨 후, 주위 온도로 냉각시키고, 여과하였다. 습윤 케이크를 25 ㎖의 에탄올로 세정하고, 밤새 진공 하에서 40℃에서 오븐에서 가열하여 3.66 g의 표제 화합물을 얻었다.

Claims

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5.7, 12.2, 17.2 및 18.4°2θ ± 0.2°2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴; 또는 7.7, 9.2, 16.7 및 27.4°2θ ± 0.2°2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 페메트렉세드 이산 결정형을 제조하는 단계; 및
상기 페메트렉세드 이산 결정형을 페메트렉세드 이산의 약학적으로 허용가능한 염 또는 이의 동결건조된 형태로 전환시키는 단계
를 포함하는, 페메트렉세드 이산의 약학적으로 허용가능한 염 또는 이의 동결건조된 형태를 제조하는 방법.
제5항에 있어서, 페메트렉세드 이산의 약학적으로 허용가능한 염은 페메트렉세드 이나트륨인 방법.
페메트렉세드 이산의 약학적으로 허용가능한 염 또는 이의 동결건조된 형태를 제조하는 방법으로서, 5.7, 12.2, 17.2 및 18.4°2θ ± 0.2°2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴; 또는 7.7, 9.2, 16.7 및 27.4°2θ ± 0.2°2θ에서 피크를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 페메트렉세드 이산 결정형을 출발물질로 사용하는 것인 방법.
제7항에 있어서, 페메트렉세드 이산의 약학적으로 허용가능한 염은 페메트렉세드 이나트륨인 방법.
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