KR101356126B1 - 자라 추출물을 이용한 간 보호용 음료조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 간 보호용 음료조성물에 관한 것으로서, 자라의 추출물을 함유하여 건강에 유익한 간 보호용 음료조성물에 관한 것이다.
본 발명의 간 보호용 음료조성물은 자라 추출물 70 내지 90중량%, 식물추출물 10 내지 30중량%를 함유하고, 상기 식물추출물은 단삼, 마늘, 대두, 미나리로부터 추출된 추출물을 포함한다. 그리고 자라추출물은 자라의 고기 또는 자라의 등딱지로부터 추출된다.

Description

자라 추출물을 이용한 간 보호용 음료조성물{beverage composition for protecting liver using snapping turtle extract}
본 발명은 간 보호용 음료조성물에 관한 것으로서, 자라의 추출물을 함유하여 건강에 유익한 간 보호용 음료조성물에 관한 것이다.
생활환경이 고속화됨에 따라 그에 따른 식생활이 고 칼로리 위주로 인스턴트화되어 비만증, 고혈압을 비롯하여 각종 성인병에 대한 보고가 급증하고 있다. 핵가족화, 개인주의화, 야간활동의 인구증가, 대중소비시대, 소비패턴의 다양화, 편리성 추구경향, 그리고 여성의 사회진출 증가 등의 사회경제적인 환경의 변화로 식생활 구조의 변화를 겪고 있다.
그리고 이러한 식사 구성에 대한 의식변화와 간편식에 대한 소비자의 요구 증가는 편의성을 추구하는 경향으로 나타나기 시작하였다.
그러나 이러한 현대인의 잘못된 식생활은 영양부족, 영양 과잉 및 잘못된 영양정보에 의한 영양불량을 초래하기 쉽다. 영양부족으로 인한 영양불량은 빈혈 등 여러 질병을 일으키게 되고 영양소의 과잉섭취는 체중 과다 및 비만을 유발하여 오늘날 보건문제로 대두하고 있을뿐 아니라 동맥경화증, 당뇨병, 고혈압과 같은 만성 퇴행성 질환의 발병을 더욱 가중시키게 된다.
식생활 습관이 질병과 매우 밀접한 관계가 있다는 과학적 증거가 속속 드러나면서 식생활을 포함한 생활양식의 변화를 통해 건강을 증진시키고자 하는 소비자들이 빠르게 늘어나고 있다.
이에 각종 질병을 예방하고 치료에 도움을 주기 위한 보조식품 및 기능성 식품이 다수 소개되고 있으나 근본적으로 곡물에 편중되어 있어 영양학적인 측면에서 문제가 된다.
한편, 자라(Pelodiscus sinensis)는 거북목 자라과에 속하는 파충류의 일종으로서 우리나라에서는 예로부터 보혈(補血)효과가 있는 동물로 알려져 건강식품으로 인기가 있다. 자라에 많이 포함된 동물성 단백질은 소화, 흡수의 과정에서 아미노산으로 분해되어 체내에서 다시 단백질로 재합성되는 효율이 식물성 단백질보다 좋다. 또한 자라에 많이 포함된 불포화 지방은 다른 동물성 식품에서 LDL콜레스테롤을 증가시키는 포화지방산과는 달리, 양질의 지방식품에 해당하며, 섬유질, 칼슘, 미네랄이 풍부하다고 알려져 있다.
본 발명은 자라 추출물을 이용하여 간 보호 효과가 있고 건강에 유익한 간 보호용 음료조성물을 제공하는 데 그 목적이 있다.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 간 보호용 음료조성물은 자라 추출물 70 내지 90중량%, 식물추출물 10 내지 30중량%를 함유하고, 상기 식물추출물은 단삼, 마늘, 대두, 미나리로부터 추출된 추출물을 포함하는 것을 특징으로 한다.
상기 자라추출물은 자라의 고기 또는 자라의 등딱지로부터 추출된 것을 특징으로 한다.
상기 식물추출물은 석이버섯 추출물을 더 포함하는 것을 특징으로 한다.
상기 자라추출물은 초임계유체 추출법을 이용하여 추출하고, 상기 자라추출물은 상기 자라의 고기 또는 등딱지를 건조시켜 세절한 후 온도 34 내지 36℃, 압력 250 내지 350bar의 초임계이산화탄소를 가하여 1 내지 2시간 동안 추출한 것을 특징으로 한다.
상술한 바와 같이 본 발명은 간 손상 모델에서 간세포 손상을 유의성 있게 개선시키므로 건강에 유익한 음료조성물을 제공할 수 있다.
도 1은 간손상이 유도된 모델에서 GST(glutathione-S-transferase) 효소활성을 나타내는 그래프이고,
도 2는 간손상이 유도된 모델에서 GCS(γ-glutamylcysteine synthetase) 효소활성을 나타내는 그래프이다.
이하, 본 발명의 바람직한 실시 예에 따른 자라 추출물을 이용한 간 보호용 음료조성물에 대하여 구체적으로 설명한다.
본 발명의 음료조성물은 일 예로 자라 추출물 70 내지 90중량%, 식물추출물 10 내지 30중량%를 함유한다.
자라(Pelodiscus sinensis)는 거북목 자라과에 속하는 파충류의 일종으로, 본 발명에서는 자라의 고기 또는 자라의 등딱지가 이용된다.
그리고 식물추출물은 단삼, 마늘, 대두, 미나리로부터 추출된 추출물을 포함한다.
단삼(丹蔘)은 근피는 붉고 속은 자색이어서 얻어진 이름으로, 예로부터 오삼중의 하나에 포함시켜 인삼과 같이 귀하게 여겼다. 본 발명에서 식물 추출물은 단삼의 뿌리로부터 추출된 추출물을 포함한다.
마늘은 백합과 알리움(Allium)속 식물에 속하는 것으로, 항혈전, 콜레스테롤 저하, 혈압강하, 항균, 항암 및 노화방지 작용등 여러 약리작용등이 발표되고 있다. 마늘의 기능성 성분은 알리신(allicin), 메틸 알릴(methyl allyl), 1-프로페닐 알릴(1-propenyl allyl), 알릴1-프로페닐(allyl-1-propenyl), 1-프로페닐 메틸(1-propenyl methyl), 디메틸 티오설피네이트(dimethyl thiosulfinate) 등 대부분 황화합물로 구성되어 있는 것으로 알려져 있다. 본 발명에서 식물 추출물은 마늘의 뿌리로부터 추출된 추출물을 포함한다.
대두(大豆)는 콩과식물로서, 식이성 대두 단백질, 아이소플라본류에 속하는 제니스테인(genistein), 다이드제인(daidzein) 등과 함께, 사포닌, 지방류, 비타민류, 무기질류 등이 많이 함유되어 있다. 현재 알려진 대두의 약리 작용으로는 항암 작용, 항균작용, 항고지혈증 작용, 항산화 작용, 죽상 동맥 경화증 예방 작용, 소화기계에 대한 장운동 활성화 작용과 해독 이뇨작용 등이 알려져 있다. 본 발명에서 식물 추출물은 대두의 종자로부터 추출된 추출물을 포함한다.
미나리는 우물가나 물이 잘 마르지 않는 논에서 자라는 여러해살이풀로 독성물질을 분해시키는 효능이 있다고 옛부터 알려져 있다. 특히, 과음한 후 미나리 생즙을 마시면 숙취를 푸는데 효과적이다. 즉, 술로 오른 열독을 풀어주고 해독작용으로 술독을 중화시키며 이뇨작용으로 술로 인한 해로운 찌꺼기를 배설시킨다고 알려져 있다. 한방에서는 미나리의 생즙이 황달이나 소장질환, 대장질환, 신경쇠약 등에 좋고 대하증에는 미나리 생즙을 한 컵 정도씩 매일 마시면 효과가 있으며 비만 예방에도 효과가 있다고 알려져 있다. 본 발명에서 식물 추출물은 미나리의 전초로부터 추출된 추출물을 포함한다. 미나리로 오스테리아쿰 코리아눔(Ostericum coreanum), 오에난테 자바니카(Oenanthe javanica), 오에난테 스톨로니페라 (Oenanthe stolonifera) 등을 이용할 수 있다.
그리고 식물추출물은 상술한 단삼, 마늘, 대두, 미나리로부터 추출된 추출물 외에도 석이버섯 추출물을 더 포함할 수 있다.
석이버섯(Umbilicaria escuenta)은 석이과(Umbilicariaceae) 식물인 석이의 전주 자실체이다. 고지대 절벽 바위에 기생하는 버섯으로 바위에 붙어있는 귀와 같다하여 석이라고 명명한다. 한국(강원), 중국, 일본 등지에 분포하며, 장기 복용하면 기력이 좋아지고, 얼굴색이 좋아지며, 면역력을 증강시키는 효과가 있고, 알라닌과 페닐알라닌, 글루타민산과 같은 단백질 구성 요소인 아미노산 성분이 많이 함유되어 있다.
상술한 자라 추출물, 식물 추출물은 각각 별개로 추출되거나, 일정 비율로 혼합한 후 동시에 추출할 수 있다. 가령, 자라추출물과 식물추출물을 별개로 준비한 후 자라 추출물 70 내지 90중량%, 식물추출물 10 내지 30중량%로 혼합된 음료조성물을 제조할 수 있다. 상기 식물추출물은 단삼, 마늘, 대두, 미나리의 식물재료를 동일 중량비율로 혼합하여 동시에 추출할 수 있다.
상술한 바와 달리 자라와 식물재료들을 혼합한 후 동시에 추출할 수 있다. 이 경우 자라 70 내지 90중량%, 식물재료 10 내지 30중량%로 혼합한 후 동시에 추출한다. 이때 식물재료는 단삼, 마늘, 대두, 미나리의 식물재료를 동일 중량비율로 혼합된 것이다.
추출방법으로 다양한 방식이 적용 가능하다. 가령 자라 또는 식물재료에 추출용매를 가해 추출할 수 있다. 추출용매로 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 다가 알코올 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 어느 하나를 이용할 수 있다. 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올로 메탄올, 에탄올 등을 이용할 수 있고, 다가 알코올로 부틸렌글리콜 및 프로필렌글리콜, 펜틸렌글리콜 등을 이용할 수 있다. 그리고 혼합물로는 물 및 저급 알코올의 혼합물, 물 및 다가 알코올의 혼합물, 저급 알코올 및 다가 알코올의 혼합물, 또는 물 및 저급알코올 및 다가 알코올의 혼합물을 이용할 수 있다.
추출의 일 예로 추출용매를 중량비로 2 내지 20배를 가하여 혼합한 후 10 내지 150℃에서 1 내지 36시간 동안 열수추출, 냉침 또는 온침 추출 등을 이용할 수 있다. 또한, 환류냉각추출, 초음파 추출방법 등을 이용할 수 있다. 또한, 상술한 추출방법뿐만 아니라, 통상적인 정제 과정을 거친 추출물도 포함한다. 예컨대, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 활성 분획도 추출물에 포함되는 것이다. 그리고 상기의 추출용매를 이용하여 추출한 추출액을 여과, 감압농축 또는 동결건조, 분무건조 방식 등을 통해 분말 형태로 얻을 수 있음은 물론이다.
자라추출물의 추출방법으로 특히 초임계 유체 추출법이 바람직하다. 고온에서 열수추출하는 경우 영양소의 파괴가 발생한다. 자라는 동물성 단백질로 구성되어 있는데 단백질은 고온에서 변성되는 특성이 있다. 섭씨 95도의 열은 단백질을 변성시키기에 충분한 고온이며 장시간 가하는 열로 인하여 자라 내의 각종 영양소가 파괴, 소실되는 문제가 발생한다. 하지만, 초임계 유체 추출법을 적용하면 40℃미만의 낮은 온도에서 추출이 가능하여 단백질의 열변성을 효과적으로 방지할 수 있다.
이와 같이 초임계 유체 추출(Supercritical Fluid Extraction)은 초임계유체의 점도가 작아 시료에의 침투성이 좋아 추출효율이 높으며 또한 확산 계수(diffusion coefficient)가 크므로 추출속도가 빠르고, 비교적 저온에서 추출함으로서 열에 의한 손상을 피할 수 있고, 시료와 초임계유체와의 밀도차이가 크고 초임계유체의 점도가 낮으므로 추출 잔유물과 용매의 분리가 용이한 장점 등을 갖는다.
초임계 유체란 초임계 대상 물질 즉, 이산화탄소, 물, 알코올, 헬륨 등의 물질에 임계 압력, 임계온도를 가하여 고온 고압 상태하의 특수 상황에서 유체가 된 것을 의미한다. 이 초임계 유체는 액체의 밀도와 비슷한 값을 가지며, 점도는 기체에 가까우며 그 확산 계수는 액체보다 약 100배 정도의 큰 값을 가지게 된다. 이러한 초임계 유체를 추출 대상에 침투시키면 고순도의 내용물을 추출할 수 있게 된다.
본 발명에서 초임계 추출에 이용하는 초임계 유체는 이산화탄소이다. 이산화탄소의 경우 비교적 낮은 임계압력(73.8bar)과 상온 근처의 임계온도(31℃)를 가지며, 압력 또는 온도를 좁은 범위 내에서 변화시킴으로써 용해도, 확산도 등의 성질을 쉽게 조절할 수 있으며, 인체에 무해하고 가격이 저렴할 뿐만 아니라 폭발성 및 발화성이 없으며, 감압에 의해 쉽게 회수할 수 있다.
자라추출물 추출시 바람직한 초임계 유체 추출조건은 초임계유체로 이산화탄소를 이용하고, 온도 34 내지 36℃, 압력 250 내지 350bar에서 1 내지 2시간 동안 추출한 것이다.
초임계 유체 추출의 일 예로, 자라의 고기 또는 등딱지를 실온에서 2 내지 3일 동안 건조시켜 분쇄한 후 초임계 추출조에 투입, 밀봉하고 추출조에 이산화탄소를 공급하여 압력을 높인다. 동시에 고압용 액체펌프를 이용하여 water soluble 공용매인 1,3-butylene glycol과 95% ethanol의 혼합용액 (1,3-butylene glycol : 95% ethanol = 100 : 5)을 1.1g/min속도로 이산화탄소와 동시에 추출조에 투입한다. 압력 250 내지 350bar에 달하면 이산화탄소와 공용매의 공급을 중단하고, PID 온도제어기를 이용하여 추출조에 외부를 감싸고 있는 열선을 이용하여 추출조 내부의 온도를 0.5℃/min 속도로 34 내지 36℃까지 승온시킨다. 온도 34 내지 36℃, 압력 250 내지 350bar로 1 내지 2시간 동안 유지하여 자라추출물을 수득할 수 있다.
본 발명의 음료 조성물은 자라 추출물 70 내지 90중량%, 식물추출물 10 내지 30중량%를 함유한다. 이외에도 공지의 식품 첨가물이 첨가될 수 있다. 식품첨가물의 예로 단당류, 이당류, 다당류, 당알콜 등의 당류와, 타우마틴, 스테비아 추출물, 사카린, 아스파르탐 등의 향미제와, 영양제, 비타민, 식용 전해질, 풍미제, 착색제, 증진제(예, 치즈, 초콜릿 등), 펙트산, 알긴산, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산화제 등이 이용될 수 있다.
이하, 상술한 음료 조성물의 제조방법에 대하여 간단하게 설명한다.
먼저, 자라추출물과 식물추출물과 준비한다. 추출방법은 상술한 바와 같다. 추출후 여과하여 고형물을 제거하여 추출물을 준비하다. 자라 추출물 70 내지 90중량%, 식물추출물 10 내지 30중량%로 혼합하여 살균공정을 거쳐 음료 조성물을 제조한다.
살균공정에 앞서 추출물에 향미제 등의 각종 식품 첨가물이 첨가될 수 있다추가 성분으로서 함유될 수 있다. 향미제로서 타우마틴, 스테비아 추출물 등의 천연 향미제 및 수크랄로스, 아스파르탐 등의 합성 향미제를 사용할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다.
살균 후 음료 조성물은 포장용기에 충전한다. 포장용기로 유통과정에서의 간편성과 품질을 유지하기 위해 파우치(pouch), 스파우트 파우치(spout pouch), PET를 이용하는 것이 바람직하다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시 예를 제시하나, 하기 실시 예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시 예에 한정되는 것은 아니다.
(실시예 1)
전라남도 해남의 용천자라농장에서 사육하여 체중이 약 1kg인 자라를 구입한 후 자라의 몸통으로부터 분리해낸 고기(이하, 별육이라 함)를 동결건조기(SFDSM 12 L-19H220V, 60 Hz, 삼원사)를 사용하여 -40℃에서 72시간 동결건조하였다. 다음 분쇄한 후 메탄올을 중량비로 10배량을 가한 후 40℃에서 3시간 동안 4회 반복 추출하고 여과한 다음 감압농축하여 자라 추출물을 추출하였다.
그리고 단삼, 마늘, 대두, 미나리를 동일 중량비로 혼합한 식물 재료들을 건조시킨 다음 분쇄한 후 메탄올을 중량비로 10배량을 가한 후 40℃에서 3시간 동안 4회 반복 추출하고 여과한 다음 감압농축하여 식물 추출물을 추출하였다.
준비된 자라추출물과 식물추출물은 8:2의 중량비로 혼합하여 제 1시료를 제조하였다.
(실시예2)
자라의 등딱지(이하, 별갑이라 함)를 동결건조(실시예 1의 동결건조방법과 동일)시킨 다음 분쇄한 후 메탄올을 중량비로 10배량을 가한 후 40℃에서 3시간 동안 4회 반복 추출하고 여과한 다음 감압농축하여 자라 추출물을 추출하였다.
그리고 식물추출물은 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 추출한 다음 자라추출물과 식물추출물을 8:2의 중량비로 혼합하여 제 2시료를 제조하였다.
(실시예 3)
별육 및 별갑을 동결건조(실시예 1의 동결건조방법과 동일)시킨 다음 분쇄하여 동일 중량비로 혼합한 혼합물에 메탄올을 중량비로 10배량을 가한 후 40℃에서 3시간 동안 4회 반복 추출하고 여과한 다음 감압농축하여 자라 추출물을 추출하였다.
그리고 식물추출물은 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 추출한 다음 자라추출물과 식물추출물을 8:2의 중량비로 혼합하여 제 3시료를 제조하였다.
(실시예4)
상기 실시예 3과 동일한 방법으로 제 4시료를 제조하되, 식물추출물로 단삼, 마늘, 대두, 미나리, 석이버섯을 동일 중량비로 혼합한 식물 재료들을 건조시킨 다음 분쇄한 후 메탄올을 중량비로 10배량을 가한 후 40℃에서 3시간 동안 4회 반복 추출하고 여과한 다음 감압농축하여 식물 추출물을 추출하였다.
<아미노산 분석실험>
본 발명의 주재료인 자라에 함유된 아미노산을 분석하기 위해 실시예 1 및 2에 사용된 별육 및 별갑의 동결건조 분말을 시료로 하여 구성아미노산과 유리아미노산의 함량을 측정하였다. 아미노산, 특히 필수아미노산은 발육, 성장 등의 건강에 영향을 주는 것으로 알려져 있다.
1. 구성아미노산
구성아미노산은 시료 0.5g을 18ml test tube에 칭량하여 6N HCl 3ml를 가한 다음 진공펌프를 이용하여 test tube를 sealing하였다. sealing한 test tube는 120℃로 heating block에 24시간 동안 가수분해시킨 후, 50℃, 40psi의 rotary evaporator로 산을 제거한 후 Sodium loading buffer로 10ml 정용한 다음, 이중 1 ml를 취하여 membrane filter 0.2㎛로 여과하여 아미노산분석기(S433-H, SYKAM)로 정량분석하였다. 이때 분석조건은 column은 cation separation column(LCA K06/Na)을 사용하였고, column size는 4.6 × 150mm, column temperature는 57~74℃, flow rate는 buffer 0.45㎖/min, reagent 0.25㎖/min 이었으며, 이때 buffer pH range는 3.45~10.85이었으며, wavelengeth는 440㎚과 570㎚이었다.
하기 표 1에 별육과 별갑의 구성아미노산(mg/100g) 분석결과를 나타내었다.
아미노산 별육 별갑
Aspatic acid 3615.883 2354.639
Threonine 1549.127 947.241
Serine 1671.869 1264.691
Glutamic acid 6065.491 4005.636
Proline 3889.954 3455.583
Glycine 6482.434 5994.649
Alanine 3229.100 2536.346
Cystine 313.725 197.913
Valine 1731.291 1053.269
Methionine 686.251 443.649
Isoleucine 1577.437 855.038
Leucine 2742.444 1631.167
Tyrosine 843.083 558.320
Phenylalanine 1633.644 1054.003
Histidine 1356.563 919.846
Lysine 2775.093 1483.654
Ammonia 2270.601 1576.010
Arginine 3546.906 2674.768
Total 45980.896 33006.422
상기 표 1을 참조하면, 별육 및 별갑에 각종 구성아미노산이 함유되어 있음을 확인할 수 있었다. 그리고 별갑보다는 별육이 구성아미노산의 총량에서 더 높게 나타났다.
그리고 별육에서 필수 아미노산인 glutamic acid, glycine, proline, aspatic acid, arginine, alanine가 약 6,065.5, 6,482.4, 3,889.9, 3,615.9, 3,546.9, 3,229.1 mg/100g으로 다량 함유된 것으로 확인되었다. 또한 별갑에서도 glycine, glutamic acid, proline, arginine, alanine, aspatic acid가 각각 5,994.6, 4,005.6, 3,455.5, 2,674.7, 2,536.3, 2,354.6 mg/100g로 다량 함유된 것을 확인되었다. 이는 자라추출물의 섭취시 건강도에 긍정적인 영향을 줄 것으로 기대할 수 있다.
2.유리아미노산
유리아미노산은 시료 2g을 칭량하여 증류수 20ml를 가한 후 균질화하여 3000rpm에서 20분간 원심분리하였다. 상층액에 sulfosalicylic acid 20mg을 첨가하여 4℃로 1시간 동안 방치시킨 후, 다시 3000rpm에서 20분간 원심분리하여 20ml 정용하였다. 이중 1ml를 취하여 membrane filter(0.2㎛)로 여과시켜 위의 구성아미노산과 같은 조건에서 정량분석하였다.
하기 표 2에 별육과 별갑의 유리아미노산(mg/100g) 분석결과를 나타내었다.
유리아미노산 별육 별갑
Phosphoserine 2.181 6.342
Taurine 70.091 86.643
Phosphoethanolamine - 3.514
Urea - 29.607
Aspartic acid 4.402 3.290
Hydroxyproline - -
Threonine 4.234 1.360
serine 6.613 -
Asparagine 2.448 -
Glutamic acid 23.627 4.572
Glycine 10.928 17.858
Alanine 7.130 13.380
Citrulline 1.284 -
Valine 2.627 1.294
Methionine 9.827 5.392
Isoleucine 2.631 -
Leucine 4.352 -
Tyrosine 2.962 6.243
phenylalanine 2.653 3.805
β-alanine 2.778 7.758
γ-amino-n-butyric acid 1.254 2.336
Histidine 25.946 72.358
3-methylhistidine 1.833 6.399
1-methylhistidine 86.597 -
Anserine 0.868 2.564
Ornitine 4.825 3.366
Lysine 12.992 -
Ammonia 55.190 70.959
Ethanolamine 2.096 1.876
Arginine 5.894 11.383
Total 358.263 362.299
상기 표 2의 결과를 참조하면, 별육 및 별갑의 유리아미노산의 총량은 비슷한 것으로 나타났다. 별육에서는 1-methylhistidine, taurine이 각각 86.6, 70.1 mg/100g, 별갑에서 taurine, histidine이 각각 86.6, 72.4 mg/100g 함유하는 것으로 나타났다.
<간보호 효과실험>
1. 실험동물
실험동물로 한국 Biolink로부터 분양받아 경성대 약대 동물사에서 일정한 조건(온도: 20±1℃, 습도: 55±3%, 명암: 12시간 light/dark cycle)으로 1주간 적응시킨 체중 200±10 g의 Sprague-Dawley계 웅성 흰쥐를 사용하였다.
2. 실험방법
실험동물은 6개의 군으로 나누어 1군당 5마리씩 할당하였다. 4개군의 실험동물에 실시예1 내지 4에서 제조한 제 1 내지 제 4시료를 250㎎/㎏을 각각 경구로 2주일간 투여하고 마지막 날에는 bromobezene을 Zampaglion 등의 방법을 참조로 하여 1% tween80에 현탁시켜 460mg/kg을 하루에 한번씩 12시간 간격으로 3일간 복강 주사하였다. 1개의 대조군은 동일 용량의 생리식염수를 2주일간 경구투여하고 마지막날에는 1% tween80 460mg/kg을 하루에 한번씩 12시간 간격으로 3일간 복강 주사하였다. 그리고 마지막 1개의 비교군은 동일 용량의 생리식염수를 2주일간 경구투여하고 마지막 날에는 bromobezene을 1% tween80에 현탁시켜 460mg/kg을 하루에 한번씩 12시간 간격으로 3일간 복강 주사하였다.
실험동물을 마취시킨 후, 생리식염수로 관류시켜 혈액을 제거한 간장을 적출하여 생리식염수로 씻은 다음 간조직 1g당 4배의 0.1M 인산염 완충용액(pH 7.4)을 가하여 빙냉상에서 glass Teflon homogenizer로 마쇄하였다. 이 마쇄액을 원심분리기로 원심분리하여 세포질(cytosolic) 분획을 얻었으며, 이를 GST(glutathione-S-transferase), GCS(γ-glutamylcysteine synthetase) 효소 활성 측정에 사용하였다. 모든 실험은 4℃에서 실행하였고, 실험에서 얻어진 결과의 통계처리는 평균치±표준편차로 표시하였다. 통계학적 분석은 Duncan's multiple rage test를 이용하여 유의성을 검증하였으며, 유의성은 p<0.05로 표시하였다.
3. GST(glutathione-S-transferase)의 측정
Habig와 Jakoby(1981)의 방법에 따라 GST 효소 활성을 측정하였다[Habig WH, Jakoby WB. Glutathione S-transferases (rat and human). Methods Enzymol. 1981; 77: 218-231.]. 3.5㎖의 0.1M 인산나트륨 완충용액(pH6.5)에 1mM glutathione, 1 mM 1-chloro 2,4-dinitro-benzene 및 0.1mL 효소액을 가하여 25℃에서 2분간 반응시킨 후, 이때 생성되는 thioether를 340nm에서 흡광도의 변화를 읽고 흡광계수 9.6 mM-1cm-1을 이용하여 효소의 활성도를 산정하였다.
도 1을 참조하면, 대조군(그래프에서 "con")의 효소활성은 231.19 nmoles/mg protein/min임에 반해 비교군(그래프에서 "bb")의 경우는 효소활성이 154.2nmoles/mg protein/min로 정상 동물에 비하여 현저한 활성억제 현상이 관찰되었다.
그리고 제 1시료를 투여한 실험군(그래프에서 "제 1시료")은 166.3nmoles/mg protein/min, 제 2시료를 투여한 실험군(그래프에서 "제 2시료")은 176.3nmoles/mg protein/min, 제 3시료를 투여한 실험군(그래프에서 "제 3시료")은 174.7nmoles/mg protein/min, 제 4시료를 투여한 실험군(그래프에서 "제 4시료")은 199.7nmoles/mg protein/min로 나타났다. 따라서 제 1 내지 제 4시료를 투여한 경우 효소활성을 회복시킬 수 있는 것으로 나타났다. 그리고 제 1 내지 제 3시료를 투여한 실험군간에 효소활성에 유의적인 차이가 없는 것으로 나타났지만, 제 4시료를 투여한 실험군은 제 1 내지 제 3시료를 투여한 실험군에 비해 유의적으로 더 높게 나타났다.
4. GCS(γ-glutamylcysteine synthetase)의 측정
Richman와 Meister(1975)의 방법에 따라 GCS 효소 활성을 측정하였다[Richman PG, Meister A. Regulation of gamma-glutamyl-cysteine synthetase by nonallosteric feedback inhibition by glutathione. J Biol Chem.1975; 250: 1422-1426.]. 3.5㎖의 반응액[0.1M 트리스·HCl 완충용액(pH 8.0), 8.9mM L-글루탐산, 0.94mM EDTA, 3.2mM MgCl2, 1.35mM ATP]과 간균질액(100~300㎖ 단백질)을 섞어 37℃에서 10분간 반응시켰다. 600nm에서 흡광도를 측정하여 표준 검량선으로 계산하였다.
도 2를 참조하면, 비교군(그래프에서 "bb")의 경우는 효소활성이 12.4nmoles/mg protein/min로 대조군(그래프 "con")에서 에 비하여 현저하게 저하되었다.
이에 비해 제 1시료를 투여한 실험군(그래프에서 "제 1시료"), 제 2시료를 투여한 실험군(그래프에서 "제 2시료"), 제 3시료를 투여한 실험군(그래프에서 "제 3시료"), 제 4시료를 투여한 실험군(그래프에서 "제 4시료")에서는 유의성 있는 효소활성 회복이 나타난 것으로 확인되었다.
이상에서 본 발명은 일 실시 예를 참고로 설명되었으나 이는 예시적인 것에 불과하며, 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 이로부터 다양한 변형 및 균등한 실시 예가 가능하다는 점을 이해할 것이다. 따라서 본 발명의 진정한 보호 범위는 첨부된 청구범위에 의해서만 정해져야 할 것이다.

Claims (4)

  1. 삭제
  2. 자라 추출물 70 내지 90중량%, 식물추출물 10 내지 30중량%를 함유하고,
    상기 식물추출물은 단삼, 마늘, 대두, 미나리로부터 추출된 추출물을 포함하고,
    상기 자라추출물은 자라의 고기 또는 자라의 등딱지로부터 추출되며,
    상기 자라추출물은 초임계유체 추출법을 이용하여 추출하고,
    상기 자라추출물은 상기 자라의 고기 또는 등딱지를 건조시켜 분쇄한 후 온도 34 내지 36℃, 압력 250 내지 350bar의 초임계이산화탄소를 가하여 1 내지 2시간 동안 추출한 것을 특징으로 하는 간 보호용 음료조성물.
  3. 제 2항에 있어서, 상기 식물추출물은 석이버섯 추출물을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 간 보호용 음료조성물.
  4. 삭제
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