KR101288376B1 - 바이페닐 및 나프틸―페닐 하이드록삼산 유도체 - Google Patents

Abstract

항종양 및 항-혈관형성 활성을 갖는, 하이드록사믹 기를 함유하는 바이페닐 및 페닐-나프틸 화합물. 이들 화합물은 따라서 약물-내성 종양의 치료에 특히 유용하다.

항종양, 항-혈관형성 활성, 하이드록사믹 기, 바이페닐, 페닐-나프틸 화합물, 약물-내성 종양의 치료

Description

바이페닐 및 나프틸―페닐 하이드록삼산 유도체{BIPHENYL AND NAPHTYL-PHENYL HYDROXAMIC ACID DERIVATIVES}

본 발명은 항종양 및 항-혈관형성 활성을 갖는, 하이드록사믹 기를 함유하는 바이페닐 및 페닐-나프틸 화합물에 관한 것이다.

소수 화합물의 항-증식 및 항-혈관신생 활성이 보고된 본 발명에 기술된 한 종류의 화합물과 구조적으로 관련되어 있다.

(6-[3'-(1-아다만틸)-4'-하이드록시페닐]-2-나프탈렌카복실산 (AHPN, CD437로도 명명됨) (Cancer Research 2002; 62(8), 2430-6; Blood 2000; 95, 2672-82; Leukemia 1999, 13, 739-49; Cancer Letters 1999, 137, 217-2)은 수용체 결합과 독립적인 기작으로, 그들 모든 트랜스-레티노산- (ATRA-) 내성을 포함하는, 유방 암종, 흑색종 및 자궁 암종 세포주에서 세포 성장을 억제하고 아폽토시스를 유도하기 위하여, 레티노산 수용체-감마 RAR-γ에 대해 선택된 것으로 보고된다 (WO9703682; J. Med . Chem. 1995, 38, 4993-5006).

또한, 이 종류의 화합물과 관련된 일부 화합물들, 예컨대 TAC-101 (Clin . Cancer Res. 1999, 5,2304-10) 또는 유도체들, 예컨대 RE-80, AM-580 또는 Am-80 (Eur. J. Pharmacol. 1993, 249, 113-6)은 항혈관신생 특성을 나타내었다.

아크릴산의 바이페닐 유도체인 신규 화합물이 최근에 기술되었다 (Cincinelli R. 등, J. Med . Chem. 2003, 46: 909-912 및 WO03/11808). 특히, ST1926 (E-3-(4'-하이드록시-3'-아다만틸바이페닐-4-일)아크릴산)으로 명명된 화합물은 넓은 범위의 인간 종양 세포에 대해 강력한 항증식 활성을 갖는 것으로 나타났다.

CD437의 최근에 개발된 유사체의 하나인, 화합물 (E)-4-[3'-(1-아다만틸)-4'-하이드록시페닐]-3-클로로신남산 (3-CI-AHPC) (Dawson, M.I. 등, J. Med . Chem . 2004, 47(14), 3518-3536; WO0348101)은 생체내 및 생체외 모두에서 암세포의 증식을 억제하고 아폽토시스를 유도하는 것으로 보고된다.

특허 JP10182583은 암세포에 대해 세포분화-유도 작용을 갖고 악성 종양, 자가면역 질환 및 파부 질환의 치료를 위한 약품으로 유용한 일부 페닐신나모하이드록삼산 유도체를 기술한다.

도 1은 그의 합성 및 생물학적 검사가 본 출원에 보고된 화합물의 화학적 구조를 나타낸다. 하이드록사믹 기를 함유하는 화합물이 실시예 또는 참조 실시예에 표시된 바와 같은 그들의 동정 번호로 보고되고, 괄호 사이에, 대응하는 카복실산 화합물의 동정 번호가 보고된다. 괄호 안에 번호로 동정된 화합물 및 이들의 대응하는 생물학적 활성 데이터는 단지 비교 목적으로 보고된다.

도 2는 그의 생물학적 검사가 본 출원에 보고되지만, 본 발명의 범위를 벗어나는 화합물의 화학적 구조를 나타낸다. 하이드록사믹 기를 함유하는 화합물이 실시예 또는 참조 실시예에 표시된 바와 같은 그들의 동정 번호로 보고되고, 괄호 사이에, 대응하는 카복실산 화합물의 동정 번호가 보고된다. 괄호 안에 번호로 동정된 화합물 및 이들의 대응하는 생물학적 활성 데이터는 단지 비교 목적으로 보고된다.

본 발명의 화합물은 하이드록사믹 기의 존재를 특징으로 하는데, 이는 놀랍게도 화합물에 현저한 항종양 활성을 부여한다. 특히, 본 발명의 화합물은 관련된 화학적 종류에 속하지만 하이드록사믹 기를 함유하지는 않는 다른 공지된 항종양 화합물에 대해 내성을 갖는, 종양 세포주에 대해 예기치 않은 활성을 나타낸다.

따라서 본 발명의 주된 목적은 화학식 (I)의 바이페닐 및 페닐-나프틸 화합물을 제공하는 것이다.

(I)

상기에서,

ㆍR1은 H, 아다만틸, Cl로 구성된 그룹으로부터 선택되고;

ㆍR2는 OMe, Cl, CN, 및 (CH₂)_nOH로 구성된 군으로부터 선택되고, 여기서 n은 0, 1 및 2 중에서 선택되고; 또는

ㆍR2는, 그것이 연결되는 고리와 함께, 메틸렌- 또는 에틸렌-다이옥시 유도체를 형성하고;

ㆍR3은 H 및 Cl로부터 선택되고;

ㆍA는 하기 이가 기 중의 하나임: [CH=CH] (트랜스), [C≡C], 또는, 그것이 연결되는 고리와 함께, 나프틸 기를 형성함.

이미 언급한 바와 같이, 본 발명의 화합물은 다른 공지된 항종양 화합물에 대해 내성을 갖는 종양 세포에 대해 예기치 않은 항종양 활성을 나타낸다.

바람직하게 이들은 5 이하, 더욱 바람직하게는 1에 가까운 내성 지수 (reference index)를 갖는다. 이 내성 지수는 내성 종양 세포주에 대해 측정된 IC50과 민감성 종양 세포주에 대해 측정된 IC50 사이의 비율이다 [(내성 종양 세포주에 대한 IC50/민감성 종양 세포주에 대한 IC50)]; 이 내성 지수를 결정하기 위하여 "생물학적 연구"로 표제를 붙인 대응 항목에서 가치 기준 (value reference)이 정해진다.

본 발명에 따른 가장 바람직한 화합물의 일부는 하기와 같다:

E-3-(4'-하이드록시-바이페닐-4-일)-N-하이드록시-아크릴아마이드 (ST2782);

E-3-[3'-(1-아다만틸)-4'-하이드록시-바이페닐-4-일]-N-하이드록시-아크릴아마이드 (ST2992);

6-[3-1-(아다만틸)-4-하이드록시페닐]-나프탈렌-2-카복실산 N-하이드록시아마이드 (ST2142);

6-[3-1-(아다만틸)-4-메톡시페닐]-나프탈렌-2-카복실산 N-하이드록시아마이드 (ST3259);

3-[4-(8-아다만탄-1-일-2,3-다이하이드로벤조[1,4]다이옥신-6-일)-페닐]-N-하이드록시-아크릴아마이드 (ST3081);

E-3-(3'-아다만탄-1-일-2-클로로-4'-하이드록시-바이페닐-4-일)-N-하이드록시-아크릴아마이드 (ST3088);

E-3-(3'-아다만탄-1-일-4'-메톡시-바이페닐-4-일)-N-하이드록시-아크릴아마이드 (ST3056);

E-3-(4'-하이드록시메틸-바이페닐-4-일)-N-하이드록시-아크릴아마이드 (ST3258);

E-3-(3'-클로로-4'-하이드록시-바이페닐-4-일)-N-하이드록시-아크릴아마이드 (ST3192);

E-3-[4'-메톡시-바이페닐-4-일]-N-하이드록시-아크릴아마이드 (ST3595);

E-3-[4'-사이아노-바이페닐-4-일]-N-하이드록시-아크릴아마이드 (ST3604); 및

E-3-[4'-클로로바이페닐-4-일]-N-하이드록시-아크릴아마이드 (ST3483).

("실시예"로 표제가 붙은 항목에서 보고된) 얻어진 실험 결과는 화학식 (I)의 화합물이, 단독으로 및 다른 공지된 항종양 약물과 병용하는 경우 모두에서, 종양의 치료를 위해 유용한 제제임을 나타낸다.

본 명세서에 기재된 발명의 다른 목적은 일반 화학식 (I)을 갖는 화합물 및 의학 분야에서 이들의 용도이다.

본 명세서에 기재된 발명의 다른 목적은 활성 성분으로서 화학식 (I)의 화합물과 적어도 약학적으로 허용가능한 부형제 및/또는 희석제를 포함하는 약학 조성물이다.

본 명세서에 기재된 발명의 다른 목적은 일반 화학식 (I)을 갖는 화합물 및 이의 제조를 위한 방법이다.

본 명세서에 기재된 발명의 다른 목적은 종양 병리의 치료를 위한, 활성 성분으로 화학식 (I)의 화합물을 포함하는 약학 조성물로서, 상기 종양은 육종, 암종, 암양종, 골 종양, 신경내분비 종양, 림프 백혈병, 급성 전골수구성 백혈병, 골수성 백혈병, 단핵구성 백혈병, 거대모구성 백혈병 및 호지킨 병으로 구성된 군으로부터 선택된다.

본 명세서에 기재된 발명의 다른 목적은 종양 병리의 치료를 위한, 활성 성분으로 화학식 (I)의 화합물을 포함하는 약학 조성물로서, 상기 종양은 동일한 치료를 위해 사용된 항생제에 다른 항종양 제제대해 약물 내성을 나타낸다.

본 명세서에 기재된 발명의 다른 목적은, 하나 이상의 공지된 항종양 제제와 병용하는, 활성 성분으로 화학식 (I)의 화합물을 포함하는 약학 조성물로서, 상기 항종양 화합물이 알킬화제, 국소이성화제 억제제, 항튜불린 제제, 중격 화합물, 항 대사물, 빈카 알칼로이드와 같은 천연 생성물, 에피포도필로톡신, 항생제, 효소, 탁산, 및 세포분화 화합물로 구성된 군으로부터 선택된다.

상기 세포분화 항종양 제제 중에서, 바람직한 것은 올-트랜스 레티노산 (ATRA)이다.

본 명세서에 기술된 발명의 다른 목적은 종양 병리학의 치료용 약품의 제조를 위한 화학식 (I)의 화합물의 용도이다.

본 명세서에 기술된 발명의 다른 목적은 종양 병리학의 치료용 약품의 제조를 위한 화학식 (I)의 화합물의 용도로서, 상기 종양은 동일한 치료를 위해 사용된 다른 항종양 약물에 대해 약물 내성을 나타낸다.

본 명세서에 기술된 발명의 다른 목적은, 종양 병리학의 치료용 약품의 제조를 위하여, 하나 이상의 공지된 항종양 제제와 병용되는, 화학식 (I)의 화합물의 용도이다.

본 명세서에 기술된 발명의 다른 목적은 급성 전골수구성 백혈병의 치료용 약품의 제조를 위해 올-트랜스 레티노산과 병용되는 화학식 (I)의 화합물의 용도이다.

본 발명의 또 다른 목적은 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제 및/또는 희석제와 함께 활성 성분을 혼합하는 것을 포함하는 본 발명의 약학 조성물을 제조하는 방법이다.

본 발명의 다른 목적은, 화학식 (I)의 화합물의 치료학적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기에 기술된 바와 같은, 종양 병리를 앓고 있는 포유동물을 치료하는 방법이다.

"치료학적 유효량"은 치료 대상에게서 의학적으로 바람직한 결과를 달성하는데 효과적인 양이다. 약학 조성물은 적합한 약학적으로 허용가능한 담체, 동물에 투여하기에 적합한 생물학적으로 합당한 매개체 (예를 들면, 생리 식염수)를 포함하고 약학적으로 사용될 수 있는 조제약 내로 활성 화합물의 가공을 용이하게 해주는 보조제 (예컨대, 부형제, 안정화제 또는 희석제)를 선택적으로 포함한다.

약학 조성물은 투여 방식의 요구를 충족시키기 위한 임의의 허용가능한 방법으로 제형화될 것이다. 투여의 특별한 방식을 허가하기 위한 다른 기술 및 모델과 함께, 생체물질 및 약물 전달을 위한 기타 중합체의 사용이 문헌에 기술되어 있다.

혈액-뇌 장벽의 투과를 향상시키기 위한 본 발명의 화합물의 변형이 또한 유용하다.

투여의 임의의 허용된 방식은 당업계의 숙련자들에 의해 사용되고 결정될 수 있다. 예를 들면, 투여는 피하, 정맥내, 진피내, 근육내, 복막내, 비강내, 종피, 경구, 또는 볼쪽 경로와 같은 다양한 비경구 경로에 의해 이루어질 수 있다.

비경구 투여는 일시 주사에 의해 또는 시간을 두고 순차적 관류에 의해 이루어질 수 있다. 비경구 투여를 위한 조제약은 멸균된 수성 또는 비수성 용액, 현탁액, 및 유탁액을 포함하는데, 이들은 당업계에 공지된 보조제 또는 부형제를 포함할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다. 또한, 적합한 유성 주사 현탁액으로서 활성 화합물의 현탁액이 투여될 수 있다. 적합한 친지질성 용매 또는 매개체는 지방유, 예를 들면, 참기름, 또는 합성 지방산 에스테르, 예를 들면 참기름, 또는 합성 지방산 에스테르, 예를 들면 에틸올레이트 또는 트리글리세라이드를 포함한다.

상기 현탁액의 점도를 증가시키는 성분을 포함할 수 있는 수성 주사 현탁액은, 예를 들면 소듐 카복시메틸 셀룰로스, 솔비톨, 및/또는 덱스트란을 포함한다. 선택적으로, 상기 현탁액은 또한 안정화제를 포함할 수 있다.

약학 조성물은 주사에 의한 투여에 적합한 용액을 포함하고, 부형제와 함께 약 0.01 내지 99%, 바람직하게는 약 20 내지 75%의 활성 화합물을 포함한다. 직장으로 투여될 수 있는 조성물은 좌약을 포함한다.

투여된 용량은 수용자의 연령, 성별, 건강 및 체중, 동시 치료의 종류, 만약 있다면, 치료 빈도, 및 목적하는 효과의 특성에 따라 좌우되는 것으로 이해된다. 투여량은 당업계의 숙련자에 의해 이해되고 결정가능한 바와 같이, 개별적인 환자에게 맞추어 질 것이다. 각각의 치료를 위해 요구되는 총 투여량은 다중 용량으로 또는 단일 용량으로 투여될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 단독으로 또는 그 상태에 처방되거나, 또는 그 상태의 다른 증상에 처방된, 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있다. 일반적으로 활성 성분의 일일 투여량은 체중의 킬로그램 당 0.01 내지 100 밀리그램을 포함한다.

본 발명의 화합물은 생리 식염수와 같은 약학적으로 허용가능한 담체를 이용하여 정맥내로 환자에게 투여될 수 있다.

펩타이드의 세포내 전달을 위한 표준 방법, 예컨대 리포좀을 통한 전달이 사용될 수 있다. 이러한 방법은 당업계의 숙련자들에게 잘 알려져 있다. 본 발명의 제형은 정맥내, 피하, 근육내, 및 복막내와 같이 비경구 투여에 유용하다.

의학 분야에 잘 알려진 바와 같이, 임의의 한 환자에 대한 투여량은 환자의 체적, 체표면적, 투여되는 특정 화합물, 성별, 투여 시간 및 경로, 평소 건강상태, 및 동시에 투여되는 다른 약물을 포함하는 많은 인자들에 따라 좌우된다.

본 명세서에 인용된 모든 참고문헌들은 인용된 문헌들 내에 기재된 모든 데이터, 표, 도면, 및 본문을 포함하여, 그 전체로서 본 명세서에 참고문헌으로 도입된다.

추가로, 본 명세서에 인용된 참고문헌 내에 인용된 참고문헌의 전체 내용도 또한 그 전체가 참고문헌으로 도입된다. 공지된 방법 단계, 통상적인 방법 단계, 공지된 방법 또는 통상적인 방법에 대한 참조는 어떠한 방식으로도 본 발명의 임의의 측면, 기술 또는 실시형태가 관련 선행 기술에 기재되고, 교시되거나 제시되는 것에 대한 승인이 아니다.

일단 본 출원에 기술된 방법 및 물질의 특성을 이해한다면, 추가적인 단계의 필요성 및 종류는 발명의 근본적인 설명 및 일부 적용을 기술하는 비-제한적인 이후의 도면 및 실시예 뿐만 아니라, 선행 기술을 검토함으로써 용이하게 추론될 수 있다.

본 발명의 화합물은 대응하는 카복실산을 출발 물질로 사용하는, 방법에 따라 용이하게 제조될 수 있다. 이러한 대응하는 카복실산은 WO9703682, JP10182583, WO03/11808에 보고된 공정, 및 관련된 간행물, 또는 유기 합성의 표준 공정에 따라서 제조될 수 있다.

용이한 참고문헌으로서, 항목 "실시예"에 보고된 모식도가 사용될 수 있고 화학식 (I)의 특정 화합물의 합성이 용이하게 고안될 수 있을 것이다.

하기 실시예는 언급된 도면을 참고로 하여 본 발명을 더욱 설명한다.

실시예 1:

E-3-(4'- 하이드록시 - 바이페닐 -4-일)-N- 하이드록시 - 아크릴아마이드 ( ST2782 )의 제조

표제 화합물은 하기에 보고된 합성 모식도 1에 따라 제조되었다.

합성 모식도 1

250 mg (1.04 mmol)의 E-4-(4-하이드록시페닐)신남산을 질소 하에서 10 ml의 DMF에 용해시킨 후, 169 mg (1.25 mmol)의 하이드록시벤조트리아졸 수화물 및 259 mg (1.35 mmol)의 1-(3-다이메틸아미노프로필)-3-에틸-카보다이이미드 하이드로클로라이드를 첨가하고 이로부터 수득된 용액을 실온에서 교반 하에 3시간 동안 유지하였다.

하이드록실아민 하이드로클로라이드 (361 mg, 5.2 mmol)에 이어 0.72 ml (5.2 mmol)의 TEA를 첨가한 후, 이 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. DMF를 감압 하에서 제거하고 그 잔사를 물로 세척하여 263 mg의 조 생성물을 수득하였다. 용리액으로 메탄올:물 50/50을 이용한 역상 실리카 겔 상에서의 플래쉬 크로마토그래피 (리크로프렙 [LiCroprep] RP-18, 머크)에 의한 정제를 통해 백색 고형물로서 34 mg (13%)의 표제 화합물을 수득하였다.

실시예 2:

E-3-[3'-(1- 아다만틸 )- 하이드록시 - 바이페닐 -4-일]-N- 하이드록시 - 아크릴아마이드 ( ST2992 )의 제조

표제 화합물은 하기에 보고된 합성 모식도 2에 따라 제조되었다.

합성 모식도 2

80 ml의 DMF 중의 E-4-(3-(1-아다만틸)-4-하이드록시페닐)신남산 (2 g, 5.34 mmol) 용액에 하이드록시벤조트리아졸 수화물 (866 mg, 5.34 mmol) 및 1-(3-다이메틸아미노프로필)-3-에틸-카보다이이미드 하이드로클로라이드 (1130 mg, 6.94 mmol)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 하이드록실아민 하이드로클로라이드 (1856 mg, 26.7 mmol)에 이어서 3.7 ml (26.7 mmol)의 TEA를 첨가한 후, 이 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. DMF를 감압 하에서 제거하고 그 잔사를 물로 세척하여 5 g의 조 생성물을 수득하였다. 용리액으로 다이클로로메탄/메탄올 95:5를 이용한 실리카 겔 (인산염 완충) 상에서의 플래쉬 크로마토그래피에 의한 정제를 통해 백색 고형물로서 950 mg의 표제 화합물을 수득하였다.

실시예 3:

6-[3-1-( 아다만틸 )-4- 하이드록시페닐 ]-나프탈렌-2- 카복실산 N- 하이드록시아마이드 ( ST2142 )의 제조

표제 화합물은 하기에 보고된 합성 모식도 3에 따라 제조되었다.

합성 모식도 3

212 mg (0.53 mmol)의 6-[3-1-(아다만틸)-4-하이드록시페닐]-나프탈렌-2-카복실산을 질소 하에서 8 ml의 DMF에 용해시킨 후, 79 mg (0.58 mmol)의 하이드록시벤조트리아졸 수화물 및 132 mg (0.67 mmol)의 1-(3-다이메틸아미노프로필)-3-에틸-카보다이이미드 하이드로클로라이드를 첨가하고 이로부터 수득된 용액을 실온에서 교반하면서 2시간 동안 유지하였다. 하이드록실아민 하이드로클로라이드 (184 mg, 2.65 mmol)에 이어서 0.36 ml (2.65 mmol)의 TEA를 첨가한 후, 그 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. DMF를 감압 하에서 제거하고 그 잔사를 물로 세척하여 150 mg의 조 생성물을 수득하였다. 용리액으로 메탄올:물 85/15를 이용한 역상 실리카 겔 상에서의 플래쉬 크로마토그래피 (리크로프렙 [리크로프렙] RP-18, 머크)에 의한 정제를 통해 백색 고형물로서 80 mg (41%)의 표제 화합물을 수득하였다.

실시예 4:

3-[4-(8- 아다만탄 -1-일-2,3- 다이하이드로 - 벤조[1,4]다이옥신 -6-일)- 페닐 ]-N-하이드록시- 아크릴아마이드 ( ST3081 )의 제조

표제 화합물은 하기에 보고된 합성 모식도 4에 따라 제조되었다.

합성 모식도 4

60 mg (0.144mmol)의 3-[4-(8-(1-아다만틸)-2,3-다이하이드로-벤조 [1,4]다이옥신-6일)-페닐]-아크릴산, 55 mg (0.144 mmol)의 N-[(다이메틸아미노)-1H-1,2,3-트리아졸로-[4,5-b]피리딘-1-일-메틸렌]N-메틸메탄아미늄-헥사플루오로포스페이트 N-옥사이드 (HATU) 및 50 μl (0.288 mmol)의 DIPEA를 질소 하에서 1 ml의 DMF에 용해시켰다. 그 결과 혼합물을 2분간 교반하였다. (전-활성화 시간), 그 후에 하이드록실아민 하이드로클로라이드 (40 mg, 0.576 mmol)를 첨가하였다. 이 반응액을 실온에서 밤새 교반하였다. 용매의 증발 후에 그 잔사를 빙-냉각시키고, 물을 첨가한 후 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 그 결과 현탁액을 여과한 후 여과물을 물과 다이에틸 에테르로 세척하여 40.5 mg (65%)의 백색 고형물을 수득하였다.

실시예 5:

E-3-(3'- 아다만탄 -1-일-2- 클로로 -4'- 하이드록시 - 바이페닐 -4-일)-N- 하이드록시 - 아크릴아마이드 ( ST3088 )의 제조

표제 화합물은 하기에 보고된 합성 모식도 5에 따라 제조되었다.

합성 모식도 5

5 mg (0.134 mmol)의 E-3-[3'-(1-아다만틸)-2-클로로-4'-하이드록시바이페닐-4-일]-아크릴산, 51 mg (0.134 mmol)의 N-[(다이메틸아미노)-1H-1,2,3-트리아졸로-[4,5-b]피리딘-1-일-메틸렌]N-메틸메탄아미늄헥사플루오로포스페이트 N-옥사이드 (HATU) 및 47 μl (0.288 mmol)의 DIPEA를 질소 하에서 1 ml의 DMF에 용해시켰다. 그 결과 혼합물을 2분간 교반하였다. (전-활성화 시간). 하이드록실아민 하이드로클로라이드 (37 mg, 0.536 mmol)를 첨가하고 그 반응액을 90분간 더 교반하였다. 용매의 증발 후 그 잔사를 빙-냉각시키고, 물을 첨가한 후 실온에서 1시간 동안 교 반하였다. 그 결과 현탁액을 여과하고 물과 다이에틸 에테르로 세척하였다. 조 생성물을 용리액으로 다이클로로메탄/메탄올 9:1을 이용한 실리카 겔 (포스페이트 완충) 상에서의 플래쉬 크로마토그래피로 정제하여 15 mg의 백색 고형물을 수득하였다.

실시예 6:

E-3-(3'- 아다만탄 -1-일-4'- 메톡시 - 바이페닐 -4-일)-N- 하이드록시 - 아크릴아마이드 ( ST3056 )의 제조

표제 화합물은 하기에 보고된 합성 모식도 6에 따라 제조되었다.

합성 모식도 6

450 mg (1.159 mmol)의 E-3-[3'-(1-아다만틸)-2-클로로-4'-메톡시바이페닐-4-일]-아크릴산, 529.2 mg (1.392 mmol)의 N-[(다이메틸아미노)-1H-1,2,3-트리아졸로-[4,5-b]피리딘-1-일-메틸렌]N-메틸메탄아미늄헥사플루오로포스페이트 N-옥사이 드 (HATU) 및 404 μl (2.32 mmol)의 DIPEA를 질소 하에서 13.5 ml의 DMF에 용해시켰다. 그 결과 혼합물을 30분간 교반하였다. (전-활성화 시간). 4.5 ml의 DMF 중의 하이드록실아민 하이드로클로라이드 (161.19 mg, 2.320 mmol) 및 DIEA (404 μl, 2.320 mmol)의 용액을 첨가하고 그 반응액을 2.2시간 동안 더 교반하였다.

공정: 그 후에 반응 혼합물을 수성 HCl (pH 3-4)로 산성화시켰다; 그 결과 현탁액을 여과하고 그 침전물을 수성 HCl (pH 3-4) 및 물로 세척하였다. 이를 그리고 나서 이를 뜨거운 MeOH에 현탁하여 실온으로 냉각시키고 밤새 교반 하에 유지하였다.

결과 현탁액의 여과 및 아세톤으로의 세척을 통해 350 mg의 백색 고형물을 수득하였다 (0.867; 수율: 75%).

실시예 7:

E-3-(4'- 하이드록시 - 바이페닐 -4-일)-N- 하이드록시 - 프로피올아마이드 (ST3056)의 제조

표제 화합물은 하기에 보고된 합성 모식도 7에 따라 제조되었다.

합성 모식도 7

40 mg (0.17 mmol)의 (4'-하이드록시바이페닐-4-일)-프로피노산을 질소 하에서 13 μl의 DMF에 용해시킨 후, 1.2 ml의 CH₂Cl₂를 첨가하고 그 용액을 O℃로 냉각시켰다. 33 μl (0.38 mmol)의 옥살일 클로라이드를 서서히 첨가한 후, 그 용액을 O℃에서 40분간 교반 하에 유지하였다. 0.7 ml의 THF/H₂O 6:1 중의 mg (0.68 mmol)의 하이드록실아민 하이드로클로라이드 및 148 μl (1.06 mmol)의 TEA의 용액을 O℃로 냉각시킨 후, 그 혼합물을 1.5시간 동안 O℃에서 교반하였다. CH₂Cl₂의 첨가 후 유기층을 HCl 2 N로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시킨 후, 여과하고 증발시켜 30 mg의 노란색 고형물을 수득하였다.

용리액으로 물/메탄올 1:1을 이용하는 역상 플래쉬 크로마토그래피 (리크로프렙 RP-18, 머크)에 의한 정제를 통해 백색 고형물로서 15 mg (35%)의 표제 화합물을 수득하였다.

실시예 8:

E-3-[4'- 하이드록시메틸바이페닐 -4-일]-N- 하이드록시 - 아크릴아마이드 ( ST 3258)의 제조

표제 화합물은 하기에 보고된 합성 모식도 8에 따라 제조되었다.

합성 모식도 8

70 mg (0.28 mmol)의 E-4-하이드록시메틸페닐신남산을 질소 하에서 3 ml의 DMF에 용해시킨 후, 107 mg (0.28 mmol)의 HATU 및 97 μl (0.56 mmol)의 DIPEA를 첨가하고 이로부터 수득된 용액을 실온에서 5분간 교반 하에 유지하였다. 하이드록실아민 하이드로클로라이드 (22 mg, 0.31 mmol)의 첨가 후, 그 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. DMF를 감압 하에서 제거하고 그 잔사를 물로 세척한 후 여과하여 48 mg의 백색 고형물을 수득하였다.

실시예 9:

E-3-[3'- 클로로 -4'- 하이드록시바이페닐 -4-일]-N- 하이드록시 - 아크릴아마이드 (ST 3192)의 제조

표제 화합물은 하기에 보고된 합성 모식도 9에 따라 제조되었다.

합성 모식도 9

205 mg (0.75 mmol)의 E-3-클로로-4-하이드록시페닐신남산을 질소 하에서 7.5 ml의 DMF에 용해시킨 후, 285 mg (0.75 mmol)의 HATU 및 97 μl (0.56 mmol)의 DIPEA를 첨가하고 이로부터 수득된 용액을 실온에서 2분간 교반하였다. 하이드록실아민 하이드로클로라이드 (261 mg, 3.75 mmol)의 첨가 후, 그 혼합물을 실온에서 2일간 교반하였다. DMF를 감압 하에서 제거하고 그 잔사를 물로 세척한 후 여과하여 140 mg의 조 생성물을 수득하였다. 용리액으로 물/메탄올 1:1을 이용한 역상 플래쉬 크로마토그래피 (리크로프렙 RP-18, 머크)에 의한 정제 및 다이에틸 에테르로의 결정화를 통해 백색 고형물로서 21 mg의 표제 화합물을 수득하였다.

실시예 10:

6-[3-1-( 아다만틸 )-4- 메톡시페닐 ]-나프탈렌-2- 카복실산 N- 하이드록시아마이드 ( ST3259 )의 제조

표제 화합물은 하기에 보고된 합성 모식도 10에 따라 제조되었다.

합성 모식도 10

메틸 6-(3-아다만틸-4-하이드록시페닐)나프토에이트 (506 mg, 1.23 mmol)를 건조 DMF 중의 NaH (80 mg, 60%) 빙-냉각 현탁액에 첨가하고, 그 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 후, 245 mg (1.7 mmol)의 CH₃I를 첨가하고, 실온에서 90분간 유지하였다. 80 ml의 냉각수로 녹이고, CH₂Cl₂로 반복적으로 추출한 후, EtOAc 건조, 및 연속된 유기상들의 증발, 및 크로마토그래피 (실리카 겔, 헥산/EtOAc 9/1)로 300 mg의 메틸 6-(3-아다만틸-4-메톡시페닐)나프토에이트를 수득하였다. 이 화합물 (235 mg)을 MeOH 중의 1 M NaOH 용액에 현탁하고 그 혼합물을 8시간 동안 환류하였다. 물로 녹이고, 증발, HCl의 첨가 및 여과로 227 mg의 6-(3-아다만틸-4-메톡시페닐)나프토산을 수득하였다 (mp > 300℃).

이 화합물 (100 mg, 0.24 mmol)을 질소 하에서 2.4 ml의 DMF에 용해시킨 후, 92 mg (0.24 mmol)의 HATU 및 0.2 ml (1.21 mmol)의 DIPEA를 첨가하고 이로부터 수득한 용액을 실온에서 2분간 교반 하에 유지하였다. 하이드록실아민 하이드로클로 라이드 (84 mg, 1.21 mmol)의 첨가 후, 그 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. DMF를 감압 하에서 제거하고 그 잔사를 물로 세척한 후 여과하여 111 mg의 조 생성물을 수득하였고, 이를 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔, MeOH/H₂O 85:15)로 정제하였다.

실시예 11:

E-3-[4'- 클로로바이페닐 -4-일]-N- 하이드록시 - 아크릴아마이드 ( ST3483 )의 제조

표제 화합물은 하기에 보고된 합성 모식도 11에 따라 제조되었다.

합성 모식도 11

3 ml의 THF 중의 61 mg (0.22 mmol)의 3-(4-클로로바이페닐일)아크릴산 및 26 mg (0.22 mmol)의 O-테트라하이드로피란일하이드록실아민의 혼합물에 0.45 ml (0.46 mmol)의 리튬 헥사다이메틸실라잔을 첨가하고, 그 혼합물을 질소 하에서 10 분간 교반한 후, 그 반응액을 NH₄Cl 용액으로 식혔다. 일단 실온이 되면, 그 혼합물을 EtOAc로 추출하고, 그 추출물을 증발시켜 79 mg의 3-(4-클로로바이페닐일)아크릴산의 2-테트라하이드로피란일옥시아마이드를 수득하였다. 이 화합물 (79 mg, 0.22 mmol)을 3 ml의 MeOH에 용해시키고, 12 mg (0.066 mmol)의 p-톨루엔설폰산 일수화물을 첨가한 후, 그 혼합물을 실온에서 2일간 교반하였다. 여과 및 MeOH로의 세척을 통해 3-(4-클로로바이페닐일)아크릴산의 하이드록시아마이드를 수득하였다.

실시예 12:

E-3-[4'- 메톡시 - 바이페닐 -4-일]-N- 하이드록시 - 아크릴아마이드 ( ST3595 )의 제조

표제 화합물은 하기에 보고된 합성 모식도 12에 따라 제조되었다.

합성 모식도 12

200 mg (0.83 mmol)의 메틸 4-브로모신나메이트를 건조 톨루엔에 용해시키고, 29 mg (0.025 mmol)의 Pd(PPh₃)₄, 0.5 ml의 EtOH 중의 152 mg (0.91 mmol)의 4- 메톡시벤젠보론산 용액, 물 중의 1.66 ml의 2 M Na₂COa를 첨가한 후, 2시간 동안 환류시켰다. EtOAc의 첨가, 물과 이어서 식염수로의 세척, 여과 및 95/5 내지 8/2의 헥산/EtOAc 혼합물로의 플래쉬 크로마토그래피 (머크 실리카 겔)를 통해 112 mg의 메틸 3-(4-메톡시바이페닐일)아크릴레이트를 수득하였다 (mp. 175-177℃).

6 ml THF 중의 상기 화합물 (110 mg, 0.41 mmol) 및 2-테트라하이드로피란일-O-하이드록실아민 (48 mg, 0.41 mmol)의 용액을 -78℃로 냉각시키고, 0.81 ml의 소듐 헥사메틸다이실라잔을 첨가하고, 2시간 동안 교반한 후, -2O℃로 가온하고, 다시 -78℃로 냉각시키고, NH₄Cl로 식히고, AcOEt로 추출하고, 그 추출물을 증발시켜 145 mg의 3-(4-메톡시바이페닐일)아크릴산의 2-테트라하이드로피란일옥시아마이드를 노란색 고형물로서 수득하였다.

5 ml의 MeOH 중의 상기 화합물 (145 mg, 0.41 mmol) 용액을 23 mg (0.12 mmol)의 p-톨루엔설폰산으로 처리하고, 실온에서 24시간 동안 교반하고, 여과한 후 MeOH로 세척하여 50 mg의 3-(4-메톡시바이페닐일)아크릴산 하이드록시아마이드를 수득하였다.

실시예 13:

E-3-[4'- 사이아노 - 바이페닐 -4-일]-N- 하이드록시 - 아크릴아마이드 ( ST3604 )의 제조

표제 화합물은 하기에 보고된 합성 모식도 13에 따라 제조되었다.

합성 모식도 13

820 mg (3.4 mmol)의 메틸 4-브로모신나메이트를 7 ml의 건조 톨루엔에 용해시키고, 116 mg (0.1 mmol)의 Pd(PPh₃)₄, 2 ml의 MeOH 중의 374 mg (1.1 mmol)의 4-사이아노벤젠보론산 용액, 물 중의 6.8 ml의 2 M Na₂CO₃를 첨가하고 9시간 동안 환류시켰다. EtOAc의 첨가, 물과 이어서 식염수로의 세척, 여과 및 헥산/EtOAc 혼합물 9/1로의 플래쉬 크로마토그래피 (머크 실리카 겔)를 통해 273 mg의 메틸 3-(4-사이아노바이페닐일)아크릴레이트를 수득하였다 (mp. 150-152℃).

14 ml THF 중의 상기 화합물 (270 mg, 1.02 mmol) 및 2-테트라하이드로피란일-O-하이드록실아민 (117 mg, 1.02 mmol)의 용액을 -78℃로 냉각시키고, 1.07 ml의 소듐 헥사메틸다이실라잔을 첨가하고, 2시간 동안 교반한 후, -2O℃로 가온하고, 다시 -78℃로 냉각시키고, NH₄Cl로 식히고, AcOEt로 추출하고, 그 추출물을 증발시키고 헥산/EtOAc 6/4를 이용한 크로마토그래피로 분석하여 189 mg의 3-(4-사이아노바이페닐일)아크릴산의 2-테트라하이드로피란일옥시아마이드를 백색 고형물로서 수득하였다 (mp. 211-213℃).

5 ml의 MeOH 중의 상기 화합물 (187 mg, 0.54 mmol) 용액을 30 mg (0.16 mmol)의 p-톨루엔설폰산으로 처리하고, 실온에서 24시간 동안 교반하고, 여과한 후 MeOH로 세척하여 96 mg의 3-(4-사이아노바이페닐일)아크릴산 하이드록시아마이드를 수득하였다.

참조 실시예

이 항목에서 본 발명자들은 그들의 가장 유사한 동종체들에 대한 청구된 화합물들의 우수성 및 이점을 보여주기 위하여, 비교 목적으로 합성되고 검사된, 일부 화합물들의 합성을 보고한다.

참조 실시예 1:

N- 하이드록시 -3-(4'- 하이드록시바이페닐 -4-일)- 프로피온아마이드 ( ST 3208)의 제조

표제 화합물은 하기에 보고된 합성 모식도 1R에 따라 제조되었다.

합성 모식도 1R

368 mg (1.5 mmol)의 3-(4'-하이드록시바이페닐-4-일)-프로피온산을 질소 하에서 15 ml의 DMF에 용해시킨 후, 568 mg (1.5 mmol)의 HBTU 및 1.23 ml (7.5 mmol)의 DIPEA를 첨가하고 이로부터 수득된 용액을 실온에서 10분간 교반 하에 유지하였다. 하이드록실아민 하이드로클로라이드 (521 mg, 7.5 mmol)의 첨가 후, 그 혼합물을 실온에서 3.5시간 동안 교반하였다. DMF를 감압 하에서 제거하고, 그 잔사를 물로 세척하고 0℃에서 15분간 교반한 후 여과하여 354 mg의 백색 고형물을 수득하였다 (92%).

참조 실시예 2:

E-3-( 바이페닐 -4-일)-N- 하이드록시 - 아크릴아마이드 ( ST3256 )의 제조

표제 화합물은 하기에 보고된 합성 모식도 2R에 따라 제조되었다.

합성 모식도 2R

200 mg (0.89 mmol)의 E-4-페닐신남산을 질소 하에서 9 ml의 DMF에 용해시킨 후, 338 mg (0.89 mmol)의 HATU 및 308 μl (1.78 mmol)의 DIPEA를 첨가하고 이로부터 수득된 용액을 실온에서 2분간 교반 하에 유지하였다. 하이드록실아민 하이드로클로라이드 (68 mg, 0.98 mmol)의 첨가 후, 그 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. DMF를 감압 하에서 제거하고 그 잔사를 물로 세척한 후 여과하여 220 mg의 백색 고형물을 수득하였다.

참조 실시예 3:

E-3-[4'- 하이드록시바이페닐 -3-일]-N- 하이드록시아크릴아마이드 ( ST3284 )의 제조

표제 화합물은 하기에 보고된 합성 모식도 3R에 따라 제조되었다.

합성 모식도 3R

70 mg (0.29 mmol)의 E-3-(4'-하이드록시바이페닐-3-일)-아크릴산을 질소 하에서 3 ml의 DMF에 용해시킨 후, 109 mg (0.29 mmol)의 HBTU 및 100 μl (0.57 mmol)의 DIPEA를 0℃에서 첨가하였다. 5분 후 하이드록실아민 하이드로클로라이드 (20 mg, 0.29 mmol)를 첨가하고 그 혼합물을 0℃에서 10분간 교반한 후, 실온에서 4시간 동안 교반하였다. DMF를 감압 하에서 제거하고 그 잔사를 물로 세척한 후 여과하여 73 mg의 조 생성물을 수득하였다. 용리액으로 CH₂Cl₂/MeOH 95:5를 이용한 KH₂PO₄ 완충 실리카 겔 상에서의 플래쉬 크로마토그래피를 통해 백색 고형물로서 24 mg의 표제 화합물을 수득하였다.

참조 실시예 4:

E,E-5- 바이페닐일 - 펜타디에노산 N- 하이드록시아마이드 ( ST3400 )의 제조

표제 화합물은 하기에 보고된 합성 모식도 4R에 따라 제조되었다.

합성 모식도 4R

168 mg (0.7 mmol)의 E,E-5-바이페닐일-펜타디에노산 (문헌 [L.M. Werbel 등, J. Med . Chem. 10, 366, (1967)]에 따라 제조됨)을 질소 하에서 7 ml의 DMF에 용해시킨 후, 267 mg (0.7 mmol)의 HBTU 및 245 μl (0.56 mmol)의 DIPEA를 첨가하고 이로부터 수득된 용액을 실온에서 10분간 교반 하에 유지하였다. 하이드록실아민 하이드로클로라이드 (54 mg, 0.77 mmol)의 첨가 후, 그 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. DMF를 감압 하에서 제거하고 그 잔사를 물로 세척한 후 여과하여 53 mg의 생성물을 수득하였다.

참조 실시예 5:

E-3-[4'- 다이메틸아미노바이페닐 -4-일]-N- 하이드록시 - 아크릴아마이드 (ST3444)의 제조

표제 화합물은 하기에 보고된 합성 모식도 5R에 따라 제조되었다.

합성 모식도 5R

(0.13 mmol)의 E-4-(4-다이메틸아미노페닐)신남산 (4-다이메틸아미노-브로모벤젠과 메틸 4-브로모신나메이트의 스즈키 반응과 이어서 에스테르의 가수분해에 의해 제조)을 질소 하에서 1.3 ml의 DMF에 용해시킨 후, 55 mg (0.14 mmol)의 HBTU 및 43 μl (0.26 mmol)의 DIPEA를 첨가하고 이로부터 수득된 용액을 실온에서 10분 간 교반 하에 유지하였다. 하이드록실아민 하이드로클로라이드 (10 mg, 0.14 mmol)의 첨가 후, 그 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. DMF를 감압 하에서 제거하고 그 잔사를 물로 세척한 후 여과하고 건조하고 에테르로 식혀 25 mg의 생성물을 수득하였다.

생물학적 연구

세포독성 결과

하이드록삼산 기를 함유하는 일부 바이페닐 및 페닐나프틸 화합물의 세포독성 효과가 여기에 보고된다. 이들 분자들을 카복실산 기를 함유하는 대응 화합물과 구별되는 약리학적 특성을 갖는다. 본 발명의 검사된 화합물 및 카복실산 기 함유 대응 화합물의 화학적 구조를 도 1에 나타내었다. 세포 성장에 대한 화합물의 효과를 조사하기 위하여, NB4 인간 전골수구성 백혈병, NCI-H460 비-소세포 암종 세포, H460/(R9A) (카복실산-함유 화합물에 대해 내성: ST1898, ST1926, ST1964), HCT-116 인간 결장 암종 세포, IGROV-1 및 IGROV-1/Pt (각각, 민감성 난소 암종 및 백금-내성 난소 암종 세포)를 사용하였다. NB4 및 NCI-H460 종양 세포는 10% 소 태아 혈청 (GIBCO)을 포함하는 RPMI 1640에서 배양하였고, HCT-116 종양 세포는 10% 소 태아 혈청 (GIBCO)을 포함하는 맥코이 (McCoy's) 5A에서 배양하였고, IGROV-1 및 IGROV-1/Pt는 10% 소 태아 혈청 (GIBCO)을 포함하는 DMEM에서 배양 하였다.

종양 세포를 96-웰 조직 배양 플레이트에 약 10% 융합성으로 접종하고 적어도 24시간 동안 부착시키고 회수한 채로 두었다. 그 후에 이들의 IC₅₀ 값 (50% 세포 생존을 저해하는 농도)을 측정하기 위하여 각 웰에 약물의 농도를 달리하여 첨가하였다. 상기 플레이트를 37℃에서 24시간 동안 배양하였다. 상기 처리 후반에, 현탁액 상태의 NB4 종양 세포에 대해서, 하기와 같은 과정을 수행하였다: 상기 플레이트를 1600 ×g에서 10분간 원심분리하여 배지 배양물을 제거하고 상등액을 제거하였다. 250 μl PBS를 첨가한 후, 상기 플레이트를 1600 ×g에서 10분간 원심분리하였고, 상등액을 제거하였다. 10% FCS를 포함하는 200 μl/웰의 배지 배양물 RPMI 1640을 첨가하고 상기 플레이트를 37℃에서 추가로 48시간 동안 배양하였다. 상기 플레이트를 다시 1600 ×g에서 10분간 원심분리하고, 배지 배양물을 제거한 후 200 μl PBS 및 50 μl의 냉각 80% TCA를 첨가하였다. 상기 플레이트를 적어도 1시간 동안 얼음 중에서 보관하였다. TCA를 제거한 후, 상기 플레이트를 증류수에 담가 3회 세척하였고 종이 위에서 4O℃에서 5분간 건조시켰다. 그 후에 1% 아세트산 중의 200 μl의 0.4% 설포로다민 B를 첨가하였다. 상기 플레이트를 실온에서 추가로 30분간 방치하였다. 설포로다민 B를 제거하고, 상기 플레이트를 1% 아세트산에 3회 담가 세척한 후, 이들을 종이 위에서 4O℃에서 5분간 건조시켰다. 그 후에 200 μl 트리스 10 mM를 첨가하고, 상기 플레이트를 20분간 교반 하에서 보관하였다. 생존 세포를 540 nm에서 멀티스캔 분광 형광계 (Multiskan spectrofluorimeter)를 이용하여 광학 밀도로서 결정하였다. 부착 상태의 종양 세포 (NCI-H460 및 HCT-116)에 대해서는, 처리 후반에 원심분리 없이 상기 플레이트를 상등액의 제거 및 PBS의 3회 첨가로 세척하는 것을 제외하고는, 상기에 언급된 바와 같은 과정을 수행하였다. 또한 분석 마지막 날에 상등액을 원심분리 없이 제거하였다.

사멸된 세포의 양은 대조군 배양과 비교하여 설포로다민 B 결합에 있어 백분율 감소로서 계산하였다. IC₅₀ 값 (50%의 세포 생존을 저해하는 농도)은 "올핏 (ALLFIT)" 프로그램으로 계산하였다.

내성 종양 세포주 NCI H460 R9A는 ST1926에 대한 내성으로 선택된 클론이었다 (표 3). 내성 종양 세포주를 얻기 위하여, 민감성 NCI-H460 종양 세포를 24시간 동안 2 μM ST1926로 처리하고 7일간의 회복 기간 동안 무약물 배지에서 유지하였다. 그 후에, 생존된 세포를 2 μM (10× IC₅₀) ST1926의 연속적인 선택적 압력을 적용하면서 배양하였다. 내성 NCI-H460 세포를 ST1926 농도를 4 μM (20× IC₅₀)까지 증가시키기 전에 3-4회 계대배양 하였다. 생존된 세포를 96-웰 플레이트에 접종하여 내성 세포 클론을 분리하고 4 μM의 ST1926를 포함하는 완전 배지에서 유지하였다. 상기 종양 세포주를 SRB 세포독성 분석을 위해 접종하기 전에, 무약물 배지에서 1주일 이상 유지하였다.

놀랍게도, 카복실산 기 함유 대응 화합물 (각각 ST2188 및 ST1898)와 비교하여, 하이드록사믹 유도체 ST2782 및 ST3056은 서로 다른 종양 세포주에 대해 향상 된 항-증식 활성을 나타내었다 (표 1). ST2188와 비교할 때 ST2782에 대한 활성 차이가 인상적이다.

표 1: NB4 , IGROV -1 및 IGROV -1/ Pt 종양 세포에 대한 서로 다른 화합물의 세포독성

또한, 하이드록사믹 유도체, ST2782, ST2992, ST3081, ST3088, ST3056, ST2142는 서로 다른 종양 세포에 대해 현저한 항증식 활성을 나타내었다 (표 2).

표 2: NCI - H460 , HCT -116, IGROV -1 및 IGROV -1/ Pt 종양 세포에 대한 서로 다른 화합물의 세포독성

놀랍게도, 이들 화합물은 또한 카복실산 기 (ST1898, ST1926, ST1964) 함유 화합물에 대한 그의 내성에 대해 선발된 폐 암종 세포주 H460/(R9A)에 대한 세포독성 제제로서 효과적이었다.

생존 세포에 대한 화합물의 효과를 평가하기 위하여, 설포로다민 B 검사를 이용하였다. 사멸된 세포의 양을 대조군 배양과 비교하여 설포로다민 B 결합에서 백분율 감소로 계산되었다. IC₅₀ 값 (50%의 세포 생존을 저해하는 농도)은 "올핏 (ALLFIT)" 프로그램으로 계산하였다.

표 3에 나타난 바와 같이, 카복실산 기를 함유하는 대응 화합물, 예컨대 ST1926, ST1964 (CD437), ST1898은 H460/R9A에 대해 34-78배 덜 효과적인 반면, 하이드록사믹 유도체, 예컨대 ST2142, ST2992, ST3056은 완벽히 내성을 극복하였고, 이는 선택된 화합물이 대응하는 카복실산 화합물과는 차별되는 특정한 약리학적 작용을 가짐을 확인시켜 준다. 흥미롭게도, ST2782, ST3081 및 ST3088도 상기와 동일한 특성을 보유한다.

표 3: NCI - H460 , NCI - H460 R9A 종양 세포에 대한 서로 다른 화합물의 세포독성

R.I. [RI = 내성 지수 (내성 종양 세포주에 대한 IC50/민감성 종양 세포주에 대한 IC50)]

세포분화 활성

결과

급성 전골수구성 백혈병 (APL)은 핵 레티노산 수용체 (RAR)를 포함하는 비정상적 융합 단백질의 발현을 야기하는 전형적인 염색체 전위를 갖는 급성 골수 백혈병이다. 이러한 융합 단백질은 종양유전자로 작용하고 세포분화 차단 및 백혈병 클론의 발현을 담당한다. 대부분의 APL 환자에서, 상기 전위는 염색체 15 및 17을 포함하고 전골수구성 백혈병 (PML)-RAR_α의 합성을 야기한다. APL은 세포분화 접근법으로 처리될 수 있는 종양 질환의 유일한 예시를 나타내기 때문에, 본 연구의 대상이다. APL 환자는 올-트랜스 레티노산 (ATRA)의 임상적 완화를 유도하여, 백형병 모세포가 말단 분화 호중구의 많은 특성을 획득하도록 해준다. 이들은 짧은 수 명 및 세포 예정사 또는 아폽토시스의 정상적 과정을 거치는 성향을 포함한다.

APL 환자에게서 탈성된 성공이 백혈병 및 다른 종양성 질환의 치료에 있어서 SPL의 임상적 용도에 대한 의욕을 고취시킨다고 하더라도, 이 화합물의 치료 효과는 내성 및 독성과 같은 문제들로 인해 여전히 부담이 되고 있다. ATRA의 내성 지수를 증가시키기 위한 하나의 가능한 전략은 개별적인 성분들 보다 더욱 강력하고 쉽게 내성을 갖는 ATRA-기반 약리학적 조합의 개발이다.

APL 세포에서 ATRA에 의해 착수된 세포분화 프로그램의 관련 측면은 ATRA 및 그 유도체의 약리학적 활성 연구를 위한 특이적 모델인, 백혈병 모세포의 일차 배양액 및 유도된 NB4 세포주에서 재형될 수 있다. 약리학적 농도의 ATRA는 NB4 모세포의 성장을 정지시키고 이들을 성숙 중성구와 유사한 세포로 분화시킨다. 이후 아폽토시스의 저속 공정이 이어진다. 표 3에 보고된 바와 같이, 본 발명자들은 이렇게 서로 다른 화합물들이 ATRA의 약리학적 활성을 증가시킴을 입증하기 위하여 NB4 세포를 이용하였다. 특히, 상기 화합물에 의해 유도된 NB4 세포를 이용하였다. 특히, 상기 화합물에 의해 유도된 NB4 종양 세포의 분화는 니트로블루 테트라졸륨 (NBT) 환원에 의해 결정되었다. NB4 전골수구성 백혈병 세포를 10% FCS를 함유하는 RPMI 1640 배지에 150000 세포/ml의 농도로 접종하였다. 상기 분자들의 세포분화 효과를 측정하기 위하여, 종양 세포를 적어도 0.4 μM에서부터 시작하여 0.01 μM까지의 서로 다른 농도의 화합물로 처리하였고, 반면 상기 분자의 ATRA 활성을 증가시키는 작용을 측정하기 위하여, NB4 세포를 준최적 농도 (5 nM)에서 ATRA의 존재 또는 부재 시에 상기 분자들의 농도를 증가시키면서 처리하였다.

종양 세포를 배지 배양액을 교체하지 않으면서 37℃에서 3일간 배양하였다. 세포분화 효과를 측정하기 위하여, 500,000 세포를 수집하고, 원심분리한 후 10% FCS, 1 mg/ml의 니트로블루 테트라졸륨 (NBT) 및 100 ng의 PMA (4-포볼-12-리미스테이트-13-아세테이트)를 함유하는 1 ml의 RPMI 1640 배지에 현탁하였다. 제현탁된 종양 세포를 37℃에서 60분간 배양하였다. 배양 후반에, 종양 세포를 원심분리하고, 그 펠렛을 10% 트리톤 ×100을 함유하는 1 ml의 PBS에 재현탁하였다. 이 시료를 초음파 처리하고 흡광도를 분광광도계를 이용하여 540 nm에서 결정하였다. AC50 (활성화 농도)으로서 종양 세포의 분화는 ATRA의 존재 또는 부재 시에 NBT-환원 활성의 최대 유도의 50%를 제공하는 화합물의 농도로서 평가하였다. 표 4에 나타난 바와 같이, 화합물 단독으로는 NB4 종양 세포의 세포분화를 유도할 수 없는 반면, 이들이 준최적 농도의 ATRA (5 nM)와 병용될 때에는, 일부 분자들이 ATRA-유도성 분화를 증가시켰다. 가장 강력한 화합물은 ST2142 (AC50 = 0.31 μM)에 상응하는 0.19 μM의 AC50 값을 갖는 ST2992였고 그 다음으로는 2.47 μM 범위의 AC50 값을 갖는 ST2782였다.

놀랍게도, 가장 유사한 동족체들 (ST1926, ST1964, ST3444, ST3256, ST3400)의 어느 것도 유사한 결과를 나타내지 않았다.

표 4: NB4 종양 세포에 대한 ATRA 의 세포분화 활성에 대한 하이드록사믹 유도체의 증강 효과

Claims (19)

1. 화학식 (I)의 화합물,

   

   (I)

   상기에서,

   ㆍR1은 H, 아다만틸, Cl로 구성된 그룹으로부터 선택되고;

   ㆍR2는 OMe, Cl, CN, 및 (CH₂)_nOH로 구성된 군으로부터 선택되고, 여기서 n은 1 또는 2이고; 또는

   ㆍR2는, 그것이 연결되는 고리와 함께, 메틸렌- 또는 에틸렌-다이옥시 유도체를 형성하고;

   ㆍR3은 H 및 Cl로부터 선택되고;

   ㆍA는 하기 이가 기 중의 하나임: [CH=CH] (트랜스), [C≡C], 또는, 그것이 연결되는 고리와 함께, 나프틸 기를 형성함.
2. 제1항에 있어서, 하기로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 화학식 (I)의 화합물:

   E-3-(4'-하이드록시-바이페닐-4-일)-N-하이드록시-아크릴아마이드;

   E-3-[3'-(1-아다만틸)-4'-하이드록시-바이페닐-4-일]-N-하이드록시-아크릴아마이드;

   6-[3-1-(아다만틸)-4-하이드록시페닐]-나프탈렌-2-카복실산 N-하이드록시아마이드;

   3-[4-(8-아다만탄-1-일-2,3-다이하이드로벤조[1,4]다이옥신-6-일)-페닐]-N-하이드록시-아크릴아마이드;

   E-3-(3'-아다만탄-1-일-2-클로로-4'-하이드록시-바이페닐-4-일)-N-하이드록시-아크릴아마이드;

   E-3-(3'-아다만탄-1-일-4'-메톡시-바이페닐-4-일)-N-하이드록시-아크릴아마이드;

   E-3-(4'-하이드록시-바이페닐-4-일)-N-하이드록시-프로피올아마이드;

   E-3-(4'-하이드록시메틸-바이페닐-4-일)-N-하이드록시-아크릴아마이드;

   E-3-(3'-클로로-4'-하이드록시-바이페닐-4-일)-N-하이드록시-아크릴아마이드;

   E-3-[4'-메톡시-바이페닐-4-일]-N-하이드록시-아크릴아마이드;

   E-3-[4'-사이아노-바이페닐-4-일]-N-하이드록시-아크릴아마이드; 및

   E-3-[4'-클로로바이페닐-4-일]-N-하이드록시-아크릴아마이드.
3. 대응하는 카복실산을 하이드록실아민 하이드로클로라이드와 반응시키는 것을 포함하는 제1항 또는 제2항에 따른 화합물을 제조하는 방법.
4. 약품으로서, 제1항 또는 제2항의 종양 병리의 치료를 위한 화합물.
5. 활성 성분으로 제1항 또는 제2항에 따른 화합물과, 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제 및/또는 희석제를 포함하는 종양 병리의 치료를 위한 약학 조성물.
6. 제5항에 있어서, 종양 병리학의 치료를 위한 약학 조성물로서 상기 종양이 동일한 치료에 사용된 다른 항종양 약물에 대해 내성을 나타내는 조성물.
7. 제5항에 있어서, 상기 종양 병리가 육종, 암종, 암양종, 골 종양, 신경내분비 종양, 림프 백혈병, 급성 전골수구성 백혈병, 골수성 백혈병, 단핵구성 백혈병, 거대모구성 백혈병 및 호지킨 병으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 조성물.
8. 제5항에 있어서, 상기 활성 성분이 하나 이상의 공지된 항종양 제제와 병용되는 조성물.
9. 제8항에 있어서, 상기 공지된 항종양 제제가 알킬화제, 국소이성화제 억제제, 항튜불린 제제, 중격 화합물, 항 대사물, 빈카 알칼로이드와 같은 천연 생성물, 에피포도필로톡신, 항생제, 효소, 탁산, 및 세포분화 화합물로 구성된 그룹으로부터 선택되는 조성물.
10. 제9항에 있어서, 상기 세포분화 항종양 화합물이 올-트랜스 레티노산인 조성물.
11. 활성 성분을 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제 및/또는 희석제와 혼합하는 것을 포함하는 제5항에 따른 조성물을 제조하는 방법.
12. 치료학적 유효량의 제1항의 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 제7항에 따른 질환을 앓고 있는 인간을 제외한 포유동물을 치료하는 방법.
13. 치료학적 유효량의 제2항의 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 제7항에 따른 질환을 앓고 있는 인간을 제외한 포유동물을 치료하는 방법.
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