KR101284382B1

KR101284382B1 - 점액세균 배양추출액을 포함하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101284382B1
Application number: KR1020110072184A
Authority: KR
Inventors: 채희정; 조경연; 강희선; 김소영; 최선주; 윤진권; 박수연
Original assignee: 호서대학교 산학협력단
Priority date: 2011-07-20
Filing date: 2011-07-20
Publication date: 2013-07-09
Also published as: KR20130011204A

Abstract

본 발명은 점액세균 배양추출액을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 점액세균 배양추출액을 유효성분으로 함유하여 항산화 효과 또는/및 티로시나제(tyrosinase) 활성 억제효과가 있어서, 피부미백 또는/및 노화방지효과가 우수한 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

점액세균 배양추출액을 포함하는 화장료 조성물{COMPOSITION COMPRISING EXTRACTION OF MYXOBACTERIUM CULTURES}

현대사회는 평균수명의 연장과 소득수준 향상으로 인해 건강 및 피부에 대한 관심이 높아졌으며 이에 따라 식품, 영양학적인 접근, 천연추출물을 이용한 화장품 원료구현을 통해 피부의 노화를 억제하려는 노력이 증가하고 있다.

일례로, 기미, 주근깨 등 피부에 생기는 색소 침착은 표피 내 멜라닌 증가에 기인하고, 피부색을 결정하는 중요 요인도 멜라닌에 의한 것이다. 활성화된 멜라노사이트에서는 티로시나제의 합성이 촉진되고, 멜라닌의 생성이 항진되어 이를 표피 밖으로 운반, 배출하게 된다(V. J. Hearing and M. Jimenez., Int. J. Biochem,19(20). p.1141, 1987., I. Koiso., Fragrance J. 6, p39, 1990).

그래서, 멜라노사이트 내에서 멜라닌 생성의 억제, 멜라노사이트 자극물질의 조절, 멜라닌 배설을 촉진할 수 있는 미백제를 개발하는 추세이다. 그 중에서 멜라닌 생성 저해제의 연구는 주로 티로시나제 저해제를 개발하는 방향으로 집중되어 왔고, 대표적인 티로시나제 저해제로는 티로시나제 활성부위의 구리 이온에 대한 킬레이트 형성물질, 퀴논류를 페놀류로 환원시키는 비타민 C 등의 환원제 그리고 티로시나제 자체를 변성시키는 바이설파이트 제제 등을 들 수 있다.

한편, 최근 웰빙을 추구하는 식생활 패턴의 변화, 영양 상태의 개선 및 의학의 발달과 더불어 개인의 평균 수명이 점차 증가함에도 불구하고 현대인들은 노화를 포함하는 각종 성인병에 노출되고 있으며 이의 발생 원인으로 활성산소가 주목 받고 있다.

이러한 활성산소들은 효소 불활성화, 지질산화, DNA 변성, 세포노화 등을 초래하기 때문에 산화적 스트레스의 직접적인 원인이 되는 활성 산소를 억제하고 각종 질병과 노화를 예방하기 위한 관심이 증가되고 있다(McCord JM., Fed Proc, 46(7),2402-2406).

이에 따라, 티시나아제 활성 억제효과 또는/및 항산화 효과가 우수하여, 효과적인 피부미백 및 노화방지 기능을 가지는 화장료 조성물의 필요성은 항시 존재하고 있는 실정이다.

상기한 바와 같은 문제점을 해결하기 위한 본 발명은 높은 항산화 효과 및 티로시나제(tyrosinase) 활성 억제 효과를 가지고, 이에 따라 피부미백 및 노화방지효과가 우수한 화장료 조성물을 제공하는 것이 목적이다.

상기한 목적을 달성하기 위한 본 발명은 점액세균(myxobacteria) 배양추출액을 포함하는 화장료 조성물이다.

여기서, 상기 화장료 조성물은 항산화능 또는 티로시나아제(tyrosinase) 활성 억제능을 가지는 것일 수 있다.

그리고, 상기 점액세균은 코랄로코쿠스 코랄로이드(Corallococcus coralloides), 믹소코쿠스(Myxococcus sp.) 및 소란지움 셀룰로숨(Sorangium cellulosum) 중에서 선택된 하나 이상인 것이 가능하다.

또한, 상기 점액세균은 코랄로코쿠스 코랄로이드 KCTC 11967BP인 것이 바람직하다.

또한, 상기 점액세균 배양추출액은 화장료 조성물 전체에 대하여 0.00001 내지 20 중량% 범위 내로 포함된 것이 더욱 바람직하다.

한편, 본 발명의 다른 실시형태는 상기한 화장료 조성물을 포함하고, 피부외용연고, 유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 팩, 에멀젼, 또는 오일젤의 제형을 가지는 화장품일 수 있다.

기타 실시예들의 구체적인 사항들은 상세한 설명 및 도면들에 포함되어 있다.

상기한 본 발명에 의하면, 점액세균 배양추출액을 유효성분으로 함유함으로써, 높은 항산화 효과 및 티로시나제(tyrosinase) 활성 억제 효과를 가지고, 이에 따라 피부미백 및 노화방지효과가 우수한 화장료 조성물을 제공할 수 있다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 점액세균 배양추출액을 포함하는 화장료 조성물의 제조방법을 설명하기 위한 흐름도이고,
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 점액세균 배양추출액을 포함하는 화장료 조성물의 항산화능 실험 결과 그래프이고(sample concentration : 2000㎍/㎖),
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 점액세균 배양추출액을 포함하는 화장료 조성물의 티로시나아제 저해 활성 실험 결과 그래프이고(sample concentration : 2000㎍/㎖),
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 코랄로코쿠스 코랄로이드(KYC1096) 균주의 위상차 현미경 사진이고,
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 코랄로코쿠스 코랄로이드(KYC1096) 균주의 16S rDNA 서열에 의한 분류학적 위치 일례를 나타내는 계통수 모식도이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른 코랄로코쿠스 코랄로이드(KYC1096) 균주의 자실체를 나타내는 현미경 사진이다.

본 발명은 다양한 변환을 가할 수 있고 여러 가지 실시 예를 가질 수 있는 바, 특정 실시 예들을 도면에 예시하고 상세한 설명에서 상세하게 설명하고자 한다. 그러나, 이는 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변환, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.

본 출원에서 사용한 용어는 단지 특정한 실시예를 설명하기 위해 사용된 것으로, 본 발명을 한정하려는 의도가 아니다. 단수의 표현은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한, 복수의 표현을 포함한다. 본 출원에서, "포함하다" 또는 "가지다" 등의 용어는 명세서상에 기재된 특징, 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것이 존재함을 지정하려는 것이지, 하나 또는 그 이상의 다른 특징들이나 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것들의 존재 또는 부가 가능성을 미리 배제하지 않는 것으로 이해되어야 한다.

본 발명은 화장품 제조에 사용되는 화장료 조성물에 대한 것으로, 특히 점액세균(myxobacteria) 배양추출액을 유효성분으로 함유하는 것이다.

점액세균은 그람음성 토양박테리아로써, 두께는 0.7-1.2㎛, 길이는 대략 4-12 ㎛인 담배모양의 간균이다. 점액세균은 항생물질과 가수분해효소 등을 분비함으로써 주변의 생물체를 분해하여 영양분으로 섭취하는 까닭에 많은 종류의 생리활성 물질과 효소를 생산하는 것으로 알려져 있다. 그래서, 신규 생리활성물질을 탐색하는 연구자들이 점액세균에 관심을 가지고 있으나, 점액세균의 분리와 배양이 까다로워 다른 박테리아에 비해 상대적으로 적은 수의 점액세균만이 분리되어왔다(Reichenbach and H, 1999; Gerth et al., 2003).

본 발명자들은 오랜 시간 동안 화장료 조성물로 사용 가능한 새로운 생리활성물질에 대해 연구한 결과, 토양 시료로부터 점액세균을 분리·배양하는데 성공하였고, 그것의 항산화 활성과 티로시나아제 저해 활성을 확인한 후에, 본 발명을 완성하였다.

이에, 본 발명은 점액세균을 배양한 배양추출액을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물이고, 상기 배양추출액은 우수한 항산화 능력 또는/및 티로시나제 활성 억제 능력을 가지는바, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 피부미백 또는/및 노화방지에 탁월한 효과를 가진다.

일 구체예로, 상기 점액세균은 코랄로코쿠스 코랄로이드(Corallococcus coralloides), 믹소코쿠스(Myxococcus sp.) 및 소란지움 셀룰로숨(Sorangium cellulosum) 중에서 선택된 하나 이상일 수 있다.

본 발명자들은 상기 점액세균 중에서 코랄로코쿠스 코랄로이드 균주를 동정한 후, 2011년 06월 17일자로 한국생명공학연구원(Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology, KRIBB)에 기탁하여 각각 수탁번호 KCTC 11967BP를 부여받았다. 이에 따라, 본 발명은 수탁번호 KCTC 11967BP 로 기탁된 점액세균 균주의 배양추출액을 유효성분으로 포함하는 것이 바람직하다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 유효성분으로써 상기 점액세균 배양추출액을 전체 화장료 조성물의 중량에 대하여 0.00001 내지 20 중량%로 포함하는 것이 바람직하고, 더욱 바람직하게는 0.01 내지 10 중량%로 포함되는 것이다. 상기 함량이 0.00001 중량% 미만일 경우에는 뚜렷한 효과를 기대할 수 없고, 20 중량%를 초과할 경우 화장료의 물성을 저하시킬 우려가 있다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 점액세균 배양추출액을 포함하는 화장료 조성물의 제조방법을 설명하기 위한 흐름도이다.

먼저, 본 발명에 따른 점액세균 배양추출액에 사용할 원료로 점액세균을 토양으로부터 분리한다. 이때 분리된 점액세균을 VY/2 배지에 접종하여 배양한다. 이 후 배양된 점액세균을 CSG/1 또는 CTS 배지에 접종하여 진탕배양한다. 배양과정을 모두 진행하면 50% acetone와 100% acetone로 추출하고 감압 여과하여 배양추출물을 수득할 수 있다. 이와 같이 수득된 추출물을 감압건조하여 본 발명에 따른점액세균 배양추출액을 얻을 수 있다.

이러한 본 발명에 따른 점액세균 배양추출액의 제조방법에 의하면, 항산화 효과와 미백효과가 우수한 점액세균 배양추출액을 제조할 수 있다.

한편, 본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림,로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 피부외용연고, 유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 팩, 에멀젼, 또는 오일젤의 제형으로 제조될 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 화장료에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함하는 것이 가능하다.

일 구체예로, 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

일 구체예로, 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

일 구체예로, 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

일 구체예로, 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

일 구체예로, 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로써, 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르,이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드,지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명은 하기의 실시예에 의하여 보다 더 잘 이해 될 수 있으며, 하기의 실시예는 본 발명의 예시 목적을 위한 것이며, 첨부된 특허청구범위에 의하여 한정되는 보호범위를 제한하고자 하는 것은 아니다.

실시예 : 점액세균 배양추출액을 포함하는 화장료 조성물의 제조

실시예 1 : 토양시료로부터 점액세균의 분리

본 발명자들은 먼저 점액세균을 분리하기 위해 전라북도, 충청남도, 경기도, 경상북도, 전라남도, 제주도, 부산 등에서 토양 시료를 채취하였다.

그런 다음, 채취한 각각의 토양을 야마나카 등의 방법(S. Yamanaka, A. Kawaguchi and K. Komagata, J. Gen. Appl. Microbiol. 33:247, 1987)에 따라 처리하여, 다양한 종류의 점액세균과 함께 본 발명에 따른 기능을 가지는 점액세균 균주를 분리하였고, 이를 국가지정연구소재은행인 점액세균은행(www.myxobank.or.kr)에 기탁하였으며, CE1062, CE1096, CE1918, CE1931, CE1988, CE2022, CE2037, CE2058, CE2325, CE2446, CE3078, CE3082, CE3086, CE3087, CE3134, CE3338,CE3380, CE3382, CE3393, CE3396, CE3399 로 명명하였다.

그리고, 이러한 각 균주의 형태와 각종 배지상의 생육상태 및 생리적 특성 등을 조사한 결과, 상기 각 균주는 코랄로코쿠스 코랄로이드(Corallococcus coralloides), 믹소코쿠스(Myxococcus sp.) 또는 소란지움 켈룰로숨(Sorangium cellulosum)인 것을 확인하였다.

토양 시료별 각 점액세균 및 그것의 번호는 하기 표 1에 나타낸 바와 같다.

토양 시료별 점액세균

MyxoBank No.	Genus	Species	Strain No.	Media	지역
CE1062	Myxococcus	sp .	KYC1062	CTS	전북 무주
CE1096	Corallococcus	coralloides	KYC1096	CTS	충남 논산군
CE1918	Myxococcus	sp .	KYC1918	CTS	경기 양평군
CE1931	Myxococcus	sp .	KYC1931	CTS	경기 양평군
CE1988	Myxococcus	sp .	KYC1988	CTS	경북 안동
CE2022	Myxococcus	sp .	KYC2022	CTS	전북 담양군
CE2037	Myxococcus	sp .	KYC2037	CTS	전북 남원
CE2058	Myxococcus	sp .	KYC2058	CTS	전북 담양군
CE2325	Myxococcus	sp .	KYC2325	CTS	전남 순천시
CE2446	Myxococcus	sp .	KYC2446	CTS	제주 남제주군
CE3078	Sorangium	cellulosum	KYC3078	CTS	경북 영덕
CE3082	Sorangium	cellulosum	KYC3082	CSG /1	강원도 화천
CE3086	Sorangium	cellulosum	KYC3086	CSG /1	강원도 화천
CE3087	Sorangium	cellulosum	KYC3087	CSG /1	전북 전주
CE3134	Sorangium	cellulosum	KYC3134	CSG /1	전북 전주
CE3338	Sorangium	cellulosum	KYC3338	CSG /1	전북 무주
CE3380	Sorangium	cellulosum	KYC3380	CSG /1	경북 김천
CE3382	Sorangium	cellulosum	KYC3382	CSG /1	전남 여수
CE3393	Sorangium	cellulosum	KYC3393	CSG /1	경북 포항
CE3396	Sorangium	cellulosum	KYC3396	CSG /1	부산 기장군
CE3399	Sorangium	cellulosum	KYC3399	CSG /1	부산 사상구

* MyxoBank No. : 국가지정연구소재은행인 점액세균은행(www.myxobank.or.kr)에의 기탁번호

실시예 2 : 점액세균 균주의 배양

상기 실시예 1에 따라 얻은 토양 시료를 ST21(K₂HPO₄, yeast extract, KNO₃, MgSO₄, FeCl₃, MnSO₄·7H₂O and 1.5% agar) 배지를 이용하여 32℃에서 점액세균을 배양하여 분리하였다. 그런 다음, 상기 분리된 점액세균을 VY/2(0.5% baker's yeast, 0.1％ CaCl₂2H₂O and 1.5% agar) 배지를 이용하여 계대하여 점액세균 균주를 배양하였다.

실시예 3: 점액세균 배양추출액 제조

상기 실시예 2에서 배양한 점액세균 균주를, 멸균된 Amberlite XAD16과 CSG/1배지(Glucose, Soluble starch, Raffinose, Casitone, MgSO₄7H₂O, CaCl₂ 2H₂O, K₂HPO₄, 미량원소, Vitamin B-12) 또는 XAD16과 CTS배지(Casitone, MgSO₄·7H₂O, HEPES, 미량원소, Vitamin B-12)가 들어있는 플라스크에 접종하고 32℃에서 5일간 진탕배양하였다. 진탕배양 후 bead와 세포가 가라앉을때까지 기다린 후 상등액을 버리고, 같은 방법으로 증류수를 이용해 washing 하였다. washing한 bead와 세포에 50% acetone을 2ml 넣고 교반하여 상등액을 취하고 위와 같은 과정을 한번 더 수행하였다. 그 후 같은 방법으로 100% acetone을 2ml 넣고 교반하여 상등액을 취하고 같은 방법으로 한번 더 수행해 50% acetone로 추출하여 상등액을 취한 후, 한 곳으로 모았다. 수득된 추출물을 감압 여과 및 건조하여 본 발명에 따른 점액세균 배양추출액을 얻었다.

실험예 1 : 점액세균 배양추출액의 항산화 활성 분석

상기 실시예를 통해 제조한 각각의 점액세균 배양추출액을 2000㎍/㎖의 농도에서 분석하였다. 점액세균 배양추출액의 전자 공여능은 DPPH(1,1-diphenyl-2-picrydrazyl(1.1-다이페닐 1-2 피크릴하이드라일))를 사용하여 측정하였다. 점액세균 배양추출액에 DPPH 용액을 혼합한 후, 효소면역분석기(Microplate reader) (VERSAmax, Molecular Device, CA, USA)를 이용하여 515nm에서 흡광도를 측정하였으며, 양성대조군으로 비타민 C를 사용하였다. DPPH 라디칼 소거능은 다음과 같이 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 나타내었다.

그 결과는 하기 표 2와 도 2에 나타내었고, 여기에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 점액세균 배양추출액은 높은 항산화 활성을 보이는 것으로 확인되었다. 특히, KYC1096, KYC1988, KYC2037는 80%이상의 DPPH 저해활성을 보이는 것으로 보아, 이에 따른 점액세균 배양추출물은 기능성 화장품 소재로 사용하기에 충분한 것을 알 수 있다.

각 점액세균 배양추출액 종류에 따른 DPPH 저해활성(sample concentration : 2000㎍/㎖)

Strain No.	DPPH 저해활성(%)
KYC1062	46.78
KYC1096	88.96
KYC1918	68.99
KYC1931	65.20
KYC1988	80.56
KYC2022	24.15
KYC2037	82.59
KYC2058	53.07
KYC2325	78.27
KYC2446	42.35
KYC3078	23.53
KYC3082	26.69
KYC3086	15.46
KYC3087	41.18
KYC3134	71.37
KYC3338	50.96
KYC3380	67.49
KYC3382	27.32
KYC3393	26.24
KYC3396	54.84
KYC3399	40.23

실험예 2: 점액세균 배양추출액의 티로시나제 활성 분석

상기 실시예를 통해 제조한 각각의 점액세균 배양추출액을 2000㎍/㎖의 농도에서 분석하였다. 티로시나제 저해활성은 일반적으로 분광학적인 방법에 의해 측정한다. 본 실험에서는 0.5M 인산완충용액(phosphate buffer, pH 6.5) 0.5 ㎖에 10mM L-DOPA를 녹인 기질액 0.2 ㎖에 상기 실시예에서 수득한 추출물을 농도별로 시료용액 0.1 ㎖의 혼합액에 머쉬룸 티로시나제(mushroom tyrosinase)(110U/㎖) 0.2 ㎖을 첨가하여 25℃에서 5분간 반응시켰다. 그 다음 반응액 중에 생성된 도파크롬(dopachrome)을 마이크로플레이트리더(microplate reader)를 이용하여 475nm에서 흡광도를 측정하였으며, 양성대조군으로 kojic acid를 사용하였다. 티로시나제 저해활성은 아래의 식에 따라 계산하여 시료의 효소 저해활성 정도를 구하였다.

그 결과는 하기 표 3과 도 3에 나타내었고, 여기에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 점액세균 배양추출액은 높은 티로시나제 저해활성을 보이는 것으로 확인되었다. 특히, KYC1096, KYC2058, KYC3086은 80%이상의 티로시나제 저해활성을 보이는 것으로 보아, 이에 따른 점액세균 배양추출물은 높은 미백 활성을 가지는 기능성 화장품 소재로 사용하기에 충분한 것을 알 수 있다.

각 점액세균 배양추출액 종류에 따른 티로시나제 저해활성(sample concentration : 2000㎍/㎖)

Strain No.	티로시나제 저해활성(%)
KYC1062	63.43
KYC1096	87.02
KYC1918	68.96
KYC1931	49.54
KYC1988	60.51
KYC2022	49.13
KYC2037	48.85
KYC2058	86.42
KYC2325	70.67
KYC2446	71.72
KYC3078	50.86
KYC3082	58.65
KYC3086	88.40
KYC3087	67.43
KYC3134	57.13
KYC3338	66.80
KYC3380	70.21
KYC3382	58.04
KYC3393	54.82
KYC3396	75.70
KYC3399	49.99

실험예 3: 점액세균의 동정

상기 실시예를 통해 분리, 배양한 균주 중 KYC1096(코랄로코쿠스 코랄로이드)를 동정하기 위하여, 생리적, 생화학적인 검사를 수행하였다(BERGEY's Manual of Systemic Bacteriology).

그 결과, 도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 점액세균(KYC1096) 균주의 위상차 현미경 사진이다. 여기에 도시된 바와 같이, 상기 점액세균은 간균으로 약 5㎛ 내외의 크기를 가지며, 절대호기성이다. CY(0.3% casitone, 0.1% yeast extract, 0.1% CaCl₂2H₂O, 1.5% agar)배지에서 영양생장하였으며, VY/2(0.5% baker's yeast, 0.1％ CaCl₂2H₂O, 0.5 μg/μl vitamin B-12, 1.5% agar)배지상에서 코랄로코쿠스 코랄로이드 특유의 자실체를 형성했다.

다른 한편으로, 더욱 정확한 균주의 동정을 위하여 16S rDNA 서열에 의한 균주의 계통학적 분류를 실시하였다. 이를 위하여 상기 KYC1096 균주를 대상으로 CY배지에서 배양한 후, 이들 균체로부터 DNA를 추출하였으며, 이를 PCR(primers: 27F, 5'-GAGTTTGATCCTGGCTCAG-3' 및 1544R, 5'-AGAAAGGAGGTGATCCAGCC-3'/ 30 cycles: 94℃ 30 sec, 55℃ 30 sec, 72℃ 2 min)로 증폭시켜 정제하고, (주)마크로젠에 의뢰하여 염기서열을 분석하였다.

그 결과 KYC1096 균주의 16S rDNA 서열에 의한 염기서열은 별도로 첨부한 서열번호 1과 같이 1,493bp가 분석되었으며, 16S rDNA 서열에 의한 유효세균과 그 관련세균의 분류학적 위치를 나타내는 계통수(philogenetic tree)는 도 5와 같이 나타났다. 즉, Corallococcus는 현재 2종(2011년 6월 기준)이 존재하는데, KYC1096 균주는 Corallococcus coralloides 및 Corallococcus exiguus 표준균주와 16S rDNA 염기서열이 99.87% 일치하는 매우 높은 유사도를 보였으며, 이외에 가장 가까운 균주로서 Myxococcus fulvus의 표준균주와는 98.2%의 유사도를 보여 Corallococcus 속에 속하는 균주로 판단되었다. 그런데 상기 KYC1096 균주는 VY/2배지상에서 전형적인 Corallococcus coralloides의 자실체를 형성하였으므로(도 6), 본 발명에 따른 상기 균주를 코랄로코쿠스 코랄로이드(Corallococcus coralloides) KYC1096 균주라고 최종 명명하였다.

상기한 바에 따르면, 본 발명에 따른 점액세균 배양추출액은 높은 항산화 효과 및 티로시나제 활성 억제 효과를 가지고, 이에 따라 상기 점액세균 배양추출액을 유효성분으로 함유하는 조성물은 우수한 피부미백 및 노화방지 효과를 제공하는 화장료 조성물로 활용될 수 있을 것이다.

한국생명공학연구원

KCTC11967BP

20110617

서열목록 전자파일 첨부

Claims

점액세균(myxobacteria) 배양추출액을 포함하고,
상기 점액세균은 코랄로코쿠스 코랄로이드(Corallococcus coralloides), 믹소코쿠스(Myxococcus sp.) 및 소란지움 셀룰로숨(Sorangium cellulosum) 중에서 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 항산화능 또는 티로시나아제(tyrosinase) 활성 억제능을 가지는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
삭제
제1항에 있어서, 상기 점액세균은 코랄로코쿠스 코랄로이드 KCTC11967BP 인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 점액세균 배양추출액은 화장료 조성물 전체에 대하여 0.00001 내지 20 중량% 범위 내로 포함된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항, 제2항, 제4항 및 제5항 중 어느 한 항에 따른 화장료 조성물을 포함하고, 피부외용연고, 유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 팩, 에멀젼, 또는 오일젤의 제형을 가지는 화장품.