KR101224486B1 - 밀순 추출물을 유효성분으로 포함하는 당뇨병 예방 및 치료용 조성물 - Google Patents
밀순 추출물을 유효성분으로 포함하는 당뇨병 예방 및 치료용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 밀순 추출물을 유효성분으로 포함하는 당뇨병 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다. 보다 구체적으로 β-glucan 및 GABA를 다량 함유하는 밀순 저온 추출물을 유효성분으로 포함하는 당뇨병 예방 및 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 종전의 치료제를 보완하여 효과적인 당뇨 및 그 합병증 치료제로 사용될 수 있으며, 음료 또는 건강기능 보조식품으로 사용될 수 있다.
본 발명의 밀순 저온 추출물은 항당뇨 가능성을 갖는 유효성분이 다량으로 함유되어 보다 경제적이면서 효율적인 제품 생산이 가능하게 될 것이다.
본 발명은 종전의 치료제를 보완하여 효과적인 당뇨 및 그 합병증 치료제로 사용될 수 있으며, 음료 또는 건강기능 보조식품으로 사용될 수 있다.
본 발명의 밀순 저온 추출물은 항당뇨 가능성을 갖는 유효성분이 다량으로 함유되어 보다 경제적이면서 효율적인 제품 생산이 가능하게 될 것이다.
Description
본 발명은 밀순 추출물을 유효성분으로 포함하는 당뇨병 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다. 보다 구체적으로 β-glucan 및 GABA를 다량 함유하는 밀순 저온 추출물을 유효성분으로 포함하는 당뇨병 예방 및 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
현재 많이 이용되고 있는 당뇨병 치료 요법으로는 인슐린 요법과 경구혈당 강하제가 그 대표적인 예이다. 이를 보다 자세히 살펴보면, 인슐린 요법은 그 효과가 확실하지만 매일 주사를 맞아야 하는 번거로움이 있기 때문에 약물요법이 인슐린 요법보다 선호되는 경향이 있다. 그러나 설폰요소제는 경우에 따라서 그 효능에 한계가 있고 또한 비구아니드 제제는 유산증 같은 중대한 부작용을 초래할 수 있기에 그 적응이 더욱 제한적이다. 따라서 기존 약제들을 보완하거나 능가할 수 있는 약제의 개발이 요구되고 있다.
이러한 요구에 부응하여 인슐린분비 촉진물질 (pirogliride, linogliride, 2,4-디아미노-5-시안-브로모리피딘, incretin, repaglinide, nateglinide), 인슐린 작용 증강제 (troglitazone), 인슐린 저항성 개선제, 표적조직에서 인슐린 유사 효과를 나타내는 약물 (pirogliride, linogliride, dichiloroacetate, insulin lispro, insulin aspart), 포도당신합성 억제제 (지방분해 억제제, 카르니틴 전이효소 억제제, 베타산화억제제), 인슐린 길항호르몬 억제제 (somatostain, 글루카곤 유도체), 탄수화물 흡수를 지연시키는 약제 (식이성 섬유, 알파글루코시테이즈 억제제), amylin 유사체 (pramlinitide)에 대한 많은 연구가 수행되고 있다.
경구혈당 강하제는 식이요법과 운동요법으로 혈당조절이 적절히 이루어지지 않는 제2형 당뇨병 환자에게 시행되고 있으며, 당뇨병에 수반되는 탄수화물, 지질 및 단백질 대사장애를 효과적으로 교정하여 줄 수 있는 경구혈당 강하제의 개발은 이미 지난 50여 년 전부터 계속되어 오고 있다. 그 동안 수많은 약제들이 개발되어 왔으나, 대부분은 독제의 약성이나, 유효성 혹은 안전성이 문제되어 현재 임상에 사용되고 있는 약제는 소수에 불과하다.
또한 이들 중 일부는 현재 시판되고 있으나, 상당수가 아직도 인체에 사용하기에는 미흡한 실험단계에 있거나 독성 검사단계에 있다. 특히, 합성 약물들에 의한 당뇨치료는 그 효과가 뛰어나지만, 그에 대한 부작용의 위험이 동반되기 때문에 최근 천연물에 함유된 생리활성 물질을 분리 정제하여 이를 건강 유지와 질병 예방을 위해 활용하고자 하는 연구가 활발히 진행되고 있는데, 천연물에 함유된 물질은 독성 및 알레르기 반응으로 인한 부작용이 합성 의약품에 비해 적기 때문에 이를 이용한 기능성 식품 및 신약개발의 소재로 많은 관심의 대상이 되고 있다.
오래전부터 밀 (Triticum aestrivum)은 주로 온대지방에서 재배되는 세계 제 1위의 생산량을 유지하는 곡물이다. 일반적으로 줄기는 뭉쳐서 곧게 자라며, 잎 표면은 밋밋하고 마디가 길며, 넒은 바소 모양으로 자라면서 끝이 점점 좁아지고 뒤로 처진다. 우리나라는 예로부터 밀을 귀한음식에 사용하였으며, 동의보감에서는 밀은 성질이 약간 차고, 맛이 달며 무독하여 번열을 제거하고, 갈증을 줄이며, 이뇨작용 및 간기를 보양한다고 하였다. 최근 건강기능성 식품으로 발아 밀, 통밀 등을 이용하려는 추세이며, 그 효능에 많은 관심을 보이고 있다. 하지만 오래전부터 외국에서 주요 건강기능성 소재로 알려진 밀순에 대한 연구가 우리나라에서는 매우 미흡한 실정이다.
이에 본 발명자는 급속도로 늘어가는 당뇨관련 치료시장에 기존 치료 약품들의 문제점을 해결할 수 있도록 천연물 특히, 밀순을 이용한 당뇨 치료 및 예방에 효과적인 조성물을 고안하고자 하였다.
본 발명의 목적은 밀순 추출물을 유효성분으로 포함하는 당뇨병 예방 및 치료용 조성물을 제공하고자 하는 것이다. 보다 구체적으로 β-glucan 및 GABA를 다량 함유하는 밀순 저온 추출물을 유효성분으로 포함하는 당뇨병 예방 및 치료용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명은 밀순 추출물을 유효성분으로 포함하는 당뇨병 예방 및 치료용 약학 조성물을 제공한다.
상기 밀순 추출물은 동결건조한 밀순 분말에 정제수를 포함한 물을 첨가한 후 12시간 내지 36시간 동안 2~5℃의 저온에서 추출하는 것이 바람직하다.
상기 밀순 추출물에 베타-글루칸 (β-glucan) 또는 γ-아미노부티르산 (Gamma-Amino Butyric Acid, GABA)를 추가로 첨가하는 것을 포함할 수 있다.
상기 베타-글루칸 (β-glucan)은 1 내지 100mg/kg, γ-아미노부티르산 (Gamma-Amino Butyric Acid, GABA)은 0.1 내지 100mg/kg를 추가하는 것이 바람직하다.
또한 본 발명은 밀순 추출물을 유효성분으로 포함하는 당뇨병 예방 및 치료용 건강기능식품을 제공한다.
건강기능식품은 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 것을 포함할 수 있다.
상기 밀순 추출물에 베타-글루칸 (β-glucan) 또는 γ-아미노부티르산 (Gamma-Amino Butyric Acid, GABA)를 추가로 첨가하는 것이 바람직하다.
상기 베타-글루칸 (β-glucan)은 1 내지 100mg/kg, γ-아미노부티르산 (Gamma-Amino Butyric Acid, GABA)은 0.1 내지 100mg/kg를 추가하는 것이 바람직하다.
본 발명은 종전의 치료제를 보완하여 효과적인 당뇨 및 그 합병증 치료제로 사용될 수 있으며, 음료 또는 건강기능 보조식품으로 사용될 수 있다.
본 발명의 밀순 저온 추출물은 항당뇨 가능성을 갖는 유효성분이 다량으로 함유되어 보다 경제적이면서 효율적인 제품 생산이 가능하게 될 것이다.
도 1은 다양한 방법에 의해 추출된 밀순 추출물을 나타낸다.
도 2는 밀순 추출물의 인슐린 의존형 당뇨모델 마우스에서 췌장 베타세포에 대한 영향을 나타낸다.
도 2는 밀순 추출물의 인슐린 의존형 당뇨모델 마우스에서 췌장 베타세포에 대한 영향을 나타낸다.
본 발명은 밀순 추출물을 유효성분으로 포함하는 당뇨병 예방 및 치료용 조성물을 제공하고자 하는 것이다.
본 명세서에 사용된 용어 당뇨병은 당뇨병으로 인한 합병증, 예를 들면, 고혈압, 고지혈증, 간병증, 신병증을 포함하는 개념이다.
본 명세서에서 사용된 용어 "예방"은 밀순 추출물을 포함하는 조성물의 투여로 당뇨병 또는 당뇨 합병증의 발병을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "치료"란 밀순 추출물을 포함하는 조성물의 투여로 당뇨의 증세 및 당뇨 합병증을 호전시키거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "추출물 (extract)"란 천연물로부터 분리된 활성성분 즉, 목적하는 활성을 보이는 물질을 의미한다. 상기 추출물은 물, 유기용매 또는 이들의 혼합용매를 이용하는 추출과정으로 획득할 수 있으며, 추출물 이의 건조 분말 또는 이를 이용하여 제형화된 모든 형태를 포함한다. 또한, 상기 추출물에
는 상기 추출과정을 거친 추출액을 분획한 것도 포함된다.
본 발명의 밀순에 함유되어 있는 유용성분으로 곡류의 배유와 호분층의 세포벽을 구성하는 비전분 다당류 (nonstarch polysaccharide) 베타-글루칸 (β-glucan)과 포유류의 중추신경 시스템의 신경전달물질인 GABA 등이 함유되어 있다. 수용성 β-glucan은 혈중 콜레스테롤 수치를 저하시키는 등의 인체 건강에 유용한 생리적 작용이 있음이 잘 알려져 있다.
GABA는 세계적으로도 식품소재로서 1980년대 중반부터 이용되기 시작하였으며, 2001년경부터 본격적으로 시장을 형성하기 시작한 성분이다. GABA는 γ-아미노부티르산 (Gamma-Amino Butyric Acid)의 약자로 GABA라는 단어가 가장 널리 일반적으로 사용되고 있다. GABA는 4개의 탄소로 구성되어 있고, glutamate decarboxylase (GAD)의 L-glutamate의 탈탄산 반응에 의해 CO2와 함께 생성되며 (Satya Narayan & Nair, 1990), pyridoxal-5'-phosphate dependent 경로로 합성되는 것으로 알려져 있다 GABA는 신경전달물질로서 역할 이외에도 최근 췌장 세포에서 발현한다고 알려져 있다. GABA는 인슐린과 더불어 베타세포에서부터 분비되며, GABAA수용체를 활성화는 글루카곤 분비를 억제하며, 당뇨성 시력저하와 말초신경병증을 개선시킨다고 보고되었다.
밀순, 특히 어린싹에는 다양한 영양성분과 생리활성물질에 함유되어 있음이 알려져 있다. 발아밀을 포함해서 밀순에는 단백질, 탄수화물 뿐만 아니라 유리아미노산, 비타민 및 클로로필 등이 다량을 포함하고 있으며, 다수 무기물 및 항산화물질을 함유하고 있다.
상기 밀순 추출물은 동결건조한 밀순 분말에 정제수를 포함한 물을 첨가한 후 12시간 내지 36시간 동안 2~5℃의 저온에서 추출하는 것이 바람직하다.
상기 동결건조한 밀순 분말은 밀순을 2~4일 동안 동결건조한 후 이를 분쇄기를 이용하여 평균분말입도 0초과 1mm이하로, 130 내지 180 rpm로 분쇄하는 것이 바람직하다. 상기 평균분말입도는 생밀순에서의 유용성분 추출율을 높이기 위한 방법으로 용매와의 비 표면적을 크게 해주기 위함이다. 분쇄기로 분말화하여 차광된 2~5℃에 보관하여 하는 것이 바람직하다. 이는 불필요한 박테리아 증식을 방지하기 위해 온도를 제한하는 것이다.
상기와 같은 밀순의 저온 추출물은 동결건조한 밀순 분말, 밀순의 에탄올 추출물, 밀순의 열수 추출물보다 항당뇨 효능을 가지는 수용성 베타-글루칸 (β-glucan) 및 γ-아미노부티르산 (Gamma-Amino Butyric Acid, GABA)의 함량이 높음을 알 수 있다 (표 2).
따라서 밀순 저온 추출물은 인슐린 의존성 당뇨 모델 마우스에서 체중의 경우 정상 대조군과 비슷하게, 혈중 포도당 농도의 경우 동결건조한 밀순 분말, 밀순의 에탄올 추출물, 밀순의 열수 추출물보다 낮게, 혈중 인슐린 농도의 경우 동결건조한 밀순 분말, 밀순의 에탄올 추출물, 밀순의 열수 추출물보다 높게 측정이 됨을 알 수 있다 (표 1). 이처럼 밀순의 저온 추출물은 동결건조한 밀순 분말, 밀순의 에탄올 추출물, 밀순의 열수 추출물보다 항당뇨 효능이 우수함을 알 수 있다.
상기 밀순 추출물에 인슐린 의존성 당뇨병에 대한 개선 및 치료효과의 강화를 위해 식물유래 베타-글루칸 (β-glucan) 또는 순수 γ-아미노부티르산 (Gamma-Amino Butyric Acid, GABA)를 추가로 첨가하는 것이 바람직하다. 상기 β-glucan 또는 GABA를 추가로 첨가하는 경우 당뇨로 인한 체중 감소량이 월등히 개선되었으며, 혈당 증가는 효과적으로 억제 되었다. 인슐린 분비량의 변화는 저온 추출물 단독 투여군 보다 GABA 또는 수용성 β-glucan과 저온 추출물과의 조합 투여군에서 항당뇨 효과가 강화되었고, 이는 기존 밀순 저온 추출물내의 포함된 GABA 또는 β-glucan의 상승으로 보다 효과적인 항당뇨 효과가 나타난 것이다 (표 3).
상기 베타-글루칸 (β-glucan)은 1 내지 100mg/kg, γ-아미노부티르산 (Gamma-Amino Butyric Acid, GABA)은 0.1 내지 100mg/kg를 추가하는 것이 바람직하다.
또한 본 발명은 밀순 추출물을 유효성분으로 포함하는 당뇨병 예방 및 치료용 건강기능식품을 제공한다.
건강기능식품은 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 것을 포함할 수 있다.
상기 밀순 추출물에 베타-글루칸 (β-glucan) 또는 γ-아미노부티르산 (Gamma-Amino Butyric Acid, GABA)를 추가로 첨가하는 것이 바람직하다.
상기 베타-글루칸 (β-glucan)은 1 내지 100mg/kg, γ-아미노부티르산 (Gamma-Amino Butyric Acid, GABA)은 0.1 내지 100mg/kg를 추가하는 것이 바람직하다.
본 발명의 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 추출물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로스 (sucrose) 또는 락토오스 (lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올 레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔 (witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 추출물은 1일 10 내지 1000 mg/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수 있다.따라서 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 (intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명은 밀순의 추출물을 유효성분으로 함유하는 당뇨병의 예방 및 치료용 건강기능식품을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 추출물에 수용성 β-glucan 또는 GABA를 추가적으로 첨가하는 추출물을 유효성분으로 함유하는 당뇨병의 예방 및 치료용 건강기능식품을 제공한다. 상기 베타-글루칸 (β-glucan)은 1 내지 100mg/kg, γ-아미노부티르산 (Gamma-Amino Butyric Acid, GABA)은 0.1 내지 100mg/kg를 추가하는 것이 바람직하다.
본 발명의 추출물을 포함하는 조성물은 당뇨병의 예방 및 치료를 위한 약제, 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 발명의 건조물 또는 그 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.
본 발명의 추출물은 당뇨병의 예방 및 치료를 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 추출물의 양은 일반적으로 본 발명의 건강식품 조성물은 전체 식품 중량의 1 내지 5 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 10 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다.
본 발명의 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물을 함유하는 것 외에 액체성분에는 특별한 제한점은 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등의 디사카라이드, 예를들어 말토스, 슈크로스 등의 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제 (타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제 (사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 mL당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g이다.
상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다.
그밖에 본 발명의 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하, 본 발명을 실시예를 통하여 상세히 설명하도록 한다. 하기 실시예는 본 발명을 설명하기 위한 일 예에 지나지 않으며, 이에 의하여 본 발명의 범위가 제한되는 것은 아니다.
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실시예
1> 본 발명에 사용된
밀순추출물의
조제
본 발명에 사용된 밀순은 우리밀 품종 (Triticum aestrivum)을 국립식량과학원에서 평균 온도 20±1℃, 상대 습도 60~70%를 유지하며 무균 유기농 발아용 피트머스 위에서 발아시킨 후 10일 동안 키운 어린 밀순을 제공 받아 사용하였다.
생밀순에서의 유용성분 추출율을 높이기 위한 방법으로 용매와의 비 표면적을 크게 해주는 단계를 위해 평균 분말입도 1mm이하, 분당 160회전으로 분쇄하며, 추출단계과정 중 불필요한 박테리아 증식을 막기 위해 온도를 제한하여 추출을 실시하였다.
본 실시예에 사용된 밀순 추출물은 다음과 같은 방법으로 각각의 다른 조건으로 추출하여 제작 및 사용하였다.
1. 동결분말 시료 제작 (시료 1)
밀순을 48시간 이상 동결건조 한 후 이를 분쇄기를 이용하여 평균분말입도 1mm 이하로 분말화하여 차광된 4℃에 보관하여 실험에 사용하였다.
2. 에탄올 추출물 시료 제작 (시료 2)
상기 제작된 동결분말 시료 100g에 1L의 90%이상의 에탄올을 첨가 한 후 이를 상온에서 규칙적으로 10분에 한번 씩 교반하며 추출하였다. 추출액을 3000rpm 이상에서 20분간 원심분리하여 얻은 상등액을 pore size 0.45 로 여과 후 취합한다 (2회 반복). 48시간 이상 동결건조 하여 적갈색의 동결건조물을 수득하였다. 실험 직전까지 빛으로부터 차단된 4℃에 보관하여 실험에 사용하였다.
3.
열수추출물
시료 제작 (시료 3)
상기 제작된 동결분말 시료 100g에 1L의 끓인 정제수를 첨가 한 후 이를 가열을 하며 2시간 동안 상온에서 규칙적으로 10분에 한번 씩 교반하며 추출하였다. 이 추출액을 상기 에탄올 추출물 시료 제작과 동일하게 여과, 취합 및 동결건조 하여 실험 직전까지 빛으로부터 차단된 4℃에 보관하여 실험에 사용하였다.
4. 저온 추출물 시료 제작 (시료 4)
상기 제작된 동결분말 시료 100g에 1L의 4℃ 정제수를 첨가 한 후 이를 유용성분 추출을 위한 충분한 24시간 동안 4℃에서 규칙적으로 30분에 한번 씩 교반하며 추출하였다. 상기 열수추출물 시료 제작방법과 동일하게 여과, 취합 및 동결건조 하여 실험 직전까지 빛으로부터 차단된 4℃에 보관하여 분석에 사용하였다.
투여시 이를 10ml의 정제수에 각각의 밀순 추출물들을 총 투여량 100 mg/kg으로 시료액을 조제하여 사용하였다.
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실시예
2> 실험 동물 준비 및 시료 조제
1. 실험동물
이 실험에서 사용한 실험동물은 9 주령된 SPF 수컷 Balb/C mice (25 ± 1 g)로, 샘타코㈜에서 공급받아 실험동물 사육장에서 1주일간 적응시킨 후 실험에 사용하였다. 실험 기간 중 고형사료와 물은 자유로이 섭취시켰으며, 사육실의 온도 (22 ± 2℃), 상대습도 (60 ± 5%)와 명암은 12시간 주기를 유지하였다. 이 동물실험은 전북대학교 동물실험윤리위원회의 사전 심의를 받아 동물실험윤리위원회의 규정에 따라 수행되었다.
2. 시료조제
이 실험에 사용한 시료는 상기 추출 방법들로 처리하여 제작된 각각의 추출물을 마우스 체중 당 100 mg/kg로 정제수에 녹여 일정 시간에 1일 1회 공급하였다. 순수 GABA 또는 수용성 β-glucan은 밀순 저온 추출물과 일정량 조합하여 공급하였다.
3. 당뇨병 유발 및 시료투여
실험에서 사용한 당뇨 유발시약인 streptozotocin (sigma)를 citrate buffer (pH 4.5)에 녹여 45 mg/kg 용량으로 1일 1회 3일 연속 실험동물에 복강투여를 실시 하였다. 마지막 주사 후 48시간 동안 충분히 췌장 내 베타세포가 파괴될 수 있도록 방치한 후 혈당을 확인하였다.
밀순 추출물의 공복혈당 200 mg/dL 이상인 개체를 선별하고 이를 인슐린 의존형 당뇨모델로 인정하고 본 실험에 사용하였다. 당뇨를 유도하지 않고 정제수 100 ul를 경구투여 한 정상 대조군 5마리, 당뇨를 유발하고 정제수 100 ul를 경구투여 한 당뇨 대조군 5마리, 당뇨를 유발하고 각각의 다른 추출 방법에 따라 추출된 각각의 밀순 추출물을 경구투여 (100 mg/kg)한 시료처리군들, 그리고 저온 추출물 100 mg/kg 에 보리 유래 순수 수용성 β-glucan 추출물 또는 순수 GABA를 일정량 조합하여 투여한 시료처리군에 각각 5마리씩 사용하였다. 시료는 당뇨유발 확인 일부터 매일 1일 1회 투여하였다.
4. 통계학적 처리
모든 실험결과는 평균 ± 표준편차로 표시하였고, 통계적 유의성 검정은 Student’s t-test로 처리하였다.
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실시예
3> 당뇨병 실험동물인
Balb
/c마우스에서 당뇨병 증상 체중, 혈당 및 인슐린 변화에 대한
밀순추출물의
효과
실험의 시작과 함께 마우스의 몸무게 변화 및 혈당 변화를 관찰하였다. 마우스의 체중 변화 확인은 실험시작일로부터 종료하는 날까지 3일에 한 번씩 측정하였다. 최초 실험 실시 시작 체중은 25 g 오차범위 1 g 내로 실험 종료 후 최종 체중은 당뇨병군에 비하여 저온 추출물 공급군이 몸무게 감소율이 월등히 줄어든 것을 확인하였다. 혈당은 당뇨병 치료효과를 나타내는 직접적이며, 대표적인 지수이고, 인슐린은 혈당을 조절하는 가장 직접적인 인자이다. 혈당 확인은 혈당측정기기 (ACCU-check, USA)를 사용하였다. 당뇨에 대한 마우스의 혈중 인슐린 변화에 대한 밀순 추출물의 효과를 검토하기 위하여 실험종료일에 마우스를 희생하며 각각 실험군을 ethyl ether로 마취시킨 후 미리 헤파린나트륨을 혈액 1ml당 100 IU를 전처리한 주사기를 사용하여 심장으로부터 혈액을 채취하였다, 혈액채취 후 4℃에서 3000 rpm, 15분간 원심분리하여 혈장을 분리하였으며, 수 시간 내에 Mouse insulin ELISA Kit (SHIBAYAGI Co. Japan)를 이용하여 제조회사에서 제공한 매뉴얼에 따라 혈중 인슐린 농도를 측정하였다.
결과, 혈당과 인슐린 변화에 대한 영향 또한 저온 추출물 공급군에서 효과적인 항당뇨 효과를 확인할 수 있었다.
저온 추출물 1일 1회 투여량 중에 유용성분 수용성 β-glucan이 약 18.46 mg/kg, GABA가 342.4ug/kg 함유되어 공급되어 졌다 (표 1).
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실시예
4> 당뇨병 실험동물인
Balb
/c마우스에서 췌장 베타세포 변화에 대한
밀순추출물의
효과
당뇨에 대한 마우스의 췌장 베타세포 변화에 대한 밀순 저온 추출물의 효과를 검토하기 위하여 실험종료일에 마우스를 희생하여 조직과 혈액을 채취한 후 췌장을 적출하여 H&E 염색 및 면역염색을 실시하였다. 당뇨대조군의 췌장 베타세포에 비하여 저온 추출물 투여군에서 모두 그 수와 크기가 회복 및 개선되었다 (도 2).
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실시예
5> 밀순 추출물 수용성 β-
glucan
및
GABA
분석
상기 실시예1 에서 생산된 추출물들에서의 유용성분 수용성 β-glucan 함유량을 분석하기 위해 Megazyme 사에서 판매하는 β-glucan 분석 키트를 사용하여 시료분석을 실시하였다. 분석 방법은 키트에서 제공되는 매뉴얼을 토대로 응용 실시하여 함유량을 분석하였다. 밀순 건조분말 시료의 수용성 β-glucan 함유량은 8.04%, 에탄올 추출물은 1.84%, 열수추출물은 14.73%, 그리고 저온추출물은 18.46%로 수용성 β-glucan 추출 그 함유량이 증가하였다.
상기 실시예1 에서 생산된 추출물들에서의 유용성분 GABA 함유량을 분석하기 위해 건조중량 100mg을 취하여 메탄올: 클로로폼: 물 (12:5:3) 용액에 현탁 후 원심분리 (13,000Xg, 15min)하여 상등액을 취한다. 잔여물에 chloroform: DW (1:2) 용액을 첨가하여 현탁 후 재 원심분리하여 이를 0.45 여과한 후 아미노산분석을 위한 시료로 준비하고, 추출물 내 GABA 함량을 분석하였다. 밀순 건조분말 시료의 GABA 함유량은 100 g 당 299.4±5 mg, 에탄올 추출물은 193.8±5 mg, 열수추출물은 310±3 mg, 그리고 저온추출물은 324±6 mg 로 GABA 함유량이 증가하였다(표 2).
| 시료명 | β-glucan (%, w/w) |
GABA (mg/100g) |
| 동결건조분말 | 8.04 ±1.0 | 299.4 ±5 |
| 에탄올추출물 | 1.84 ±0.8 | 193.8 ±3 |
| 열수추출물 | 14.73 ±1.2 | 310.6 ±5 |
| 저온추출물 | 18.46 ±1.2 | 342.4 ±6 |
<
실시예
6> 당뇨병 실험동물인
Balb
/c마우스에서 당뇨병 증상 체중, 혈당 및 인슐린 변화에 대한 밀순 추출물과 수용성 β-
glucan
및
GABA
의 효과
상기 실시예에서 밀순 저온 추출물이 체중, 혈당 및 인슐린 개선에 뛰어난 항당뇨 효과가 있음을 확인하고 항당뇨 효과를 강화시키고자 저온 추출물 (100 mg/kg)과 유용성분으로서 수용성 β-glucan(12 mg/kg) 또는 순수 GABA (350 ug/kg)을 조합하는 복합 조성물로서 그 효능을 분석하였다. 이는 US-FDA가 메밀 및 보리 등에 함유하는 수용성 β-glucan을 하루 12.5 mg/kg 이상 섭취할 것을 권장하고 있으며, 실시예5 에서 본 발명에 사용된 밀순 추출물 시료에 함유하는 GABA 함량에 근거하여 동일량을 추가 투여하는 조건으로 밀순 추출물과 수용성 β-glucan 또는 GABA의 조합 함량을 결정하여 인슐린의존성 당뇨동물모델에서 체중, 혈당, 혈중인슐린 농도의 변화를 관찰 비교하였다.
그 실험결과는 순수 GABA와 또는 수용성 β-glucan을 밀순 추출물과 함께 투여 할 경우 체중의 변화는 각각 23.32±1.30 g과 25.74±1.02 g로 당뇨로 인한 체중 감소량이 상당히 개선되었으며, 혈당 증가는 각각 169.20±20.12, 154.75± 17.34 mg/dL로 증가가 효과적으로 억제 되었다. 인슐린 분비량의 변화는 밀순 추출물과 GABA와 함께 투여한 그룹에서 1.42±0.28 ng/ml, 밀순 추출물과 수용성 β-glucan을 함께 투여한 그룹에서 1.83±0.32 ng/ml으로 인슐린 분비량이 또한 증가 되어 밀순 추출물과 GABA조합군 또는 수용성 β-glucan의 조합군이 밀순추출물 단독 투여군에 비하여 현저히 당뇨 확인인자인 체중, 혈중 당농도 및 인슐린농도를 현저히 개선하는 효과가 있음을 관찰하였다 (표 3). 이는 기존 밀순 저온 추출물내의 포함된 GABA 또는 β-glucan의 상승으로 보다 효과적인 항당뇨 효과가 나타난 것으로 여겨진다.
이상 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 실시예들을 설명하였지만, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 그 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.
Claims (8)
- 동결 건조한 밀순 분말에 정제수를 포함한 물을 첨가한 후 12시간 내지 36시간 동안 2~5℃의 저온에서 추출한 밀순 추출물을 유효성분으로 포함하는 당뇨병 예방 또는 개선용 건강기능식품.
- 제 1항에 있어서,
분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 건강기능식품 - 제 1항에 있어서,
상기 밀순 추출물에 베타-글루칸 (β-glucan) 또는 γ-아미노부티르산 (Gamma-Amino Butyric Acid, GABA)이 추가로 첨가된 것을 특징으로 하는 건강기능식품. - 제 3항에 있어서,
상기 베타-글루칸은 1 내지 100mg/kg, γ-아미노부티르산은 0.1 내지 100mg/kg이 추가된 것을 특징으로 하는 건강기능식품. - 동결 건조한 밀순 분말에 정제수를 포함한 물을 첨가한 후 12시간 내지 36시간 동안 2~5℃의 저온에서 추출한 밀순 추출물을 유효성분으로 포함하는 당뇨병 예방 및 치료용 약학 조성물.
- 삭제
- 제 5항에 있어서,
상기 밀순 추출물에 베타-글루칸 또는 γ-아미노부티르산이 추가로 첨가된 것을 특징으로 하는 약학 조성물. - 제 5항에 있어서,
상기 베타-글루칸은 1 내지 100mg/kg, γ-아미노부티르산은 0.1 내지 100mg/kg이 추가된 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020100085524A KR101224486B1 (ko) | 2010-09-01 | 2010-09-01 | 밀순 추출물을 유효성분으로 포함하는 당뇨병 예방 및 치료용 조성물 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020100085524A KR101224486B1 (ko) | 2010-09-01 | 2010-09-01 | 밀순 추출물을 유효성분으로 포함하는 당뇨병 예방 및 치료용 조성물 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20120022211A KR20120022211A (ko) | 2012-03-12 |
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ID=46130380
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
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| KR1020100085524A KR101224486B1 (ko) | 2010-09-01 | 2010-09-01 | 밀순 추출물을 유효성분으로 포함하는 당뇨병 예방 및 치료용 조성물 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR101224486B1 (ko) |
-
2010
- 2010-09-01 KR KR1020100085524A patent/KR101224486B1/ko not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Kor. J. Pharmacogn. 40(4), pp. 408~414, 2009 * |
| Kor. J. Pharmacogn. 40(4), pp. 408∼414, 2009* |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20120022211A (ko) | 2012-03-12 |
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