KR101219146B1

KR101219146B1 - 항당뇨 효과를 가진 단백질 가수분해물

Info

Publication number: KR101219146B1
Application number: KR1020077013379A
Authority: KR
Inventors: 쿄이치 카가와; 토시히코 나루세; 치즈코 푸쿠하마
Original assignee: 엠지 팜마 아이엔씨.
Priority date: 2004-11-15
Filing date: 2005-11-15
Publication date: 2013-01-07
Also published as: EP1824501B1; CA2585442A1; WO2006052031A1; EP1824501A4; DK1824501T3; HK1109563A1; US20090155376A1; KR20070086160A; JP4808218B2; ES2328835T3; AU2005302921A1; ATE439854T1; EP1824501A1; CN101060854B; DE602005016144D1; JP2008519758A; AU2005302921B2; CN101060854A

Abstract

본 발명은 고혈당 상태의 대상의 혈당 수준을 낮추는 효과가 있고 이러한 대상의 혈당 수준을 낮추는데 사용되는 조성물(혈당 증가 억제제)을 제공한다. 또한, 본 발명은 고혈당으로 인해 비롯되는 질환, 특히 당뇨병 및 당뇨 합병증을 예방하거나 치료하는데 사용되는 조성물(항당뇨 인자인 고혈당으로 인해 발생하는 질환들에 대한 예방 또는 개선용 조성물)을 제공한다.

Description

항당뇨 효과를 가진 단백질 가수분해물{PROTEIN HYDROLYSATE WITH ANTIDIABETIC EFFECT}

본 발명은 당뇨병이 있는 대상이나 임상 전단계(당뇨의 경계)의 대상의 인슐린 수용체를 증가시킴으로써 인슐린 분비의 도입 또는 인슐린 민감도의 증가를 통해 고혈당의 상태(혈당 증가를 억제하는 효과)를 예방 또는 치료하는 효과를 보이는 조성물(혈당 증가 억제제, 인슐린 분비 강화제)에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 고혈당으로 인해 비롯되는 질환, 특히 당뇨병 및 당뇨 합병증을 예방 또는 치료하는데 사용되는 조성물에 관한 것이다. 본 명세서에서, 이런 조성물은 때로는 집합해서 항당뇨 조성물이라고 불린다.

게다가, 본원 발명은 고혈당 상태의 대상의 혈당 수치를 낮추는 방법 및 혈당의 증가를 억제하고 인슐린 분비를 증가시키는 등의 행위의 고혈당으로 인한 질환(특히, 당뇨병 및 당뇨 합병증)을 예방 또는 치료하는 방법에 관한 것이다.

살아있는 신체의 혈당 수치는 인슐린의 고혈당 작용과 아드레날린(adrenalin), 글루카곤(glucagon), 글루코코티코이드(glucocorticoid) 등의 혈당 증대 작용 간의 밸런스에 의해 조절된다. 특히, 인슐린은 글루코오스(glucose) 생산을 방해하고 간에서 혈액으로 빠져나가는 글루코오스의 양을 줄이기 위해 간에서 글리코게놀리시스(glycogenolysis) 및 글루코네오제네시스(gluconeogenesis)를 저해한다. 또한, 동시에 인슐린은 골격근과 백색지방조직으로 글루코오스의 흡수를 증가시키는데, 이로써 혈당 수치를 감소시킨다. 반대로 아드레날린, 글루카곤 등은 간에서의 글리코제놀리시스와 글루코네오제네시스를 자극하고 간으로부터 빠져나가는 글루코오스를 증가시키는데, 이로써 혈당 수치를 증가시킨다.

당뇨병은 당 신진대사, 지질 신진대사, 아미노산 신진대사 등의 장애를 유발시키는 급성 또는 만성 인슐린 작용 감소로 인해 고혈당 상태가 유지되는 신진대사 질환이다.

당뇨병은 인슐린 의존성이나 인슐린 비의존성으로 분류된다. 식이요법과 구강용 고혈제는 인슐린 의존성 당뇨병 치료에는 효과가 없고 인슐린 의존성 당뇨병은 인슐린 분비능이 줄거나 결여된 것이기 때문에 인슐린에 의해서만 치료가 가능하다. 반대로, 인슐린 비의존성 당뇨병은 당뇨병 환자의 90 퍼센트를 차지하는데 인슐린 작용이 정상인에 비해 약화된 상태이지만, 이에 대한 치료는 인슐린을 반드시 필요로 하지는 않는다. 식이요법과 운동요법이 보통 수행되는데 만약 이것이 충분치 않으면 다음엔 고혈당 약제에 의한 화학요법이 동시에 이용된다.

상기와 같이, 당뇨병은 지속적인 고혈당 상태로 인한 신진대사 장애를 유발하는 질환이고 눈, 신장, 신경계, 심장혈관계, 피부 등에 여러 가지 합병증을 수반할 수 있는 까다로운 질환이다. 이러한 합병증은 혈당 수치가 정상수치에 가깝게 조절되면 일반적으로 감소했다고 여겨진다.(Saishin Igaku Daijiten, 1988, p. 1211, Ishiyaku Publishers Inc., Japan)

고혈당 상태를 개선 시키는 잘 알려진 약학적 제제로는 인슐린 제제, 술포닐 요소(sulfonyl urea) 제제, 비구아니드(biguanide) 제제, 인슐린 저항 개선 제제, 알파-글루코시다제(α-glucosidase) 억제제 등이 있다. 인슐린 제제들은 인슐린 의존성 당뇨병의 치료약제이고 이것들은 혈당 수치를 확실히 낮추는 한편 고혈당을 일으킬 위험이 있다. 술포닐 요소제제는 췌장 베타세포들을 자극하여 내부 인슐린 분비를 증대시킴으로써 혈당 수치를 낮추는 약제들이다. 이들은 혈당 수치를 고려하지 않고 유도된 인슐린 분비 때문에 부작용으로써 고혈당을 유발시킬 수 있다. 비구아니드 제제들은 간에서 글루코네오제네시스를 억제하고, 골격근 등에서 당 소비를 증대시키고, 장에서의 당의 흡수를 억제함으로써 혈당 수치를 낮추는 약제들이고 정상인이나 당뇨병 환자들에게 고혈당을 유발하지 않는다는 이점이 있다. 그러나 비구아니드 제제들은 비교적 심각한 유산 과다를 빈번히 일으킨다는 문제가 있다. 인슐린 저항 개선 제제들〔예를 들어, 티아졸리딘(thiazolidine)유도체 등〕은 인슐린의 작용을 강화하고 인슐린 수용체 키나아제를 활성화시킴으로써 혈당 수치를 낮추는 약제들이다. 그러나, 부작용으로써 소화증상들, 부종 등이 발달하고 적혈구 세포들인 헤마토크리트(hematocrit)와 헤모글로빈의 양이 감소하고 LDH의 양은 증가한다는 것은 지적되어 왔다[Atarashii Tonyobyo Chiryoyaku (New Diabetic Medicines), pp. 90-99, 1994, Iyaku (Medicine and Drug) Journal Co., Ltd., Japan]. 알파-글루코시다아제 억제제들은 위장계 내에서의 당의 소화와 흡 수를 지체시킴으로써 식후 혈당 수치의 증가를 억제하는 작용을 보여주지만 팽창된 느낌, 복명, 설사 등과 같은 부작용의 측면에서는 문제가 있다(Joslin's Diabetes mellitus, 13^th ed., pp. 521-522).

따라서, 당뇨병 및 이의 합병증을 효과적으로 치료 또는 예방하는 방법들은 아직까지 충분히 입증되지 않았다고 말할 수 있다.

본 발명의 목적은 인슐린 분비증가 작용 또는 혈당 증가를 억제하는 작용을 하는 약학적 조성물, 식품 조성물 및 사료 조성물을 제공하기 위함이다. 본 발명의 또 다른 목적은 당뇨병이나 그의 합병증을 치료 또는 예방을 하기 위한 조성물과 같은 이러한 조성물들을 제공하기 위함이다.

본 발명자들은 상기의 목적을 달성하기 위해 광범위한 연구를 수행했고, 글로빈 프로테올라이세이트(globin proteolysate)를 인위적으로 유도된 고혈당의 마우스들에게 투여했을 때, 그들의 혈당 수치가 현저하게 낮아지고 고혈당이 개선되는 것을 알게 되었다. 게다가, 본 발명자들은 글로빈 프로테올라이세이트의 활성요소가 이에 포함된 펩타이드(VVYP)이고 혈당 증가를 억제하는 작용은 이의 인슐린 분비강화작용에 기인한다는 것을 확인했다.

또한, 본 발명자들은 혈당수치 증가를 억제하는 작용과 글로빈 프로테올라이세이트나 펩타이드(VVYP)의 인슐린 분비강화 작용은 정상 혈당 수치를 갖는 대상에서는 관찰되지 않는다는 것과 이러한 작용들은 특히 당뇨병 환자들이나 임상단계에 있는 당뇨병 환자 경계자들에게서 관찰된다는 것을 확인했다.

이런 연구결과들을 기초로, 본 발명자들은 글로빈 프로테올라이세이트 또는 펩타이드(VVYP)가 고혈당을 억제하거나 개선하고(고혈당으로 여겨지는 혈당수치를 감소시킴) 당뇨병과 그의 합병증과 같은 고혈당으로부터 유발된 질환들을 예방 또는 치료하는 데에 이용된다는 것을 확인했다. 본 발명은 이러한 연구결과들을 기초로 완성되었다.

특히, 본 발명은 다음의 실시예를 포함한다.

1. 글로빈 프로테올라이세이트(globin proteolysate) 또는 발린-발린-티로신-프롤린 펩타이드(Val-Val-Tyr-Pro peptide)를 활성성분으로 포함하는 항당뇨제.

2. 글로빈 프로테올라이세이트(globin proteolysate) 또는 발린-발린-티로신-프롤린 펩타이드(Val-Val-Tyr-Pro peptide)를 활성성분으로 포함하는 혈당 증가 억제제.

3. 글로빈 프로테올라이세이트(globin proteolysate)나 발린-발린-티로신-프롤린 펩타이드(Val-Val-Tyr-Pro peptide)를 활성성분으로 포함하는 인슐린 분비 강화제.

4. 글로빈 프로테올라이세이트(globin proteolysate) 또는 발린-발린-티로신-프롤린 펩타이드(Val-Val-Tyr-Pro peptide)를 활성성분으로 포함하고, 혈당 증가를 억제하는 기능 또는 인슐린 분비를 증대시키는 기능을 가지며, 바람직하게는 상기 기능을 목적으로 사용되는 특정 건강 용도용 식품.

5. 글로빈 프로테올라이세이트(globin proteolysate) 또는 발린-발린-티로신-프롤린 펩타이드(Val-Val-Tyr-Pro peptide)를 활성성분으로 포함하고, 혈당 증가를 억제하는 기능 또는 인슐린 분비를 증대시키는 기능을 가지며, 바람직하게는 상기 기능을 목적으로 사용되는 사료.

6. 글로빈 프로테올라이세이트(globin proteolysate) 또는 발린-발린-티로신-프롤린 펩타이드(Val-Val-Tyr-Pro peptide)를 활성성분으로 포함하는 고혈당으로 인한 질환을 예방 또는 치료하기 위한 조성물.

7. 상기 항목 6에 따른 고혈당으로 인한 당뇨병 또는 당뇨산증, 당뇨황색종, 당뇨근위축증, 당뇨케톤증, 당뇨혼수, 당뇨위병, 당뇨괴저, 당뇨궤양, 당뇨설사, 당뇨미세혈관병, 당뇨자궁경화, 당뇨심근증, 당뇨신경병, 당뇨신장병, 당뇨물집, 당뇨백내장, 당뇨피부병, 당뇨경화부종, 당뇨망막병증, 당뇨병성 유지방 괴사생성 또는 당뇨혈액순환장애와 같은 당뇨합병증을 예방 또는 치료하기 위한 조성물.

8. 상기 항목 6에 따른 고혈당으로 제 Ⅱ 유형 당뇨병 또는 이의 합병증을 예방 또는 치료하기 위한 조성물.

9. 고혈당으로 인한 질환에 영향을 받은 대상 또는 이러한 질환의 임상 전의 단계에 있는 대상에게 글로빈 프로테올라이세이트 또는 발린-발린-티로신-프롤린 펩타이드를 효과적인 양으로 투여하는 단계를 포함하는 혈당 증가를 억제하는 방법.

10. 상기 항목 9에 따른 대상의 혈당 증가를 억제하는 방법에 있어서, 상기 질환은 고혈당으로 인한 당뇨병 또는 당뇨산증, 당뇨황색종, 당뇨근위축증, 당뇨케톤증, 당뇨혼수, 당뇨위병, 당뇨괴저, 당뇨궤양, 당뇨설사, 당뇨미세혈관병, 당뇨자궁경화, 당뇨심근증, 당뇨신경병, 당뇨신장병, 당뇨물집, 당뇨백내장, 당뇨피부병, 당뇨경화부종, 당뇨망막병증, 당뇨병성 유지방 괴사생성 또는 당뇨혈액순환장애와 같은 당뇨합병증이다.

11. 상기 항목 9에 따른 대상의 혈당 수준의 증가를 억제하는 방법에 있어서 상기 질환은 고혈당으로 인한 제 Ⅱ 유형 당뇨병 또는 이의 합병증이다.

12. 고혈당으로 인한 질환에 영향을 받는 대상 또는 이러한 질환의 임상 전의 단계에 있는 대상에게 글로빈 프로테올라이세이트 또는 발린-발린-티로신-프롤린 펩타이드를 효과적인 양으로 투여하는 단계를 포함하는 고혈당으로 인한 질환을 예방 또는 치료하는 방법.

13. 상기 항목 12에 따른 대상의 고혈당으로 인한 질병을 예방 또는 치료하는 방법에 있어서, 상기 질환은 고혈당으로 인한 당뇨 또는 당뇨산증, 당뇨황색종, 당뇨근위축증, 당뇨케톤증, 당뇨혼수, 당뇨위병, 당뇨괴저, 당뇨궤양, 당뇨설사, 당뇨미세혈관병, 당뇨자궁경화, 당뇨심근증, 당뇨신경병, 당뇨신장병, 당뇨물집, 당뇨백내장, 당뇨피부병, 당뇨경화부종, 당뇨망막병증, 당뇨병성 유지방 괴사생성 또는 당뇨혈액순환장애와 같은 당뇨합병증이다.

14. 상기 항목 12에 따른 대상의 고혈당으로 인한 질환의 예방 또는 치료하는 방법에 있어서, 상기 질환은 고혈당으로 인한 제 Ⅱ 유형 당뇨병 또는 이의 합병증이다.

15. 항당뇨제를 제조하기 위한 글로빈 프로테올라이세이트 또는 발린-발린-티로신-프롤린 펩타이드의 용도.

16. 혈당 증가 억제제를 제조하기 위한 글로빈 프로테올라이세이트 또는 발린-발린-티로신-프롤린 펩타이드의 용도.

17. 인슐린 분비강화제를 제조하기 위한 글로빈 프로테올라이세이트 또는 발린-발린-티로신-프롤린 펩타이드의 용도.

18. 혈당 증가를 억제하는 기능 또는 인슐린 분비를 증가시키는 기능을 가지며, 상기 기능을 목적으로 사용되는 특정 건강 목적의 식품을 제조하기 위한 글로빈 프로테올라이세이트 또는 발린-발린-티로신-프롤린 펩타이드의 용도.

19. 혈당 증가를 억제하는 기능 또는 인슐린 분비를 증가시키는 기능을 가지며, 상기 기능을 목적으로 사용되는 특정 건강 목적의 사료를 제조하기 위한 글로빈 프로테올라이세이트 또는 발린-발린-티로신-프롤린 펩타이드의 용도.

20. 고혈당으로 인한 질환을 예방 또는 치료하기 위한 조성물을 제조하기 위한 글로빈 프로테올라이세이트 또는 발린-발린-티로신-프롤린 펩타이드의 용도.

발명의 실시를 위한 최선의 형태

본 발명의 약학적 조성물, 식품 조성물 및 사료 조성물의 특징은 활성 인자로써 글로빈 프로테올라이세이트 또는 펩타이드(VVYP)를 포함하는 것이다.

(1) 약학적 조성물

혈당 증가 억제제, 인슐린 분비 강화제, 및 고혈당으로 인한 질환을 예방 또는 치료하기 위한 조성물들은 본 발명의 약학적 조성물 내에 포함된다. 상기 혈당 증가 억제제의 특징은 당뇨병 환자나 임상 당뇨병 환자, 즉, 경계 당뇨병 환자의 고혈당을 예방 또는 개선(혈당의 증가를 억제)하는 데 효과적인 양의 글로빈 프로테올라이세이트 또는 펩타이드(VVYP)를 포함하는 것이다. 상기 인슐린 분비 강화제의 특징은 당뇨병 환자나 경계 당뇨병 환자의 인슐린 분비를 강화하기 위해 효과적인 양의 글로빈 프로테올라이세이트 또는 펩타이드(VVYP)를 포함하는 것이다. 게다가, 고혈당으로 인한 질환을 예방 및 치료하기 위한 상기의 성분들은 혈당 증가 억제작용 또는 인슐린 분비 강화작용을 보여주는 효과적인 양의 글로빈 프로테올라이세이트 또는 펩타이드(VVYP)를 포함한다.

본 발명의 약학적 조성물의 활성 인자의 한 형태인 글로빈 프로테올라이세이트는 헤모글로빈, 미오글로빈 등과 같은 글로빈 단백질의 가수분해물이다. 글로빈 단백질의 출처가 될 수 있는 동물의 종류는 제한이 없고 소, 돼지, 양, 인간, 말 등과 같이 다양한 종류의 동물들이 사용될 수 있다.

가금류의 고기, 생선 살코기와 같은 많은 양의 미오글로빈을 포함하는 고기들은 글로빈 단백질 원료로써 사용될 수 있다.

글로빈 단백질의 가수분해와 다른 절차들은 WO89/06970에 기재된 방법들에 따라 수행될 수 있다. 가수분해는 대부분 산성 프로테아제, 중성 프로테아제 및 알카리성 프로테아제와 같은 하나 또는 그 이상의 가수분해 효소를 사용하여 수행된다.

글로빈 단백질의 가수분해를 위한 방법의 특별한 예로는 5 내지 30 중량 퍼센트의 양(고형물 함량)으로 물에 글로빈 단백질을 포함하는 물질을 확산시키고, 최적의 프로타아제가 되도록 산 또는 염기로 pH를 조절하고, 한개의 묶음 또는 분량으로 프로테아제를 첨가하고, 20 내지 70℃에서 3 내지 48 시간 동안 상기 효소를 반응시키는 것이 있다.

상기와 같이 하여 수득된 프로테올라이세이트는 본 발명에서 혈당의 증가를 억제하거나 인슐린 분비강화 작용을 하는 글로빈 프로테올라이세이트로써 사용된다. 이는 있는 그대로 사용될 수도 있고, 건조 후에 사용될 수도 있고 또는 카르복시메틸셀루로즈(carboxymethylcellulose), 덱스트린과 같은 증량제 또는 건조응고 후에 생성되는 것을 여기에 첨가하여 사용될 수도 있다.

펩타이드(VVYP), 즉 본 발명의 약학적 조성물의 활성 성분의 다른 형태는 앞서 언급한 글로빈 프로테올라이세이트에 약 1중량 퍼센트의 비율으로 포함되어 있고, 따라서 앞서 언급된 글로빈 프로테올라이세이트로부터 분리/정제될 수 있다. 펩타이드(VVYP)의 분리 또는 정제는 글로빈 단백질에 첨가하는 개시 물질로써, 예를 들어, 생선의 살코기 단백질, 생선 분말과 같은 동물 단백질들; 옥수수 단백질(제인), 콩단백질과 같은 식물 단백질들의 가수분해물을 사용하여 수행될 수 있다.

본 명세서에 기재된 분리 또는 정제 방법은 단백질과 펩타이드에 대해 잘 알려진 정제 방법들과 같은 방법으로 수행될 수 있다. 예를 들어, 펩타이드(VVYP)를 포함하는 분획을 수득할 수 있고, 그 후 염석, 투석, 이온교환 수지, 한외여과, 역상크로마토그래피 등을 이용하거나, 필요시 상기 방법들의 적합한 조합을 이용하여 상기 분획으로부터 펩타이드(VVYP)를 분리시킬 수 있다. 상기 정제 방법들 중에 언급된 역상크로마토그래피에 관해서는, 산성 상태에서의 역상크로마토그래피와 중성 상태에서의 역상크로마토그래피가 조화를 이루어 수행되는 것이 바람직하다.

상기 분획의 단백질 함량은 닌히드린(ninhydrin) 방법들과 같이 잘 알려진 단백질 측정법에 따라 측정될 수 있다. 상기 분리된 분획에 포함된 펩타이드의 아미노산 서열은 잘 알려진 방법들(아미노산 분석)로 동정될 수 있다. 이로써 발린-발린-티로신-프롤린(Val-Val-Tyr-Pro) 아미노산 서열로 구성된 본 발명의 표적 펩타이드의 존재는 확인될 수 있다. 앞서 언급한 방법에 따라 분리 또는 정제된 펩타이드(VVYP)외에 또한, 이를 포함하는 분획은 상기 분획이 혈당의 증가를 억제하거나 인슐린 분비를 강화하는 작용을 보여주는 한 본 발명의 약학적 조성물의 활성 성분으로써 사용될 수 있다.

펩타이드(VVYP)는 잘 알려진 펩타이드 합성 방법들에 따라 화학적으로 합성될 수 있다. 펩타이드 합성 방법들의 사례는 아지드 방법, 산 염화물 방법, 무수산 방법, 혼합 무수산 방법, DCC 방법, 활성화된 에스테르 방법, 카르보이미다졸( carboimidazole)방법,산화환원반응 방법, DCC-첨가(HOMB, HOBt, HOSu)방법(Schreder, Luhke, The Peptide, volume 1, 1966, Academic Press, New York, USA; Izumiya et al., Peptide Synthesis, Maruzen Co., Ltd. (1975); etc.)과 같은 것들이다. 상기 펩타이드 합성 방법들은 고체 단계와 액체 단계 합성 방법들을 포함한다.

상기 펩타이드 합성 방법들과 관련하여, 곁사슬(side-chain) 기능을 갖는 아미노산, 예를 들어 티로신과 트레오닌과 같은 아미노산에 있어서, 이들의 곁사슬 기능 그룹들은 바람직하게 보호된다. 알려진 보호 그룹들, 예를 들어 벤지록시카르보닐 그룹[(benzyloxycarbonyl group (Cbz-)], t-부토식카르보닐 그룹[(t-butoxycarbonyl group (Boc-)], 벤질 그룹[(benzyl group (Bz-)] 등이 본 발명에 사용될 수 있다. 이러한 보호 그룹들은 잘 알려진 방법에 따라 본 발명의 펩타이드 생산 과정 중에서 제거될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 오로지 글로빈 프로테올라이세이트 또는 펩타이드(VVYP)로만 구성될 수 있다. 약학적 조성물이 다른 성분들과 조합되어 제조될 경우, 글로빈 프로테올라이세이트 또는 펩타이드(VVYP)의 양은 혈당의 증가를 억제하거나 인슐린 분비를 강화하는 작용을 보여주기 충분한 양인 한 제한되지 않는다. 대부분, 본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 허용할 수 있는 담체와 첨가제가 공존하여 제조된다.

담체의 예로는 첨가제, 희석제, 접합제,보습제, 붕괴제, 붕괴 억제제, 흡수 강화제, 윤활제, 보조 용매, 완충제, 유화제, 현탁화제 등과 같은 것이 있고, 이것들은 약학적 조성물(제조)을 투여하는 방법에 따라 전형적으로 사용된다. 첨가제의 예로는 안정제, 방부제, 완충제, 등장 조절제, 킬레이트 제, pH-조절제, 계면 활성제, 착색제, 아로마 화학제, 방향제, 감미료 등과 같은 것이 있고 이것들은 투여하는 방법에 따라 전형적으로 사용된다.

약학적 조성물의 단위 제제(약학적 조성물의 형태)는 투여 방법에 따라 적절히 선택될 수 있다. 약학적 조성물은 구강제, 폐제(transpulmonary agent), 비강제, 설하제, 비경구제(주입, 점적) 등으로 크게 구분된다. 약학적 조성물은 알려진 방법들에 따라 정제, 환, 분산제, 분말, 미립제, 캡슐 등의 고형제제; 및 용액제, 현탁액, 유제, 시럽, 엘릭시르 제(elixirs)등의 액제로도 혼합, 형성 또는 제조될 수 있다. 약학적 조성물은 사용될 때 적합한 담체의 첨가에 의해 액상화 될 수 있는 건조 제품의 형태로 제조될 수 있다. 약학적 조성물은 알려진 방법에 따라 상기와 같이 어떤 형태로든 제조될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물에 있어서, 글로빈 프로테올라이세이트 또는 펩타이드(VVYP)의 비율은 제한이 없다. 대부분, 약학적 조성물은 글로빈 프로테올라이세이트는 약 0.1~80 % 비중을 갖고, 바람직하게는 약 5~60% 비중을 갖고, 더욱 바람직하게는 약 20~50% 비중을 갖거나 펩타이드(VVYP)는 약 0.001~80% 비중을 갖고, 바람직하게는 약 0.01~10% 비중을 갖는 제조형태로 제제화된다.

상기와 같은 방법으로 수득된 약학적 조성물의 투여량은 약학적 조성물의 목적(혈당의 증가 억제, 인슐린 분비 강화, 고혈당으로 인한 질환의 예방 또는 치료 등); 약학적 조성물의 투여 방법; 투여 형태; 환자의 연령, 체중, 증상(당뇨병의 심각성); 및 기타 요인들에 따라 적절하게 결정된다. 보통 글로빈 프로테올라이세이트는 일일 투여량이 약 100~2000 ㎎으로 성인에게 투여되는 것이 바람직하며, 펩타이드(VVYP)는 일일 투여량이 약 1~20 ㎎으로 성인에게 투여하는 것이 바람직하다.

상기 약학적 조성물은 1회 투여할 필요는 없고, 하루에 3~4회로 나누어 투여될 수 있다. 앞서 언급한 형태의 약학적 조성물은 형태에 적합한 방법으로 투여되는데, 예를 들어 주입용 제제의 약학적 조성물은 정맥내, 근육내, 피하, 피내, 동맥 또는 이와 같은 방법으로 투여될 수 있고, 고형제의 약학적 조성물은 구강 또는 이와 같은 방법으로 투여될 수 있다.

하기의 실시예에서 기재된 바와 같이, 본 발명의 약학적 조성물은 글로빈 프로테올라이세이트 또는 펩타이드(VVYP)로 인한 인슐린 분비강화의 작용이 있고, 인슐린 작용의 약화 또는 부족으로 인한 고혈당 상황을 개선시킴으로써 고혈당 작용을 보여준다. 따라서, 본 발명의 약학적 조성물은 인슐린 작용의 약화 또는 부족으로 인한 고혈당 상황으로부터 유발된 다양한 질환들을 예방 또는 치료하는 조성물로써 이용된다.

당뇨병 및 당뇨 합병증은 상기 질병들에 포함된다. 대상 당뇨병은 인슐린 비의존형인 타입 Ⅱ 당뇨병인 것이 바람직하다. 본 명세서에서 언급되는 당뇨 합병증은 당뇨병(바람직하게는 인슐린 비의존형인 타입 Ⅱ 당뇨병)에서 직접 또는 간접적으로 발달된 체계적이고 국지적인 질환을 가르킨다. 특정 예로는 당뇨산증, 당뇨황색종, 당뇨근위축증, 당뇨케톤증, 당뇨혼수, 당뇨위병, 당뇨괴저, 당뇨궤양, 당뇨설사, 당뇨미세혈관병, 당뇨자궁경화, 당뇨심근증, 당뇨신경병, 당뇨신장병, 당뇨물집, 당뇨백내장, 당뇨피부병, 당뇨경화부종, 당뇨망막병, 당뇨병성 유지방 괴사생성, 당뇨혈액순환장애 등이 있다.

(2) 식품 조성물

본 발명에 따른 식품 조성물은 혈당의 증가를 억제하는 기능을 갖고, 바람직하게는 상기 기능을 목적으로 사용되는 특정 건강 용도를 위한 식품들(특정 건강 용도에 적합한 식품 포함); 인슐린 분비강화의 기능을 갖고 바람직하게는 상기 기능을 목적으로 사용되는 특정 건강 용도를 위한 식품(특정 건강 용도에 적합한 식품 포함); 혈당 증가 억제작용 또는 인슐린 분비 강화 작용으로 인한 고혈당으로부터 유발된 질환을 예방 또는 치료 목적의 특정 건강 용도를 위한 식품(특정 건강 용도에 적합한 식품 포함)을 포함한다.

앞서 언급한 혈당의 증가를 억제하는 기능을 갖는 특정 건강 용도를 위한 식품의 특징은 당뇨병 환자 또는 경계 당뇨병 환자에게 고혈당을 예방 또는 개선(혈당의 증가를 억제)시키는데 효과적인 양의 글로빈 프로테올라이세이트 또는 펩타이드(VVYP)를 포함하는 것이다. 상기 식품에 대한 포장 및 광고를 통해 상기 효과(혈당의 증가를 억제하는 작용)를 알릴 수 있다. 인슐린 분비를 강화하는 작용을 갖는 특정 건강 용도를 위한 상기 식품의 특징은 당뇨병 환자 또는 경계 당뇨병 환자에게 인슐린 분비 강화에 효과적인 양의 글로빈 프로테올라이세이트 또는 펩타이드(VVYP)를 포함하는 것이다. 상기 식품에 대한 포장 및 광고를 통해 상기 효과(인슐린 분비의 강화)를 알릴 수 있다. 고혈당으로부터 유발된 질환을 예방하고 치료하는 목적을 갖는 특정 건강 용도의 상기 식품의 특징은 당뇨병 환자 또는 경계 당뇨병 환자에게 혈당의 증가를 억제 또는 인슐린 분비 강화 작용을 보이는데에 효과적인 양의 글로빈 프로테올라이세이트 또는 펩타이드(VVYP)를 포함하는 것이다. 상기 식품에 대한 포장 및 광고를 통해 상기 효과들(항당뇨 작용)을 알릴 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 전적으로 글로빈 프로테올라이세이트 또는 펩타이드(VVYP)로 이루어질 수 있다. 식품 조성물이 다른 성분들과 조합하여 제조될 경우, 글로빈 프로테올라이세이트 또는 펩타이드(VVYP)의 양은 그것이 혈당의 증가를 억제하거나 인슐린 분비를 강화하는 작용을 보이는데 충분하다면 제한이 없다. 본 발명의 식품 조성물은 식품에 사용될 수 있는 담체와 첨가제와 함께 동시에 제조 될 수 있다. 상기 식품 조성물은 식품에 허용되는 정제, 환, 캡슐, 미립제, 분산제, 분말, 용액제(드링크) 등의 형태의 담체 및 첨가제와 글로빈 프로테올라이세이트 또는 펩타이드(VVYP)를 혼합하여 제조되는 보강제(supplement) 등을 포함한다. 또한, 본 발명의 식품 조성물은 일반적인 식품 또는 드링크의 형태를 갖는 글로빈 프로테올라이세이트 또는 펩타이드(VVYP)를 포함하는 물질을 포함한다.

상기 식품과 드링크의 예로는 유음료(milk beverage), 유산균음료, 비얄콜성음료를 포함한 과일 주스, 탄산음료, 과일 쥬스 드링크, 야채 주스 드링크, 야채/과일 음료, 알코올 음료, 과립 음료, 커피 음료, 홍차 음료, 녹차 음료, 보리차 음료 등의 음료; 커스타드 푸딩, 밀크 푸딩, 수플레 푸딩, 푸딩을 포함한 과일 쥬스 등의 푸딩; 젤리, 바바루아(bavarois), 요구르트 등의 디저트 아이스크림; 아이스 밀크, 락토-아이스(lacto-ices), 밀크 아이스크림, 아이스크림을 포함한 과일 쥬스; 소프트크림, 아이스캔디, 셔벗(Sorbets), 얼린 과자 등의 차가운 과자; 츄잉껌, 풍선껌 등의 (스틱껌, 당의정껌); 마블 쵸콜렛 등의 코팅 쵸콜렛, 딸기 쵸콜렛, 블루베리 쵸콜렛, 멜론 쵸콜렛 등의 향이 나는 쵸콜렛 및 이와 같은 쵸콜렛; 하드 캔디(봉봉, 버터볼, 마블 등을 포함), 소프트 캔디(캐러멜, 누가, 구미캔디(gummy candy), 마시맬로우 등을 포함), 드롭스, 태피(taffy) 등의 캐러멜; 딱딱한 비스킷, 쿠키, 오카키(okaki, 쌀크래커), 셈베이(sembei, 쌀크래커) 등의 구운 과자(상기한 모든 것은 과자들이다); 콩소메수프, 포타지 수프(potage soups) 등의 수프; 딸기 잼, 블루베리 잼, 마멀레이드, 사과 잼, 애프리컷 잼(apricot jams), 설탕 조림(preserves) 등의 잼; 레드 와인 등의 과일 와인; 당절임된 체리, 애프리컷, 사과, 딸기, 복숭아 등의 가공 처리된 과일; 햄, 소세지, 로스트 포크(roast pork) 등의 가공 처리된 가축 육류; 생선 햄, 생선 소세지, 생선 필레, 카마보코(kamaboko, 찐 생선 페이스트), 치쿠와(chikuwa, 구운 생선 페이스트), 핸펜(hanpen, 갈아서 찐 생선) 사츄마아게(satsumaage,튀긴 생선 볼), 다테마키(datemaki, 오믈렛 싸개), 고래 베이컨 등의 가공 처리된 해산물; 우동(밀분말 국수), 히야무기(hiyamugi), 소멘(somen, 가는 국수), 소바(soba, 메밀 국수), 차이니즈 국수, 스파게티, 마카로니, 비푼(bifun, 쌀국수), 하루사메(harusame, 콩-젤리 스틱), 원튼(wonton) 등의 국수; 및 다양한 형태의 반찬들, 소맥글루텐 케이크(wheat gluten cake), 덴부(denbu) 등의 다양한 기타의 가공 처리된 식품들을 포함한다. 본 발명의 식품 조성물은 바람직하게는 음료 또는 과자의 형태를 갖는다.

상기 식품 조성물에서 활성 성분[(글로빈 프로테올라이세이트 또는 펩타이드(VVYP)]의 양 또는 식품 조성물의 투여량은 제한이 없고 식품 조성물의 형태, 기대되는 개선효과 등의 기타 요인들에 따라 광범위한 영역에서 적합하게 선택될 수 있다. 비록 식품 조성물의 형태에 따라 다양할지라도, 식품 조성물의 투여량은 60 ㎏의 체중을 가진 대상에게 투여시 약 100~2000 ㎎/60 ㎏의 글로빈 프로테올라이세이트 또는 약 1~20 ㎎/60 ㎏의 펩타이드(VVYP)의 영역에서 적합하게 선택될 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 글로빈 프로테올라이세이트 또는 펩타이드(VVYP)로 인한 인슐린 분비강화 작용을 갖고, 인슐린 작용의 약화 또는 부족으로 인해 유발된 고혈당 상황을 개선함으로써 고혈당 작용을 보여준다. 따라서, 본 발명의 식품 조성물은 인슐린 작용의 약화 또는 부족으로 인해 유발된 고혈당 상황으로 인한 다양한 질환들을 예방 또는 치료를 위한 조성물로써 이용된다.

(3) 사료 조성물

본 발명에 따른 사료 조성물은 혈당 증가를 억제하는 기능을 갖는 사료; 인슐린 분비를 증대시키는 기능을 갖는 사료; 및 혈당 증가 억제 또는 인슐린 분비 증대 작용으로 인한 고혈당으로부터 유발된 질환을 예방 또는 치료하는데 이용되는 사료를 포함한다. 이러한 사료들은 바람직하게는 애완동물, 특히 개, 고양이 등의 동물의 사료로써 사용될 수 있다. 앞서 말한 혈당의 증가를 억제하는 기능을 갖는 사료의 특징은 당뇨병 동물이나 경계 당뇨병 동물에게 고혈당을 예방 또는 개선(혈당 증가를 억제)하는 데 효과적인 양의 글로빈 프로테올라이세이트 또는 펩타이드(VVYP)를 포함하는 것이다. 인슐린 분비 증대의 기능을 갖는 사료의 특징은 당뇨병 동물이나 경계 당뇨병 동물에게 인슐린 분비를 증대하는 데 효과적인 양의 글로빈 프로테올라이세이트 또는 펩타이드(VVYP)를 포함하는 것이다. 고혈당으로부터 유발된 질환의 예방 또는 치료하는 데에 사용되는 사료의 특징은 혈당 증가 억제 또는 인슐린 분비 증대의 작용을 보여주는 데 효과적인 양의 글로빈 프로테올라이세이트 또는 펩타이드(VVYP)를 포함하는 것이다.

상기 사료 조성물은 글로빈 프로테올라이세이트 또는 펩타이드(VVYP)를 정제, 환, 캡슐, 미립제, 분산제, 분말, 용액제등의 형태를 가진 담체 및 첨가제와 혼합하여 제조되는 것들을 포함한다. 또한, 본 발명의 사료 조성물은 보통의 사료형태를 취할 수 있는 글로빈 프로테올라이세이트 또는 펩타이드(VVYP)를 갖는 물질을 포함한다.

사료 조성물 또는 사료 조성물의 투여량에 포함된 활성인자[(글로빈 프로테올라이세이트 또는 펩타이드(VVYP)]의 양은 제한되지 않고, 사료 조성물의 형태, 상기 사료 조성물을 섭취하는 동물의 종류, 바람직한 개선 효과의 정도 등의 다른 요소들에 따라 넓은 범위에서 적합하게 선택될 수 있다. 상기 사료 조성물의 투여량은 사료 조성물의 형태에 따라 달라질 수 있지만 10 ㎏의 체중을 가진 동물에게 투여시 글로빈 프로테올라이세이트로 계산할 경우 약 50~약 1000 ㎎/10 ㎏의 범위 또는 펩타이드로 계산할 경우 약 0.5~약 10 ㎎/10 ㎏의 범위에서 적합하게 선택될 수 있다.

도 1은 글로빈 가수분해의 젤 여과작용 크로마토그램을 보여준다(제조 실시예 1).

도 2는 제조 실시예 2(3)에서 수행된 역상(산성) 크로마토그래피의 결과(크 로마토그램)를 보여준다.

도 3은 제조 실시예2(4)에서 수행된 역상(중성) 크로마토그래피의 결과(크로마토그램)를 보여준다.

제조 실시예 및 실험 실시예는 하기와 같이 본 발명을 좀 더 자세히 묘사하기 위해 주어져 있지만 본 발명의 범위는 이러한 실시예에 국한되지 않는다. 다음의 실험 실시예에서, "%"는 특별한 지정이 없다면 "무게당 퍼센트"를 의미한다.

제조 실시예 1 글로빈 프로테올라이세이트의 제조

소 적혈구를 이용하여 글로빈 프로테올라이세이트를 제조하는 방법은 하기에 자세히 기재되어 있다.

충분한 용혈현상을 수행하기 위해 신선한 소 적혈구 100 ㎏에 250 리터의 물이 첨가되었다. 인산으로 pH를 2.8로 조절한 후, 아스퍼길루스 니게르(Aspergillus niger)유래의 산성 프로테아제가 2.6 × 10⁷유닛으로 용액에 첨가되고, 3 시간 동안 50℃에서 반응시켰다.

상기의 반응 후, 상기 반응 용액은 상기 반응을 종결시키기 위해 30분 동안 80℃에서 가열시켰다. 이 후, 상기 반응 용액을 pH 6.5로 조절하기 위해 칼슘 수산화물의 액상 현탁물질이 첨가되었다. 다음으로, 10 ㎏의 규조토가 첨가되고, 혼 합물은 여과압축기를 통해 여과되었다. 여과된 결과물을 스프레이 건조시킴으로써 글로빈 프로테아제 분말 23 ㎏을 수득하였다. 글로빈 프로테아제의 분자량 분배는 하기와 같은 조건하에서 수행되는 젤 여과 크로마토그래피에 의해 조사되었다.

<젤 여과 크로마토그래피>

장치: 고성능 액체 크로마토그래프(Shimadzu Corporation, Model LC-6A)

컬럼: PolyLC Inc.에서 제조한 폴리하이드록실에틸 A(PolyHYDROXYETHYL A), 5 ㎛, 9.4 × 200 ㎜

용출액: 포름산 50 mM

유속: 0.5 ㎖/min

검출: 221 ㎚에서 UV 흡수

도 1은 상기 젤 여과 크로마토그래피로피에 따라 수득된 글로빈 프로테올라이세이트의 젤 여과 크로마토그램을 나타낸다.

제조 실시예 2 혈액 TG 수치의 증가를 억제하는 펩타이드의 분획 및 정제

본 발명의 펩타이드는 하기의 절차에 따라서 수득되었다:

(1) 이온교환, (2) 한외 여과, (3) 산성 조건하에서 역상 컬럼 크로마토그래피에 의한 분리, 및 (4) 중성 조건하에서 역상 크로마토그래피에 의한 분리.

(1) 이온교환

제조 실시예 1에서 수득된 글로빈 프로테올라이세이트 13.7 g 을 포함한 10% 수용액은 산성 양이온 교환 수지[앰버라이트(Amberlite) IRC₅₀, H⁺ Type, Organo Co., Ltd.]로 약하게 주입되었고, 흡착을 위해 1 시간 동안 교반되었다.

(2) 한외 여과

상기 언급된 이온 교환에 의해 수득된 흡착되지 못한 분획은 교반력 한외 여과 단위(Advantec 제조, UHP 90K)와 한외 여과막(Advantec 제조, UIIH-1, 분자량 절단: 1000)을 이용해 한외 여과되었다. 한외 여과 막에 남은 액체(잔여 액체)가 모아졌다. 따라서 수득된 분획은 산성 가수분해될 수 있고, 닌히드린(ninhydrin) 방법에 따라 정량화되었다. 산성 가수분해는 3 내지 5 ㎎의 단백질 당 시험관에 6 N의 최종 농도를 가진 히드로클로르 산(hydrochloric acid) 1 ㎖을 넣고 대기압하에서 시험관을 밀봉하여 22 시간 동안 110℃에서 가열함으로써 수행되었다. 앞서 언급된 닌히드린 방법은 하기와 같이 수행되었다. 가수분해 이후에 예의 pH는 수산화나트륨으로 5.0으로 조절되었다. 상기 예는 이후 100℃에서 15분 동안 0.2 M 시트레이트(citrate) 버퍼(pH 5.0)에 용해된 닌히드린 시약과 반응시켰다. 570 ㎚에서 흡광도가 측정되었다. L-루신(L-leucine) 수용액(75, 150, 225, and 300 nmol/㎖)은 각각 표준용액으로써 닌히드린 반응에 이용되었다. 교정 곡선은 측정된 흡광도로부터 수득되었고 예의 L-루신과 동등한 아미노 그룹의 양이 측정되었다. 정량의 결과는 표 1에 나타내었다. 초기 글로빈 프로테올라이세이트에 근거한 수득물 또한 표1에 나타내었다.

(3) 역상(산성) 크로마토그래피

상기의 한외 여과후, 수득된 여과물에 하기와 같은 조건하에서 역상(산성)크로마토그래피가 수행되었다.

<역상(산성) 크로마토그래피>

장치: 고성능 액체 크로마토그래프(Shimadzu Corporation, Model LC-10A)

칼럼: SuperPac Pep-S, 15 μm, 22.5 x 250 mm, Pharmacia 제조

용출액: 0.1% 의 트리플루오아세트(trifluoroacetic) 산을 함유하는 아세토니트릴(acetonitrile) 수용액

아세토니트릴의 직선 농도 구배는 2 내지 35%; 아세토니트릴(acetonitrile) 농도는 1%/분의 비율로 변화시켰다.

유속: 5 ㎖/분

온도: 40℃

검출: 220 ㎚에서 UV 흡수

분획 시간: 53.8 내지 54.5 분(분획 A)

도 2는 상기 기술된 역상(산성)크로마토그래피에 의해 수득된 크로마토그램을 보여준다.

따라서 수득된 분획물은 산성 가수분해될 수 있고 아미노산 분석에 의해 정량화될 수 있다. 산성 가수분해는 단백질 3 내지 5 ㎎이 있는 시험관에 1 ㎖ 염산(최종농도 6 N HCL)을 넣고, 감소된 압력하에서 시험관을 밀봉하여, 110℃에서 22 시간 동안 가열시켰다. 아미노산 분석은 하기의 조건하에서 수행되었다.

<아미노산 분석>

컬럼: 시마쯔(Shimadzu)사에서 제조된 Shim-pack ISC-07/S1504 Na, 7 μm, 4.0 x 150 ㎜

용출액: 시마쯔(Shimadzu)사에서 제조된 아미노산 이동상 키트(Na 형태)

유속: 0.3 ㎖/분

온도: 55℃

반응 용액 1: 시마쯔(Shimadzu)사에서 제조된 분석 키트 OPA 시약

검출: 형광 흡수(Ex 348 ㎚, Em 450 ㎚)

산성 가수분해 용액은 회전 증발기를 이용해 농축되고, 건조되고 굳게 되며, 또한 12 시간 이상 감소된 압력하에서 건조됨으로써 완전히 염산을 제거하였다. 수득물은 0.2 M 시트레이트 버퍼(pH 2.2)에 용해되어서 각각의 아미노산은 약 100 nmol/㎖의 비율로 함유되었다. 이 용액은 0.45 ㎛ 여과기를 통해 여과되었고 여과물의 10 ㎕는 칼럼으로 도입되었다. 표준 용액에 대해서는, 표준용액(Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)과 혼합된 18-성분 형태-H 아미노산이 0.2 M 시트레이트 버퍼(pH 2.2)로 25-배 희석되었고, 상기 희석된 용액의 10 ㎕는 컬럼(각 아미노산 당 1 nmol/10 ㎕)으로 도입되었다. 아미노산들의 피크 부분을 Chromatopac C-R4A(시마쯔 사)를 이용하여 계산 및 분석되었고 아미노산의 양은 표준 용액의 피크 부분 대비 예의 피크 부분의 비율을 기초로 하여 계산되었다. 상기 결과는 표 1에서 나타냈다. 글로빈 프로테올라이세이트에 근거한 수득물 또한 표 1에서 나타냈 다.

(4) 역상(중성) 크로마토그래피

상기 기술된 역상(산성) 크로마토그래피에 의해 용출 및 분획된 분획은 하기의 조건하에서 첨가적으로 역상(중성) 크로마토그래피를 받게 하였다.

<역상(중성)크로마토그래피>

칼럼: 파마시아(Pharmacia)에서 제조된 SuperPac Pep-S, 15 ㎛, 22.5 x 250 ㎜

용출액: 20 mM의 암모늄 아세테이트 버퍼(pH 6.5)를 함유한 아세토니트릴 수용액

0 내지 25%의 아세토니트릴의 직선 농도 구배; 아세토니트릴의 농도는 0.5%/분의 속도로 변화시켰다.

유속: 5 ㎖/분

온도: 40℃

검출: 220 ㎚에서 UV 흡수

분획 시간: 41.7 내지 43.2 분(분획 B), 45.8 내지 51.0 분(분획 C)

도 3은 상기 기술한 역상(중성) 크로마토그래피에 의해 수득된 크로마토그램을 보여준다. 수득된 분획이 상기 (3)에서와 같이 정량화되고, 이 후 동정되었다. 아미노산 조성은 총 아미노산 함량에 대한 상대적인 각각의 아미노산 비율에 근거하여 계산되었다. 그 결과, 분획 B는 VTL(Val-Thr-Leu)였고, 분획 C는 VVYP (Val-Val-Tyr-Pro)였음을 보여준다. 헤모글로빈의 아미노산 서열과의 일치는 이러 한 분획들이 헤모글로빈에 존재한다는 것이 증명되었다. 정량의 결과는 글로빈 프로테올라이세이트에 근거한 수득물과 함께 표 1에서 나타냈다.

펩타이드　 단백질의 양(g) 수득률(%)

글로빈 프로테올라이세이트 13.70 100.0

이온교환 +한외 여과 　　　 4.24　　　　 30.9
역상 크로마토그래피

분획 A 0.39　　　　　　 0.28

분획 B VTL 0.009　　　　 0.06

분획 C VVYP 　　　　 0.006　　　0.04

실험 실시예 1 혈당수치 증가 억제효과(마우스)

당내성 실험은 제조 실시예 1에서 수득된 글로빈 프로테올라이세이트 및 제조 실시예 2(4)에서 수득된 분획 C 펩타이드(VVYP)를 이용하여 수행되었고, 이는 상기 물질들의 혈당수치증가 억제효과를 조사하기 위함이다.

하룻밤 동안 금식시킨 70마리의 수컷 ICR 마우스(8주령)를 그룹당 10마리의 마우스로 이루어진 7그룹으로 나누었다. 구강 탐침을 이용하여 각 그룹의 마우스들에게 5 ㎎(실험 그룹 1), 10 ㎎(실험 그룹 2), 또는 50 ㎎(실험 그룹 3)의 양의 글로빈 프로테올라이세이트를 위 내부로 투여하고; 펩타이드(VVYP)를 1 ㎍(실험 그룹 4), 2 ㎍(실험 그룹 5) 또는 10 ㎍(실험 그룹 6)을 투여하거나; 또는 물 0.2 ㎖(대조 그룹)을 투여하였다. 상기 글로빈 프로테올라이세이트 및 펩타이드(VVYP)는 물 0.2 ㎖에 용해시킨 후에 사용되었다. 투여 직후, 0.2 ㎖의 포도당 용액(0.25 g/㎖ 글루코오스 수용액)은 구강 탐침을 이용하여 비슷한 방식으로 위 내부로 투여되었다. 혈액은 꼬리 정맥으로부터 포도당 용액 투여 후 30, 60, 90분 및 120분 후에 채취하였고, 혈당수치는 시약 키트(포도당 CII Test Wako, Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Osaka)를 이용하여 무타로타제(mutarotase)/GOD 방법에 따라 측정되었다.

포도당 용액 투여 120분 후, 실험 그룹 및 대조 그룹의 혈당수치(AUC: 곡선 아래 부분, ㎎/dL·120분)는 표 2에 나타내었다. 표 2에서, "대조군 대비 상대적 퍼센트" 는 대조 그룹의 혈당 수치 100%에 대하여 실험 그룹의 혈당 수치의 비율을 언급하고 있다(이후에도 동일하게 적용된다).

그룹	투여량(양/마우스)	혈당수치(㎎/dL·120분)	대조군 대비 상대적 퍼센트
대조군	-	1768±360	100%
실험 그룹1	글로빈 프로테올라이세이트 5 ㎎	1654±470	94%
실험 그룹2	10 ㎎	1596±500	90%
실험 그룹3	50 ㎎	888±204^*	50%
실험 그룹4	펩타이드(VVYP) 1 ㎍	1537±486	87%
실험 그룹5	2 ㎍	892±210^*	54%
실험 그룹6	10 ㎍	644±140^**	40%

^*p<0.05

^** p<0.01

상기 표를 통해서 알 수 있듯이, 글로빈 프로테올라이세이트 및 펩타이드(VVYP)는 투여량 의존적으로 마우스의 혈당 수치의 증가를 현저히 억제시켰다. 펩타이드(VVYP)의 혈당 강하 작용은 글로빈 프로테올라이세이트의 작용보다 1000배 이상 강하다. 글로빈 프로테올라이세이트는 약 1% 비율의 펩타이드(VVYP)를 함유하고 있기 때문에, 혈당 강하 작용을 하는 글로빈 프로테올라이세이트의 활성 인자(활성 성분) 중의 하나는 펩타이드(VVYP)일 것이다.

실험 실시예 2 혈당수치의 증가에 대한 억제효과(일본인)

당내성 실험(7일의 휴약기, 단순 맹검 교차 시도)은 글로빈 프로테올라이세이트의 혈당 수치의 증가를 억제하는 작용을 연구하기 위하여 사람들(일본인)(당뇨병 대상: 12명의 Ⅱ 형태 당뇨병 환자로서 금식 혈당 수치가 200 ㎎/㎗ 이상인 자; 정상 대상: 10명의 금식 혈당 수치가 100 ㎎/㎗ 이하의 정상대상; 평균 체중: 68 ㎏)에 대하여 제조 실시예1에서 수득된 글로빈 프로테올라이세이트를 이용하여 수행되었다.

지난 밤부터 금식으로 인해 배고픈 상태인 실험 대상들(당뇨병 대상 및 정상 대상)에게 글로빈 프로테올라이세이트 1000 ㎎, 1500 ㎎ 또는 3000 ㎎(실험 그룹)을 주거나 우유 카세인 3000 ㎎(대조 그룹)을 주었다. 상기 투여 직후, 포도당 용액(75 g/200 ㎖)이 투여되었다. 포도당 용액 투여 후 60, 90분 및 120분이 지나 혈액을 채취하였고, 혈당 수치는 시약키트(포도당 CII Test Wako, Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Osaka)를 이용하여 무타로타제/GOD 방법에 따라서 측정되었다.

포도당 용액 투여 후 120분이 지나서 실험 그룹과 대조그룹의 대상(당뇨병 대상 및 정상 대상)들의 혈당 수치(AUC: 곡선 아래의 부분, ㎎/dL·120분)는 표 3에 나타내었다.

대상	투여량	혈당수치(㎎/dL·120분)	대조군 대비 상대적 퍼센트
정상 대상 (n=10)	대조 그룹 0 ㎎	4575±680	100%
	실험 그룹 글로빈 프로테올라이세이트 1000 ㎎	4212±754	92%
	글로빈 프로테올라이세이트 1500 ㎎	4198±770	92%
	글로빈 프로테올라이세이트 3000 ㎎	3745±759^**	82%
당뇨병 대상 (n=12)	대조 그룹 0 ㎎	12675±1680	100%
	실험 그룹 글로빈 프로테올라이세이트 1000 ㎎	11431±2288	90%
	글로빈 프로테올라이세이트 1500 ㎎	10862±2203^*	86%
	글로빈 프로테올라이세이트 3000 ㎎	8773±2480^**	69%

^*p<0.05

^** p<0.01

상기 표에서 알 수 있듯이, 3000 ㎎의 글로빈 프로테올라이세이트의 투여는형태 Ⅱ 당뇨병 대상들 및 정상 대상들 모두에서 혈당 수치 증가에 대한 현저한 억제효과가 통계적으로 나타났다. 하지만, 임상 적용의 측면에서, 글로빈 프로테올라이세이트는 정상 대상보다 당뇨병 대상에 대한 더 현저하고 유용한 효과를 보여줄 것이다.

따라서, 글로빈 프로테올라이세이트는 형태 Ⅱ(인슐린 비의존형) 당뇨병을 가진 대상들의 혈당 증가를 현저히 억제하는 것으로 여길 수 있다. 상기 실험 실시예 1의 결과를 통해, 글로빈 프로테올라이세이트의 주요 성분(활성 인자)는 펩타이드(VVYP)가 될 것이고, 펩타이드(VVYP)는 형태 Ⅱ(인슐린 비의존형) 당뇨병을 가진 환자의 혈당 증가를 억제하는데 있어서, 글로빈 프롤테올리사테의 효과보다 5000배 더 강한 작용을 가지고 있다고 예상된다.

실험 실시예 3 혈중 인슐린 수치의 증가 효과(일본인)

12명의 대상들(일본인, 평균 체중: 67 ㎏)은 제조 실시예1에서 수득된 글로빈 프로테올라이세이트 1000 ㎎ 및 3000 ㎎이 투여되었고 플라시보(우유 카세인) 1000 ㎎을 7일의 휴약기(단순 맹검 교차 시도)를 가지고 투여받았다. 각 물질의 투여 후, 혈중 인슐린 및 혈중 티로닌 수치를 측정하기 위해 혈액이 채취되었다. 특히, 대상들은 전날 밤부터 12 시간 이상 금식하였다. 실험 당일에는, 혈중 인슐린 및 혈중 티로닌 수치를 측정하기 위해 상기 투여 직전부터 상기 투여 후 6 시간 까지 혈액이 매 시간마다 채취되었다. 혈중 인슐린 수치는 "Glazyme Insulin-EIA TEST"(Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Osaka)를 이용하여 측정되었다. 혈중 티로닌 수치의 측정(CLIA 방법에 따라)은 시오노기 생의학 실험실(Shionogi Biomedical Laboratories,Osak)에서 수행되었다.

실험 물질들(글로빈 프로테올라이세이트 1000 ㎎, 3000 ㎎ 및 플라시보)의 투여 하고, 3 시간이 경과한 후의 혈중 인슐린 수치(mU/L·3 시간) 및 혈중 티로닌 수치(ng/L·3 시간)는 표 4에 나타냈다.

	플라시보 섭취	글로빈 프로테올라이세이트 섭취
	플라시보 섭취	1000 ㎎	3000 ㎎
혈중 인슐린 수치(mU/L·3 시간)	8.7±1.1	10.1±1.6	15.6±2.1^*
혈중 인슐린 수치(mU/L·3 시간)	100%	116%	179%
혈중 티로닌 수치(ng/L·3 시간)	0.38±0.10	0.22±0.08	0.33±0.07

^*p<0.05

상기 표에서 알 수 있듯이, 글로빈 프로테올라이세이트 3000 ㎎의 투여는 혈중 티로닌 수치에는 큰 변화를 가져오지 않았지만, 혈중 인슐린 수치(인슐린 분비 비율)는 현저하게 증가했다. 이러한 사실은 글로빈 프로테올라이세이트가 갑상선 기능에 부작용을 주지 않고 사람들(일본인)의 인슐린 분비 속도를 명확하게 증가시키는 작용을 한다는 것을 입증한다. 게다가, 상기 표에서 보여지는 결과를 고려할 때, 상기 실험 실시예 2에서 나타난 사람들(일본인)의 글로빈 프로테올라이세이트 증가를 억제하는 효과는 아마도 인슐린 분비 강화작용에 기인하기 때문이고, 실험 실시예 1의 결과를 고려할 때, 글로빈 프로테올라이세이트의 활성 성분(활성 인자)은 펩타이드(VVYP)일 것이다.

실험 실시예 4 혈중 인슐린 수치의 증가 효과(서양인)

17명의 서양인들(7명의 비만 대상, 10명의 정상 대상, 평균 체중: 82 ㎏)에게 제조 실시예 1에서 제조된 글로빈 프로테올라이세이트 500, 1000 및 2000 ㎎ 과 플라시보(우유 카세인 1000 ㎎)을 7일의 휴약기(단순 맹검 교차 시도)를 가지고 투여했다. 각각의 물질을 투여 후, 혈액은 혈중 인슐린 및 혈당 수치를 측정하기 위해 채취되었다. 특히, 상기 대상들에게 크림 스프(41 g의 탄수화물과 67 g의 지방함유)를 실험 물질과 동시에 주었다. 혈액은 혈중 인슐린 및 혈당 수치를 측정하기 위해 상기 투여 (0)직전부터 상기 투여 후 4 시간까지 매 시간 채취되었다.

혈중 인슐린 수치는 "Glazyme Insulin-EIA TEST"(Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Osaka)를 이용하여 측정되었다. 혈당 수치는 시약 키트(Glucose CII Test Wako, Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Osaka)를 이용하여 무타로타세/GOD 방법에 따라 측정되었다.

상기 실험 물질(글로빈 프로테올라이세이트 500 ㎎, 1000 ㎎ 및 2000 ㎎, 및 플라시보)을 비만 대상과 정상 대상들에게 투여 후 4 시간이 지난 후의 혈중 인슐린 수치(AUC: 곡선 아래 부분, mU/L·4 시간) 및 혈당 수치(mg/dL·4시간)는 표 5에 나타냈다.

혈중 인슐린 수치에 대한 글로빈 프로테올라이세이트의 효과

대상	실험 물질	투여량	인슐린			혈당 수치
대상	실험 물질	(㎎)	(mU/L·4 시간)			(㎎/dL·4 시간)
비만 대상	플라시보	0	47.9±7.1	100%		42.2±9.6	100%
	글로빈 프로테올라이세이트	500	73.4±10.5	153%	p<0.05	40.9±6.7	97%
		1000	85.2±12.8	178%	p<0.01	24.2±4.9	57%	p<0.05
		2000	64.9±4.4	136%	p<0.05	30.0±5.2	71%	p<0.05
정상 대상	플라시보	0	51.2±3.6	100%		38.7±11.3	100%
	글로빈 프로테올라이세이트	500	55.7±5.4	109%		34.1±8.2	88%
		1000	40.2±2.7	79%	p<0.01	39.6±7.3	102%
		2000	42.4±2.7	83%	p<0.01	38.8±6.4	100%

상기 표에서 알 수 있듯이, 비만 대상들의 혈중 인슐린 수치(인슐린 분비 비율)는 글로빈 프로테올라이세이트의 투여에 의해 분명하게 증가되었고, 혈당 수치의 증가는 이에 따라 억제되었다. 이러한 효과는 글로빈 프로테올라이세이트를 1000 ㎎ 투여했을 때 현저하였다. 반대로, 혈중 인슐린 수치(인슐린 분비 비율)는 정상 대상들에서 어떤 증가(강화)도 관찰되지 않았다. 정상 대상들은 다소 하향되는 추세를 보였다.

일본인 대상들에 실행된 실험 실시예 3에서, 글로빈 프로테올라이세이트 3000 ㎎의 투여할 때가 글로빈 프로테올라이세이트 1000 ㎎를 투여할 때보다 혈중 인슐린 수치(인슐린 분비 비율)를 강화하는데에 더 큰 효과를 보여줬다. 반대로, 이 실험 실시예를 서양인들에게 실행했을 때, 글로빈 프로테올라이세이트 1000 ㎎의 투여할 때가 글로빈 프로테올라이세이트 2000 ㎎를 투여할 때보다 혈중 인슐린 수치를 강화하는 데에 더 큰 효과(인슐린 분비 강화 효과)를 보여줬다. 이러한 사실을 고려할 때, 글로빈 프로테올라이세이트가 일본인 당뇨병에 효과적인 개선 또는 예방용 조성물로써 유용하지만, 서양인의 당뇨병에는 더 효과적일 것이다.

실험 실시예 5 혈당 수치의 감소효과(서양인)

BMI 30 이상(나이 18 내지 65세)의 수치를 가진 30명의 비만 대상들은 12주 비만 치료 프로그램(식이 요법, 운동요법)을 받았다. 그들 가운데 무작위로 선별된 17명은 제조 실시예 1에서 제조된 1.5 g의 글로빈 프로테올라이세이트를 함유한 저칼로리 식품 을 하루에 한번 집에서 섭취했다(실험 그룹). 나머지 13명의 대상들은 상기 글로빈 프로테올라이세이트를 함유하지 않는 식품을 하루에 한번 집에서 섭취했다(대조 그룹). 이러한 가정 건강관리를 수행한지 37주 후, 실험 그룹과 대조 그룹의 실험 대상들의 금식 혈당 수치와 체중을 측정하여 가정 건강관리를 시작하기 전에 측정된 수치와 비교하였다. 혈당 수치는 시약키트( Glucose CII Test Wako, Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Osaka)를 이용하여 무타로타제/GOD 방법에 따라 측정되었다. 표 6은 실험 그룹과 대조 그룹의 가정 건강관리를 시작하기 전의 금식 혈당 수치 대비 금식 혈당 평균 수치의 변화를 보여준다.

	대상의 수	체중 변화(㎏)	혈당 수치 변화(㎎/dL)
대조 그룹	13	-3.7 ± 7.2	+9.0 ± 14.1
실험 그룹(글로빈 프로테올라이세이트-투여 그룹)	17	-3.9 ± 9.4	-7.3 ± 16.8

상기 표에서 알 수 있듯이, 글로빈 프로테올라이세이트-투여 그룹과 글로빈 프로테올라이세이트-비투여 그룹(대조 그룹) 모두의 실험 대상들은 가정 건강관리가 시작되기 전보다 더 낮은 체중을 보였다. 더욱이, 글로빈 프로테올라이세이트-투여 그룹은 현저히 낮아진 혈당 수치를 보였다. 실험 실시예 4의 결과를 고려할 때, 이 실험 실시예에서 보여지는 글로빈 프로테올라이세이트의 혈당 감소의 작용은 강화된 인슐린 분비 때문일 것이다.

실험 실시예 6 안전성 실험

실시예 2에서 제조된 아미노산 서열 Val-Val-Tyr-Pro(서열번호 1)를 함유한 펩타이드 10 g/㎏(최대 허용 투여량) 이상의 양을 ICR 수컷 마우스, 암컷 마우스에게 구강으로 투여하였고, 모두 치사하지 않았으므로 펩타이드의 안전성이 입증되었다.

실시예 1 펩타이드 ( VVYP ) 함유한 식품의 제조

(1) 분말 우유의 제조

제조 실시예 2에서 제조된 아미노산 서열 Val-Val-Tyr-Pro(서열번호 1)를 함유한 펩타이드 10 ㎎을 유아용 분말 우유 유동식 100 g에 첨가함으로써 분말 우유는 인슐린 분비 강화 작용 또는 혈당의 증가를 억제하는 작용을 갖게 된다.

(2) 초콜렛의 제조

제조 실시예 2에서 제조된 아미노산 서열 Val-Val-Tyr-Pro(서열번호 1)를 함유한 펩타이드 50 ㎎을 초콜렛 100 g에 첨가함으로써 초콜렛은 인슐린 분비 강화 작용 또는 혈당의 증가를 억제하는 작용을 갖게 된다.

(3) 녹차 음료의 제조

녹차 잎 80 ㎏을 뜨거운 물(80℃) 300 ℓ에 넣고 4분 동안 상기 온도에서 추출되었다. 수득된 추출물을 냉각시키고 원심분리했다. 깨끗한 상등액은 녹차 추출물로써 모아졌다. 이 추출물에 0.4 ㎏의 비타민 C를 첨가한 후, 제조 실시예 2에서 제조된 아미노산 서열 Val-Val-Tyr-Pro(서열번호 1)를 함유한 펩타이드 50 g을 첨가했다. 최종 부피 1000 ℓ를 얻기 위해 뜨거운 물이 첨가되었다. 상기 혼합물이 85℃ 이상의 온도로 가열되었고, 금속 캔에 담아져서 레토르트(retort)-살균처리(125℃, 5분)시켜, 녹차 음료를 만들었다.

(4) 츄잉껌의 제조

츄잉껌은 하기와 같은 조성으로 제조되었다.

<츄잉껌 조성>

껌베이스 25.0 중량부

수크로오스 63.8 중량부

옥수수 시럽 10.0 중량부

글리세롤 1.0 중량부

펩타이드(VVYP) 0.2 중량부

총 100.0 중량부

우선, 껌베이스, 설탕, 옥수수 시럽 및 글리세롤이 혼합되었다. 다음으로, 제조 실시예 2에서 제조된 아미노산 서열 Val-Val-Tyr-Pro(서열번호 1)를 함유한 펩타이드가 첨가되고, 상기 혼합물은 믹서를 이용하여 50℃에서 일정하게 반죽 되었다. 냉각 후, 상기 혼합물을 롤러로 압축시킴으로써 활성 인자로서 펩타이드(VVYP)를 스틱 당 5 ㎎의 비율로 함유하는 츄잉껌 스틱을 만들었다.

실시예 2 글로빈 프로테올라이세이트를 함유하는 식품의 제조

(1) 보강제

하기의 성분들을 표준 방법에 따라 반죽하고, 표면을 까슬까슬하게 하고, 건조하고, 정제하여, 활성 인자로써 글로빈 프로테올라이세이트를 정제(200 ㎎) 당 25 중량%(50 ㎎)의 비율로 함유하는 정제를 만들었다. 이러한 정제들은 글로빈 프로테올라이세이트(항당뇨 작용, 혈당 수치 증가 억제작용, 인슐린 분비 강화작용)로 인한 약리학 작용을 갖는 보강제로써 쓰인다.

<정제 조성> (정제 당)

글로빈 프로테올라이세이트(제조 실시예 1) 50 ㎎

결정 셀룰로오스 140 ㎎

수크로오스 지방산 에스테르 10 ㎎

총 200 ㎎

실시예 3 본 발명의 펩타이드를 함유한 사료의 제조

제조 실시예 2에서 제조된 아미노산 서열 Val-Val-Tyr-Pro(서열번호 1)를 함유한 펩타이드를 비타민, 미네랄 등을 포함한 예비 혼합물에 0.1 중량%의 비율로 첨가했다. 이 혼합물은 10 중량%의 비율로 상업적으로 이용 가능한 개사료에 첨가하여, 인슐린 분비 강화 작용 또는 혈당의 증가를 억제하는 작용을 갖는 개사료를 만들었다.

본 발명에 따라 생산된 약학적 조성물, 식품 조성물 및 사료 조성물은 활성 인자로써 글로빈 프로테올라이세이트 또는 펩타이드(VVYP)를 함유하며 이로 인해 혈당을 감소시키거나 인슐린 분비를 강화시키는 작용을 보여준다. 이러한 조성물들은 혈당 감소 또는 인슐린 분비 강화작용 때문에 당뇨병 또는 경계 당뇨병 대상들의 고혈당 혈당 수치를 낮추는 작용을 보여준다. 따라서, 본 발명의 조성물들은 고혈당으로 인한 질환들, 특히 당뇨병과 당뇨 합병증을 예방 또는 치료하는데 효과적으로 이용될 수 있다.

<110> Korea Institute of Oriental Medicine <120> The primers specific to Cervus elaphus, C. nippon, C. canadensis and Rangifer tarandus gene and the method to identify Cervi Parvum Cornu species <160> 19 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 22 <212> DNA <213> CST2 primer <400> 1 taatatactg gtcttgtaaa cc 22 <210> 2 <211> 24 <212> DNA <213> CST39 primer <400> 2 gggtcggaag gctgggacca aacc 24 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> SeqR primer <400> 3 atgtcctgtg accattgact 20 <210> 4 <211> 21 <212> DNA <213> FOR primer <400> 4 ccctaagact caaggaagaa g 21 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> RED <400> 5 gtggttggtg gatgtaaaat 20 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> NIP <400> 6 tatcttacgc accggtttat 20 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> ELK <400> 7 ttttatgtac tacgagcgca 20 <210> 8 <211> 21 <212> DNA <213> REIN <400> 8 gtgccatgta cgatcaataa t 21 <210> 9 <211> 28 <212> DNA <213> L14724 <400> 9 cgaagcttga tatgaaaaac catcgttg 28 <210> 10 <211> 35 <212> DNA <213> H15149 <400> 10 aaactgcagc ccctcagaaa tgatatttgt cctca 35 <210> 11 <211> 199 <212> DNA <213> C. elaphus <400> 11 ccctaagact caaggaagaa gccatagccc cactatcaac acccaaagct gaagttctat 60 ttaaactatt ccctgatgct tattaatata gttccataaa aatcaagaac tttatcagta 120 ttaaatttcc aaaaagtttt aatatttcaa tacagctttc cactcaacac ccattttaca 180 ttttacatcc accaaccac 199 <210> 12 <211> 299 <212> DNA <213> C. nippon <400> 12 ccctaagact caaggaagaa gccatagccc cactatcaac acccaaagct gaagttctat 60 ttaaactatt ctctgacgct tattaatata gttccataaa aatcaagaac tttatcagta 120 ttaaatttcc aaaaaatttt aatattttaa tacagttttc tactcaacac ccaatttaca 180 tttatgtcct actaattaca caacaaaaca cgtgatataa ccttatgcac ttgtagcaca 240 taaaattaat gcgttaagac ataccatgta caacagcaca taaaccggtg cgtaagata 299 <210> 13 <211> 245 <212> DNA <213> C. e. canadensis <400> 13 ccctaagact caaggaagaa gccatagccc cactatcaac acccaaagct gaagttctat 60 ttaaactatt ccctgacgct tattaatata gttccataaa aatcaagaac tttatcagta 120 ttaaatttcc aaaaaattta atattttaat acagctttct actcaacatc caatttacat 180 tttatgtcct actaattaca cagcaaaaca cgtgatataa ccttatgcgc tcgtagtaca 240 taaaa 245 <210> 14 <211> 375 <212> DNA <213> R. tarandus <400> 14 ccctaagact caaggaagaa gctatagccc cactatcaac acccaaagct gaagttctaa 60 ttaaactatt ccctggcgta tattaatata gctccacaaa attcaagagc cttgtcagta 120 ttaaatttct aaaaaccttc aagaatttaa tacagttctg cactcaatag ccatattata 180 tattaaatat cattaactac ataaatattt tataaacgta catatatggt cctgtacggc 240 tatagtacat aaaattaatg tattaagaca tattatgtat aatagtacat taaattatat 300 gccccatgct tataagcaag tacttgacat tatttacagt acatagtaca taatattatt 360 gatcgtacat ggcac 375 <210> 15 <211> 80 <212> DNA <213> conserved sequence <400> 15 acctccctaa gactcaagga agaagccata gccccactat caacacccaa agctgaagtt 60 ctatttaaac tattctctga 80 <210> 16 <211> 49 <212> DNA <213> C. elaphus primer region <400> 16 tacattttac atccaccaac cacacaacaa aatatgtaat aaaacctta 49 <210> 17 <211> 77 <212> DNA <213> C.nippon primer region <400> 17 atgtacaaca gcacataaac cggtgcgtaa gatacattat gcatgatagt acataaatta 60 atgtattagg acatact 77 <210> 18 <211> 20 <212> DNA <213> C. e. canadensis primer region <400> 18 tgcgctcgta gtacataaaa 20 <210> 19 <211> 23 <212> DNA <213> R.tarandus primer region <400> 19 atattattga tcgtacatgg cac 23

Claims

글로빈 프로테올라이세이트(globin proteolysate) 또는 발린-발린-티로신-프롤린 펩타이드(Val-Val-Tyr-Pro peptide)를 활성성분으로 포함하는 항당뇨병제.
삭제
삭제
글로빈 프로테올라이세이트(globin proteolysate) 또는 발린-발린-티로신-프롤린 펩타이드(Val-Val-Tyr-Pro peptide)를 활성성분으로 포함하는, 혈당 증가 억제 또는 인슐린 분비 증대용 건강 식품.
글로빈 프로테올라이세이트(globin proteolysate) 또는 발린-발린-티로신-프롤린 펩타이드(Val-Val-Tyr-Pro peptide)를 활성성분으로 포함하는, 혈당 증가 억제 또는 인슐린 분비 증대용 사료.
글로빈 프로테올라이세이트(globin proteolysate) 또는 발린-발린-티로신-프롤린 펩타이드(Val-Val-Tyr-Pro peptide)를 활성성분으로 포함하는 당뇨병 또는 당뇨병 합병증 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제 6항에 있어서, 상기 당뇨병 합병증은 당뇨병성산증, 당뇨병성황색종, 당뇨병성근위축증, 당뇨병성케톤증, 당뇨병성혼수, 당뇨병성위병, 당뇨병성괴저, 당뇨병성궤양, 당뇨병성설사, 당뇨병성미소혈관증, 당뇨병성사구체경화증, 당뇨병성심근증, 당뇨병성신경병, 당뇨병성신장병, 당뇨병성물집, 당뇨병성백내장, 당뇨병성피부병, 당뇨병성경화부종, 당뇨병성망막병증, 당뇨병성 유지방 괴사생성 및 당뇨병성 혈액순환장애로 구성된 군으로부터 선택되는 질환인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
제 6항에 있어서, 상기 당뇨병 또는 당뇨병 합병증은 제 Ⅱ 유형 당뇨병 또는 이의 합병증인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
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