ES2328835T3 - Hidrolizado de proteinas con efecto antidiabetico. - Google Patents

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Abstract

Utilización de un péptido que presenta la secuencia Val-Val-Tyr -Pro (SEC ID nº: 1), o de un proteolizado de globina que contiene el péptido para preparar una composición alimenticia para prevenir o tratar la enfermedad resultante de la hiperglucemia.

Description

Hidrolizado de proteínas con efecto antidiabético.
La presente invención se refiere a la utilización de un péptido que contiene la secuencia Val-Val-Tyr-Pro (SEC ID nº 1) o un hidrolizado de globina que contiene el péptido, que muestra una acción de prevención o mejora de las situaciones hiperglucémicas (acción de inhibir un aumento del azúcar sanguíneo) mediante la inducción de la secreción de insulina o la potenciación de la sensibilidad insulínica aumentando los receptores de la insulina de un individuo diabético o de un individuo en un estadio preclínico (diabetes incierta). Además, la presente invención se refiere a un péptido que contiene la secuencia Val-Val-Tyr-Pro (SEC ID nº 1) o un hidrolizado de globina que contiene el péptido, para la utilización en la prevención o en el tratamiento de enfermedades de origen hiperglucémico, en particular la diabetes y sus complicaciones. En la presente memoria, a veces, dichas composiciones se denominan colectivamente composiciones antidiabéticas.
Técnica anterior
El nivel de glucosa sanguínea en el organismo vivo está controlado por el equilibrio entre la acción hipoglucémica de la insulina y las acciones de la adrenalina, glucagón, glucocorticoides y similares que aumentan el azúcar. En particular, la insulina muestra glicogenólisis y gluconeogénesis en el hígado para dificultar la producción de la glucosa y reducir la cantidad de glucosa liberada en la sangre a partir del hígado y, al mismo tiempo, la insulina aumenta la absorción de la glucosa en el músculo esquelético y en los tejidos adiposos blancos, disminuyendo de esta forma el nivel de azúcar sanguíneo. Al contrario, la adrenalina, el glucagón, etc., propician la glicogenólisis y la gluconeogénesis en el
hígado y potencian la liberación de la glucosa a partir de éste, aumentado de este modo el nivel de azúcar sanguíneo.
La diabetes es una enfermedad metabólica en la que persiste un estado hiperglucémico debido a una disminución aguda o crónica en la acción de la insulina, lo que da lugar a alteraciones en el metabolismo del azúcar, metabolismo lipídico, metabolismo aminoácido, etc.
La diabetes se divide en insulino-dependiente o no insulino dependiente. La terapia alimenticia y los agentes hipoglucémicos orales no son efectivos para tratar la diabetes insulino dependiente, y ésta puede tratarse sólo mediante la insulina, a causa de que la capacidad secretora de ésta está reducida o ausente. Contrariamente, con respecto a la diabetes no dependiente de la insulina, que representa el 90% de los pacientes diabéticos. aunque la acción de la insulina está debilitada comparada con la de la gente normal, su tratamiento no necesariamente requiere insulina. La terapia alimentaria y la de ejercicios se llevan a cabo habitualmente, y si no son suficientes, puede utilizarse entonces a la vez la quimioterapia mediante agentes hipoglucémicos.
Tal como se ha descrito anteriormente, la diabetes es una enfermedad que da lugar a alteraciones metabólicas, debido a una situación hiperglucémica persistente, y constituye una enfermedad fastidiosa que puede acompañar a muchas complicaciones en los ojos, riñones, sistema nervioso, sistema cardiovascular, piel, etc. Se considera generalmente que dichas complicaciones disminuyen cuando el nivel de azúcar sanguíneo se controla cerca de los niveles normales (Saishin Igaku Daijiten, 1988, pág. 1211, Ishiyaku Publishers Inc., Japón).
Las preparaciones farmacéuticas conocidas para mejorar las condiciones hiperglucémicas incluyen preparaciones de insulina, preparaciones de sulfonil urea, preparaciones biguanido, preparaciones que mejoran la resistencia a la insulina, inhibidores de la a-glucosidasa, etc. Las preparaciones de insulina son agentes terapéuticos para la diabetes dependiente de la insulina, y aunque disminuyen de forma digna de confianza los niveles sanguíneos de azúcar muestran el riesgo de causar hipoglicemia. Las preparaciones de sulfonil urea son medicamentos que disminuyen los niveles de azúcar sanguínea potenciando la secreción endógena de insulina estimulando las células \beta pancreáticas. Pueden provocar hipoglicemia como efecto secundario debido a la secreción inducida de insulina, sin tener en cuenta los niveles sanguíneos de azúcar. Las preparaciones biguanídicas son medicamentos que disminuyen los niveles sanguíneos del azúcar inhibiendo la gluconeogénesis en el hígado, aumentando el consumo de azúcar en los músculos esqueléticos y similares, e inhibiendo la absorción intestinal de azúcar, mostrando la ventaja de que no causan hipoglicemia en la gente normal o diabética. Sin embargo, las preparaciones biguanídicas son problemáticas porque a menudo dan lugar a una acidosis láctica comparativamente severa. Las preparaciones que mejoran la resistencia a la insulina (por ejemplo, derivados tiazolidínicos y similares) son medicamentos que disminuyen los niveles del azúcar sanguíneo potenciando la acción de la insulina y activando las quinasas de los receptores de la insulina. Se ha puesto de manifiesto, sin embargo, que como efectos secundarios se desarrollan síntomas digestivos, edemas, etc., que disminuyen las cantidades de hematíes, hematocrito y hemoglobina y aumenta la cuantía de LDH (Atarashii Tonyobyo Chiryoyaku (New Diabetic Medicines), págs 90-99, 1994, Iyaku (Medicine and Drug), Journal Co., Ltd., Japón). Los inhibidores de la a-glucosidasa muestran una acción inhibidora de los niveles de azúcar sanguíneo después de la comida, retardando la digestión y absorción de los azúcares en el tracto gastrointestinal, pero son problemáticos en términos de efectos secundarios tales como meteorismo, borborigmos, diarrea, etc. (Joslin's Diabetes mellitus 13ª edición, págs. 521-522).
Puede, por tanto, decirse que aún no se han establecido suficientemente procedimientos para tratar efectivamente o prevenir la diabetes y sus complicaciones.
Además, Kagawa et al (The Journal of Nutrition, vol. 128, nº 1, páginas 56-60, 1998) describen el efecto del digesto de globina sobre la absorción y el catabolismo de las grasas en el hombre. Kagawa et al (Life Sciences, vol 58, nº 20, páginas 1745-1755, 1996), describen el efecto del digesto de globina sobre los niveles séricos de triglicéridos y la excreción de los lípidos administrados, la patente WO-A1-9421671 da a conocer un péptido que posee una función inhibidora de la diferenciación adipocítica, así como (da a conocer) alimentos y alimentos para animales salutíferos que contienen dicho péptido, la patente WO-A1-8906970 da a conocer un agente que mejora el metabolismo lipídico para el hombre o los animales, así como un procedimiento para su utilización, Steiner y Vranic (International Journal of Obesity, vol. 6, páginas 117-124, 1986) describen las consecuencias fisiológicas de la hipertrigliceridemia, y Steiner (American Journal of Cardiology, vol 57, nº 14, páginas 27G-30G, 1986) describe la relación entre hipertrigliceridemia y la intolerancia a los hidratos de carbono, así como sus consecuencias.
La figura 1 muestra un cromatograma de filtración en gel de un proteolizado de globina (Ejemplo 1 de Preparación).
La figura 2 muestra el resultado (cromatograma) de la cromatografía de fase inversa (ácida) llevada a cabo en el Ejemplo 2 de Preparación (3).
La figura 3 muestra el resultado (cromatograma) de la cromatografía de fase inversa (neutra) llevada a cabo en el Ejemplo 2 de Preparación (4).
Un objetivo de la presente invención consiste en proporcionar la utilización de un péptido que contiene la secuencia Val-Val-Tyr-Pro (SEC ID nº 1) o de un hidrolizado de globina que contiene el péptido, para preparar un agente antidiabético, una composición alimenticia y una composición alimenticia para animales, que poseen acciones inhibidoras de un aumento en el azúcar sanguíneo. Otro objetivo de la presente invención consiste en proporcionar un péptido que contiene la secuencia Val-Val-Typ-Pro (SEC ID nº: 1) o un hidrolizado de globina que contiene el péptido, para su utilización en el tratamiento o prevención de la diabetes o de sus complicaciones.
Los inventores llevaron a cabo una intensa investigación para alcanzar los objetivos que se describen anteriormente, y encontraron que cuando un proteolizado de globina se administra a ratones con una hiperglicemia inducida artificialmente, sus niveles de azúcar sanguínea disminuyen significativamente y la hiperglicemia mejora. Además, los inventores dilucidaron que el principio activo del proteolizado de globina es un péptido (VVYP) en él contenido, y que la acción de la inhibición de un aumento en el azúcar sanguíneo puede atribuirse a su acción potenciadora de la secreción de insulina.
Además, los inventores dilucidaron que la acción de inhibir un aumento en el nivel del azúcar sanguíneo y la de potenciar la secreción insulínica del proteolizado de globina del péptido (VVYP), no se observan en individuos que poseen niveles normales de azúcar sanguíneo, y que estas acciones se observan específicamente en pacientes diabéticos y en pacientes diabéticos inciertos que se encuentran en un estadio preclínico.
Basándose en estos hallazgos, los inventores confirmaron que el proteolizado de globina o el péptido (VVYP) inhiben y mejoran la hiperglicemia (disminuyen un nivel de azúcar sanguíneo que se considera hiperglucémico), y que se utiliza para prevenir o tratar enfermedades ocasionadas por la hiperglicemia, tales como la diabetes y sus complicaciones. La presente invención se llevó a cabo basándose en estos hallazgos.
En particular, la presente invención incluye las siguientes formas de realización:
1.
Utilización de un péptido que posee la secuencia Val-Val-Tyr-Pro (SEC ID nº: 1), o de un proteolizado de globina que contiene el péptido, para preparar una composición alimenticia para prevenir o tratar la enfermedad resultante de la hiperglicemia.
2.
Utilización de un péptido que posee la secuencia Val-Val-Tyr-Pro (SEC ID nº: 1), o de un proteolizado de globina que contiene el péptido, para preparar una composición alimenticia para animales, para prevenir o tratar la enfermedad resultante de la hiperglicemia.
3.
Utilización de un péptido que posee la secuencia Val-Val-Tyr-Pro (SEC ID nº: 1), o de un proteolizado de globina que contiene el péptido, para preparar un agente antidiabético.
4.
Utilización de un péptido que posee la secuencia Val-Val-Tyr-Pro (SEC ID nº: 1), o de un proteolizado de globina que contiene el péptido, para preparar alimento con una específica utilización sanitaria, que posee una función inhibidora de un aumento en el azúcar sanguíneo o de potenciación de la secreción insulínica, y que se utiliza para vigilar dicha función atentamente.
5.
Utilización de un péptido que posee la secuencia Va-Val-Tyr- Pro (SEC ID nº: 1), o de un proteolizado de globina que contiene el péptido, para preparar una composición alimenticia para animales con una específica utilización sanitaria, que posee una función inhibidora de un aumento en el azúcar sanguíneo, o una función de potenciación de la secreción de insulina, y que se utiliza para vigilar dicha función atentamente.
6.
Péptido que posee la secuencia Val-Val-Tyr-Pro (SEC ID nº: 1), o de un proteolizado de globina que contiene el péptido, para su utilización en la prevención o en el tratamiento de una enfermedad que resulta de una situación hiperglucémica causada por la debilidad o la falta de la acción insulínica.
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7.
Péptido que posee la secuencia Val-Val-Tyr-Pro (SEC ID nº: 1), o de un proteolizado de globina que contiene el péptido, para su utilización en la prevención o en el tratamiento de una enfermedad que resulta de una situación hiperglucémica causada por la debilidad o la falta de la acción insulínica según el punto 6, en el que la enfermedad es la diabetes o una complicación suya.
Una característica de la composición farmacéutica, de la composición alimenticia, y de la composición alimenticia para animales, es contener un proteolizado de globina o un péptido (VVYP) como ingredientes activos, para ser utilizados según la presente invención.
(1) Composición farmacéutica
Las composiciones farmacéuticas comprenden inhibidores del aumento del azúcar sanguíneo, potenciadores de la secreción insulínica y composiciones para prevenir o tratar enfermedades provocadas por la hiperglicemia. Una característica de dichos inhibidores del aumento del azúcar sanguíneo es contener un proteolizado de globina o un péptido (VVYP) en una cantidad efectiva para prevenir o mejorar la hiperglicemia (inhibiendo un aumento en el azúcar sanguíneo) de un paciente diabético o de un paciente diabético preclínico, es decir, un paciente diabético incierto. Una característica de dichos potenciadores de la secreción insulínica, es contener un proteolizado de globina o un péptido (VVYP) en una cantidad efectiva para potenciar la secreción insulínica en un paciente diabético o en un paciente diabético incierto. Además, dichas composiciones para prevenir y tratar enfermedades resultantes de la hiperglicemia, contienen un proteolizado de globina o un péptido (VVYP) en una cantidad efectiva para mostrar un aumento de la acción inhibidora del azúcar sanguíneo, o de una acción potenciadora de la secreción insulínica.
Un proteolizado de globina, es decir, una forma de ingrediente activo de la composición farmacéutica, es un hidrolizado de una proteína globina tal como hemoglobina, mioglobina, etc. El tipo de animales que puede constituir el origen de la proteína globina no está limitado y puede utilizarse una amplia variedad de animales, tales como bovinos, cerdos, ovejas, humanos, caballos, etc.
La carne de ganado, la carne de pescado y similares, que contienen grandes cantidades de mioglobina, pueden utilizarse como origen de proteínas de globina.
La hidrólisis de la proteína globina y otros procedimientos pueden llevarse a cabo según los procedimientos que se describen en WO89/06970. La hidrólisis se lleva a cabo habitualmente utilizando uno o dos enzimas hidrolíticas tales como proteasas ácidas, proteasas neutras y proteasas alcalinas.
Un ejemplo específico de un procedimiento para hidrolizar una proteína globina es dispersar en agua una proteína globina que contiene material, en una cantidad entre el 5 y el 30% en peso (contenido sólido), ajustando el pH con un ácido o una base para que sea óptimo para una proteasa, añadiendo una proteasa en un único lote o en varias porciones, y haciendo reaccionar la enzima entre 20 y 70ºC durante 3 a 48 horas.
El proteolizado obtenido de esta forma se utiliza como el proteolizado de globina que posee una acción inhibidora de un aumento en el azúcar sanguíneo o una acción potenciadora de la secreción insulínica de la presente invención. Puede utilizarse de esta forma, utilizarse después de secado, o utilizarse después de añadir un extensor tal como carboximetilcelulosa, dextrina o similares, seguido por secado/solidificación.
Un péptido (VVYP), es decir, otra forma de ingrediente activo de la composición farmacéutica de la presente invención, está contenido en el proteolizado de globina mencionado anteriormente en una proporción de aproximadamente 1% en peso, y puede por tanto aislarse/purificarse a partir del proteolizado de globina anteriormente mencionado. El aislamiento o purificación del péptido (VVYP) puede llevarse a cabo utilizando, como materiales iniciales, hidrolizados de, además de proteínas de globina, por ejemplo, de proteínas de carne de pescado, de polvos de pescado, y de proteínas animales similares; proteínas de maíz, proteínas de soja, y proteínas vegetales similares.
El procedimiento de aislamiento o purificación que se describe en la presente memoria, puede llevarse a cabo de la misma forma que en los procedimientos de purificación conocidos para las proteínas y los péptidos. Por ejemplo, puede obtenerse una fracción que contiene el péptido (VVYP), y entonces, a partir de la fracción, puede aislarse entonces el péptido (VVYP) mediante salación, diálisis, resina de intercambio iónico, ultrafiltración, cromatografía de fase inversa o similares, o utilizando dichos procedimientos en una combinación apropiada, si es necesario. Con respecto a la cromatografía de fase inversa que se ha mencionado entre dichos procedimientos de purificación, resulta preferido que se lleven a cabo combinadamente la cromatografía de fase inversa bajo condiciones ácidas y la cromatografía de fase inversa bajo condiciones neutras.
El contenido proteico de la fracción puede medirse según determinaciones proteicas conocidas, tales como los procedimientos de la ninhidrina. La secuencia aminoácida de un péptido contenido en la fracción aislada puede identificarse mediante procedimientos conocidos (análisis de aminoácidos).
La presencia del péptido diana de la invención, compuesto por la secuencia aminoácida Val-Val-Tyr-Pro, puede, por tanto, comprobarse. Además del péptido (VVYP) aislado o purificado según uno (de los) procedimientos mencionados anteriormente, una fracción que lo contiene puede utilizarse como un ingrediente activo de la composición farmacéutica de la presente invención, ya que la fracción muestra la inhibición de un aumento en el azúcar sanguíneo o la potenciación de la secreción insulínica.
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El péptido (VVYP) puede sintetizarse químicamente según los procedimientos de síntesis peptídica conocidos. Los ejemplos de síntesis peptídica son los procedimientos acídicos, los procedimientos de cloruro ácido, los procedimientos de anhídrido ácido, los procedimientos mezclados de anhídrido ácido, los procedimientos DCC, procedimientos de éster activado, procedimientos carboimidazólicos, procedimientos redox (de oxidación-reducción), procedimientos DCC-aditivos (HOMB, HOBt, HOSu) (Schreder, Luhke, The Peptide, volumen 1, 1966, Academic Press, New York, USA; Izumiya et al., Peptide Synthesis, Maruzen Co., Ltd. (1975); etc.), y procedimientos similares. Dichos procedimientos de síntesis peptídica incluyen procedimientos de síntesis en fase líquida y en fase sólida.
En relación con dichos procedimientos de síntesis peptídica, para aminoácidos que poseen grupos funcionales en cadenas laterales, por ejemplo, tirosina y treonina, (estos) grupos funcionales en cadenas laterales son preferentemente protegidos. En la presente memoria pueden utilizarse grupos protectores conocidos, por ejemplo, el grupo benciloxicarbonilo (Cbz-), el grupo t-butoxicarbonilo (Boc-), grupo bencilo (Bz-), etc. Dichos grupos protectores pueden eliminarse según procedimientos conocidos, durante la producción del péptido de la presente invención.
La composición farmacéutica puede estar compuesta en su totalidad por el proteolizado de globina o el péptido (VVYP). Cuando la composición se prepara combinadamente con otras sustancias, la cantidad del proteolizado de globina o del péptido (VVYP) no está limitada, siempre que sea suficiente para mostrar una acción inhibitoria de un aumento en el azúcar sanguíneo, o una acción potenciadora de la secreción insulínica. Habitualmente, la composición farmacéutica se prepara concomitantemente con portadores y aditivos farmacológicamente aceptables.
Los ejemplos de portadores son excipientes, diluyentes, aglomerantes, humectantes, desintegradores, inhibidores de la desintegración, potenciadores de la absorción, lubricantes, disolventes auxiliares, tampones, emulsificantes, agentes de suspensión, y similares, que se utilizan típicamente según la forma de administrar la composición farmacéutica (preparación). Los ejemplos de aditivos son estabilizadores, conservantes, tampones, ajustadores de isotonicidad, agentes quelantes, ajustadores del pH, surfactantes, agentes colorantes, sustancias químicas aromáticas, agentes saborizantes, edulcorantes, y similares, que se utilizan típicamente según la forma de administrar la preparación.
La forma de dosificación unitaria de la composición farmacéutica (forma de la preparación farmacéutica) puede seleccionarse adecuadamente según la vía de administración. La composición farmacéutica puede clasificarse como un agente oral, agente transpulmonar, agente transnasal, agente sublingual, agente parenteral (inyección, goteo), o similar. La composición farmacéutica puede componerse, formarse o prepararse según procedimientos conocidos, en formas sólidas de dosificación tales como comprimidos, grageas, dispersantes, polvos, gránulos, cápsulas, etc.; y formas líquidas de dosificación, tales como soluciones, suspensiones, emulsiones, jarabes, elíxires, etc. La composición farmacéutica puede prepararse en forma de un producto seco, que cuando se utilice, puede licuarse añadiendo un portador
apropiado. La composición farmacéutica puede prepararse en cualquier forma según los procedimientos conocidos.
La proporción del proteolizado de globina o del péptido (VVYP) en la composición farmacéutica no está limitada. Habitualmente, la composición farmacéutica se forma en el interior de una forma de preparación que contiene el proteolizado de globina en una cantidad entre el 0,1 y el 80% en peso, preferentemente entre el 5% y el 60% en peso, y más preferentemente entre el 20% y el 50% en peso, o del péptido (VVYF) en una cantidad entre el 0,001 y el 80% en peso, preferentemente entre el 0,01% en peso y el 10% en peso.
La dosificación de la composición farmacéutica obtenida de tal forma, puede determinarse adecuadamente según la finalidad de la composición farmacéutica (para inhibir un aumento en el azúcar sanguíneo, para potenciar la secreción insulínica, previniendo o tratando enfermedades resultantes de la hiperglicemia, etc.); procedimiento de administración de la composición farmacéutica; modo de administración; edad, peso corporal, síntomas (gravedad de la diabetes) del paciente; y otros factores. Resulta preferido habitualmente que el proteolizado de globina se administre a un adulto, a una dosis diaria de aproximadamente 100 y 2.000 mg, o el péptido (VVYP) se administre a un adulto a una dosis diaria de aproximadamente 1 a 20 mg.
La composición farmacéutica no debe administrarse en una dosis única, y puede administrarse en 3 ó 4 dosis diarias. la preparación farmacéutica en dichas formas anteriormente mencionadas se administra en una vía apropiada para la forma, por ejemplo, la preparación farmacéutica es una forma inyectable que puede administrarse intravenosa, intramuscular, subcutánea, intracutánea o intraperitonealmente, o de forma similar; la preparación farmacéutica en una forma sólida puede administrarse oralmente o de forma similar.
Tal como se ha demostrado en los ejemplos que se proporcionan a continuación, la composición farmacéutica posee una acción de potenciación de la secreción insulínica debida al proteolizado de globina o al péptido (VVYP), mejora una situación hiperglucémica causada por el debilitamiento o la falta de la acción insulínica, y muestra, por tanto, una acción hipoglucémica. Por tanto, la composición farmacéutica constituye una composición a utilizar en la prevención o tratamiento de varias enfermedades que resultan de las afecciones hiperglucémicas causadas por el debilitamiento o la falta de la acción de la insulina.
La diabetes y sus complicaciones se incluyen entre dichas enfermedades. La diabetes diana es preferentemente la diabetes de tipo II no dependiente de la insulina. Las complicaciones diabéticas que se consideran en la presente memoria se refieren a enfermedades sistémicas y locales que se desarrollan directa o indirectamente con la diabetes (preferentemente diabetes de tipo II no dependiente de la insulina). Los ejemplos específicos son la acidosis diabética, xantoma diabético, amiotrofia diabética, cetosis diabética, coma diabético, trastorno gástrico diabético, gangrena diabética, úlcera diabética, diarrea diabética, microangiopatía diabética, esclerosis diabética del cuerpo uterino, cardiomiopatía diabética, neuropatía diabética, nefropatía diabética, ampollas diabéticas, cataratas diabéticas, dermopatía diabética, escleroderma diabético, retinopatía diabética, necrobiosis lipoidica diabética, trastorno diabético de la circulación sanguínea, etc.
(2) Composición alimenticia
Las composiciones alimenticias que se proporcionan según la presente invención, incluyen alimentos para su utilización sanitaria específica (incluyendo los alimentos cualificados para uso sanitario específico), que tienen la función de inhibir un aumento en el azúcar sanguíneo, y que se utilizan preferentemente para vigilar dicha función atentamente; los alimentos para uso sanitario específico (incluyendo los alimentos cualificados para el uso sanitario específico), que tienen la función de potenciar la secreción insulínica, y que se utilizan preferentemente para vigilar dicha función atentamente; y alimentos para uso sanitario específico (incluyendo los alimentos cualificados para uso sanitario específico), para utilizarlos en la prevención o tratamiento de una enfermedad resultante de la hiperglicemia, debido a una acción inhibidora del aumento del azúcar sanguíneo, o a una acción potenciadora de la secreción insulínica.
Una característica de los alimentos anteriormente mencionados para uso sanitario específico, que tienen una función inhibidora del aumento en el azúcar sanguíneo, es que contienen el proteolizado de globina o el péptido (VVYP) en una cantidad efectiva para prevenir o mejorar la hiperglicemia (inhibiendo un aumento en el azúcar sanguíneo) en un paciente diabético o en un paciente diabético incierto. El empaquetamiento y las advertencias para los alimentos pueden mostrar informaciones de sus efectos (acción inhibidora del aumento en el azúcar sanguíneo). Una característica de los alimentos para uso sanitario específico que poseen una función de potenciación de la secreción insulínica, es que contienen el proteolizado de globina o el péptido (VVYP) en una cantidad efectiva para potenciar la secreción insulínica en los pacientes diabéticos o en los pacientes diabéticos inciertos. El empaquetamiento y las advertencias para los alimentos, pueden mostrar informaciones de los efectos (potenciación en la secreción insulínica). Una característica de los alimentos para uso sanitario específico, para la utilización en la prevención o tratamiento de una enfermedad resultante de la hiperglicemia, es que contienen el proteolizado de globina o el péptido (VVYP) en una cantidad efectiva para mostrar una acción inhibidora de un aumento en el azúcar sanguíneo, o una acción potenciadora de la secreción insulínica. El empaquetamiento y las advertencias para los alimentos pueden mostrar informaciones de sus efectos (acción antidiabética).
La composición alimenticia de la presente invención puede estar totalmente compuesta del proteolizado de globina o del péptido (VVYP). Cuando la composición alimenticia se prepara combinadamente con otras sustancias, la cantidad del proteolizado de globina o del péptido (VVYP) no está limitada, siempre que sea suficiente para mostrar una acción inhibidora de un aumento en el azúcar sanguíneo, o una acción potenciadora de la secreción insulínica. La composición alimenticia de la presente invención, puede prepararse concomitantemente con portadores y aditivos que se pueden utilizar en los alimentos. Dichas composiciones alimenticias incluyen suplementos y similares, preparadas mezclando el proteolizado de globina o el péptido (VVYP) con portadores y aditivos que son aceptables en los alimentos, en forma de comprimidos, grageas, cápsulas, gránulos, dispersiones, polvos, soluciones (bebidas), etc. Asimismo, la composición alimenticia de la presente invención incluye productos que contienen el proteolizado de globina o el péptido (VVYP), que pueden tomar la forma de los alimentos y bebidas habituales.
Los ejemplos de dichos alimentos y bebidas incluyen bebidas lácteas, bebidas (que incluyen) bacterias del ácido láctico, bebidas suaves que contienen jugos de frutas, bebidas carbónicas, bebidas de jugos de frutas, bebidas de jugos vegetales, bebidas vegetales/frutas, bebidas alcohólicas, bebidas en polvo, bebidas de café, bebidas de té negro, bebidas de té verde, bebidas de té de centeno y bebidas similares; pudín de tipo flan, pudines lácteos, pudines soufflé, pudines que contienen jugos de frutas y pudines similares, jaleas, bávaros, yogurt, y postres similares; helados, leche helada, lacto-helados, helados de leche, helados que contienen jugos de frutas, helados blandos, golosinas congeladas, sorbetes, confites congelados y confites similares enfriados; chicles, chicles de globo, y chicles similares (chicles de palo, chicles en comprimidos revestidos con azúcar); chocolates marmolados y chocolates con revestimientos similares, chocolates de fresa, chocolates de arándano, chocolates de melón y chocolates con sabores similares, y chocolates similares; golosinas duras, (incluyendo bombones, bolas de mantequilla, mármoles, etc.), golosinas blandas (incluyendo caramelos, turrones, golosinas engomadas, dulces de merengue blando, etc.), pastillas, melcochas, y caramelos similares; galletas duras, galletas, okaki (galletas saladas de arroz), sembei (galletas saladas de arroz), y confites similares horneados (todos los anteriores son confites); sopas consomé, sopas de potaje, y sopas similares; mermelada de fresas, mermelada de arándanos, mermeladas de manzana, mermeladas de albaricoque, conservas, mermeladas similares; vinos tintos y vinos afrutados; cerezas en jarabe, albaricoques, manzanas, fresas y melocotones, y frutos tratados de modo similar; mermelada, salsas, cerdo asado y carne de ganado tratada de modo similar; mermelada de pescado, salsa de pescado, filetes de pescado, kamaboko (pasta de pescado al vapor), chikuva (pasta de pescado horneada), hanpen (pescado troceado y al vapor), sataumaage (bolas de pescado frito), datemaki (envoltura de tortilla), tocino de tiburón, y productos marinos procesados de modo similar; udon (tallarines de trigo), hiyamugi, somen (tallarines finos), soba (tallarines de trigo sarraceno), tallarines chinos, spaghetti, macarrones, bifun (tallarines de arroz), harusame (palo de jalea), wonton, y tallarines similares; y varios tipos de platos secundarios, pastelillos de gluten de trigo, danbu y otros varios productos alimenticios procesados de modo similar. La composición alimenticia de la invención está preferentemente en forma de una bebida o de confites.
La cantidad de ingrediente activo (el proteolizado de globina o el péptido (VVYP) en la composición alimenticia, o la dosis de la composición alimenticia, no está limitada, y puede seleccionarse adecuadamente a partir de un amplio intervalo según el tipo de composición alimenticia, del grado del efecto de mejora deseado, y de otros factores. La dosis de la composición alimenticia, aunque varíe dependiendo del tipo de composición alimenticia, puede seleccionarse adecuadamente de entre 100 a 2.000 mg/60 kg aproximadamente, cuando se calcula como proteolizado de globina, o de entre 1 a 20 mg/60 kg aproximadamente calculada como péptido (VVYP), administrándola a un individuo humano de 60 kg de peso corporal.
La composición alimenticia de la presente invención presenta una acción potenciadora de la secreción insulínica, debida al proteolizado de globina o al péptido (VVYP), mejora la situación hiperglucémica establecida debido a la debilidad o a la falta de la acción de la insulina, mostrando, por lo tanto, una acción hipoglucémica. Por tanto, la composición alimenticia de la presente invención puede utilizarse como una composición para prevenir o tratar varias enfermedades resultantes de las situaciones hiperglucémicas, establecidas por la debilidad o la falta de la acción insulínica.
(3) Composición alimenticia para animales
La composición alimenticia para animales que se proporciona según la presente invención incluye alimento que posee una función de inhibición del aumento del azúcar sanguíneo; alimento que posee una función potenciadora de la secreción insulínica; y un alimento que se utiliza para la prevención o tratamiento de una enfermedad resultante de la hiperglicemia, debidos (dicha prevención o tratamiento) a la acción de inhibir un aumento en el azúcar sanguíneo o de potenciar la secreción de la insulina. Dichos alimentos pueden utilizarse preferentemente como alimento para mascotas, especialmente para perros, gatos y animales similares. Una característica del alimento mencionada anteriormente, con la función de inhibir un aumento en el azúcar sanguíneo, es contener el proteolizado de globina o el péptido (VVYP), en una cantidad efectiva para prevenir o mejorar la hiperglicemia (inhibiendo un aumento en el azúcar sanguíneo) en un animal diabético o en un animal diabético incierto. Una característica del alimento con la función de potenciar la secreción insulínica es contener un proteolizado de globina o el péptido (VVYP) en una cantidad efectiva para potenciar la secreción insulínica en un animal diabético o en un animal diabético incierto. Una característica del alimento para utilizar en la prevención o en el tratamiento de una enfermedad resultante de la hiperglicemia, es que el proteolizado de globina o el péptido (VVYP) esté contenido en una cantidad efectiva para que muestre una acción de inhibición del aumento en el azúcar sanguíneo o en la potenciación de la secreción insulínica.
Dichas composiciones alimenticias para animales incluyen las preparadas mezclando el proteolizado de globina o el péptido (VVYP) con portadores o aditivos que puedan utilizarse en los alimentos, en forma de comprimidos, píldoras, cápsulas, gránulos, dispersiones, polvos, soluciones, etc. Asimismo, la composición del alimento de la presente invención incluye productos que contienen el proteolizado de globina o el péptido (VVYP) que pueden tomar la forma de alimentos ordinarios.
La cantidad de ingrediente activo (el proteolizado de globina o el péptido (VVYP)) contenido en la composición alimenticia para animales, o la dosis de la composición alimenticia para animales, no está limitada, y puede seleccionarse adecuadamente a partir de un amplio intervalo según el tipo de la composición alimenticia para animales, del tipo de animal que toma la composición alimenticia para animales, del grado del efecto de mejora deseado, y de otros factores. La dosis de la composición alimenticia, aunque varíe dependiendo del tipo de composición alimenticia para animales, puede seleccionarse adecuadamente de entre 50 a 1.000 mg/10 kg aproximadamente, cuando se calcula como proteolizado de globina, o de entre 0,5 a 10 mg/10 kg aproximadamente, calculada como péptido (VVYP), administrándola a un animal de 10 kg de peso corporal.
Ejemplos
Los ejemplos de preparación y los ejemplos de prueba se proporcionan a continuación para ilustrar la invención con mayor detalle, pero el alcance de la invención no está limitado por estos ejemplos. En los siguientes Ejemplos Prueba "% " representa el "porcentaje en peso", si no se especifica lo contrario.
Ejemplo preparativo 1
Preparación del proteolizado de globina
A continuación se describe detalladamente un procedimiento para preparar un proteolizado de globina utilizando hematíes bovinos.
A 100 kg de hematíes bovinos recién preparados se añadieron 250 litros de agua para permitir una hemólisis suficiente. Después de ajustar el pH a 2,8 con ácido fosfórico, se añadieron a la solución 2,6 x 10^{7} unidades de proteasa ácida de Aspergillus niger y se hicieron reaccionar a 50ºC durante 3 horas.
Después de la reacción, la solución reactiva se calentó a 80ºC durante 30 minutos para finalizar la reacción. Entonces, se añadió a la solución reactiva una suspensión acuosa de hidróxido cálcico para ajustar el pH a 6,5. Entonces, se añadieron 10 kg de tierra de diatomeas, y la mezcla se filtró con una prensa de filtro. El filtrado resultante se secó mediante pulverización, produciendo entonces 23 kg de un proteolizado de globina como un polvo. La distribución del peso molecular del proteolizado de globina se examinó mediante cromatografía de filtración en gel llevada acabo bajo las condiciones siguientes:
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Cromatografía de filtración en gel
Equipo: Cromatógrafo líquido de alta resolución (Shimazdu Corporation, modelo LC-6A)
Columna: PoliHIDROXIETIL A, 5 \mum, 9,4 x 200 mm, fabricado por PolyLC Inc.
Eluado: 50 mM ácido fórmico
Velocidad de flujo: 0,5 ml/min
Detección: absorción UV a 221 nm
La Figura 1 muestra un cromatograma de filtración en gel de un proteolizado de globina obtenido según la cromatografía de filtración en gel descrita anteriormente.
Ejemplo preparativo 2
Fraccionamiento y purificación del péptido que inhibe un aumento en los niveles TG de la sangre
El péptido de la presente invención se obtuvo mediante los procedimientos siguientes: (1) intercambio iónico, (2) ultrafiltración, (3) separación mediante cromatografía en columna de fase inversa bajo condiciones ácidas, y (4) separación mediante cromatografía de fase inversa bajo condiciones neutras.
(1) Intercambio iónico
Una solución acuosa al 10% que contenía 13,7 g del proteolizado de globina obtenido en el Ejemplo preparativo 1 se introdujo en una resina de intercambio catiónico débilmente ácida (Amberlite IRC_{50}, Tipo H^{+}, Organo Co, Ltd.) y se agitó durante 1 hora para adsorción. Se separó de esta forma una fracción no adsorbida.
(2) Ultrafiltración
La fracción no adsorbida obtenida mediante el intercambio iónico mencionado anteriormente, se sometió a ultrafiltración utilizando una unidad ultrafiltradora con fuerza agitadora (fabricada por Advantec, UHP 90K) y una membrana ultrafiltradora (fabricada por Advantec, UIIH-1, peso molecular: 1.000). El líquido que permanecía en la membrana ultrafiltradora (líquido residual) se recuperó. La fracción así obtenida se sometió a hidrólisis ácida y se cuantificó según un procedimiento de ninhidrina. La hidrólisis ácida se llevó a cabo situando 1 ml del ácido clorhídrico que poseía una concentración final de 6N en un tubo de ensayo por 3 a 5 mg de proteína, precintando el tubo bajo presión atmosférica y calentándolo a 110ºC durante 22 horas. El procedimiento de ninhidrina mencionado anteriormente se llevó a cabo de la siguiente forma: Se ajustó a pH 5,0 con hidróxido sódico la muestra obtenida después de la hidrólisis. La muestra se hizo entonces reaccionar con un reactivo de ninhidrina disuelto en un tampón 0,2M citrato (pH=5,0) a 100ºC durante 15 minutos. Se midió la absorbancia a 570 nm. Separadamente, soluciones acuosas de L-leucina (75, 150, 225, y 300 nmol/ml) se sometieron a una reacción de ninhidrina como soluciones estándares. Se obtuvo una curva de calibración a partir de las absorbancias medidas, y se calculó la cantidad en la muestra de los grupos amino equivalentes a la L-leucina. El resultado de la cuantificación se presenta en la Tabla 1. El rendimiento basado en el proteolizado de globina inicial, se presenta también en la Tabla 1.
(3) Cromatografía (ácida) de fase inversa
El filtrado obtenido después de la ultrafiltración anterior se sometió a cromatografía (ácida) de fase inversa según las condiciones siguientes:
Cromatografía (ácida) de fase inversa
Equipo: Cromatógrafo líquido de alta resolución (Shimazdu Corporation, modelo LC-10A)
Columna: SuperPac Pep-S, 15 \mum, 22,5 x 250 mm, fabricado por Pharmacia).
Eluado: solución acuosa de acetonitrilo que contiene ácido trifluoroacético al 0,1%
Gradiente lineal de concentración del acetonitrilo desde 2 al 35%; la concentración de acetonitrilo cambió a una velocidad de 1%/min.
Velocidad de flujo: 5 ml/min
Temperatura: 40ºC
Detección: absorción UV a 220 nm
Tiempo de fraccionamiento: 53,8 a 54,5 minutos (Fracción A)
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La Figura 2 muestra un cromatograma obtenido mediante la cromatografía (ácida) de fase inversa descrita anteriormente.
La fracción así obtenida se sometió a hidrólisis ácida y se cuantificó entonces mediante análisis aminoácido. La hidrólisis ácida se llevó a cabo situando 1 ml de ácido clorhídrico (concentración final de 6 N HCl) en un tubo de ensayo por 3 a 5 mg de proteína, precintando el tubo de ensayo bajo presión reducida, y calentándolo a 110ºC durante 22 horas. El análisis aminoácido se llevó a cabo bajo las condiciones siguientes:
Análisis aminoácido
Equipo: Cromatógrafo líquido de alta resolución (Shimazdu Corporation, modelo LC-6A)
Columna: Shim-pack ISC-07/S1504 Na, 7 \mum, 4,0 x 150 mm, fabricado por Shimazdu Corporation.
Eluado: Equipo de fase móvil de aminoácidos (tipo Na) fabricado por Shimazdu Corporation.
Velocidad de flujo: 0,3 ml/min
Temperatura: 55ºC
Solución reactiva 1: Reactivo OPA del equipo de análisis fabricado por Shimazdu Corporation
Detección: adsorción de fluorescencia (Ex 348 nm, Em 450 nm)
La solución ácido hidrolizada se concentró, se secó y se obtuvo un residuo sólido utilizando un evaporador rotatorio, secándose posteriormente bajo presión reducida durante más de 12 horas, eliminando completamente el ácido clorhídrico. El resultante se disolvió en tampón 0,2 M citrato (pH 2,2) de forma que cada aminoácido estaba contenido en una proporción de alrededor de 100 nmol/ml. Esta solución se filtró a través de un filtro de 0,45 \mum, introduciéndose 10 \mul del filtrado en la columna. Para una solución estándar, una solución estándar mezclada de 18 componentes aminoácidos de tipo- H (Wako Pure Chemical Industries, Ltd), se diluyó 25 veces con un tampón 0,2 M citrato (pH 2,2), introduciéndose 10 \mul de la solución diluida en la columna (1 nmol/10 \mul para cada aminoácido). Las áreas de los picos (niveles máximos) de los aminoácidos se calcularon y analizaron utilizando Chromatopac C-R4A (Shimazdu Corporation), y las cantidades de aminoácidos se calcularon basándose en las proporciones de las áreas de los picos para las muestras con respecto a las áreas de los picos para la solución estándar. Los resultados se muestran en la Tabla 1. El rendimiento, basado en el proteolizado de globina se presenta también en la Tabla 1.
(4) Cromatografía (neutra) de fase inversa
La fracción eluida y fraccionada mediante la cromatografía (ácida) de fase inversa, que se ha descrito anteriormente, se sometió posteriormente a cromatografía (neutra) de fase inversa bajo las siguientes condiciones:
Cromatografía (neutra) de fase inversa
Equipo: Cromatógrafo líquido de alta resolución (Shimazdu Corporation, modelo LC-10A)
Columna: SuperPac Pep-S, 15 \mum, 22,5 x 250 mm, fabricado por Pharmacia).
Eluado: solución acuosa de acetonitrilo que contiene tampón de 20 mM acetato amónico (pH 6,5).
Gradiente lineal de concentración del acetonitrilo desde 0 al 25%; la concentración de acetonitrilo cambió a una velocidad d de 0,5% /min.
Velocidad de flujo: 5 ml/min
Temperatura: 40ºC
Detección: absorción UV a 220 nm
Tiempos de fraccionamiento: 41,7 a 43,2 minutos (Fracción B) 45,8 a 51,0 minutos (Fracción C).
La Figura 3 muestra un cromatograma obtenido mediante la cromatografía (neutra) de fase inversa descrita anteriormente. Las fracciones resultantes se cuantificaron como en el punto (3) anterior, y se identificaron entonces. La composición aminoácida se computó basándose en la proporción de cada aminoácido con respecto al contenido aminoácido total. Los resultados mostraron que la Fracción B fue VTL (Val-Thr-Leu), y que la Fracción C fue VVYP (Val-Val-Tyr-Pro). El emparejamiento con la secuencia aminoácida de la hemoglobina, demostró que estas fracciones se encuentran en la hemoglobina. Los resultados de la cuantificación se presentan en la Tabla 1 conjuntamente con los rendimientos basados en el proteolizado de globina.
TABLA 1
1 
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Ejemplo 1 de prueba
Efecto inhibidor sobre un aumento en el nivel de azúcar sanguíneo (ratones)
Se llevó a cabo un ensayo de tolerancia a la glucosa, utilizando el proteolizado de globina obtenido en el Ejemplo 1 de Preparación y el Péptido (VVYP) de la fracción C obtenido en el Ejemplo 2(4), para investigar sus efectos inhibitorios sobre un aumento en los niveles de azúcar sanguíneo.
Setenta ratones ICR machos (de 8 semanas de edad) que se sometieron a ayuno durante la noche, se dividieron en 7 grupos, formados por 10 animales por grupo. Utilizando una sonda oral, a los ratones de cada grupo se les administró intragástricamente el proteolizado de globina en una cantidad de 5 mg (Grupo de ensayo 1), de 10 mg (Grupo de ensayo 2), o de 50 mg (Grupo de ensayo 3); el péptido (VVYP) en una cantidad de 1 \mug (Grupo de ensayo 4), 2 \mug (Grupo de ensayo 5) o 10 \mug (Grupo de ensayo 6); o agua en una cantidad de 0,2 ml (Grupo de control). El proteolizado de globina y el péptido (VVYP) se utilizaron después de disolverlos en 0,2 ml de agua. Inmediatamente después de la administración, 0,2 ml de una solución de glucosa (0,25 g/ml de solución acuosa de glucosa), se administró intragástricamente de una forma similar, utilizando una sonda oral. Se recuperó sangre de las venas de la cola, 30, 60, 90 y 120 minutos después de la administración de la solución de glucosa, midiéndose los niveles de azúcar sanguínea utilizando un equipo reactivo (Ensayo CII de Glucosa, de Wako, Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Osaka), según un procedimiento mutarotasa/GOD.
Los niveles de azúcar sanguíneo (AUC: área bajo la curva, mg/dl \cdot 120 min) de los grupos de ensayo y del grupo de control, 120 minutos después de la administración de la solución de glucosa, se presentan en la Tabla 2. En la tabla 2, "porcentaje relativo al control" se refiere a la proporción del nivel de azúcar en la sangre de un grupo de ensayo respecto al nivel de azúcar en sangre del grupo de control, siendo éste del 100%, (el cual se muestra a continuación (en la tabla).
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TABLA 2
2 
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Como puede entenderse a partir de la tabla, el proteolizado de globina y el péptido (VVYP) inhibieron significativamente un aumento en los niveles de azúcar sanguíneo en los ratones, de una forma dependiente de la dosis. La actividad reductora del azúcar sanguíneo del péptido (VVYP) es más de 1.000 veces más intensa que la del proteolizado de globina. Ya que el proteolizado de globina contiene el péptido (VVYP) en una proporción de alrededor del 1%, uno de los ingredientes activos (componentes activos) del proteolizado de globina que proporciona la acción reductora del azúcar sanguíneo es presumiblemente el péptido (VVYP).
Ejemplo 2 de prueba
Efecto inhibidor sobre un aumento en el nivel de azúcar sanguíneo (individuos japoneses)
Se llevó a cabo un ensayo de tolerancia a la glucosa (7 días sin medicamentos, ensayo clínico anónimo sencillo), utilizando el proteolizado de globina obtenido en el Ejemplo 1 de Preparación para hombres (japoneses) (individuos diabéticos: 12 pacientes de diabetes II que tenían, en ayuno, niveles de azúcar en sangre de 200 mg/dl o superior; individuos normales: 10 individuos normales que tenían, en ayuno, niveles de azúcar sanguíneos de 100 mg/dl o inferiores; peso corporal promedio: 68 kg), para investigar la acción inhibitoria de un aumento en los niveles de azúcar sanguíneo del proteolizado de globina.
A los individuos (individuos diabéticos y normales) hambrientos, debido al ayuno, la noche anterior se les proporcionó el proteolizado de globina en una cantidad de 1.000 mg, 1.500 o 3.000 mg (grupos de ensayo), o la caseína láctica en una cantidad de 3.000 mg (grupos de control). Inmediatamente después de la administración, se administró una solución de glucosa (75 g/200 ml). La sangre se recuperó 60, 90 y 120 minutos después de la administración de la solución de glucosa, midiéndose los niveles de azúcar sanguíneo utilizando un equipo reactivo (Ensayo CII de Glucosa Wako, Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Osaka), según un procedimiento mutarotasa/GOD.
En la Tabla 3, se presentan los niveles de azúcar sanguíneo (AUC: área bajo la curva, mg/dl\cdot120 min) de los individuos de los grupos de ensayo y de los grupos de control (individuos diabéticos y normales), 120 minutos después de la administración de una solución de glucosa.
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TABLA 3
3 
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Tal como puede apreciarse a partir de la tabla, administración del proteolizado de globina en una cantidad de 3.000 mg mostró un efecto inhibitorio estadísticamente significativo sobre un aumento en los niveles de azúcar sanguíneo, para, tanto los individuos diabéticos con una diabetes de tipo II como para los individuos normales. Sin embargo, en vista de la aplicación clínica, el proteolizado de globina mostrará más efectos útiles significativos sobre los individuos diabéticos que sobre los individuos normales.
Por tanto, puede considerarse que el proteolizado de globina inhibe significativamente un aumento en el azúcar sanguíneo en individuos con una diabetes de tipo II (no insulino-dependiente). En vista de los resultados del ejemplo 1 de prueba anterior, se cree que el componente principal (ingrediente activo) del proteolizado de globina es el péptido (VVYP), y se espera que el péptido (VVYP) inhiba un aumento en el azúcar sanguíneo en pacientes con diabetes del tipo II (no insulino dependiente), con una actividad de aproximadamente 5.000 veces más potente que la del proteolizado de globina.
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Ejemplo 3 de prueba
Efecto de incremento sobre el nivel de insulina sanguínea (japonés)
A doce individuos (japoneses, promedio de peso corporal: 67 kg) se les administró el proteolizado de globina obtenido en el Ejemplo 1 de Prueba en cantidades de 1.000 y 3.000 mg, y un placebo (caseína de leche) en una cantidad de 1.000 mg con (administración que se realizó durante 7 días sin ningún otro tipo de medicamento, ensayo clínico anónimo sencillo). Después de la administración de cada sustancia, se recuperó la sangre para medir la insulina sanguínea y los niveles de triyodotironina sanguíneos. En particular, los individuos se sometieron a ayuno durante más de 12 horas a partir de la noche anterior. En el día del ensayo, la sangre se recuperó cada hora entre inmediatamente antes de la administración y 6 horas después de ella, para calcular los niveles de insulina y triyodotironina sanguíneos. Los niveles de insulina sanguínea se midieron utilizando un "Glazyme Insulin-EIA TEST" (Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Osaka). La medida de los niveles sanguíneos de triyodotironina (según el procedimiento CLIA), se asignó a los Shionogi Biomedical Laboratories (Osaka).
Los niveles sanguíneos de insulina (mU/L \cdot3h) y los niveles sanguíneos de triyodotironina (ng/L \cdot 3h) 3 horas después de la administración de las sustancias de prueba (el proteolizado de globina en 1000 mg y 3000 mg, y placebo) se presentan en la Tabla 4.
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TABLA 4
4
Tal como puede apreciarse a partir de la tabla, la administración del proteolizado de globina en una cantidad de 3000 mg no afectó mucho a los niveles de la triyodotironina sanguínea, pero los niveles insulínicos sanguíneos (velocidad de la secreción de la insulina) aumentaron significativamente. Este hecho establece que el proteolizado de globina posee una acción de potenciar específicamente la velocidad de secreción insulínica en humanos (Japoneses) sin afectar adversamente la función de la glándula tiroides. Además, considerando los resultados que se presentan en la tabla, el efecto del proteolizado de globina en el hombre (Japoneses) para inhibir un aumento en el azúcar sanguíneo, que se muestra en el Ejemplo 2 de prueba, se debe presumiblemente a su acción de potenciación de la secreción insulínica; y considerando los resultados del Ejemplo 1 de Prueba, el componente activo (ingrediente activo) del proteolizado de globina es presumiblemente el péptido (VVYP).
Ejemplo 4 de prueba
Efecto de aumento sobre el nivel de insulina sanguínea (individuos occidentales)
A diecisiete individuos occidentales (7 individuos obesos, 10 individuos normales, de promedio de peso corporal: 82 kg) se les administró el proteolizado de globina obtenido en el Ejemplo 1 de Preparación, en cantidades de 500, 1000 y 2.000 mg y un placebo (caseína de leche en una cantidad de 1000 mg), administración que se realizó durante 7 días sin ningún otro medicamento, ensayo clínico anónimo sencillo). Después de la administración de cada sustancia, se recuperó la sangre para medir la insulina sanguínea y los niveles de azúcar sanguíneos. En particular, a los individuos se les suministró una sopa de crema (que contiene 41 g de hidratos de carbono y 67 g de grasa), conjuntamente con una sustancia de prueba. La sangre se recuperó cada hora entre inmediatamente antes (0) y 4 horas después de la administración, para calcular los niveles de insulina y de azúcar sanguíneos.
Los niveles de insulina sanguínea se midieron utilizando un "Glazyme Insulin-EIA TEST" (Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Osaka). Los niveles sanguíneos de azúcar se midieron utilizando un equipo reactivo (Glucose CII Test Waco, Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Osaka), según un procedimiento mutarotasa/GOD.
Los niveles insulínicos sanguíneos (AUC: área bajo la curva, ?mU/l\cdot4h) y los niveles de azúcar sanguíneo
(?mg/dl\cdot4h) 4 horas después de la administración de las sustancias de prueba (el proteolizado de globina en 500 mg, 1.000 mg y 2.000 mg, y el placebo) a los individuos obesos y a los individuos normales, se presentan en la Tabla 5.
TABLA 5 Efecto del proteolizado de globina sobre los niveles de insulina sanguínea
5
Como puede apreciarse a partir de la tabla, los niveles insulínicos sanguíneos (tasas de secreción de insulina) de los individuos obesos aumentaron claramente por la administración del proteolizado de globina, inhibiéndose, de acuerdo con esto, el aumento en el nivel del azúcar sanguíneo. Este efecto fue significativo cuando el proteolizado de globina se administró en una cantidad de 1.000 mg. Contrariamente a esto, no se observó aumento (potenciación) en los niveles sanguíneos de insulina (tasa de secreción insulínica) de los individuos normales. Éstos, más bien, mostraron una tendencia a la disminución de estos niveles.
En el ejemplo 3 de prueba, llevado a cabo en los individuos japoneses, la administración del proteolizado de globina en una cantidad de 3.000 mg, mostró un efecto superior con respecto a la potenciación en los niveles de la insulina sanguínea (tasas de secreción de la insulina) que la administración del proteolizado de globina en una cantidad de 1.000 mg. Contrariamente a esto, en este ejemplo de prueba llevado a cabo en los individuos occidentales, la administración del proteolizado de globina en una cantidad de 1.000 mg, mostró un efecto superior para la potenciación de los niveles insulínicos sanguíneos (efecto para potenciar la secreción de la insulina), que la administración del proteolizado de globina en una cantidad de 2.000 mg. Considerando este hecho, aunque el proteolizado de globina puede utilizarse como una composición de mejora efectiva o preventiva para los Japoneses diabéticos, es presumiblemente más efectiva para los diabéticos Occidentales.
Ejemplo 5 del ensayo
Efecto de disminución en el nivel de azúcar sanguíneo (occidentales)
Treinta individuos obesos con un BMI de 30 o superior (de edades comprendidas entre 18 y 65), se sometieron a un programa de tratamiento contra la obesidad de 12 semanas (terapia alimentaria, terapia de ejercicio). Diecisiete de los individuos seleccionados al azar de entre ellos, se alimentaron una vez al día en su casa con una dieta baja en calorías que contenía 1,5 g del proteolizado de globina preparado en el Ejemplo 1 de Preparación (grupo de prueba), Los 13 individuos restantes tomaron alimento una vez al día en su casa con una dieta baja en calorías que no contenía el proteolizado de globina (grupo de control). Después de 37 semanas de mantener esta situación, se midieron los niveles de azúcar sanguíneo en ayunas y los pesos corporales de los individuos del grupo de prueba y de los individuos del grupo de control, para llevar a cabo una comparación con los que se midieron antes del comienzo del experimento. Los niveles del azúcar sanguínea se midieron utilizando un equipo reactivo (Ensayo CII de glucosa Wako, Wako Pure Chemical Industries, Ltd, Osaka), según un procedimiento mutarotasa/GOD. La Tabla 6 muestra los promedios del cambio en los niveles de azúcar sanguíneo en ayunas con respecto a los niveles de azúcar sanguíneo en ayunas antes del comienzo del experimento casero, de los individuos de prueba del grupo de prueba y del grupo de control.
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TABLA 6
6
Como puede apreciarse a partir de la tabla, los individuos de prueba de tanto el grupo al que se administró el proteolizado de globina, como al grupo de control al que no se administró el proteolizado de globina, mostraron pesos corporales inferiores a los que existían antes del comienzo del experimento. Además, el grupo al que se administró el proteolizado de globina mostró significativamente unos niveles inferiores de azúcar sanguíneo. En vista de los resultados del ejemplo 4 de prueba, la acción reductora del azúcar sanguíneo del proteolizado de globina que se muestra en este ejemplo de prueba, se debe presumiblemente a la potenciación de la secreción insulínica.
Ejemplo 6 de prueba
Prueba de seguridad
El péptido que tiene la secuencia aminoácida Val-Val-Tyr-Pro (SEC ID nº: 1) que se preparó en el Ejemplo 2, se administró oralmente a ratones ICR machos y hembras en una cantidad de 10 g/kg (dosis máxima permitida) o mayor, no dando lugar a incidencias (desgraciadas), estableciéndose de este modo la seguridad del péptido.
Ejemplo 1 Preparación de alimento conteniendo el péptido (VVYP) (1) Preparación de la leche en polvo
Diez miligramos del péptido con la secuencia aminoácida Val-Val-Tyr-Pro (SEC ID nº: 1), preparado en el Ejemplo 2 de Preparación, se añadió a 100 g de una fórmula de leche infantil en polvo, dando lugar entonces, por lo tanto, a una leche en polvo con una función potenciadora de la secreción de insulina o de inhibición de un aumento en el azúcar sanguíneo.
(2) Preparación del chocolate
Cincuenta miligramos del péptido con la secuencia aminoácida Val-Val-Tyr-Pro (SEC ID nº: 1), preparado en el Ejemplo 2 de Preparación, se añadieron a 100 g de chocolate, dando lugar entonces, por lo tanto, a un chocolate con una función potenciadora de la secreción de insulina o de inhibición de un aumento en el azúcar sanguíneo.
(3) Preparación de la bebida de té verde
Ocho kilogramos de hojas de té verde se introdujeron en 300 l de agua caliente (80ºC) y se extrajeron a esta temperatura durante 4 minutos. El extracto resultante se enfrió y centrifugó. Se recuperó el sobrenadante transparente como un extracto de té verde. A este extracto se añadieron 0,4 kg de vitamina C y entonces, 50 g del péptido con la secuencia aminoácida Val-Val-Tyr-Pro (SEC ID nº: 1), preparado en el Ejemplo 2 de Preparación. Se añadió agua caliente para alcanzar un volumen final de 1.000 l. La mezcla se calentó a 85ºC o más, se cargó en una lata metálica, y se esterilizó (125ºC, 5 minutos), dando lugar por tanto a una bebida de té verde.
(4) Preparación de chicle
Se preparó un chicle utilizando la fórmula a continuación:
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7 
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La base de goma, el azúcar, el jarabe de maíz y el glicerol se mezclaron en primer lugar. El péptido que presentaba la secuencia aminoácida Val-Val-Tyr-Pro (SEC ID nº: 1), preparado en el Ejemplo 2 de Preparación, se añadió entonces, y la mezcla se amasó uniformemente utilizando un mezclador a 50ºC. Después de enfriamiento, la mezcla fue moldeada mediante prensado por un rodillo, dando lugar de esta forma a un palo de chicle de goma que contiene, como ingrediente activo, el péptido (VVYP) en una proporción de 5 mg por palo.
Ejemplo 2 Preparación del alimento conteniendo proteolizado de globina (1) Suplemento
Los ingredientes siguientes se amasaron, granularon, secaron y se constituyeron en comprimidos según un procedimiento estándar, dando así lugar, a comprimidos que contenían, como ingrediente activo, proteolizado de globina en una cantidad del 25% en peso (50 mg) por comprimido (200 mg). Estos comprimidos pueden utilizarse como suplementos con acciones farmacológicas resultantes del proteolizado de globina (acción antidiabética, acción de inhibición de un aumento en los niveles de azúcar sanguíneo, acción de potenciación de la secreción de insulina).
8
Ejemplo 3 Preparación del alimento para animales que contiene el péptido de la presente invención
El péptido que posee la secuencia aminoácida Val-Val-Tyr-Pro (SEC ID nº: 1), preparada en el Ejemplo 2 de Preparación, se añadió en una proporción de 0,1% en peso a una premezcla que contenía vitaminas, minerales y similares. Esta mezcla se añadió a un alimento canino comercialmente disponible, en una proporción del 10% en peso, dando lugar de esta forma a un alimento canino con una función potenciadora de la secreción insulínica o con una función inhibidora de un aumento en el azúcar sanguíneo.
Según la presente invención, pueden prepararse un agente antidiabético, una composición alimenticia y una composición alimenticia que muestran una acción reductora del azúcar sanguíneo o potenciadora de la secreción insulínica debidas a un proteolizado de globina o a un péptido (VVYP) contenidos en (dichas composiciones alimenticias humanas, para animales, o en el agente antidiabético) como ingredientes activos. Dichas composiciones muestran una acción de disminución de los niveles hiperglucémicos del azúcar sanguíneo en individuos diabéticos y diabéticos inciertos, debido a la acción reductora del azúcar sanguínea o de potenciación de la secreción insulínica. Por tanto, las composiciones de la presente invención pueden utilizarse efectivamente para prevenir o tratar las enfermedades resultantes de la hiperglicemia, en particular, la diabetes y sus complicaciones.
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<110> MG PHARMA Inc.
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<120> Hidrolizado de proteínas con efecto antidiabético
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<130> P05-98
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<150> US 60/627843
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<151> 2004-11-15
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<160> 1
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<210> 1
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<211> 4
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<212> PRT
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<400> 1
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9

Claims (7)

1. Utilización de un péptido que presenta la secuencia Val-Val-Tyr -Pro (SEC ID nº: 1), o de un proteolizado de globina que contiene el péptido para preparar una composición alimenticia para prevenir o tratar la enfermedad resultante de la hiperglucemia.
2. Utilización de un péptido que presenta la secuencia Val-Val-Tyr- Pro (SEC ID nº: 1), o de un proteolizado de globina que contiene el péptido para preparar una composición alimenticia para animales, para prevenir o tratar la enfermedad resultante de la hiperglucemia.
3. Utilización de un péptido que presenta la secuencia Val-Val-Tyr-Pro (SEC ID nº: 1), o de un proteolizado de globina que contiene el péptido para preparar un agente antidiabético.
4. Utilización de un péptido que presenta la secuencia Val-Val-Tyr -Pro (SEC ID nº: 1), o de un proteolizado de globina que contiene el péptido para preparar un alimento para una utilización sanitaria específica, que presenta una función de inhibición de un aumento en el azúcar sanguíneo o una función de potenciación de la secreción de insulina, y que se utiliza considerando dicha función.
5. Utilización de un péptido que presenta la secuencia Val-Val-Tyr- Pro (SEC ID nº: 1), o de un proteolizado de globina que contiene el péptido para preparar un alimento para animales para una utilización sanitaria específica que presenta una función de inhibición de un aumento en el azúcar sanguíneo o una función de potenciación de la secreción de insulina, y que se utiliza considerando dicha función.
6. Péptido que presenta la secuencia Val-Val-Tyr-Pro (SEC ID nº: 1), o de un proteolizado de globina que contiene el péptido para su utilización en la prevención o en el tratamiento de una enfermedad que resulta de una afección hiperglucémica causada por el debilitamiento o la falta de la acción de la insulina.
7. Péptido que presenta la secuencia Val-Val-Tyr-Pro (SEC ID nº: 1), o de un proteolizado de globina que contiene el péptido para su utilización en la prevención o en el tratamiento de una enfermedad que resulta de una afección hiperglucémica causada por el debilitamiento o la falta de la acción de la insulina según la reivindicación 6, en el que la enfermedad es la diabetes o una complicación diabética.
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