KR101146857B1

KR101146857B1 - 흑마늘 건조분말 또는 이의 추출물을 유효성분으로 함유하는 간 질환의 예방 및 치료용 조성물

Info

Publication number: KR101146857B1
Application number: KR1020100017094A
Authority: KR
Inventors: 김정인; 강민정; 서영주; 이영민; 임지은; 재 헌 이
Original assignee: 인제대학교 산학협력단
Priority date: 2010-02-25
Filing date: 2010-02-25
Publication date: 2012-05-16
Also published as: KR20110097309A

Abstract

본 발명은 흑마늘 건조분말 또는 이의 추출물을 유효성분으로 함유하는 간 질환의 예방 및 치료를 위한 조성물에 관한 것으로, 상세하게는 본 발명의 흑마늘 건조분말 또는 이의 추출물은 혈장의 GOT, GPT 및 LDH 활성을 개선시키는 효과를 나타내므로, 간 질환의 예방 및 치료에 유용한 약학조성물 및 건강기능식품에 이용될 수 있다.

Description

흑마늘 건조분말 또는 이의 추출물을 유효성분으로 함유하는 간 질환의 예방 및 치료용 조성물 {Composition comprising the dried powder of aged black garlic or the extract thereof for preventing and treating hepatic disease}

본 발명은 흑마늘 건조분말 또는 이의 추출물을 유효성분으로 함유하는 간 질환의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.

[문헌 1] Moody et al., Proc . Natl . Acsd . SCI ., 79, pp.2855-2859, 1982.

[문헌 2] Junqueira, et al., Toxicology, 41, pp.193-204, 1986.

[문헌 3] Dong Joon Kim. et al., The Korean Journal of Hepatology , 14, pp.126, 2008.

[문헌 4] 태전 강산과 전중소, 진단과 치료, 65, p.991, 1977.

[문헌 5] Recknagel et al., Life Sciences, 33, pp.401-408, 1983.

[문헌 6] 정보섭 및 신민교, 향약대사전, 영림사, pp.158-161, 1998.

[문헌 7] Reitman, S, Frankel, S., Am . J. Clin . Pathol., 28, pp.56-63, 1957.

[문헌 8] King, F. Clin . Chem., 18, pp.1443, 1972.

간세포를 비롯한 생체 내 조직의 손상 원인은 유리기(free radicals: O₂-, H₂O₂, OH)에 의한 지질과산화물 생성으로 단백질 파괴, 염색체 이상 및 적혈구 파괴 등의 세포기능 저하와 세포괴사를 일으킨다(Moody et al., Proc . Natl . Acsd . SCI ., 79, pp.2855-2859, 1982; Junqueira, et al., Toxicology, 41, pp.193-204, 1986).

우리나라는 만성 간질환의 유병률과 그로 인한 사망률이 높다. 통계청 자료에 따르면 2008년도의 간질환에 의한 사망률은 인구 10만 명당 14.5명으로 사망률 8위를 차지하고 있다. 특히 40~50대 남자에서는 암에 이어 간질환이 사망률 2위를 차지하고 있다. 또한 만성 간질환은 간암의 원인이며, 간암은 우리나라에서 한 해에 약 1만 명의 환자가 새로 발생하여 위암, 폐암에 이어 암 등록순위 3위의 암이다. 결국 만성 간질환은 간질환 자체뿐 아니라 간암의 발생을 야기하므로 간암과 만성 간질환은 하나의 범주로 파악되어야 하나, 현재의 통계자료 분류방식은 이를 분리하므로 만성 간질환이 미치는 영향이 실제보다 축소되어 파악되기 쉽다. 더욱이 경제활동이 활발한 40~50대에 간경변증, 간암과 같은 합병증이 발생하기 쉬워 만성 간질환으로 야기되는 문제는 개인에 국한되지 않고 한 가정 전체의 존립에 영향을 미치게 되며 궁극적으로 사회의 생산성을 저하시키는 요인이 된다.

만성 간질환의 원인에 대해 전 국민을 대상으로 한 대규모 역학조사는 없으나 B형 간염 바이러스에 의한 만성 간질환이 가장 많고(~70%), 알코올성 혹은 C형 간염 바이러스에 의한 경우가 다음 순위를 차지한다. 즉, 우리나라에서는 바이러스간염, 그중에서도 B형 간염이 가장 중요한 원인이다(Dong Joon Kim. et al., The Korean Journal of Hepatology, 14, pp.126, 2008).

간기능 개선제를 스크리닝하는 방법으로는, 실험동물 자체 또는 실험동물에서 채취한 간세포 또는 혈장을 대상으로 간 손상물질인 사염화탄소와 시료물질을 함께 처리하여, 손상된 간으로부터 분비되는 젖산 탈수소효소(lactate dehydrogenase; LDH), 글루타민 옥살로초산 트랜스아미나제(glutamic-oxaloacetic transaminase; GOT), 글루타민 피르브 트랜스아미나제(glutamic-pyruvic transaminase; GPT) 등의 효소들의 유리를 억제하는 효과를 비교하는 방법을 주로 채택하고 있다(태전 강산과 전중소, 진단과 치료, 65, p.991, 1977)

사염화탄소는 실험적 간 장해를 일으키는 약물로서 체내의 mixed function(cytochrome P₄₅₀) oxidase system에 의해 생긴 CCl₃ 자유 라디칼이 간 마이크로솜(microsome)의 막단백 티올(thiol)기와 강하게 공유결합되어 막의 지질과산화 반응을 촉진해서 장해를 일으키는 것으로서 그 결과 간에서 단백합성 억제와 글리코겐(glycogen)양 감소, 혈중으로의 아스파라진산염 아미노기전이효소(aspartate aminotransferase, AST) 및 알라닌 아미노기전이효소(alanine aminotransferase, ALT) 이탈을 일으키고, 조직학적으로는 간세포의 괴사 및 섬유화 등을 일으키는 것으로 알려져 있다(Recknagel et al., Life Sciences, 33, pp.401-408, 1983).

마늘(Allium sativum L.)은 전국에서 재배되는 다년생 초본으로서 그 인경을 약재 또는 식품 재료로 널리 사용하며, 그 구성 성분으로는 칼슘, 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 C 등의 성분이 알려져 있으며, 항암작용, 항진균 작용, 항원충작용, 항암작용 등이 보고된 바가 있다(정보섭 및 신민교, 향약대사전, 영림사, pp.158-161, 1998년).

이에 본 발명자들은 생체에 부작용이 없으면서 간 질환의 예방 및 치료에 효과가 있는 우수한 물질을 찾고자 흑마늘 추출물의 약리학적 효과를 실험한 결과, 흑마늘 추출물이 혈장의 GOT, GPT 및 LDH 활성을 개선 시키는 효과를 나타냄을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

상기 목적을 수행하기 위하여, 본 발명은 흑마늘 건조분말 또는 이의 추출물을 유효성분으로 함유하는 간 질환의 예방 및 치료용 약학조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 흑마늘 건조분말 또는 이의 추출물을 유효성분으로 함유하는 간 질환의 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본원에서 정의되는 상기 추출물은 정제수를 포함한 물, 주정, C₁ 내지 C₄의 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매로부터 선택되어진 용매, 바람직하게는 주정에 가용한 추출물을 포함한다.

본원에서 정의되는 간 질환은 구체적으로는 급성?만성 간염, 간경화, 지방간 또는 간섬유증, 바람직하게는 급성?만성 간염이다.

이하, 본 발명의 흑마늘 건조분말 또는 이의 추출물을 수득하는 방법을 상세히 설명한다.

본원에서 정의되는 흑마늘은 경상남도 남해군 지역에서 재배된 생마늘을 일정한 온도와 습도에서 자연숙성 및 발효시킨 가공 마늘로서, 구체적으로는, 생마늘을 1차 열풍 숙성, 자연건조 및 2차 열풍 건조하는 가공공정, 보다 구체적으로는, 생마늘을 10 내지 120℃, 바람직하게는 40 내지 90℃에서 150 내지 500시간, 바람직하게는 280 내지 320시간 동안 열풍으로 1차 숙성하는 제 1단계; 상기 단계에서 숙성된 마늘을 10 내지 60 시간, 바람직하게는 38 내지 42 시간 동안 자연 건조하는 제 2단계; 상기 건조 마늘을 다시 10 내지 50℃, 바람직하게는 20 내지 30℃의 온도의 열풍으로 10 내지 100 시간, 바람직하게는 30 내지 50 시간 동안 숙성하는 2차 숙성 단계를 포함하는 제 3단계 공정을 통하여 수득한 흑색의 가공 마늘을 의미한다.

본 발명의 흑마늘 건조분말 또는 그 추출물은 하기와 같이 수득될 수 있다.

본 발명의 흑마늘 건조분말은 상기 공정으로부터 수득한 흑마늘을 동결건조하고 이를 분쇄함으로서 본 발명의 기능성 흑마늘 건조분말을 수득할 수 있다.

또한, 추가적으로 상기 건조분말을 당업계의 통상적인 추출방법, 예를 들어 상기 건조분말 시료 중량의 약 1배 내지 30배, 바람직하게는 약 5배 내지 15배의 물, 주정, C₁ 내지 C₄의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로, 바람직하게는 물 또는 주정을 추출용매로 하여, 0℃ 내지 350℃, 바람직하게는 50℃ 내지 300℃, 보다 바람직하게는 70℃ 내지 100℃추출 온도에서 약 1시간 내지 24시간, 바람직하게는 약 2시간 내지 5시간 동안 냉침추출, 열수추출, 가열추출, 바람직하게는 열수추출법으로 1 내지 10회, 바람직하게는 2 내지 7회 반복 추출한 후 수득한 추출액을 여과, 감압농축 및 건조하여 본 발명의 흑마늘 추출물을 수득할 수 있다.

본 발명은 상기의 제조방법으로 얻어진 흑마늘 건조분말 또는 이의 추출물을 유효성분으로 함유하는 간 질환의 예방 및 치료용 약학조성물을 제공한다.

본 발명의 추출물을 함유하는 약학 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물을 0.1 내지 50 중량%로 포함한다.

그러나 상기와 같은 조성은 반드시 이에 한정되는 것은 아니고, 환자의 상태 및 질환의 종류 및 진행 정도에 따라 변할 수 있다.

본 발명의 추출물 자체는 독성 및 부작용이 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있는 약제이다.

본 발명의 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 추출물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 추출물은 1일 0.5 g/kg 내지 5 g/kg으로, 바람직하게는 1 g/kg 내지 3 g/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수 있다. 따라서 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관 내 (intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

본 발명의 건조분말 또는 이의 추출물을 포함하는 조성물은 간 질환의 예방 및 개선을 위한 약제, 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 발명의 건조분말 또는 이의 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.

본 발명의 건조분말 또는 이의 추출물은 간 질환의 예방 및 개선을 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 건조분말 또는 이의 추출물의 양은 일반적으로 본 발명의 건강식품 조성물은 전체 식품 중량의 1 내지 5 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 10 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 건조분말 또는 이의 추출물을 함유하는 것 외에 액체성분에는 특별한 제한점은 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등의 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등의 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제 (타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등)) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 mL당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

본 발명의 흑마늘 건조분말 또는 이의 추출물은 혈장의 GOT, GPT 및 LDH 활성을 개선시키는 효과를 나타내므로, 간 질환의 예방 및 치료에 유용한 약학조성물 및 건강기능식품에 이용될 수 있다.

도 1은 사염화탄소로 유도한 간 손상 동물 모델에서 흑마늘 추출물의 혈장 GOT 활성 개선 효과를 나타낸 도이며,
도 2는 사염화탄소로 유도한 간 손상 동물 모델에서 흑마늘 추출물의 혈장 GPT 활성 개선 효과를 나타낸 도이며,
도 3은 사염화탄소로 유도한 간 손상 동물 모델에서 흑마늘 추출물의 혈장 LDH 활성 개선 효과를 나타낸 도이다.

이하, 본 발명을 참고예, 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 참고예, 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 참고예, 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 흑마늘 주정 추출물의 제조

경상남도 남해군에서 재배된 국내산 생마늘 500 g을 40~90℃에서 280~320시간 열풍으로 숙성하고, 이를 38~42시간 동안 자연 건조한 후, 다시 20~30℃의 열풍으로 30~50시간 숙성하여 흑마늘 347.5 g을 수득하여, 수득한 흑마늘 100 g을 동결 건조기(Clean-Vac 24T, 바이오트론)로 동결건조하여 분쇄한 후, 시료 중량의 약 7배 부피의 100% 주정으로 실온에서 10시간 동안 추출하고, 감압 여과하여 얻은 1차 추출액 및 잔사를 분리하였다. 여기에서 수득한 잔사에 추출 시작 당시의 흑마늘 시료중량의 약 6배 부피의 100% 주정으로 실온에서 3시간 동안 추출한 후, 감압여과하고 제 1차 추출액과 합하여 농축 및 동결건조하여 본 발명의 흑마늘 추출물 47.7 g (이하,“ABG"라 함)을 수득하였다.

참고예 1. 동물모델 준비 및 통계처리

1-1. 동물모델 준비

평균 체중이 120~150 g인 스프라그-도울리계(sprague-Dawley) 수컷 흰쥐(n=21)를 ㈜효창사이언스(대구)로부터 구입하여 인제대학교 동물자원센터에서 실험 전 약 7일간 적응시간을 두고 사육하였다.

상기 실시예 1에서 제조한 흑마늘 추출물의 생체 내(In vivo) 간 기능 개선효과를 측정하기 위하여 동물을 3 군으로 나누어 정상대조군, 사염화탄소대조군 및 사염화탄소흑마늘군으로 나누었다. 정상대조군 및 사염화탄소 대조군에는 대조식이를, 사염화탄소 흑마늘군에는 흑마늘 추출물을 1% 함유한 식이를 3주간 제공하였다. 식이 제공 21일째에, 사염화탄소 대조군 및 사염화탄소 흑마늘군에 사염화탄소(사염화탄소:옥수수기름 = 1:1 (v/v))를 1 ㎖/kg BW로 복강 주사하여 간독성을 유발하였다. 또한 정상 대조군에게는 동일량의 옥수수기름을 복강 주사하였다.

식이와 식수는 자유롭게 섭취할 수 있도록 하였으며, 사육실의 온도 및 습도는 각각 20~25℃, 50~60%로 유지하였고, 명암은 12시간 간격으로 점등 및 소등을 하였다. 동물 체중과 식이 섭취량은 일주일에 2회 측정하였다.

1-2. 통계분석

모든 결과는 평균 ± 표준편차로 나타내었으며, 각 군의 유의성 검정은 분산분석(ANOVA)을 사용하여 실시하였고, Tukey's test를 follow test로 사용하였다(α = 0.05).

실험예 1. 식이섭취량 및 체중증가량 측정

모든 실험동물에게 하기 표 1에 나타낸 AIN-93G 기초식이를 3주간 섭취시켰다.

조성	대조 식이(%)	흑마늘 추출물 식이(%)
옥수수 녹말¹⁾	39.7	38.7
카제인(casein)²⁾	20.0	20.0
호화 전분	13.2	13.2
수크로오스³⁾	10.0	10.0
α-셀룰로오스⁴⁾	5.0	5.0
미네랄 혼합물⁵⁾	3.5	3.5
비타민 혼합물⁵⁾	1.0	1.0
L-시스틴⁵⁾	0.3	0.3
콜린 바이타르트레이트³ ⁾	0.25	0.25
4-부틸하이드로퀴논	0.0014	0.0014
콩 오일⁶ ⁾	7.0	7.0
흑마늘 추출물(ABG)	-	1.0
¹⁾ 대상사, 한국 ²⁾ 머리고울번사(Murry goulburn Co., 오스트레일리아) ³⁾ 삼양사, 한국 ⁴⁾ 시그마사, 미국 ⁵⁾ ICN 바이오케미컬, 미국 ⁶⁾ 제일제당, 한국

체중 및 식이 섭취량 측정결과, 하기 표 2에 나타낸 바와 같이, 정상대조군과 사염화탄소 대조군, 사염화탄소 흑마늘군의 체중은 각각 204.3± 24.2 g, 189.5±17.4 g 및 198.2±21.3 g 이었다. 정상대조군, 사염화탄소 대조군, 사염화탄소 흑마늘군의 식이 섭취량은 각각 20.0±2.1 g/일, 18.9±1.9 g/일 및 19.0±1.7 g/일로 유의적인 차이를 나타내지는 않았다.

	체중(g)	식이 섭취량(g/일)
정상대조군	204.3±24.2	20.0±2.1
사염화탄소 대조군	189.5±17.4	18.9±1.9
사염화탄소 흑마늘군	198.2±21.3	19.0±1.7
* 평균± S.D.

실험예 2. 혈장 GOT, GPT 및 LDH 측정

2-1. 시료 채취

참고예 1-1의 실험동물을 사염화탄소 또는 옥수수기름 투여 24시간 후 희생하였다. 실험동물은 희생하기 전 14시간 절식시킨 후 이산화탄소 가스로 질식시켜 EDTA(ethylene diamine tetra acetic acid)를 10 ㎎씩 넣은 주사기를 사용하여 심장에서 채혈하였다. 혈액은 3,000 rpm에서 15분간 원심분리하여 혈장을 수집한 후 -70℃에서 보관하였다.

2-2. 혈장 GOT 활성 측정

혈장 GOT(glutamic-oxaloacetic transaminase) 활성은 assay kit(아산제약, 한국)를 이용하여 레이트만의 방법(Reitman, S, Frankel, S., Am . J. Clin . Pathol., 28, pp.56-63, 1957)에 의하여 측정하였다.

GOT에 의해 아스파르트산(aspartic acid)과 알파-케토글루타르산(α-ketoglutaric acid)은 옥살아세트산(oxaloacetic acid)과 글루탐산(glutamic acid)으로 변화된다. 생성된 옥살아세트산(oxaloacetic acid)은 조효소 NADH의 존재 하에 MDH의 작용에 의해 말산(malic acid)으로 변화되는데, 이 반응에서 NADH의 흡광도 감소속도를 측정하여 GOT의 활성도를 구하였다.

GOT 기질액 1.0 mL를 37℃ 수조에서 2분간 가온한 후, 상기 실험예 2-1에서 채취한 혈장을 0.2 mL 넣고 37℃ 수조에서 60분간 반응 시켰다. 60분 후 발색액을 1.0 mL 넣고 실온에서 20분간 방치시킨 다음, 0.4 N NaOH 10.0 mL를 넣고 505 nm에서 흡광도를 측정하였다. GOT 기준액(2 mM pyruvate)을 농도별로 위의 방법과 동일하게 발색시켜 흡광도를 측정한 후, 표준곡선에 외삽시켜 시료의 농도를 계산하였다.

실험결과, 도 1에서 나타낸 바와 같이, 사염화탄소대조군의 혈장 GOT 활성(377.2±37.8 IU/L)은 정상대조군(68.0±11.2 IU/L)에 비해 유의적으로 높게 나타나 사염화탄소투여에 의한 간 손상이 일어난 것을 확인할 수 있었다(p<0.05). 또한, 사염화탄소 흑마늘군의 혈장 GOT 활성은 98.8±157.8 IU/L로 사염화탄소 대조군에 비해 유의적으로 감소하였음을 확인할 수 있었다(p<0.05).

2-3. 혈장 GPT 활성 측정

혈장 GPT(glutamic-pyruvic transaminase) 활성은 assay kit(아산제약, 한국)를 이용하여 레이트만의 방법(Reitman, S, Frankel, S., Am . J. Clin . Pathol., 28, pp.56-63, 1957)에 의해 측정하였다.

GPT에 의해 알라닌(Alanine)과 알파-케토글루타르산(α-ketoglutaric acid)은 피루브산(pyruvic acid)과 글루탐산(glutamic acid)으로 변화된다. 생성된 피루브산(pyruvic acid)은 조효소 NADH의 존재 하에 LDH의 작용에 의해 젖산(lactic acid)으로 변화되는데, 이 반응에서 NADH의 흡광도 감소속도를 측정하여 GPT의 활성도를 구하였다.

GPT 기질액 1.0 mL를 37℃ 수조에서 2분간 가온한 후, 상기 실험예 2-1에서 채취한 혈장을 0.2 mL 넣고 37℃ 수조에서 30분간 반응 시켰다. 60분 후 발색액을 1.0 mL 넣고 실온에서 20분간 방치시킨 다음, 0.4 N NaOH 10.0 mL를 넣고 505 nm에서 흡광도를 측정하였다. GPT 기준액(2 mM pyruvate)을 농도별로 위의 방법과 동일하게 발색시켜 흡광도를 측정한 후, 표준곡선에 외삽시켜 시료의 농도를 계산하였다.

실험결과, 도 2에서 나타낸 바와 같이, 사염화탄소 대조군의 혈장 GPT 활성(287.7±47.5 IU/L)은 정상대조군(53.3±8.5 IU/L)에 비해 유의적으로 높게 나타났으며(p<0.05), 사염화탄소 흑마늘군의 혈장 GPT 활성은 79.4±118.7 IU/L로 사염화탄소 대조군에 비해 유의적으로 감소하였음을 확인할 수 있었다(p<0.05).

2-4. 혈장 LDH 활성 측정

혈장 LDH(lactate dehydrogenase) 활성은 assay kit(아산제약, 한국)를 이용하여 킹의 방법(King, F. Clin . Chem., 18, pp.1443, 1972)에 의해 측정하였다.

LDH는 NADH에서 NAD⁺로의 산화를 초래해 피루브산(pyruvic acid)이 젖산(lactic acid)으로 전환되는 촉매작용을 일으킨다. 산화율과 LDH의 활성도는 비례적으로 나타나는데, 이 반응에서 NADH의 흡광도 감소속도를 측정하여 LDH의 활성도를 구하였다.

상기 실험예 2-1에서 채취한 혈장 0.05ml을 취하여 미리 37℃로 가온시킨 유산염(lactate)과 NAD 혼합액 1ml에 가하여 340 nm에서 1분간 흡광도의 변화를 측정하였다.

실험결과, 도 3에서 나타낸 바와 같이, 사염화탄소대조군의 혈장 LDH 활성(484.8±57.8 IU/L)은 정상대조군(183.5±39.7 IU/L)에 비해 유의적으로 높게 나타났으며(p<0.05), 사염화탄소 흑마늘군의 혈장 LDH 활성은 153.2±197.7 IU/L로 사염화탄소 대조군에 비해 유의적으로 감소하였음을 확인할 수 있었다(p<0.05). 따라서 흑마늘 추출물은 사염화탄소에 의해 유도된 간 손상을 억제하는 것으로 사료된다.

실험예 3. 급성독성실험

6 주령의 특정병원체부재(specific pathogen-free, SPF) SD계 랫트를 사용하여 급성독성실험을 실시하였다. 각 그룹 당 2마리씩의 동물에 본 발명의 흑마늘 추출물을 100 mg/kg의 용량으로 1회 경구투여 하였다. 실험 물질 투여 후 동물의 폐사여부, 임상증상 및 체중변화를 관찰하고 혈액학적 검사와 혈액생화학적 검사를 실시하였으며, 부검하여 육안으로 강장기와 흉강장기의 이상여부를 관찰하였다.

실험결과, 실험 물질을 투여한 모든 동물에서 특기할 만한 임상증상이나 폐사된 동물은 없었으며, 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학 검사 및 부검 소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다. 이상의 결과, 본 발명의 흑마늘 추출물은 랫트에서 각각 100 mg/kg 까지도 독성변화를 나타내지 않으며, 경구투여 최소치사량(LD₅₀)은 100 mg/kg 이상인 안전한 물질로 판단되었다.

하기에 본 발명의 흑마늘 추출물을 포함하는 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 산제의 제조

흑마늘 추출물(ABG) 20 mg

유당 100 mg

탈크 10 mg

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

제제예 2. 정제의 제조

흑마늘 추출물(ABG) 10 mg

옥수수전분 100 mg

유당 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mg

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

제제예 3. 캅셀제의 제조

흑마늘 추출물(ABG) 10 mg

결정성 셀룰로오스 3 mg

락토오스 14.8 mg

마그네슘 스테아레이트 0.2 mg

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

제제예 4. 주사제의 제조

흑마늘 추출물(ABG) 10 mg

만니톨 180 mg

주사용 멸균 증류수 2974 mg

Na2HPO4,12H2O 26 mg

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.

제제예 5. 액제의 제조

흑마늘 추출물(ABG) 20 mg

이성화당 10 g

만니톨 5 g

정제수 적량

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100 ㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.

제제예 6. 건강 식품의 제조

흑마늘 추출물(ABG) 1000 ㎎

비타민 혼합물 적량

비타민 A 아세테이트 70 ㎍

비타민 E 1.0 ㎎

비타민 B1 0.13 ㎎

비타민 B2 0.15 ㎎

비타민 B6 0.5 ㎎

비타민 B12 0.2 ㎍

비타민 C 10 ㎎

비오틴 10 ㎍

니코틴산아미드 1.7 ㎎

엽산 50 ㎍

판토텐산 칼슘 0.5 ㎎

무기질 혼합물 적량

황산제1철 1.75 ㎎

산화아연 0.82 ㎎

탄산마그네슘 25.3 ㎎

제1인산칼륨 15 ㎎

제2인산칼슘 55 ㎎

구연산칼륨 90 ㎎

탄산칼슘 100 ㎎

염화마그네슘 24.8 ㎎

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

제제예 7. 건강 음료의 제조

흑마늘 추출물(ABG) 1000 ㎎

구연산 1000 ㎎

올리고당 100 g

매실농축액 2 g

타우린 1 g

정제수를 가하여 전체 900 ㎖

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

Claims

경상남도 남해군 지역에서 재배된 생마늘을 10 내지 120℃에서 150 내지 500시간 동안 열풍으로 1차 숙성하는 제 1단계; 상기 단계에서 숙성된 마늘을 10 내지 60 시간 동안 자연 건조하는 제 2단계; 상기 건조 마늘을 다시 10 내지 50℃의 온도의 열풍으로 10 내지 100 시간 동안 숙성하는 2차 숙성 단계를 포함하는 제 3단계 공정을 통하여 수득한 흑색의 흑마늘을 동결건조하고 이를 분쇄함으로서 수득한 흑마늘 건조분말; 또는 상기 건조분말을 상기 건조분말 시료 중량의 1배 내지 30배의 물 또는 주정을 추출용매로 하여, 0℃ 내지 350℃ 추출 온도에서 1시간 내지 24시간 동안 열수추출법으로 1 내지 10회 반복 추출한 후 수득한 추출액을 여과, 감압농축 및 건조하여 수득한 흑마늘 추출물을 유효성분으로 함유하는 급성만성 간염 또는 지방간의 예방 및 치료용 약학조성물.
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경상남도 남해군 지역에서 재배된 생마늘을 10 내지 120℃에서 150 내지 500시간 동안 열풍으로 1차 숙성하는 제 1단계; 상기 단계에서 숙성된 마늘을 10 내지 60 시간 동안 자연 건조하는 제 2단계; 상기 건조 마늘을 다시 10 내지 50℃의 온도의 열풍으로 10 내지 100 시간 동안 숙성하는 2차 숙성 단계를 포함하는 제 3단계 공정을 통하여 수득한 흑색의 흑마늘을 동결건조하고 이를 분쇄함으로서 수득한 흑마늘 건조분말; 또는 상기 건조분말을 상기 건조분말 시료 중량의 1배 내지 30배의 물 또는 주정을 추출용매로 하여, 0℃ 내지 350℃ 추출 온도에서 1시간 내지 24시간 동안 열수추출법으로 1 내지 10회 반복 추출한 후 수득한 추출액을 여과, 감압농축 및 건조하여 수득한 흑마늘 추출물을 유효성분으로 함유하는 급성만성 간염 또는 지방간의 예방 및 개선용 건강기능식품.
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