JP2002154981A

JP2002154981A - ニンニク発酵組成物

Info

Publication number: JP2002154981A
Application number: JP2001273468A
Authority: JP
Inventors: Masanori Kakimoto; 雅範柿本; Ayumi Suzuki; あゆみ鈴木; Isao Nishimoto; 功西本; Sumihiro Shiraishi; 澄廣白石; Yoichi Itakura; 洋一板倉
Original assignee: Wakunaga Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Wakunaga Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1996-12-10
Filing date: 2001-09-10
Publication date: 2002-05-28
Anticipated expiration: 2017-11-27
Also published as: JP4380951B2

Abstract

(57)【要約】【解決手段】本発明は、酵素失活処理したニンニクを
麹菌で発酵させた組成物、あるいは酵素失活処理したニ
ンニクに豆類及び／又は穀類を添加し、麹菌で発酵させ
た組成物を有効成分とする医薬。【効果】臭気がなく、糖尿病、肝臓病、癌、免疫疾
患、高脂血症等の予防・治療剤として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ニンニク発酵組成
物を有効成分とする医薬に関する。

【０００２】

【従来の技術】ニンニクは、古来より調味料、香辛料と
して利用されているが、近年、その中に種々の生理活性
成分が含まれていることが明らかとなり、健康食品及び
医薬品として広く使用されている。しかし、ニンニクに
はアリシン、ジアリルジスルフィド等の臭気成分の前駆
物質が含まれ、容易にこれらに変換されるため、嗜好が
合わず敬遠する人も多い。そのため、熱処理して無臭化
する方法（特開昭５９−２１６５６５号公報、特開平４
−１２６０４号公報）等が開発されたが、服用後にニン
ニク臭が発生する等、依然問題が残されている。また、
ニンニクは、加工条件の違いにより、含有成分や生理活
性に差が生じるため、ニンニクの加工法を定めることは
重要である（望月恵美子：FOODS & FOODINGREDIENTS JO
URNAL OF JAPAN 164, 36-45, 1995）。

【０００３】一方、ニンニク以外に、従来から麹菌及び
／又は紅麹菌を用いた発酵法があり、味噌、醤油及び酒
等の製造に利用されている。この麹菌及び紅麹菌はいず
れも長年にわたる食経験から安全性については既に実証
されており、種々の生理活性を有することが報告されて
いる（例えば、麹菌による抗酸化活性（山口直彦：日本
食品工業学会誌 26, 71-75, 1979）、アンジオテンシン
Ｉ変換酵素阻害活性（寺中毅頼他：日本農芸化学会誌 6
9, 1163-1169, 1995）又は紅麹菌によるコレステロール
低下活性、降圧活性等が報告されている）。

【０００４】そこで、本発明者はニンニクを麹菌及び／
又は紅麹菌で発酵処理すれば、ニンニク臭がなく、かつ
医薬又は食品として有用な組成物が得られると考え、検
討したが、ニンニクはそれ自体で抗菌作用を有するた
め、麹菌及び／又は紅麹菌で発酵を行うことはできなか
った。またぶどう酒の製造過程で少量のニンニクを添加
した例（特開昭４８−５２９９５号公報）や少量のニン
ニクに多量の糖を添加して発酵させた例（特開昭５３−
２６３６１号公報）はあるが、ニンニクを主原料とした
発酵例はない。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の目的
は、ニンニクを麹菌で発酵させることによりニンニク特
有の臭気をなくし、医薬又は食品として有用な組成物を
得ることにある。

【課題を解決するための手段】

【０００６】斯かる実状に鑑み本発明者らは鋭意研究を
行った結果、ニンニクを予め酵素失活処理すれば、グル
コース、デンプン等の栄養源を加えずニンニクのみでも
麹菌で発酵できることを見出し、更に得られた発酵組成
物はニンニク臭がなく、通常のニンニクに比べ抗酸化活
性が約100倍強く、抗糖尿病作用、肝障害防護作用、抗
癌作用、免疫増強作用、コレステロール低下作用等があ
り、糖尿病、肝臓病、癌、免疫疾患、高脂血症等の治療
又は予防に有用であることも見出し、本発明を完成させ
るに至った。

【０００７】

【発明の実施の形態】すなわち本発明は、酵素失活処理
したニンニクを麹菌で発酵させた組成物、あるいは酵素
失活処理したニンニクに豆類及び／又は穀類を添加し、
麹菌で発酵させた組成物を有効成分とする医薬を提供す
るものである。

【０００８】更に本発明は、酵素失活処理したニンニク
を麹菌で発酵させた組成物、あるいは酵素失活処理した
ニンニクに豆類及び／又は穀類を添加し、麹菌で発酵さ
せた組成物を有効成分とする糖尿病、肝臓病、癌、免疫
疾患及び高脂血症から選ばれる疾患の予防・治療剤を提
供するものである。

【０００９】本発明においてニンニクとはユリ科(Lilia
ceae)、アリウム(Allium)属に属するアリウム・サチバ
ム・リンネ(Allium sativum L.)を示す。ニンニクのう
ち発酵に用いる部分は、とりわけ鱗茎部が好ましく、酵
素失活処理した鱗茎をそのまま又は任意の大きさにスラ
イスするか、あるいは破砕して破砕汁にしたものを発酵
に供することができる。また、必要に応じて、米、大
豆、麦、ハトムギ等の豆類及び／又は穀類を添加しても
よい。

【００１０】本発明のニンニク発酵組成物を製造するに
は、まずニンニクの酵素失活処理を行う。酵素失活処理
は、ニンニクを熱、マイクロウエーブ、高圧処理、酵
素、酸又はアルコールで処理することにより行うことが
でき、このうち熱処理が簡便であり好ましい。熱処理の
ための温度は、５０〜２００℃、１〜６０分が好まし
く、特に９０〜１２１℃、１０〜３０分が好ましい。

【００１１】酵素失活処理したニンニクは、例えばAspe
rgillus oryzae、Aspergillus sojae、Aspergillus kaw
achi、Aspergillus awamori等の麹菌及びMonascus pilo
sus、Monascus anka、Monascus paxii、Monascus pubig
erus、Monascus purpures、Monascus ruber、Monascus
vitreus、Monascus major等の紅麹菌から選ばれる一種
又は二種以上の菌により発酵させれば、目的とするニン
ニク発酵組成物を得ることができる。具体的なニンニク
発酵組成物の調製法としては、例えば次の工程に従って
行う方法が挙げられる。

【００１２】１）ニンニク培地／ニンニク含有培地の調
製ニンニクを水洗した後、等量の水を加え、２０〜３０分
間煮沸し、必要に応じて、細断、破砕等の加工を行う
（破砕する場合は、破砕汁のみを使用することもでき
る）。これに必要により、栄養源として適宜、米、大
豆、麦、ハトムギ等の豆類及び／又は穀類を加えたり、
補糖を行い、オートクレーブ等で滅菌（１２１℃、２０
分）する。なお、豆類及び／又は穀類を加えたり、補糖
を行う場合は、これらが全体の９０重量％（以下、単に
「％」という）を超えないようにする。

【００１３】２）発酵菌の前培養発酵菌としては、麹菌（Aspergillus oryzae、Aspergil
lus sojae、Aspergillus kawachi、Aspergillus awamor
i等）及び紅麹菌（Monascus 属の菌株：M.pilosus、M.a
nka、M.paxii、M.pubigerus、M.purpures、M.ruber、M.
vitreus、M.major等）から選ばれる一種又は二種以上を
用いることが好ましい。菌株は２％酵母エキス添加ポテ
トデキストロース寒天培地で継代し、それを次の培地に
接種し、１０〜５０℃で２〜１４日、好ましくは２０〜
４０℃で２〜４日間前培養する。前培養用の培地は、サ
ブロー培地（ペプトン１％、グルコース４％）、ポテト
デキストロース培地（ジャガイモ煎汁（２００ｇ／l）
グルコース２％）、グリセリン培地（グリセリン７％、
グルコース３％、 Soybean meal ３％、ペプトン０．
８％、硫酸マグネシウム０．１％、塩化ナトリウム０．
２％）の他、任意の真菌用の培地を利用できるが、培地
構成物としては食用可能な物が好ましい。

【００１４】３）ニンニクの発酵工程１で調製したニンニク培地に、工程２で調製した前
培養菌液を０．１〜５０％、好ましくは０．５〜１０％
添加し、１０〜５０℃で７日〜６０日間、更に好ましく
は、２０〜４０℃で麹菌の場合は７日〜３５日間、紅麹
菌の場合は１４日〜４２日間、振盪培養若しくは静置培
養を行うことにより、ニンニク発酵組成物を調製するこ
とができる。また、培地の水分を４０〜６０％に減少さ
せ、個体培養の形式で静置培養を行ってもよい。

【００１５】４）ニンニク発酵組成物の処理工程３の発酵が終了した段階で、発酵物を加熱滅菌した
後、これを直接使用するか又は培養濾液と分離して別々
に使用する。また、有効成分のみを抽出して使用するこ
ともできる。

【００１６】このようにして得られた本発明の組成物
は、常法により食品としたり、薬学的に許容される担体
とともに種々の剤型の医薬とすることができる。このう
ち経口用固形製剤を調製する場合は、ニンニク発酵組成
物に賦形剤、必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着
色剤、矯味剤、矯臭剤等を加えた後、常法により錠剤、
被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等を製造すること
ができる。そのような添加剤としては、当該分野で一般
的に使用されるものでよく、例えば、賦形剤としては、
乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ぶどう糖、デンプン、炭
酸カルシウム、カオリン、微結晶セルロース、珪酸等
を、結合剤としては、水、エタノール、プロパノール、
単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カ
ルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロ
ース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロー
ス、エチルセルロース、シェラック、リン酸カルシウ
ム、ポリビニルピロリドン等を、崩壊剤としては乾燥デ
ンプン、カルメロースカルシウム、アルギン酸ナトリウ
ム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウ
ム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセ
リド、乳糖等を、滑沢剤としては精製タルク、ステアリ
ン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコール等を、矯味剤
としては白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等を例示でき
る。

【００１７】経口用液体製剤を調製する場合は、ニンニ
ク発酵組成物に矯味剤、緩衝剤、安定化剤、矯臭剤等を
加えて常法により内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤
等を製造することができる。この場合矯味剤としては上
記に挙げられたもので良く、緩衝剤としてはクエン酸ナ
トリウム等が、安定化剤としてはトラガント、アラビア
ゴム、ゼラチン等が挙げられる。

【００１８】本発明の食品又は医薬は糖尿病、肝臓病、
癌、免疫疾患、高脂血症等の治療又は予防の目的で使用
することができる。投与量及び投与方法は、年齢、体
重、症状等により適宜決定することができるが、通常成
人１日当たり、本発明組成物を０．５〜２ｇを１回又は
数回に分けて投与することが好ましい。

【００１９】なお、本発明組成物は主成分であるニンニ
ク、麹菌又は紅麹菌が通常食用に供されており、一般に
低毒性である。また、本発明組成物を若齢ラットに、３
週間にわたって３％混餌で与えたが、成長過程および、
一般行動に何ら異常は認められず、安全性の高い物質で
あることが確認された。

【００２０】本発明のニンニク発酵組成物は、強い抗酸
化活性を有し、抗癌作用、ＮＫ活性等の免疫増強作用、
アセトアミノフェン肝障害に対する防護作用、アロキサ
ン糖尿病モデルに対する防護作用、耐糖能の増強作用に
よる抗糖尿病作用、コレステロール低下作用等が認めら
れ、現代社会に蔓延する成人病の治療又は予防にきわめ
て有用である。また、本発明組成物は安全性が高く、か
つニンニク臭が殆どない（アリナーゼを失活することに
よって得られる無臭ニンニクとは異なり、口の中でニン
ニク臭が発生することはない）ので健康食品及び医薬品
として広く用いることができる。

【００２１】

【実施例】次に実施例をあげて本発明を更に詳しく説明
する。なお、本発明はこれによって限定されるものでは
ない。また、本実施例で使用した麹菌及び紅麹菌株を表
１に示す。

【００２２】

【表１】

【００２３】実施例１麹菌を用いたニンニク発酵組
成物の製造及びその抗酸化活性（発酵組成物（エキス）
の調製）ニンニクを水洗した後、等量の水を加え、３０分間煮沸
した後、破砕し、破砕汁を得た。破砕汁に等量の水、及
びグルコース２％を添加し、オートクレーブで１２１
℃、２０分間滅菌した（ニンニク培地）。別に、麹菌
（Aspergillus oryzae）を、サブロー培地（ペプトン１
％、グルコース４％）で２７℃、１６０rpm振盪の条件
下で３日間前培養し、ニンニク培地にこの培養液を１％
添加し２７℃、１６０rpm 振盪の条件下で２日〜５週間
培養し、３００rpm１０分間遠心分離した上清（エキ
ス）を以下の試験に用いた。一方、米、大豆は、乾燥固
形物としてニンニク培地と等しくなるように調製した。

【００２４】（スーパーオキシドアニオン消去能の測定
法）65mM KH₂PO₄−ほう酸緩衝液（pH８．２）２００μ
l、５mMキサンチン水溶液２００μl、１０mMヒドロキシ
ルアミン水溶液１００μl、水２００μlの混合液にサン
プル１００μl及び、キサンチンオキシダーゼ２００μl
を加え、３７℃で１５分間インキュベートした。インキ
ュベート終了時に、反応停止及び発色の目的で、３０μ
ＭＮ−ナフチルエチレンジアミン−３mMスルファニル
酸−２５％氷酢酸２mLを加えて室温で４５分間放置し、
５５０nmで吸光度を測定した。本測定は、２回行い、サ
ンプル添加による吸光度の減少から活性酸素消去活性
（％）を求めた。なお、キサンチンオキシダーゼ（キサ
ンチンオキシダーゼ懸濁液：和光純薬）は、吸光度の変
化が０．０２０〜０．０２５／分になるように調製した
（１５〜２０mU／mL）。結果を図１及び２に示す。

【００２５】（ＤＰＰＨラジカル消去能の測定法）サン
プルを０．５Ｍ酢酸緩衝液（pH５．５）で希釈し、その
０．５mLにエタノール０．５mLを加え、更に０．５mM
ＤＰＰＨ（１，１−ジフェニル−１−２−ピクリルヒド
ラジル：和光純薬）エタノール溶液０．２５mLを加えて
よく混合し、５２０nmにおける吸光度を経時的に測定
し、サンプル無添加の対照に対する％を求めた。結果を
図３〜５に示す。

【００２６】（結果）（１）ニンニク培地及び、ニンニク発酵エキスのスーパ
ーオキシドアニオン消去能ニンニク培地は、弱い消去活性を示したが、ニンニク発
酵エキスは、発酵期間に応じて消去活性が増加した。ま
た、グルコースの添加によって、ニンニク培地の活性は
僅かに増加したが、発酵エキスは、ほとんど差が認めら
れなかった（図１）。ニンニク発酵エキスを希釈して、
同様にスーパーオキシドアニオン消去能を測定した。ニ
ンニク発酵エキスは、４週間発酵のサンプルで、１００
倍希釈したものと、ニンニク培地の活性が等しくなり、
発酵によってスーパーオキシドアニオン消去活性は、１
００倍に増強された（図２）。

【００２７】（２）ＤＰＰＨラジカル消去活性１００倍希釈液を用いてＤＰＰＨラジカル消去活性を測
定した。ニンニク培地（ＢＧ）は、殆ど活性は認められ
なかったが、ニンニク発酵エキスは、何れの麹菌でも、
発酵期間に応じてＤＰＰＨラジカル消去活性が増加し
た。特にＡ−１、Ａ−６に強い活性が認められた（図
３）。

【００２８】（３）A-1、A-6 のＤＰＰＨラジカル消去
活性物質産生に及ぼす培地の影響米培地、大豆培地は殆どＤＰＰＨラジカル消去活性を示
さなかった。Ａ−１は、米培地で若干のＤＰＰＨラジカ
ル消去活性が認められ、大豆培地では更に弱いものであ
ったが、ニンニク培地の発酵エキスでは、非常に強い活
性が認められた。（図４）Ａ−６では、ニンニク培地で
の特異性が、更に顕著に認められた。（図５）

【００２９】実施例２紅麹菌を用いたニンニク発酵
エキスの抗酸化活性（発酵エキスの調製法）ニンニクを水洗した後、等量の
水を加え、３０分間煮沸した後、破砕し、破砕汁を得
た。破砕汁に等量の水、及びグルコース２％を添加し、
オートクレーブで１２１℃、２０分間滅菌した（ニンニ
ク培地）。別に、紅麹菌（Monascus属）１白金耳を、グ
リセリン培地（グリセリン７％、グルコース３％、Soyb
ean meal３％、ペプトン０．８％、硫酸マグネシウム
０．１％、塩化ナトリウム０．２％）で培養し、ニンニ
ク培地にこの培養液を１％添加し２５℃、１６０rpm 振
盪の条件下で２〜５週間培養し、３００rpm １０分間遠
心分離した上清を以下の試験に用いた。ニンニク培地の
他、大豆を乾燥固形物としてニンニク培地と等しくなる
ように調製した大豆培地、ニンニクと大豆を混合した培
地などを用いた。

【００３０】（ＤＰＰＨラジカル消去能の測定法）サン
プルを０．５Ｍ酢酸緩衝液（pH５．５）で希釈し、その
０．５mLにエタノール０．５mLを加え、更に０．５mM
ＤＰＰＨ（１，１−ジフェニル−１−２−ピクリルヒド
ラジル：和光純薬）エタノール溶液０．２５mLを加えて
よく混合し、５２０nmにおける吸光度を経時的に測定
し、サンプル無添加の対照に対する％を求めた。結果を
図６及び７に示す。

【００３１】（結果）（１）紅麹培溶液のＤＰＰＨラジカル消去能ニンニク：大豆（２：２）の混合培地は、弱い消去活性
を示したが、紅麹菌で発酵した、ニンニク発酵エキス
は、発酵期間に応じて消去活性が増加した。特に、Ａ−
２４、Ａ−２６に強い活性が認められた（図６）。Ａ−
２４株を用いて、ニンニクと大豆の混合比を変えて検討
した。大豆のみの培地（０：４）では、ラジカル消去活
性は、弱いものであったが、ニンニクの配合比が高くな
るにしたがって、活性の増加が認められた。特に、ニン
ニクを２倍の濃度にした培地（８：０）で最も強い活性
が認められた（図７）。

【００３２】実施例３ニンニク発酵組成物の抗腫瘍
効果及び免疫増強作用（ニンニク発酵組成物の調製法）ニンニクを水洗した
後、等量の水を加え、３０分間煮沸した後、破砕し、破
砕汁を得た。破砕汁に、等量の水及びグルコース２％を
添加し、オートクレーブで１２１℃、２０分間滅菌した
（ニンニク培地）。別に、麹菌（Aspergillus oryzae）
を、サブロー培地（ペプトン１％、グルコース４％）で
２７℃、１６０rpm振盪の条件下で３日間前培養し、ニ
ンニク培地にこの培養液を１％添加し２７℃、１６０rp
m 振盪の条件下で２週間培養した。得られた発酵物は、
１００℃１０分間加熱した後、凍結乾燥し、粉砕した。
各種試験に際しては、ニンニク発酵組成物を水に懸濁し
て経口投与した。

【００３３】（実験方法）ＩＣＲ系雄性マウス（７週
令:日本クレア）に、sarcoma-180 10⁶cell/mouseを皮下
移植し、翌日より被験物質を隔日で１０回経口投与し、
最終投与の翌日に、腫瘍の大きさ（３／４×短径×短径
×長径mm³）を測定した。その後、無菌的に脾臓を摘出
し、常法に従って細胞浮遊液を調製し、赤血球除去用ト
リス緩衝液（１７mMトリスヒドロキシメチルアミノメタ
ン０．７４７％、NH₄Cl,pH７．６５）で処理後、ＲＰＭ
Ｉ１６４０で洗浄し、１０％ＦＣＳを含むＲＰＭＩ１
６４０に懸濁した。

【００３４】ＹＡＣ−１細胞、Salcoma １８０細胞の標
識１０％ＦＣＳを含むＲＰＭＩ１６４０で２×１０⁶cell
／０．１mLに調製したＹＡＣ−１細胞又は、salcom−１
８０細胞に、Na₂ ⁵¹CrO₄１００μl（アマシャム、１μCi
／μl in sterile０．９％NaCl）を加え、CO₂インキュ
ベータで２時間培養した。その後、１０％ＦＣＳを含む
ＲＰＭＩ１６４０で４回洗浄し、３×１０⁵cell／mL
に調製した。

【００３５】ＮＫ活性、キラー活性脾臓細胞を３×１０⁷cell／mL（ＹＡＣ−１細胞、Salco
ma−１８０細胞の２００倍）に調製し、ＮＵＮＣ９６ウ
ェルＵ底multi dishに１００μl（３×１０⁶cell）を入
れ、３×１０⁵cell／mLに調製した⁵¹Cr標識ＹＡＣ−１
細胞又は、Salcoma−１８０細胞５０μl（１．５×１０
⁴cell）を加えた（Exp）。これ以外に、最大遊離用とし
て、⁵¹Cr標識ＹＡＣ−１細胞又は、Salcoma−１８０細
胞５０μl（１．５×１０⁴cell）に１N HCl １００μl
を加えたもの（Tmax）、自然遊離用として、⁵¹Cr標識Ｙ
ＡＣ−１細胞又は、Salcoma−１８０細胞５０μl（１．
５×１０⁴cell）に１０％ＦＣＳを含むＲＰＭＩ１６４
０１００μlを加えたもの（Tspon）を用意した。このmu
lti dishをＣＯ₂インキュベーターで２４時間培養後、
遠心分離した上清１００μlをＲＩＡチューブにとり、
ガンマーカウンターで遊離した⁵¹Crを測定した。次の式
より、細胞毒性（％）を算出しＮＫ活性、キラー活性と
した。

【００３６】細胞毒性（％）＝（(Exp-Tspon)/(Tmax-Tspon)）×100

【００３７】統計処理Ｆ検定の後、Student's-T testもしくは、Aspin-Welch
法で検定し危険率５％未満を有意とし＊印で示した。結
果を以下に示す。

【００３８】（結果）（１）抗腫瘍効果ガン細胞移植３週間後の腫瘍体積は、コントロール群の
３９３mm³に対し、Ａ−１、Ａ−６投与群では統計的に
有意な増殖抑制作用が認められた。クレスチンでも同様
に有意な作用が認められた。

【００３９】

【表２】

【００４０】（２）ＮＫ活性ガン細胞移植３週間後の脾臓細胞を用いて、ＮＫ活性を
測定した。ＮＫ活性は、コントロール群の４．６％に対
し、Ａ−１、Ａ−６投与群では、１７．８％、１４．１
％となり統計的に有意な、ＮＫ活性の増強作用が認めら
れた。クレスチン投与群でも同様に有意な増強作用が認
められた。

【００４１】

【表３】

【００４２】（３）キラー活性ガン細胞移植３週間後の脾臓細胞を用いて、キラー活性
を測定した。キラー活性は、ＮＫ活性と同様に、Ａ−
１、Ａ−６投与群では、顕著かつ、統計的に有意な、活
性の増強作用が認められた。

【００４３】

【表４】

【００４４】実施例４アセトアミノフェン肝障害防
護効果（実験方法）実施例３と同じニンニク発酵組成物を用い
て検討した。６週令のｄｄＹ系雄性マウス（日本ＳＬ
Ｃ）を一夜絶食した。アセトアミノフェン投与の２時間
前と３０分前の２回被験物質を経口投与し、アセトアミ
ノフェン（４００mg／kg）を腹腔内投与した。６時間後
に、腹部大静脈より、ヘパリン処理したシリンジを用い
て採血し、血漿ＧＰＴ活性を測定し、肝障害の指標とし
た。アセトアミノフェン（和光純薬）は、リン酸三カリ
ウム水溶液（１００mg／mL）でpH１１に調製した生理食
塩水に沸騰水浴中で溶解した。血漿中ＧＰＴ活性は、Ｇ
ＰＴ−ＵＶテストワコー（和光純薬）を用いて測定し
た。結果を以下に示す。

【００４５】（結果）アセトアミノフェンの投与によ
り、コントロール群の血漿中ＧＰＴ活性は、４６８ＩＵ
／ｌに増加し激しい肝障害が惹起された。一方、Ａ−
１、Ａ−６投与群のＧＰＴ活性は、１４６、６８ＩＵ／
ｌの増加に留まり、顕著な肝障害防護作用が認められ
た。

【００４６】

【表５】

【００４７】実施例５抗糖尿病作用（実験方法）実施例３と同じニンニク発酵組成物を用い
て検討した。６週令のｄｄＹ系雄性マウス（日本ＳＬ
Ｃ）を一夜絶食した。キヤピラリを用いて眼窩静脈叢よ
り２０μl採血した。被験物質４ｇ／kgを経口投与し、
１時間後にアロキサン（和光純薬）５０mg／kgを静脈内
投与し、１時間後及び６時間後に同様に採血した。絶食
は、アロキサン投与直後に解除し、被験物質は、アロキ
サン投与の前日から、３日後まで１日１回経口投与し、
採血は、１、２、４日後に同様に行った。採血後、直ち
にヘマトクリット用遠心機で血漿を分離し、グルコース
ＣII−テストワコー（和光純薬）を用いて血糖値を測
定した。統計処理は実施例３と同様に行った。結果を図
８に示す。

【００４８】

【表６】

【００４９】（結果）ノーマルで示した、正常状態のマ
ウスの血糖値は２００mg／dl程度であるが、アロキサン
の投与により、コントロール群の血糖値は、１時間後で
５４０mg／dlに激増し、その後も増加を続け、４８時間
後では、６５０mg／dlに達した。一方、ニンニク発酵組
成物Ａ−６投与群では、アロキサン投与１時間後の血糖
値は、３８０mg／dlに留まり、コントロール群との間
に、統計的に有意な血糖上昇の抑制作用が認められた。
その後も、有意な低値が観察された。Ａ−１も同様に有
意な血糖上昇の抑制作用が認められた。しかし、発酵の
原料として用いた、ボイルニンニク（ニンニク培地：Ｂ
Ｇ）では、アロキサン投与による血糖の上昇の抑制作用
は認められなかった（図８）。

【００５０】実施例６血糖上昇抑制作用（実験方法）実施例３と同じニンニク発酵組成物を用い
て検討した。８週令のｄｄＹ系雄性マウス（日本ＳＬ
Ｃ）を一夜絶食した後、キヤピラリを用いて眼窩静脈叢
より２０μl採血し、以後実験終了時まで絶水とした。
被験物質及びスターチを同時に経口投与し、３０、６
０、１２０分後に同様に採血した。採血後、直ちにヘマ
トクリット用遠心機で血漿を分離し、グルコースＣII−
テストワコー（和光純薬）を用いて血糖値を測定し
た。統計処理は実施例３と同様に行った。結果を図９に
示す。

【００５１】

【表７】

【００５２】（結果）スターチを経口投与したコントロ
ール群の血糖値は、３０分後で１５０mg／dl上昇した
が、Ａ−１投与群では、１００mg／dlの上昇に留まり、
コントロール群に対し有意な血糖上昇の抑制作用が認め
られた。その後の血糖値は、有意差は無いがコントロー
ル群よりやや高値を推移し、血糖上昇の遅延が観察され
た。Ａ−６投与群でも、Ａ−１とほぼ同様の結果が得ら
れた。一方、ボイルニンニク（ニンニク培地：ＢＧ）投
与群は、コントロールと同様の血糖推移を示し、ニンニ
ク発酵組成物とは明らかに異なる結果が得られた（図
９）。

【００５３】実施例７紅麹菌を用いたニンニク発酵
エキスのコレステロール合成阻害活性実施例２と同じニンニク発酵エキスを用いて検討した。（酵素標本の調製法）Wistar系雄性ラット（６．５週
令）を明時１７：００〜５：００の逆転照明下で、粉末
のＥＣ−２（日本クレア製）で６日間の馴致飼育の後、
２％コレスチラミン８％コーン油を配合したＣＥ−２で
５日間飼育した。深夜に相当する、１０：００にラット
を脱血致死後肝臓を摘出し、氷冷下で２倍量のリン酸バ
ッファーを加えて、テフロン（登録商標）ホモジナイザ
ーで、ホモジネートを作成した。以下、次の様にミクロ
ゾーム画分を調製しタンパク量１０mg／mLに調製後、−
８０℃で保存した。

【００５４】ラット肝ホモジネート ↓遠心分離（700g、５分）遠心上清 ↓遠心分離（12,000ｇ、30分）遠心上清 ↓遠心分離（105,000g、60分）沈渣（洗浄） ↓遠心分離（105,000g、60分）沈渣（ミクロゾーム画分）リン酸バッファーに懸濁（タンパク量10mg／mL）

【００５５】（HMG-CoA リダクターゼ阻害活性の測定
法）酵素反応液５０μl中、次の試薬を含むように調製
し、３７℃、３０分反応させた。反応の開始は酵素液の
添加、反応の停止は２Ｎ塩酸２０μlの添加により行
い、塩酸添加後、更に３７℃、１５分間インキュベート
した。次に、陽イオン交換樹脂（Bio Rex ５：Bio Rad
社製）の懸濁液（１ｇ／１０mL）４５０μlを加え、１
時間振盪後、上清４００μlを液体シンチレーター（ACS
II：Amersham社製）１０mLに加えＣｏＡより乖離した
¹⁴Ｃをカウントした。被験物質（実施例２に記載の方法
により得た発酵エキス）は、反応液５０μl中に１０μl
添加とし、無添加時の酵素反応に対し、５０％阻害を挟
む３点以上のデータからLitchfild-Wilcoxon法によりＩ
Ｃ₅₀値を算出した。

【００５６】酵素反応液の組成０．１１mM dl［３−¹⁴Ｃ］ＨＭＧ−ＣｏＡ（2.25Ci/m
ol）１００mM リン酸カリウムバッファー（pH７．４）１０mM ＥＤＴＡ１０mM ジチオスレイトール５mM ＮＡＤＰＨ３０〜４０μｇミクロゾーム蛋白（反応液５０μl
中）

【００５７】（結果）図１０に各培養液のＨＭＧ−Ｃｏ
Ａリダクターゼ阻害活性（ＩＣ₅₀の逆数で表示）を示し
た。紅麹菌（Ａ−２４株）を大豆培地、ニンニク：大豆
（１：１）の混合培地、ニンニク培地を用いて１３〜３
４日間培養した。大豆培地では検討期間中殆ど阻害活性
は認められなかったが、ニンニク：大豆の混合培地では
ＩＣ₅₀値０．０３〜０．０２mL／mLの阻害活性が認めら
れた。更にニンニク培地では培養期間に依存した強い阻
害活性（ＩＣ₅₀値０．０２〜０．００７mL／mL）が認め
られた（図１０）。

【００５８】この結果から、酵素失活処理ニンニクは、
紅麹菌においてHMG-CoA reductase阻害活性物質を効率
よく産生することが確認された。

【００５９】実施例８製剤例／錠剤実施例３で調製したニンニク発酵組成物に乳糖、コーン
スターチ、結晶セルロース、カルメロースカルシウム及
びステアリン酸マグネシウムを下記の処方量で加え、ボ
ーレコンテナミキサー（コトブキ技研工業製）で１０分
間混合した。この混合末を打錠機（コレクト１９Ｋ、菊
水製作所製）で圧縮成形し、径８mm、重量１８０mgの錠
剤を製した。本錠剤は硬度及び胃内崩壊性に優れてい
た。

【００６０】

【表８】

【００６１】実施例９製剤例／顆粒剤実施例３で調製したニンニク発酵組成物にコーンスター
チ、結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース及
びカルメロースカルシウムを下記の処方量で加え混合し
た後、水を加えて練合した。この練合物を押し出し造粒
機（DOME GRAN、不二パウダル製）で径０．８mmの柱状
造粒物とし、整粒、乾燥、篩過した後、顆粒剤を製し
た。本顆粒は胃内崩壊性に優れ、分包等の包装形態で提
供することができる。

【００６２】

【表９】

【００６３】実施例１０製剤例／ドリンク剤実施例２で得られたニンニク発酵組成物に下記の処方で
甘味剤、酸味剤、香料、水を加えて滅菌した後、ガラス
瓶に充填してドリンク剤を製した。

【００６４】

【表１０】

【００６５】

【発明の効果】本発明の組成物は臭気がなく、糖尿病、
肝臓病、癌、免疫疾患、高脂血症等の予防・治療剤とし
て有用である。

【図面の簡単な説明】

【図１】活性酸素消去活性を示す図である。

【図２】活性酸素消去活性を示す図である。

【図３】ＤＰＰＨラジカル消去活性を示す図である。

【図４】ＤＰＰＨラジカル消去活性を示す図である。

【図５】ＤＰＰＨラジカル消去活性を示す図である。

【図６】ＤＰＰＨラジカル消去活性を示す図である。

【図７】ＤＰＰＨラジカル消去活性を示す図である。

【図８】抗アロキサン糖尿病作用を示す図である。

【図９】耐糖能を示す図である。

【図１０】ＨＭＧ−ＣｏＡリダクターゼ阻害活性を示す
図である。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 3/06 Ａ６１Ｐ 3/06 3/10 3/10 35/00 35/00 37/00 37/00 (72)発明者西本功広島県高田郡甲田町下甲立1624 湧永製薬株式会社内 (72)発明者白石澄廣広島県高田郡甲田町下甲立1624 湧永製薬株式会社内 (72)発明者板倉洋一広島県高田郡甲田町下甲立1624 湧永製薬株式会社内Ｆターム(参考） 4B016 LC01 LC07 LE02 LE03 LG09 LK18 LP13 4B018 LE01 LE02 LE05 MD49 MD55 MD57 MD80 ME03 ME04 ME07 ME08 MF13 4C088 AB88 AC11 BA37 CA25 NA14 ZA51 ZA75 ZB02 ZB05 ZB26 ZC35

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】酵素失活処理したニンニクを麹菌で発酵
させた組成物、あるいは酵素失活処理したニンニクに豆
類及び／又は穀類を添加し、麹菌で発酵させた組成物を
有効成分とする医薬。
【請求項２】酵素失活処理したニンニクを麹菌で発酵
させた組成物、あるいは酵素失活処理したニンニクに豆
類及び／又は穀類を添加し、麹菌で発酵させた組成物を
有効成分とする糖尿病、肝臓病、癌、免疫疾患及び高脂
血症から選ばれる疾患の予防・治療剤。