KR101108830B1 - 사상균 포자의 제조 방법 및 식물 병해 방제 방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은, 일반적인 액체 배양에서는 형성 곤란한 사상균 포자를 액체 배양에 의해 효율적으로 제조하는 방법, 및 상기 방법에 의해 얻어진 포자를 사용하는 식물 병해 방제 기술을 제공한다. 탄소원이나 질소원을 공급하는 유기 성분으로서 옥수수 침지수 또는 대두에서 유래하는 펩톤, 무기 성분으로서 인산수소이칼륨, 황산마그네슘, 염화칼슘을 포함하는 액체 배지를 사용하여 사상균을 배양함으로써, 실용화에 충분한 양의 포자를 형성시킨다. 또한, 이와 같이 하여 얻어진 사상균 포자를 회수하고, 식물체에 접촉시켜 식물 병해를 유효하게 방제한다.
사상균 포자, 옥수수 침지수, 펩톤, 액체 배지, 액체 배양, 방제 기술

Description

사상균 포자의 제조 방법 및 식물 병해 방제 방법{METHOD FOR PRODUCING FILAMENTOUS FUNGUS SPORES AND METHOD FOR PREVENTING PLANT DISEASE}
본 발명은, 식물 병해의 방제에 따른 기술에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 페니실리움속균의 미생물 농약 또는 자재로서의 실용화에 충분한 양의 포자 형성을 가능하게 하는 기술에 관한 것이다.
화학 농약은 식물의 병해충 방제에 있어서 불가결한 수단이며, 안정적인 식물 생산에 크게 공헌하고 있다. 그러나, 최근 화학 농약의 다량 투여에 의한 저항성 병해충의 발생이나 환경 부하의 문제점이 발생하게 되었다.
이것을 배경으로서, 최근 상기 화학 농약보다 환경으로의 부하가 낮다고 상정되는 미생물을 이용한 "생물 농약(Biological agrochemicals)"이라고도 불리는 생물적 방제의 연구가 진전되고 있으며, 그 일부는 이미 실용화되고 있다.
상기 생물 농약으로서의 이용이 기대되는 미생물로서, 예를 들면 페니실리움속균 등의 사상균이 알려져 있다. 이 중, 페니실리움속균의 완전 세대인 탈라로마이세스속(Talaromyces속)은, 이미 딸기 탄저병이나 백분병용의 농업용 살균제로서 이용되고 있다(탈라로마이세스 플라버스(Talaromyces flavus) 수화제, 농림 수산성 제20659호). 일본 특허 공개 (평)10-229872호 공보에는, 딸기 탄저균에 대하여 길 항 작용을 갖는 탈라로마이세스ㆍ플라버스가 개시되어 있다.
또한, 일본 특허 공개 제2001-39810호 공보에는, 망고 탄저병에 대하여 길항 작용을 갖는 미생물로서 페니실리움 엑스판섬(Penicillium expansum)이 개시되어 있으며, 일본 특허 공개 제2004-231626호 공보에는 회색 곰팡이 병균에 방제 효과를 나타내는 페니실리움 카멤베르티(Penicillium camemberti) 등이 개시되어 있다.
이들 페니실리움속균을 미생물 농약 또는 자재로서 이용할 때에는, 통상적인 액체 배양에 의해 얻어지는 배양 균사체를 사용할 수 있다. 그러나, 균사체는 내구성의 포자에 비해 생존성이 떨어지기 때문에 실용성이 부족하다. 그 때문에, 내구성의 포자를 저렴하면서도 대량 생산할 수 있는 기술이 요망되고 있다.
종래 사상균의 포자 형성 방법으로서, 고체 배양이나 액체 배양이 행해졌다. 고체 배양을 행하는 경우에는, 쌀, 보리, 옥수수 등의 곡물류나, 밀기울 등의 곡물에서 유래하는 고체 성분 등이 사용되었지만, 고체 배양을 멸균시키기 위해서는 장시간이 필요함과 동시에 무균 관리도 어렵고, 배양 중에 온도, 수분, pH 등의 환경을 제어하는 것도 어렵다. 또한, 이들 고체 성분과 포자의 분리가 곤란함과 동시에, 배양 시간이 길고, 배양 비용도 고가가 된다.
한편, 액체 배양에서는 많은 범용성 배양 장치의 이용이 가능하기 때문에, 멸균이 용이하고, 배양 중 온도, 산소 공급량, pH 등의 환경 제어가 용이하다는 이점도 있지만, 포자 형성이 어렵다는 문제점이 있었다.
이 문제를 해결하기 위해, 예를 들면 탄소원으로서 갈락토오스 및/또는 프룩토오스를 사용하는 방법(일본 특허 공개 (평)9-322759호 공보 참조), 배지 중 성분 으로서 마그네슘염 및/또는 칼륨염을 사용하는 방법(일본 특허 공개 (평)11-276158공보 참조), 프룩토오스를 0.1 내지 5 ％, 염화칼슘을 0.01 내지 0.5 ％, 글루탐산을 0.01 내지 0.5 ％ 첨가하는 사상균의 액체 배양 방법(일본 특허 공개 제2000-201669호 공보 참조)이 있다.
또한, 사상균의 포자 형성에 유효한 배지로서, 당밀을 5 내지 20 g/ℓ, 옥수수 침지수(CSL)를 10 내지 25 g/ℓ, 염화나트륨을 5 내지 15 g/ℓ, 황산칼슘을 0.1 내지 0.5 g/ℓ, 인산이수소칼륨을 0.001 내지 0.01 g/ℓ, 황산마그네슘 7수화물을 0.001 내지 0.01 g/ℓ, 황산구리를 0.001 내지 0.005 g/ℓ, 황산철을 0.0009 내지 0.005 g/ℓ로 소포제나 한천 등의 고화제를 포함하는 배지(United State Patent 6593127호 공보 참조) 등이 보고되어 있다. 나아가서는, 칼슘염의 첨가가 페니실리움속균의 포자 형성에 유효하다는 것이 알려져 있다(Trans. Br. Mycol. Soc., 80(2), p.319-325, 1983 참조).
사상균을 미생물 농약 또는 자재로서 실용화할 때, 종래의 배양 방법으로는 만족스러운 양의 포자 형성량을 얻는 것이 여전히 어렵다는 기술적 과제가 있었다. 또한, BSE 문제 등으로부터 사용하는 배지 성분의 탄소원이나 질소원에 대해서는, 동물에서 유래하는 배지 성분으로부터 안전한 식물에서 유래하는 배지 성분으로의 대체가 요망되고 있다.
따라서, 본 발명은 미생물 농약 또는 자재로서의 실용화에 충분한 양의 사상균 포자의 형성이 가능하며, 안전한 기술을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명자는, 미생물 농약 또는 자재로서 사용하는 사상균의 포자를 액체 배양 생산하는 기술에 대하여 예의 연구를 진행시킨 결과, 배지의 탄소원 및 질소원으로서 바람직한 식물에서 유래하는 성분을 사용하고, 이것에 바람직한 무기 성분을 첨가함으로써, 식물 병해 방제를 위해 이용되는 미생물 농약 또는 자재로서의 실용화에 충분한 양의 포자를 생산할 수 있다는 것을 발견하였다.
우선, 본 발명은 사상균 포자의 제조 방법을 제공한다. 이 제조 방법에서는 많은 범용성 배양 장치의 이용이 가능하기 때문에, 멸균이 용이하고, 배양 중 온도, 산소 공급량, pH 등의 환경 제어가 용이하다는 등의 이점도 있는 액체 배양을 선택한다.
또한, 이 액체 배지는 탄소원 및 질소원으로서 옥수수 침지수 또는 대두에서 유래하는 펩톤을 포함하고, 탄소원 및 질소원에서 유래하는 무기 성분의 양이 목적으로 하는 사상균의 액체 배양시의 포자 형성 개수로부터 판단하여 필요량보다 부족한 경우에는, 우선 염화칼슘을, 필요에 따라 황산마그네슘을, 필요에 따라 추가로 인산수소이칼륨을 포함하도록 연구한 결과, 이 액체 배지를 사용하여 사상균을 배양하고, 포자를 형성시켰다.
탄소원 및 질소원으로서의 상기 옥수수 침지수 또는 상기 대두에서 유래하는 펩톤이 액체 배지 중에 0.1 내지 10 ％ 포함되도록, 나아가서는 무기 성분으로서의 상기 염화칼슘이 0.2 내지 5.0 ％, 바람직하게는 0.4 내지 3.5 ％ 포함되도록 한다.
이때 무기 성분으로서, 과잉이 되지 않을 정도로 황산마그네슘, 인산수소이칼륨을 첨가할 수도 있다. 배지 중의 마그네슘염, 칼륨염의 필요량이 부족하지 않도록 보충하기 위해서이다. 이 경우, 황산마그네슘은 0.001 내지 10 ％, 바람직하게는 0.005 내지 5.0 ％ 포함되도록 첨가하는 것이 바람직하다. 또한, 인산수소이칼륨은 0.001 내지 0.3 ％, 바람직하게는 0.05 내지 0.2 ％ 포함되도록 첨가하는 것이 바람직하다.
상기 사상균은 페니실리움(Penicillium)속의 사상균이며, 적합예를 들면 탈라로마이세스 sp.B-422(FERM BP-08516)나 탈라로마이세스 플라버스를 사용할 수 있다. 이들 2개의 균에 있어서, 탄소원 및 질소원에서 유래하는 무기 성분의 양이 필요량을 만족하고 있다고 판단하기 위해서는, 액체 배양시의 포자 형성 개수가 약 108개 이상인 것이 포자 제조상 유효하다. 따라서, 액체 배양시의 포자 형성 개수가 약 108개를 하회하는 경우에는, 액체 배지에 무기 성분으로서 우선 염화칼슘, 필요에 따라 황산마그네슘, 필요에 따라 추가로 인산수소이칼륨을 첨가하는 것이 바람직하다.
이어서, 본 발명은 탄소원 및 질소원으로서 옥수수 침지수 또는 대두에서 유래하는 펩톤을 포함하고, 무기 성분으로서 적어도 염화칼슘을 포함하는 액체 배지를 사용하여 사상균을 배양함으로써 형성된 포자를 회수하고, 상기 포자를 식물체에 접촉시키는 식물 병해 방제 방법을 제공한다. 또한, "접촉"이란, 식물체로의 산포, 침지, 혼합, 도포 등의 방법을 포함하고, 상기 포자를 토양에 혼화, 탁주(濯注)한 후, 식물체 종자를 파종하여 "접촉"시키는 것도 가능하며, 좁게 해석되지 않는다.
이때, 상기 액체 배지에 무기 성분으로서, 과잉이 되지 않을 정도로 인산수소이칼륨, 황산마그네슘을 첨가할 수도 있다. 배지 중의 마그네슘염, 칼륨염의 필요량이 부족하지 않도록 보충하기 위해서이다. 이 경우, 황산마그네슘은 0.001 내지 10 ％, 바람직하게는 0.005 내지 5.0 ％ 포함되도록 첨가하는 것이 바람직하다. 또한, 인산수소이칼륨은 0.001 내지 0.3 ％, 바람직하게는 0.05 내지 0.2 ％ 포함되도록 첨가하는 것이 바람직하다.
또한, 상기 본 발명에 있어서 "옥수수 침지수(Corn Steep Liquor: 약칭 CSL)"란, 제당(옥수수 전분) 제조 과정에서 발생하는 유기성 부산물이다. "대두에서 유래하는 펩톤"이란, 대두 단백질을 단백질 분해 효소나 산으로 부분적으로 가수분해하여 얻어지는 것이며, 올리고펩티드, 아미노산을 주성분으로 한다. 이것은 모두 사상균의 배양에서 탄소원 및 질소원을 공급하는 유기 성분으로서 기능한다.
<발명의 효과>
본 발명의 방법에 따라 페니실리움속 사상균을 배양함으로써, 일반적인 액체 배양에서는 형성 곤란한 사상균 포자를 저렴하면서도 대량 공업적으로 생산할 수 있다. 본 방법에서 얻어진 포자는, 미생물 농약 및 생물 자재로서 유용하다. 또한, 동물성의 유기 성분을 일체 사용하지 않고 배양하기 때문에, BSE 문제도 없고, 안전하다.
<발명을 실시하기 위한 최선의 형태>
이하, 본 발명에 따른 실시 형태에 대하여 설명한다. 또한, 본 발명은 이하에 설명하는 실시 형태나 실시예에 의해 한정되지 않는다.
우선, 본 발명에서는, 사상균 포자의 액체 배양에 사용하는 탄소원 및 질소원으로서 옥수수 침지수 또는 대두에서 유래하는 펩톤을 사용한다. 경우에 따라서는, 이들을 모두 사용할 수도 있다. 대두 분말이나 기나수 분말 등도 사용할 수 있지만, 배양 후 포자와의 분리가 곤란해진다. 또한, 동물성 펩톤에서는 충분한 포자 형성량이 얻어지지 않는다.
"옥수수 침지수"는 특별히 한정되지 않지만, 예를 들면 쇼와 산교사 제조, 홋카이도 도교사 제조, 닛본 쇼꾸힌 가꼬사 제조, 오리엔탈 고보사 제조(솔리스 AST, 솔리스 095MPE 등) 등을 적절하게 사용할 수 있다. "대두에서 유래하는 펩톤"에 대해서도 특별히 한정되지 않지만, 예를 들면 닛본 세이야꾸사 제조 폴리펩톤-S 등을 사용할 수 있다.
옥수수 침지수나 대두에서 유래하는 펩톤의 바람직한 첨가량은 0.1 ％ 내지 10 ％, 바람직하게는 0.5 내지 10 ％, 보다 바람직하게는 1 내지 5 ％이다. 과잉량 첨가하면 불용물의 침전이 증가하고, 포자와의 분리가 곤란해진다. 본 발명에서는 옥수수 침지수나 대두에서 유래하는 펩톤의 첨가만으로 충분한 양의 포자 생산이 가능하지만, 통상 일반적으로 사용되는 탄소원을 추가로 첨가하는 것도 가능하다. 예를 들면 글루코오스, 수크로오스, 프룩토오스, 갈락토오스, 글리세롤, 전분, 사탕수수나 비트에서 유래하는 폐당밀 등을 추가로 첨가할 수도 있다. 이 중에서는 주로 저렴하다는 이유로부터, 폐당밀을 사용하는 것이 바람직하다. 예를 들면, 비트 당밀을 사용한 경우, 0.5 ％ 내지 10 ％를 첨가한 배지를 예시할 수 있다.
본 발명에서는 상기 탄소원 및 질소원 뿐만 아니라, 무기 성분으로서 탄산이나 인산 등의 염류, 칼륨, 나트륨, 철, 마그네슘 등의 금속염을 첨가할 수 있다. 특히, 페니실리움속균의 증식에 필요한 요소라는 이유로부터, 인산수소이칼륨 및 황산마그네슘이 바람직하다.
또한, 포자 형성을 촉진시키는 성분으로서 칼슘염을 첨가한다. 이 칼슘염으로서는, 주로 용해도의 면에서 염화칼슘이 바람직하다. 염화칼슘 농도로서는 0.2 내지 5.0 ％, 바람직하게는 0.4 내지 3.5 ％이다. 지나치게 염화칼슘을 첨가하면 불용물의 침전이 증가하고, 포자와의 분리가 곤란해진다. 이외에 다양한 계면활성제를 소포제로서 배지 중에 자유롭게 첨가할 수 있다.
배양은 배양 온도 약 20 ℃ 내지 40 ℃, 바람직하게는 25 ℃ 내지 35 ℃, 배지의 시초 pH는 4.0 내지 8.0, 바람직하게는 5.0 내지 7.0으로 하고, 액체 진탕 배양, 단지 발효기(jar fermenter)에 의한 통기 교반 배양 등에 의해 호기적 조건으로 행해진다.
배양 종료 후에는, 우선 배양물을 면보, 가제 또는 유리울 등으로 여과하여 균사를 제거한다. 이어서, 얻어진 여과액을 원심 분리하여, 포자를 분리한다. 물을 첨가하여 원심 분리하고, 세정을 행한다. 이들 공정을 수회 반복하여, 세정된 포자를 회수한다. 또한, 세정수에는 이온 교환수, 증류수, 각종 여과막을 사용하여 제조된 순수, 수돗물 등을 사용할 수 있다.
해당 포자는 감자 포도당 한천 배지(PDA) 등의 고체 배지로부터 얻어진 포자와 동등한 보존성, 방제 효과를 나타내기 때문에, 생물 농약, 생물 자재로서 사용할 수 있다.
또한, 본 발명에 있어서 배양 대상으로 할 수 있는 사상균은, 예를 들면 페니실리움속균 사상균이다. 이 페니실리움속균 사상균은 특별히 한정되지 않지만, 예를 들면 유페니실리움 sp.B-408(FERM BP-08517), 탈라로마이세스 sp.B-422(FERM BP-08516), 페니실리움 sp.B-453(FERM BP-08515), 탈라로마이세스 플라버스, 페니실리움 엑스판섬, 페니실리움 카멤베르티 등을 예시할 수 있다. 유페니실리움 sp.B-408(FERM BP-08517), 탈라로마이세스 sp.B-422(FERM BP-08516), 페니실리움 sp.B-453(FERM BP-08515), 탈라로마이세스 플라버스가 바람직하지만, 탈라로마이세스 sp.B-422(FERM BP-08516)나 탈라로마이세스 플라버스가 보다 바람직하다.
유페니실리움 sp.B-408(FERM BP-08517), 탈라로마이세스 sp.B-422(FERM BP-08516), 페니실리움 sp.B-453(FERM BP-08515)는 독립 행정 법인 산업 기술 종합 연구소 특허 생물 기탁 센터(우편 번호 305-8566 일본 이바라기껜 쯔꾸바시 히가시 1번지 1 중앙대 6)에 기탁되어 있다.
실시예 1
실시예 1에서는, 균포자의 배양에 있어서 액체 배지의 조성을 변화시켰을 때의 배양 포자수의 차이를 조사하였다. 또한, 실험예 1 내지 3이 본 발명에 따른 사상균 포자의 제조 방법이다.
(실험예 1)
옥수수 침지수(오리엔탈 고보사 제조) 3 ％, 인산수소이칼륨 0.1 ％, 황산마그네슘 7수화물 0.05 ％, 염화칼슘 2수화물 1 ％(pH 7.0)의 조성의 배지 50 ㎖를 300 ㎖ 3각 플라스크에 분주(分注)하여 멸균(120 ℃, 20분간)하였다. PDA 배지에서 전배양한 탈라로마이세스 sp.B-422(FERM BP-08516) 또는 탈라로마이세스 플라버스에 멸균수를 첨가하고, 포자 농도가 1×106 개/㎖가 되도록 제조하였다. 상기 액체 배지에 탈라로마이세스 sp.B-422(FERM BP-08516) 포자액 또는 탈라로마이세스 플라버스 포자액을 0.5 ㎖ 접종하고, 진탕 배양기(150 rpm, 25 ℃)에서 7일간 배양하였다. 배양 종료 후, 포자수를 혈구 계산반으로 측정하였다. 또한, 탈라로마이세스 플라버스는, 시판되어 있는 농약 제제로부터 분리하여 사용하였다.
(실험예 2)
옥수수 침지수(쇼와 산교사 제조) 3 ％, 비트 당밀(홋카이도 도교사 제조) 0.5 ％, 인산수소이칼륨 0.1 ％, 황산마그네슘 7수화물 0.05 ％, 염화칼슘 2수화물 1 ％(pH 7.0)의 조성의 배지 50 ㎖를 300 ㎖ 3각 플라스크에 분주하여 멸균(120 ℃, 20분간)하였다. 실험예 1에 준하여 조정한 탈라로마이세스 sp.B-422(FERM BP-08516) 포자액, 또는 탈라로마이세스 플라버스 포자액을 0.5 ㎖ 접종하고, 진탕 배양기(150 rpm, 25 ℃)에서 7일간 배양하였다. 배양 종료 후, 포자수를 혈구 계산반으로 측정하였다.
(실험예 3)
대두에서 유래하는 펩톤(폴리펩톤-S, 닛본 세이야꾸사 제조) 3 ％, 인산수소 이칼륨 0.1 ％, 황산마그네슘 7수화물 0.05 ％, 염화칼슘 2수화물 1 ％(pH 7.0)의 조성의 배지 50 ㎖를 300 ㎖ 3각 플라스크에 분주하여 멸균(120 ℃, 20분간)하였다. 실험예 1에 준하여 조정한 탈라로마이세스 sp.B-422(FERM BP-08516) 포자액 또는 탈라로마이세스 플라버스 포자액을 0.5 ㎖ 접종하고, 진탕 배양기(150 rpm, 25 ℃)에서 7일간 배양하였다. 배양 종료 후, 포자수를 혈구 계산반으로 측정하였다.
(비교 실험예 1)
비트 당밀(홋카이도 도교사 제조) 0.75 ％, 옥수수 침지수(쇼와 산교사 제조) 2 ％, 염화나트륨 1 ％, 황산칼슘 0.025 ％, 인산이수소칼륨 0.0006 ％, 황산마그네슘 7수화물 0.0005 ％, 황산구리 0.0001 ％, 황산철 0.0002 ％(pH 7.0)의 조성의 배지 50 ㎖를 300 ㎖ 3각 플라스크에 분주하여 멸균(120 ℃, 20분간)하였다. 실험예 1에 준하여 조정한 탈라로마이세스 sp.B-422(FERM BP-08516) 포자액 또는 탈라로마이세스 플라버스 포자액을 0.5 ㎖ 접종하고, 진탕 배양기(150 rpm, 25 ℃)에서 7일간 배양하였다. 배양 종료 후, 포자수를 혈구 계산반으로 측정하였다.
(비교 실험예 2)
갈락토오스 2 ％, 염화칼슘 2수화물 2.5 ％, 질산나트륨 0.6 ％, 인산이수소칼륨 0.15 ％, 황산마그네슘 7수화물 0.05 ％(pH 7.0)의 조성의 배지 50 ㎖를 300 ㎖ 3각 플라스크에 분주하여 멸균(120 ℃, 20분간)하였다. 실험예 1에 준하여 조정한 탈라로마이세스 sp.B-422(FERM BP-08516) 포자액 또는 탈라로마이세스 플라버스 포자액을 0.5 ㎖ 접종하고, 진탕 배양기(150 rpm, 25 ℃)에서 7일간 배양하였 다. 배양 종료 후, 포자수를 혈구 계산반으로 측정하였다.
(비교 실험예 3)
프룩토오스 1 ％, 탈지 분유 2 ％, 염화칼슘 2수화물 0.2 ％, 글루탐산 0.1 ％(pH 7.0)의 조성의 배지 50 ㎖를 300 ㎖ 3각 플라스크에 분주하여 멸균(120 ℃, 20분간)하였다. 실험예 1에 준하여 조정한 탈라로마이세스 sp.B-422(FERM BP-08516) 포자액 또는 탈라로마이세스 플라버스 포자액을 0.5 ㎖ 접종하고, 진탕 배양기(150 rpm, 25 ℃)에서 7일간 배양하였다. 배양 종료 후, 포자수를 혈구 계산반으로 측정하였다.
(비교 실험예 4)
포테이토 덱스트로오스 브로스(디프코(Difco)사 제조) 2.4 ％(pH 7.0)의 조성의 배지50 ㎖를 300 ㎖ 3각 플라스크에 분주하여 멸균(120 ℃, 20분간)하였다. 실험예 1에 준하여 조정한 탈라로마이세스 sp.B-422(FERM BP-08516) 포자액 또는 탈라로마이세스 플라버스 포자액을 0.5 ㎖ 접종하고, 진탕 배양기(150 rpm, 25 ℃)에서 7일간 배양하였다. 배양 종료 후, 포자수를 혈구 계산반으로 측정하였다.
(비교 실험예 5)
폴리펩톤(닛본 세이야꾸사 제조) 3 ％, 인산수소이칼륨 0.1 ％, 황산마그네슘 7수화물 0.05 ％, 염화칼슘 2수화물 1 ％(pH 7.0)의 조성의 배지 50 ㎖를 300 ㎖ 3각 플라스크에 분주하여 멸균(120 ℃, 20분간)하였다. 실험예 1에 준하여 조정한 탈라로마이세스 sp.B-422(FERM BP-08516) 포자액 또는 탈라로마이세스 플라버스 포자액을 0.5 ㎖ 접종하고, 진탕 배양기(150 rpm, 25 ℃)에서 7일간 배양하였 다. 배양 종료 후, 포자수를 혈구 계산반으로 측정하였다.
상기한 실험예 1 내지 3 및 비교 실험예 1 내지 5에서 얻어진 배양액 중의 포자 농도를 이하의 "표 1"에 나타낸다.
Figure 112008070772645-pct00001
상술한 "표 1"의 결과로부터 분명한 바와 같이, 어떠한 균에 대해서도 실험예 1 내지 3에서의 포자 생산량은, 비교 실험예 1 내지 5의 포자 생산량에 비해 현저히 많았다. 또한, 탈라로마이세스 sp.B-422(FERM BP-08516)를 사용했을 때의 비교 실험예 4, 5 및 탈라로마이세스 플라버스를 사용했을 때의 비교 실험예 1, 4, 5에서는, 포자 형성이 곤란하고, 균사상이었다(표 1 참조).
실시예 2
실시예 2에서는, 본 발명에 따른 사상균 포자의 제조 방법에 사용하는 최적의 염화칼슘의 농도를 조사하였다.
실시예 1의 실험예 1과 동일한 방법으로 염화칼슘 2수화물의 농도만을 0.1 ％, 0.5 ％, 3.0 ％로 변화시키고, 배양된 탈라로마이세스 sp.B-422(FERM BP-08516) 포자수를 조사하였다. 결과를 표 2에 나타낸다.
Figure 112008070772645-pct00002
실시예 3
실시예 3에서는, 본 발명에 따른 사상균 포자의 제조 방법에 있어서의 배양 시간별로 포자수의 추이를 조사하였다.
옥수수 침지수(닛본 쇼꾸힌 가꼬사 제조) 3 ％, 인산수소이칼륨 0.1 ％, 황산마그네슘 7수화물 0.05 ％, 염화칼슘 2수화물 1 ％(pH 7.0)의 조성의 배지 2 ℓ를 3 ℓ 단지 발효기에 분주하여 멸균(120 ℃, 60분간)하였다. 동 배지를 사용하여 5일간 3각 플라스크에서 전배양한 탈라로마이세스 sp.B-422(FERM BP-08516)의 배양액을 0.1 ％ 접종하고, 교반 속도 300 rpm, 온도 25 ℃, 통기량 0.5 vvm으로 배양을 행하였다. 시간 경과에 따라 샘플링하고, 포자수를 혈구 계산반으로 측정하였다. 배양 시간별로 포자수의 추이를 도면 대용 그래프인 도 1에 도시한다. 이 도 1에 도시한 결과로부터 알 수 있는 바와 같이, 배양 3일에 포자수는 거의 1×108 개/㎖에 달하였다.
실시예 4
실시예 4에서는 상기 실시예 3에서 사용한 배지를 사용하여, 포자의 생존성의 확인을 행하였다.
실시예 4에서 사용한 조성의 배지 50 ㎖를 300 ㎖ 3각 플라스크에 분주하여 멸균(120 ℃, 20분간)하였다. PDA 배지에서 전배양한 탈라로마이세스 sp.B-422(FERM BP-08516) 포자액을 0.5 ㎖ 접종하고, 진탕 배양기(150 rpm, 25 ℃)에서 7일간 배양하였다. 배양 종료 후, 배양액을 면보로 여과하여 균사를 제거하였다. 얻어진 여과액을 원심 분리하여, 포자를 모았다. 증류수를 첨가하여 원심 분리하고, 세정을 행하였다. 이것을 2회 반복하여 세정된 포자를 회수하고, 수돗물에 현미경하에 계산한 포자수가 약 2×108 개/㎖가 되도록 제조하였다.
비교를 위한 고체 배지에서 형성된 포자는, PDA 배지에서 25 ℃에서 10일간 배양한 것을 사용하였다. 샬레에 증류수를 첨가하여 붓으로 표면을 긁은 후, 액체 배양의 경우와 동일한 조작을 행하여 동일한 농도의 포자액을 조정하였다. 5 ℃, 20 ℃에서 유지하고, 3개월 후의 생균수를 측정하였다. 얻어진 결과를 다음의 "표 3"에 나타낸다.
Figure 112008070772645-pct00003
상술한 "표 3"에 표시된 결과로부터 알 수 있는 바와 같이, 액체 배양에서 얻어진 포자는 고체 배지에서 얻어진 포자와 동등한 생존성을 나타내었다.
실시예 5
실시예 5에서는, 탈라로마이세스 sp.B-422(FERM BP-08516) 액체 배양 포자액 및 고체 배양 포자액의 벼 키다리병에 대한 방제 효과를 검증하였다.
실시예 3과 동일하게 하여 얻어진 탈라로마이세스 sp.B-422(FERM BP-08516) 액체 배양 포자액 및 고체 배양 포자액을 5 ℃에서 1개월간 보존하였던 것을 본 시험에 사용하였다.
벼 키다리병 다발 포장(圃場)에서 자연 감염된 감염 종자(2001년산, 품종: 단은방주)를 제조한 탈라로마이세스 sp.B-422(FERMBP-08516) 포자액에 욕비 1:1로 24 시간 동안 침지하고, 이어서 15 ℃에서 4 일간 침종(욕비 1:1), 30 ℃에서 1일간 최아(催芽)를 행한 후, 시판된 육묘용 입상 배지(상품명: 구미아이 류조 바이찌, 가부시끼가이샤 쿠레하 제조)를 넣은 육묘용 상자(10×15 ㎝)에 상자 당 건조 벼 5 g 상당을 파종하였다(1구 3회 반복).
그 후, 출아기 중 30 ℃에서 3일간 출아시키고, 이후에는 유리 온실 내에서 육묘하였다. 파종 14일 후 각 시험구의 도장묘율을 조사하고, 방제가를 구하였다. 이 결과를 다음의 "표 4"에 나타내었다. 또한, 방제가는 다음의 수학식 1로 산출하였다.
방제가=(1-(처리구의 도장묘율÷무처리구의 도장묘율))×100
Figure 112008070772645-pct00004
상술한 "표 4"에 표시된 결과로부터 알 수 있는 바와 같이, 액체 배양에서 얻어진 포자는 고체 배지에서 얻어진 포자와 동등한 효과(방제가)를 나타내었다.
본 발명은, 식물 병해 방제를 위한 생물 농약이나 자재에 사용할 수 있는 사상균 포자를 제조하는 기술, 또는 식물 병해 기술로서 이용할 수 있다.
[도 1] 실시예 3의 결과를 도시한 도면이며, 배양 시간별로 포자수의 추이를 나타낸 도면 대용 그래프이다.

Claims (13)

  1. 탄소원 및 질소원으로서, 옥수수 침지수 및/또는 대두에서 유래하는 펩톤 1 내지 5 ％, 염화칼슘 0.75 내지 3.5 ％, 인산수소이칼륨 0.05 내지 0.2 ％ 및 황산마그네슘 0.005 내지 5.0 ％를 포함하는 액체 배지를 사용하여, 사상균 탈라로마이세스 에스피 B-422(Talaromyces sp.B-422(FERM BP-08516))을 배양하여 포자를 형성시키는 사상균 포자의 제조 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 액체 배지가 비트 당밀 0.5 내지 10 ％를 추가로 함유하는 것을 특징으로 하는 사상균 포자의 제조 방법.
  3. 탄소원 및 질소원으로서, 옥수수 침지수 1 내지 5 ％, 염화칼슘 0.75 내지 3.5 ％, 인산수소이칼륨 0.05 내지 0.2 ％ 및 황산마그네슘 0.005 내지 5.0 ％를 포함하는 액체 배지를 사용하여, 사상균 탈라로마이세스 플라버스(Talaromyces flavus)를 배양하여 포자를 형성시키는 사상균 포자의 제조 방법.
  4. 제3항에 있어서, 상기 액체 배지가 비트 당밀 0.5 내지 10 ％를 추가로 함유하는 것을 특징으로 하는 사상균 포자의 제조 방법.
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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4810151B2 (ja) * 2005-07-22 2011-11-09 出光興産株式会社 イネの育苗時期に発生する病害に対する防除剤
JP6384087B2 (ja) * 2014-03-31 2018-09-05 栗田工業株式会社 植物の栽培方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003065812A1 (en) 2002-02-05 2003-08-14 Council Of Scientific And Industrial Research Novel composition for early and profuse sporulation in fungi and a method thereof
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Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1087903C (zh) * 1996-01-19 2002-07-24 济南科贝尔生物工程有限公司 液体发酵法制备防治植物病毒的农药及其生产工艺
JP3350357B2 (ja) * 1996-06-10 2002-11-25 雪印乳業株式会社 糸状菌の培養方法
JP3601928B2 (ja) * 1997-02-21 2004-12-15 栃木県 炭そ病防除効果を示す新規微生物
JPH11276158A (ja) * 1998-03-26 1999-10-12 Snow Brand Milk Prod Co Ltd 糸状菌の培養方法
JP2000201669A (ja) * 1999-01-12 2000-07-25 Snow Brand Milk Prod Co Ltd 糸状菌の培養方法
JP2001039810A (ja) * 1999-07-30 2001-02-13 Zenichi Moromizato マンゴー炭そ病の防除法
CN1276713C (zh) * 2003-04-14 2006-09-27 浙江省农业科学院 一种微生物农药及其制备方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003065812A1 (en) 2002-02-05 2003-08-14 Council Of Scientific And Industrial Research Novel composition for early and profuse sporulation in fungi and a method thereof
JP2004035241A (ja) 2002-07-08 2004-02-05 Tonamientekku:Kk ベルトコンベヤの仕分け装置
JP2004231626A (ja) 2003-02-03 2004-08-19 Nippon Soda Co Ltd 植物病害防除剤組成物及び微生物

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