JP3350357B2 - 糸状菌の培養方法 - Google Patents
糸状菌の培養方法Info
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ペニシリウム(Pen
icillium) 属菌等の糸状菌を液体培養して効率的に胞子
を形成させる培養方法に関する。なお、この糸状菌の胞
子は、発酵食品等を製造する際に使用される。
icillium) 属菌等の糸状菌を液体培養して効率的に胞子
を形成させる培養方法に関する。なお、この糸状菌の胞
子は、発酵食品等を製造する際に使用される。
【０００２】
【従来の技術】従来より、糸状菌の胞子を形成させる方
法として、固体培養や液体培養が行われている。固体培
養では、米、大豆、小麦、ふすま等の穀類・雑穀類やそ
の加工品からなる固体培地を使用するが、固体培地を滅
菌するには長い時間を要すると共に無菌管理も難しく、
また、培養中に温度、水分、pH等の環境を制御すること
も難しいという問題がある。そこで、容易に滅菌がで
き、培養中に温度、水分、pH等の環境を制御し易い液体
培養により、糸状菌の胞子を形成させる方法が検討され
てきた。しかし、一般に糸状菌の液体培養を行う場合、
菌糸体は容易に形成させることができるが、胞子につい
ては形成させることが難しいという問題があった。
法として、固体培養や液体培養が行われている。固体培
養では、米、大豆、小麦、ふすま等の穀類・雑穀類やそ
の加工品からなる固体培地を使用するが、固体培地を滅
菌するには長い時間を要すると共に無菌管理も難しく、
また、培養中に温度、水分、pH等の環境を制御すること
も難しいという問題がある。そこで、容易に滅菌がで
き、培養中に温度、水分、pH等の環境を制御し易い液体
培養により、糸状菌の胞子を形成させる方法が検討され
てきた。しかし、一般に糸状菌の液体培養を行う場合、
菌糸体は容易に形成させることができるが、胞子につい
ては形成させることが難しいという問題があった。
【０００３】そして、このような糸状菌の液体培養にお
ける諸問題を解決するために、糸状菌の胞子形成に影響
を及ぼす様々な要因についての検討がなされてきてい
る。例えば、（１）液体培地中で安定した胞子形成能を
有する菌株の選択、（２）液体培地へ接種するシードの
形態や接種濃度、（３）液体培養中のpH制御、（４）液
体培養中の溶存酸素濃度の制御、（５）胞子形成に至適
な液体培養温度の検討、（６）胞子形成と液体培養形態
の検討、（７）通気撹拌条件の検討、（８）液体培養容
器の種類の検討、（９）液体培養容器に対する液体培地
量の検討、（10)液体培地成分の検討等である。
ける諸問題を解決するために、糸状菌の胞子形成に影響
を及ぼす様々な要因についての検討がなされてきてい
る。例えば、（１）液体培地中で安定した胞子形成能を
有する菌株の選択、（２）液体培地へ接種するシードの
形態や接種濃度、（３）液体培養中のpH制御、（４）液
体培養中の溶存酸素濃度の制御、（５）胞子形成に至適
な液体培養温度の検討、（６）胞子形成と液体培養形態
の検討、（７）通気撹拌条件の検討、（８）液体培養容
器の種類の検討、（９）液体培養容器に対する液体培地
量の検討、（10)液体培地成分の検討等である。
【０００４】これらの要因の中で最も重要なものの一つ
が液体培地成分である。液体培地成分の検討は、胞子形
成だけでなく発酵生産に際しても重要なものである。糸
状菌の胞子形成を目的とした液体培地については、例え
ば、液体培地中の窒素源として硝酸イオンを使用するこ
とが胞子形成に適していること(J. Gen. Microbiol.,vo
l.59, pp.31-45, 1969)、液体培地中のカルシウムイオ
ンが胞子形成を誘導すること、及び液体培地中へのカル
シウムイオン添加時期により胞子形成が影響を受けるこ
と(Trans. Br. Mycol. Soc., vol.80, pp.319-325, 198
3)、２％濃度の塩化カルシウムを液体培地に添加するこ
とにより胞子形成が著しく良好になること(J. Gen. Mic
robiol., vol.133, pp.3109-3119, 1987) 等が検討され
ている。
が液体培地成分である。液体培地成分の検討は、胞子形
成だけでなく発酵生産に際しても重要なものである。糸
状菌の胞子形成を目的とした液体培地については、例え
ば、液体培地中の窒素源として硝酸イオンを使用するこ
とが胞子形成に適していること(J. Gen. Microbiol.,vo
l.59, pp.31-45, 1969)、液体培地中のカルシウムイオ
ンが胞子形成を誘導すること、及び液体培地中へのカル
シウムイオン添加時期により胞子形成が影響を受けるこ
と(Trans. Br. Mycol. Soc., vol.80, pp.319-325, 198
3)、２％濃度の塩化カルシウムを液体培地に添加するこ
とにより胞子形成が著しく良好になること(J. Gen. Mic
robiol., vol.133, pp.3109-3119, 1987) 等が検討され
ている。
【０００５】なお、上記した糸状菌の胞子形成を目的と
した液体培地成分の検討を行うに際して使用された基本
的な液体培地成分は、いずれも、リン、カルシウム、カ
リウム、マグネシウム、ナトリウム、鉄等の無機塩類0.
03〜1.0 ％及び炭素源としてシュークロース又はグルコ
ース 0.5〜５％を含有するものであった。しかし、これ
らの液体培地を使用して無機塩類の種類や濃度を変更す
るだけでは、安定的に胞子形成を行うことはできない。
した液体培地成分の検討を行うに際して使用された基本
的な液体培地成分は、いずれも、リン、カルシウム、カ
リウム、マグネシウム、ナトリウム、鉄等の無機塩類0.
03〜1.0 ％及び炭素源としてシュークロース又はグルコ
ース 0.5〜５％を含有するものであった。しかし、これ
らの液体培地を使用して無機塩類の種類や濃度を変更す
るだけでは、安定的に胞子形成を行うことはできない。
【０００６】また、糸状菌の液体培養に使用する液体培
地成分中の炭素源について検討がなされた例としては、
クエン酸発酵における澱粉の影響 (醗酵工学, vol.69,
pp.471-475, 1991) やグルコン酸生産におけるグルコー
スの影響 (醗酵工学, vol.65, pp.501-506, 1987) 等が
知られているが、これらの検討は発酵生産に与える影響
に関するものであり、胞子形成を目的としたものではな
い。さらに、糸状菌の液体培養に使用する液体培地で
は、炭素源として、廃糖蜜、穀物粉、澱粉、グルコー
ス、シュークロース、ラクトース等が一般的に使用され
ている。
地成分中の炭素源について検討がなされた例としては、
クエン酸発酵における澱粉の影響 (醗酵工学, vol.69,
pp.471-475, 1991) やグルコン酸生産におけるグルコー
スの影響 (醗酵工学, vol.65, pp.501-506, 1987) 等が
知られているが、これらの検討は発酵生産に与える影響
に関するものであり、胞子形成を目的としたものではな
い。さらに、糸状菌の液体培養に使用する液体培地で
は、炭素源として、廃糖蜜、穀物粉、澱粉、グルコー
ス、シュークロース、ラクトース等が一般的に使用され
ている。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、糸状菌
を液体培養して胞子を形成させる際に使用する液体培地
成分について、鋭意研究を進めていたところ、液体培地
成分中の炭素源としてガラクトースやフラクトースを使
用することにより、効率的に糸状菌の胞子を形成させる
ことができることを見出し、本発明を完成するに至っ
た。したがって、本発明は、液体培地成分中の炭素源と
してガラクトース及び／又はフラクトースを使用するこ
とにより胞子を形成させる糸状菌の液体培養方法を提供
することを課題とする。
を液体培養して胞子を形成させる際に使用する液体培地
成分について、鋭意研究を進めていたところ、液体培地
成分中の炭素源としてガラクトースやフラクトースを使
用することにより、効率的に糸状菌の胞子を形成させる
ことができることを見出し、本発明を完成するに至っ
た。したがって、本発明は、液体培地成分中の炭素源と
してガラクトース及び／又はフラクトースを使用するこ
とにより胞子を形成させる糸状菌の液体培養方法を提供
することを課題とする。
【０００８】なお、本発明でいう糸状菌の胞子とは、胞
子及び複数個の胞子が内生した胞子のうを包含するもの
である。
子及び複数個の胞子が内生した胞子のうを包含するもの
である。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明では、糸状菌を液
体培養する際に使用する液体培地成分中の炭素源とし
て、ガラクトース及び／又はフラクトースを使用するこ
とにより、効率的に糸状菌の胞子を形成させる。
体培養する際に使用する液体培地成分中の炭素源とし
て、ガラクトース及び／又はフラクトースを使用するこ
とにより、効率的に糸状菌の胞子を形成させる。
【００１０】なお、本発明で使用する液体培地は、炭素
源としてガラクトースやフラクトースを使用すること以
外、通常の糸状菌を培養する際に使用する培地で良く、
例えば、培地成分中の炭素源として、ガラクトース及び
／又はフラクトースを 0.5〜５％とし、必要に応じて、
ペプトン等の窒素源を 0.5〜５％、リン、カルシウム、
カリウム、マグネシウム、ナトリウム等の無機塩類を0.
05〜５％、それぞれ添加したものを使用すれば良い。
源としてガラクトースやフラクトースを使用すること以
外、通常の糸状菌を培養する際に使用する培地で良く、
例えば、培地成分中の炭素源として、ガラクトース及び
／又はフラクトースを 0.5〜５％とし、必要に応じて、
ペプトン等の窒素源を 0.5〜５％、リン、カルシウム、
カリウム、マグネシウム、ナトリウム等の無機塩類を0.
05〜５％、それぞれ添加したものを使用すれば良い。
【００１１】
【発明の実施の形態】本発明では、ポテトデキストロー
ス寒天培地等の培地で純粋培養した糸状菌の胞子を 104
〜107 個/ml 程度、液体培地に接種する。この液体培地
は、上記したように、炭素源としてガラクトース及び／
又はフラクトースを 0.5〜５％とし、必要に応じて、ペ
プトン等の窒素源を 0.5〜５％、リン、カルシウム、カ
リウム、マグネシウム、ナトリウム等の無機塩類を0.05
〜５％、それぞれ添加したものを使用することができ
る。
ス寒天培地等の培地で純粋培養した糸状菌の胞子を 104
〜107 個/ml 程度、液体培地に接種する。この液体培地
は、上記したように、炭素源としてガラクトース及び／
又はフラクトースを 0.5〜５％とし、必要に応じて、ペ
プトン等の窒素源を 0.5〜５％、リン、カルシウム、カ
リウム、マグネシウム、ナトリウム等の無機塩類を0.05
〜５％、それぞれ添加したものを使用することができ
る。
【００１２】糸状菌の培養は、胞子形成に至適な培養温
度である18〜26℃で行うことが望ましく、旋回又は通気
撹拌して好気的条件下で培養することが望ましい。この
ようにして、培養３〜７日で 106〜108 個/ml の胞子が
得られる。なお、培養中に培養液のpHが変化するが、特
にpHを調整する必要はない。
度である18〜26℃で行うことが望ましく、旋回又は通気
撹拌して好気的条件下で培養することが望ましい。この
ようにして、培養３〜７日で 106〜108 個/ml の胞子が
得られる。なお、培養中に培養液のpHが変化するが、特
にpHを調整する必要はない。
【００１３】このようにして得られた糸状菌の胞子は、
酵素生産、物質生産、菌体生産、物質変換、麹や発酵食
品の製造等に種菌として使用することができる。以下に
実施例を示し、本発明を具体的に説明する。
酵素生産、物質生産、菌体生産、物質変換、麹や発酵食
品の製造等に種菌として使用することができる。以下に
実施例を示し、本発明を具体的に説明する。
【００１４】
【実施例１】表１に組成を示した液体培地成分を 100ml
容の振盪三角フラスコに注入して加熱滅菌し、糸状菌の
液体培養に使用した。
容の振盪三角フラスコに注入して加熱滅菌し、糸状菌の
液体培養に使用した。
【００１５】
【表１】 ──────────────────── ガラクトース 2.0 (％) 塩化カルシウム 2.5 硝酸ナトリウム 0.6 リン酸二水素カリウム 0.15 硫酸マグネシウム 0.05 ────────────────────
【００１６】上記の液体培地に、ポテトデキストロース
寒天培地で前培養した市販のペニシリウム・カマンバー
ティ(Penicillium camemberti, LACTO-LAB 社) を胞子
数が104〜105 個/ml となるよう接種し、18〜26℃で３
〜７日間、旋回振盪培養 (振盪回数；毎分 150回、振盪
幅；4.5cm)した。そして、培養終了後、胞子数をトーマ
の血球計算板で測定したところ、 9.0×106 個/ml であ
った。
寒天培地で前培養した市販のペニシリウム・カマンバー
ティ(Penicillium camemberti, LACTO-LAB 社) を胞子
数が104〜105 個/ml となるよう接種し、18〜26℃で３
〜７日間、旋回振盪培養 (振盪回数；毎分 150回、振盪
幅；4.5cm)した。そして、培養終了後、胞子数をトーマ
の血球計算板で測定したところ、 9.0×106 個/ml であ
った。
【００１７】
【実施例２】表２に組成を示した液体培地成分を 100ml
容の振盪三角フラスコに注入して加熱滅菌し、糸状菌の
液体培養に使用した。
容の振盪三角フラスコに注入して加熱滅菌し、糸状菌の
液体培養に使用した。
【００１８】
【表２】 ──────────────────── フラクトース 2.0 (％) 塩化カルシウム 2.5 硝酸ナトリウム 0.6 リン酸二水素カリウム 0.15 硫酸マグネシウム 0.05 ────────────────────
【００１９】上記の液体培地に、ポテトデキストロース
寒天培地で前培養した市販のペニシリウム・カマンバー
ティ(Penicillium camemberti, LACTO-LAB 社) を胞子
数が104〜105 個/ml となるよう接種し、18〜26℃で３
〜７日間、旋回振盪培養 (振盪回数；毎分 150回、振盪
幅；4.5cm)した。そして、培養終了後、胞子数をトーマ
の血球計算板で測定したところ、 7.1×106 個/ml であ
った。
寒天培地で前培養した市販のペニシリウム・カマンバー
ティ(Penicillium camemberti, LACTO-LAB 社) を胞子
数が104〜105 個/ml となるよう接種し、18〜26℃で３
〜７日間、旋回振盪培養 (振盪回数；毎分 150回、振盪
幅；4.5cm)した。そして、培養終了後、胞子数をトーマ
の血球計算板で測定したところ、 7.1×106 個/ml であ
った。
【００２０】
【比較例１】表３に組成を示した液体培地成分を 100ml
容の振盪三角フラスコに注入して加熱滅菌し、糸状菌の
液体培養に使用した。
容の振盪三角フラスコに注入して加熱滅菌し、糸状菌の
液体培養に使用した。
【００２１】
【表３】 ──────────────────── シュークロース 2.0 (％) 塩化カルシウム 2.5 硝酸ナトリウム 0.6 リン酸二水素カリウム 0.15 硫酸マグネシウム 0.05 ────────────────────
【００２２】上記の液体培地に、ポテトデキストロース
寒天培地で前培養した市販のペニシリウム・カマンバー
ティ(Penicillium camemberti, LACTO-LAB 社) を胞子
数が104〜105 個/ml となるよう接種し、18〜26℃で３
〜７日間、旋回振盪培養 (振盪回数；毎分 150回、振盪
幅；4.5cm)した。そして、培養終了後、胞子数をトーマ
の血球計算板で測定したところ、 4.3×105 個/ml であ
った。
寒天培地で前培養した市販のペニシリウム・カマンバー
ティ(Penicillium camemberti, LACTO-LAB 社) を胞子
数が104〜105 個/ml となるよう接種し、18〜26℃で３
〜７日間、旋回振盪培養 (振盪回数；毎分 150回、振盪
幅；4.5cm)した。そして、培養終了後、胞子数をトーマ
の血球計算板で測定したところ、 4.3×105 個/ml であ
った。
【００２３】
【実施例３】実施例１と同様に、ペニシリウム・ノテイ
タム(Penicillium notatum) IFO-4640 を培養し、胞子
数を測定したところ、 1.3×107 個/ml であった。
タム(Penicillium notatum) IFO-4640 を培養し、胞子
数を測定したところ、 1.3×107 個/ml であった。
【００２４】
【実施例４】実施例２と同様に、ペニシリウム・ノテイ
タム(Penicillium notatum) IFO-4640 を培養し、胞子
数を測定したところ、 9.5×106 個/ml であった。
タム(Penicillium notatum) IFO-4640 を培養し、胞子
数を測定したところ、 9.5×106 個/ml であった。
【００２５】
【比較例２】比較例１と同様に、ペニシリウム・ノテイ
タム(Penicillium notatum) IFO-4640 を培養し、胞子
数を測定したところ、 2.2×106 個/ml であった。
タム(Penicillium notatum) IFO-4640 を培養し、胞子
数を測定したところ、 2.2×106 個/ml であった。
【００２６】以上の結果から、糸状菌を液体培養して胞
子を形成させる際に使用する液体培地成分中の炭素源と
して、ガラクトースやフラクトースを使用することによ
り、胞子の形成を促進することができることが判る。
子を形成させる際に使用する液体培地成分中の炭素源と
して、ガラクトースやフラクトースを使用することによ
り、胞子の形成を促進することができることが判る。
【００２７】
【発明の効果】本発明の方法に従って糸状菌を培養する
ことにより、pH調整等の特別な培養管理を行うこと無
く、胞子の形成を促進することができる。そして、この
ような糸状菌の胞子は、発酵食品等を製造する際に有用
である。
ことにより、pH調整等の特別な培養管理を行うこと無
く、胞子の形成を促進することができる。そして、この
ような糸状菌の胞子は、発酵食品等を製造する際に有用
である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭62−151177（ＪＰ，Ａ) 特開 昭53−3581（ＪＰ，Ａ) 日本食品科学工学会第45回大会講演 集，1998年７月31日，ｐ．210 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12N 1/00 - 7/08 ＪＩＣＳＴファイル（ＪＯＩＳ) ＢＩＯＳＩＳ／ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (2)
- 【請求項１】 糸状菌を液体培養して胞子を形成させる
際に使用する液体培地成分中の炭素源として、ガラクト
ース及び／又はフラクトースを使用することを特徴とす
る糸状菌の培養方法。 - 【請求項２】 培養する糸状菌がペニシリウム(Penicil
lium) 属菌である請求項１記載の培養方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14699696A JP3350357B2 (ja) | 1996-06-10 | 1996-06-10 | 糸状菌の培養方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14699696A JP3350357B2 (ja) | 1996-06-10 | 1996-06-10 | 糸状菌の培養方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09322759A JPH09322759A (ja) | 1997-12-16 |
| JP3350357B2 true JP3350357B2 (ja) | 2002-11-25 |
Family
ID=15420245
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14699696A Expired - Lifetime JP3350357B2 (ja) | 1996-06-10 | 1996-06-10 | 糸状菌の培養方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3350357B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101415331B (zh) * | 2005-04-11 | 2012-09-05 | 株式会社吴羽 | 丝状菌孢子的制造方法及植物病害防治方法 |
-
1996
- 1996-06-10 JP JP14699696A patent/JP3350357B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 日本食品科学工学会第４５回大会講演集，１９９８年７月３１日，ｐ．２１０ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH09322759A (ja) | 1997-12-16 |
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