JPS63190806A - 野菜類の土壌病害の植物根面細菌による防除 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〈産業上の利用分野〉 本発明は微生物により野菜の土壌病害を抑制し健全な野
菜を栽培する方法及びそれに用いるシュ−トモナト科に
属する新規な微生物に関する。更に詳しくは、本発明は
、シュードモナス　フロレッセンス　ＳＣＢ−８００４
株、シュードモナスフロレッセンス　ＳＣＢ−１０７０
５株、シュードモナス　フロレッセンス　ＳＣＢ−１０
８０７株、キサントモナス　ｓｐ．ＳＣＢ−１２８０１
株、及びシュードモナス　ｓｐ．ＳＣＢ−１６７０１株
を野菜に付着・生育させることにより、ピシウム菌、リ
ゾクトニア菌に原因する野菜の土壌病害を抑制し、健全
な野菜を栽培する方法および上記の方法に用いる新規な
微生物であるシュードモナス　ｓｐ、ＳＣＢ　　１６７
０１株、キサントモナス　ｓｐ、ＳＣＢ　　１２８０１
株に関する。

〈従来技術および問題点〉 近年、野菜類の特産地化、長期連作が進行するのに相俟
って、野菜類の土壌病害による被害が甚大なものとなっ
ている。その土壌病害の大部分が、土壌中での病害菌の
異常増殖と、それらの感染・腐敗によることが明らかと
なってきた。そこで、この土壌病害を防除するため、数
多くの殺菌剤、土壌薫蒸剤などが開発され、用いられて
きた。それら農薬は、土壌中への散布・施用では充分な
効果を発揮できず、大量に施用した場合は、土壌中の有
益な微生物をも殺し、その結果、作物の栽培に適した土
壌の生態を撹乱する可能性があり、他方では薬剤耐性を
もった病害菌の出現を招いている。その他燻蒸剤は作業
者への影響が心配されている。化学農薬による病害防除
のこれらの欠点を補うため、病害菌に対し拮抗活性を有
する微生物を土壌中から分離し、植物体に直接、または
畑作上に添加処理し、作物の病害菌による感染、畑作土
壌内での病害菌の生育あるいは病害作用を抑制する、生
物防除の方法が開発されてきている。この方法は、殺菌
効果は緩慢である反面、長期間にわたって土壌生態を乱
さず、病害菌の異常増殖を抑え、病害菌による作物の被
害を抑制できる。

本件に関連した技術としては以下の例がある。

ピシウム病に適用した例では、豆の腐敗病にトリコデル
マ菌を使用した例（Ｌｏｃｋｅ、Ｊ、Ｃ，；　Ｐｈｙｔ
ｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ　（１９７６）　６９．５３６）
、綿の苗立枯病にシュードモナス・フロレッセンス菌ま
たはその抗菌物質ピオルテリンを使用した例（ｌｏｗｅ
ｌｌ。

Ｃ，Ｒ，ｅｔ、ａｌ、　；　Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏ
ｇｙ　　（１９８０）　７０．７１２−７１５Ｌ砂糖大
根の苗立枯病に根面微生物を使用した例（Ｏｓｂｕｒｎ
＋Ｒ，Ｍ、ｅｔ、ａｌ、　；Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏ
ｇｙ　（１９８３）１主、９６１）がある。またピシウ
ム菌あるいはりジフトニア国による病害に適用した例と
して、大根や豆について、トリコデルマ・ハマタムを使
用した例（Ｈａｒｍａｎ、　Ｇ、Ｅ、ｅｔ。

ａｌ、；ＰｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇＶ　　（１９８０
）　７０．　１１６”７−１１７２）、綿の苗立枯病に
グリオクラディウム・ウィレンスを適用した例（Ｈｏｗ
ｅｌｌＳＣ，Ｒ。

Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ（１９８２）　７２．４
９６−４９８）がある。いずれの研究成果も、生物防除
の有用性を示しているが、実際の圃場の使用では効果が
栽培作物の品種や土地、気候条件などによって一定しな
いなどの問題がある。またキュウリなどウリ科野菜の苗
立枯病への有効な例は示されていない。

〈問題解決の手段〉 本発明者らはこのような問題点を解決すべく、連作畑で
栽培される健全な野菜根面から（ｉ）ピシウム菌、リゾ
クトニア菌の生育、感染を抑制し く　ｉｉ　）種子からの発根部に付着・生育して、（ｉ
ｉｉ）畑作土壌中に拡散することなく根の表面で生育の
旺盛な （ｉｖ）微生物自体が作物に病害を与えないなどの性質
を有している菌株をビシラム菌、リゾクトニア菌を指標
病害菌としたキュウリの苗立枯病病害抑制活性を測定す
ることにより分離した。

分離した細菌．ＳＣＢ−８００４，ＳＣＢ−１０７０５
，ＳＣＢ−１０８０７，ＳＣＢ−１２８０１、及びＳＣ
Ｂ−１６７０１の５株の分類学的性質を表１に示す。

各菌株につき、パージエイズ・マニュアル・オプ・シス
テマティック　バクテリオロジ−（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　
Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔ
ｅｒｉｏｌｏｇｙ）の検索式に従い検索した結果．ＳＣ
Ｂ−８００４株、ＳＣＢ−１０７０５株およびＳＣＢ−
１０８０７株はいずれも、表１に示したようにダラム陰
性桿菌で運動性を有する好気性菌であり、しかもパラヒ
ドロキシベンゾエイトを細胞内に蓄積することはなく、
Ｋｉｎｇ’ｓ　Ｂ培地で蛍光色素を生産し、アルギニン
ジヒドロラーゼ活性があり、ゼラチンの液化能は陽性で
あり、ビオシアニンを生産しないなどの性ｔから、シュ
ードモナス　フロレッセンスと同定した。

ＳＣＢ−１２８０１株はダラム陰性桿菌で運動性を有す
る好気性細菌であり、黄色色素を細胞内に蓄積し、栄養
寒天培地上でムコイドを生成することから、キサントモ
ナス・カムペストリス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ　ｃａ
ｍｐｅｓｔｒｉｓ）及びキサントモナス・フラガリエ（
Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ　　ｆｒａｇａｒｉａｅ）が類
似菌として挙げられる。ところが、キサントモナス・カ
ムペストリスはフラクトースおよびトレハロースから酸
を生成するが．ＳＣＢ−１２８０１株は、それらから酸
を生成しない点で、また、キサトモナス・フラガリエは
エスクリン（Ｅｓｃａｌｉｎ）を加水分解せず、ミルク
の分解も行わないが．ＳＣＢ−１２８０１株はそれらを
分解する点で、両者とは異なる０以上のことから．ＳＣ
Ｂ−１２８０１株をキサントモナス属に属する新菌種と
認め、キサントモナス　ｓｐ．ＳＣＢ−１２８０１と命
名した。

ＳＣＢ−１６７０１株はダラム陰性桿菌で、運動性を有
する好気性菌であり、細胞内にバラヒドロキシベンゾエ
イトの蓄積が認められない菌であり、いずれの培地にお
いても蛍光性の色素の生成は認められず、さらにグルコ
ースを炭素源にして生育することから、シュードモナス
属のシュードモナス・スツテエリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎ
ａｓ　５ｔｕｔｚｅｒｉ）及びシュードモナス・メンド
シナ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｍｅｎｄｏｃｉｎａ　）
が類似菌として考えられる。ところが、シュードモナス
・スツテエリはゼラチンの液化は行なわないがＳＣＢ−
１６７０１株は液化する点で、また、シュードモナス・
メンドシナは細胞内に黄色または橙色の色素を含み、デ
ンプンを加水分解せず、ゼラチンを液化しないが．ＳＣ
Ｂ−１６７０１株は該色素を含まず、各々を加水分解、
液化する点で、両者と異なる。従って．ＳＣＢ−１６７
０１株は、シュードモナス・スッテエリ及びシュードモ
ナス・メンドシナとは菌学的に近いが異なる菌株であり
．ＳＣＢ−１６７０１株をシュードモナス属に属する新
菌種と認め、シュードモナス　ｓｐ、ＳＣＢ　　１６７
０１と命名した。

上記のシュードモナス　フロレッセンス　ＳＣＢ−８０
０４株、シュードモナス　フロレッセンス　ＳＣＢ−１
０７０５株、シュードモナス　フロレッセンス　ＳＣＢ
−１０８０７株、キサントモナス　ｓｐ．ＳＣＢ−１２
８０１株およびシュードモナス　ｓｐ、ＳＣ８１６７０
１株は各々工業技術院微生物工業技術研究所に受託番号
微工研菌寄第９１３７号、第９１３８号、第９１３９号
、第９１４０号、第９１４１号として受託されている。

これらの菌株の分離は以下の方法で行った。

健全な野菜から滅菌したハサミで切り離し、付着してい
る土を滅菌水中で振り落としたのち約１ＣＩ１１の長さ
に切断した細根を５本とり、５ｎ＋１の滅菌水中に入れ
、５分間サーモミキサーで激しく撹拌して、根に付着し
た菌を遊離した。得られた溶液を滅菌水で１００倍及び
１０，０００倍に希釈して、その１００μｌを栄養寒天
培地（Ｄｉｆｃｏ社製）上に拡げ、２７°Ｃ２〜４日間
培養しコロニーを形成させた。

得られたコロニーを、栄養寒天培地に塗布し、２７°Ｃ
２日間培養して生育した菌体をかき取った。

この方法で２３種類、１３０株の野菜根から約１８００
の細菌を得た。

このようにして分離した菌を培養し、予め表面滅菌した
キュウリ種子に塗布にした。このコートした種子を、ビ
シラム菌、リゾクトニア菌を含む病上に播種し、健全苗
率を測定して特に有効な５株を得た。

これらの菌株の培養には、通常行なわれる微生物の培養
に常用される炭素源、窒素源、無機物等を含む各種培地
を使用することができる。具体的には、炭素源としては
、グルコース、フラクトース、マルトース、ガラクトー
ス、リボース、サッカロース、澱粉、澱粉粉加水分解物
、１１密、廃Ｆ密などの糖類、麦、米などの天然炭水化
物、グリセロール、マンニトール、メタノール、エタノ
ールなどのアルコール類、グルコン酸ピルビン酸、酢酸
、クエン酸などの脂肪酸、グリシン、グルタミン酸、グ
ルタミン、アラニン、アスパラギンなとのアミノ酸類な
どの一般的な炭素源のなかから、使用する微生物の資化
性を考慮して、一種または二種以上を適宜選択して使用
すれば良い。

窒素源としては、肉エキス、ペプトン、酵母エキス、乾
燥酵母、大豆加水分解物、大豆粉、ミルクカゼイン、ガ
ザミノ酸、各種アミノ酸、コーンスィーブリカー、フィ
ツシュミールないし、その加水分解物、その他の動物、
植物、微生物の加水分解物などの有機窒素化合物、アン
モニア、塩化アンモニウム、リン酸アンモニウム、酢酸
アンモニウムなどのアンモニウム塩、硝酸ナトリウムな
どの硝酸塩、尿素など無機窒素化合物より使用する微生
物の資化性を考慮して、一種または、二種以上を適宜選
択して使用すれば良い。

さらに、無機塩として微量のマグネシウム、マンガン、
鉄、亜鉛、銅、ナトリウム、カルシウム、カリウムなど
のリン酸塩、塩酸塩、硫酸塩、炭酸塩、酢酸塩などの一
種または二種以上を適宜添加し、必要に応じて植物油、
界面活性剤などの消泡剤を添加しても良い。

これらの炭素源、窒素源、無機塩を組合せた培地に、寒
天などゲル化剤を添加して作製した固体培地も使用でき
る。

培養は、前記培地成分を含有する液体培地中で振盪培養
、通気撹拌培養、静置培養、連続培養などの通常の培養
方法、または固体培地上での静置培養法より、使用微生
物に適した培養法を選択して行なう。

培養条件は、培地の種類、培養法により適宜選択すれば
良く、当該菌株が増殖し、ピシウム菌やりジフトニア菌
による野菜の土壌病害を防除できル条件であれば、特に
制限はない、　１ｉｌｌ常は、２５〜３３℃が好ましく
、培養液ｐＨは、６．５〜８程度が好ましい。

上述のようにして得られた細菌５株、シュードモナス　
フロレフセンス　ＳＣＢ−８００４、シェードモナス　
フロレフセンス　ＳＣＢ−１０７０５、シュードモナス
　フロレフセンス　ＳＣＢ−１０８０７、キサントモナ
ス　ｓｐ．ＳＣＢ−１２８０１、及びシュードモナス　
ｓｐ．ＳＣＢ−１６７０１が適用される野菜の土壌病害
は、ピシウム国、リゾクトニア菌に原因するものであれ
ばよく、キュウリの苗立枯病の他、例えば、ビシラム菌
による病害の例として、ヘチマ等のウリ科野菜の苗立枯
病、リゾクトニア菌による病害の例として、トマト、ナ
ス等のナス科野菜の苗立枯病、イチゴのｍｇ病、ビシラ
ム菌あるいはりジフトニア菌による病害の例として、エ
ントウ、タバコ、ワタ、ホウレンソウ、テンサイ、ダリ
アの苗立枯病等に有効である。又、野菜の土壌病害抑制
の実施にあたり、上記の細菌５株を野菜に付着・生育さ
せる方法として、例えば、野菜の種子にコート処理する
方法、或いは、野菜の苗を菌培養液に浸漬する方法があ
げられる。

次に実施例により本発明を説明するが、これらにより本
発明の範囲が何ら制限されるものでないことは言うまで
もない。

実施例１ シェードモナス　ｓｐ、ＳＣＢ　　１６７０１、キサン
トモナス　ｓｐ．ＳＣＢ−１２８０１、シュードモナス
　フロレフセンス　ＳＣＢ−８００４、シュードモナス
　フロレフセンスＳＣＢ−１０７０５、シュードモナス
　フロレフセンス　ＳＣＢ−１０８０７の５菌株を各々
Ｋｉｎｇ’ｓ　Ｂ液体培地で２７°Ｃ４Ｂ時間墳養した
試験菌液に、等量の２％メチルセルロースを加えた。そ
の溶液２１を、予め１％アンチホルミンで表面滅菌した
キュウリ種子１２粒に加え、小容器内で乾燥した。Ｖ８
ジユースを加えたフスマ培地に病害菌ビシラム・ウルチ
マム（Ｐｙｔｈｉｕｎ＋　ｕｌｔｉｍｕｍ　）　、を植
菌し、２７°Ｃで２週間培養し充分乾燥して細砕した病
害菌をオートクレプ滅菌した畑土に表示濃度となるよう
に加え混合し、１５０ｍ１容ポツトに１１０ｍ１加えた
。

種子に付着させた細菌数は１粒当り１０’個以上である
。このコートした種子を上記ポット土壌に播種し、２７
°Ｃ温室で１２日間栽培した。苗立枯れのない健全菌数
を測定し、病害抑制活性を検定した。

（Ｋｉｎｇ’ｓ　　Ｂ培地の組成） グリセリン　　　　　　　　　１０ｍ１ペプトン　　　
　　　　　　　　２０ｇリン酸水素２カリンム　　　　
　１．５ｇ硫酸マグネシウム・７水和物　１．５ｇ蒸留
水　　　　　　　　　　　１．０ＯＯｎ＋１（ｐＨ７，
２） （ＶＢジュースを加えたフスマ培地） フスマ培地３００Ｉ！ｌｌにＶ８ジニース（キャンベル
社製）　　１５０ｍ１を加え、よく混ぜた後、１２１°
Ｃ２０分間高圧蒸気滅菌を行なう。

結果を表２に示す。

表２　キュウリ苗立枯病（ビシラム１３ＩＩＩ）に対す
る抑制活性健全苗率（％） 膚害ス濃度（ｇ／イ） ＳＣＢ８００４　　１００　８８　６９　５０ＳＣＢ　
１０７０５　　１００　９２　７８　６５ＳＣＢ　１０
８０７　　１００　６５　９２　５２ＳＣＢ　１２８０
１　　１００　６３　８０　７０ＳＣＢ　１６７０１　
　１００　２７　、５３　７５無処理　　１００　３８
　１５　１１ 表２に示されたように、上記の細菌でコート処理した場
合、無処理のものと比べて健全苗率が高いことから、該
細菌がいずれもビシラム・ウルチマム（Ｐｙｔｈｉｕｍ
　ｕｌｔｉｍｕｍ　）による苗立枯れ病害抑制活性を有
することが明らかとなった。

実施例２ 病害菌として、同じくキュウリ苗立枯病害菌で　　：あ
るリゾクトニア・ソラニ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ　５
ｏｌａｎｉ）を用いて実施例１と同様の実験を行なった
。

結果を表３に示す。

表３　キュウリ苗立枯病（リゾクトニア菌）に対する抑
制活性ＳＣＢ、　　１０７０５　　　１００　　　４６
　　　４７ＳＣＢ　　１０８０７　　　１００　　　４
７　　　５０ＳＣＢ　　１２８０１　　　１００　　　
１１　　　１９ＳＣＢ　　１６７０１　　　１００　　
　３３　　　３８無処理　　１００　５　２ 実施例１の場合と同様に、上記の細菌でコート処理した
場合、無処理のものと比べて健全苗率が高いことから、
該細菌がいずれもリゾクトニア・ソラニ（Ｒｈ１ｚｏｃ
ｔｏｎｉａ　５ｏｌａｎｉ　）による苗立枯れ何病害抑
制活性を有することが明らかとなった。

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. （１）シュードモナス　フロレッセンス　ＳＣＢ−８０
   ０４（￥Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ￥　ｆｌｕｏｒｅｓｃ
   ｅｎｓＳＣＢ−８００４）株（微工研菌寄第９１３７号
   ）、シュードモナス　フロレッセンス　ＳＣＢ−１０７
   ０５（￥Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ￥　ｆｌｕｏｒｅｓｃ
   ｅｎｓＳＣＢ−１０７０５）株（微工研菌寄第９１３８
   号）、シュードモナスフロレッセンス　ＳＣＢ−１０８
   ０７（￥Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ￥　ｆｌｕｏｒｅｓｃ
   ｅｎｓＳＣＢ−１０８０７）株（微工研菌寄第９１３９
   号）、キサントモナスｓｐ．ＳＣＢ−１２８０１（￥Ｘ
   ａｎｔｈｏｍｏｎａｓ￥　ｓｐ．ＳＣＢ−１２８０１株
   （微工研菌寄第９１４０号）およびシュードモナスｓｐ
   ．ＳＣＢ−１６７０１（￥Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ￥　
   ｓｐ．ＳＣＢ−１６７０１）株（微工研菌寄第９１４１
   号）を野菜に付着・生育させることにより、ピシウム菌
   、リゾクトニア菌に原因する野菜の土壌病害を抑制し、
   健全な野菜を栽培する方法
2. （２）ウリ科野菜の苗立枯病を抑制することを特徴とす
   る特許請求の範囲第１項記載の方法
3. （３）野菜に付着・生育させる方法として、野菜の種子
   にコート処理することを特徴とする特許請求の範囲第１
   項記載の方法
4. （４）野菜に付着・生育させる方法として、野菜の苗を
   菌培養液に浸漬することを特徴とする特許請求の範囲第
   １項記載の方法
5. （５）キサントモナス　ｓｐ．ＳＣＢ−１２８０１（￥
   Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ￥　ｓｐ．ＳＣＢ−１２８０１
   ）株（微工研菌寄第９１４０号）
6. （６）シュードモナス　ｓｐ．ＳＣＢ−１６７０１（￥
   Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ￥　ｓｐ．ＳＣＢ−１６７０１
   ）株（微工研菌寄第９１４１号）