KR101078765B1

KR101078765B1 - 구강세균의 증식에 의한 치주질환의 예방 및 치료를 위한 경구용 조성물

Info

Publication number: KR101078765B1
Application number: KR1020090057649A
Authority: KR
Inventors: 김중수; 손동호; 고석훈; 송재준; 최종현; 김용모; 최낙식; 한윤전; 장영효
Original assignee: 한국생명공학연구원
Priority date: 2009-06-26
Filing date: 2009-06-26
Publication date: 2011-11-01
Also published as: KR20110000241A

Abstract

본 발명은 구강세균의 증식에 의한 치주질환의 예방 및 치료를 위한 경구용 조성물에 관한 것으로, 폴리소르베이트(polysorbate), 소르비탄지방산에스테르(Sorbitan Esters of Fatty Acids), 계피향(cinnamon), 글리세린지방산에스테르(Glycerin Esters of Fatty Acids), 빌베리(Bilberry) 및 황금추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 단일 또는 2종 이상이 수용성 필름 기재 내부에 균일하게 분산된 경구용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 필름 조성물은 포피로모나스 긴기발리스(Porphyromonas gingivalis) 및/또는 프레보텔라 인터메디아(Prevotella intermedia)에 대해 뛰어난 항균활성을 나타내므로 상기 균의 증식에 의한 치주질환의 예방 및 치료에 유용하게 이용될 수 있다.

포피로모나스 긴기발리스(Porphyromonas gingivalis), 프레보텔라 인터메디아(Prevotella intermedia), 폴리소르베이트(polysorbate), 소르비탄지방산에스테르(Sorbitan Esters of Fatty Acids), 계피향(cinnamon), 글리세린지방산에스테르(Glycerin Esters of Fatty Acids), 빌베리(Bilberry), 황금추출물, 구강세균, 치주질환, 항균활성, 필름

Description

구강세균의 증식에 의한 치주질환의 예방 및 치료를 위한 경구용 조성물{Edible composition for prevention of periodontal disease by growth of bacteria in the mouth}

본 발명은 구강세균의 증식에 의한 치주질환의 예방 및 치료에 효과가 있는 경구용 조성물에 관한 것이다.

현대인은 더욱 건강한 삶을 살기 위한 열망중의 하나로 80세 이상까지도 건강한 치아를 갖기를 원할 뿐 아니라 대인관계에 장애가 되는 구취를 줄이기 위해서라도 식사 후 구강세정을 한다. 구강세정은 현대인의 식생활변화에 의한 구강 및 치아의 손상에 따라 발생하는 치아우식증, 구취, 치주염을 예방하기 위한 목적으로 행하여지고 있다. 현재 시중에 유통되고 있는 구강청정제는 항균효능을 갖는 성분인 불화나트륨, 염화벤제토늄, 폴리옥시에틸렌, 폴리옥시프로필렌 중합체, 염화세틸파이리디늄, 사카린나트륨, 안식향산나트륨 등을 이용하여 충치, 치주염 등을 예방치료 한다. 그러나 이러한 성분들을 삼킬 때에는 구토, 신경쇠약, 혼수상태, 설 사 등의 부작용을 나타내며 과량을 삼킬 경우 치명적인 손상이 야기된다. 그래서 7세 이하의 유아는 구강청정제의 사용을 제한하고 있다. 또한, 장기간 사용시에는 구강에 손상을 준다는 연구들이 발표되고 있다. 또한 치아우식증 예방을 위해 치면세균막 형성의 원인균 퇴치에는 페니실린이나 에리스로마이신(erythromycin)과 같은 항생제가 효과적인 역할을 하는 것으로 보고된 바 있지만, 장기간 사용시 항생제에 대한 내성이 발생하므로 임상에서 사용되지 못하고 있다. 구취는 후천적인 질병에 의해 발생하기도 하나, 일반적으로는 타액 중의 단백질, 음식물 찌꺼기 등이 구강 내에서 미생물에 의해 분해되어 생성된 아미노산이 탈회산 효소나 아미노 효소 등에 의해 분해되어 악취를 유발하는 물질을 생성함으로써 발생한다. 구취를 유발하는 대표적인 성분으로는 휘발성 황화물(Volatile Sulfide Compounds)을 들 수 있는데, 이들 휘발성 황화물에는 황화수소(Hydrogen sulfide, H2S), 메틸머캅탄(Methyl mercaptan, CH₃SH), 디메틸머캅탄[Dimethyl mercaptan, (CH₃)2S] 등이 있으며, 특히 메틸머캅탄은 구취 중 역겨운 냄새의 주성분이라고 알려져 있다.

이러한 치아우식증, 구취, 치주염을 예방하기 위하여 현재 사용되고 있는 많은 구강청정제는 구강세정이 이루어져야 하는 상황에 따라 때때로 사용이 어렵거나 불편할 수 있다. 자신의 집에서는 다양한 장치 및 조성물을 사용한 브러싱, 플러싱, 혀 세정 및 가글링 등 통상적인 구강세정이 가능하나 집이 아닌 곳, 즉, 욕실 설비가 불충분하고 이용가능하지 않거나 또는 비위생적인 곳에서 사용하는 것은 편리하지 않다. 공공장소에서의 브러싱, 플러싱, 혀 세정 및 가글링 행위가 많은 문 화권에서 사회적으로 받아들여지지는 않으므로, 눈에 덜 띄는 다양한 구강 세정 제품이 개발되었다. 이러한 제품에는 호흡, 구강청정 껌 및 로젠지 등이 있다. 하지만 이들 또한 항상 사회적으로 받아들여지지는 않는다. 예를 들면, 껌은 학교와 같은 특정한 기관 및 싱가포르와 같은 특정한 나라에서 명백히 금지된다. 껌 및 민트는 오랜 시간 사용을 요하며, 소비자에게 빨아들이거나 또는 씹는 행동을 하게 함으로 인해 주위를 산만하게 하는 등 바람직하지 않을 수 있다. 또한 마우스워시와 같은 마우스스프레이는 대체로 비교적 비싸고 복잡한 금속 캐니스터에 포장되어 있으며 사용 중 관이 막힐 수 있고 환경적으로 좋지 않다. 더욱이, 스프레이 방향을 맞추지 못하면 제품을 낭비하게 될 뿐만 아니라, 눈을 자극하며 얼굴을 끈적이게 하고 옷을 얼룩지게 할 수 있다. 따라서 구강 및 호흡 청정 제제를 눈에 띄지 않게 전달하기 위한 수단으로서 식용 필름이 제안되었다.

식용필름은 소지하기 간편하고 물 없이, 장소와 환경에 구해 없이 쉽게 복용할 수 있는 장점 때문에, 외국에서는 알약을 먹기 어려운 노인 환자나 시럽형 약물을 싫어하는 어린아이들에게 약물을 전달할 수 있는 좋은 매개체로서 관심을 받고 있다. 약물로부터 식품까지 다양한 물질을 식용필름에 제형화 할 수 있기 때문에 식용필름의 용도는 매우 다양하다. 감기약이나 비타민, 식욕감퇴제와 같은 생리활성물질을 식용필름을 통하여 투여할 수 있는 방법이 개발되고 있으며 애완동물에게 약물을 투여하기 위한 수단으로도 개발되고 있다.

이러한 식용필름을 적용한 사례로는 신속히 용해하는 경구용 소모 필름에 대해 기재된 대한민국 특허공개공보 제10-2001-0075347호, 경구용 소모 필름 조성물 에 대해 기재된 대한민국 특허공개공보 제10-2005-0048056호, 녹차로부터 추출한 폴리페놀을 함유한 가식성 필름의 제조방법에 대해 기재된 대한민국 특허공개공보 제10-2005-0055808호, 구취 억제 및 제거용 필름 및 이를 제조하기 위한 필름형성용 조성물에 대해 기재된 대한민국 특허공개공보 제10-2005-0029905호, 경구용 소모성 필름에 대해 기재된 대한민국 특허공개공보 제10-2008-0023873호 등이 있다.

식용필름은 앞에서 설명한 바와 같이 사용 용도에 있어서 큰 잠재력이 있는 제품으로서 구강질환(구취, 치주염 등) 원인 세균에 대한 항균활성이 좋은 조성물을 탐색, 개발하여 식용필름에 적용이 필요한 실정이다.

본 발명의 목적은 포피로모나스 긴기발리스Porphyromonas gingivalis) 및/또는 프레보텔라 인터메디아(Prevotella intermedia)에 대해 항균활성을 나타내는 경구용 필름 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 시나믹알데하이드(Cinnamic Aldehyde), 폴리소르베이트(polysorbate), 소르비탄지방산에스테르(Sorbitan Esters of Fatty Acids), 빌베리(Bilberry), 커큐민, 차카테킨, 프로폴리스 및 황금추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 단일 또는 2종 이상이 수용성 필름 기재 내부에 균일하게 분산된 것을 특징으로 하는 포피로모나스 긴기발리스(Porphyromonas gingivalis)의 증식에 의한 치주질환의 예방 및 치료를 위한 경구용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 구연산, 계피향(cinnamon), 시나믹알데하이드, 사과산, 글리세린지방산에스테르(Glycerin Esters of Fatty Acids), 소르비탄지방산에스테르 및 프로폴리스로 이루어진 군으로부터 선택된 단일 또는 2종 이상이 수용성 필름 기재 내부에 균일하게 분산된 것을 특징으로 하는 프레보텔라 인터메디아(Prevotella intermedia)의 증식에 의한 치주질환의 예방 및 치료를 위한 경구용 조성물을 제공한다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명은 시나믹알데하이드(Cinnamic Aldehyde), 폴리소르베이트(polysorbate), 소르비탄지방산에스테르(Sorbitan Esters of Fatty Acids), 빌베리(Bilberry), 커큐민, 차카테킨, 프로폴리스 및 황금추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 단일 또는 2종 이상이 수용성 필름 기재 내부에 균일하게 분산된 것을 특징으로 하는 포피로모나스 긴기발리스(Porphyromonas gingivalis)의 증식에 의한 치주질환의 예방 및 치료를 위한 경구용 조성물을 제공한다.

본 발명의 구체적인 실시예에서, 상기 사과산, 홍삼추출물, 커피가루, 계피향, 시나믹알데하이드, 레몬오일, 페퍼민트오일, 페퍼민트향, 구연산, 폴리소르베이트, 소르비탄지방산에스테르(Sorbitan Esters of Fatty Acids), 빌베리(Bilberry), 커큐민, 차카테킨, 프로폴리스 및 황금추출물은 포피로모나스 긴기발리스에 대해 항균활성을 나타내며, 포피로모나스 긴기발리스의 증식억제에 있어서 가장 억제율이 높은 것은 저해율이 50%일 때 폴리소르베이트, 저해율이 90%일 때 소르비탄지방산에스테르인 것으로 나타났으며, 시나믹알데하이드, 빌베리, 커큐민, 차카테킨, 프로폴리스 및 황금추출물 등도 IC₉₀이 0.5 이하로 상당히 높은 억제율을 나타내는 것으로 확인되었다(표 2 참조). 또한, 상기 물질들 중 폴리소르베이트와 소르비탄지방산에스테르는 이전에 포피로모나스 긴기발리스에 대해 항균활 성을 나타내는 것이 보고된다 없다. 이에, 포피로모나스 긴기발리스의 증식에 의한 치주질환의 예방 및 치료에 유용하게 이용될 수 있다.

본 발명의 경구용 조성물은 약학 조성물, 구강 세정용 조성물 및 식품 조성물을 포함하며, 구체적으로 필름, 치약, 구강양치용액, 연고제, 분무제, 드레싱용액, 도포제, 치실 또는 치주포대로 제형화될 수 있다. 상기 치주질환은 치주염이다.

폴리소르베이트(polysorbate)는 살균력이 강하며, 대부분 혼합되지 않는 액체가 고체를 균일하게 분산시키기 위한 계면활성제 및 유화제로 사용된다. FAO/WHO 전문위원회에서는 1일 허용 섭취량을 25 mg/kg으로 정하였으며, 화장품으로의 사용에는 규제가 없다. 상기 폴리소르베이트는 포피로모나스 긴기발리스에 대한 항균활성을 나타내는 것으로 보고된 바 없으며, IC₅₀ 및 IC₉₀ 값이 각각 0.00077 및 0.0345 ㎎/㎖로, 본 발명의 수용성 필름 기재 내부에 0.7×10^-4 내지 0.04 ㎎/㎖의 농도로 균일하게 분산되어 포함되는 것이 바람직하다.

소르비탄지방산에스테르(Sorbitan Esters of Fatty Acids)는 백색~황갈색의 액상 또는 분말 및 왁스 상태의 물질로 강력한 분산 안정성이 있으며, 단일 제품으로 사용되지만 주로 혼합 유화제로 사용되며 혼합했을 때 상승효과가 크고, 특별한 사용기준은 없다. 제조방법은 솔비톨을 150℃∼152℃로 가열, 탈수한 다음 160℃∼165℃로 유지하면 솔비탄(sorbitan)이 되는데 이것에 지방산을 반응시켜 에스테르화하여 제조한다. 빵, 케이크용 쇼트닝 제조에 소맥분의 0.5% 정도 혼합하면 빵의 느려지고 기름성분의 분산, 기포의 균일화, 용적의 증량 등의 품질을 향상시키고, 츄잉껌에 0.5~2% 가하면 기초제의 개량에 의해 향료의 분산을 일정하게 하고 치아에 부착하는 것을 방지한다. 그 밖에도 반죽의 혼합을 용이하게 하고, 팽창이 양호하여 노화가 갈라지는 것을 방지할 수 있다. 상기 소르비탄지방산에스테르는 포피로모나스 긴기발리스에 대한 항균활성을 나타내는 것으로 보고된 바 없으며, IC₅₀ 및 IC₉₀ 값이 각각 0.01569 및 0.0275 ㎎/㎖로, 본 발명의 수용성 필름 기재 내부에 0.015 내지 0.03 ㎎/㎖의 농도로 균일하게 분산되어 포함되는 것이 바람직하다.

빌베리(Bilberry; Vaccinium myrtillus L.)는 수세기 동안 식재료로 사용되었고, 맛 및 영양이 좋은 것으로 평가되었으며, 여전히 잼, 파이, 시럽 및 음료의 제조에 사용되고 있다. 약제학적으로 설사 및 치질의 치료에 사용되었고, 현저한 수렴효과를 가져서 입 및 점막의 염증 치료에 사용되었다. 상기 빌베리는 포피로모나스 긴기발리스에 대한 항균활성을 나타내는 것으로 보고된 바 없으며, IC₅₀ 및 IC₉₀ 값이 각각 0.0485 및 0.2462 ㎎/㎖로, 본 발명의 수용성 필름 기재 내부에 0.04 내지 0.3 ㎎/㎖의 농도로 균일하게 분산되어 포함되는 것이 바람직하다.

황금추출물은 황금(黃芩, Scutellariae Radix)을 주요성분으로 하고, 단맛효과를 위해 부수적으로 감초를 포함하여 추출된 것으로, 상기 황금은 꿀풀과에 속하며, 동아시아대륙 중국 북부지방 원산으로, 약용식물로 들여와 각처의 약초농가에서 재배하는 귀화식물이며 흔히 밭에 재배한다. 생약(生藥)에서 황금은 뿌리를 말 린 것으로, 봄 또는 가을에 뿌리를 캐서 겉껍질과 썩은 속을 긁어 버리고 물에 씻어 햇볕에 말려 약재로 사용한다. 뿌리가 노란색이어서 황금이라 한다. 상기 황금은 열, 화를 잘 내거나, 갈증, 기침 및 가래 등의 증상과 관련된 열을 동반하는 질환 및 설사, 가슴이 답답하거나, 배뇨가 고통스러운 것과 관련된 습도와 관련된 질환의 치료에 관련되어 있다. 상기 황금추출물은 포피로모나스 긴기발리스에 대한 항균활성을 나타내는 것으로 보고된 바 없으며, IC₅₀ 및 IC₉₀ 값이 각각 0.099 및 0.368 ㎎/㎖로, 본 발명의 수용성 필름 기재 내부에 0.09 내지 0.4 ㎎/㎖의 농도로 균일하게 분산되어 포함되는 것이 바람직하다.

또한, 본 발명은 구연산, 계피향(cinnamon), 시나믹알데하이드, 사과산, 글리세린지방산에스테르(Glycerin Esters of Fatty Acids), 소르비탄지방산에스테르 및 프로폴리스로 이루어진 군으로부터 선택된 단일 또는 2종 이상이 수용성 필름 기재 내부에 균일하게 분산된 것을 특징으로 하는 프레보텔라 인터메디아(Prevotella intermedia)의 증식에 의한 치주질환의 예방 및 치료를 위한 경구용 조성물을 제공한다.

본 발명의 구체적인 실시예에서, 상기 구연산, 계피향, 시나믹알데하이드, 사과산, 글리세린지방산에스테르, 소르비탄지방산에스테르 및 프로폴리스는 프레보텔라 인터메디아에 대해 항균활성을 나타내며, 프레보텔라 인터메디아의 증식억제에 있어서 가장 억제율이 높은 것은 저해율이 50%일 때 프로폴리스, 저해율이 90% 일 때 글리세린지방산에스테르인 것으로 나타났으며, 계피향, 시나믹알데하이드 및 소르비탄지방산에스테르 등도 IC₉₀이 0.5 이하로 상당히 높은 억제율을 나타내는 것으로 확인되었다(표 3 참조). 또한, 상기 물질들 중 계피향, 글리세린지방산에스테르 및 소르비탄지방산에스테르는 이전에 프레보텔라 인터메디아에 대해 항균활성을 나타내는 것이 보고된다 없다. 이에, 프레보텔라 인터메디아의 증식에 의한 치주질환의 예방 및 치료에 유용하게 이용될 수 있다.

본 발명의 경구용 조성물은 약학 조성물, 구강 세정용 조성물 및 식품 조성물을 포함하며, 구체적으로 필름, 치약, 구강양치용액, 연고제, 분무제, 드레싱용액, 도포제, 치실 또는 치주포대로 제형화될 수 있다. 상기 치주질환은 치은염이다.

계피(cinnamon)는 혈액순환을 촉진시켜 흉복부의 냉증을 제거하며 식욕을 증진시키고 소화를 촉진하며 사지마비 등에 사용한다. 위장의 경련성 통증을 억제하고 위장관의 운동을 촉진해 가스를 배출하고 흡수를 좋게 하기도 한다. 장내의 이상발효를 억제하는 방부효과도 있다. 약리작용으로 개선균 억제작용, 백색염주균병 억제작용, 건위작용, 타액 및 위액 분비촉진작용 등이 보고되었다. 상기 계피향은 프레보텔라 인터메디아에 대한 항균활성을 나타내는 것으로 보고된 바 없으며, IC₅₀ 및 IC₉₀ 값이 각각 0.168 및 0.285 ㎎/㎖로, 본 발명의 수용성 필름 기재 내부에 0.15 내지 0.3 ㎎/㎖의 농도로 균일하게 분산되어 포함되는 것이 바람직하다.

글리세린지방산에스테르(Glycerin Esters of Fatty Acids)는 지방산과 글리세린 또는 폴리글리세린의 에스터 및 유도체로 물에 녹지 않으나 알코올, 아세트산에틸, 에테르, 클로로폼과 같은 유기용매에 녹는다. 서로 잘 혼합되지 않는 액체나 고체를 액체에 균일하게 분산시키기 위해 사용되는 첨가물로 마가린, 우유음료, 아이스크림, 케이크, 비스킷, 빵 등에 유화제 외에 여러 가지 용도로 사용되고 있다. 상기 글리세린지방산에스테르는 프레보텔라 인터메디아에 대한 항균활성을 나타내는 것으로 보고된 바 없으며, IC₅₀ 및 IC₉₀ 값이 각각 0.03 및 0.072 ㎎/㎖로, 본 발명의 수용성 필름 기재 내부에 0.02 내지 0.08 ㎎/㎖의 농도로 균일하게 분산되어 포함되는 것이 바람직하다.

소르비탄지방산에스테르는 프레보텔라 인터메디아에 대한 항균활성을 나타내는 것으로 보고된 바 없으며, IC₅₀ 및 IC₉₀ 값이 각각 0.035 및 0.074 ㎎/㎖로, 본 발명의 수용성 필름 기재 내부에 0.03 내지 0.08 ㎎/㎖의 농도로 균일하게 분산되어 포함되는 것이 바람직하다.

본 발명의 필름 조성물은 포피로모나스 긴기발리스 및/또는 프레보텔라 인터메디아에 대해 뛰어난 항균활성을 나타내므로 상기 균의 증식에 의한 치주질환의 예방 및 치료에 유용하게 이용될 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 1> 사용균주 및 배양조건

본 실험에 사용한 균주는 치주염의 주 원인균인 포피로모나스 긴기발리스(Porphyromonas gingivalis) 및 치은염의 주 원인균인 프레보텔라 인터메디아(Prevotella intermedia)로 조선대학교 치과대학 구강생화학연구실로부터 분양받아 사용하였다.

포피로모나스 긴기발리스와 프레보텔라 인터메디아 배양 시 고체 배지에 도말하여 37℃, 혐기성 상태(CO₂ 5%, H₂ 5%, N₂ 90%)에서 4~5일간 배양한 후 단일 콜로니로 형성된 균주를 따서 액체 배지에 접종하여 37℃, 혐기성 상태에서 24시간 배양하였다. 고체 배지는 TSB(Tryptic soy broth) 30 g/ℓ, 효모 추출액(Yeast extract) 5 g/ℓ, 0.025% 레사주린(resazurin) 4 ㎖/ℓ, 박토 아가(Bacto-agar) 20 g/ℓ을 넣고 열을 가하여 완전히 녹인 후 시스테인(Cystein) HCL-H₂O 0.5 g/ℓ, 50 ㎎/㎖ 헤민 용액(Hemin solution) 10 ㎖/ℓ, 10 ㎎/㎖ 비타민 K1 0.2 ㎖/ℓ을 넣고 오토크레이브하여 약 45~46℃가 되었을 때, 면양 혈액(Sheep blood)을 50 ㎖/ℓ가 되도록 넣어 만들었다. 액체 배지는 상기 고체 배지를 만드는 방법과 같으나 아가 와 면양 혈액을 넣지않고 만들었다.

< 실시예 2> 구강미생물증식 억제 후보물질

(주)씨엘팜으로부터 표 1의 구강미생물증식억제 후보물질을 분양받았으며, 각 물질을 적정용매에 녹여 실험에 사용하였다.

	구강미생물증식억제 후보물질	농도
	구강미생물증식억제 후보물질	H ₂ O	50% EtOH	EtOH	DMSO
1	감초추출물		100 ㎎/㎖
2	계피향			500 ㎎/㎖
3	구연산	500 ㎎/㎖
4	글리세린지방산에스테르			500 ㎎/㎖
5	녹차추출물	500 ㎎/㎖
6	레몬오일			500 ㎎/㎖
7	레몬향			500 ㎎/㎖
8	비타민 C	200 ㎎/㎖
9	사과산	500 ㎎/㎖
10	소르비탄지방산에스테르			500 ㎎/㎖
11	솔잎추출물	500 ㎎/㎖
12	시나믹알데하이드			500 ㎎/㎖
13	유칼립투스			500 ㎎/㎖
14	체리추출물	500 ㎎/㎖
15	커피가루	200 ㎎/㎖
16	커피향	500 ㎎/㎖
17	페퍼민트오일			500 ㎎/㎖
18	페퍼민트향			500 ㎎/㎖
19	포도향			500 ㎎/㎖
20	폴리소르베이트	200 ㎎/㎖
21	한방컴플렉스(감초외 7종)	500 ㎎/㎖
22	홍삼추출물	500 ㎎/㎖
23	홍삼향			500 ㎎/㎖
24	회향추출물	500 ㎎/㎖
25	아세로라	200 ㎎/㎖
26	빌베리(Bilberry)	100 ㎎/㎖
27	차카테킨	100 ㎎/㎖
28	키토산	100 ㎎/㎖
29	프로폴리스	100 ㎎/㎖
30	황금추출물	100 ㎎/㎖
31	라즈베리(Razberry)		100 ㎎/㎖
32	복합황금추출물2		100 ㎎/㎖
33	히노키티올			100 ㎎/㎖
34	커큐민				100 ㎎/㎖
35	루테인				100 ㎎/㎖

< 실시예 3> 포피로모나스 긴기발리스에 대한 구강미생물억제물질의 항균효과 확인

분양받은 포피로모나스 긴기발리스를 TBS 액체 배지에서 3회 계대 배양하여 활성화한 후 실험에 사용하였다. 항균활성 평가는 액체배양법으로 저해력을 조사함으로써 수행하였다.

배양시킨 균체를 최종 균수가 600 ㎚에서 OD가 0.01이 되도록 희석하여 액체배지에 접종하였다. 이어서, 상기 표 1의 구강미생물증식억제 후보물질을 같은 농도로 첨가한 후, 37℃, 혐기성 상태에서 24시간 배양한 후, 액체배양액을 595 ㎚에서 흡광도를 측정하여 수학식 1에 의해 성장저해(%)를 계산하였다.

[S:배지+균주+시료의 흡광도, C1: 배지+균주의 흡광도, C2: 배지+시료의 흡광도, M: 배지의 흡광도]

항균활성을 검토한 결과, 표 2의 사과산을 포함하는 구강미생물증식억제 후모물질이 포피로모나스 긴기발리스에 대해 항균활성을 갖는 것을 확인하였다.

상기 선별된 항균활성이 확인된 후보물질들을 표 2의 '농도범위' 컬럼에 기재된 바와 같이 농도별로 첨가하여 항균활성을 검토함으로써, 표 2에 기재된 바와 같이 IC₅₀(50% 저해력을 가질 때의 농도)과 IC₉₀(90% 저해력을 가질 때의 농도)을 확인하였다.

구강미생물증식억제물질	MIC(㎎/㎖)
구강미생물증식억제물질	농도범위	IC50	IC90
사과산	≤0.25-1.25	0.485	1.094
홍삼추출물	≤1-5	2.151	4.512
커피가루	≤0.8-4	0.845	3.52
계피향	≤0.01-0.81	0.024	0.558
시나믹알데하이드	≤0.005-0.405	0.011	0.185
레몬오일	≤0.6-3	1.466	2.726
페퍼민트오일	≤0.2-1	0.413	0.734
페퍼민트향	≤0.2-1	0.493	0.982
구연산	≤0.2-1	0.439	0.97
폴리소르베이트	≤0.001 -0.081	0.00077	0.0345
소르비탄지방산에스테르	≤0.006-0.03	0.01569	0.0275
빌베리	≤0.06-0.3	0.0485	0.2462
커큐민	≤0.01-0.05	0.0228	0.0449
차카테킨	≤0.025-0.4	0.0436	0.222
프로폴리스	≤0.01-0.16	0.037	0.107
황금추출물	≤0.1-0.5	0.099	0.368

즉, 포피로모나스 긴기발리스의 증식억제에 있어서 가장 억제율이 높은 것은 저해율이 50%일 때 폴리소르베이트, 저해율이 90%일 때 소르비탄지방산에스테르인 것으로 나타났으며, 시나믹알데하이드, 빌베리, 커큐민, 차카테킨, 프로폴리스 및 황금추출물 등도 IC₉₀이 0.5 이하로 상당히 높은 억제율을 나타내는 것으로 확인되었다.

< 실시예 4> 프레보텔라 인터메디아에 대한 구강미생물억제물질의 항균효과 확인

분양받은 프레보텔라 인터메디아를 TBS 액체 배지에서 3회 계대 배양하여 활성화한 후 실험에 사용하였다. 항균활성 평가는 액체배양법으로 저해력을 조사함으로써 수행하였다.

배양시킨 균체를 최종 균수가 600 ㎚에서 OD가 0.01이 되도록 희석하여 액체배지에 접종하였다. 이어서, 상기 표 1의 구강미생물증식억제 후보물질을 일정 농도로 첨가한 후, 37℃, 혐기성 상태에서 24시간 배양한 후, 액체배양액을 595 ㎚에서 흡광도를 측정하여 수학식 1에 의해 성장저해(%)를 계산하였다.

항균활성을 검토한 결과, 표 3의 구연산을 포함하는 구강미생물증식억제 후모물질이 프레보텔라 인터메디아에 대해 항균활성을 갖는 것을 확인하였다.

상기 선별된 항균활성이 확인된 후보물질들을 표 3의 '농도범위' 컬럼에 기재된 바와 같이 농도별로 첨가하여 항균활성을 검토함으로써, 표 3에 기재된 바와 같이 IC₅₀(50% 저해력을 가질 때의 농도)과 IC₉₀(90% 저해력을 가질 때의 농도)을 확인하였다.

구강미생물증식억제물질	MIC(㎎/㎖)
구강미생물증식억제물질	Range	IC50	IC90
구연산	≤0.8-4	0.913	3.806
계피향	≤0.06-0.3	0.168	0.285
시나믹알데하이드	≤0.08-0.4	0.143	0.318
사과산	≤0.8-4	2.345	3.603
글리세린지방산에스테르	≤0.016-0.08	0.03	0.072
소르비탄지방산에스테르	≤0.02-0.1	0.035	0.074
프로폴리스	≤0.02-0.32	0.026	0.164

즉, 프레보텔라 인터메디아의 증식억제에 있어서 가장 억제율이 높은 것은 저해율이 50%일 때 프로폴리스, 저해율이 90%일 때 글리세린지방산에스테르인 것으로 나타났으며, 계피향, 시나믹알데하이드 및 소르비탄지방산에스테르 등도 IC₉₀이 0.5 이하로 상당히 높은 억제율을 나타내는 것으로 확인되었다.

이상과 같이, 표 2 및 표 3의 구강미생물억제 후보물질들은 항균활성을 나타내었고, 특히 계피향, 시나믹알데하이드, 글리세린지방산에스테르, 소르비탄지방산에스테르, 차카테킨, 폴르소르베이트, 프로폴리스, 빌베리, 커큐민 및 황금추출물 등은 상당히 낮은 농도에서도 포피로모나스 긴기발리스 또는 프레보텔라 인터메디아의 성장을 효과적으로 억제하는 것을 확인하였다. 이를 통하여 본 발명은 구강미생물억제물질이 치주염, 치은염 및 구취제거에 효과적으로 이용될 수 있다.

Claims

폴리소르베이트(polysorbate), 소르비탄지방산에스테르(Sorbitan Esters of Fatty Acids) 및 빌베리(Bilberry)로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나가 수용성 필름 기재 내부에 균일하게 분산된 것을 특징으로 하는 포피로모나스 긴기발리스(Porphyromonas gingivalis)의 증식에 의한 치주질환의 예방 및 치료를 위한 경구용 조성물.
제 1항에 있어서, 폴리소르베이트는 상기 수용성 필름 기재 내부에 0.7×10^-4 내지 0.04 ㎎/㎖의 농도로 균일하게 분산되어 포함되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서, 소르비탄지방산에스테르는 상기 수용성 필름 기재 내부에 0.015 내지 0.03 ㎎/㎖의 농도로 균일하게 분산되어 포함되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서, 빌베리는 상기 수용성 필름 기재 내부에 0.04 내지 0.3 ㎎/㎖의 농도로 균일하게 분산되어 포함되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서, 황금추출물, 시나믹알데하이드(Cinnamic Aldehyde), 커큐민, 차카테킨 및 프로폴리스로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서, 필름, 치약, 구강양치용액, 연고제, 분무제, 드레싱용액, 도포제, 치실 및 치주포대로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나로 제형화되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서, 치주질환은 치주염인 것을 특징으로 하는 조성물.
글리세린지방산에스테르(Glycerin Esters of Fatty Acids) 또는 소르비탄지방산에스테르이 수용성 필름 기재 내부에 균일하게 분산된 것을 특징으로 하는 프레보텔라 인터메디아(Prevotella intermedia)의 증식에 의한 치주질환의 예방 및 치료를 위한 경구용 조성물.
제 8항에 있어서, 계피향, 구연산, 시나믹알데하이드, 사과산 및 프로폴리스로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 8항에 있어서, 글리세린지방산에스테르는 상기 수용성 필름 기재 내부에 0.02 내지 0.08 ㎎/㎖의 농도로 균일하게 분산되어 포함되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 8항에 있어서, 소르비탄지방산에스테르는 상기 수용성 필름 기재 내부에 0.03 내지 0.08 ㎎/㎖의 농도로 균일하게 분산되어 포함되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 8항에 있어서, 필름, 치약, 구강양치용액, 연고제, 분무제, 드레싱용액, 도포제, 치실 및 치주포대로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나로 제형화되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 8항에 있어서, 치주질환은 치은염인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 5항에 있어서, 상기 황금추출물은 수용성 필름 기재 내부에 0.09 내지 0.4 ㎎/㎖의 농도로 균일하게 분산되어 포함되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 9항에 있어서, 상기 계피향은 수용성 필름 기재 내부에 0.15 내지 0.3 ㎎/㎖의 농도로 균일하게 분산되어 포함되는 것을 특징으로 하는 조성물.