KR101068259B1 - 헤테로사이클기에 고리－축합된 신규 베툴린산 유도체 - Google Patents

헤테로사이클기에 고리－축합된 신규 베툴린산 유도체 Download PDF

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Abstract

본원 발명은 종양 암 세포의 억제를 위해 유용하고, R은 C(=CH2)CH3 또는 CH(CH3)2이고; R2는 인접한 카르보닐기와 함께 카르복시산, 카르복시산 에스테르 또는 아미드 또는 치환된 아미드를 형성하고; R3과 R4 모두 독립적으로 수소 또는 알킬이 아니라는 조건으로 R3 또는 R4는 수소 또는 아릴이고 또는 R3과 R4는 함께 결합되어 할로겐, 시아노, 니트로, 알콕시, 아미노 또는 치환된 아민으로부터 선택되는 X기로 선택적으로 치환된 아릴 고리를 형성하고; Y는 N 또는 O이고; 및 Y가 O일 때 R1은 없고, 및 Y가 N일 때 R1은 수소, 알킬 또는 아릴 알킬인 식 (I)의 신규 베툴린산 유도체 관한 것이다.
베툴린산, 항암 활성, 헤테로사이클

Description

헤테로사이클기에 고리－축합된 신규 베툴린산 유도체{Novel betulinic acid derivatives a­ring­condensed to a heterocyclic group}
본원 발명은 종양 암 세포의 억제에서 유용한 활성을 나타내고 특히 베툴린 산에 비해 개선된 약물 동력학을 갖는, 하기 식 (I)의 신규 베툴린산 유도체에 관한 것이다.
또한, 본원 발명은 하기 식 (I)의 신규 베툴린산 유도체의 제조 방법에 관한 것이다.
또한, 본원 발명은 암 치료를 위한, 하기 식 (I)의 신규 베툴린산 유도체를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.
일반명으로는 베툴린산으로 알려져 있고 하기 화학식 (II)로 나타내어지는 화학 실재물(chemical entity)인 3β-히드록시-루프-20(29)-엔-28-오익산은 항암성, 항-염증성, 항바이러스성, 항살균성, 항말라리아성, 살정제성(spermicidal), 항균성, 항리슈만편모충성(antileshmanial), 구충성(antihelmentic) 및 섭식저해물질(antifeedant) 활성과 같은 유용한 생물학적 특성을 갖는 천연적으로 발생하는 펜타시클릭 트리터페노이드이다(Journal of Applied Biomedicine, 2003, 1, 7-12).
Figure 112007061712019-pct00001
그러나, 상기 언급된 모든 활성 중에서도, 베툴린산은 특히 항암 활성과 항 HIV 활성을 나타내는 것으로 발견되었다(Journal of Medicinal and Aromatic Plant Sciences, 2002, 24, 1031-1037).
이보다 빨리, 베툴린산은 흑색종에-특이적인 독성 물질이라고 생각되었으나, 최근 증거는 베툴린산이 다른 형태의 암세포에 대해 넓은 스펙트럼의 활성을 갖는 것을 보여주고 있다(IDrugs, 2004, 7(4), 359-373).
베툴린산은 중재 개발을 향한 빠른 접근 프로그램(Rapid Access to Intervention Development (RAID) programm)을 위해 미국 NCI에 의해 선택되었다. 베툴린산은 세포의 p-53 및 CD-95 상태에 관계없이 아포토시스의 유도를 통해 작용하는 것으로 보여진다. 소정의 실험 보고서는 베툴린산이 미토콘드리아 경로를 통해 작용하는 것을 보여주고 있다. 또한, 베툴린산의 약물 동력학과 조직상의 분포가 CD-1 마이스(mice)에서 연구되었으나, 베툴린산의 동력학적 작용을 발견하기 위해서는 상세한 조사가 요구된다(Biopharm . Drug Dispos ., 1999, 20, 379-383). 최근의 연구는 베툴린산이 독소루비신에 비해 더 낮은 효능을 갖고 있지만, 그러나 정상 세포에 대해서 최소한의 독성이 관찰되었으므로, 베툴린산이 종양 세포에 대해서는 선택적인 것처럼 보인다고 보여주고 있다(Cancer Letters, 2002, 175, 17-25). 이러한 발견 사실과 심지어 500 mg/Kg 신체 체중까지 투여량에서의 좋은 치료 지수(therapeutic index)는 베툴린산을 다양한 형태의 암의 임상 치료를 위한 매우 유망한 후보로 만들어왔다(Medicinal Research Reviews, 2004, 24(1), 90-114).
그 결과 유망한 베툴린산이 다양한 형태의 암 치료에 적용될 수 있으므로, 최근 과거의 연구는 더 강력한 화합물을 발견하려는 목적으로 베툴린산의 신규 유도체의 합성과 스크리닝으로 기울어지고 있다. 최근 진행된 것의 요약이 하기에서 제공된다:
처음에는, 즉 US 6,048,847; US 6,225,353; US 6,369,109;US 6,670,345; WO 98/51293; WO 98/51294; WO 02/16395; WO 02/091858; US 03/0181429; US 03/0186945;US 6,403,816에서와 같이, 식 (II)의 베툴린산 분자에서 2, 3, 20 및 28번 위치에서 치환체를 변형시키는 것이 강력한 선도 화합물을 얻기 위한 모든 연구 노력의 주제가 되었다.
최근에는, 베툴린산의 이속사졸 유도체가 세포독성 물질로 보고되고 있다(Bioorganic Medicinal Chemistry Letters, 2003, 13, 3137-3140).
비록 상기 언급된 모든 보고서가 총체적으로는 다양한 이유에 근거하여, 항종양 활성을 갖는 것으로 발견된 다수의 유도체와 함께 상당수의 베툴린산 유도체를 개시하고 있지만, 그러나 이들은 임상적으로는 특히 좋은 후보 물질이 아닐 뿐 만 아니라 최상의 약물 동력학 특성을 갖고 있지 않다.
상기에서 논의된 모든 베툴린산 유도체 중에서, 우리 실험실에서의 발견에 의하면 US 6,403,816에서 개시되어 있고 하기 식 (III)의 MJ-1098-RS으로 명시된 분자들 중 어느 하나는 다양한 암 세포주에서 좋은 생체외 세포 독성을 나타내었다. 또한, US 6,670,345는 또한 하기 식 (III)의 화합물이 무린 이종 이식 모델(murine xenograft model)에서 종양 감소를 보여주었음을 개시하고 있다.
Figure 112007061712019-pct00002
그러므로, 효능이 있을 뿐만 아니라, 임상적으로 안전하고 또한 더 좋은 약물 동력학 특징을 갖는 신규 베툴린산 유도체를 위한 필요성이 존재한다.
치료적으로 효능이 있을 뿐만 아니라 임상적으로 허용가능한 분자를 발견하고자 하는 우리의 노력에서, 우리는 상기 식 (II)의 베툴린산의 C-2번과 C-3번 위치에서 상기 C-2번과 C-3번 위치와 융합된(fused) 헤테로사이클에 의한 치환이 본원 발명의 근거를 형성하는 목표가 되는 특징임을 발견하였다.
본원 발명의 목적
본원 발명의 목적은 항종양 활성을 나타내는 신규 베툴린산 유도체를 제공하는 것이다.
본원 발명의 또 다른 목적은 치료적으로 효능이 있을 뿐만 아니라 개선된 약물 동력학을 갖는 신규 베툴린산 유도체를 제공하는 것이다.
본원 발명의 또 다른 목적은 신규 베툴린산 유도체의 제조 방법을 제공하는 것이다.
본원 발명의 또 다른 목적은 암 치료를 위한, 신규 베툴린산 유도체의 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
발명의 요약
본원 발명의 목적을 충족시키고자 하는 노력에서, 본원 발명자들은 상기 식 (II)의 베툴린산의 C-2번과 C-3번 위치에서 상기 C-2번과 C-3번 위치와 융합된(fused) 헤테로사이클로 치환되어 신규 분류의 베툴린산 유도체들이 수득될 수 있음을 발견하였다.
특히, 상기 식 (II)의 베툴린산의 C-2번과 C-3번 위치에서 고리 융합(ring fusion)에 의해 5원(five membered) 헤테로사이클로 치환되는 것은 유용한 항암 활성을 나타내는 하기 식 (I)로 나타내어지는 신규 화합물을 제공한다. 이런 유도체는 신규하고 지금까지 보고되지 않았다.
R은 C(=CH2)CH3 또는 CH(CH3)2이고; R2는 인접한 카르보닐기와 함께 카르복시산, 카르복시산 에스테르 또는 아미드 또는 치환된 아미드를 형성하고; R3과 R4 모두 독립적으로 수소 또는 알킬이 아니라는 조건에서 R3 또는 R4는 수소 또는 아릴이고 또는 R3과 R4는 함께 결합되어, 할로겐, 시아노, 니트로, 알콕시, 아미노 또는 치환된 아민으로부터 선택되는 X기로 선택적으로 치환된 아릴 고리를 형성하고; Y는 N 또는 O이고; 및 Y가 O일 때 R1은 부재(不在)하고, 및 Y가 N일 때 R1은 수소, 알킬 또는 아릴 알킬이고, 스크리닝된 그러한 상당수의 식 (I)의 화합물, 그의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물(solvate), 그들의 이성질체, 다형체(polymorph), N-옥사이드 또는 대사 산물 중에서, 명세서 전체를 통해 특히 화합물 5로 표시되는 화합물 하나는 상당한 효능을 나타내는 것으로 발견되었고 즉 상기 식 (II)의 베툴린산에 비해 상당히 개선된 항암 활성을 나타내는 것으로 발견되었고 상기 식 (III)의 MJ-1098-RS에 필적할 만한 것으로 발견되었다.
Figure 112007061712019-pct00003
화합물 5의 항암 활성과 베툴린산 (II)의 활성 및 MJ-1098-RS (III)의 항암 활성 비교가 표 1에서 제공된다.
표 1: 베툴린산 유도체(화합물 5)와 베툴린산 (II)과 MJ-1098-RS (III)의 생체외 세포 독성의 IC50 값 비교
<표 1>
Figure 112007061712019-pct00004
또한, 화합물 5는 표 2의 비교로부터 분명히 나타나는 바와 같이, 베툴린산 (II)에 비해 상당히 뛰어난 약물 동력학 특징을 나타내었고, MJ-1098-RS (III)의 약물 동력학 특징과 필적할 만한 것으로 발견되었다.
표 2: 화합물 5와 베툴린산 (II), 및 MJ-1098-RS (III)의 약물 동력학 특성 비교
<표 2>
Figure 112007061712019-pct00005
약물 동력학 파라미터는 베툴린산 유사체인 MJ-1098-RS (III)와 화합물 5가 베툴린산에 비해 더 좋은 전신성 노출(systemic exposure)(AUC0 -∞)을 제공하고 더 늦은 제거율(Kel)을 제공함을 보여주고 있다. 이것은 베툴린산에 비해 상당히 더 좋은 치료 반응을 생기게 할 것이다.
식 (I)의 화합물의 대표적인 염은 아세테이트, 아스코르베이트, 벤조에이트, 시트레이트, 옥살레이트, 스테아레이트, 트리플루오로아세테이트, 숙시네이트, 타르타레이트, 락테이트, 푸마레이트, 글루코네이트, 글루타메이트, 포스페이트/디포스페이트, 및 발레레이트를 포함하지만, 이들에 제한되는 것은 아니다. 다른 염으로는 리신 또는 아르기닌과 같은 아미노산의 Ca, Li, Mg, Na, 및 K 염, 할라이드 염; 구아니딘 염, 암모늄 염, 치환된 암모늄 염 또는 알루미늄 염을 포함한다.
상기 식 (I)의 화합물, 그의 염 등을 포함하는 약학적 조성물은 인간 암세포의 증식(multiplication)을 억제하는데 유용한 것으로 발견되었다. 특히, 약학적 조성물은 인간, 포유 동물 또는 암 또는 기타 종양으로 고통받고 있는 다른 개체들의 치료에 유용한 것으로 발견되었다.
상기 식 (I)에 포함되는 대표적인 화합물이 표 3에 요약되어 있다.
표 3: 식 (I)에 포함되는 대표적인 화합물
<표 3>
Figure 112007061712019-pct00006
Figure 112007061712019-pct00007
Figure 112007061712019-pct00008
이러한 개선된 세포 독성 프로파일과 약물 동력학 특성은 본원 발명의 식 (I)의 신규 베툴린산 유도체를 암 치료를 위한 상당히 뛰어난 후보 물질로 만들어 준다.
또 다른 실시 형태에서, 본원 발명은 종양 암 세포의 억제에서 유용한 활성을 나타내는 식 (I)의 신규 베툴린산 유도체를 제공한다.
또 다른 실시 형태에서, 본원 발명은 상기 식 (II)의 베툴린산에 비해 개선된 약물 동력학을 보여주고 상기 식 (III)의 MJ-1098-RS에 필적할 만한 약물 동력학을 보여주는, 상기 식 (II)의 화합물을 제공한다.
또 다른 실시 형태에서, 본원 발명은 상기 식 (I)의 신규 베툴린산 유도체의 제조 방법을 제공한다.
또 다른 실시 형태에서, 본원 발명은 암 치료를 위한 상기 식 (I)의 화합물을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
발명의 상세한 설명
상기 식 (I)의 화합물은 하기 식 (IV)의 베툴로닉산(betulonic acid) 또는 하기 식 (V)의 20,29-디히드로베툴로닉산(dihydrobetulonic acid)으로부터 제조될 수 있다.
Figure 112007061712019-pct00009
출발 화합물인 식(IV)와 (V)는 US 6,670,345에서 기술된 방법에 따라 제조될 수 있다.
표-3의 화합물 1 내지 10, 30과 31은 식 (IV)의 베툴로닉산 또는 식 (V)의 20,29-디히드로베툴로닉산과 적절한 히드라진 또는 그의 히드로클로라이드 염의 반응에 의해 제조될 수 있다. 반응은 염산 존재 또는 부재 하에서 및 예를 들면 에탄올, 메탄올 및 이소프로판올과 같은 적절한 용매 존재 하에서 및 0℃ 내지 100℃ 범위의 온도에서 수행될 수 있다.
표-3의 화합물 11 내지 12는 식 (IV)의 베툴로닉산 또는 식 (V)의 20,29-디히드로베툴로닉산과 적절한 O-페닐히드록시아민 또는 그의 히드로클로라이드 염의 반응에 의해 제조될 수 있다. 반응은 염산 존재 또는 부재 하에서 및 예를 들면 에탄올, 메탄올 및 이소프로판올과 같은 적절한 용매 존재 하에서 및 0℃ 내지 100℃ 범위의 온도에서 수행될 수 있다.
표-3의 화합물 13은 식 (IV)의 베툴로닉산과 적절한 아민 및 적절한 β-니트로스티렌의 반응에 의해 제조될 수 있다. 반응은 파라-톨루엔술폰산 존재 또는 부재 하에서 및 분자체(molecular sieve) 부재 또는 존재 하에서 및 예를 들면 에탄올, 메탄올 및 이소프로판올과 같은 적절한 용매 존재 하에서 및 0℃ 내지 100℃ 범위의 온도에서 수행될 수 있다.
표-3의 화합물 15 내지 19는 화합물 14와 적절한 할라이드의 반응에 의해 제조될 수 있다. 반응은 예를 들면 포타슘 카보네이트 또는 트리에틸아민과 같은 적절한 염기 존재 하에서 및 예를 들면 아세톤과 에테르와 같은 적절한 용매 존재 하에서 및 0℃ 내지 100℃ 범위의 온도에서 수행될 수 있다.
화합물 20은 화합물 14와 옥살릴 클로라이드의 반응에 의해 제조될 수 있다. 반응은 용매 존재 또는 부재 하에서 및 0℃ 내지 실온 범위의 온도에서 수행될 수 있다.
표-3의 화합물 21, 23, 25 내지 27 및 32 내지 35는 화합물 20과 적절한 아민의 반응에 의해 제조될 수 있다. 반응은 예를 들면 메틸렌 클로라이드, 클로로포름, 카본 테트라클로라이드, 아세톤 및 에테르와 같은 적절한 용매 존재 하에서 및 0 내지 100℃ 범위의 온도에서 수행될 수 있다.
화합물 22와 24는 각각, 화합물 21 및 23과 수성(aqueous) 소듐 히드록시드 용액의 반응에 의해 제조될 수 있다. 반응은 예를 들면 테트라히드로푸란, 에탄올 및 메탄올과 같은 적절한 용매 존재 하에서 및 0 내지 100℃ 범위의 온도에서 수행될 수 있다.
표-3의 화합물 28과 29는 각각 화합물 23 및 21과 벤질 브로마이드와 소듐 히드라지드의 반응에 의해 제조될 수 있다. 반응은 예를 들면 헥사메틸 포스포라미드와 같은 적절한 용매 존재 하에서 및 0℃ 내지 실온 범위의 온도에서 수행될 수 있다.
표-3의 화합물 1 내지 35의 제조 방법이 반응식 1, 2 및 3에서 요약된다.
<반응식 1>
Figure 112007061712019-pct00010
Figure 112007061712019-pct00011
<반응식 2>
Figure 112007061712019-pct00012
Figure 112007061712019-pct00013
<반응식 3>
Figure 112007061712019-pct00014
분명히 나타난 바와 같이, 본원 발명의 식 (I)의 베툴린산 유도체(화합물 1-13, 30과 31)는 반응식 1에서 보여지는 반응 순서에 의해 합성될 수 있는 반면에, 본원 발명의 식 (I)의 몇몇 베툴린산 유도체(화합물 15-29 및 32-35)는 반응식 2와 3에서 보여지는 반응 순서에 의해 합성될 수 있다.
이들 유도체의 약학적으로 허용가능한 염, 약학적으로 허용가능한 용매화물, 이들의 이성질체, 다형체, N-옥사이드 또는 대사산물은 당해 분야에서 알려진 방법에 의해 제조될 수 있다.
식 (I)의 화합물의 합성은 하기 실시예에서 추가로 기술되지만, 이들을 본원 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석하여서는 안 된다.
베툴린산 (II)은 인도의 다부르 파마 엘티디 칼리아니(Dabur Pharma Ltd. Kalyani), WB로부터 구입할 수 있다. 용매와 반응 시약은 Aldrich, Lancaster, Acros, Rankem, Qualigens Fine Chemicals, Spectrochem, SD Fine Chem 및 Merck와 같은 다양한 회사로부터 구입하였고, 공급받은 대로 사용하였다. 모든 베툴린산 유도체를 흡착제로서 실리카 겔 (100-200 메쉬)을 사용하고 용리액으로서 디클로로메탄/메탄올 또는 헥산/에틸 아세테이트 혼합을 사용하는 컬럼 크로마토그래피에서 정제하였다. 모든 TLC 결과 (Rf 값)를 실리카 겔 60 F254로 코팅된 알루미늄 시트 (Merck)로 결정하였다. 핵 자기 공명 (NMR) 스펙트럼을 내부 표준 물질로 테트라메틸실란 (TMS)을 사용하는 브룩커 300MHz 기계를 사용하여 기록하였다. 질량 스펙트럼을 Micromass Quattro microTM 기계로 기록하였다. 베툴린산 유도체의 순도를 구배 시스템을 사용하는 시마쥬(Shimadzu) HPLC LC-2010 C HT 기계에서 결정하였다. 녹는 점을 열 과학 녹는 점 측정 장치(thermal scientific melting point apparatus) MP-I에 있는 모세관으로 수득하였고 보정하지 않았다.
하기 줄임말을 본원 발명에서 사용한다: pTSA(파라 톨루엔술폰산), DCM(디클로로메탄 또는 메틸렌 클로라이드), CHCl3(클로로포름), EtOAc(에틸 아세테이트), MeOH(메탄올), EtOH(에탄올), THF(테트라히드로푸란), NaOH(소듐 히드록시드), Na2CO3(소듐 카보네이트), K2CO3(포타슘 카보네이트) 및 Na2SO4(소듐 술페이트).
출발 물질인 베툴로닉산 (IV)과 20,29-디히드로베툴로닉산 (V)을 US 6,670,345에서 개시된 바와 같이 각각 베툴린산과 20,29-디히드로베툴린산으로부터 합성하였다.
실시예 -1
식 I에서 기술된 화합물 합성을 위한 일반적인 방법(화합물 1-12, 30과 31):
베툴로닉산 (IV) 또는 20,29-디히드로베툴로닉산 (V)(1 당량)과 적절한 히드라진 또는 그의 히드로클로라이드(1.1 당량)를 용매 에탄올에 녹인다. 얻은 용액에, 3N HCl 2-3 방울을 첨가하고, 6-9시간 동안 환류시켰다. 그런 다음 용매를 진공 하에서 제거하였고, 얻은 잔여물을 물과 EtOAc 또는 DCM으로 추출하였다. 유기층을 분리하였고, Na2SO4로 물을 제거하였고, 그런 다음 용매를 증발시켜 정제되지 않은 생성물을 얻었다. 생성물을 용리액으로 DCM 또는 DCM/MeOH 또는 EtOAc/헥산을 사용하는 컬럼으로 정제하였다.
실시예 -2
식 I에서 기술된 화합물 합성을 위한 일반적인 방법(화합물 13):
베툴로닉산 (IV) 또는 20,29-디히드로베툴로닉산 (V)(1 당량)을 용매 에탄올에 넣은 용액에, 아민 (1.1 당량), 파라-톨루엔술폰산 모노히드레이트(촉매량)와 분자체(4Å)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 2 시간 동안 환류시켰다. 반응 혼합물을 냉각시켰고 그런 다음 적절한 β-니트로스티렌(1 당량)을 첨가하였다. 얻은 혼합물을 7시간 더 환류시켰다. 그런 다음 냉각시켰고 여과하였다. 용매를 진공 하에서 증발시켰고, 그렇게 얻은 잔여물을 헥산으로 수세하였다. 생성물을 용리액으로서 DCM 또는 DCM/MeOH 또는 EtOAc/헥산을 사용하는 컬럼에 의해 정제하였다.
실시예 -3
식 I에서 기술된 화합물 합성을 위한 일반적인 방법(화합물 15-19):
화합물 14 (1 당량)와 K2CO3 (1.5 당량)를 용매 아세톤에 넣은 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 적절한 브로마이드 또는 클로라이드 (2.5 당량)를 첨가하였고, 얻은 혼합물을 밤새 교반하였다. 브로마이드 또는 클로라이드 (1.5 당량)를 다시 첨가하였고, 24 시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 진공에서 증발시켰고, 그렇게 얻은 잔여물을 물과 헥산으로 수세하였다. 그런 다음 DCM으로 수세하였다. 유기층을 합하였고, Na2SO4로 물을 제거하였고 그런 다음 용매를 증발시켜 정제되지 않은 생성물을 얻었다. 생성물을 용리액으로 DCM 또는 DCM/MeOH 또는 EtOAc/헥산을 사용하는 컬럼에 의해 정제하였다.
실시예 -4
베툴로노일(betulonoyl) 클로라이드 유도체의 합성을 위한 일반적인 방법(화합물 20):
화합물 14 (1 당량)를 DCM에 녹였고 옥살릴 클로라이드 (1.5 당량)를 첨가하였고 실온에서 6 시간 동안 교반하였다. 그런 다음, 용매를 증발시켰고; 물로 수세하였고, 수성 Na2CO3 용액으로 처리하였고 DCM으로 추출하였다. 합한 유기층에서 Na2SO4로 물을 제거하였고 그런 다음 진공에서 증류시켜 베툴로노일 클로라이드 유도체 20을 얻었고, 정제하지 않고 다음 단계에서 사용하였다.
실시예 -5
식 I에서 기술된 화합물 합성을 위한 일반적인 방법(화합물 21-27 및 32 내지 35):
DCM에 넣은 적절한 베툴로노일 클로라이드 유도체 20 (1 당량)의 용액에 아민 (2 당량)을 첨가하였고, 실온에서 밤새 교반하였다. 그런 다음, 용매를 진공에서 증발시켰고, 그렇게 얻은 잔여물을 물과 헥산으로 수세하였다. 그런 다음 DCM으로 추출하였다. 유기층을 합하였고, Na2SO4로 물을 제거하였고, 그런 다음 용매를 증발시켜 정제되지 않은 생성물을 얻었다. 생성물을 용리액으로 DCM 또는 DCM/ MeOH 또는 EtOAc/헥산을 사용하는 컬럼에 의해 정제하였다.
화합물 21과 23의 가수분해를 용매 THF/MeOH (1:1)에서 4N 수성 NaOH 용액을 사용하여 수행하여 각각 화합물 22와 24를 얻었다.
실시예 -6
식 I에서 기술된 화합물 합성을 위한 일반적인 방법(화합물 28-29):
소듐 히드라이드 (NaH)(1.1 당량)를 헥사메틸포스포라미드 (HMPA)에 넣은 화합물 23 또는 21 용액에 0℃에서 및 질소 분위기 하에서 첨가하였고, 10분 동안 교반하였다. 실온에서 5시간 더 교반하였다. 벤질 브로마이드 (1 당량)를 첨가하였고, 주변 온도에서 밤새 교반하였다. 그런 다음, 물로 희석하였고 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 합하였고, Na2SO4로 물을 제거하였고, 그런 다음 용매를 증발시켜 정제되지 않은 생성물을 얻었다. 수득한 생성물을 용리액으로 DCM을 사용하는 컬럼에 의해 정제하였다.
표-3에서 보여지는 식 (I)의 다양한 화합물의 스펙트럼 특징을 하기에서 제공한다:
2,3- 디데히드로인돌로[2',3':2,3]베툴린산 (1):
R f 0.72 (2％ MeOH/DCM); 1HNMR (CDCl3) δ 값 7.69 (bs, 1H), 7.39-7.25 (m, 2H), 7.12-7.02 (m, 2H), 4.7 (bs, 1H), 4.64 (bs, 1H), 3.1-2.9 (m, 1H), 2.83 (d, 1H, J = 14.9 Hz), 2.28-1.98 (m, 4H), 1.82-1.38 (m, 20H), 1.27 (s, 3H), 1.16 (s, 3H), 1.03 (s, 6H), 0.86 (s, 3H); MS m/z (％ 상대적 강도) 528 (100); HPLC 순도 97.48％.
2,3- 디데히드로 -20,29- 디히드로인돌로[2',3':2,3]베툴린산 (2):
R f 0.59 (2％ MeOH/CHCl3); 1HNMR (CDCl3) δ 값 7.68 (bs, 1H), 7.42-7.40 (m, 1H), 7.29-7.24 (m, 1H), 7.13-7.03 (m, 2H), 2.84 (d, 1H, J = 14.9 Hz), 2.3-1.98 (m, 3H), 1.9-1.24 (m, 23H), 1.15 (s, 3H), 1.02-0.85 (m, 12H), 0.78 (d, 3H, J= 6.7 Hz); MS m/z (％ 상대적 강도) 529 (100); HPLC 순도 96.87％.
2,3- 디데히드로 -1'- 메틸인돌로[2',3':2,3]베툴린산 (3):
R f 0.88 (2％ MeOH/DCM); 1HNMR (CDCl3) δ 값 7.45-7.42 (m, 1H), 7.29- 7.17 (m, 2H), 7.12-7.07 (m, 1H), 4.83 (bs, 1H), 4.69 (bs, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.2-3.05 (m, 1H), 2.92 (d, 1H, J = 14.9 Hz), 2.45-2.0 (m, 4H), 1.98-1.44 (m, 23H), 1.31 (s, 3H), 1.08 (s, 6H), 0.91 (s, 3H). MS m/z (％ 상대적 강도) 540 (100); HPLC 순도 94.94％.
2,3- 디데히드로 -20,29- 디히드로 -1'- 메틸인돌로[2',3':2,3]베툴린산 (4):
R f 0.83 (2％ MeOH/DCM); 1HNMR (CDCl3) δ 값 7.45-7.43 (m, 1H), 7.28- 7.16 (m, 2H), 7.11-7.06 (m, 1H), 3.85 (s, 3H), 2.9 (d, 1H, J = 14.9 Hz), 2.45-2.15 (m, 3H), 2.14-1.20 (m, 26H), 1.08-0.83 (m, 12H), 0.80 (d, 3H, J = 6.6 Hz); MS m/z (％ 상대적 강도) 542 (100); HPLC 순도 89.29％.
5'- 클로로 -2,3- 디데히드로인돌로[2',3':2,3]베툴린산 (5):
R f 0.62 (2％ MeOH/DCM); 1HNMR (CDCl3) δ 값 7.73 (bs, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.07-7.06 (m, 1H), 7.04-7.03 (m, 1H), 4.78 (bs, 1H), 4.65 (bs, 1H), 3.14-3.0 (m, 1H), 2.80 (d, 1H, J = 15.0 Hz), 2.32-2.27 (m, 2H), 2.2-1.99 (m, 3H), 1.77-1.26 (m, 22H), 1.18 (s, 3H), 1.03 (s, 6H), 0.85 (s, 3H); MS m/z (％ 상대적 강도) 560 (100); HPLC 순도 99.09％.
5'- 클로로 -2,3- 디데히드로 -20,29- 디히드로인돌로[2',3':2,3]베툴린산 (6):
R f 0.9 (2％ MeOH/DCM); 1HNMR (CDCl3) δ 값 7.66 (bs, 1H), 7.29 (d, 1H, J = 1.9 Hz), 7.13-7.10 (m, 1H), 6.99-6.96 (m, 1H), 2.70 (d, 1H, J = 15.1 Hz), 2.32-2.19 (m, 3H), 2.10-1.96 (m, 1H), 1.85-1.68 (m, 2H), 1.64-1.18 (m, 20H), 1.09 (s, 3H), 0.94 (s, 6H), 0.83-0.78 (m, 6H), 0.71 (d, 3H, J = 6.6 Hz); MS m/z (％ 상대적 강도) 562 (100); HPLC 순도 98.38％.
2,3- 디데히드로 -5'- 플루오로인돌로[2',3':2,3]베툴린산 (7):
R f 0.63 (2％ MeOH/DCM); 1HNMR (CDCl3) δ 값 7.68 (bs, 1H), 7.20-7.15 (m, 1H), 7.03-6.89 (m, 1H), 6.87-6.80 (m, 1H), 4.78 (bs, 1H), 4.64 (bs, 1H), 3.20-3.06 (m, 1H), 2.74 (d, 1H, J = 14.9 Hz), 2.36-2.19 (m, 2H), 2.15-1.98 (m, 3H), 1.80-1.26 (m, 22H), 1.17 (s, 3H), 1.03 (s, 6H), 0.86 (s, 3H); MS m/z (％ 상대적 강도) 544 (100); HPLC 순도 93.36％.
2,3- 디데히드로 -5'- 플루오로 -20,29- 디히드로인돌로[2',3':2,3]베툴린산 (8):
R f 0.82 (2％ MeOH/DCM); 1HNMR (CDCl3) δ 값 7.68 (bs, 1H), 7.20-7.16 (m, 1H), 7.06-7.02 (m, 1H), 6.87-6.80 (m, 1H), 2.76 (d, 1H, J = 14.9 Hz), 2.30-2.10 (m, 4H), 1.95-1.85 (m, 2H), 1.80-1.25 (m, 20H), 1.17 (s, 3H), 1.01 (s, 6H), 0.90-0.87 (m, 6H), 0.78 (d, 3H, J = 6.6 Hz); MS m/z (％ 상대적 강도) 546 (100); HPLC 순도 99.14％.
7'- 클로로 -2,3- 디데히드로인돌로[2',3':2,3]베툴린산 (9):
R f 0.76 (2％ MeOH/DCM); 1HNMR (CDCl3) δ 값 7.85 (bs, 1H), 7.28-7.26 (m, 1H), 7.09 (d, 1H, J = 7.3 Hz), 7.0-6.95 (m, 1H), 4.77 (bs, 1H), 4.64 (bs, 1H), 3.05-2.95 (m, 1H), 2.79 (d, 1H, J = 15.1 Hz), 2.32-2.2 (m, 2H), 2.18-1.98 (m, 3H), 1.90-1.33 (m, 13H), 1.31-1.21 (m, 12H), 1.03 (s, 6H), 0.86 (s, 3H); MS m/z (％ 상대적 강도) 560 (100); HPLC 순도 91.16％.
2,3- 디데히드로 -5'- 메톡시인돌로[2',3':2,3]베툴린산 (10):
R f 0.3 (DCM); 1HNMR (CDCl3) δ 값 7.50 (bs, 1H), 7.09 (d, 1H, J = 8.6 20 Hz), 6.78 (d, 1H, J = 2.3 Hz), 6.70-6.66 (m, 1H), 4.70 (bs, 1H), 4.56 (bs, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.1-2.9 (m, 1H), 2.72 (d, 1H, J = 14.9 Hz), 2.30-2.15 (m, 2H), 2.09-1.85 (m, 3H), 1.80-1.25 (m, 13H), 1.21-1.18 (m, 9H), 1.09 (s, 3H), 0.96 (s, 6H), 0.80 (s, 3H); MS m/z (％ 상대적 강도) 556 (100); HPLC 순도 99.45％.
2,3- 디데히드로벤즈푸라노[2',3':2,3]베툴린산 (11):
R f 0.38 (DCM); 1HNMR (CDCl3) δ 값 7.41-7.31 (m, 2H), 7.19-7.15 (m, 2H), 4.78 (bs, 1H), 4.64 (bs, 1H), 3.12-2.90 (m, 1H), 2.70 (d, 1H), 2.4-2.2 (m, 2H), 2.19-1.98 (m, 3H), 1.90-1.25 (m, 22H), 1.2 (s, 3H), 1.03 (s, 6H), 0.89 (s, 3H); MS m/z (％ 상대적 강도) 527 (100); HPLC 순도 93.83％.
2,3- 디데히드로 -20,29- 디히드로벤즈푸라노[2',3':2,3]베툴린산 (12):
R f 0.87 (2％ MeOH/DCM); 1HNMR (CDCl3) δ 값 7.42-7.34 (m, 2H), 7.20-7.16 (m, 2H), 2.71 (d, 1H, J = 15.2 Hz), 2.35-2.10 (m, 3H), 2.0-1.2 (m, 26H), 1.02-0.87 (m, 12H), 0.78 (d, 3H, J = 6.7 Hz); MS m/z (％ 상대적 강도) 529 (100); HPLC 순도 90.89％.
1'-벤질-2,3- 디데히드로 -20,29- 디히드로 -4'- 페닐피롤로[2',3':2,3]베툴린산 (13):
R f 0.75 (2％ MeOH/DCM); 1HNMR (CDCl3) δ 값 7.37-7.28 (m, 8H), 7.19- 6.99 (m, 2H), 6.63 (s, 1H), 5.29 (bs, 2H), 2.79 (d, 1H, J = 14.6 Hz), 2.37-2.12 (m, 3H), 1.99-1.80 (m, 2H), 1.78-0.79 (m, 39H); MS m/z (％ 상대적 강도) 646 (100); HPLC 순도 83.86％.
28- O -벤질-2,3- 디데히드로[2',3':2,3]인돌로베툴리네이트 (15):
R f 0.9 (2％ MeOH/DCM); 1HNMR (CDCl3) δ 값 7.73 (bs, 1H), 7.40-7.28 (m, 6H), 7.14-7.06 (m, 3H), 5.15 (dd, 2H, J = 12.3, 20.4 Hz), 4.78 (bs, 1H), 4.64 (bs, 1H), 3.10-3.07 (m, 1H), 2.84 (d, 1H, J = 14.8 Hz), 2.4-2.0 (m, 3H), 1.98-1.29 (m, 24H), 1.20 (s, 3H), 1.02 (s, 6H), 0.87 (s, 3H); MS m/z (％ 상대적 강도) 618 (100); HPLC 순도 94.56％.
28- O -벤질-2,3- 디데히드로 -20,29- 디히드로[2',3':2,3]인돌로베툴리네이트 (16):
R f 0.8 (DCM); 1HNMR (CDCl3) δ 값 7.68 (bs, 1H), 7.34-7.19 (m, 6H), 7.05-6.97 (m, 3H), 5.04 (dd, 2H, J = 12.3, 17.4 Hz), 2.85 (d, 1H, J = 14.9 Hz), 2.48-2.30 (m, 3H), 2.02-1.20 (m, 23H), 1.0 (s, 3H), 0.91-0.85 (m, 12H), 0.79 (d, 3H, J = 6.7 Hz); MS m/z (％ 상대적 강도) 620 (100); HPLC 순도 97.8 ％.
28- O - 피발로일옥시메틸 -2,3- 디데히드로인돌로[2',3':2,3]베툴리네이트 (17):
R f 0.87 (2％ MeOH/DCM); 1HNMR (CDCl3) δ 값 7.90 (bs, 1H), 7.42 (d, 1H, J = 7.0 Hz), 7.30 (d, 1H, J = 7.3 Hz), 7.16-7.06 (m, 2H), 5.83 (dd, 2H, J = 5.4, 11.0 Hz), 4.81 (bs, 1H), 4.68 (bs, 1H), 3.08-3.05 (m, 1H), 2.86 (d, 1H, J = 14.9 Hz), 2.4-2.1 (m, 3H), 2.0-1.8 (m, 2H), 1.75-1.22 (m, 34H), 1.06 (s, 6H), 0.90 (s, 3H); MS m/z (％ 상대적 강도) 664 (100), 642 (37); HPLC 순도 92.19％.
28- O -알릴-2,3- 디데히드로인돌로[2',3':2,3]베툴리네이트 (18):
R f 0.4 (20％ EtOAc/헥산); 1HNMR (CDCl3) δ 값 7.71 (bs, 1H), 7.38-7.37 (m, 1H), 7.3-7.28 (m, 1H), 7.10-7.04 (m, 2H), 6.0-5.9 (m, 1H), 5.37-5.25 (m, 2H), 4.77 (bs, 1H), 4.63-4.58 (m, 3H), 3.15-3.05 (m, 1H), 2.83 (d, 1H, J = 14.9 Hz), 2.45-2.05 (m, 3H), 2.0-1.8 (m, 2H), 1.75-1.01 (m, 31H), 0.86 (s, 3H); MS m/z (％ 상대적 강도) 566 (95), 113 (100); HPLC 순도 100％.
28- O -벤질-5'- 클로로 -2,3- 디데히드로인돌로[2',3':2,3]베툴리네이트 (19):
R f 0.5 (20％ EtOAc/헥산); 1HNMR (CDCl3) δ 값 7.67 (bs, 1H), 7.30-7.25 (m, 6H), 7.11-7.08 (m, 1H), 6.98-6.94 (m, 1H), 5.06 (dd, 2H, J = 12.3, 20.9 Hz), 4.68 (bs, 1H), 4.55 (bs, 1H), 3.10-2.90 (m, 1H), 2.68 (d, 1H, J = 15.0 Hz), 2.30-1.95 (m, 3H), 1.9-1.85 (m, 2H), 1.75-1.0 (m, 25H), 0.92 (s, 3H), 0.76-0.75 (m, 6H); MS m/z (％ 상대적 강도) 650 (100); HPLC 순도 100％.
28- N - 메틸글리시네이트 -2,3- 디데히드로인돌로[2',3':2,3]베툴린아미드 (21):
R f 0.53 (2％ MeOH/DCM); 1HNMR (CDCl3) δ 값 7.69 (bs, 1H), 7.31 (d, 1H, J = 7.2 Hz), 7.21 (d, 1H, J = 7.7 Hz), 7.05-6.97 (m, 2H), 6.01 (bs, 1H), 4.70 (bs, 1H), 4.55 (bs, 1H), 3.97-3.94 (m, 2H), 3.69 (s, 3H), 3.2-3.0 (m, 1H), 2.74 (d, 1H, J = 14.9 Hz), 2.6-2.3 (m, 1H), 2.2-1.8 (m, 3H), 1.78-1.70 (m, 2H), 1.68-0.95 (m, 30H), 0.78 (s, 3H); MS m/z (％ 상대적 강도) 621 (100), 599 (60); HPLC 순도 93.43％.
28- N -글리신-2,3- 디데히드로인돌로[2',3':2,3]베툴린아미드 (22):
R f 0.43 (7％ MeOH/DCM); 1HNMR (CDCl3) δ 값 7.70 (bs, 1H), 7.37 (d, 1H, J = 7.4 Hz), 7.30-7.27 (m, 1H), 7.12-7.04 (m, 2H), 6.13 (bs, 1H), 4.77 (bs, 1H), 4.62 (bs, 1H), 4.09-4.06 (m, 2H), 3.15-3.12 (m, 1H), 2.83 (d, 1H, J= 14.9 Hz), 2.6-2.45 (m, 1H), 2.2-1.88 (m, 3H), 1.85-1.70 (m, 2H), 1.68-1.01 (m, 30H), 0.86 (s, 3H); MS m/z (％ 상대적 강도) 583 (100); HPLC 순도 97.59％.
28- N - 메틸글리시네이트 -5'- 클로로 -2,3- 디데히드로인돌로[2',3':2,3]베툴린아 미드 (23):
R f 0.5 (2％ MeOH/DCM); 1HNMR (CDCl3) δ 값 7.73 (bs, 1H), 7.32 (d, 1H, J = 1.7 Hz), 7.18 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 7.05-7.02 (m, 1H), 6.06 (t, 1H, J = 5.0 Hz), 4.77 (bs, 1H), 4.63 (bs, 1H), 4.04-4.02 (m, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.25-3.1 (m, 1H), 2.76 (d, 1H, J = 15.0 Hz), 2.6-2.4 (m, 1H), 2.15-1.95 (m, 3H), 1.9-1.75 (m, 2H), 1.70-1.01 (m, 30H), 0.84 (s, 3H); MS m/z (％ 상대적 강도) 633 (100); HPLC 순도 100％.
28- N -글리신-5'- 클로로 -2,3- 디데히드로인돌로[2',3':2,3]베툴린아미드 (24):
R f 0.31 (7％ MeOH/DCM); 1HNMR (CDCl3) δ 값 7.67 (bs, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.11 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 6.97-6.95 (m, 1H), 6.2 (bs, 1H), 4.69 (bs, 1H), 4.55 (bs, 1H), 3.93 (bs, 2H), 3.2-2.95 (m, 1H), 2.68 (d, 1H, J = 15.0 Hz), 2.5-2.3 (m, 1H), 2.25-1.85 (m, 5H), 1.8-0.75 (m, 33H); MS m/z (％ 상대적 강도) 617 (100); HPLC 순도 100％.
28- N -(2"-피리딘)-5'- 클로로 -2,3- 디데히드로인돌로[2',3':2,3]베툴린아미드 (25):
R f 0.7 (2％ MeOH/DCM); 1HNMR (CDCl3) δ 값 8.18-8.15 (m, 2H), 8.08 (bs, 1H), 7.76 (bs, 1H), 7.62 (t, 1H, J = 7.6 Hz), 7.26 (s, 1H), 7.08 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 6.97-6.94 (m, 2H), 4.72 (bs, 1H), 4.58 (bs, 1H), 3.2-3.05 (m, 1H), 2.69 (d, 1H, J = 15.0 Hz), 2.65-2.55 (m, 1H), 2.04-1.9 (m, 5H), 1.87-1.09 (m, 25H), 1.03 (s, 3H), 0.96-0.93 (m, 2H), 0.76 (s, 3H); MS m/z (％ 상대적 강도) 638 (100); HPLC 순도 95.81％.
28- N -(2"-티아졸)-5'- 클로로 -2,3- 디데히드로인돌로[2',3':2,3]베툴린아미드 (26):
R f 0.59 (2％ MeOH/DCM); 1HNMR (CDCl3) δ 값 9.9 (bs, 1H), 7.72 (bs, 1H), 7.45 (d, 1H, J = 3.4 Hz), 7.33 (s, 1H), 7.17 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 7.05-6.97 (m, 2H), 4.81 (bs, 1H), 4.66 (bs, 1H), 3.25-3.1 (m, 1H), 2.76 (d, 1H, J = 14.8 Hz), 2.65-2.55 (m, 1H), 2.25-1.8 (m, 5H), 1.75-1.26 (m, 21H), 1.17 (s, 3H), 1.04-0.97 (m, 6H), 0.83 (s, 3H); MS m/z (％ 상대적 강도) 644 (100); HPLC순도 91.43％.
28- N - 프로파르질 -5'- 클로로 -2,3- 디데히드로인돌로[2',3':2,3]베툴린아미드 (27):
R f 0.68 (DCM); 1HNMR (CDCl3) δ 값 7.71 (bs, 1H), 7.33 (d, 1H, J = 1.5Hz), 7.17 (d, 1H, J = 8.5 Hz), 7.05-7.02 (m, 1H), 5.71 (bs, 1H), 4.77 (bs, 1H), 4.63 (bs, 1H), 4.08-4.0 (m, 2H), 3.25-3.1 (m, 1H), 2.76 (d, 1H, J = 15.0 Hz), 2.6-2.45 (m, 1H), 2.2-1.95 (m, 3H), 1.9-1.25 (m, 24H), 1.18 (s, 3H), 1.02 (s, 6H), 0.84 (s, 3H); MS m/z (％ 상대적 강도) 599 (100); HPLC 순도 98.01％.
28- N -글리신-1'-벤질-5'- 클로로 -2,3- 디데히드로인돌로[2',3':2,3]베툴린아미 드 (28):
R f 0.5 (DCM); 1HNMR (CDCl3) δ 값 7.73 (s, 1H), 7.36-7.33 (m, 5H), 7.18 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 7.05-7.02 (m, 1H), 6.06 (t, 1H), 5.23-5.14 (m, 2H), 4.77 (bs, 1H), 4.62 (bs, 1H), 4.08-4.06 (m, 2H), 3.15-3.09 (m, 1H), 2.76 (d, 1H, J = 14.9 Hz), 2.56-2.49 (m, 1H), 2.11-1.8 (m, 5H), 1.64-0.99 (m, 31H), 0.83 (s, 3H); MS m/z (％ 상대적 강도) 709 (20), 731 (100); HPLC 순도 96.6％.
28- N -글리신-1'-벤질-2,3- 디데히드로인돌로[2',3':2,3]베툴린아미드 (29):
R f 0.6 (DCM); 1HNMR (CDCl3) δ 값 7.71 (s, 1H), 7.37-7.26 (m, 6H), 7.12-7.02 (m, 2H), 6.07 (bs, 1H), 5.19 (s, 2H), 4.77 (bs, 1H), 4.62 (bs, 1H), 4.07 (d, 2H, J = 4.5 Hz), 3.15-3.1 (m, 1H), 2.81 (d, 1H, J = 15.0 Hz), 2.56-2.48 (m, 1H), 2.13 (d, 1H, J = 15.0 Hz), 2.0-1.79 (m, 4H), 1.64-1.0 (m, 31H), 0.85 (s, 3H); MS m/z (％ 상대적 강도) 675 (10), 697 (100); HPLC 순도 98.6％.
2,3- 디데히드로 -5',7'- 디클로로인돌로[2',3':2,3]베툴린산 (30):
R f 0.7 (DCM); 1HNMR (CDCl3) δ 값 7.85 (bs, 1H), 7.25 (d, 2H, J = 3.0 Hz), 4.78 (bs, 1H), 4.65 (bs, 1H), 3.1-3.0 (m, 1H), 2.74 (d, 1H, J = 15.0 Hz), 2.32-2.23 (m, 2H), 2.09 (d, 1H, J = 15.0 Hz), 2.04-1.97 (m, 2H), 1.81 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 1.64-1.25 (m, 22H), 1.19 (s, 3H), 1.02 (s, 6H), 0.84 (s, 3H); MS m/z (％ 상대적 강도) 594 (100); HPLC 순도 91.6％.
2,3- 디데히드로 -4',6'- 디클로로인돌로[2',3':2,3]베툴린산 (31):
R f 0.4 (20％ EtOAc/헥산); 1HNMR (CDCl3) δ 값 7.79 (bs, 1H), 7.14 (s, 1H), 6.98 (s, 1H), 4.78 (bs, 1H), 4.64 (bs, 1H), 3.3 (d, 1H, J = 15.6 Hz), 3.1-3.0 (m, 1H), 2.32-2.22 (m, 3H), 2.05-1.98 (m, 2H), 1.79 (d, 1H, J= 12.6 Hz), 1.64-1.25 (m, 22H), 1.17 (s, 3H), 1.02 (s, 6H), 0.87 (s, 3H); MS m/z (％ 상대적 강도) 594 (100); HPLC 순도 98.6％.
28- N -(4"- 트리플루오로메틸 ) 페닐 -5'- 클로로 -2,3- 디데히드로인돌로[2',3':2,3]베툴린아미드 (32):
R f 0.3 (20％ EtOAc/헥산); 1HNMR (CDCl3) δ 값 7.72 (bs, 1H), 7.65-7.56 (m, 3H), 7.38 (s, 1H), 7.33 (d, 1H, J = 1.8 Hz), 7.18 (d, 1H, J = 8.5 Hz), 7.06-7.02 (m, 1H), 4.78 (bs, 1H), 4.66 (bs, 1H), 3.22-3.19 (m, 1H), 2.79-2.66 (m, 2H), 2.4-2.2 (m, 1H), 2.2-1.8 (m, 5H), 1.56-1.01 (m, 30H), 0.84 (s, 3H); MS m/z (％ 상대적 강도) 703 (100); HPLC 순도 90％.
28- N -(4"- 트리플루오로메톡시 )벤질-5'- 클로로 -2,3- 디데히드로인돌로[2',3':2,3]베툴린아미드 (33) :
R f 0.8 (DCM); 1HNMR (CDCl3) δ 값 7.68 (bs, 1H), 7.27-7.24 (m, 3H), 7.12-7.09 (m, 3H), 6.98-6.95 (m, 1H), 5.89 (t, 1H), 4.7 (bs, 1H), 4.56 (bs, 1H), 4.44-4.42 (m, 1H), 4.3-4.28 (m, 1H), 3.13-3.11 (m, 1H), 2.69 (d, 1H, J = 14.9 Hz), 2.5-2.3 (m, 1H), 2.1-1.74 (m, 5H), 1.57-1.1 (m, 24H), 0.94 (s, 3H), 0.86 (s, 3H), 0.77 (s, 3H); MS m/z (％ 상대적 강도) 735 (55), 757 (100); HPLC 순도 97.3％.
28- N - 사이클로프로필 -5'- 클로로 -2,3- 디데히드로인돌로[2',3':2,3]베툴린아미드 (34):
R f 0.3 (DCM); 1HNMR (CDCl3) δ 값 7.71 (bs, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.18 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 7.05-7.02 (m, 1H), 5.67 (bs, 1H), 4.76 (bs, 1H), 4.62 (bs, 1H), 3.21-3.18 (m, 1H), 2.76 (d, 1H, J = 14.9 Hz), 2.67-2.65 (m, 1H), 2.53-2.51 (m, 1H), 2.1-1.7 (m, 5H), 1.55-1.01 (m, 30H), 1.0-0.8 (m, 6H), 0.45-0.44 (m, 1H); MS m/z (％ 상대적 강도) 601 (100); HPLC 순도 98.1％.
28- N - 사이클로펜틸 -5'- 클로로 -2,3- 디데히드로인돌로[2',3':2,3]베툴린아미드 (35):
R f 0.5 (DCM); 1HNMR (CDCl3) δ 값 7.66 (bs, 1H), 7.25 (d, 1H, J = 1.7 Hz), 7.11 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 6.98-6.95 (m, 1H), 5.4 (d, 1H, J = 6.9 Hz), 4.7 (bs, 1H), 4.55 (bs, 1H), 4.15-4.09 (m, 1H), 3.12-3.09 (m, 1H), 2.68 (d, 1H, J = 14.9 Hz), 2.47-2.45 (m, 1H), 2.05-1.7 (m, 5H), 1.56-0.95 (m, 38H), 0.77 (s, 3H); MS m/z (％ 상대적 강도) 629 (85), 651 (100); HPLC 순도 97.5％.
펩티드의 항암 활성을 결정하기 위해 우리가 사용한 세포주들의 적합성을 결정하기 위하여 미국 국립 의학 도서관의 펍메드 연구(PubMed search)를 수행하였다. DU 145 (인간 전립선)가 암에 관하여 829회의 "성공(hits)"을 보여준 반면에, 또한 우리가 사용한 기타 인간 암 세포주는 상당수의 성공을 보여주었다(A549에 대해 3047, PA-1에 대해 349 및 Miapaca.2에 대해 134). 이것은 암 연구에서 이러한 세포주의 폭넓은 사용을 명백하게 보여준다. 또한, 이것은 인간 종양 세포주에서 분자들의 생체외 항암 활성을 테스트하기 위한 통상적이고 표준적인 관행이고 기준이 된다(Br J Cancer. 2001 5월 18; 84(10):1289-90 (Flasks, Fibres와 Flanks-임상 항종양 활성을 예상하기 위한 전 임상 종양 모델). 저자는 6개 또는 그 이상의 폐암 또는 유방암 세포주에 대한 생체외 활성은 이러한 종양 형태에 대한 이종 이식 활성(xenograft activity)을 예상하게 한다고 보고하였다. "Semin Oncol 1992 Dec; 19(6):622-38 (미국의 국립 암 연구소: 암 약물 발견과 개발 프로그램)와 "Jpn J Antibiot ., 1977 Dec.;30 Suppl:35-40 (미국 국립 암 연구소의 항종양 스크리닝 방법)" 기사(article)에서는, 잠재적인 세포 독성이 있는 약물의 규명을 위한 인간 종양 세포주의 폭넓은 사용이 기술되어 있다.
식 (I)의 화합물의 생체외 세포 독성
표-3에서 목록화되어 있는 수많은 화합물에 대해 전립선암, 폐암, 후두(laryngeal)암, 췌장암, 유방암, 결장암 및 난소암, 백혈병 및 림프종(lymphoma), 인간 종양 세포주에 대한 세포 독성을 테스트하였다. 간단히 말해서, 3일 동안 MTT 세포 독성 분석을 수행하였는데, 이것은 대사 상으로 활성 세포들이 테트라졸리윰 염인 MTT(3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐 테트라졸리윰 브로마이드)를 흡수하고 이것이 활성 미토콘드리아에 의해 푸른 색의 포르마잔 생성물로 대사되고 이 생성물이 분광학적으로 해독되는 원리에 기초하고 있다. MTT를 pH 7.4인 포스페이트 완충된 식염수에 녹여 MTT 농도를 5mg/ml로 얻었고; 그 결과 얻은 혼합물을 0.22 미크론 필터를 통해 여과하여, 멸균시키고 소량의 불용성 잔여물을 제거하였다. 각각의 종양 세포 형태에 대해, 10,000 내지 15,000 개의 세포들을 96-웰 배양 플레이트에 시딩(seeding)하였고, CO2 인큐베이터 안에서 총 72시간 동안 각각의 베툴린산 유도체와 함께 배양하였다. 베툴린산 유도체로 처리하지 않은 대조군 세포들을 유사한 방식으로 배양하였다. 각각의 웰에 MTT 100 ㎍(20 ㎕)을 첨가하였고, 그런 다음 1시간 더 배양하였고, 최종적으로 각각의 웰에 10％ SDS-0.01N HCl 50㎕를 첨가함으로써 세포들을 용해시키고(lyse) 포르마잔을 용해시켜(dissolve), 분석을 종결하였다. 1시간 배양한 후에, 540 nm에서 플레이트를 분광학적으로 해독하였고, 하기 식을 사용하여 세포 독성 백분율(cytotoxicity percentage)을 계산하였다:
세포 독성 백분율 = 100 x [1-(X/R1)]
상기에서 X = (처리된 시료의 540 nm에서의 흡광도) - (블랭크(blank)의 540 nm에서의 흡광도) R1 = 대조군 시료의 540 nm에서의 흡광도.
생체 외에서 세포들 중 50％가 소멸되는 농도로서 정의되는 세포 독성의 IC50 값을 각각의 베툴린산 유도체로 처리된 각각의 세포주에 대해 계산하였다.
식 (I)의 베툴린산 유도체의 생체외 세포 독성의 IC50 값을 표 4에서 나타낸다.
NIH 3 T3 세포 독성 테스트
배양 상태에 있는 NIH 3T3 세포에서 화학 물질의 세포 독성 효과를 이미 기술한 MTT 분석법을 사용한 세포 대사 결정법으로 측정한다. 연속적으로 배양 상태에서 유지한 건강한 NIH 3T3 세포(확인된 세포-주)를 나누고 초과 시간 동안 증식시킨다. 이 테스트의 기초는 세포 독성 화학물질(작용 부위 또는 작용 기작에 관계없이)이 이러한 과정을 방해하여, 그 결과 세포 수로 반영되는 성장 속도의 감소를 초래한다는 점이다. 테스트 화합물의 농도와 관련되어, 성장을 억제하는 정도는 독성에 관한 표식을 제공한다.
NIH 3T3 세포들을 배양 상태로 유지하고 어느 한 범위의 농도의 테스트 화합물에 노출시키고, 72 시간 동안 노출시킨 후에 MTT 분석에 의해 살아있는 세포의 개수를 결정하였다. 테스트 화학 물질의 존재 하에서 세포의 개수를 대조군 배양 상태에서 관찰되는 것과 비교하였고, 성장 억제 백분율을 계산하였다. IC50 농도(즉, 50％ 성장을 억제시키는 농도)를 결정하고 ㎍/ml로 표현한다. 종양 세포에 대한 NIH 3T3 세포의 IC50의 비율은 분자의 독성을 예상하게 하는 표지로서 "안전성 지표(Safety Index)"로 나타내어진다. 그 값이 높을수록, 분자의 예상되는 안전성은 더 좋아진다. 표 5는 NIH 3T3 세포에서의 IC50 값과 다양한 세포주에서 분자들의 안전성 지표를 보여준다.
약물 동력학 연구
베툴린산 (II), MJ-1098-RS (III) 및 본원 발명에 따른 화합물 5의 약물 동력학 동태를 정맥 주사로 10mg/kg의 투여량으로 투여한 후에 3 마리의 수컷 위스타 랫트(Wistar rat)(150-180 g)에서 연구하였다. 투여한 후에 다양한 시간마다 혈액 시료를 취하였고, 혈청을 제조하였고 분석할 때까지 -20℃에서 동결시켰다. C- 18 컬럼을 사용하는 적절한 HPLC 방법으로 혈청 시료를 분석하였다. 물의 pH를 인산으로 3.0까지 조절하였다. 5분 동안 70％ 아세토니트릴로 농도 구배를 시작하여 25분 이내에 아세토니트릴 농도를 100％까지 높이고, 그 다음에 10분 동안 아세토니트릴 농도를 100％에서 유지한다. 이렇게 하여 시간 함수에 따라 혈청 농도를 보여주는 곡선을 그릴 수 있고, 연구하고자 하는 화합물들의 서로 다른 약물 동력학 파라미터를 결정하는 것이 가능해진다. WinNonlin 소프트웨어를 사용하여 약물 동력학 파라미터를 계산하였고, 이들을 표 2에서 요약한다.
표 2에서 제공된 결과는 베툴린산 (II)에 비하여 MJ-1098-RS와 화합물-5의 혈청 농도가 상당히 높고 오랫동안 지속적이었음을 보여준다. 따라서, 본원 발명의 화합물은 주어진 치료 효과에 필요한, 사용될 활성 주성분의 함량과 하루 당 투여 횟수를 실질적으로 감소시키는 것을 가능하게 하는 매우 유익한 약물 동력학 파라미터를 갖고 있다. 전 임상 개발을 위해 이러한 화합물을 평가하기 위한 추가적인 연구가 진행 중에 있다. 무린 이종 이식 모델에서의 생체 내 효능에 관한 연구와 안전성 연구가 또한 진행 중에 있으며, 이들은 완벽한 출원에서 포함될 것이다.
<표 4>: 베툴린산 유도체의 생체 외 세포 독성의 IC50 값
Figure 112007061712019-pct00015
Figure 112007061712019-pct00016
Figure 112007061712019-pct00017
<표 5>: NIH 3T3 세포에서 IC50 값과 다양한 세포 주에서 분자들의 안전성 지표
Figure 112007061712019-pct00018
이미 언급된 바와 같이, 식 (I)의 화합물, 그의 염 등을 포함하는 약학적 조성물은 인간 암세포의 증식을 억제하는데 유용한 것으로 발견되었다. 특히, 약학적 조성물은 암 또는 기타 종양으로 고통스러워 하는 인간, 포유 동물 또는 다른 객체의 치료에 유용한 것으로 발견되었다.
약학적 조성물은 캐리어, 희석제 등과 같이 당해 분야에서 알려진 약학적으로 허용가능한 첨가제를 포함할 수 있다. 사용될 수 있는 대표적인 캐리어로는 붕해제와 윤활제를 포함한다. 붕해제와 윤활제는 약학에서 잘 알려져 있다. 적절한 붕해제로는 스타치, 크로스카르멜로스 소듐, 크로스포비돈, 소듐 스타치 글리콜레이트, 크로스카르멜로스 칼슘, 미세결정 셀룰로오스 및 폴아크랄린 포타슘( polacralin potassium) 및 그 등가물을 포함한다. 적절한 윤활제로는 마그네슘 스테아레이트, 소듐 스테아릴 푸마레이트, 수소화된 식물성 오일, 수소화된 캐스터 오일, 수소화된 면실유, 스테아르산 및 칼슘 스테아레이트, 콜로이드형 실리콘 디옥시드 및 그 등가물을 포함한다.
붕해제와 윤활제는 각각 붕해제에 대해 효과적인 붕해되는 양(disintegrating amount) 및/또는 윤활제에 대해 효과적인 윤활시키는 양(lubricating amount)을 제공하도록 선택된다. 예를 들면, 대표적인 제형들은 붕해제 0중량％ 내지 30중량％와 윤활제 0중량％ 내지 10중량％를 포함할 수 있다. 바람직한 실시 형태에서, 제형은 붕해제 1중량％ 내지 10중량％와 윤활제 0.2중량％ 내지 2중량％를 포함한다.
또한, 조성물은 현탁제, 증점제(thickening agent), 방부제, pH 조절제, 벌크화제(bulking) 및 감미제와 같은 다른 첨가제를 포함할 수 있다.
적절한 현탁제의 예로는 크산탄 검, 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 카라기난, 소듐 카르복시메틸 셀룰로오스, 및 소듐 카르복시메틸 셀룰로오스/미세결정 셀룰로오스 혼합물을 포함하고, 특히 소듐 카르복시메틸 셀룰로오스/미세결정 셀룰로오스 혼합물을 포함한다.
적절한 현탁제는 크산탄, 카라기난 및 소듐 카르복시메틸 셀룰로오스/미세결정 셀룰로오스 혼합물 및 이들의 혼합물과 같은 요변성(thixotropic) 현탁제이다. 이들 중 크산탄 검과 구아 검이 더 바람직하다.
본원 제형에서 적절하다고 발견된 증점제는 실리콘 디옥시드를 포함한다.
본원 발명에서 유용하다고 발견된 수(水) 가용성(water soluble) 방부제로는 소듐 벤조에이트, 소듐 시트레이트 및 벤즈알코늄 클로라이드를 포함하고, 바람직한 것은 소듐 벤조에이트이다.
사용될 수 있는 감미제로는 프룩토스, 수크로스, 글루코스, 말토스 또는 락토스와 같은 당뿐만 아니라 아스파탐과 같은 칼로리가없는 감미제를 포함하고, 이들은 단독으로 사용되거나 또는 예를 들면 사카린, 아세술팜(acesulfame), 토마틴(thaumatin), 캘콘(chalcone), 시클라메이트, 스테비오사이드(stevioside) 및 그 등가물과 같이, 아스파탐과 함께 상승적인 감미 특성을 가진 것으로 알려진 또 다른 종류의 칼로리가 없거나 또는 칼로리가 낮은 감미제와 결합하여 사용될 수 있다. 감미제 조성물이 더 경제적이고 뒷맛(after-taste) 없이 양호한 단맛을 준다.
조성물은 선택적으로 및 바람직하게는 약제학적으로 허용가능한 희석제, 부형제, 용매, 결합제, 안정화제 및 그 등가물을 포함할 수 있다. 그러한, 희석제로는 RPMI 1649, 완충된 식염수, 등장성 NaCl, 링거 용액(Ringer's solution), 물, 증류수, 폴리에틸렌 글리콜(물을 타지 않은 상태 또는 물에 넣은 상태), 물에 넣은 2％ 트윈, 물에 넣은 50％까지의 디메틸술폭시드, 프로필렌 글리콜(물을 타지 않은 상태 또는 물에 넣은 상태), 포스페이트로 완충된 식염수, 균형을 맞춘 염 용액(balanced salt solution), 글리세롤, 및 정맥 주사에 적절한 기타 통상적인 액체를 포함한다. 단위 투여량 당 조성물 약 0.1 내지 10 그램(바람직하게는 0.5 내지 5.0 그램)을 제공하는 약학적 조성물이 바람직하고, 통상적으로 정제, 로젠지, 캡슐, 분말, 수성 또는 유성 현탁액, 엘릭시르, 및 수성 용액으로 제조된다. 물론, 사용된 약학적 조성물의 성질은 목표로 하는 투여 경로에 의존할 것이다. 본원 발명의 방법은 식 (I)의 베툴린산 유도체의 치료적으로 유효한 조성물을 포유 동물에게 전신으로 투여하는 단계를 포함한다. 식 (I)의 베툴린산 유도체 또는 약학적으로 허용가능한 염의 유효 투여량은 얻으려고 하는 효과, 투여 경로 및 치료할 암에 투여량 의존성을 보이면서, 포유 동물 1mg/Kg체중 내지 300mg/Kg체중(바람직하게는 10-100 mg/Kg체중) 범위에 있다. 전신 투여는 경구, 직장, 비강, 경피, 및 비경구(즉, 근육내, 정맥내 및 피하내)를 지칭한다. 좋은 임상 경험에 따라, 부적당하고 해로운 부작용을 만들지 않고 항암 효과를 산출할 수 있는 투여량으로 조성물을 투여하는 것이 바람직하다. 조성물은 단독으로 또는 5-플루오로우라실, 메토트렉세이트, 에토포사이드(etoposide), 파클리탁셀, 택소테레(taxotere), 독소루비신, 빈크리스틴, 빈블라스틴 및 기타 유사하게 알려져 있고 확립된 항암 약물과 같은 기타 치료제와 함께 혼합물로 투여될 수 있다.
일반식 (I)의 화합물과 일반식 (I)의 화합물을 포함하는 조성물은 전립선암, 폐암, 후두암, 췌장암, 유방암, 직장암 및 난소암, 백혈병 및 림프종의 억제 및/또는 예방을 위해 사용될 수 있다.

Claims (26)

  1. R은 C(=CH2)CH3 또는 CH(CH3)2이고;
    R2는 인접한 카르보닐기와 함께 카르복시산, 카르복시산 에스테르 또는 아미드 또는 치환된 아미드를 형성하고;
    R3과 R4는 함께 결합되어, 수소, 할로겐, 알킬 및 알콕시로부터 선택되는 X기로 선택적으로 치환된 아릴 고리를 형성하고;
    Y는 N 또는 O이고; 및 Y가 O일 때 R1은 부재하고; 및 Y가 N일 때 R1은 수소, 알킬 또는 아릴 알킬인 하기 식 (I)의 화합물 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염 또는 그의 용매화물.
    Figure 112007061717519-pct00038
  2. 제1항에 있어서, 상기 R은 C(=CH2)CH3이고; Y는 N이고; R1은 수소이고; R2는 인접한 카르보닐기와 함께 카르복시산을 형성하고; R3과 R4는 함께 결합되어 X기로 치환된 아릴 고리를 형성하고; 및 X는 할로겐인 것인 화합물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 R은 C(=CH2)CH3이고; Y는 N이고; R1은 수소이고; R2는 -NHCH2COOH이고; R3과 R4는 함께 결합되어 X기로 치환된 아릴 고리를 형성하고; 및 X는 수소인 것인 화합물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 식의 화합물이
    Figure 112007061717519-pct00039
    Figure 112007061717519-pct00021
    로부터 선택되는 것인 화합물.
  5. 하기 식 (IV)와 (V)로 표시되는 베툴로닉산(Betulonic acid) 또는 20,29-디히드로베툴로닉산과 적절한 히드라진 또는 그의 히드로클로라이드 염 및 산성 촉매 물질을 용매인 C1 내지 C4 알코올 존재 하에서 반응시키는 단계를 포함하는,
    Figure 112007061717519-pct00040
    R은 C(=CH2)CH3 또는 CH(CH3)2이고;
    R2는 인접한 카르보닐기와 함께 카르복시산, 카르복시산 에스테르 또는 아미드 또는 치환된 아미드를 형성하고;
    R3과 R4는 함께 결합되어, 수소, 할로겐, 알킬 및 알콕시로부터 선택되는 X기로 선택적으로 치환된 아릴 고리를 형성하고;
    Y는 N이고; 및
    R1은 수소, 알킬 또는 아릴 알킬인 하기 식 (I)의 화합물의 제조 방법.
    Figure 112007061717519-pct00041
  6. 제5항에 있어서, 상기
    (i) X = H, R1 = H, R = C(=CH2)CH3
    (ii) X = H, R1 = H, R = CH(CH3)2
    (iii) X = H, R1 = CH3, R = C(=CH2)CH3
    (iv) X = H, R1 = CH3, R = CH(CH3)2
    (v) X = 5'-Cl, R1 = H, R = C(=CH2)CH3
    (vi) X = 5'-Cl, R1 = H, R = CH(CH3)2
    (vii) X = 5'-F, R1 = H, R = C(=CH2)CH3
    (viii) X = 5'-F, R1 = H, R = CH(CH3)2
    (ix) X = 7'-Cl, R1 = H, R = C(=CH2)CH3
    (x) X = 5'-OCH3, R1 = H, R = C(=CH2)CH3
    (xi) X = 5'-Cl, 7'-Cl, R1 = H, R = C(=CH2)CH3
    (xii) X = 4'-Cl, 6'-Cl, R1 = H, R = C(=CH2)CH3
    (xiii) R = C(=CH2)CH3
    (xiv) R = CH(CH3)2인 것인 제조 방법.
  7. 하기 식 (IV)의 베툴로닉산 또는 하기 식 (V)의 20,29-디히드로베툴로닉산과 적절한 O-페닐히드록시아민 또는 그의 히드로클로라이드 염을 반응시키는 단계를 포함하는,
    Figure 112007061712019-pct00024
    X는 H이고, Y는 O이고, R은 C(=CH2)CH3 또는 CH(CH3)2이고, R1은 부재하고, R2는 OH이고, R3과 R4는 함께 Ph가 되는 하기 식 (I)의 화합물의 제조 방법.
    Figure 112007061712019-pct00025
  8. 제7항에 있어서, 상기 반응이 염산 존재 또는 부재 하에서 에탄올, 메탄올 및 이소프로판올로부터 선택되는 적절한 용매 존재 하에서 0℃ 내지 100℃ 범위의 온도에서 수행되는 것인 제조 방법.
  9. 하기 식 14의 화합물과 적절한 할라이드를 반응시키는 단계를 포함하는,
    Figure 112007061717519-pct00042
    X는 H 또는 5'-Cl이고; Y는 N이고; R은 C(=CH2)CH3 또는 CH(CH3)2이고; R1은 H이고; R2는 -OCH2Ph, OCH2C(O)OC(CH3)3 또는 OCH2CH=CH2이고; 및 R3과 R4는 함께 Ph가 되는 하기 식 (I)의 화합물의 제조 방법.
    Figure 112007061717519-pct00043
  10. 제9항에 있어서, 상기 반응이 포타슘 카보네이트 또는 트리에틸아민으로부터 선택되는 적절한 염기 존재 하에서 아세톤과 에테르로부터 선택되는 적절한 용매 존재 하에서 0℃ 내지 100℃ 범위의 온도에서 수행되는 것인 제조 방법.
  11. X는 H 또는 5'-Cl이고; Y는 N이고; R은 C(=CH2)CH3 또는 CH(CH3)2인 하기 화합물 20과 적절한 아민을 반응시키는 단계를 포함하는,
    Figure 112007061717519-pct00044
    X는 H 또는 5'-Cl이고; Y는 N이고; R은 C(=CH2)CH3 또는 CH(CH3)2이고; R1은 H, 알킬 또는 아릴 알킬이고; R2는 -NHCH2CO2CH3 또는 -NHCH2CO2H, 또는
    Figure 112007061717519-pct00045
    이고; 및 R3과 R4는 함께 Ph가 되는 하기 식 (I)의 화합물의 제조 방법.
    Figure 112007061717519-pct00046
  12. 제11항에 있어서, 상기 반응이 메틸렌 클로라이드, 클로로포름, 카본 테트라클로라이드, 아세톤 및 에테르로부터 선택되는 적절한 용매 존재 하에서 0℃ 내지 100℃ 범위의 온도에서 수행되는 것인 제조 방법.
  13. 하기 식 21 또는 23의 화합물과 수성 소듐 히드록시드 용액을 반응시키는 단계를 포함하는,
    Figure 112007061717519-pct00047
    Figure 112007061717519-pct00048
    X는 H 또는 5'-Cl이고; Y는 N이고; R은 C(=CH2)CH3이고, R1은 H이고; R2는 -NHCH2CO2H이고 및 R3과 R4는 함께 결합되어 Ph를 형성하는 하기 식 (I)의 화합물의 제조 방법.
    Figure 112007061717519-pct00049
  14. 제13항에 있어서, 상기 반응이 테트라히드로푸란, 에탄올 및 메탄올로부터 선택되는 적절한 용매 존재 하에서 0℃ 내지 100℃ 범위의 온도에서 수행되는 것인 제조 방법.
  15. 각각, 하기 화합물 23 또는 21과 벤질 브로마이드와 소듐 히드라지드를 반응시키는 단계를 포함하는,
    Figure 112007061717519-pct00050
    Figure 112007061717519-pct00051
    X는 5'-Cl 또는 H이고, Y는 N이고; R은 C(=CH2)CH3이고; R1은 C6H5CH2이고, R2는 -NHCH2CO2H이고; 및 R3과 R4는 함께 결합되어 Ph를 형성하는 하기 식 (I)의 화합물의 제조 방법.
    Figure 112007061717519-pct00052
  16. 제15항에 있어서, 상기 반응은 헥사메틸 포스포라미드와 같은 적절한 용매 존재 하에서 0℃ 내지 실온 범위의 온도에서 수행되는 것인 제조 방법.
  17. 적절한 약학적으로 허용가능한 캐리어, 아쥬반트(adjuvant) 또는 희석제 존재 하에 제1항에 따른 식 (I)의 화합물의 치료적 유효량을 포함하는 암 치료용 약학적 조성물.
  18. 적절한 약학적으로 허용가능한 캐리어, 아쥬반트 또는 희석제 존재 하에 제2항에 따른 식 (I)의 화합물의 치료적 유효량을 포함하는 암 치료용 약학적 조성물.
  19. 적절한 약학적으로 허용가능한 캐리어, 아쥬반트 또는 희석제 존재 하에 제3항에 따른 식 (I)의 화합물의 치료적 유효량을 포함하는 암 치료용 약학적 조성물.
  20. 제17항에서 정의된 약학적 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 암 치료법에 사용하기 위한 조성물.
  21. 제18항에서 정의된 약학적 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 암 치료법에 사용하기 위한 조성물.
  22. 제19항에서 정의된 약학적 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 암 치료법에 사용하기 위한 조성물.
  23. 삭제
  24. 삭제
  25. 삭제
  26. 삭제
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