KR101045572B1 - Clostridium propionicum 유래의프로피오닐―CoA 트랜스퍼라아제 변이체 및 상기변이체를 이용한 락테이트 중합체 또는 락테이트공중합체의 제조방법 - Google Patents
Clostridium propionicum 유래의프로피오닐―CoA 트랜스퍼라아제 변이체 및 상기변이체를 이용한 락테이트 중합체 또는 락테이트공중합체의 제조방법 Download PDFInfo
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Abstract
Description
재조합 벡터 | 핵산 치환 | 아미노산 치환 | 프라이머 |
pPs619C1200-ReAB | AGC →ACC | S325T | 서열번호 15/16 |
CAG →ATG | Q481M | 서열번호 17/18 | |
pPs619C1300-ReAB | GAA →GAT | E130D | 서열번호 19/20 |
AGC →ACC | S325T | 서열번호 15/16 | |
CAG →ATG | Q481M | 서열번호 17/18 |
균주명 | PLA 함량(w/w %) | PHB 함량(w/w %) |
pPs619C1300-CPPCT/JM109 | 0.86 % | 5.85 % |
CP-PCT Variant 512/JM109 | 2.19 % | 12.82 % |
CP-PCT Variant 522/JM109 | 7.49 % | 35.59 % |
재조합벡터 | 핵산 치환 |
CP-PCT Variant 512 | A1200G |
CP-PCT Variant 522 | T78C, T669C, A1125G, T1158C |
78 | 669 | 1125 | 1158 | 1200 | |
야생형 cp - pct | GGT (Gly) 24.7 |
GGT (Gly) 24.7 |
AAA (Lys) 33.6 |
CGT (Arg) 20.9 |
ACA (Thr) 7.1 |
cp - pct 변이체 512 | GGT (Gly) 24.7 |
GGT (Gly) 24.7 |
AAA (Lys) 33.6 |
CGT (Arg) 20.9 |
ACG (Thr) 14.4 |
cp - pct 변이체 522 | GGC (Gly) 29.6 |
GGC (Gly) 29.6 |
AAG (Lys) 10.3 |
CGC (Arg) 22.0 |
ACA (Thr) 7.1 |
Mutations | Silent Mutations | |
CpPct512 | A1200G | |
CpPct522 | T78C, T669C, A1125G, T1158C | |
CpPct531 | Gly335Asp | A1200G |
CpPct532 | Ala243Thr | A1200G |
CpPct533 | Asp65Gly | T669C, A1125G, T1158C |
CpPct534 | Asp257Asn | A1200G |
CpPct535 | Asp65Asn | T669C, A1125G, T1158C |
CpPct537 | Thr199Ile | T669C, A1125G, T1158C |
Name | 고분자 함량(%) | Lac mol% | 3HB mol% |
PCT (wild control) | 24.9 | 38.0 | 62.0 |
531 | 26.5 | 56.5 | 43.5 |
532 | 23.5 | 54.5 | 45.5 |
533 | 25.2 | 63.8 | 36.2 |
534 | 23.9 | 58.0 | 42.0 |
535 | 30.7 | 59.2 | 40.8 |
537 | 33.3 | 52.4 | 47.6 |
Claims (23)
- 서열번호 3의 유전자 서열에서 T78C, T669C, A1125G 및 T1158C가 변이된 유전자 서열을 가지는 락틸-CoA 공급 효소인 프로피오닐-CoA 트랜스퍼라아제 변이체.
- 서열번호 3의 유전자 서열에서 A1200G가 변이된 유전자 서열을 가지는 락틸-CoA 공급 효소인 프로피오닐-CoA 트랜스퍼라아제 변이체.
- 서열번호 3의 유전자 서열에서 A1200G가 변이되고, 서열번호 3에 대응하는 아미노산 서열에서 Gly335Asp가 변이된 유전자 서열을 가지는 락틸-CoA 공급 효소인 프로피오닐-CoA 트랜스퍼라아제 변이체.
- 서열번호 3의 유전자 서열에서 T669C, A1125G 및 T1158C가 변이되고, 서열번호 3에 대응하는 아미노산 서열에서 Asp65Gly이 변이된 유전자 서열을 가지는 락틸-CoA 공급 효소인 프로피오닐-CoA 트랜스퍼라아제 변이체.
- 서열번호 3의 유전자 서열에서 T669C, A1125G 및 T1158C가 변이되고, 서열번호 3에 대응하는 아미노산 서열에서 Asp65Asn이 변이된 유전자 서열을 가지는 락틸-CoA 공급 효소인 프로피오닐-CoA 트랜스퍼라아제 변이체.
- 서열번호 3의 유전자 서열에서 T669C, A1125G 및 T1158C가 변이되고, 서열번호 3에 대응하는 아미노산 서열에서 Thr199Ile이 변이된 유전자 서열을 가지는 락틸-CoA 공급 효소인 프로피오닐-CoA 트랜스퍼라아제 변이체.
- 서열번호 3의 유전자 서열에서 A1200G가 변이되고, 서열번호 3에 대응하는 아미노산 서열에서 Ala243Thr이 변이된 유전자 서열을 가지는 락틸-CoA 공급 효소인 프로피오닐-CoA 트랜스퍼라아제 변이체.
- 서열번호 3의 유전자 서열에서 A1200G가 변이되고, 서열번호 3에 대응하는 아미노산 서열에서 Asp257Asn이 변이된 유전자 서열을 가지는 락틸-CoA 공급 효소인 프로피오닐-CoA 트랜스퍼라아제 변이체.
- 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 프로피오닐-CoA 트랜스퍼라아제 변이체를 코딩하는 유전자.
- 제9항의 유전자를 함유하는 락테이트 중합체 또는 락테이트 공중합체 합성용 재조합 벡터.
- 제10항에 있어서, 상기 재조합 벡터는 락틸-CoA를 기질로 이용하여 락테이트 중합체 또는 락테이트 공중합체를 합성할 수 있는 서열번호 4의 폴리하이드록시알 카노에이트 합성효소 유전자(phaC1 Ps6 -19 300)를 추가로 함유하는 것을 특징으로 하는 재조합 벡터.
- 제10항의 재조합 벡터로 형질전환된 세포.
- 제11항의 재조합 벡터로 형질전환된 세포.
- 제12항의 세포를 배양하는 것을 특징으로 하는 락테이트 중합체 또는 락테이트 공중합체의 제조방법.
- 제13항의 세포를 배양하는 것을 특징으로 하는 락테이트 중합체 또는 락테이트 공중합체의 제조방법.
- 제14항에 있어서, 상기 배양은 하이드록시알카노에이트를 함유하는 환경에서 수행되는 것을 특징으로 하는 제조방법.
- 제16항에 있어서, 상기 하이드록시알카노에이트는 3-하이드록시부티레이트(hydroxybutyrate), 3-하이드록시발레르산(hydroxyvalerate), 4-하이드록시부티레이트(hydroxybutyrate), 탄소수가 6∼14개인 중간사슬 길이의 (D)-3-하이드록시 카르복실산(hydroxycarboxylic acid), 2-하이드록시프로피온산(hydroxypropionic acid), 3-하이드록시프로피온산(hydroxypropionic acid), 3-하이드록시헥산산(hydroxyhexanoic acid), 3-하이드록시헵탄산(hydroxyheptanoic acid), 3-하이드록시옥탄산(hydroxyoctanoic acid), 3-하이드록시노난산(hydroxynonanoic acid), 3-하이드록시데칸산(hydroxydecanoic acid), 3-하이드록시운데칸산(hydroxyundecanoic acid), 3-하이드록시 도데칸산(hydroxydodecanoic acid), 3-하이드록시테트라데칸산(hydroxytetradecanoic acid), 3-하이드록시헥사데칸산(hydroxyhexadecanoic acid), 4-하이드록시발레르산(hydroxyvaleric acid), 4-하이드록시헥산산(hydroxyhexanoic acid), 4-하이드록시헵탄산(hydroxyheptanoic acid), 4-하이드록시옥탄산(hydroxyoctanoic acid), 4-하이드록시데칸산(hydroxydecanoic acid), 5-하이드록시발레르산(hydroxyvaleric acid), 5-하이드록시헥산산(hydroxyhexanoic acid), 6-하이드록시도데칸산(hydroxydodecanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-4-펜텐산(pentenoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-4-trans-헥센산(hexenoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-4-cis-헥센산(hexenoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-5-헥센산(hexenoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-6-trans-옥텐산(octenoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-6-cis-옥텐산(octenoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-7-옥텐산(octenoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-8-노넨산(nonenoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-9-데센산(decenoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-5-cis-도데센산(dodecenoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-6-cis-도데센산(dodecenoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-5-cis-테트라데센 산(tetradecenoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-7-cis-테트라데센산(tetradecenoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-5,8-cis-cis-테트라데센산(tetradecenoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-4-메틸발레르산(methylvaleric acid), 3-하이드록시(hydroxy)-4-메틸헥산산(methylhexanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-5-메틸헥산산(methylhexanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-6-메틸헵탄산(methylheptanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-4-메틸옥탄산(methyloctanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-5-메틸옥탄산(methyloctanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-6-메틸옥탄산(methyloctanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-7-메틸옥탄산(methyloctanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-6-메틸노난산(methylnonanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-7-메틸노난산(methylnonanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-8-메틸노난산(methylnonanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-7-메틸데칸산(methyldecanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-9-메틸데칸산(methyldecanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-7-메틸-6-옥텐산(octenoic acid), 말산(malic acid), 3-하이드록시숙신산(hydroxysuccinic acid)-메틸에스테르, 3-하이드록시아디핀산(hydroxyadipinic acid)-메틸에스테르, 3-하이드록시스베린산(hydroxysuberic acid)-메틸에스테르, 3-하이드록시아젤라인산(hydroxyazelaic acid)-메틸에스테르, 3-하이드록시세바신산(hydroxysebacic acid,)-메틸에스테르, 3-하이드록시스베린산(hydroxysuberic acid)-에틸에스테르, 3-하이드록시세바신산(hydroxysebacic acid)-에틸에스테르, 3-하이드록시피메린산(hydroxypimelic acid)-프로필에스테르, 3-하이드록시세바신산(hydroxysebacic acid)-벤질에스테르, 3-하이드록시(hydroxy)-8-아세톡시옥탄산(acetoxyoctanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-9-아세톡시노난산(acetoxynonanoic acid), 페녹시(phenoxy)-3-하이드록시부티레이트(hydroxybutyric acid), 페녹시(phenoxy)-3-하이드록시발레르산(hydroxyvaleric acid), 페녹시(phenoxy)-3-하이드록시헵탄산(hydroxyheptanoic acid), 페녹시(phenoxy)-3-하이드록시옥탄산(hydroxyoctanoic acid), para-시아노페녹시(cyanophenoxy)-3-하이드록시부티레이트(hydroxybutyric acid), para-시아노페녹시(cyanophenoxy)-3-하이드록시발레르산(hydroxyvaleric acid), para-시아노페녹시(cyanophenoxy)-3-하이드록시헥산산(hydroxyhexanoic acid), para-니트로페녹시(nitrophenoxy)-3-하이드록시헥산산(hydroxyhexanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-5-페닐발레르산(phenylvaleric acid), 3-하이드록시(hydroxy)-5-시클로헥실부티레이트(cyclohexylbutyric acid), 3,12-디하이드록시도데칸산(dihydroxydodecanoic acid), 3,8-디하이드록시(dihydroxy)-5-cis-테트라데센산(tetradecenoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-4,5-에폭시데칸산(epoxydecanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-6,7-에폭시도데칸산(epoxydodecanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-8,9-에폭시(epoxy)-5,6-cis-테트라데칸산(tetradecanoic acid), 7-시아노(cyano)-3-하이드록시헵탄산(hydroxyheptanoic acid), 9-시아노(cyano)-3-하이드록시노난산(hydroxynonanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-7-플루오로헵탄산(fluoroheptanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-9-플루오로노난산(fluorononanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-6-클로로헥산산(chlorohexanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-8-클로로옥탄산(chlorooctanoic acid), 3-하이드록 시(hydroxy)-6-브로모헥산산(bromohexanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-8-브로모옥탄산(bromooctanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-11-브로모운데칸산(bromoundecanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-2-부텐산(butenoic acid), 6-하이드록시(hydroxy)-3-도데센산(dodecenoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-2-메틸부티레이트(methylbutyric acid), 3-하이드록시(hydroxy)-2-메틸발레르산(methylvaleric acid) 및 3-하이드록시(hydroxy)-2,6-디메틸-5-헵텐산(heptenoic acid)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 제조방법.
- 제17항에 있어서, 상기 하이드록시알카노에이트는 3-하이드록시부티레이트(hydroxybutyrate), 4-하이드록시부티레이트(hydroxybutyrate), 2-하이드록시프로피온산(hydroxypropionic acid), 3-하이드록시프로피온산(hydroxypropionic acid), 탄소수가 6∼14개인 중간사슬 길이의 (D)-3-하이드록시카르복실산(hydroxycarboxylic acid), 3-하이드록시발레르산(hydroxyvalerate), 4-하이드록시발레르산(hydroxyvaleric acid) 및 5-하이드록시발레르산(hydroxyvaleric acid)로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 제조방법.
- 제18항에 있어서, 상기 하이드록시알카노에이트는 3-하이드록시부티레이트(hydroxybutyrate)인 것을 특징으로 하는 제조방법.
- 제15항에 있어서, 상기 배양은 하이드록시알카노에이트를 함유하는 환경에서 수행되는 것을 특징으로 하는 제조방법.
- 제20항에 있어서, 상기 하이드록시알카노에이트는 3-하이드록시부티레이트(hydroxybutyrate), 3-하이드록시발레르산(hydroxyvalerate), 4-하이드록시부티레이트(hydroxybutyrate), 탄소수가 6∼14개인 중간사슬 길이의 (D)-3-하이드록시카르복실산(hydroxycarboxylic acid), 2-하이드록시프로피온산(hydroxypropionic acid), 3-하이드록시프로피온산(hydroxypropionic acid), 3-하이드록시헥산산(hydroxyhexanoic acid), 3-하이드록시헵탄산(hydroxyheptanoic acid), 3-하이드록시옥탄산(hydroxyoctanoic acid), 3-하이드록시노난산(hydroxynonanoic acid), 3-하이드록시데칸산(hydroxydecanoic acid), 3-하이드록시운데칸산(hydroxyundecanoic acid), 3-하이드록시 도데칸산(hydroxydodecanoic acid), 3-하이드록시테트라데칸산(hydroxytetradecanoic acid), 3-하이드록시헥사데칸산(hydroxyhexadecanoic acid), 4-하이드록시발레르산(hydroxyvaleric acid), 4-하이드록시헥산산(hydroxyhexanoic acid), 4-하이드록시헵탄산(hydroxyheptanoic acid), 4-하이드록시옥탄산(hydroxyoctanoic acid), 4-하이드록시데칸산(hydroxydecanoic acid), 5-하이드록시발레르산(hydroxyvaleric acid), 5-하이드록시헥산산(hydroxyhexanoic acid), 6-하이드록시도데칸산(hydroxydodecanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-4-펜텐산(pentenoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-4-trans-헥센산(hexenoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-4-cis-헥센산(hexenoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-5-헥센산(hexenoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)- 6-trans-옥텐산(octenoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-6-cis-옥텐산(octenoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-7-옥텐산(octenoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-8-노넨산(nonenoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-9-데센산(decenoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-5-cis-도데센산(dodecenoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-6-cis-도데센산(dodecenoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-5-cis-테트라데센산(tetradecenoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-7-cis-테트라데센산(tetradecenoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-5,8-cis-cis-테트라데센산(tetradecenoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-4-메틸발레르산(methylvaleric acid), 3-하이드록시(hydroxy)-4-메틸헥산산(methylhexanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-5-메틸헥산산(methylhexanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-6-메틸헵탄산(methylheptanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-4-메틸옥탄산(methyloctanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-5-메틸옥탄산(methyloctanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-6-메틸옥탄산(methyloctanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-7-메틸옥탄산(methyloctanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-6-메틸노난산(methylnonanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-7-메틸노난산(methylnonanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-8-메틸노난산(methylnonanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-7-메틸데칸산(methyldecanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-9-메틸데칸산(methyldecanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-7-메틸-6-옥텐산(octenoic acid), 말산(malic acid), 3-하이드록시숙신산(hydroxysuccinic acid)-메틸에스테르, 3-하이드록시아디핀산(hydroxyadipinic acid)-메틸에스테르, 3-하이드록시스베린 산(hydroxysuberic acid)-메틸에스테르, 3-하이드록시아젤라인산(hydroxyazelaic acid)-메틸에스테르, 3-하이드록시세바신산(hydroxysebacic acid,)-메틸에스테르, 3-하이드록시스베린산(hydroxysuberic acid)-에틸에스테르, 3-하이드록시세바신산(hydroxysebacic acid)-에틸에스테르, 3-하이드록시피메린산(hydroxypimelic acid)-프로필에스테르, 3-하이드록시세바신산(hydroxysebacic acid)-벤질에스테르, 3-하이드록시(hydroxy)-8-아세톡시옥탄산(acetoxyoctanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-9-아세톡시노난산(acetoxynonanoic acid), 페녹시(phenoxy)-3-하이드록시부티레이트(hydroxybutyric acid), 페녹시(phenoxy)-3-하이드록시발레르산(hydroxyvaleric acid), 페녹시(phenoxy)-3-하이드록시헵탄산(hydroxyheptanoic acid), 페녹시(phenoxy)-3-하이드록시옥탄산(hydroxyoctanoic acid), para-시아노페녹시(cyanophenoxy)-3-하이드록시부티레이트(hydroxybutyric acid), para-시아노페녹시(cyanophenoxy)-3-하이드록시발레르산(hydroxyvaleric acid), para-시아노페녹시(cyanophenoxy)-3-하이드록시헥산산(hydroxyhexanoic acid), para-니트로페녹시(nitrophenoxy)-3-하이드록시헥산산(hydroxyhexanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-5-페닐발레르산(phenylvaleric acid), 3-하이드록시(hydroxy)-5-시클로헥실부티레이트(cyclohexylbutyric acid), 3,12-디하이드록시도데칸산(dihydroxydodecanoic acid), 3,8-디하이드록시(dihydroxy)-5-cis-테트라데센산(tetradecenoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-4,5-에폭시데칸산(epoxydecanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-6,7-에폭시도데칸산(epoxydodecanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-8,9-에폭시(epoxy)-5,6-cis-테트라데칸산(tetradecanoic acid), 7-시아노(cyano)-3-하이드록시헵탄산(hydroxyheptanoic acid), 9-시아노(cyano)-3-하이드록시노난산(hydroxynonanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-7-플루오로헵탄산(fluoroheptanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-9-플루오로노난산(fluorononanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-6-클로로헥산산(chlorohexanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-8-클로로옥탄산(chlorooctanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-6-브로모헥산산(bromohexanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-8-브로모옥탄산(bromooctanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-11-브로모운데칸산(bromoundecanoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-2-부텐산(butenoic acid), 6-하이드록시(hydroxy)-3-도데센산(dodecenoic acid), 3-하이드록시(hydroxy)-2-메틸부티레이트(methylbutyric acid), 3-하이드록시(hydroxy)-2-메틸발레르산(methylvaleric acid) 및 3-하이드록시(hydroxy)-2,6-디메틸-5-헵텐산(heptenoic acid)로 구성된 군에서 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 제조방법.
- 제21항에 있어서, 상기 하이드록시알카노에이트는 3-하이드록시부티레이트(hydroxybutyrate), 4-하이드록시부티레이트(hydroxybutyrate), 2-하이드록시프로피온산(hydroxypropionic acid), 3-하이드록시프로피온산(hydroxypropionic acid), 탄소수가 6∼14개인 중간사슬 길이의 (D)-3-하이드록시카르복실산(hydroxycarboxylic acid), 3-하이드록시발레르산(hydroxyvalerate), 4-하이드록시발레르산(hydroxyvaleric acid) 및 5-하이드록시발레르산(hydroxyvaleric acid)로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 제조방법.
- 제22항에 있어서, 상기 하이드록시알카노에이트는 3-하이드록시부티레이트(hydroxybutyrate)인 것을 특징으로 하는 제조방법.
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