KR101014872B1

KR101014872B1 - 복합 김치유산균으로 발효한 콩 발효물을 유효성분으로 함유하는 식중독 예방 및 치료용 조성물

Info

Publication number: KR101014872B1
Application number: KR1020080078779A
Authority: KR
Inventors: 윤기천; 정인범
Original assignee: 두두원발효(주)
Priority date: 2008-08-12
Filing date: 2008-08-12
Publication date: 2011-02-15
Also published as: KR20100020123A

Abstract

본 발명은 복합 김치유산균으로 발효된 콩 발효물을 유효성분으로 함유하는 식중독 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 따른 복합 김치유산균으로 발효된 콩 발효물은 단일 김치유산균으로 발효된 콩 발효물에 비해 식중독을 일으키는 원인균에 대해 항균 효과가 뛰어나고, 또한 기존에 발효 배지로 사용되는 MRS 배지 등 고가의 배지를 대체하여 선택된 콩물에서 용이하게 대량으로 생산이 가능하여 식중독의 예방 및 치료에 유용하게 이용될 수 있다.

김치유산균, 콩 발효물, 식중독균

Description

복합 김치유산균으로 발효한 콩 발효물을 유효성분으로 함유하는 식중독 예방 및 치료용 조성물{A compound for treating or preventing intestinal disease comprising a soybean compound fermented by kimchi lactic acid bacteria complex}

본 발명은 콩 발효물을 유효성분으로 함유하는 식중독 예방 및 치료용 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 콩을 복합 김치유산균으로 발효하여 만든 콩 발효물을 유효성분으로 함유하는 식중독 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.

유산균은 자연계에 널리 존재하며 탄수화물을 혐기적으로 이용하여 유산을 생산한다. 유산균이 발견되는 자연환경은 다양한데, 사람이나 동물의 장내에 존재할 뿐 아니라, 다양한 채소와 과일에서도 발견되며 요구르트, 우리나라의 김치나 독일의 사우어크라우트(sauerkraut)와 같은 발효식품에서 그 발효과정에 중요한 역할을 담당한다. 이러한 유산균으로는 스트렙토코커스 속(Streptococcus sp.), 페디오코커스 속(Pediococcus sp.), 류코노스톡 속(Leuconostoc sp.), 락토바실러스 속(Lactobacillus sp.), 스포로락토바실러스 속(Sporolactobacilus sp.), 비피도박테리움 속(Bifidobacterium sp.) 등이 있다. 이들 유산균은 장내로 유입된 후 장내 상피세포에 착생하게 되어 유해 미생물의 장 정착을 방지하고 항균 물질을 분비함으로써 유해 미생물의 생육을 억제하고 설사와 변비를 개선할 뿐만 아니라, 면역활성 증진, 항암 작용 등의 효능을 가지고 있다. 유산균이 장내에 유입되어 자체적인 대사활동을 통해 분비하는 물질은 숙주에 많은 이로움을 주기 때문에 유산균을 이용한 많은 연구가 진행되고 있다.

김치유산균 중에 항균 활성을 보이는 류코노스톡 시트레움(Leuconostoc citreum), 류코노스톡 김치아이(Leuconostoc kimchii), 류코노스톡 메센테로이드스 (Leuconostoc mesenteroides), 락토바실러스 플랜타룸(Lactobacillus plantarum) 등이 보고 되었다.

콩은 식용작물로서 널리 재배된다. 줄기는 높이가 60∼100cm이고 곧게 서며 덩굴성인 품종도 있다. 뿌리에는 많은 근류(뿌리혹)가 있다. 잎은 어긋나고, 3장의 작은 잎이 나온 잎이며, 작은 잎은 달걀 모양 또는 타원 모양이고, 가장자리가 밋밋하다. 콩의 단백질에는 필수 아미노산이 골고루 들어 있고, 다른 식물성 단백질에서 부족 되기 쉬운 라이신(lysine)이 많이 함유되어 있다. 콩의 지방은 대부분 불포화 지방산인 리놀레산으로 혈중의 콜레스테롤의 축적을 방지하는 효과가 있다. 또한 콩에는 이소플라본(isoflavone)의 일종인 제니스테인(genistein), 다이드제인(daidzein), 글리시테인(glycitein) 등의 영양소가 있는데 이 물질들은 인체에 섭취되면 장내 미생물에 의해 당이 떨어져 나간 뒤에 소장에서 흡수된다. 흡수된 이소플라본 등은 특수한 생리작용을 하는데 항암효과 및 항산화 효과뿐만 아니라 혈중 콜레스테롤을 낮춰주어 각종 만성 질환의 예방과 치료에 효과적이다.

식중독 균의 감염 시 항생제에 의한 치료가 주가 되지만 항생제 남용으로 각종 항생제에 대한 내성이 증가되고 있다. 이러한 문제점을 해결하기 위하여 프로바이오틱(probiotics)에 대한 관심이 증대되고 있고, 프로바이오틱 균주를 이용하여 유익한 세균총의 장내 조성을 조절함으로써 중요한 예방 및 치료 효과를 획득하려는 시도가 이루어지고 있는 실정이다. 지금까지 주로 보고된 프로바이오틱 균주들로는 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei), 스트렙토코쿠스 써모필러스(Streptococcus thermophilus) 등이 있으나, 상기 균주들의 단독 배양에 의한 박테리오신 등의 배양산물에 의한 항균효과에 초점을 맞추어 연구가 진행되는 등의 한계가 있었으며, 이들의 대량생산에 대한 방안에 대해 연구가 미진하였다.

이에, 본 발명자들은 상기 종래기술들의 문제점들을 극복하기 위하여 예의 연구노력한 결과, 김치유산균 복합균주로 콩을 발효하여 콩 발효물을 제조하는 경우, 콩 성분의 분해가 촉진되어 인체에 유익한 유산균 대사산물을 대량 함유한 발효물을 제조할 수 있으며, 이렇게 제조된 발효물이 종래 단일 유산균으로 생산된 발효물에 비해 식중독을 일으키는 원인균에 대하여 뛰어난 항균효과를 보임을 확인하고, 본　발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명의 주된 목적은 식중독을 일으키는 원인균에 대하여 뛰어난 항균효과를 갖는 복합 김치유산균으로 발효한 콩 발효물을 유효성분으로 함유하는 식중독 예방 및 치료용 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적은 상기 복합 김치유산균으로 발효한 콩 발효물을 이용하여 식중독 균에 대한 예방 및 치료를 하는데 있다.

본 발명의 한 양태에 따르면, 본 발명은 복합 김치유산균으로 발효된 콩 발효물을 유효성분으로 함유하는 식중독 예방 및 치료용 조성물을 제공한다.

본 발명의 식중독 예방 및 치료용 조성물에서, 상기 복합 김치유산균(kimchi lactic acid bacteria)은 콩물을 발효하고, 식중독을 일으키는 원인균에 대해 항균작용을 하는 물질을 생성하여 분비하는 어떠한 복합 김치 유산균도 될 수 있으나, 바람직하게는 락토바실러스 플랜타룸(Lactobacillus plantarum), 류코노스톡 김치아이(Leuconostoc kimchii), 류코노스톡 시트레움(Leuconostoc citreum), 류코노스톡 메센테로이드스(Leuconostoc mesenteroides), 및 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei)로 이루어진 군에서 선택된 둘 이상의 김치 유산균을 포함하는 복합균주인 것이 좋고, 더욱 바람직하게는 상기 균주들을 모두 포함하는 복합균주인 것이 좋다. 상기 균주 이외에도 류코노스톡 가시코미타툼(Leuconostoc gasicomitatum), 류코노스톡 락티스(Leuconostoc lactis), 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis) 락토바실러스 엑시도필루스(Lactobacillus acidophilus), 비피도박테리움 론굼(Bifidobacterium longum), 스트렙토코커스 써머필러스(Streptococcus thermophilus) 및/또는 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus)를 더 포함하여 복합균주를 배양하는 경우 콩물의 발효를 촉진시켜 인체에 유익한 대사산물을 다량 생성하고 배출시킬 수 있으며, 식중독을 일으키는 원인균에 대한 항균능력을 배가시킬 수 있다. 본 발명에서 상기 콩물은 물에 불린 콩을 갈아서 만든 두유를 의미하며, 김치유산균의 접종 시 잡균의 생장을 억제하기 위해 100℃ 이상에서 30분 이상 바람직하게는 1시간 이상 가열하는 것이 좋다.

본 발명에서 복합균주를 사용하여 콩 발효물을 제조하는 것은 유산균의 종류마다 그 발효 메커니즘이 상이하여 상호 보완을 통해 풍부한 발효산물을 만들 수 있기 때문이다. 구체적으로 발효 메커니즘의 상이함의 예를 들면 같은 부류의 유산균이라 하더라도 포도당을 이용하여 생육할 때에 젖산(Lactic acid)을 주로 생성하는 스트렙토코커스 김치 유산균이 있는가 하면 젖산과 더불어 에탄올과 이산화탄소를 생성하는 류코노스톡 김치 유산균이 있고, 젖산과 초산을 생성하는 비피도박테리움과 같은 유산균이 있다. 본 발명자들은 김치에서 채취한 수십 가지의 김치 유산균 중에서 콩물에서 배양할 때 생육이 촉진되고, 대사산물을 외부로 배출하여 많은 양의 유기 물질을 생성하는 김치 유산균들을 분리하고, 이들을 혼합 배양하였을 때 상호 보완적으로 유기물질을 생산하는 김치 유산균의 조합을 발견하고 본 발명 의 식중독 예방 및 치료에 효과가 있는 콩 발효물을 완성하였다. 본 발명의 하기 실시예에서 본 발명자들은 김치유산균 복합균주로 콩을 발효하여 콩 발효물을 제조하였다. 그 결과 단일한 유산균으로 발효하는 것보다 복합유산균을 사용하는 경우에 발효되는 콩의 성분이 분해되는 정도가 높아지고 유산균 대사산물도 더 많이 만들어졌다. 예를 들어 비타민 C의 경우를 들어보면 한 가지 유산균을 사용하여 콩을 발효한 경우엔 10mg/100ml 이하로 만들어지지만 복합유산균을 사용하여 발효하면 30mg/100ml 이상 만들어진다.

본 발명의 식중독 예방 및 치료용 조성물에서, 상기 콩 발효물은 콩물(두유)에 김치유산균을 접종하여 20 ~ 40℃에서 10내지 30시간 발효된 것이 김치유산균의 생장이 증가하고, 많은 발효 대사산물을 배출할 수 있어서 좋고, 더욱 바람직하게는 25 ~ 35℃에서 20내지 30시간 발효하는 것이 좋으며, 가장 바람직하게는 30℃에서 24시간 발효하는 것이 좋다.

본 발명의 식중독 예방 및 치료용 조성물에서, 상기 식중독의 예방 및 치료는 식중독을 일으키는 어떠한 원인균에 대한 항균작용에 의하여 수행될 수 있으나, 바람직하게는 대장균(E. coli), 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 쉬젤라 플렉네리(Shigella flexneri), 및 살모넬라 티피뮤리움(Salmonella typhimurium)으로 이루어진 군에서 선택된 식중독 균에 대한 항균작용에 의해 수행된다.

본 발명의 식중독 예방 및 치료용 조성물에서, 상기 조성물은 복합 김치유산균으로 발효된 콩 발효물이 그 자체적으로 식중독 균에 대하여 항균효과를 갖고 있 으므로 식중독균에 대한 예방 및 치료 효과를 지니는 기능성 식품 조성물로 이용 될 수 있고, 식중독균에 대한 예방 및 치료 효과가 있는 천연추출물들을 함유하는 다른 기능성 식품에 첨가하거나 이러한 천연물들을 추출하는데 사용하는 형태로도 이용이 가능하다.

본 발명의 기능성 식품 조성물을 건강 기능식품, 건강음료 또는 음료첨가제로 사용 할 수 있으며, 상기 기능성 식품 조성물은 식품 총 중량에 대하여 0.01 내지 80 중량% 혼합하여 식중독균의 치료 및 예방을 목적으로 한 기능성 음료, 환제, 정제 또는 상기 성분을 건조 분말화하여 충진한 연질 또는 경질 캡슐제의 형태로 이용하는 것이 바람직하다. 본 발명의 추출물들을 포함하는 조성물은 식중독균의 치료 및 예방을 위한 약제, 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 복합 김치유산균으로 발효한 콩 발효물을 첨가 할 수 있는 식품으로는 예를 들어 각종 식품류, 캔디, 초코릿, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있고 분말, 과립, 정제, 환제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.

본 발명의 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물을 함유하는 외에는 액체성분에는 특별한 제한점은 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 포도당, 과당 등의 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스 등의 다이사카라이드, 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 폴리사카라이드, 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당 알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연향미제(타우마틴, 스테비아 추출물. 예를 들어 헤바우디오시드 A, 글리 시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100ml당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g이다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 증진제(치즈, 초코릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 본 발명의 복합 김치유산균으로 발효한 콩 발효물은 독성 및 부작용이 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용 할 수 있다.

본 발명의 복합 김치유산균으로 발효된 콩 발효물을 유효성분으로 함유하는 식중독 예방 및 치료용 조성물은 식중독의 치료 또는 예방을 위한 목적으로 식품 또는 음료에 첨가 될 수 있다. 이때 식품 또는 음료 중에 본 발명의 상기 식품 조성물의 양은 일반적으로 전체 식품 중량의 1 내지 70 중량%로 가할 수 있으며, 음료 조성물에는 100ml를 기준으로 0.02 내지 30 g, 바람직하게는 0.3 내지 5g의 비율로 본 발명의 식품조성물을 가할 수 있다. 상기 식품은 과일, 야채, 과일이나 야채의 건조제품이나 절단제품, 과일쥬스, 야채쥬스, 이들의 혼합 주스이거나, 산성음료수를 포함하는 음료류, 쿠키, 사탕, 카라멜, 껌 등과 같은 제과류, 제빵류, 아 이스크림 제품류, 다류, 요구르트와 같은 발효류식품, 유가공식품, 양념류, 주류, 통조림 또는 병조림류, 면류, 축산가공식품, 수산가공식품, 미생물발효식품, 두류식품, 곡류식품, 육가공류, 감초류, 또는 허브류 중 어느 하나 또는 하나 이상이다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 김치유산균으로 발효된 콩 발효물을 유효성분으로 함유하는 식중독 예방 및 치료용 조성물과 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 식중독의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다. 본 발명의 김치유산균으로 발효된 콩 발효물을 포함하는 식중독 예방 및 치료 효과를 갖는 약학 조성물의 투여방법은 제형에 따라 용이하게 선택될 수 있으며, 산제, 정제, 환제, 과립제, 당의정, 경질 또는 연질의 캡슐제, 액, 에멀젼, 현탁액, 시럽제, 엘릭서, 외용제, 좌제, 멸균 주사용액 등의 형태로 제형화 되어 전신 또는 국소적으로 경구 또는 국소적으로 경구 또는 비경구 투여될 수 있으며 특히 경구 투여가 바람직하다. 경구투여를 위한 고형 제형에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제형은 김치유산균으로 발효된 콩 발효물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 슈크로스, 락토오스, 또는 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제형으로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제형에는 멸균된 수용액, 비수성용 제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌클리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 본 발명의 식중독의 예방 또는 치료 효과를 갖는 약학 조성물은 조성물 총중량 대비 김치유산균으로 발효된 콩 발효물은 1 내지 80 중량%로 포함하는 것이 좋고, 더욱 바람직하게는 10 내지 50 중량 %로 포함되는 것이 좋다. 본 발명의 김치유산균으로 발효된 콩 발효물을 포함하는 약학 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 본 발명의 김치유산균으로 발효된 콩 발효물을 포함하는 약학 조성물은 우수한 식중독 치료 효과를 제공할 뿐만 아니라, 약물에 의한 독성 및 부작용도 없어 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물의 투여량은 성인 기준으로 0.01-10g/kg 범위 내이다.

이하, 본 발명의 식중독 예방 및 치료용의 제조방법을 구체적으로 설명한다. 이때, 사용되는 기술 용어 및 과학 용어에 있어서 다른 정의가 없다면, 이 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 통상적으로 이해하고 있는 의미를 가진다. 또한, 종래와 동일한 기술적 구성 및 작용에 대한 반복되는 설명은 생략하기로 한다.

종균(복합 김치유산균 ) 배양

배지를 가열 멸균하고 김치유산균 락토바실러스 플랜타룸(Lactobacillus plantarum), 류코노스톡 김치아이(Leuconostoc kimchii), 류코노스톡 시트레움(Leuconostoc citreum), 류코노스톡 메센테로이드스(Leuconostoc mesenteroides), 류코노스톡 가시코미타툼(Leuconostoc gasicomitatum), 류코노스톡 락티스(Leuconostoc lactis), 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) 및 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis)를 각각 접종하여 종균을 배양한다. 이때 배지의 가열 멸균은 121℃에서 15분 이상 하는 것이 좋고, 김치유산균 접종량은 1× 10⁴cfu/ml 이상이 되게 하고 배양온도는 20~40℃, 배양시간은 10~30시간, 배지는 MRS 배지를 사용하는 것이 바람직하다. 그리고 배양은 정치 배양한다.

콩 발효물을 유효성분으로 함유하는 식중독 예방 및 치료용 조성물의 제조

콩물을 100℃에서 1~2시간 가열하여 멸균하고 20～40℃로 식힌 다음 여기에 상기 종균 배양단계에서 제조된 8가지의 종균에서 수와 종류를 선택하여 동일한 양으로 혼합된 복합 김치유산균을 2~4%(v/v)되게 접종한 다음 20～40℃에서 10～30시간 발효한다. 이때, 10시간 미만을 발효하면 발효대사산물이 충분히 만들어지지 않으며 30시간을 초과하여 발효하면 도리어 대사산물의 농도가 떨어지기 때문에 상술한 발효 시간 범위 내에서 발효하는 것이 바람직하다. 하지만, 본 발명의 목적에 부합되는 것이라면 발효 시간은 변경될 수 있다.

발효가 끝난 콩 발효물은 65 ~ 75℃에서 10분간 저온 살균한다. 본 발명자들은 상기 콩 발효물로 식중독균에 대해 억제 활성실험을 수행하였고, 본 발명의 상기 복합 김치유산균으로 발효된 콩 발효물이 식중독을 일으키는 원인균인 대장균(E. coli), 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 쉬젤라 플렉네리(Shigella flexneri), 및 살모넬라 티피뮤리움(Salmonella typhimurium)에 대하여 항균 활성을 가짐을 확인하였다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.

실시예 1. 김치유산균 종균 배양

MRS 배지를 121℃에서 20분간 멸균하고, 식물성 김치유산균인 락토바실러스 플랜타룸(Lactobacillus plantarum), 류코노스톡 김치아이(Leuconostoc kimchii), 류코노스톡 시트레움(Leuconostoc citreum), 류코노스톡 메센테로이드스(Leuconostoc mesenteroides), 류코노스톡 가시코미타툼(Leuconostoc gasicomitatum), 류코노스톡 락티스(Leuconostoc lactis), 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) 및 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis)를 각각 5× 10⁴ cfu/ml 되게 접종하여 30℃에서 24시간 배양하여 8종의 종균을 제조하였다.

실시예 2. 단일 김치 유산균 발효에 의한 콩 발효물의 제조

물에 불린 콩을 갈아서 만든 콩물을 100℃에서 1시간 가열하여 멸균하고 30℃로 식혔다. 실시예 1에서 제조한 8종의 종균을 각각 콩물에 3%(v/v)되게 접종하였다. 접종 후에 30℃에서 24시간 발효하여 단일 김치유산균 발효된 콩 발효물을 제조하였다. 이렇게 단일 김치유산균으로 발효된 콩 발효물을 70℃에서 10분간 저온 살균하여 식중독균에 대한 억제 활성 비교 실험에 사용하였다.

실시예 3. 복합 유산균 발효에 의한 콩 발효물의 제조

3-1. 2종의 복합 유산균 발효

물에 불린 콩을 갈아서 만든 콩물을 100℃에서 1시간 가열하여 멸균하고 30℃로 식혔다. 실시예 1에서 제조한 종균 중에서 선택된 2종[각각 락토바실러스 플랜타룸과 락토바실러스 사케이; 류코노스톡 김치아이와 류코노스톡 메센테로이드스; 류코노스톡 시트레움과 락토바실러스 사케이; 락토바실러스 플랜타룸과 류코노스톡 시트레움; 류코노스톡 메센테로이드스와 락토바실러스 사케이; 그리고 류코노스톡 김치아이와 류코노스톡 시트레움의 조합]의 종균을 동일한 양으로 혼합하여 복합 김치유산균을 제조하고 콩물에 3%(v/v)되게 접종하였다. 접종 후에 30℃에서 24시간 발효하여 5종의 김치유산균 발효된 콩 발효물을 제조하였다. 이렇게 복합 김치유산균으로 발효된 콩 발효물을 70℃에서 10분간 저온 살균하여 콩 발효물을 유효성분으로 함유하는 식중독 예방 및 치료용 조성물을 제조하였다.

3-2. 3종의 복합 유산균 발효

상기 실시예 1에서 제조된 8종의 복합 김치 유산균 중에서 선택된 3종의 김치유산균[락토바실러스 플랜타룸, 류코노스톡 시트레움, 및 류코노스톡 메센테로이드스; 락토바실러스 플랜타룸, 류코노스톡 시트레움, 및 락토바실러스 사케이]을 동일한 양으로 혼합하여 접종한 것 외에는 상기 실시예 3-1의 방법과 동일한 방법으로 식중독 예방 및 치료용 조성물을 제조하였다.

3-3. 5종의 복합 유산균 발효

상기 실시예 1에서 제조된 8종의 복합 김치 유산균 중에서 선택된 5종의 김치유산균[락토바실러스 플랜타룸(Lactobacillus plantarum), 류코노스톡 김치아이(Leuconostoc kimchii), 류코노스톡 시트레움(Leuconostoc citreum), 류코노스톡 메센테로이드스(Leuconostoc mesenteroides), 및 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei)]을 동일한 양으로 혼합하여 접종한 것 외에는 상기 실시예 3-1의 방법과 동일한 방법으로 식중독 예방 및 치료용 조성물을 제조하였다.

3-4. 8종의 복합 유산균 발효

상기 실시예 1에서 제조된 8종의 복합 김치 유산균[락토바실러스 플랜타룸(Lactobacillus plantarum), 류코노스톡 김치아이(Leuconostoc kimchii), 류코노스톡 시트레움(Leuconostoc citreum), 류코노스톡 메센테로이드스(Leuconostoc mesenteroides), 류코노스톡 가시코미타툼(Leuconostoc gasicomitatum), 류코노스톡 락티스(Leuconostoc lactis), 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) 및 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis)]을 동일한 양으로 혼합하여 접종한 것 외에는 상기 실시예 3-1의 방법과 동일한 방법으로 식중독 예방 및 치료용 조성물을 제조하였다.

실시예 4. 콩이 아닌 배지에서의 복합 유산균 발효액의 제조

실시예 2와 동일하게 발효하되 콩물이 아닌 MRS 배지를 사용하였고 단일 김치유산균이 아닌 상기 실시예 1의 8종의 복합 김치유산균 발효액을 제조하였다. 제조한 복합 유산균 발효액을 70℃에서 10분간 저온 살균하여 식중독균에 대한 억제 활성 비교 실험에 사용하였다.

상기 실시예 2 ~ 4의 실험 조건을 표 1에 요약하였다.

[표 1]. 접종된 김치 유산균의 조합

실시예 5. 식중독균에 대한 억제활성 실험

식중독 예방 및 치료용에 의한 식중독균의 생장억제실험은 구로이와 등의 문헌(Kuroiwa et al.,감염증학지,64,257,1990)을 변형하여 페이퍼 디스크(Paper Disc) 법으로 실시하였다. 배양 후 나타난 억제환의 직경을 측정하여 식중독균에 대한 억제능력을 비교하였다. 항균력 평가 시 사용된 미생물은 한국생명공학연구소에서 분양받아 사용하였으며, E.coli(KCTC 2441), Staphylococcus aureus(KCTC 1621), Shigella flexneri(KCTC 2008), Salmonella typhimurium(KCTC 2514)에 대하여 실험을 수행하였다. 상기 식중독균을 NB(nutrient broth) 액체 배지에서 배양한(37℃,18시간)후 배양액 0.1ml을 취하여 NA(nutrient agar) 고체 배지에 도말하였다. 도말된 배지를 건조시킨 다음 지름 8 mm의 페이퍼 디스크를 배지 위에 올려놓았다. 실시예 3에서 제조된 복합 김치유산균으로 발효한 식중독 예방조성물을 페이퍼 디스크 위에 각각 30㎕를 접종하고, 배양(37℃, 24시간)하였다. 일정시간의 배양이 끝난 다음 형성된 생육 억제환(clear zone)의 지름을 측정하여 본 발명 조성물에 의한 식중독균의 억제정도를 평가하였고, 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다. 이와 함께 유산균 복합 발효의 효과를 확인하기 위해 대조구로 실시예 2에서 제조한 단일 김치유산균 발효 콩 발효물을 동일한 방식으로 평가하였다. 또한 비교 실험으로 실시예 4에서 제조한 일반적인 유산균 배지인 MRS배지에서 복합 발효한 것도 평가하였다.

[표 2]. 항균력 평가

그 결과 단일 김치유산균으로 발효된 콩발효물에 비해 본 발명의 복합 김치유산균으로 발효된 콩 발효물이 식중독 원인균에 대한 항균 활성이 뛰어남을 알 수 있었다. 또한 2 ~ 3 종의 김치유산균을 복합발효하여 생성된 콩 발효물에 비하여 5종 및 8종의 복합균주로 발효한 콩 발효물 식중독균에 항균효과가 월등히 높았다. 그리고, 일반적인 유산균 배지에 복합 발효한 것보다도 김치유산균 복합발효 콩 발효물의 항균력이 높아 콩물을 배지로 사용하여 김치유산균을 접종하여 생성된 콩 발효물에 식중독균에 대한 항균효과가 있는 물질이 다량 포함되어 있음을 알 수 있었다.

이상 설명한 바와 같이, 본 발명에 따른 복합 김치유산균으로 발효된 콩 발효물은 단일 김치유산균으로 발효된 콩 발효물에 비해 식중독을 일으키는 원인균에 대해 항균 효과가 뛰어나고, 또한 기존에 발효 배지로 사용되는 MRS 배지 등 고가의 배지를 대체하여 선택된 콩물에서 용이하게 대량으로 생산이 가능하여 식중독의 예방 및 치료에 유용하게 이용될 수 있다.

Claims

락토바실러스 플랜타룸(Lactobacillus plantarum), 류코노스톡 김치아이(Leuconostoc kimchii), 류코노스톡 시트레움(Leuconostoc citreum), 류코노스톡 메센테로이드스(Leuconostoc mesenteroides), 및 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei)로 이루어진 군에서 선택된 둘 이상의 김치 유산균의 복합균주로 발효된 콩 발효물을 유효성분으로 함유하는 식중독 예방 및 치료용 조성물.
삭제
제1항에 있어서, 상기 김치 유산균의 복합균주는 류코노스톡 가시코미타툼(Leuconostoc gasicomitatum), 류코노스톡 락티스(Leuconostoc lactis), 및 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 김치유산균을 더 포함하는 복합균주인 것을 특징으로 하는 식중독 치료 및 예방용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 발효는 20 ~ 40℃에서 10내지 30시간 발효하는 것을 특징으로 하는 식중독 치료 및 예방용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 식중독의 예방 및 치료는 대장균(E. coli), 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 쉬젤라 플렉네리(Shigella flexneri), 및 살모넬라 티피뮤리움(Salmonella typhimurium)으로 이루어진 군에서 선택된 식중독 균에 대한 항균작용에 의해 수행되는 것을 특징으로 하는 식중독 치료 및 예방용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 기능성 식품인 것을 특징으로 하는 식중독 치료 및 예방용 조성물.
제1항에 따른 조성물과 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 식중독 치료 및 예방용 조성물.