KR100990962B1 - 바실러스 낫토균을 이용한 발효 울금 제조법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 바실러스 낫토균을 이용한 발효울금 및 그의 제조방법에 관한 것으로, 낫토균으로 울금을 발효함으로써 울금의 기호성 향상 및 낫토키나제의 작용으로 울금의 흡수율을 증가시켜 체내이용율을 증가시킬 수 있는 발효울금 및 그의 제조방법에 관한 것이다.
울금, 낫토균, 발효

Description

바실러스 낫토균을 이용한 발효 울금 제조법{The method of fermented curcuma aromatica by bacillus natto}
본 발명은 바실러스 낫토균을 이용한 발효 울금 제조법에 관한 것으로, 더욱 구체적으로는 울금을 주성분으로 하는 울금 배지를 사용하고, 바실러스 낫토균을 이용하여 발효시킴으로서, 새로운 발효울금을 얻을 수 있는 발효울금 및 그의 제조방법에 관한 것이다.
울금(Curcuma aromatica Salisb, CA)은 생강과에 속하는 다년생 숙근성 초본식물로서 생강과 식물인 강황, 울금, 아출의 덩이뿌리이다. 울금의 뿌리, 줄기의 주성분은 항산화와 세포보호 역할을 수행하는 curcumin (Food Research International , 32, 487-490, 1999) 과 그것의 유사물질인 demethoxycurcumin,bisdemethoxycurcu
*min, cyclocurcumin, calebin 등이 전체 4~6%를 차지하며 이담효과를 나타내는 p-tolymethylcarbionol과 기타 지방유, 전분, 과당을 함유하고 있다. 울금은 염료와 식품 착색재로 사용되었으며 인도 카레의 원료이다. 일본에서는 단무지 착색제로 울금을 이용하고 있으며 특히 세계적 장수마을로 알려진 일본 오키나와 일대에 서 특용작물로 재배돼 건강식품으로 애용되고 있다. 그러나 울금은 생체이용율이 매우 낮은 것으로 알려져 있으며 (Clin . Cancer Research, 7, 1894~1900, 2001) 특히 울금의 주요성분인 curcumin은 장속의 미생물에 의해 tetrahydrocurcumin(THC)이라는 물질로 변화하여 흡수되는 것으로 보고되었다. (Drug Metabol ., Dispos ., 27(1), 486, 1999)
바실러스 낫토균(Bacillus natto)은 짚에 존재하며, 짚 한 묶음에 약 1천만개가 붙어있으며 균의 크기는 길이 2.33마이크론, 폭은 1마이크론이고 종의 보존을 위해 포자를 형성하는 성질을 가지고 있다. 원래, 짚에 붙어있는 잡균의 일종이지만 바실러스 낫토균 외의 잡균은 짚의 건조과정에서 햇볕 등의 작용으로 멸균되거나 장에 도달되더라도 고작 이틀의 수명을 가진 반면, 낫토균은 1주일이나 살아 남는다. 또한 이 균은 낫토키나아제(Nattokinase)라는 효소를 생성하며 낫토키나아제는 장내 생존율이 높고 정장작용을 하는 것으로 알려져 있다. 특히 낫토키나아제는 혈전용해능력(Alternative & complementary Therapy, 8(3), 157~164, 2002) 이 우수하며 뇌경색, 심근경색 등을 예방하는 것으로 알려져있다.
울금 발효에 관련된 종래 기술에는 황국 (Aspergillus oryzae, Aspergillus soyzae)을 사용한 '울금 발효방법 및 울금을 주재료로 하는 식품조성물 제조방법(출원번호 10-2003-0075366)'과 '유산균(Lactobacillus , Lueconostoc , Streptococcus)을 이용한 발효 강황 조성물 및 그 제조방법(출원번호 1-2005-0069028)'이 있다. 종래 기술에서 사용한 균들은 혼합균으로서 황국은 Aspergillus oryzaeAspergillus soyzae가, 유산균은 Lactobacillus , Lueconostoc, Streptococcus가 혼합된 균들을 사용하여 울금 발효에 사용되어 왔으며 바실러스 낫토균을 사용하여 울금을 발효한 예는 없었다.
본 발명은 바실러스 낫토균을 이용한 발효울금 및 그의 제조방법에 관한 것으로, 낫토균으로 울금을 발효함으로써 울금의 기호성 향상 및 낫토키나제의 작용으로 울금의 흡수율을 증가시켜 체내이용율을 증가시킬 수 있는 발효울금 및 그의 제조방법에 관한 것이다.
이에 본 발명에서는 바실러스 낫토균을 사용하여 발효한 울금에서 curcumin이 장내미생물에 의해 변하여 흡수되는 tetrahydrocurcumin을 확인하여 발효울금이 체내흡수율을 증가시킬 수 있음을 확인한 후 본 발명을 완성하고자 한다.
또한 본 발명에서는 바실러스 낫토균을 사용하여 울금을 발효시킴으로서 장내 유용 미생물을 활성화뿐만 아니라 혈전용해 효소인 낫토키나아제의 작용에 따른 콜레스테롤 감소 기대효과도 얻을 수 있게 하는 울금 발효방법 및 울금을 주재료로 하는 식품 및 의약품 조성물 제조방법에 관한 것이다.
이하, 본 발명의 구체적인 구성 및 작용을 설명한다.
우선, 본 발명은 바실러스 낫토균을 이용한 발효울금 및 그의 제조방법에 관한 것으로서, 바실러스 낫토균을 배양시키는 배양단계, 발효 조 내부에 울금 분말을 배지로 조제하여 멸균하는 멸균단계, 상기 배양된 바실러스 낫토균을 발효조로 이송 접종시키는 접종단계, 상기 접종을 거친 후 25℃~40℃에서 4~14일간 발효시키는 발효단계를 포함한 울금 발효 제조방법에 관한 것이다. 이를 보다 구체적으로 살펴보면 다음과 같다.
상기 균 배양단계에 사용되는 바실러스 낫토균은 Bacillus Natto로서 분류되며 낫토키나제를 생산할 수 있는 미생물이면 어떤 미생물도 사용할 수 있다. 시판하는 낫토로부터 분리한 바실러스 낫토를 사용할 수 있다. 바실러스 낫토에 사용되는 배지는 특별히 제한되지 않지만 전분, 글루코스, 자당 등의 탄소원, 탈지 대두, 고기 추출물 등의 질소원, 탄산칼슘, 염화마그네슘 등의 무기염, 필요에 따라, 지방산 등을 배지성분으로 사용하여 바실러스 낫토를 배양한다. 이들 배지에 사용되는 성분은 식품 첨가물 등급인 것이 바람직하다. 바실러스 낫토의 배양방법에는 특별히 제한되지 않지만, 대량으로 생산하기 위해서는 통기성 교반 배양이 바람직하다. 배양온도는 바실러스 낫토가 생육할 수 있는 온도이면 특별한 제한은 없지만, 30~45℃가 바람직하며, 37℃ 전후가 가장 바람직하다. 배양기간은 3 내지 4일이 바람직하다.
상기 멸균 및 접종단계의 울금은 정제수를 5~80% 비율로 혼합하고, 울금 배지를 멸균온도 95~121℃에서 20~30분간 멸균하고, 25~35℃가 되도록 급냉 한 후 상기 바실러스 낫토균 배양단계에서 배양된 바실러스 배양액을 상기 발효조로 이송하여 접종시키는 방식으로 진행된다.
상기 발효단계는 바실러스 낫토균이 접종된 울금 분말 배지에 발효조의 온도가 약 30~45℃ 정도로 유지된 상태에서, 약 100rpm 정도의 회전 속도로 유지하면서 4~14일간 발효시킨다. 이때 pH 변화로 바실러스 낫토균의 배양상태를 확인하는 바, 기준조건은 pH 3.5이하, 낫토키나제 활성이 약 20 내지 40U/mL 일 때 발효를 종료시킨다. 발효가 종료되면 상기 발효물을 여과시키고, 건조하여 수분함량을 5%이하로 건조하여 최종 발효울금 분말을 완성시킨다.
또한, 낫토키나제의 활성 정량은 하기의 방법에 따른다.
낫토키나제를 피브린에 작용시키고 피브린의 분해에 따라 증가하는 산 가용성 저분자 분해산물의 양을 자외선 (275nm) 흡광도를 측정하여 구하는 방법으로 측정한다. 50mM 붕산 완충액 (pH 8.5, 150mM NaCl을 함유) 10mL에 피브리노겐 72mg을 용해시켜 0.72% 피브리노겐 수용액을 조제한다. 트롬빈을 50mM 붕산 완충액에 용해시켜 1000U/mL의 농도로 조제하고, 사용할 때에 동일한 붕산 완충액을 사용하여 50배로 희석한다.
시험관에 50mM 붕산 완충액 1.4ml 및 피브리노겐 수용액 0.4ml를 취하고, 37℃±0.3℃의 항온 수조에서 5분 동안 가온한 다음, 트롬빈 용액 0.1ml를 가하여 교반한다. 혼합액을 10분 동안 이러한 항온 수조에 방치한 다음, 시료 용액 0.1mL를 혼합액에 가하고 항온 수조에서 1시간 방치한 후에 0.2M 트리클로로아세테이트 용액 2ml를 가하여 교반한 다음, 추가로 20분 동안 방치한다. 이러한 반응액을 원심분리 하여 상등액의 275nm에서의 흡광도(Ar)를 측정한다.
한편, 50mM 붕사 완충액 1.4ml 및 피브리노겐 수용액 0.4ml를 취하고, 37℃±0.3℃의 항온 수조에서 5분 동안 가온한 다음, 트롬빈 용액 0.1ml를 가하여 교반한다. 혼합액을 10분동안 이러한 항온 수조에 방치한 다음, 0.2M 트리클로로아세테이트 용액 2ml를 혼합액에 가하여 교반한다. 다음에, 시료 용액을 0.1ml 가하여 교반하고 20분 동안 방치한다. 이러한 반응액을 원심분리하여 상등액의 275nm에서의 흡광도(Ac)를 측정하고 대조군으로 한다.
낫토키나제의 활성(A)은 하기 식으로 구한다.
A(U/ml)= [(Ar-Ac)/(0.01×60×0.l)]×D
상기식에서, D는 희석 배율이다.
이와 같은 본 발명은 다음의 실시 예에 의거하여 더욱 상세히 설명하겠는바, 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명은 바실러스 낫토균(Bacillus natto)을 이용하여 울금을 발효시키는 제조방법에 관한 것으로서, 울금의 주요성분인 커큐민의 많은 생리활성이 알려지면서 식품, 의약품 및 화장품 등 여러 용도로 사용될 수 있는 생약으로서 그 활용가치가 높아지고 있다. 울금의 기호성을 개선하기 위하여 종래에 사용되지 않았던 균인 바실러스 낫토균으로 발효하여 울금의 기호성을 개선하였으며 pH3.5 이하, 낫토키나아제 활성이 20 내지 40일 때 발효를 종료함으로서 울금의 주요성분의 체내 흡 수율을 증가시킬 수 있는 물질로 전환됨을 확인하여 울금의 체내흡수율을 높여 울금 및 낫토키나제의 약리작용을 기대할 수 있는 기능성 소재인 발효울금 및 그의 제조방법을 제공하여 울금의 고부가가치를 높일 수 있다.
실시 예
1. 균 배양공정
폴리펩톤 중량 1%, 글루코스 중량 1%, 고기추출물 중량 0.5% 및 NaCl 중량 0.2%를 함유하는 배지를 넣고 바실러스 낫토를 접종한 다음, 37℃에서 18시간 배양한다. 수득한 배양액을 동일한 조성의 배지를 함유하는 씨드(seed) 배양조에 접종하고, 22시간 동안 배양하여 씨드 배양액을 수득한다.
2. 멸균공정
울금의 이물질을 제거한 후 분쇄하여 분말화한 울금 분말 100g을 121℃에서 20분간 멸균한 다음 25~35℃가 되도록 급냉 한 후 1L의 정제수를 첨가하여 본 배양 배지를 준비한다.
3. 본배양 공정
상기 멸균공정 단계에서 준비된 본 배양 배지에 상기 균 배양공정에서 준비한 씨드 배양액을 첨가하여 온도 37℃에서 7일간 배양한다. 수득된 배양액 중에는 25U/ml의 낫토키나제가 함유되어 있으며 pH는 3.5이하이다. 상기 발효에 의해 제조된 발효울금과 발효시키지 않은 울금의 주요성분인 curcumin의 성분 변화를 HPLC로 확인하였다. (도면)
[분석조건]
1. 컬럼: Capcell pak C18 4.6*150mm (5um)
2. 이동상: A) 40% Acetonitrile B) 80% Acetonitrile
3. UV: 280nm
4. Injection volume: 10uL
5. F. Rate: 1.00mL/min
[Tetrahydrocurcumin(THC) 제조]
THC는 표준품 curcumin을 PtO2를 촉매로 사용하여 Uehara(Chem . Pharm . Bull., 35, 3298-3304, 1987)방법에 의해 수소화반응을 진행하여 얻어진 원료를 사용하여 THC를 확인하였다.

Claims (4)

  1. 낫토키나아제를 생산할 수 있는 바실러스 낫토균(Bacillus natto)을 배양하는 단계;
    울금 분말 배지를 멸균하는 단계; 및
    상기 배양균을 접종하여 울금을 발효하는 단계;
    를 포함하는 것을 특징으로 하는 발효 울금의 제조방법.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 발효과정을 pH 3.5 이하, 낫토키나아제 활성이 20~40U/ml일때 발효를 종료하는 것을 특징으로 하는 발효 울금의 제조방법.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항의 제조방법으로 제조된 것을 특징으로 하는 발효 울금.
  4. 제 3 항의 발효 울금을 포함하는 것을 특징으로 하는 건강기능식품.
    도면
    <표준품 curcumin의 크로마토그램>
    Figure 712010003655718-pat00001
    < THC (Curcumin의 수소화반응)>
    Figure 712010003655718-pat00002
    <울금 크로마토그램>
    Figure 712010003655718-pat00003
    <발효울금 크로마토그램>
    Figure 712010003655718-pat00004
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