KR100935031B1

KR100935031B1 - 헬리코박터 파일로리균의 리보좀 단백질 ｌ１유래의 유사체펩타이드로부터 풀림구조를 절단한 양이온 증가 항생펩타이드 및 항균 및 항진균용 조성물

Info

Publication number: KR100935031B1
Application number: KR1020070088127A
Authority: KR
Inventors: 함경수; 박윤경; 박성철; 김미현
Original assignee: 조선대학교산학협력단
Priority date: 2007-08-31
Filing date: 2007-08-31
Publication date: 2010-01-06
Also published as: KR20090022608A

Abstract

본 발명은 헬리코박터 파일로리균의 리보좀 단백질 L1 유래의 유사체 펩타이드로부터 풀림구조를 절단한 양이온 증가 항생 펩타이드 및 항균 및 항진균용 조성물에 관한 것으로, 서열번호 2로 기재되는 아미노산 서열을 가지는 HPA3의 N-말단의 1번부터 4번까지 풀림구조를 절단하고 9번째와 13번째 아미노산인 글루탐산과 세린을 리신으로 치환시킴으로써 풀림구조를 절단시켜 펩타이드의 나선구조만 남기고 양이온 성질을 증가시킴으로써 서열번호 3으로 기재된 항생 펩타이드 및 그를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 구체적으로 본 발명의 항생 펩타이드는 헬리코박터 파일로리(Helicobacter pylori) 균의 리보좀 단백질 L1(ribosomal protein L1, RPL1) 아미노말단 부위에서, 양친화성 (amphipathic)과 항생 활성을 갖는 HP(2-20) 펩타이드의 소수성 부위를 증가시킨 HPA3로부터, N-말단의 1번부터 4번까지 풀림구조를 절단하고 5번째와 9번째 아미노산인 글루탐산과 세린을 리신으로 치환시킴으로써 세포의 막에 잘 결합하도록 하는 구조를 갖게 됨으로 탁월한 항균 및 항진균 활성을 나타내고 세포 독성이 없으므로 인체에 안전한 항생제로 유용하게 사용될 수 있다.

헬리코박터 파일로리균, 리보좀 단백질 L1, 항생 펩타이드, 나선 구조, 양이 온

Description

헬리코박터 파일로리균의 리보좀 단백질 Ｌ１유래의 유사체 펩타이드로부터 풀림구조를 절단한 양이온 증가 항생 펩타이드 및 항균 및 항진균용 조성물{Novel synthetic antimicrobial peptide without random coil region and added cationic ion derived from Ribosomal Protein L1 of Helicobacter pylori and composition for antibacterac and antifungal}

본 발명은 서열번호 2로 기재되는 아미노산 서열을 가지는 HPA3의 N-말단의 1번부터 4번까지 풀림구조를 절단하고 9번째와 13번째 아미노산인 글루탐산과 세린을 리신으로 치환시킴으로써 풀림구조는 절단함으로써 펩타이드의 나선구조만 남기고 양이온 성질을 증가시킴으로써 서열번호 3으로 기재된 항생 펩타이드 및 그를 포함하는 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 헬리코박터 파일로리(Helicobacter pylori) 균의 리보좀 단백질 L1(ribosomal protein L1; 이하, RPL1) 아미노말단 부위에서, 양친화성(amphipathic)과 항생 활성을 갖는 HP(2-20) 펩타이드의 소수성 부위를 증가시킨 HPA3로부터, 글루탐산과 세린을 리신으로 치환시킴으로써 세포의 막에 잘 작용하도록 설계한 항생 펩타이드 및 그를 포함하는 조성물에 관한 것이다.

세균의 감염은 인간의 질병에서 가장 흔하고 치명적인 원인 중의 하나인데, 불행하게도 항생제의 남용으로 인하여 세균의 항생제 저항성(resistance)이 야기되었다. 실제로, 세균이 새로운 항생제에 저항성을 나타내는 속도는 새로운 항생제의 유사체가 개발되는 속도보다 훨씬 더 빠르다. 예를 들면, 생명에 위협을 가할 수 있는 엔테로코쿠스 패칼리스(Enterococcus faecalis ), 마이코박테리움 투버쿨로시스(Mycobacterium tuberculosis ) 및 슈도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa ) 등의 세균 종들은 지금까지 알려진 모든 항생제에 대한 저항력을 키워왔다 (Stuart B. Levy, Scientific American, 46-53, 1998).

항생제에 대한 내성(tolerance)은 항생제에 대한 저항성(resistance)과는 구별되는 현상인데, 1970년대에 뉴모코커스(Pneumococcus sp .)에서 최초로 발견이 되었으며 페니실린의 작용 기작에 대한 중요한 단서를 제공하였다(Tomasz et al., Nature, 227, 138-140, 1970). 내성을 보이는 종은 통상적인 농도의 항생제 존재하에서는 성장을 멈추지만 결과적으로 죽지는 않는다. 내성은 항생제가 세포벽 합성 효소를 저해할 때 오토라이신(autolysin)과 같은 세균의 자가분해(autolytic) 효소의 활성이 일어나지 않기 때문에 생기는데, 페니실린의 경우에 있어서 내인성 가수분해 효소(endogenous hydrolytic enzymes)를 활성화함으로써 세균을 죽이지만, 또한 세균이 이 효소의 활성을 억제하여 항생제 치료 시에도 생존하는 결과를 나타내게 된다.

세균이 항생제에 대한 내성을 가지는 것은 임상적으로 대단히 중요한데, 이는 내성 세균을 박멸하는 것이 불가능하게 되면 임상적인 감염에서 항생제 치료의 효용이 떨어지기 때문이다(Handwerger and Tomasz, Rev . Infec . Dis ., 7, 368-386, 1985). 아울러, 내성은 항생제에 대한 세균의 저항성이 발생할 선행조건이라고 간주하는데, 이것은 항생제 치료에도 살아남는 균주가 생기기 때문이다. 이러한 균주는 항생제에 저항성을 가지는 새로운 유전 요소를 획득해서 항생제의 존재하에서도 계속 성장하게 된다. 실제로 항생제에 대한 저항성을 보이는 모든 세균들은 그 항생제에 대한 내성도 있는 것으로 알려져 있으므로(Liu and Tomasz, J. Infect . Dis ., 152, 365-372, 1985), 항생제 저항성을 가지는 세균을 죽일 수 있는 신규한 항생제의 개발이 필요하다.

작용 기작의 측면에서 내성은 크게 두 가지로 구분되는데, 첫 번째는 모든 세균에 있어서 성장 속도가 감소할 때 일어나는 외형적(phenotypic) 내성이며(Tuomanen E., Revs . Infect . Dis ., 3, S279-S291, 1986), 두 번째는 특정 세균에서 일어나는 돌연변이에 의한 유전적인 내성이다. 두 가지 경우 모두에 있어서 기본적인 현상은, 오토라이신 효소의 활성을 감소시키는 조절(down regulation)이 일어나는 것인데, 이러한 조절은 외부자극에 대한 외형적인 내성일 경우에는 일시적이지만, 세포 용혈을 조절하는 경로의 변화를 야기하는 돌연변이가 일어난 유전적인 내성의 경우에는 영구적이다. 명백하게, 가장 간단한 유전적인 내성의 경우는 오토라이신 효소의 결손으로 생긴 경우인데, 확실하지 않은 여러 가지 이유로, 이러한 자가분해 효소의 결손에 의해 내성을 가지는 균주가 임상적으로 발견된 적 은 없으며, 오히려 임상에서 발견되는 내성은 오토라이신 효소의 활성을 외형적으로 조절하는 과정으로 이루어진다(Tuomanen et al., J. infect . Dis ., 158, 36-43, 1988).

상기에서 살펴본 바와 같이, 항생제에 대한 저항성을 나타내는 세균을 제거하기 위하여 새로운 항생제의 개발이 필요하며, 오토라이신 효소의 활성과는 독립적으로 작용하는 새로운 항생제의 개발이 필요하다.

한편, 세균은 박테리오신(bacteriocin)이라는 펩타이드나 작은 유기물 분자들을 합성해서 이웃하는 세균을 죽일 수 있는데, 이러한 박테리오신들은 구조적 특징에 따라 세 가지로 구분된다. 첫 번째는 란티바이오틱스(lantibiotics)이며 두 번째는 비(非)란티바이오틱스(nonlantibiotics)이고, 세 번째는 신호 펩타이드(signal peptide)에 의해 분비되는 것들이다 (Cintas et al ., J. Bad ., 180, 1988-1994, 1998). 곤충을 포함하여, 동물 역시 펩타이드 항생제를 자체적으로 생산할 수 있는데(Bevins et al., Ann . Rev . Biochem ., 59, 395-414, 1990), 구조에 따라 세 개의 그룹으로 나눌 수 있다. 첫 번째는 시스테인이 풍부한 (cysteine-rich)β-쉬트(sheet) 펩타이드이고, 두 번째는 α-회전형(helical)의 양친화성 펩타이드 분자이며, 세 번째는 프롤린이 풍부한(proline-rich) 펩타이드이다(Mayasaki et al., Int . J. Antimicrob . Agents, 9, 269-280, 1998). 이들 항균 펩타이드들은 숙주 방어 및 선천적 면역계에 있어서 중요한 역할을 담당하는 것으로 알려져 있다(Boman, H. G., Cell, 65:205, 1991; Boman, H. G., Annu . Rev . Microbiol ., 13:61, 1995). 또한, 상기 항균 펩타이드들은 아미노산 서열에 따라 다양한 구조를 갖는데, 이들 구조 중 가장 흔한 것은 곤충에서 발견된 항균 펩타이드인 세크로핀(cecropin)과 같이 시스테인(cysteine) 잔기가 없고 양친화성 알파 나선형을 형성하는 구조이다.

소화성 궤양이 스트레스와 위산 과다생성에 의해 발생한다는 가설이 있어왔으나, 최근에 이러한 소화성 궤양이 헬리코박터 파일로리균에 의한 것이라고 밝혀지면서(Blaser, MJ., Trends Microbiol ., 1, 255-260, 1991) 헬리코박터 파일로리 균에 대한 관심이 집중되고 있다. 헬리코박터 파일로리균은 그람 음성균에 속하는데 성장 속도가 매우 느리고 나선형 몸체와 편모를 가지는 혐기성 미생물이다. 헬리코박터 파일로리균이 생산하는 많은 단백질 중 RPL1이라는 단백질은 230개의 아미노산으로 구성되어 있으며, 상기 단백질의 아미노말단 부위가 세크로핀과 유사한 구조를 갖는 것이 밝혀졌는데, 특히 8개의 아미노산이 세크로핀과 같은 것으로 알려져 있다. 헬리코박터 파일로리균의 RPL1 아미노말단 부위는 완벽한 양친화성 나선모양 구조를 가지는데(Putsep, K. et al., Nature, 398, 671-672, 1999), 이러한 양친화성 펩타이드는 세포막의 지질 성분과 유사한 구조를 지니므로 미생물의 세포막 지질과 결합하여 미생물의 세포막을 파괴하거나, 세포막의 전위를 변화시켜 미생물을 파괴한다는 작용 기작이 보고되어 있다. 이 외에도 헬리코박터 파일로리균의 RPL1 단백질의 아미노말단 부위는 역시 항균활성을 가진다는 보고가 있다(Putsep K. et al., Nature, 398, 671-672, 1999).

따라서 양친화성 펩타이드의 항균활성에 대해서 많은 연구가 이루어졌으며, 이를 이용해 세균에 대한 항생제를 개발하려는 연구들이 많이 시도되었다. 지금까 지 보고된 양친화성 펩타이드로는 서열번호 1로 기재되는 HP(2-20) 펩타이드, 서열번호 4로 기재되는 멜리틴(melittin, ME) 펩타이드 등이 있다.

헬리코박터 파일로리 유래 RPL1 단백질의 아미노말단 부위 중 양친화성 활성을 갖고 항생 활성을 나타내는 펩타이드인 서열번호 1로 기재되는 HP(2-20) 펩타이드는 세포 독성은 없으면서 항균활성과 함께 항진균 효과가 있다고 보고되었다(Biochem . Biophys . Res . Commun ., 2002, 291, 1006-1013, Biochim . Biophys . Acta. 2002, 1598, 185-194).

또한, 서열번호 4로 기재되는 멜리틴 펩타이드는 벌독의 성분 중 고형분의 50% 이상을 차지하는 펩타이드로서 카르복시 말단이 아미노화(amidation) 되어 있고, 진핵세포에 대하여 세포독성이 매우 높아 고등동물세포를 낮은 농도에서도 잘 파괴하고, 미생물인 그람 음성균 및 그람양성균에 대해서도 항균 활성이 높다고 보고되었다(Habermann, E., Science, 177: 314, 1972; Steiner, H., et al., Nature, 292: 246, 1981; Tosteson, M. T., et al., Biochemistry, 228: 337, 1987).

그 이외 HP(2-20)과 유사한 아미노산 서열이 있는 세크로핀 계열의 양친화성 펩타이드는 초파리에게서 처음 발견되었고, 그 후 누에 번데기 및 돼지의 작은창자에서도 발견되었는데, 이 중 세크로핀 A(cecropin A, CA)는 항균활성은 높으나 항진균 및 항암활성은 미미한 것으로 보고되었다(Boman, H. G. and Hultmark, D., Annu . Rev . Microbiol., 41: 103, 1987).

또한 상기 양친화성 펩타이드의 활성에 관한 연구와 더불어, 그들이 갖는 아미노산 서열 및 단백질 구조 등의 특성을 살펴보면, 그 서열상의 특성이 항균 활성 과 매우 밀접한 관련이 있음을 확인할 수 있다. 따라서 상기 양친화성 펩타이드의 아미노산 서열을 이용하여 그 서열의 특정부위에서 유사한 아미노산으로 치환하거나, 일부 서열들을 재조합하여 접합 펩타이드(conjugation peptide)를 제조하고, 펩타이드 서열의 일부 기능 부위를 서로 도치시킴으로써 항균, 항진균 또는 항암 활성이 탁월한 새로운 합성 펩타이드를 제조할 수 있다(Chan, H. C., et al., FEBS Lett., 259: 103, 1989; Wade, D., et al., Int . J. Pept . Prot . Res ., 40: 429, 1992).

실제로 상기의 양친화성 펩타이드를 응용하여 항암효과가 있는 합성 펩타이드 mag A 및 mag G 등이 제조되었고, 그 효능이 보고된 바 있다(Ohsaki, et al ., Cancer Res., 52: 3534, 1992). 그 외에도, 마가이닌 2 및 멜리틴 펩타이드들의 양친화성 부위, 유연성 부위 및 소수성 부위 등의 아미노산을 상호 결합시켜 항진균 활성을 나타내는 합성 펩타이드들이 개발되었으며, 이들은 특히 박테리아 및 곰팡이 속 균주에 작용함이 특허 등록된 바 있다(대한민국 특허등록 제0204501호). 또한 본 발명자들은 기존의 HP(2-20) 펩타이드의 특정 아미노산을 트립토판으로 치환하여 소수성을 증가(서열번호 2)시킴으로써 항생효과가 증진됨을 확인하여 항생 펩타이드로써 특허 등록된 바 있다(대한민국 특허등록 제0459808호).

항생 펩타이드 구조의 대부분은 일직선상의 나선 구조로 구성되어 있음으로써 세포의 막을 공격하는 특징을 갖는데, 이때 일직선상의 나선구조의 적절한 부위에 접힘 구조를 줌으로써 세포의 막에 더욱더 잘 결합하도록 조절하는 것이 가능해진다. 즉 세균이나 곰팡이의 막 표면의 소수성 또는 전하를 이용하여 이들의 막에 서 결합을 더욱 잘하도록 유도하는 것이다.

이에 본 발명자들은 서열번호 2로 기재되는 아미노산 서열을 가지는 HPA3의 N-말단의 1번부터 4번까지 풀림구조를 절단하고 9번째와 13번째 아미노산인 글루탐산과 세린을 리신으로 치환시킴으로써 풀림구조는 절단함으로써 펩타이드의 나선구조만 남기고 양이온 성질을 증가시킴으로써 서열번호 3으로 기재된 항생 펩타이드를 합성하였으며, 상기 펩타이드의 항균 효과, 항진균 효과 및 세포독성(용혈활성 및 정상의 동물세포에서 세포독성)이 없음을 확인하여 상기 펩타이드 유도체가 항생제로 이용될 수 있는 항생 펩타이드임을 밝힘으로써 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 세균 및 진균에 효과적이며 세포 독성이 없는 항생 펩타이드 및 이를 포함하는 항균 및 항진균용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명은 서열번호 2로 기재되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드 HPA3의 9번째 아미노산인 글루탐산(glutamic acid) 및 13번째 아미노산인 세린(serine)을 양전하 아미노산으로 치환된 항생 활성을 갖는 펩타이드를 제공한다.

또한 본 발명은 서열번호 3으로 기재되는 아미노산 서열 중 5번 및 9번 아미노산이 리신으로 보존되고 상기 서열과 90% 이상의 상동성을 가지며, 항균 및 항진균 활성을 나타내는 항생 펩타이드를 제공한다.

또한 본 발명은 상기 항생 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 항균용 조성물을 제공한다.

아울러 본 발명은 상기 항생 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 항진균용 조성물을 제공한다.

본 발명의 항생 펩타이드는 풀림구조는 절단함으로써 나선구조만 남기고 여기에 양이온성 아미노산으로 치환함으로써 그람 양성균 및 그람 음성균 모두에서 탁월한 항균작용을 나타내고, 진균에 대해서도 높은 항진균 활성내며, 세포독성을 나타내지 않으므로 인체에 안전한 항생제로 유용하게 사용될 수 있다.

상기 양전하 아미노산은 리신(lysine), 알지닌(arginene) 및 히스티딘(histidine)으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나인 것이 바람직하며, 리신인 것이 가장 바람직하다.

상기 항생 펩타이드는 서열번호 2로 기재되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드 HPA3의 1번부터 4번째 아미노산을 절단하는 것이 바람직하다.

상기 항생 펩타이드는 서열번호 3으로 기재되는 서열을 가지는 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 항생 펩타이드는 서열번호 2로 기재되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드 HPA3의 아미노산 서열 중 N-말단의 1번부터 4번까지 풀림구조를 절단하고 9번째와 13번째 아미노산인 글루탐산과 세린을 리신으로 치환시킴으로써 풀림구조는 절단함으로써 펩타이드의 나선구조만 남기고 양이온 성질을 증가시킴으로써 항균 및 항진균 활성을 나타낸다.

본 발명의 펩타이드는 당업계에 알려진 통상의 펩타이드 합성법에 의해 제조가 가능하며, 상기 서열번호 1로 기재되는 아미노산은 헬리코박터 파일로 리(Helicobacter pylori)균의 리보좀 단백질 L1(ribosomal protein L1, 이하 RPL1)의 아미노말단 부위로 양친화성을 갖고 항생 활성을 나타낸다(표 1 참조). 서열번호 2로 기재되는 펩타이드의 아미노산 서열 중 N-말단의 1번부터 4번까지 풀림구조를 절단하고 9번째와 13번째 아미노산인 글루탐산과 세린을 리신으로 치환시킴으로써 풀림구조는 절단함으로써 펩타이드의 나선구조만 남기고 양이온 성질을 증가된 서열번호 3으로 기재된 항생 펩타이드를 제조하였다. 상기 구조는 항생 펩타이드가 미생물의 세포막에 작용시 결합력을 향상시킴으로서 항생 효과를 증진시킬 수 있다. 상기 세포막은 그람 양성균, 그람 음성균 및 진균으로 구성된 군으로부터 선택된 미생물의 세포막을 나타낸다.

펩타이드의 아미노산 서열

펩타이드	아미노산서열	Net charge
서열번호 1: HP (2-20)	AKKVFKRLEKLFSKIQNDK-NH₂	+5
서열번호 2: HPA3	AKKVFKRLEKLFSKIWNWK-NH₂	+6
서열번호 3: HPA3NT3	FKRLKKLFKKIWNWK-NH₂	+7
서열번호 4: 멜리틴	GIGAVLKVLTTGLPALISWIKRKRQQ-NH₂

본 발명자들은 본원 발명의 항생 펩타이드의 항생 효과를 확인하기 위하여 항균 및 항진균 활성을 측정하였다.

항균 활성은 균체가 분열되지 않는 펩타이드의 최소 농도인 생육 최소저해농도(Minimal Inhibitory Concentration; 이하, MIC)를 측정하여 관찰하였다. 그람 양성균으로 스태필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus)를, 그람 음성균으로 대장균(Escherichia coli)을 그 대상으로 하였고 저농도 염이 첨가되었을 때(버퍼 I)와 고농도의 염이 첨가 되었을 때(버퍼 II) 활성의 정도를 비교하였다. 서열번호 3으로 기재되는 본 발명의 풀림구조가 제거된 양이온이 증가된 펩타이드와 대조군으로 HP(2-20) 펩타이드, HPA3 펩타이드 및 멜리틴(Melittin) 펩타이드를 사용하여 각 균주의 MIC 값을 측정한 결과, 본 발명의 풀림구조가 제거된 양이온이 증가된 구조를 갖는 펩타이드는 대조군인 HP(2-20) 펩타이드에 비해 버퍼 I에서는 8배의 활성 차이를 그리고 버퍼 II에서는 적게는 4배에서 많게는 32배 이상의 활성 차이를 나타내었고, HPA3 펩타이드에 비해서는 버퍼 I과 II에서 2배까지의 항균 활성 차이를 나타내었으며, 양성 대조군으로 사용한 멜리틴 펩타이드에 비해서는 버퍼 I에서는 같은 항균 활성을 버퍼 II에서는 2배 낮게 나타남을 확인하였다(표 2 참조).

또한, 본원 발명의 펩타이드의 항진균 활성을 측정하기 위하여, 병원성 진균인 아스퍼질러스 플라브스(Aspergillus flavus) 및 아스퍼질러스 퓨미가투스(Aspergillus fumigatus)를 대상으로 각 균주의 MIC 값을 MTT 분석법으로 측정하였다. 그 결과, 본원 발명의 서열번호 3으로 기재되는 펩타이드는 대조군인 HP(2-20) 펩타이드에 비해 6배, HPA3 펩타이드에 비해서는 1.5배 이상의 높은 항진균 활성을 나타내었으며, 양성 대조군으로 사용한 멜리틴 펩타이드에 비해서도 곰팡이에 따라 1.5배 이상의 항진균 활성을 나타내었다(표 3 참조).

또한 본 발명자들은 인공 리포좀을 이용하여 세포에서 형성되는 구멍 크기를 측정하였다. 그 결과, 서열번호 3의 HPA3NT3 항생 펩타이드가 낮은 농도에서부터 덱스트란이 방출됨을 확인하였다(도 2 참조). 이후 주사전자현미경을 이용하여 본 발명의 항생 펩타이드가 병원성 곰팡이, 그람음성균 및 그람 양성균에 미치는 영향을 관찰하였다. 그 결과, 서열번호 3의 항생 펩타이드가 기존의 항생 펩타이드인 멜리틴보다 세포를 잘 파괴시킴을 관찰하였으며(도 3 참조), 인공 리포좀에 양성 대조군인 멜리틴과 비슷한 크기와 같은 모양의 구멍을 형성함을 확인하였다(도 4 참조).

상기의 결과로부터, 본원 발명의 서열번호 3으로 기재되는 펩타이드는 탁월한 항균 및 항진균 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었다.

본 발명의 서열번호 3으로 기재되는 아미노산 서열을 갖는 합성 펩타이드에서 각각의 아미노산을 구조가 유사한 다른 아미노산으로 치환하거나, 아미노 말단의 아미노기 또는 카르복시 말단의 카르복실기를 다른 기능기로 치환시킨 항균 및 항진균성 펩타이드를 포함할 수 있다. 특히, 합성된 펩타이드 중 5번과 9번의 리신을 다른 아미노산으로 치환하여도 높은 항균, 항진균 활성을 나타낼 수 있다. 상기 다른 양이온성 아미노산은 바람직하게는, 아르기닌 및 히스티딘으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.

아울러, 본 발명은 상기 본원 발명의 풀림구조를 절단하고 양이온을 증가시키는 구조를 갖는 펩타이드 및 그의 유도체를 유효성분으로 포함하는 항균 및 항진균용 조성물을 제공한다.

본원 발명의 펩타이드가 세포독성을 나타내는지를 확인하기 위하여 대조군으로 HP(2-20) 펩타이드, HPA3 펩타이드 및 멜리틴(Melittin) 펩타이드를 사용하여 본원 발명의 펩타이드의 적혈구 파괴능을 조사한 결과, 본원 발명의 서열번호 3으로 기재되는 펩타이드는 세포독성을 나타내지 않는 반면에 양성 대조군으로 사용한 멜리틴 펩타이드는 세포독성이 매우 높게 나타남을 알 수 있었다(표 4 참조). 아울러 정상세포주에서 세포 독성을 확인한 결과, 곰팡이나 박테리아의 세포성장 저해 농도보다 훨씬 높은 농도에서 세포독성이 없음을 확인하는 반면, 양성대조군인 멜라틴에서는 같은 농도에서 세포가 거의 사멸함을 확인함으로(도 1 참조), 기존의 항생 펩타이드인 멜라틴보다 세포독성이 낮음을 알 수 있었다.

상기의 결과로부터, 본원 발명의 서열번호 3으로 기재되는 펩타이드는 세포독성이 없기 때문에 인체에 안전한 항균 및 항진균제로 유용하게 사용될 수 있음을 확인할 수 있었다.

본 발명의 항균용 조성물은 스태필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 대장균(Escherichia coli), 스태필로코쿠스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis), 슈도모나스 에루지노사(Pseudomonas aeruginosa), 살모넬라 타이피무리움(Salmonella typhimurium)로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 균에 항균 활성을 가지나 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 항진균성 조성물은 아스퍼질러스 플라브스(Aspergillus flavus), 아스퍼질러스 퓨미가투스(Aspergillus fumigatus), C. 알비칸스 (Candida albicans), T. 베이겔라이(Tricosporum beigelli)로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 진균에 항진균 활성을 가지나 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 서열번호 3으로 기재되는 펩타이드는 임상투여시에 비경구로 투여가 가능하며 일반적인 의약품 제제의 형태로 사용될 수 있다.

즉, 본원 발명의 펩타이드는 실제로 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용 될 수 있다.

또한, 상기 펩타이드는 생리식염수 또는 유기용매와 같이 약제로 허용된 여러 전달체(carrier)와 혼합하여 사용될 수 있고, 안정성이나 흡수성을 증가시키기 위하여 글루코스, 수크로스 또는 덱스트란과 같은 카보하이드레이트, 아스코르브 산(ascorbic acid) 또는 글루타치온과 같은 항산화제(antioxidants), 킬레이팅 물질(chelating agents), 저분자 단백질 또는 다른 안정화제(stabilizers)들이 약제로 사용될 수 있다.

상기 펩타이드의 유효용량은 1 내지 2 ㎎/㎏이고, 바람직하기에는 0.5 내지 1 ㎎/㎏ 이며, 하루 1 내지 3회 투여될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물에서 서열번호 3으로 기재되는 펩타이드 및 그의 유도체의 총 유효량은 거환(bolus) 형태 혹은 상대적으로 짧은 기간 동안 확산(infusion) 등에 의해 단일 투여량(single dose)으로 환자에게 투여될 수 있으며, 다중 투여량(multiple dose)이 장기간 투여되는 분할 치료 방법(fractionated treatment protocol)에 의해 투여될 수 있다. 상기 펩타이드의 농도는 약의 투여 경로 및 치료 횟수뿐만 아니라 환자의 나이 및 건강상태 등 다양한 요인들을 고려하여 환자의 유효 투여량이 결정되는 것이므로 이러한 점을 고려할 때, 이 분야의 통상적인 지식을 가진 자라면 상기 펩타이드의 약학적 조성물로서의 특정한 용도에 따른 적절한 유효 투여량을 결정할 수 있을 것이다.

< 실시예 1> 펩타이드들의 합성 및 분리정제

세포막에 대한 결합력 향상을 위한 본원 발명의 항생 펩타이드를 합성하기 위해, 메리필드(Merrifield)의 액상 고상법(Merrifield, RB., J. Am. Chem. Soc., 85, 2149, 1963)에 따라, Fmoc(9-fluorenylmethoxy carbonyl)를 아미노기 보호 용기로 이용하여, 서열번호 2로 기재되는 HPA3 펩타이드의 9번째 아미노산인 글루타민산을 프롤린으로 치환시킨 서열번호 3으로 기재되는 HPA3NT3 펩타이드를 합성하 였다(표 1). 그 외에도 대조군으로 표 1에서 기재하고 있는 서열번호 1 내지 2 및 서열번호 4의 펩타이드들을 합성하였다.

구체적으로, 본 발명에서 설계한 펩타이드의 카르복실말단이 -NH₂형태인 펩타이드는 Rink Amide MBHA-Resin을 출발물질로 사용하였으며, 카르복실말단이 -OH 형태의 펩타이드는 Fmoc-아미노산-Wang Resin을 출발물질로 사용하였다. Fmoc-아미노산의 커플링(coupling)에 의한 펩타이드 사슬(chain)의 연장은 DCC(N-hydroxybenzo triazole (HOBt)- dicyclo-hexycarbodiimide) 법에 의해 실시하였다. 각 펩타이드의 아미노말단의 Fmoc-아미노산을 커플링(coupling) 시킨 후, NMP(20% piperidine /N-methyl pyrolidone) 용액으로 Fmoc기를 제거하고 NMP 및 DCM(dichoromethane)으로 여러 번 씻어준 다음 질소 가스로 건조시켰다. 여기에 TFA(trifluoroacetic acid)-phenol-thioanisole-H₂O- triisopropylsilane(85:5:5:2.5:2.5, vol./vol.) 용액을 가하고 2 내지 3시간 반응시켜 보호기의 제거 및 레진으로부터 펩타이드를 분리시킨 후, 디에틸에테르(diethylether)로 펩타이드를 침전시켰다. 상기의 방법으로 얻은 크루드(crude) 펩타이드는 0.05% TFA가 포함된 아세토니트릴 농도구배 (acetonitrile gradient)에서 정제형 역상(reverse phase, RP)-HPLC column(Delta Pak, C₁₈ 300Å, 15, 19.0mm ×30 cm, Waters, USA)을 이용하여 정제하였다. 합성 펩타이드를 6 N HCl로 110℃에서 가수분해한 후 잔사를 감압 농축하고, 0.02 N HCl에 녹여서 아미노산 분석기 (Hitachi 8500 A)로 아미노산 조성을 측정하였다. 상기의 방법으로 조성된 펩타이 드들의 순도를 확인한 결과 95% 이상의 순도를 나타내었으며, MALDI 질량 분석법(Hill, et al ., Rapid Commun. Mass Spectrometry, 5: 395, 1991) 을 이용하여 분자량을 아미노산 서열로부터 계산하여 얻은 분자량과 비교한 결과, 그 값이 일치하는 것을 확인하였다. 특히, 본 발명의 접힘 구조를 갖는 펩타이드는 MALDI 분석 결과, 분자량(HPA3NT3:2064.86)이 아미노산 서열로부터 계산하여 얻은 분자량과 일치하므로 정확한 아미노산 서열을 가짐을 확인하였다.

<실시예 2> 항균활성 측정

실시예 1의 방법으로 제조된 본원 발명의 펩타이드의 항균 활성을 측정하기 위하여, 균체가 분열되지 않는 펩타이드의 최소 농도인 생육 최소저해농도(MIC) 값을 측정하였다.

우선, 항균 활성 측정을 위하여 그람 양성균으로써 스태필로코쿠스 아우레우스(KCTC 1621)를, 그람 음성균으로써 대장균(KCTC 1682)을 생명공학연구소 유전자은행으로부터 분양받아, 각 균주를 LB 배지(1% 박토 트립톤, 0.5% 박토 이스트 추출물, 1% 염화나트륨; Sigma, USA)에서 중간-로그 상(mid-log phase)까지 배양한 다음 1% 박토 펩톤 배지(Difco, USA)로 1×10⁴ 세포/100 ㎕의 균체 농도로 희석하여 마이크로 타이트레이트 플레이트(Nunc, USA)에 접종하였다. 실시예 1에서 합성한 본원 발명의 펩타이드 및 표 1의 펩타이드들을 각각 25 μM/웰(well)로부터 1/2배씩 희석하여 플레이트에 첨가한 후 37℃에서 6 시간 동안 배양하였고, 마이크로 타 이트레이트 플레이트 판독기(Merck Elisa reader, 독일)를 이용하여 620 ㎚의 파장에서 흡광도를 측정하여 각 균주의 MIC 값을 결정하였으며, 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다. 버퍼 Ⅰ은 낮은 이온 강도 버퍼로서 10 mM 소디움 포스페이트(sodium phosphate, pH 7.2)의 조성을 가지며, 버퍼 Ⅱ는 높은 이온 강도 버퍼로서, 1.5 mM KH₂PO_4,2.7 mM KCl, 8.1 mM Na₂HPO₄, 135 mM NaCl, pH 7.2)의 조성을 가진다.

그람 양성균 및 그람 음성균에 대한 항생 펩타이드의 항균 활성

펩타이드	생육 최소저해농도(μM)
	그람 양성균		그람 음성균
	S. 아우레우스		대장균
	버퍼 Ⅰ	버퍼 Ⅱ	버퍼 Ⅰ	버퍼 Ⅱ
서열번호 1: HP(2-20)	6.25	>100	6.25	12.5
서열번호 2: HPA3	0.78	6.25	1.56	3.12
서열번호 3: HPA3NT3	0.78	3.12	0.78	3.12
서열번호 4: 벨리틴	0.78	1.56	0.78	0.78

그 결과, 본 발명의 서열번호 3으로 기재되는 펩타이드는 대조군인 서열번호 1로 기재되는 HP (2-20) 펩타이드에 비해 균주와 버퍼에 따라 32배 이상 높은 항균 활성을 나타내었고, 서열번호 3로 기재되는 HPA3 펩타이드에 비해서는 2배 이상의 높은 항균 활성을 나타내었으며, 양성 대조군으로 사용한 서열번호 4로 기재되는 멜리틴 펩타이드에 대해서는 비슷하거나 2배 낮은 항균활성을 나타냄을 확인하였다. 결과적으로, 본원 발명의 펩타이드는 그람 양성균 및 그람 음성균 모두에서 기존의 양친화성 펩타이드에 비해 매우 우수한 항균 활성을 나타내었다.

< 실시예 3> 항진균 활성 측정

실시예 1의 방법으로 제조된 본원 발명의 펩타이드의 항진균 활성을 측정하기 위하여, MTT 분석에 의한 MIC 값을 측정하였다.

우선, 96-웰 플레이트에 병원성 곰팡이인 아스퍼질러스 플라브스(KCTC 9471)와 아스퍼질러스 퓨미가투스(KCTC 6145)의 각종 진균을 포함한 PDB 배지(20% 포테이토 인퓨전 프럼, 2% 박토 덱스트로즈; Difco, USA) 100 ㎕씩을 분주한 다음, 본 발명의 항생 펩타이드를 각각 50 μM/웰(well)부터 1/2배씩 희석하여 플레이트에 첨가하여 다시 16시간 이상 배양하였다. 이어서, PBS에서 pH 7.4의 5 ㎎/㎖ 농도의 MTT 용액(3-[4,5-dimethyl-2-thiazolyl]-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide,; Amersham life science, USA) 10 ㎕를 모든 웰에 첨가하여 다시 5 내지 6시간 배양하였다. 그 후, 살아 있는 세포의 미토콘드리아 효소에 의해 생성된 포르마잔(formazan)을 0.04 N HCl-이소프로판올(isopropanol) 용액 100 ㎕로 잘 용해시킨 후 ELISA 판독기(reader)를 이용하여 570 nm에서 흡광도를 측정하여 발색되는 정도로 MIC 값을 측정하였고, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.

항생 펩타이드의 항진균 활성

펩타이드	생육 최소저해농도 (μM)
펩타이드	A. 플라브스	A. 퓨미가투스
서열번호 1: HP (2-20)	25	25
서열번호 2: HPA3	6	6
서열번호 3: HPA3NT3	4	4
서열번호 4: 멜리틴	6	6

그 결과, 본원 발명의 서열번호 3으로 기재되는 펩타이드의 항진균 활성을 HP(2-20) 펩타이드와 비교하였을 때, 아스퍼질러스 플라브스 및 아스퍼질러스 퓨미가투스의 경우에는 대조군 HP(2-20) 펩타이드 보다 4배 정도 높은 항진균 활성을 나타내었으며, 양성 대조군으로 사용한 멜리틴 펩타이드 보다는 1.5배 정도 더 높은 항진균 활성을 나타냄을 확인하였다. 이 결과는 균사를 형성하는 병원성 곰팡이에서 항진균 활성을 증가 시켰음을 더욱 큰 의미를 둘 수 있다. 결과적으로, 본원 발명의 펩타이드는 병원성 진균 모두에서 기존의 양친화성 펩타이드에 비해 매우 우수한 항진균 활성을 나타내었다.

< 실시예 4> 세포 독성 측정

실시예 1의 방법으로 제조된 접힘 구조를 갖는 펩타이드가 세포독성을 나타내는지를 확인하기 위하여, 접힘 구조를 갖는 펩타이드의 적혈구 파괴능을 조사하였다.

우선, 인간 적혈구를 8%의 농도가 되도록 인산염 완충용액(PBS, pH 7.0)으로 희석하고 여기에 12.5 μM/웰부터 1/2의 농도로 표 1에 서열번호 1 내지 4로 기재된 펩타이드들을 각각 연속적으로 희석하여 37℃에서 1 시간 동안 반응시켰다. 이후, 1,000 g로 원심분리하여 그 상등액 속에 포함된 헤모글로빈량을, 414 ㎚ 파장에서 흡광도를 측정하여 조사하였다. 세포 파괴 정도를 비교 조사하기 위하여 1% 트리톤 X-100(sigma, USA)을 인간 적혈구 세포에 첨가하여 그 상등액의 흡광도를 측정하였다. 상기 1% 트리톤 X-100의 세포 파괴능을 100%로 하고, 하기 수학식 1에 따라 본원 발명의 펩타이드 및 표 1의 펩타이드들의 적혈구 파괴능을 계산하였다.

상기 식에서, 흡광도 A는 414 ㎚ 파장에서 펩타이드 용액의 흡광도, 흡광도 B는 414 ㎚ 파장에서 PBS의 흡광도 그리고 흡광도 C는 414 ㎚ 파장에서 1% 트리톤 X-100의 흡광도를 나타낸다.

상기 식에 의한 적혈구 파괴능의 결과를 하기 표 4에 나타내었다.

항생 펩타이드의 용혈 활성 측정

펩타이드	% 적혈구 파괴능 (각 펩타이드의 농도, μM)
펩타이드	12.5	6.25	3.13	1.56	0.78	0.39	0.19	0.09
서열번호 1: HP (2-20)	0	0	0	0	0	0	0	0
서열번호 2: HPA3	0	0	0	0	0	0	0	0
서열번호 3: HPA3NT3	0	0	0	0	0	0	0	0
서열번호 4: 멜리틴	100	100	94	76	24	2	0	0

또한, 정상의 사람 혈액으로부터 적혈구만을 분리하여 이들 적혈구에 본 발명의 펩타이드를 최소생육저해농도로 처리하고 이들의 적혈구가 파괴되는지를 확인하기 위해 무처리군을 음성 대조군으로 하여 본원 발명의 서열번호 3의 펩타이드 처리군과 서열번호 4의 펩타이드 처리군을 형광의 스펙트럼을 이용하여 관찰을 수행하였다.

그 결과, 본원 발명의 서열번호 3으로 기재되는 펩타이드는 세포독성을 거의 나타내지 않는 반면에, 양성 대조군으로 사용한 멜리틴 펩타이드는 세포독성이 매우 높게 나타남을 알 수 있다(표 4).

< 실시예 5> 정상세포주에서 세포독성 확인

서열번호 3의 펩타이드의 세포에 손상을 주어 세포내로 침투하는지 확인해 보았다. 10% FBS(Fetal Bovine Serum)가 함유된 DMEM 배지에서 배양된 인간 케라토싸이트인 HaCat 세포를 3X10³ 씩 96 well 플레이트에 분주하고 24시간 배양한 후, 서열번호 3 펩타이드를 농도별로 처리하여 24시간 동안 5% CO₂ 인큐베이터에서 반응시켰다. 배양 후, 5 mg/ml 농도로 인산 완충액 생리식염수(phosphate buffered saline;PBS)에 녹인 MTT(Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide) 용액 20 ul를 각 웰에 넣고 4시간동안 반응시켰다. 상층액을 제거하고, 200 ul의 DMSO를 넣어 형성된 MTT 크리스탈을 녹여, 560 nm에서 결과를 확인하였다. 그 결과 도 1에 나타난 것처럼 서열번호 3은 곰팡이나 박테리아의 세포성장 저해 농도보다 훨씬 높은 농도에서도 세포독성이 없음을 확인한 반면, 양성대조군인 멜리틴에서는 같은 농도에서 세포가 거의 사멸함을 확인하였다(도 1).

< 실시예 6> 인공 리포좀을 이용한 세포에서 형성되는 구멍크기의 측정

인공 리포좀(Artificial liposome)을 곰팡이의 막 지질 성분인 PC/CHOL(molecular ratio 1:1)으로 제작하여 각각 펩타이드의 활성 정도 및 활성 부위를 펩타이드의 처리 시간 및 농도별로 탐색하였다. 지질(Lipid)을 0.1 ml(in CHCl3) PC/CH 용액에 10 ml 바이엘(vial)에 넣고 질소 가스 분출(N₂ gas blowing)로 CHCl₃를 제거하였다. 디에틸에테르(diethylether) 4 ml를 바이엘에 첨가한 후 각각의 크기별 덱스트란이 표지된 형광물질(FITC)을 바이엘에 놓고 소디움 포스페이트 버퍼(sodium phosphate buffer) 1 ml를 넣었다. 팁 타입 소니케이터(Tip type sonicator)를 이용하여 10초 간격으로 20회 소니케이션(sonication)을 실시하였다. 바이엘을 흔들어 주면서 질소 가스를 이용하여 에테르(ether)를 제거하였다. 리포페스트-베이직 엔드 스테빌라이져(Liposofast-Basic and stabilizer)를 이용하여 리포좀 크기(liposome size)로 100 nm를 여러번 통과시켜서 일정한 크기의 인공 리포좀을 제작하였다. 이후 펩타이드를 처리함으로써 덱스트란 크기별 방출 정도를 형광분석기를 이용하여 측정하였다. 그 결과 도 2에 나타난 것처럼 서열번호 3은 낮은 농도에서부터 덱스트란이 방출됨을 확인하였다.

< 실시예 7> 주사전자현미경을 이용한 항생펩타이드의 세포에서의 작용 관찰

서열번호 3의 항생제 효과를 확인하기 위하여 주사전자현미경에서 병원성 곰팡이 C. 알비칸스, 그람음성균인 E. 콜라이, 그람양성균인 S. 아우레어스의 세포 파괴를 관찰하였다. 각각 세포는 콜로니 1 ml당 10⁸개로 준비하고 Na-포스페이트 버퍼(Na-phosphate buffer: pH 7.4)에 이를 용해시켰다. 그 후 위의 펩타이드들을 각각 처리하였다. 대조군으로는 펩타이드를 처리하지 않고 세포만을 준비하였다. 그 후 5% 글루타르알데히드(glutaraldehyde)를 이용하여 세포를 고정하고 세포를 필터(0.2 m pore size, Millipore, Bedford, MA, USA)에 걸러냈다. 그 후 주사전자현미경(HITHACHI S-2400, Japan)을 이용하여 각각의 펩타이드 작용을 관찰하였다.

그 결과 서열번호 3이 양성대조군으로 사용된 멜리틴 만큼 세포를 잘 파괴함을 관찰하였다(도 3).

< 실시예 8> 투영 전자현미경 관찰

곰팡이의 막 구성분인 PC/콜레스테롤의 조성으로 인공리포좀을 제작하여 여기에 서열번호 3을 처리하고 이를 투영전자현미경으로 관찰하였다. 먼저 인공리포좀을 제작하기 위해 PC(phosphatidyl choline)/콜레스테롤(10:1, w/w)의 비율로 혼합하고 이를 질소가스를 이용하여 분말 상태로 건조 시킨다. 그 후 50mM 포스페이트 버퍼(pH 7.5)에서 이를 용해시키고, 2% 우라닐 아세테이트(uranyl acetate)를 이용하여 네가티브 염색을 시행하였다. 여기에 서열번호 1번, 서열번호 3번 그리고 양성 대조군인 멜리틴을 처리하였다. 서열번호 1번은 인공 리포좀에 구멍이 형성됨을 거의 확인할 수 없었지만, 서열번호 3번 그리고 양성 대조군인 멜리틴에서는 거의 비슷한 크기의 같은 모양의 구멍이 형성됨을 확인하였다(도 4).

도 1은 본 발명의 양이온이 증가된 나선구조를 갖는 항생 펩타이드를 정상의 동물세포주에 처리하여 세포 독성을 확인한 그래프이다:

■ : 서열번호 1 HP(2-20);

◆ : 서열번호 2 HPA3;

▲ : 서열번호 3 HPA3NT3; 및

△ : 서열번호 4 멜리틴(Melittin).

도 2는 본 발명의 양이온이 증가된 나선구조를 갖는 항생 펩타이드가 세포의 벽에 구멍을 뚫을 때 얼만큼의 큰 크기로 구멍을 형성하는지 측정한 결과이다:

■ : 서열번호 1 HP(2-20);

◆ : 서열번호 2 HPA3;

▲ : 서열번호 3 HPA3NT3; 및

△ : 서열번호 4 멜리틴(Melittin).

도 3은 본 발명의 양이온이 증가된 나선구조를 갖는 항생 펩타이드가 곰팡이, 그람 음성균 및 그람 양성균에서 어떻게 세포에서 작용하는지 주사전자현미경으로 그들을 관찰한 사진이다:

A : (C. 알비칸스);

B : (대장균);

C : (S. 아우레우스);

1 : (음성대조군);

2 : (HP (2-20));

3 : (HPA3);

4 : (HPA3NT3); 및

5 : (양성대조군, 맬리틴).

도 4는 본 발명의 양이온 증가된 나선구조를 갖는 항생 펩타이드가 인공의 리포좀을 제작하여 이들 인공 리포좀에서 어떻게 작용하는지 투과전자현미경으로 그들을 관찰한 사진이다:

1 : 서열번호 1 HP(2-20);(Helicobacter pylori (2-20))

2 : 서열번호 2 HPA3;(Helicobacter pylori (2-20) Analogue 3)

3 : 서열번호 3 HPA3NT3(Helicobacter pylori (2-20) Analogue 3) N-terminal truncated analogue 3); 및

4 : 서열번호 4 멜리틴(Melittin).

<110> Industry-Acadimic Cooperation Foundation, Chosun University <120> NOVEL SYNTHETIC ANTIMICROBIAL PEPTIDE WITHOUT RANDOM COIL REGION AND ADDED CATIONIC ION DERIVED FROM RIBOSOMAL PROTEIN L1 OF HELICOBACTER PYLORI AND COMPOSITION FOR ANTIBACTERAC AND ANTIFUNGAL <130> 7p-08-19 <160> 4 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HP(2-20) <400> 1 Ala Lys Lys Val Phe Lys Arg Leu Glu Lys Leu Phe Ser Lys Ile Gln 1 5 10 15 Asn Asp Lys <210> 2 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HPA3 <400> 2 Ala Lys Lys Val Phe Lys Arg Leu Glu Lys Leu Phe Ser Lys Ile Trp 1 5 10 15 Asn Trp Lys <210> 3 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HPA3NT3 <400> 3 Phe Lys Arg Leu Lys Lys Leu Phe Lys Lys Ile Trp Asn Trp Lys 1 5 10 15 <210> 4 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mellitin <400> 4 Gly Ile Gly Ala Val Leu Lys Val Leu Thr Thr Gly Leu Pro Ala Leu 1 5 10 15 Ile Ser Trp Ile Lys Arg Lys Arg Gln Gln 20 25

Claims

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서열번호 3으로 기재된 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 아스퍼질러스 플라브스(Aspergillus flavus) 또는 아스퍼질러스 퓨미가투스(Aspergillus fumigatus) 성장억제용 조성물.
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